Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Na temelju lanka 17.

stavak 2. i lanka 72. Zakona o hrani (Slubeni glasnik BiH, broj 50/04) i lanka 17. Zakona o Vijeu ministara Bosne i Hercegovine (Slubeni glasnik BiH, br. 30/03, 42/03, 81/06, 76/07, 81/07, 94/07 i 24/08), Vijee ministara Bosne i Hercegovine, na prijedlog Agencije za sigurnost hrane Bosne i Hercegovine, u suradnji s nadlenim tijelima entiteta i Brko Distrikta Bosne i Hercegovine, na 76. sjednici, odranoj 12. veljae 2009. godine, donijelo je O METODAMA ZA KONTROLU MEDA I DRUGIH PELINJIH PROIZVODA DIO PRVI - OPE ODREDBE lanak 1. (Predmet) (1) Pravilnikom o metodama za kontrolu meda i drugih pelinjih proizvoda (u daljnjem tekstu: Pravilnik) propisuju se metode kontrole kvalitete meda i drugih pelinjih proizvoda, te proizvoda na bazi meda i drugih pelinjih proizvoda (u daljnjem tekstu: proizvod). (2) Pravilnikom su definirane: a) metode uzimanja uzoraka, b) metode fizikih, kemijskih i biolokih analiza proizvoda. (3) Uzimanje uzoraka, fizike, kemijske i bioloke analize proizvod provode se prema metodama navedenim u aneksima I. i II. koji su sastavni dio ovoga Pravilnika. DIO DRUGI POSEBNE ODREDBE lanak 2. (Metode uzorkovanja) Metod uzimanja uzoraka meda i drugih proizvoda kojima se utvruju postupci i naini uzimanja uzoraka na kojima se obavlja kontrola kvalitete tih proizvoda naveden su u Aneksu I. ovoga Pravilnika. lanak 3. (Metode fizikih, kemijskih i biolokih analiza) Metod fizikih, kemijskih i biolokih analiza meda i drugih proizvoda kojima se utvruju uvjeti i postupci za izvoenje fizikih, kemijskih i biolokih ispitivanja proizvoda radi provjeravanja kvalitete naveden su u Aneksu II. ovoga Pravilnika. lanak 4. (Upotreba reagensa) Svi reagensi koji se upotrebljavaju za kemijske analize proizvoda obuhvaenih ovim Pravilnikom moraju biti u granicama propisane analitike istoe, a voda koja se koristi mora biti destilirana. lanak 5. (Preciznost odreivanja) (1) Preciznost odreivanja metoda fizikih, kemijskih i biolokih analiza, u skladu s ovim Pravilnikom, utvruje se prema naelima dobre laboratorijske prakse, a izraava se kao relativno odstupanje od prosjeka dobivenog u najmanje dva istovremena odreivanja. 1

PRAVILNIK

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 (2) Doputena razlika rezultata dvaju pojedinanih odreivanja izvedenih usporedo ili ubrzo jedno za drugim, na istom uzorku za ispitivanje, istom metodom, u istim uvjetima, koje je obavio isti analitiar i u istom laboratoriju, mora biti u granicama propisane metode, kako je to utvreno ovim Pravilnikom. DIO TREI PRIJELAZNE I ZAVRNE ODREDBE lanak 6. (Prestanak vaenja odredaba) Danom stupanja na snagu ovoga Pravilnika prestaju vaiti odredbe Pravilnika o kvaliteti meda i drugih pelinjih proizvoda i metodama za kontrolu kvalitete meda i drugih pelinjih proizvoda (Slubeni list SFRJ, br. 4/85 i 7/92), kojim se propisuju metode za kontrolu kvalitete meda i drugih pelinjih proizvoda. lanak 7. (Stupanje na snagu ) Ovaj Pravilnik stupa na snagu osmoga dana od dana objave u Slubenom glasniku BiH.

