UNIVERZITET U SARAJEVU PRIRODNO-MATEMATIKI FAKULTET ODSJEK ZA BIOLOGIJU BIOHEMIJA I FIZIOLOGIJA

BRASINOSTEROIDI KAO BILJNI HORMONI I NJIHOVO SIGNALIZIRANJE

(Seminarski rad iz predmeta Regulacija razvia biljaka) Mentor: prof. dr. Adisa Pari Studenti: Karahodi Arnela Zuki Ema

Sarajevo, 2014.

1. BRASINOSTEROIDI KAO BILJNI HORMONI I NJIHOVO SIGNALIZIRANJE

Brasinosteroidi su klasa biljnih hormona, koji promoviu rast elija i organa, kao i diobu elija. Hemijski posmatrano, brasinosteroidi su steroidi, derivati kampesterola. Brasinosteroidi su biljkama neophodni funkcija: izduivanje organa, diferencijaciju provodnog tkiva i listova, odgovor na svjetlost i ubrzavanje starenja. za niz

Grupa prirodnih regulatora sa steroidnom strukturom i stimulativnim djelovanjem na biljke naena u ekstraktima polena Brassica napus je nazvana skupnim imenom brasini. Iz ovih frakcija su kasnije izdvojena aktivna jedinjenja, koja su nazvana brasinosteroidi. Oko 40 brasinosteroida ini grupu endogenih hormona koji samostalno ili u interakciji sa drugim hormonima, moduliraju rast i razvojne procese svih biljaka.

1.1. Otkrie i rasprostranjenje brasinosteroida

Otkrie brasinosteroida je proizalo iz nastojanja da se pronau stimulativne supstance, koje bi poboljale rast i prinos gajenih biljaka. Brassica napus i Alnus glutinosa-njihovi polenski ekstrakti pokazali najjae stimulativno djelovanje. Test pomou kojeg je mjerena stimulacija zasnivao se na izduivanju druge internodije graha. Brasinosteroidi se nalaze iroko rasprostranjeni kod svih biljaka, ukljuujui angiosperme, gimnosperme i alge.

1.2. Uloge brasinosteroida

Ovi steroidni biljni hormoni su osnovni regulatori razvoja, podjele i diferencijacije biljnih elija. Njihova signalizacija je nuna za elongaciju organa, vaskularnu diferencijaciju, razvoj lista, klijavost sjemena i prilagodljivost spoljanjoj sredini. BRI1 je biljni steroidni receptor koji se znatno razlikuje u strukturi od opirno izuavane superporodice steroidnih receptora koja je otkrivena kod ivotinja. Biljke i ivotinje moraju imati molekule steroidne signalizacije za normalan razvoj, ali se putevi steroidne signalizacije kod biljaka i ivotinja uveliko razlikuju.

1.3. Uloga receptor kinaza u BR signaliziranju

Tri najvanije strukturne osobine ove vrste proteina su: vanelijska (ekstracelularna) ligandna domena, transmembranski niz i unutarelijska citoplazmatska domena koja se sastoji od jukstamembranske regije, domene katalitike kinaze sa 12 poddomena, i kratke Cterminalne regije.

Vie od 220 tih receptora poput kinaze u Arabidopsis-a i gotovo 400 u rii imaju vanelijsku domenu s viestrukim leucin bogatim ponavljanjima, a klasificiraju se kao LRR RLK.

LRR RLK igraju bitne uloge u regulaciji rasta i razvoju biljaka, kao i u odbrambenim odgovorima na razne patogene.

1.4. BR1 kao BR receptor

Analizama na mutantima je pokazano da je BRI receptorska kinaza Arabidopsis-a, rie, paradajza i graka potrebna za normalnu percepciju BR i rast biljaka. BRI Arabidopsis-a (lan je LRR RLK potporodice X) je protein sa 1196 aminokiselina, od ega 791 aminokiselina pripada ekstracelularnoj domeni koja sadri vie od 20 LRR motiva, zatim slijedi hidrofobna transmembranska domena, koja obuhvata 792-814 aminokiselinu.

Citoplazmatski dio BRI1 sastoji se od jukstamembranske regije (815-882 aminokiselina), praen sa Ser/Thr kinaznom domenom (883-1155 aminokiseline) i zavrnim kratkim slijedom od 41 aminokiseline, koje ine karboksi-terminalnu domenu. BRI1 funkcionie kao barem jedna komponenta brasinosteroidnog receptora. Takoe, odreena istraivanja su pokazala da se brasinosteroid vee direktno za BRI1 bez posrednog proteina.

