TIU CHUN VIT NAM TCVN 6168 : 1996 Phn bn vi sinh vt gii !n"#"$%& C!""#"$s!'(!g)&ing *i+)$bi&" ,!)ti"i%!) 1- Ph.

* vi /0 (1ng Tiu chun ny p dng cho cc li phn bn cc chng vi sinh vt sng c kh nng phn gii !nllulo"# v $uy %&nh cc yu c'u k( thut) ph*+ng php ki,- t.# %nh gi %i v/i phn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"#0 2- Ti3# +h#4n t)5+h (6n T123 4566758 9iso 45667:8;5< =*/ng d>n chung %?- vi sinh vt k( thut %?- khun lc @ 6AA1 T123 455:758 9BCD E55;7:856 <=*/ng d>n chung vF cch ph# ch? dung d&ch ph# loGng %, ki,- nghiH- vi sinh vt T123 I5:4 7:884 Jhn bn hKn hLp 3JM0 Jh*+ng php thN T123 E:E87:88E Jhn bn vi sinh vt0 Thut ngO 7- Th#t ng89 :;nh ngh<& Jhn bn vi sinh vt phn gi !nlulo"# l sn ph- chP# -Qt h#y nhiFu chng vi sinh vt sng %G %*Lc tuy,n chRn v/i -t %Q %t tiu chun hiHn hnh c kh nng phn gii !nlulo"#) $u# % cung cSp chSt dinh d*Tng cho %St v cy t.Ung) to %iFu kiHn nng c#o nng uSt v 9 hoVc< chSt l*Lng nWng sn) tng %Q -u -T c# %St0 Jhn vi sinh vt phn gii !nlulo"# v cc chng vi sinh vt ny khWng nh h*@ng Su %?n ng*Xi) %Qng) thYc vt) -Wi t.*Xng sinh thi v chSt l*Lng nWng sn0 =- >3# +?# @A th#t 40: Jhn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# phi chP# -Qt hoVc nhiFu chng vi sinh vt c kh nng pht t.i,n t.n -Wi t.*Xng chP# nguUn c#cbon duy nh't l !nlulo"# tY nhin 40Z Jhn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# c -t %Q vi sinh vt sng ph[ hLp v/i $uy %&nh t.ong bng : \ng: 7 ]t %Q vi sinh vt ]t %Q vi sinh vt 1_` a bg 9 h#y -l< phn bn Tn ch^ tiu 1hSt -#ng th#nh t.[ng Mhi uSt 1ui hn 1hSt -#ng khWng th#nh t.[ng Mhi 1ui hn

*@ng :02i sinh vt phn gii !nlulo"#) khWng nhc h+n Z0 2i sinh vt tp) khWng l/n h+n :0A :A8 :)A :AE

bo hnh :)A :A5 :)A :AE

uSt *@ng :)A :A;

