Tumorski biljezi

interpretacija dijagnostickih
metoda i rezultata
Goran Ferencak
Danica Matiic
Ljerka Lukinac
Dubravka Cvoricec
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Idealan tumorski biljeg Idealan tumorski biljeg
probiranje probiranje asimptomatske asimptomatske populacije populacije
dijagnoza u simptomatskih bolesnika dijagnoza u simptomatskih bolesnika
prognoza bolesti prognoza bolesti
kontrola lije kontrola lijec cenja bolesti enja bolesti
rano otkrivanje recidiva rano otkrivanje recidiva
visoka dijagnosticka osjetljivost i specificnost
specificnost za organ
korelacija s velicinom i/ili aktivnosti tumora
povezanost s prognozom
pouzdana prediktivna vrijednost
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Razlika izmedu skupine zdravih ispitanika i
skupine oboljelih od tumora
Idealno Stvarno
specificnost 100%
stvarno negativni 100%
lano pozitivni 0%
zdrave
osobe
oboljeli od
tumora
osjetljivost 100%
stvarno pozitivni 100%
lano negativni 0%
Granicna vrijednost
Idealno: negativni nalazi za sve benigne
bolesti i zdrave ispitanike (specificnost
100%). Pozitivni nalazi za sve oboljele od
tumora (osjetljivost 100%). Razlika izmedu
dvije skupine je moguca uz odabranu
granicnu vrijednost.
Stvarno: lano negativni i lano pozitivni nalazi
kao funkcija izabrane granicne vrijednosti; to
je via specificnost, to je osjetljivost nia i
obrnuto.
lano negativni lano pozitivni
Granicna vrijednost
porast
osjetljivosti
porast
specificnosti
osjetljivost 100%
specificnost ~60%
zdrave
osobe
oboljeli od
tumora
osjetljivost ~50%
specificnost 100%
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Primjer dviju ROC krivulja
Osjetljivost (%)
100
80
60
40
20
0
dobro
razlikovanje
bez razlikovanja
Specificnost (%)
100
80 60 40 20
0
Biljeg A
Biljeg B
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Zato tumorski biljezi nisu pogodni za
pretraivanje asimptomatskih osoba?
npr. CEA ima dijagnosticku osjetljivost za kolorektalan
karcinom 70% (dijagnosticka specificnost je 95%)
1. 30% bolesnika s tumorom nece biti otkriveno
2. testiranje skupine od 10 000 osoba, od kojih je 1%
bolesno, otkriti ce 70 slucajeva kolorektalnog karcinoma
(70 stvarno-pozitivnih rezultata), ali
3. tome treba dodati 495 lano-pozitivnih rezultata (5% od
9 900)
?
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Zahtjevi kojima treba udovoljiti tumorski
biljeg
Visoka specificnost (>95%)
Visoka osjetljivost (>50%)
Optimalna pozitivna i negativna prediktivna vrijednost
Korelacija s tumorskom masom
Pouzdanost i reproducibilnost
CV
intra
<5%
CV
inter
<10%
irok analiticki raspon
Primjerena cijena
Reagensi prihvatljivi za okolinu
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Cimbenici koji utjecu na rezultat
(in vivo)
Stvaranje tumorskog biljega
Oslobadanje tumorskog biljega
Tumorska masa
Opskrbljivanje tumora s krvlju
Dnevna varijacija
Poloaj tijela tijekom uzimanja krvi
Jatrogeni utjecaji (rektalni pregled, kolonoskopija, cistoskopija)
Katabolizam tumorskog biljega (funkcija bubrega, funkcija
jetre, kolestaza)
ivotne navike (puenje, alkohol)
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Cimbenici koji interferiraju s rezultatom
(in vitro)
Uvjeti pohrane
