IMUNIZACIJA

Proces primjene Ag domainu sa svrhom poticanja imunog odgovora

Imunizacija
Hapten Proteinski nosa s haptenom Hapten kao epitop

Nema produkcije At Antihaptensko AT

Imunizacija
Epitop 1 Epitop 2

Anti - epitop 2

Anti - epitop 1

Uporaba ivotinja i upute za rukovanje / brigu

Vanost koritenja protokola Upute za brigu i upotrebu laboratorijskih ivotinja, postupanje sa ivotinjama Odabir laboratorijskih ivotinja za proizvodnju At
Zeevi: ~2-7 kg Mievi: ~20-50 g takori: ~75-200 g

Nain imunizacije, doziranje i priroda antigena:

(utjecaj na ishod imunog odgovora nakon cijepljenja) Uobiajena doza imunogena - ~50 - 1000 mg (Tab 1)
SC = supkutao IM = intramuskularno ID = intradermalno IV = intravenski

(Ref: Harlow i Lane, 1988, Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratoy

Preporuke za unoenje imunogena u zeeve

Priroda Ag
Topljivi proteini

Primjer
Enzimi, nosai proteinski konjugati, imuni kompleksi Cijela bakterija, cijeli virus cijela gljivica, proteini vezani uz krutu podlogu kompleksi ugljikohidrata glikoproteina, lipopolisaharida Konjugati DNA-nosaa DNA -cjepiva: DNA ugra ena u vektore

Put unoenja
SC, IM, ID, IV SC, IM, ID, (nikada IV) SC, IM, ID, IV SC, IM, ID, IV

estice i Netopljivi Ag

Polisaharidi

Nukleinske kiseline

Volumen smjese antigena-adjuvansa za injiciranje (Ref. Lam and Mutharia, 1994)

Max. vol (ml) ivotinja Zec Mi takor ID 0.1 0.1 0.1 SC 0.4 0.1 0.2 put injiciranja IM 2.0 0.2 0.5 IP 5.0 1.0 2.5 IV* 5.0 1.0 2.5

* Antigeni (estice) ili Freundov adjuvans ne smije se primijeniti IV putem.

Imunizacija
Aktivna imunizacija Prirodnim putem Umjetno izazvana Pasivna imunizacija Prirodnim putem Umjetno izazvana

Aktivna imunizacija prirodnim putem

Odvija se u tijeku dodira domaina s uzronikom zaraznih bolesti .... oitovanje bolesti Latentan oblik bolesti Nema bolesti Imunost:
kratkotrajna (influenca, dizenterija) doivotna (difterija, hripavac, ospice, v.boginje)

Aktivna imunizacija umjetno izazvana

Cijepljenje:
postupak kojim se u organizam unosi uzronik ili njegovi produkti koji su
izgubili patogeninost, zadrali imunogeninost

Cijepljenje
Profilaksa: * sprijeiti pojavu bolesti koja je uzrokovana infektivnim agensom
Smanjiti intenzitet bolesti Smanjiti smrtnost

* sprijeiti ponovnu pojavu maligne bolesti

Nain cijepljenja
Toksoid (bakterijski toksin + formaldehid + toplina) difterija, tetanus
Ouvani epitopi, izgubljena toksinost Imunost: na bakterijske toksine

Ubijeni uzronici (tifus, kolera)

Kemijski (fenol, R-OH) Fizikalnim postupkom (UV)

ivi, nevirulentni (atenuirani) uzronici

BCG, ospice, poliomijelitis

Genetska cjepiva
Protiv zloudnih bolesti (karcinom dojke), AIDS Vojnici

Alergeni

Cjepiva - primjeri
Mrtva cjepiva: polio virus Ne - iva cjepiva: kozice Atenuirana cjepiva: ospice Toksoidi: tetanus Podjedinice: hepatitis B Genetska cjepiva (naked-DNA vaccine): HIV Alergeni

Pasivna imunizacija prirodnim putem

Odvija se: U trudnoi:
At iz majinoga krvotoka preko posteljice prelaze u dijete - IgG

