Mikrobioloka analiza ivotnih namirnica Sve vrste pavlake, jogurta i mleka: Povrina ambalae se obrie vatom natopljenom alkoholom

. Sterilnim noem napravi se otvor ili se poklopac ambalae aseptino ukloni. Sadraj se dobro promea i 20 ml se prenese u erlenmajer sa staklenim zrncima i doda se 180 ml 2% Na-citrata i dobro homogenizuje mukanjem. Tako se dobija osnovno razreenje. Za sve namirnice za ije je mikrobioloko ispitivanje potrebno vie razreenja uzima se 1 ml osnovnog razreenja i prenosi se u epruvetu sa 9 ml fiziolokog rastvora.. Postupak se ponavlja pri izradi daljih razreenja. Od napravljenih osnovnih razreenja uzoraka otpipetira se 1 ml u petri kutiju i zalije uz meanje sa oko 15 ml rastopljenog i na 45C ohlaenog medijuma. Petri olje se inkubiraju (na 30, 37 ili 40 C, 24-72h) posle ega se broje izrasle kolonije. Na osnovu broja kolonija i veliine zasejanog razreenja izraunava se broj mikroorganizama u g ili ml. Odreivanje prisustva aerobnih mikroorganizama Uzorak se aseptino otvori, razmuti i 1ml uzorka se prenese u dve petri olje koje se zaliju sa 15 ml hranljivog agara sa skrobom. Kada se podloga stegne petri olje se inkubirju 72h na 30 C. Ako posle inkubacije doe do rasta u ovim podlogama smatra se da uzorak sadri aerobne mikroorganizme. Kolonije se izbroje i iskazuju kao broj mezofilnih mikroorganizama u ml. Odreivanje prisustva aerobnih sporogenih bakterija Osnovno razreenje uzorka u koliini od 10 ml se nalije u bakterioloku epruvetu i uroni u kljualu vodu za vreme od 5 minuta. Epruvete se ohlade pod tekuom hladnom vodom. Po potrebi se mogu praviti dalja razreenja, ako nije neophodno onda se 1 ml iz epruvete prebaci u petri olju i zalije sa 15 ml na 45C ohlaenog hranljivog agara. Petri olje se inkubiraju 72h na 30 C. Posle inkubacije se prebroje izrasle kolonije i iskazuju kao broj aerobnih sporogenih bakterija u 1g ili ml. Izolovanje i identifikacija sulfitoredukujuih klostridija 1 ml osnovnog razreenja uzorka se prenese u bakterioloku epruvetu koja se zatim uroni u vodeno kupatilo koje je zagrejano na 80C i ostavi 10 minuta. Zatim se epruveta nalije otopljenim sulfitnim agarom tako da udaljenost od epa ne bude vea od 1cm, a visina razlivene podloge ne bude nia od 14 cm. Zasejana podloga se inkubira 3-5 dana na 37C. Porast karakteristinih crnih kolonija u dubini podloge ili difuzno crnjenje cele podloge uz stvaranje gasa i cepanje podloge oznaava se kao pozitivan prethodni ogled. Dalje se od karakteristinih crnih kolonija napravi razmaz i oboji po Gramu. Istovremeno se kultura ezom prenese na krvni agar koji se inkubira aerobno na 37 C, 48h. Nalaz G + tapia sa ili bez spora i izostanak rasta na krvnom agaru smatra se pozitivnim potvrdnim ogledom odnosno dokazom prisustva sulfitoredukujuih klostridija u uzorku. Izolovanje Lactobacillus sp. 1 ml uzorka odgovarajueg razreenja se prenese u petri olju i nalije sa 15 ml MRS agara. Kada se podloga stegne inkubira se na 30C, 48 h, posle ega se broje izrasle kolonije i izraava kao broj bakterija po 1 ml uzorka.

Odreivanje kvasaca i plesni Od pripremljenih uzoraka se odpipetira 1 ml u petri olju, a zatim se doda 15 ml rastopljenog i na 45C ohlaenog Sabouraud maltozni agar. Podloga se inkubira 3-5 dana na sobnoj temperaturi. Posle inkubacije se prebroje izrasle kolonije i iskazuju kao broj kvasaca i plesni u 1g ili ml. Izolovanje i identifikacija Salmonella sp. U erlenmajer se odmeri 50 g (ml) ispitivane namirnice, koja je prethodno usitnjena. Na ovu koliinu uzorka dodaje se 450 ml selenit bujona i mukanjem se dobro homogenizuje, a zatim inkubira 1824h na 37C. Posle inkubacije rastvor se promuka i ezom zaseje na povrinu SS agara ili WilsonBlair bizmut sulfitnog agara. Zasejane podloge se inkubiraju 24-48h na 37 C. Izrasle kolonije za koje se sumnja da su salmonele presejavaju se na Kliglerov dvostruki eer. Kolonije koje i na dvostrukom eeru daju karakteristine reakcije za salmonele dalje se identifikuju skraenom biohemijskom serijom. Zasejava se: kosi agar sa ureom, tena podloga za KCN i peptonska voda za indol. Podloge se inkubiraju 24-48h na 37C. Rezultati se oitavaju prema tablici: Rod Salmonella Proteus urea + KCN + Indol +/-

Posle ovoga se rade testovi aglutinacije.