EXTRACCIN DE ADN ANIMAL

OBXECTIVOS.1. Empregar unha tcnica sinxela para a extraccin do ADN dun tecido animal 2. Confirmar, a partires da observacin do aspecto que presenta, a estructura fibrilar do ADN e que se atopa replegado no interior do ncleo celular

MATERIAIS.Figadio de polo Probeta Vara de vidro Alcol de 96 Morteiro Cloruro sdico 2 M Vasos de precipitado SDS Pipeta Area Portaobjeto Trocio de tea para filtrar Colorante bsico

PROCEDEMENTO.1. Triturar medio figadio de polo nun morteiro. Engadir area para que ao triturar se poidan romper as membranas de e queden os ncleos soltos. 2. Engadir ao triturado 50 centmetros cbicos de auga. Remover ata facer unha especie de papa. 3. Filtrar varias veces sobre unha tea para separar os restos de tecidos que quedasen por romper. 4. Medir o volume do filtrado cunha probeta. 5. Engadir ao filtrado un volume igual de cloruro sdico 2 M. Con isto conseguimos producir o estalido dos ncleos para que queden libres as fibras de cromatina. 6. A continuacin engdese 1 centmetro cbico de SDS. (Nota: Se non se dispn deste produto pode substiturse por un deterxente de vaixelas, tipo Mistol ou similar. A accin deste deterxente a de formar un complexo coas protenas e separalas do ADN. As nos quedar o ADN libre das protenas que ten asociadas. 7. Engadir mediante unha pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hai que facelo de forma que o alcol esvare polas paredes do vaso e se formen das capas. Na interfase, precipita o ADN. 8. Introducir unha vara de vidro e ir removendo na mesma direccin. Sobre a vara vanse adherindo unhas fibras brancas, visibles a simple vista, que son o resultado da agrupacin de moitas fibras de ADN. 9. Esta prctica pode completarse cunha tinguidura especfica de ADN. Temos que tomar unha mostra das fibras que se van depositando sobre a vara de vidro e depositalas sobre un portaobjeto. 10. Tinguir durante uns minutos cun colorante bsico (hematoxilina, p. e.) e observar ao microscopio.