Predsjedatelj Vijea ministara BiH dr. Nikola piri VM broj _____________/09 12. veljae 2009. godine Sarajevo

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 ANEKS I. POGLAVLJE I. METODE UZIMANJA UZORAKA Odjeljak A. Uzimanje uzoraka (1) Pri obavljanju inspekcijskog nadzora, uzorci meda i drugih pelinjih proizvoda mogu se uzeti u fazi proizvodnje, prerade, obrade i distribucije. (2) Uzeti uzorak za ispitivanje mora predstavljati prosjean sastav cjelokupne koliine proizvoda od kojeg se uzorak uzima. Odjeljak B. Proizvodna serija, ambalana jedinica, poiljka (1) Pod proizvodnom serijom, u smislu ovoga Pravilnika, podrazumijeva se odgovarajua koliina proizvoda iste vrste proizvedena istoga dana, odgovarajueg obujma, s obavezatnom identifikacijskom oznakom. (2) Pod ambalanom jedinicom meda i drugih pelinjih proizvoda podrazumijevaju se utvrene koliine proizvoda iste vrste upakirane u pojedinana pakiranja odgovarajueg obujma, s obveznom identifikacijskom oznakom. (3) Ambalane jedinice mogu biti upakirane u zbirna transportna pakiranja, na koja se primjenjuju odredbe ovoga Pravilnika. (4) Pod poiljkom proizvoda podrazumijeva se istovremeno isporuena koliina proizvoda u pojedinanim i zbirnim pakiranjima koja se stavljaju u promet. Odjeljak C. Uzorak, zapisnik, pakiranje i uvanje uzorka (1) Uzorak za ispitivanje proizvoda ine najmanje tri istovjetne ambalane jedinice od ukupno uzetog uzorka, s tim to te jedinice moraju biti istovjetne po sastavu i obujmu. (2) Ovlatena osoba koja uzima uzorak za ispitivanje obvezatno sastavlja zapisnik o uzimanju uzoraka, u koji unosi podatke vane za rezultat ispitivanja: mjesto, datum i vrijeme uzimanja uzorka, svrhu uzimanja uzorka, vrstu i koliinu proizvoda od kojeg se uzima uzorak, broj pojedinano uzetih uzoraka i koliinu ukupno uzetog uzorka, identifikacijske oznake za uzorak i koliinu uzorka koja se dostavlja na ispitivanje. (3) Uzorak se pakira u staklene ili plastine posude koje se zatvaraju istim i suhim zatvaraima i oznaavaju tako da se oznaka ne moe lako skinuti ni izbrisati, a potom se u njih utiskuje slubeni peat ili stavlja plomba. (4) Uzeti uzorci uvaju se u uvjetima propisanim ovim Pravilnikom za odgovarajue proizvode. (5) Ako su proizvodi upakirani u originalne ambalane jedinice manjeg obujma ili mase, uzeti uzorak moe biti svaka nasumice uzeta pojedinana jedinica.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 POGLAVLJE II. UZIMANJE UZORAKA MEDA I DRUGIH PELINJIH PROIZVODA Odjeljak A. Broj uzoraka, formiranje uzorka (1) Broj jedinica uzetog uzorka za ispitivanje ovisi o vrsti proizvoda i veliini proizvodne serije odnosno poiljke. (2) Broj jedinica uzetog uzorka utvruje se prema sljedeoj tablici:

Vrsta pakiranja

Koliina od koje se uzorak uzima 1 jedinica 2 - 5 jedinica > 5 - 60 jedinica > 60 - 80 jedinica > 80 - 100 jedinica

Kante ili bave

Masa ukupno Broj ambalanih jedinica uzetog uzorka koje se uzimaju kao uzorak (g) 1 500 2 500 3 1 000 4 1 000 5 1 000

Za svaku daljnju stotinu ili zapoetu stotinu kanti/bavi, broj kanti/bavi za uzimanje uzoraka poveava se za 1. Staklenke (do 1 kg) 1 - 100 jedinica > 100 - 500 jedinica > 500 - 1.000 jedinica > 1.000 - 10.000 jedinica 1 2 3 4 500 500 500 500

Ako je poiljka vea od 10.000 staklenki, na svakih daljnjih 2.500 staklenki uzima se po jo jedan uzorak. Ostale vrste pakiranja (do 250 g) do 5 000 jedinica za svakih daljnjih 2.000 jedinica 1 1