Nakon poroda
At iz kolostruma najdue 6 mjeseci - IgA

Pasivna imunizacija umjetno izazvana

Davanje gotovih At (nastalih u drugoj jedinki) At djeluju odmah u hitnim stanjima (kad nema vremena za aktivnu imunizaciju) At se dobivaju iz seruma imunizirane ivotinje
Konj ksenogenian serum Ljudski serum alogenian serum
zatita je dugotrajnija reakcija manje intenzivna

Alogenian serum
Imuni serumski globulin (gama globulin)
Iz krvi veeg broja davatelja Koncentracija At 25 x vea od konc. u krvi

Specifian imuni serumski globulin

Iz seruma osoba koje su preboljele neku bolest Iz seruma dobrovoljaca imuniziranih odre enim Ag Sadri veliku koliinu At protiv odre enoga Ag

Imuni serumski globulin - 1

Preparat: 50 g/L proteina ljudske plazme Najmanje 95% IgG Virusno inaktiviran Adjuvansi: maltoza, triton X-100, TNBR, voda za injekcije Indikacije: nadomjesna terapija Kontraindikacije: preosjetljivost; u osoba s manjkom IgA kod kojih bolesnici imaju At protiv IgA

Imuni serumski globulin - 2

Nuspojave: Prebrza infuzija U bolesnika koji prvi put primaju normalni ljudski IgG U bolesnika s hipogamaglobulinemijom ili agamaglobulinemijom Razmak terapije > 8 tjedana Pacijente nadzirati 20 minuta

Imuni serumski globulin - 3

Iv-IgG zahtijeva:
Hidrataciju prije infuzije Kontrolu izluene mokrae Koncentraciju kreatinina u serumu Izbjegavati primjenu diuretika Henleove petlje Predoziranje: preoptereenje tekuinom, hiperviskozitet

Imuni serumski globulin - 4

Utjecaj na seroloke testove:
Pasivno uneena At mogu dovesti do lano (+) rezultata u serolokom testiranju Pasivni prijenos At na antigene eritrocita, (broj Rtc, haptoglobin, Coombsov test) Maltoza (adjuvans) moe utjecati na test glukoze u mokrai Prenosi se majinim mlijekom

Proizvodnja cjepiva
Osnovni zahtjev: Sigurnost cjepiva
pokusi na ivotinjama za testiranje toksinosti i teratogenosti

Djelotvornost cjepiva
na pokusnim ivotinjama, primatima (impanze) klinika ispitivanja na ljudima

Proizvodnja cjepiva
Klinika ispitivanja tri razine: 1. faza: primjena ispitivanoga cjepiva na dobrovoljcima ispitivanje sigurnosti nuspojave 2. faza: primjena infektivnog agensa u cijepljenih osoba 3. faza: prirodno izlaganje cijepljenih osoba infektivnim uzronicima

Primjena DNA-cjepiva
Virusi
HIV, Influenza, HBV, HCV, HSV, HCMV, Rota, Rabies, ...

Bakterije
Borreliosis, Tetanus, My.Tuberculosis, M. pulmonis, Salmonella typhi, ...

Paraziti
Plasmodium malariae, Leishmania major, Schistosoma jap., Toxoplasma gondii, ...

Tumor
B-cell limfom/ Non-Hodgkin limfoma, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, melanom, ...

Alergije, auto-imune bolesti, imunoloka tolerancija

Grinje, autoimuni encefalomijelitis, reumatoidni artritis, SLE

DNA-cjepiva pro et contra

Sinteza odabranog Ag ili genskog produkta in vivo Nema rizika infekcije Uporaba imunogena iz jo nekultiviranih patogena Indukctija stan. i humoralnoga imunog odgovora Jeftina i jednostavna proizvodnja Jednostavan transport i pohrana Rizik karcinoma (mutageneza) ? Rizik indukcije tolerancije ? Rizik indukcije auto-imunih bolesti ?