LRR su ukljuene u protein-protein interakcije i nisu ukljuene u vezivanje malih molekula kao to su steroidi, to ukazuje na to da se vezivanje BR za BRI1 moe odvijati kroz otok domenu ugraenu u LRR regiji. Ovo je eksperimentalno potvreno pomou radioobiljeenih BL i rekombinantnih proteina, koji se sastoje od otok domena sa raznim kombinacijama susjednih LRR.

Navedeni eksperimenti neosporno pokazuju da je BRI1 receptor brasinosteroida. Zanimljivo je istaknuti da BRI1 iz paradajza djeluje dvojako, tj. vezuje se i za brasinosteroid i za peptidni hormon sistemin, ukljuen u ranu signalizaciju. Sistemin nije pronaen kod Arabidopsis-a, iako se zna da nekoliko drugih LRR RLK Arabidopsis-a imaju male peptidi kao ligande.

Jedna od vrsta BRI1, OsBRI1, koji se nalazi u rii, utvren je kao kljuan za razvoj organa putem kontrole irenja i podjele elija, ali da ipak nije znaajan za pokretanje organa ili razvoj obrazaca. Jo jedno istraivanje koje je provedeno na biljkama rie je pokazalo ak i moguu poljoprivrednu primjenu regulacije BRI1 ekspresije. Djelomino suzbijanje ekspresije OsBRI1 je rezultiralo fenotipom sa uspravnim listovima, to je dovelo do poveanja uroda za 30% u odnosu na gusto sijanje .

1.5. BAK1/BRI1 heterodimer potie signalizaciju

BAK1 je lan LRRII RLK potporodice te je genetskom analizom utvrena njegova uloga u signalizaciji, a prekomjerna ekspresija kinazno neaktivnog mutanta BAK1 je dovela do negativnog efekta, koji se uglavnom ogleda u prekidu heterodimerskog kompleksa izmeu BRI1 i BAK1. Otkrie da BAK1 formira heterodimer sa BRI1 podrava hipotezu da signalizacija dijeli neke slinosti sa signalizacijom kinaza kod sisara (tirozin kinaza i TGF- receptor kinaza). Nedavna otkria nekoliko osobina signalizacije, ukljuujui BRI1 homodimerizaciju i in vivo vezu izmeu BAK1 i BRI1 zavisnu od liganada ukazuje na znaajne slinosti izmeu signalizacije brasinosteroida i TGF signalizacije.

1.6. SERK1 kao dio BRI1 signalnog kompleksa

SERK1, kao i BAK1, je lan LRRII potporodice i dijeli 80% aminokiselinske sekvence identine sa BAK1. Genetiki dokazi za ulogu SERK1 u BR signalizaciji su pokazani ukrtavanjem serk1-1 mutanta koji sa slabim BRI1 alelom, bri1-119. Serk1-1/bri1-119 dupli mutant je imao krae petiole, smanjenu veliinu rozete i krae cvasti u odnosu na bri1-119. Ovo ukazuje na ulogu SERK1 u BR signalizaciji koja je vezana za modulaciju aktivnosti BRI1 na nain koji je slian nain, ali ne tako snaan kao BAK1.

1.7. Supstrat BRI1 i meudjelujui proteini

TTL djeluje sa BRI1 u elijama kvasca na nain koji je zavisan od kinaza. Genetski dokazi ukazuju na to da je TTL negativan regulator signalizacije, dok in vitro dokazi ukazuju na to da je TTL supstrat BRI1, iako izravno djelovanje ova dva proteina u biljkama nije jo bilo uoeno. Jo jedan negativan regulator signalizacije je BKI1, koji je povezan za membranu u nedostatku brasinosteroida i vee se za BRI1, pri emu vjerovatno onemoguuje djelovanje nekih funkcija BRI1.

Djelovanje brasinosteroida izaziva odvajanje BKI1 od membrane, to utie na oslobaanje signalizacionog puta. BRI1 i BKI1 djeluju izravno in vitro i u biljkama. BKI1 koji je vezan za membranu se vee direktno za kinaznu domenu BRI1, i tako onemoguuje vezanje BRI1 sa BAK1. Trei supstrat BRI1 je TRIP-1 koji je kod Arapidopsis-a snano fosforiziran kinaznom domenom BRI. Ovaj supstrat je glavni izbor za citoplazmatski supstrat BRI1, ali njegova funkcionalna uloga u signalizaciji ostaje nejasna.

1.8. Komponente toka signalizacije

Odreene su etiri komponente toka signalizacije, a to su: kinaza, fosfotaza, i dva nova faktora transkripcije. Nedavne analize su utvrdile funkcionalne kategorije stotina gena regulisanih brasinosteroidima, koje se odnose na mnotvo elemenata, od proteina koji modifikuju elijski zid do faktora transkripcije.

HVALA NA PANJI!