(3) Ako svaki uzeti uzorak meda ukupno iznosi vie od tri ambalane jedinice, od njih se formira jedan uzorak, pri emu za svaku ambalanu jedinicu uzorka mora postojati jednaka mogunost da bude izdvojena kao ambalana jedinica uzorka uzetog za ispitivanje. (4) Za uzimanje uzoraka meda iz kante/bave upotrebljava se metalna sonda s odjeljcima (slika 1). Metalna se sonda sastoji od dviju koncentrinih cijevi koje ulaze jedna u drugu. Donji dio sonde je zailjen. Unutarnja cijev sonde ima ruicu kojom se sonda moe zatvoriti kada je okrenemo za 90o. (5) Uzorak meda uzima se tako to se zatvorena, ista i osuena sonda uroni u med do kraja zajednikog otvora. U medu se sonda otvori pa zatvori i s uzetim uzorkom izvlai iz proizvoda.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09

Slika 1. Metalna sonda za uzimanje uzoraka meda

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 ANEKS II. POGLAVLJE I. METODE FIZIKALNIH, KEMIJSKIH I BIOLOKIH ANALIZA MEDA I DRUGIH PELINJIH PROIZVODA Odjeljak A. Metode fizikalnih, kemijskih i biolokih analiza Metode fizikalnih, kemijskih i biolokih analiza kojima se obavlja kontrola kvaliteta meda i drugih pelinjih proizvoda su: a) priprava uzoraka za analizu; 1 b) odreivanje elektrine vodljivosti;1, 2 c) odreivanje reduciranih eera;1 d) odreivanje saharoze;1 e) odreivanje vode u medu;1 f) odreivanje tvari netopivih u vodi (gravimetrijska metoda);2 g) odreivanje pepela;2 h) odreivanje kiselosti;1, 2 i) odreivanje aktivnosti dijastaze;1 j) odreivanje hidroksimetilfurfurola HMF (fotometrijska metoda po Winkleru2 i metoda na dvije valne duljine po Whiteu2);1 k) bioloka metoda analize peluda u medu; l) odreivanje vode u matinoj mlijei i peludu; m) odreivanje bjelanevina u matinoj mlijei; n) odreivanje ekstrakta propolisa u alkoholnoj otopini.