7

bo hnh :)A :AE

7

1_`ad e+n v& hfnh thnh khun lc 406 Jhn vi sinh vt phn gii !nlulo"# phi c tc dng tt %i v/i %St v cy t.Ung0 =iHu $u c# phn bn phi %t cc ch^ tiu chSt l*Lng %G ghi t.n nhGn v %*Lc c %&nh ti phgng thN nghiH- %*Lc cWng nhn hoVc ch^ %&nh 404 eQ #n ton c# cc chng vi sinh vt chP# t.ong phn phi %*Lc c %&nh v cWng nhn ti cc phgng thN nghiH- %*Lc cWng nhn hoVc ch^ %&nh 40I Th+i gi#n bo#t hnh c# phn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# khWng ht h+n E thng k, ti ngy uSt *@ng 40E =- l*Lng cc chSt dinh d*Tng v %Q - c# phn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# phi %*Lc %ng kj ti cc c+ $un $un lj nh n*/c vF chSt l*Lng v %*Lc c %&nh %nh gi ti cc phgng thh nghiH- %*Lc cWng nhn hoVc ch^ %&nh B CDE *6# 5.1 Quy nh chung I0:0: 2iHc lSy ->u %*Lc ti?n hnh s#o cho ->u ki,- t.#n phi l ->u %i diHn cho c lW hng0 3g*Xi lSy ->u phi %*Lc hun luyHn v c kinh nghiHt.ong viHc lSy ->u I0:0Z T.ong $u t.fnh lSy ->u) vn chuy,n v N lj ->u) phi %- bo t.nh sY ly nhik- ti bn ngoi v phi bo %- l ->u %*Lc nguyn t.ng nh* b#n %lum cho t/i khi %!- phn thch t.ong phgng thh nghiHI0 :06 MhWng %*Lc bn ung th- bSt cP -Qt tc nhn bo $un) diHt khun hoVc diHt nS- vo ->u ki,- t.#0 I0:04 ]>u %*Lc lSy phi l cc b#o nguyn gi0 I0:0I Jhi ti?n hnh lSy ->u @ nhOng n+i khWng c h+i n*/c nng) ho chSt %Qc hi) khWng c nh nong g#y got hoVc bi v %*Lc %*# ng#y vo cc dng c chP# ->u0 I0:0E 1c dng c lSy ->u v chP# ->u phi sch sp v vW t.[ng 5.2 Chun b dng c ly v cha mu I0Z0: qng c lSy ->u phi l loi %*Lc l- ti thrp khWng .^ hoVc bsng thut tinh I0Z0Z 1c dng c lSy v chP# ->u sch sp v vW t.[ng bsng cch sSy t.ong t sSy @ nhiHt %Q :;AA1 t.ong thXi gi#n khWng ht h+n :giX hoVc t.ong nUi hSp @

nhiHt %Q :Z:A 1 t.ong thXi gi#n khWng ht h+n 6A -in v %*Lc bo $un t.ong cc dng c thhch hLp) %- bo t.nh ly nhik- ti bn ngoi0 5.3 S l ng mu I060: uW hng b#o gU- cc b#o 9 tvi < sn ph- phn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# %*Lc sn uSt c[ng -Qt %Lt v/i c[ng -Qt nguUn nguyn liHu0 I060Z C l*Lng b#o 9 tvi< c'n lSy %, ki,- t.# %i v/i -Ki lW hng ph thuQc v %Q l/n c# lW hng % v ph[ hLp v/i $uy %&nh t.ong bng Z0 !"ng 2# S l ng ba$ % &'( ) c*n ly + ,(+m &-a 1 lW hng 9 b#o) tvi< %?n :AA ti :A: %?n :AAA ti :AA: %?n :AAAA l/n h+n :AAAA C l*Lng ->u c'n lSy 9 b#o) tvi< ; :: :I :8

I0606 1c b#o 9 tvi < ->u %*Lc lY# chRn ng>u nhin th!o T123 :E847;I Ti?n hnh lSy ->u t.ung bfnh ti ->u chung l tp hLp cc ->u b#n %'u t.ong lW hng ki,- t.#0 1hi# ->u t.ung bfnh l- Z ph'n bsng nh#u .Ui b#o gi ph[ hLp v/i yu c'u c# sn ph-0 ]Qt ph'n d[ng %, ki,- t.# v -Qt ph'n %, l*u v bo $un t.ong %iFu kiHn $ui %&nh - -Ki loi sn ph- yu c'u %, d[ng khi phn thch t.Rng ti0 T.n -Ki gi ->u phi c nhGn ghi .wd 7 tn ->u v %i t*Lng cy t.Ung %*Lc sN dngx 7 tn c+ s@ sn uStx 7 thXi gi#n sn uStx 7 thXi gi#n v %&# %i,- lSy ->ux 7 tn ng*Xi lSy ->u ) c+ $u#n lSy ->u0 6- TiFn hGnh @iH* t)& vG /+ :;nh ..1 Chun b ,(+m &-a E0Z0:0: T.#ng thi?t b& ) dng c ki,- t.# T.#ng thi?t b& c# phgng ki,- nghiH- vi sinh vt thWng th*Xng b#o gU-d 7 thi?t b& %, khN t.[ng khW 9 t sSy < hoVc khN t.[ng h+i n*/c) 9nUi hSp< 7 t S-) c th, %iFu ch^nh %*Lc @ 6A A 1 y : A1x 7 hQp lUng thut tinh hoVc chSt dzo) %*Xng khnh ti 8A %?n :AA --x 7 pip!t thut tinh c dung thch :)A -lx I)A -lx :A)A -lx