Vrijeme izmedu uzimanja krvi i centrifugiranja (NSE)
Hemoliza (NSE) i ikterus (PSA)
Kontakt koe s krvnom ilom (SCC)
Kontaminacija uzorka sa slinom (SCC i CA 19-9; CEA)
Interakcije lijekova
PSA (divalentni i trivalentni metalni ioni; purin, indol i
gvanidinski analozi; vitamin C; cisplatina, mitomicin,
estradiol, epirubicin)
Ljudska anti-mija-Ig antitijela (HAMA, heterofilna antitijela)
imunoscintigrafija, imunoterapija; intenzivan kontakt sa
ivotinjama
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
NACB preporuke za upotrebu tumorskih biljega u NACB preporuke za upotrebu tumorskih biljega u
klinickoj praksi klinickoj praksi
AFP, AFP,
hCG hCG, ,
LDH LDH
AFP, AFP, hCG hCG, ,
LDH LDH
AFP, AFP, hCG hCG, LDH , LDH AFP, AFP, hCG hCG, ,
LDH LDH
- - Testikularni Testikularni
tumori tumori
PSA, PSA,
cPSA cPSA
PSA, PSA, cPSA cPSA PSA, PSA, cPSA cPSA (uz (uz
DR pregled i DR pregled i
biopsiju, biopsiju,Gleason Gleason
stupanj) stupanj)
PSA, PSA, cPSA cPSA, ,
% %fPSA fPSA (uz (uz
DR pregled) DR pregled)
PSA, PSA, cPSA cPSA, ,
% %fPSA fPSA (uz (uz
DR pregled) DR pregled)
Karcinom Karcinom
prostate prostate
CEA CEA CEA CEA CEA CEA - - FOB FOB
(kod osoba (kod osoba
> >50 godina) 50 godina)
Geneticko Geneticko
testiranje testiranje
kod visoko kod visoko
rizicnih rizicnih
osoba osoba
Kolorektalni Kolorektalni
karcinom karcinom
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
recidiva recidiva
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
CA 15 CA 15- -3, 3,
CEA CEA
(pracenje (pracenje
uznapredo uznapredo
- -vale vale
bolesti) bolesti)
- - ER, PR, HER ER, PR, HER- -
2, 2, uPA uPA, PAI , PAI- -
1 1
- - - - Karcinom Karcinom
dojke dojke
CA125 CA125 CA125 CA125 CA125 CA125 CA125 CA125
(samo kod (samo kod
ena u ena u
postmenopauzi postmenopauzi) )
CA125 CA125
(samo u (samo u
kombinaciji kombinaciji
s TVUS za s TVUS za
rano rano
otkrivanje otkrivanje
nasljednih nasljednih
sindroma) sindroma)
Karcinom Karcinom
ovarija ovarija
AFP AFP AFP AFP AFP AFP AFP AFP AFP AFP
(kod visoko (kod visoko
rizicnih rizicnih
osoba) osoba)
Karcinom Karcinom
jetre jetre
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
recidiva recidiva
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
- - - - - - - - - - Karcinom Karcinom
eluca eluca
CA 19 CA 19- -9 9
(tijekom (tijekom
palijativne palijativne
terapije sa terapije sa
slikovnim slikovnim
pretragama pretragama
ili nakon ili nakon
potencijalne potencijalne
kurativne kurativne
kirurgije) kirurgije)
- - CA 19 CA 19- -9 9 CA 19 CA 19- -9 9
(samo s CT (samo s CT
ili EUS i u ili EUS i u
prikladnom prikladnom
klinickom klinickom
kontekstu) kontekstu)
- - Karcinom Karcinom
pankreasa pankreasa
- - - - - - - - - - Karcinom Karcinom
mjehura mjehura
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
recidiva recidiva
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Posebne preporuke koje se odnose na upotrebu Posebne preporuke koje se odnose na upotrebu elektroforeze elektroforeze
proteina, proteina, imunofiksacije imunofiksacije, slobodnih laganih lanaca, , slobodnih laganih lanaca, viskoziteta viskoziteta, ,
beta beta- -2 2- -mikroglobulina mikroglobulina u serumu i u serumu i elekrtoforeze elekrtoforeze proteina, proteina,