DNA-cjepiva teoretski rizici

Indukcija tumora Zbog kromosomske integracije tolerancija Zbog dugotrajnog predstavljanja antigena Nuspojave i imunopatologija Zbog istodobne primjene citokina i imunih stimulacijskih gena auto-imune reakcije Korelacija s indukcijom anti-DNA antitijela Bioloka aktivnost (nevezana s imunogeninou) prisutnog antigena

Kromosomska integracija: je li mogua in vivo?

NE, nakon i.m. primjene DNA-cjepiva
- Nije uoena u miinom tkivu do 8 mjeseci nakon inokulacije,

DA, nakon ostalih oblika i metoda primjene

Radovi opisuju integraciju kromosoma u stanice slezene 17 dana nakon inokulacije Gdje traiti kromosomsku integraciju? U gonadama, u svim tkivima (uoeno u mievima)

Otkrivanje kromosomske integracije

PCR najosjetljivija metoda Ograniena osjetljivost
Zbog brze biodistribucije DNA
(1 do 5 kopija/106 st.anica)

U koje vrijeme nakon inokulacije?

5 do 15 dana

Otkrivanje kromosomske integracije

Merck - tehnika
Odvajanje kromosomske DNA agaroznom gel elektroforezom, bez metilacije, PCR-

Apollon - tehnika
Odvajanje kromosomske DNA kromatografijom na koloni, metilacija

Virusna genetska cjepiva

Genetska cjepiva protiv AIDS-a (RNA)
Klinika ispitivanja cjepiva poela su 1995. godine Cjepivo sadri virusne gene davano je oboljelima Od 1996. cjepivo se daje osobama koje nemaju HIV

Ispitivanja na ljudima: genetska cjepiva za herpes, influencu, malariju, hepatitis B

Bakterijska cjepiva
1. Atenuirane ive bakterije: BCG, Salmonella typhi 2. Inaktivirane cijele bakterije: Vibrio cholerae,
Bordetella pertussis

3. Podjedinice proteina ili kapsularnih polisaharida:

Str. pneumoniae, Hemophilus influenzae tip B, acelularna B. pertussis

4. Konjugati (polisaharidi/proteinski nosai):

Haemophilus influenzae tip B

5. Bakterijski toksoidi: Clostridium tetani,

Corynebacterium diphteriae

6. Kombinacije: Difterija / tetanus / pertusis (DTP)

Profilaktika terapijska imunizacija

Profilaktika javno-zdravstvena mjera sprjeavanja bolesti uzrokovanih infektivnim agensima, posebice u djece i u nerazvijenim zemljama Terapijska primjenjuje se
AIDS, u ve zaraenih (asimptomatskih) osoba stabilizira se broj CD4 stanica Zloudne bolesti, sprijeiti ponovno pojavljivanje bolesti

10

Cijepljenje protiv raka dojke*

Imunost protiv E75 peptida E75peptid = smjesa peptida iz humanog receptora 2 za epidermalni humani faktor rasta (HER2/novi protein) + faktora stimulacije kolonizacije granulocita/makrofaga (GM-CSF)
HER2/novi protein povean kod Ca dojke, plua, kolona i prostate GM-CSF- lijek koji stimulira imuni sustav

Prevenira ponovno pojavljivanje bolesti (Ne lijei!)

* (Clin Congress of the American College of Surgeons, 2003)

Cjepivo protiv infekcija urinarnog sustava lokalna primjena *

Cjepivo: 10 vrsta uropatogenih bakterija, ubijenih toplinom Doza Viekratne doze vaginalnog cjepiva: 0, 1, 2, 6, 10 i 14 tjedana (6 doza) Rezultati: Pacijentice praene 6 mjeseci: bez bolesti i bez nus-pojava * J Urol 2003. 170:867-9

Cjepivo protiv gripe

Influvac
Trovalentno cjepivo inaktiviranoga virusa influence; Povrinski antigeni podtipa A i B:
2 soja A : H3N2 i H1N1 - 1 soj B