7 -y %?- khun lc c %y %*Lc chi?u sng v/i nFn ti c gon -Qt thSu khnh phng %i ) @ %Q phng %i :)I l'n v -Qt dng c %?- c+ hRc hoVc hiHn s %iHn tNx 7 -y %o %Q p= c %Q chhnh c %?n y A): %+n v& %o p= 7 nUi cch thut nn nhiHtx 7 ng nghiH- thut tinh :5 :5 --x 7 bfnh t#- gic c dung thch thhch hLpx 7 ng %ong v cc dng c thut tinh khc 1c dng c d[ng t.ong c %&nh vi sinh vt phi khN t.[ng bsng cchd 7 giO @ ti :;A %?n :;IA 1 khWng ht h+n : h t.ong t sSy) hoVc 7 giO @ p suSt :)A #t-otph! 9 :Z: A 1< khWng ht h+n 6A -in t.ong nUi hSp 1c thi?t b& ph# t.Qn 7 -y t.Qn $u#y c t'n s $u#y ti 5 AAA %?n 4I AAA vgng b -in) c bfnh chP# bsng ki- loi hoVc thut tinh) ch&u %*Lc cc %iFu kiHn tiHt t.[ngx 7 dng c t.Qn nhu %Qng 9 sto-#ch!.< v/i cc tvi chSt dzo %G vW t.[ngx 7 dng c t.Qn d c th, t.Qn ti : -l %?n Z -l ->u thNx 7 cn k( thut c %Q chhnh c t/i A)A: g0 E0Z0:0Z q&ch ph# loGng %*Lc d[ng l dung d&ch -ui n 9 3#1l< A)5I {) khWng chP# cc hLp chSt c#cbon) c %Q p= l ;)A s#u khi khN t.[ng @ ZI A10 uSy 8A -l d&ch ph# loGng vo cc bfnh c'u hoVc lR bsng chSt dzo 9 cho d&ch huyFn ph[ b#n %'u <) hoVc uSy 8 -l d&ch ph# loGng vo ng nghiH- 9 cho ccs d&ch ph# loGng thp phn< 3vt li bsng bWng -T) khN t.[ng t.ong nUi hSp #p lYc @ :Z:A1 t.ong 6A -in0 3?u chP# sN dng ng#y) d&ch ph# loGng c'n %*Lc bo $un t.ong t lnh @ nhiHt %Q ti A %?n IA 1) thXi gi#n bo $n khWng $u : thng k, ti ngy chun b&0 1hv thhch 7 e, t.nh l- nh h*@ng %?n cc vi sinh vt do th#y %ni nhiHt %Q %Qt ngQt) nn diFu ch^nh nhiHt %Q c# d&ch ph# loGng %?n nhiHt %Q phgng thN nghiHE0Z0:06 1hun b& -Wi t.*Xng ki,- t.# ]Wi t.*Xng d[ng %, ki,- t.# phn vi sinh vt phn gii !nlulo"# %*Lc sN dng l -Wi t.*Xng chP# nguUn c#cbon duy nhSt l !nlulo"# tY nhin) thnh ph'n -Wi t.*Xng ph thuQc vo chng loi vi sinh vt - nh sn uSt sN dng0 3?u khWng c yu c'u c# nh sn uSt) khi ki,- t.# sN dng -Wi t.*Xng th!o ph lc |0 ]Wi t.*Xng %*Lc ph# ch? th!o thP tY cc ho chSt t.ong thnh ph'n %G cho v chi# vo cc dng c thut tinh %G chun bih t.*/c .gi khN t.[ng @ %iFu kiHn