imunofiksacije imunofiksacije i laganih lanaca u mokraci * i laganih lanaca u mokraci *
Monoklonske Monoklonske
gamapatije gamapatije
SCC SCC
(moguce u (moguce u
karcinomu karcinomu
plocaste plocaste
stanice stanice
cerviksa cerviksa) )
SCC SCC
(moguce u (moguce u
karcinomu karcinomu
plocaste plocaste
stanice stanice
cerviksa cerviksa) )
SCC SCC
(moguce u (moguce u
karcinomu karcinomu
plocaste plocaste
stanice stanice
cerviksa cerviksa) )
SCC SCC
(moguce u (moguce u
karcinomu karcinomu
plocaste plocaste
stanice stanice
cerviksa cerviksa) )
- - Karcinom Karcinom
cerviksa cerviksa
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
recidiva recidiva
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
* * Monoklonske Monoklonske gamapatije gamapatije (pretrage u serumu) (pretrage u serumu)
Da Da Beta Beta- -2 2- -
mikroglobulin mikroglobulin
Da Da Da Da Hiperviskozni Hiperviskozni
sindrom sindrom
Viskoznost Viskoznost
Da Da Da Da Dijagnoza i Dijagnoza i
pracenje pracenje
nesekretornog nesekretornog
mijeloma mijeloma, , MGUS MGUS
i i amiloidoze amiloidoze
Slobodni lagani Slobodni lagani
lanci (S) lanci (S)
Da Da Da Da Dijagnoza i Dijagnoza i
identifikacija identifikacija
klonalnosti klonalnosti
Imunofiksacija Imunofiksacija (S) (S)
Da Da Da Da Dijagnoza, Dijagnoza,
probiranje, probiranje,
pracenje terapije pracenje terapije
Elektroforeza Elektroforeza
serumskih proteina serumskih proteina
(na (na agarozi agarozi ili ili
kapilarna zonska) kapilarna zonska)
NACB 2005. NACB 2005. NCCN NCCN Primjena Primjena Biljeg Biljeg
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
* * Monoklonske Monoklonske gamapatije gamapatije (pretrage u mokraci) (pretrage u mokraci)
- - - - Dijagnoza i Dijagnoza i
pracenje pracenje
nesekretornog nesekretornog
mijeloma mijeloma, , MGUS MGUS
i i amiloidoze amiloidoze
Slobodni lagani Slobodni lagani
lanci (U) lanci (U)
Da Da Da Da Dijagnoza i Dijagnoza i
identifikacija identifikacija
klonalnosti klonalnosti
Imunofiksacija Imunofiksacija (U) (U)
Da Da Da Da Dijagnoza, Dijagnoza,
probiranje, probiranje,
pracenje terapije pracenje terapije
Elektroforeza Elektroforeza
proteina (U) proteina (U)
NACB 2005. NACB 2005. NCCN NCCN Primjena Primjena Biljeg Biljeg
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Posebne preporuke za upotrebu kalcija i Posebne preporuke za upotrebu kalcija i paratiroidnog paratiroidnog hormona u hormona u
obradi obradi bolestika bolestika s tumorima s tumorima paratiroidne paratiroidne lijezde lijezde
Tumori Tumori
paratiroidne paratiroidne
lijezde lijezde
Posebne preporuke ** Posebne preporuke ** Neuroendo Neuroendo- -
krini krini tumori tumori
TA90 TA90- -IC IC MIA, MIA,
TA90 TA90- -IC IC
MIA, S100, MIA, S100,
TA90 TA90- -IC IC
LDH, TA90 LDH, TA90- -
IC IC
- - Melanom Melanom
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
relapsa relapsa
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
** ** Neuroendokrini Neuroendokrini tumori tumori
Dijagnoza i pracenje tumora Dijagnoza i pracenje tumora
koji proizvode VIP koji proizvode VIP
Serumski VIP natate Serumski VIP natate VIP VIP neuroendokrini neuroendokrini crijevni crijevni