Umnoeni u jajima, inaktivirani formaldehidom

H = hemaglutinin; N = neuraminidaza

11

Cjepivo protiv gripe Influvac 2002/2003

0,5 mL sadri ekvivalente hemaglutinina i neuraminidaze za: A/Moskva/10/99 (H3N2) 15 g HA (A/Panama/2007/99 RESVIR) A/Nova Kaledonija /20/99 (H1N1) 15 g HA B/Sichuan /379/99 15 g HA (B/Guandong/120/2000) Adjuvansi (pomone tvari): KCl, NaH2PO4, NaCl, CaCl2, MgCl2, Na2HPO4, tiomersal

Cjepivo protiv gripe Influvac 2002/2003

Farmakodinamika: Uinak: 14 dana nakon primjene - Zatita 6 12 mjeseci Farmakokinetika: kod veine osoba zatitni titar At Indikacije: osobe s poveanim rizikom bolesti Kontraindikacije: preosjetljivost na kokoje proteine Interakcije s drugim lijekovima: mogu se pojaati nuspojave; kod bolesnika na imunosupresivnoj terapiji imunoloki odgovor moe biti smanjen

Imunogeninost cjepiva protiv gripe FLUAD - s adjuvansom i bez adjuvansa

FLUAD (Fluzone + MF59/ emulzija) Bol pri primjeni, toplina, mijalgija Imunogeniniji Vei titar At (inhibicija hemaglutinacije) Vei broj osoba s poveanim titrom At Vaccine 2003; 21 (27-28): 4234-4237 Fluzone (podjedinica antigena gripe) Manje nuspojave Manja imunogeninost Manji titar At Manji broj osoba s poveanim titrom At

12

INFLUVAC: INFLUVAC: 2002 - 2003.

A/Moskva/10/99 (H3N2) (A/Panama/2007/99 RESVIR) A/Nova Kaledonija /20/99 (H1N1) B/Sichuan /379/99 (B/Guandong/120/2000)

AGRIPPAL: AGRIPPAL: 2003 - 2006.

A/Moskva/10/99 (H3N2) (A/Panama/2007/99 RESVIR) A/Nova Kaledonija /20/99 (H1N1) B/Hong Kong /330/2001 (B/Shangdong/7/97)

VAXIGRIP: 2005
A/New York/55/04 (H3N2) (A/California/7/04) A/Nova Kaledonija /20/99 (H1N1) B/Jiangsu/10/2002 (B/Shanghai/361/2002)

umnoeni na embrioniranim kokojim jajima Adjuvansi (pomone tvari): KCl, NaH2PO4, NaCl, CaCl2, MgCl2, Na2HPO4, tiomersal

Cjepivo protiv gripe

Agrippal 2003/2004/2005.
Farmakodinamika: Uinak: 14 dana nakon primjene - Zatita 6 12 mjeseci Farmakokinetika: kod veine osoba zatitni titar At Indikacije: osobe s poveanim rizikom bolesti Kontraindikacije: preosjetljivost na kokoje proteine Interakcije s drugim lijekovima: mogu se pojaati nuspojave; kod bolesnika na imunosupresivnoj terapiji imunoloki odgovor moe biti smanjen

Cjepivo protiv gripe

Agrippal 2003/2004/2005. Vaxigrip/2005.

Utjecaj na rezultate laboratorijskih testova: Prolazna trombocitopenija Prolazno lano pozitivan nalaz serolokih testova ELISA za otkrivanje At protiv virusa HIV-1, hepatitisa C, HTLV-1 virusa
Zbog IgM odgovora na cjepivo Western Blot tehnika opovrgava lano pozitivne rezultate

13

Zadatak
Ispitati sigurnost cjepiva Ispitati imunogeninost cjepiva Simulacija studije

Ispitna pitanja:
Imunizacija je Vrste imunizacije (aktivna, pasivna, prirodna umjetna) Faze kjlinikog ispitivanja imunogeninosti cjepiva Koje podtipove antigena sadri cjepivo protiv virusa gripe Kome se daje specifian serumski imunoglobulina Razlika izme u imunogeninosti i sigurnosti cjepiva

14