: #t-otph! 9 :Z:A 1< t.ong 6A -in0 Jh#n chi# -Wi t.*Xn vo cc hQp lUng %G khN t.[ng @ %iFu kiHn vW t.[ng0 Mi,- t.# %Q sch c# -Wi t.*Xng s#u Z ngy %, @ nhiHt %Q ti Z5 %?n 6AA10 1h^ sN dng cc hQp lUng chP# -Wi t.*Xng nuWi cSy vi sinh vt khWng pht hiHn thSy tp nhik-0 1hv thhch7 %i v/i phn vi sinh vt phn gii !nlulo"# chP# cc vi sinh vt d*/i dng tiF- sinh) t.*/c khi ki,- t.# c'n phi hot ho0 E0Z0:04 1hun b& d&ch huyFn ph[ !nlulo"#0 1n 6A g giSy lRc loi %&nh l*Lng 9 thh d }h#t-#n : < r thnh -nh nhc cho vo bfnh thut tinh c dung thch 4 lit) th- -Qt lit n*/c cSt v -Qt ht vin bi thut tinh s#o cho % ngp giSy0 uop bfnh vo -y loc) loc c+ hRc v/i tWc %Q ;4 l'nb -in t.ong khong 6A -in) %, long s#u Z4 h ) chot lSy dung d&ch huyFn phv !nlulo"#0 E0Z0:0I 1hun b& dung d&ch ch^ th& \!n!dictd Thnh ph'n dung d&ch \!n!dictx 3#t.i it.#t :;) 6 g 3#Z 1D6 :A) A g 1uCD40 ;=ZD :) ;6 ~ 7 ho t#n n#t.i it.#t v 3#Z1D6 vo 5A -l n*/c S-0 \n ung n*/c cSt vi# % %, %t 5I -l 9 dung d&ch |< 7 ho t#n 1uCD4 vo :A -l n*/c 9 dung d&ch \< 7 t.Qn %Fu dung d&ch | v dung d&ch \x 7 bn ung n*+c vi# % %, %t :AA -l0 E0Z0Z Ti?n hnh ki,- t.# E0Z0Z0: Jh# loGng ->u #< %i v/i ->u dng lcngd d[ng pip!t vW t.[ng c nvt bWng @ ph'n nvt lSy .# :A -l ->u %G t.Qn %Fu bsng loc t#y h#y thi?t b& loc cc hRc v %*# vo 8A -l d&ch ph# loGng th!o E0Z0:0Z0 1hv j t.nh ch- pip!t vo d&ch ph# loGng) t.Qn cn thn ->u %G chun b& bsng cch hvt7 th li :A l'n v/i -Qt pip!t c nvt bWng @ ph'n hvt %G vW t.[ng khc hoVc bsng dng c t.Qn c+ hRc t.ong I :A s) nh&p $u#y c# dng c ny %*Lc chRn s#o cho ->u t.Qn nh* cuQn oy dng ln cch -rp lR chP# khong Z %?n 6 c-0 qung d&ch to .# %*Lc gRi l dung d&ch huyFn ph[ b#n %'u0 b< %i v/i ->u dng %Vc biHtd cn :A g ->u c %Q chhnh c t/i A)A: g v cho vo bfnh chP# vW t.[ng) th- 8A -l d&ch ph# loGng t.ong E0:0:0Z0 eVt bfnh vo -y t.Qn t.ong Z %?n I -in s#o cho c %*Lc -Qt dung d&ch c phn b %Ung %Fu) %, long c phn tN nVng t.ong khong :I -in) gn %*Lc dung d&ch huyFn ph[ b#n %'u0 c< d[ng -Qt pip!t %G vW t.[ng lSy : -l d&ch huyFn ph[ b#n %'u 9 # hoVc b< cho vo ng nghiH- chP# 8 -l d&ch ph# loGng 9 E0Z0:0Z < %G chun b& sn @ nhiHt %Q phgng) t.nh ch- pip!t vo d&ch ph# l#wng0 T.Qn k( bsng cch hvt 7