karcinom karcinom
Dijagnoza i pracenje Dijagnoza i pracenje
pankreaticnih pankreaticnih gastrinoma gastrinoma
Serumski Serumski gastrin gastrin
natate natate
Gastrinom Gastrinom
Dijagnoza i pracenje Dijagnoza i pracenje
pankreaticnih pankreaticnih insulinoma insulinoma
Serumski Serumski insulin insulin
natate natate
Insulinom Insulinom
Dijagnoza i pracenje vecine Dijagnoza i pracenje vecine
neuroendokrinih neuroendokrinih karcinoma karcinoma
ukljucujuci i one koji nisu ukljucujuci i one koji nisu
povezani s klinickim povezani s klinickim
endokrinim sindromom endokrinim sindromom
Serumski Serumski
kromogranin kromogranin- -A (CgA) A (CgA)
Vecina karcinoma Vecina karcinoma disperznog disperznog
neuroendokrinog neuroendokrinog sustava sustava
Dijagnoza i pracenje Dijagnoza i pracenje
neuroendokrinih neuroendokrinih tumora tumora
povezanih s klinickim povezanih s klinickim
karcinoidnim karcinoidnim sindromom sindromom
5 5- -HIAA u 24 HIAA u 24- -satnom satnom
urinu urinu
Neuroendokrini Neuroendokrini karcinomi koji karcinomi koji
proizvode serotonin proizvode serotonin
Klinicka primjena Klinicka primjena Preporuceni biljeg Preporuceni biljeg Tumor Tumor
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Posebne preporuke *** Posebne preporuke *** Karcinom Karcinom
pluca pluca
Tiroglobulin Tiroglobulin, ,
Antitijela na Antitijela na
tiroglobulin tiroglobulin
Tiroglobulin Tiroglobulin, ,
Antitijela na Antitijela na
tiroglobulin tiroglobulin
- - - - - - Karcinom Karcinom
titnjace titnjace
Pracenje Pracenje
terapije terapije
Otkrivanje Otkrivanje
relapsa relapsa
Stupnjevanje/ Stupnjevanje/
prognoza prognoza
Dijagnoza/ Dijagnoza/
ispitivanje ispitivanje
pojedinacnog pojedinacnog
slucaja slucaja
Probiranje/ Probiranje/
rano rano
otkrivanje otkrivanje
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
*** Karcinom pluca *** Karcinom pluca
Da, za SCLC Da, za SCLC Diferencijalna Diferencijalna
dijagnoza, pracenje dijagnoza, pracenje
terapije, otkrivanje terapije, otkrivanje
recidiva recidiva
ProGRP ProGRP
Da, za NSCLC Da, za NSCLC Diferencijalna Diferencijalna
dijagnoza, prognoza, dijagnoza, prognoza,
pracenje terapije, pracenje terapije,
otkrivanje otkrivanje recidiva recidiva
CYFRA 21 CYFRA 21- -1 1
Da, za NSCLC Da, za NSCLC Diferencijalna Diferencijalna
dijagnoza, pracenje dijagnoza, pracenje
terapije, otkrivanje terapije, otkrivanje
recidiva recidiva
CEA CEA
Da, za SCLC Da, za SCLC Diferencijalna Diferencijalna
dijagnoza, pracenje dijagnoza, pracenje
terapije, otkrivanje terapije, otkrivanje
recidiva recidiva
NSE NSE
NACB 2005. NACB 2005. Primjena Primjena Biljeg Biljeg
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
The National Academy of
The National Academy of
Clinical Biochemistry
Clinical Biochemistry
Laboratory Medicine Practice
Laboratory Medicine Practice
Guidelines
Guidelines
www.nacb.org
www.nacb.org
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Ucestalost odredivanja tumorskih biljega
Prije prve terapije
(operacija, kemoterapija, hormonska terapija i radioterapija)
Nakon operacije odnosno poslije pocetka terapije
- 2 do 10 dana nakon terapije prema poluivotu biljega
- u razmacima od 3 mjeseca tijekom prve i druge godine
- u razmacima od 6 mjeseci u 3., 4. i 5. godini nakon prve
terapije
- prije bilo kakve promjene terapije
Kod sumnje na recidiv ili metastaze
U slucaju promjene stupnja bolesti
2 do 4 tjedna nakon prve pojave znacajnog porasta biljega
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Kriteriji za procjenu uspjenosti lijecenja*
Odgovor Tumorski biljeg
Progresija povecanje >25%
Djelomicna remisija smanjenje >50%
Potpuna remisija nije odredeno
*Working Group on Tumor Marker Criteria of International Society of
Oncodevelopmental Biology and Medicine, 1990
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Monoklonske Monoklonske gamapatije gamapatije
Monoklonske Monoklonske gamapatije gamapatije (MG) ili (MG) ili paraproteinemije paraproteinemije su su
heterogena skupina bolesti karakteriziranih heterogena skupina bolesti karakteriziranih
monoklonskom monoklonskom proliferacijom plazma proliferacijom plazma- -stanica i stanica i
prisutnocu prisutnocu monoklonskih monoklonskih, , elektroforetski elektroforetski i i
imunoloki homogenih, intaktnih imunoloki homogenih, intaktnih imunoglobulina imunoglobulina ili ili
njihovih fragmenata, njihovih fragmenata, tzv tzv. . monoklonskih monoklonskih
komponenti (MC), u serumu i/ili mokraci. komponenti (MC), u serumu i/ili mokraci.
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Monoklonske Monoklonske gamapatije gamapatije
Klasifikacija prema Klasifikacija prema International International Myeloma Myeloma Working Working
Group Group
1. 1. Multipli Multipli mijelom mijelom (MM) (MM)
2. 2. Monoklonska Monoklonska gamapatija gamapatija neutvr neutvrd denog znacenja (MGUS) enog znacenja (MGUS)
3. 3. uljajuci ili indolentni uljajuci ili indolentni mijelom mijelom
4. 4. Solitarni Solitarni plazmocitom plazmocitom kosti kosti
5. 5. Nesekrecijski Nesekrecijski mijelom mijelom ( ( 30% PS u KS) 30% PS u KS)
6. 6. Ekstramedularni Ekstramedularni plazmocitom plazmocitom
7. 7. Multipli Multipli solitarni solitarni plazmocitom plazmocitom (+/ (+/- - recidivirajuci recidivirajuci) )
8. 8. Plazma Plazma- -stanicna leukemija stanicna leukemija
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
KRITERIJ ZA DIJAGNOZU I TERAPIJU KRITERIJ ZA DIJAGNOZU I TERAPIJU
MULTIPLOG MIJELOMA MULTIPLOG MIJELOMA
- -Wintrobe Wintrobe` `s s Clinical Clinical Hematology Hematology, 2004. , 2004.- -
I. Citoloki kriteriji I. Citoloki kriteriji
A. Morfologija kotane sri A. Morfologija kotane sri
B. B. Plazmocitom Plazmocitom dokazan biopsijom (kosti ili u nekog tkiva) dokazan biopsijom (kosti ili u nekog tkiva)
II: Klinicki i laboratorijski kriteriji II: Klinicki i laboratorijski kriteriji
A. A. Mijelomski Mijelomski protein (M protein (M- -komponenta) u serumu dokazan IF(IE) komponenta) u serumu dokazan IF(IE)
B. B. Mijelomski Mijelomski protein (M protein (M- -komponenta) u mokraci dokazan IF(IE) komponenta) u mokraci dokazan IF(IE)
C. Radioloki nalaz C. Radioloki nalaz
D. Pojava D. Pojava mijelomskih mijelomskih stanica u najmanje dva razmaza periferne krvi stanica u najmanje dva razmaza periferne krvi
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Vizualni pregled
Bez promjena
Bence Jones protein?