th khong :A l'n v/i -Qt pip!t khc c nvt bWng @ %'u hvt %G vW t.[ng) %, c d&ch ph# loGng ->u c nUng %Q l :A7Z0 v# t.fnh ny %*Lc lpp li lin tc %, c d&ch ->u c nUng %Q ph# l#wng th!o $uy %&nh s#ud 7 %i v/i phn vi sinh vt t.n nFn chSt -#ng th#nh t.[ng s* dng nUng %Q ph# loGng l :A 7;0 7 %i v/i phn vi sinh vt t.n nFn chSt -#ng khWng th#nh t.[ng sN dng nUng %Q ph# loGng l :A7I0 E0Z0Z0Z 1Sy ->u q[ng pip!t vW t.[ng .ing cho ting %Q ph# loGng .ing lSy .# ti d&ch ->u c nUng %Q ph# loGng :A7I0 :A7Ex :A7; %i v/i ->u phn vi sinh vt t.n nFn chSt -#ng th#nh t.[ngx :A76x :A74x :A7I %i v/i ->u phn vi sinh vt t.n nFn chSt -#ng khWng th#nh t.[ng) -Qt l*Lng d&ch ->u A)AI -l) cSy vo : hQp lUng chP# -Wi t.*Xng %G chun b& sn th!o E0Z0:060 ]Ki ->u %*Lc cSy lp li t.n h#i hQp lUng0 3hoc nh hQp lUng %, d&ch ->u dn t.i t.n bF -Vt thch ) chv j khWng %, d&ch ->u dhnh vo thnh hQp lUng) %Li bF -Vt thch khW) vp ng*Lc hQp lUng v %*# vo t S-) %iFu ch^nh nhiHt %Q t S- cho ph[ hLp v/i yu c'u c# ting loi vi sinh vt0 ThXi gi#n nuWi l 45 7;Z h0 E0Z0Z06 Jht hiHn vgng phn gii uSy : -l huyFn ph[ !nlulo"# v : -l dung d&ch ch^ th& \!n!dict nhc ln bF -Vt thch %G cSy ->u 9 E0Z0Z0Z< %, @ nhiHt %Q 6A %?n 6I A 1 t.ong :A %?n :I -in0 u#n st vgng phn gii t.ong sut b#o $u#nh cc khun lc phn gii !nlulo"# E0Z06 eRc k?t $u 2i sinh vt phn gii !nlulo"# %*Lc thnh l s khun lc t.ong hQp lUng to v#gng phn gii 9 vgng t.gn t.ong sut< b#o $u#nh khun lc0 2i sinh vt tp l tSt c cc khun lc khWng c %Vc dii,- %Vc t.*ng t.n I0Z04 1ch thnh -t %Q vi sinh vt t.n -Qt d*n v& ki,- t. 9 g#- h#y -ililit< ]t %Q vi sinh vt t.ong %+n v& ki,- t.# 9 |< %*Lc thnh th!o cWng thPcd #0ZA | d t.ong % # 7 s khun lc th!o yu c'u c t.ong hQp lUng d 7 nUng %Q d&ch ph# loGng 1hv thhch d