Klinicka sumnja ili
prisutnost monoklonske
vrpce
Imunofiksacija
Elektroforeza
proteina u mokraci
(100 x ukonc.
uzorak)
Definicija M-P
(odred. razreda i
tipa)
Negativ.
nalaz
Prisutan BJ
protein
Denzitometrijska
kvantifikacija M-P
Imunofiksacija
Opisni nalaz + klinicka
informacija daju
tumacenje nalaza
Elektroforeza serumskih
proteina
NACIONALNA GRUPA ZA LIJECENJE
HEMATOLOKIH BOLESTI
Pododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologiju
IMUNOKEMIJA: D. Matiic, V. Preden-Kerekovic
Elektroforeza
serum. prot.
Proteinogram
Imunofiksacija
Imunoelektroforeza
DIJAGNOSTICKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA (M-P)
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
1. 1. Elektroforeza Elektroforeza proteina u serumu i mokraci proteina u serumu i mokraci
indicirana je za svakog bolesnika kod kojeg indicirana je za svakog bolesnika kod kojeg
postoji sumnja na poremecaj plazma stanica. postoji sumnja na poremecaj plazma stanica.
Nisko rezolutne elektroforeze:
elektroforeza na acetat-celulozi ili agarozi: razdvaja proteine
na pet frakcija; kod ove tehnike nije moguce postici dobro
razdvajanje
1
-(transferin) i
2
-globulinske frakcije (C
3
)
Visoko rezolutne elektroforeze:
kapilarna zonska elektroforeza omogucuje bolje razdvajanje
transferina i C
3
u podrucju kao i bolje uocavanje niskih
koncentracija M-proteina koji mogu putovati od
2
do gama
podrucja
Elektroforeza Elektroforeza serumskih serumskih proteina proteina moe moe se se
izvesti izvesti nisko nisko i i visoko visoko rezolutnim rezolutnim tehnikama tehnikama: :
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
NISKO REZOLUTNA ELEKTROFOREZA SERUMSKIH NISKO REZOLUTNA ELEKTROFOREZA SERUMSKIH
PROTEINA PROTEINA
1.Procjena pribline koncentracije glavnih serumskih
proteina: alb, alfa-1-AT,Hp,
alfa-2-M, C3, Tf, IgA i IgG
2.Detekcija monoklonskog proteina
3.Osjetljivost detekcije monoklonskog proteina
je 2 g/L na acetat-celulozi i 1 g/L na agarozi
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Vizualni pregled elektroforeze
Bez promjena
Klinicka sumnja ili
prisutnost monoklonske vrpce
I Imunofiksacija munofiksacija
Opisni nalaz + klinicka
informacija daju tumacenje
nalaza
Hp-Hb
Hb
CRP
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
IMUNOFIKSACIJA
-iako je nalaz elektroforeze negativan
kod suspektnih bolesnika treba napraviti
IF (IgD, IgE))
-imunofiksacija nije indicirana ako se
ustvrdi poliklonska
hipergamaglobulinemija
2. 2. Za Za definiranje definiranje razreda razreda i i tipa tipa M M- -proteina proteina indicirana indicirana
je je imunofiksacija imunofiksacija
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
3. 3. M M- -protein protein je je potrebno potrebno pratiti pratiti denzitometrijski denzitometrijski
a a IF IF nije nije potrebno potrebno ponavljati ponavljati ako ako se se nisu nisu
dogodile dogodile promjene promjene u u migraciji migraciji M M- -proteina proteina ili ili ako ako se se nije nije
pojavila pojavila nova nova vrpca vrpca
1
2
3
1 2 3
2. Nefelometrijski izmjereni Ig:
G = 4,6 g/L
A = 14,9 g/L
M = 0,62 g/L
Denzitometrijski izmjereni
IgA = 19,1 g/L
2. Nefelometrijski izmjereni Ig:
G = 26,3 g/L
A = 0,43 g/l
M = 0,35g/L
Denzitometrijski izmjereni:
IgG = 29,4 g/L
=8,16g/L =0,57g/L =14,3
=1,7-3,7; = 0,90-2,10
= 1,35-2,65) Alb M-prot.