:< s l*Lng khun lc t.ung bfnh %*Lc thnh l t.ung bfnh cQng s khun lc c# cc hQp lUng %*Lc cSy ti c[ng -Qt %Q ph# loGng) tong % ch^ thnh cc hQp lUng chP# ti I %?n IA khun lc0 Z< s l*Lng khun lc t.ung bfnh cng c th, %*Lc thnh ti t.ung bfnh cQng s khun lc c# cc hQp lUng %*Lc cSy ti h#i %Q ph# loGng k? ti?p nh#u bsng cch thnh s khun lc t.ung bfnh c# -Ki %Q ph# loGng ) t.ong % s khun lc @ % ph# loGng c#o h+n %*Lc nhn v/i :A) s#u % lSy t.ung bfnh cQng c# h#i gi t.& nu t.n n?u tt s giO# gi t.& l/n v gi t.& nhc khWng l/n h+n Z0 3?u tt s ny l/n h+n Z thf lSy gi t.& nc l- k?t $u0 6< ]t %Q vi sinh vt t.n -Qt %+n v& ki,- t.# %*Lc bi,u th& bsng -Qt s giO# :)AA v 8)88 nhn v/i :An) n l s - thhch hLp0 ..3 ./0c nh hm l ng c0c ch& d(nh d1ng E060: c %&nh h- l*Lng nit+ 9 3< Ti?n hnh th!o T123 I5:I 7:8840 E060Z c %&nh h- l*Lng photpho 9 JZDI hOu hiHu< Ti?n hnh th!o T123 I5:I7:884 E0606 c %&nh h- l*Lng k#li 9 MZD< Ti?n hnh th!o T123 I5:I7:8840 E0604 c %&nh h- l*Lng cc chSt hOu c+ v vi l*Rng Ti?n hnh th!o cc ph*+ng php v uy %&nh hiHn hnh E060I c %&nh %Q Ti?n hnh th!o T123 I5:I7:884 ..2 !0$ c0$ ,3& 4u" ,(+m &-a \o co k?t $u ki,- t.# phi -W t li tfnh t.ng ->u t.*/c khi ti?n hnh ki,- t.#9 cc chi ti?t c'n v % %, c %&nh ->u<) cc ph*+ng php ki,- t.# v k?t $u %t %*Lc0 \o co cng phi nu tSt c cc %iFu kiHn th#o tc khWng $uy %&nh t.ong tiu chun ny hoVc %*Lc coi l tu chRn) cng nh* bSt k tfnh hung no c th, nh h*@ng %?n k?t $u0 I- >3# +?# b&$ gi9 ghi nhJn9 b$ K#n vG hLMng (6n sN (1ng ;0: Jhn bn vi sinh vt phn gii !nlulo"# phi %*Lc b#o gi bsng cc chSt liHu bo %- khWng gy %Qc hi t/i vi sinh vt) ng*Xi) %Qng thYc vt v -Wi t.*Xng sinh thi) %Ung thXi %- bo thXi hn bo hnh c# phn bn t.*/c cc %iFu kiHn bSt lL ti bn ngoi0 ;0Z T.n -Ki b#o 9 gi< sn ph- phn vi sinh vt phn gii !nlulo"# phi c ghi nhGn v/i %'y % cc nQi dung s#ud 7 tn c+ s@ sn uStx 7 tn sn ph- v tn kho# hRc c# loi vi sinh vt sN dngx 7 thnh ph'n dinh d*Tng v %Q -x 7 cWng dng

7 ngy sn uSt v thXi gi#n bo hnh 7 khi l*Lng t&nh 7 s dng kj chSt l*Lng ;06 Cn ph- phi c bn h*/ng d>n sN dng k- th!o 9 in t.n b#o bf hoVc in .ing<0 3Qi dung h*/ng d>n phi ghi % liFu l*Lng v $ui t.fnh sN dng cng nh* hiHu $u c# phn bn %i v/i cy t.Ung h#y kh nng th#y th? cc loi phn bn khc0 PHO COC A 9 uy %&nh < A-1 MPi t)LQng n#Pi +DE :H @iH* t)& nD* 0hn gii !n"#"$%& ~luco"# :A)A g J!pton I)A g M=ZJD4 :)A g ]gCD40 ;=ZD A)I g os! b!ng#l 66 -g Ct.!pto-ycin sunph#. 9:A{< 6 -l |g# ZA)A g 3*/c cSt vi# % :AAA -l p= E)I7;)A A-2 MPi t)LRng n#Pi +DE :H @iH* t)& vi @h#4n9 . @h#4n 0hn gii !n"#"$%& J!ton I)A g 1#o th&t bg 6)A g 3#1l I)A g |g# ZA)Ag 3*/c cSt vi# % :AAA -l p= E)5 ;)A A-7 MPi t)LQng n#Pi +DE :H @iH* t)& vi @h#4n9 . @h#4n 0hn gii !n"#"$%& ~luco"# :)A g MZ=JD4 A)I g |g# ZA)A g

3*/c chi?t %Sta :AA -l 3*/c cSt vi# % 8AA -l Jh E)I 7;)A a1hun b& n*/c chi?t %Std 7 : kg %St v*+n t/i : l n*/c schx 7 hSp khN t.[ng 6A phvt t.ong nUi hSpx 7 bn ung : g 1#1D6 .Ui lRc lSy n*/c t.ong0