1
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
4
4
4. Za sve bolesnike s poremecajem plazma stanica
potrebno je nefelometrijsko ili turbidimetrijsko
odredivanje Ig da bi se ustvrdila koncentracija ostalih
neukljucenih Ig
4. Nefelometrijski izmjereni Ig:
G = 22,74 g/L
A = 0,14 g/l
M = 0,10 g/L
Denzitometrijski izmjer. G = 21,4 g/L
Nefelometrijski odreeni Ig:
G=3,70 g/L
A=43,4 g/L
M=0,16g/L
Denzitometrijski odreen: IgA=36,7g/L
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
5 5. .Kod Kod bolesnika bolesnika s s multiplim multiplim
mijelomom mijelomom, , Waldenstrm Waldenstrm
makroglobulinemijom makroglobulinemijom i i amiloidozom amiloidozom
potrebno potrebno je je pratiti pratiti
promjene promjene u u konc koncentraciji entraciji M M- -
proteina proteina svakih svakih 1 1- -2 2 mj mj.; .;
dok je kod dok je kod MGNZ MGNZ
dovoljno je dovoljno je: : 1 1 x u x u godini godini
G = 16,3 g/L
G = 26,3 g/L
G = 12,3 g/L
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
6 6. . Hiperviskozni Hiperviskozni sindrom sindrom trai trai zamjenu zamjenu plazme plazme s s
indikacijama indikacijama utemeljenim utemeljenim na na klinickim klinickim znacajkama znacajkama
( (viskozitet viskozitet i i elektroforezu elektroforezu seruma seruma treba treba napraviti napraviti prije prije
nego nego se se plazma plazma zamijeni zamijeni, , radi radi usporedbe usporedbe koncentracija koncentracija
M M- -proteina proteina) )
Primjer Primjer elektroforeze elektroforeze bolesnika bolesnika s s Waldenstrm Waldenstrm m. m.
prije prije (A) i (A) i poslije poslije (B) (B) plazmafereze plazmafereze: :
A
B
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
7 7. . Krioglobuline Krioglobuline treba napraviti u svih treba napraviti u svih
bolesnika s M bolesnika s M- -proteinom koji pokazuju proteinom koji pokazuju
osjetljivost na osjetljivost na hladnocu hladnocu, , posebno kod onih posebno kod onih
sa M sa M- -IgM. IgM.
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Krioglobulinemija Krioglobulinemija
13 13
8 8
2,5 2,5
1 1
22 22
2,5 2,5
1 1
43 43
7 7
Monoklonska Monoklonska krioglobulinemija krioglobulinemija
IgM IgM
IgG IgG
IgA IgA
Bence Bence Jonesov Jonesov protein protein
Mijeana Mijeana krioglobulinemija krioglobulinemija s s
jednim jednim monoklonskim monoklonskim
proteinom proteinom
IgM IgM- -IgG IgG
IgG IgG- -IgG IgG
IgA IgA- -IgG IgG
Mijeana Mijeana poliklonska poliklonska
krioglobulinemija krioglobulinemija
IgM IgM- -IgG IgG
IgM IgM- -IgG IgG- -IgA IgA
1 1
2 2
3 3
% % Tip Tip
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Odre Odred divanje ivanje krioglobulina krioglobulina
Dokazivaje Dokazivaje prisutnosti prisutnosti krioglobulina krioglobulina
- - stvaranje precipitata ili gela na 4 stvaranje precipitata ili gela na 4- -10 10 C preko noci; C preko noci;
narednih 48 sati u slucaju negativnog nalaza narednih 48 sati u slucaju negativnog nalaza
Tipiziranje Tipiziranje krioglobulina krioglobulina
- - razlikovanje razlikovanje monoklonskih monoklonskih od od poliklonskih poliklonskih
krioglobulina krioglobulina s pomocu s pomocu imunoelektroforeze imunoelektroforeze
Kvantifikacija Kvantifikacija krioglobulina krioglobulina
- - odre odred divanje razlike u koncentraciji ukupnih proteina ivanje razlike u koncentraciji ukupnih proteina
u serumu i hladnom u serumu i hladnom supernatantu supernatantu
- - odre odred divanje koncentracije pojedinacnih ivanje koncentracije pojedinacnih
imunoglobulina imunoglobulina u precipitatu u precipitatu
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
kljucna komponenta interne kljucna komponenta interne
laboratorijske laboratorijske kontrole je izravan kontrole je izravan
kontakt kontakt biokemicara biokemicara i i klinicar klinicara a o o
slucaju koji je neuobicajene prirode slucaju koji je neuobicajene prirode
ili ili
ako postoji bilo kakav nesklad u ako postoji bilo kakav nesklad u
nalazu. nalazu.
8. Kontrola kvalitete laboratorijske evaluacije
M-proteina:
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Monoklonski slobodni lagani lanci Monoklonski slobodni lagani lanci
imunoglobulina, Bence imunoglobulina, Bence- -Jones proteini, Jones proteini,
(BJP), (BJP), su su homogena homogena populacija, populacija, kapa kapa
{k) {k) ili ili lambda lambda {k) tipa {k) tipa lakih lakih lanaca lanaca
imunoglobulina imunoglobulina koje koje stvara stvara maligni maligni klon klon
B B- -stanica stanica. .
9. Svim bolesnicima s multiplim mijelomom, Waldenstrm
makroglobulinemijom, amiloidozom i srodnim bolestima
potrebno je odrediti prisutnost i dnevno izlucivanje BJP
(IF: najmanje 100 x ukoncentriranog urina)
Bence-Jonesov protein
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Sinteza i metabolizam lakih lanaca Sinteza i metabolizam lakih lanaca
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Bence Bence- -Jones Jonesov ov protein protein
Prisutan BJ protein
Negativan nalaz: ako na elektroforetskoj slici
100x ugucene mokrace ne nalazimo nikakvu
suspektnu monoklonsku vrpcu
Elektroforeza proteina u mokraci
(najmanje 100 x ukonc. uzorak)
Preporuka je
koristiti 24h
mokracu
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr
Serum Free Light Chain Assay in Diagnosis and Monitoring of Serum Free Light Chain Assay in Diagnosis and Monitoring of
Multiple Multiple Myeloma Myeloma
D.E. Smith, A.R. Bradwell, G.P. Mead, H.D. Carr-Smith
Article Archives: 2005, Volume 16, Number 1
Introduction
A distinguishing feature of the monoclonal gammopathies is the
production of homogeneous populations of immunoglobulins by
malignant clones of B-cells. Production of free light chains (FLCs) is an
important feature of light chain diseases, such as light-chain myeloma
(LCMM), primary systemic (AL) amyloidosis, and light-chain deposition
disease (LCDD). However, in a retrospective study of 745 archived samples
from patients with plasma cell disorders, 91% had abnormal FLC levels, and
97% had either elevated FLC levels or an abnormal ratio (see Table 1) [1-3].
Among those patients with intact immunoglobulin myeloma, 96% were found
to have either elevated FLC levels or an abnormal ratio.
Referentni intervali za slobodne lake lance u serumu:
0,6 (0,26 0,6 (0,26- -1,65) 1,65) 12,7 (5,7 12,7 (5,7- -26,3) 26,3) 7,3 (3,3 7,3 (3,3- -19,4) 19,4)
Sl Sl. kapa/ . kapa/sl sl. . lambda lambda Slobodni Slobodni lambda lambda (mg/L) (mg/L) Slobodni kapa (mg/L) Slobodni kapa (mg/L)
distributed by
www.perpetuum-lab.com.hr