1 2

Codex standard for honey Usklaene metode za med Europske komisije

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 POGLAVLJE II. METODE FIZIKALNIH, KEMIJSKIH I BIOLOKIH ANALIZA KOJIMA SE ISPITUJE KONTROLA KVALITETE MEDA I DRUGIH PELINJIH PROIZVODA Odjeljak A. Priprava uzorka za analizu (1) Ovisno o konzistenciji meda, uzorci za analizu pripravljaju se na razne naine. (2) Ako je med u tekuem stanju, prije poetka analize polako se izmijea tapiem ili se protrese. (3) Ako je med granuliran, zatvorena posuda s uzorkom stavi se u vodenu kupelj i zagrijava 30 minuta na temperaturi od 60 C, a prema potrebi i na temperaturi od 65 C. Za vrijeme zagrijavanja moe se promijeati tapiem ili kruno protresti, a potom brzo prohladiti. (4) Ako se odreuje dijastaza ili hidroksimetilfurfurol, med se ne zagrijava. (5) Ako med sadri strane tvari, poput voska, dijelove pela ili dijelove saa, uzorak se zagrijava na temperaturi od 40 C u vodenoj kupelji, a potom procijedi kroz tkaninu koja se stavlja na ljepilo zagrijavano toplom vodom. (6) Ako je med u sau, sae se otvori, procijedi kroz iano sito s kvadratnim otvorima dimenzija 0,5 x 0,5 mm. Ako dio saa i voska proe kroz sito, uzorak se zagrijava u vodenoj kupelji na temperaturi od 60 C, a prema potrebi zagrijava se 30 minuta i na temperaturi od 65 C. Za vrijeme zagrijavanja promijea se tapiem ili protrese krunim pokretima, a potom se brzo prohladi. (7) Ako je med u sau granuliran, zagrijava se da bi se vosak otopio, promijea se i ohladi. Nakon hlaenja vosak se odstrani. Odjeljak B. Odreivanje elektrine vodljivosti Podruje primjene Metoda je valjana za odreivanje elektrine vodljivosti meda u rasponu od 0,1 do 3 miliSimensa po centimetru-1 (mS/cm-1). Definicija Elektrina vodljivost meda definirana je s pomou 20%-tne volumne vodene otopine meda na 20 C, pri emu se 20% odnosi na suhu tvar meda. Rezultati su izraeni u mS/cm-1. Naelo Elektrina vodljivost otopine koja sadri 20 g suhe tvari meda u 100 ml destilirane vode mjeri se s pomou elektrokonduktometrijske elije. Odreivanje elektrine vodljivosti temelji se na mjerenju elektrine otpornosti, koja je reciprona elektrinoj vodljivosti. Metoda je utemeljena na originalnom Vorwohlovom radu (1 - 5). Reagensi Ukoliko nije na drukije odreeno, reagensi moraju biti prepoznatljive analitike istoe ili kvalitete. Voda bi trebala biti svjee destilirana ili ekvivalentne kvalitete.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Otopina kalijeva klorida 0,1 M: otopiti 7,4557 g KCl (kalijeva klorida), osuenog na 130 C, u svjee destiliranoj vodi u odmjernoj tikvici obujma 1.000 ml i dopuniti do oznake destiliranom vodom. Pripraviti je na dan koritenja. Oprema Konduktometar, nieg reda 10-7S. Konduktometrijske elije, platinske dvostruke elektrode (imerzicijske elektrode). Termometar s osjetljivou mjerenja 0,1 C. Vodena kupelj, termostatike kontrole temperature na 20 0,5 C. Odmjerne tikvice, obujma 100 i 1.000 ml. Menzura, visokog oblika. Postupak Odreivanje konstante elije Ukoliko konstanta konduktometrijske elije nije poznata, postupak je sljedei: uliti 40 ml otopine kalijeva klorida u menzuru; ugoditi konduktometrijsku eliju na mjerenje konduktivnosti; temeljito isprati otopinom kalijeva klorida i uroniti eliju u otopinu zajedno s termometrom; oitati elektrinu vodljivost otopine u mS nakon postizanja temperature od 20 C. Napomena Da bi se izbjegle pogreke u rezultatu zbog efekta polarizacije, vrijeme mjerenja trebalo bi biti to je mogue krae. Konstanta elije K izraunava se s pomou sljedee formule:

K = 11,691 1 G
gdje je: Kkonstanta elije izraena u cm-1; Gelektrina vodljivost (mS) mjerena s konduktometrijskom elijom; 11,691- zbroj srednje vrijednosti elektrine vodljivosti svjee destilirane vode u mS/cm i elektrine vodljivosti 0,1 M otopine kalijeva klorida na 20 C.

Elektrodu temeljito isprati destiliranom vodom nakon odreivanja konstante elije. Kada nije u upotrebi, elektroda se dri u destiliranoj vodi da bi se izbjeglo starenje platinske elektrode.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Priprava uzorka Uzorak se pripravlja prema metodi priprave uzorka za analizu propisanu u Odjeljku A. ovoga Poglavlja. Priprava otopine s uzorkom Otopiti koliinu meda koja je ekvivalentna 20 g anhidriranog meda u destiliranoj vodi. Prenijeti kvantitativno otopinu u volumetrijski sud obujma 100 ml i dopuniti do oznake destiliranom vodom. Uliti 40 ml otopine u menzuru koju nakon toga treba staviti u vodenu kupelj na 20 C. Temeljito isprati konduktometrijsku eliju s veim dijelom otopine uzorka. Uroniti konduktometrijsku eliju u otopinu uzorka. Oitati vodljivost (mS) nakon to se postigne navedena temperatura. Napomena: 1. Mjerenje bi se trebalo obaviti to je mogue bre da bi se izbjegle pogreke u rezultatu. 2. Ako je odreivanje raeno na razliitim temperaturama zbog nedostatka termostatike elije, tada se za izraun moe koristiti korekcijski faktor za 20 C, za temperaturu iznad 20 C umanjujemo za 3,2% od vrijednosti za svaki C, a za temperaturu ispod 20 C uveavamo za 3,2% od vrijednosti za svaki C. Mjerne podatke koje smo korigirali spomenutim vrijednostima faktora ne moemo validirati u ring kontrolama. Meutim, nema znaajne razlike izmeu konduktivnosti 50 uzoraka meda mjerenih na 20 C i na temperaturama koje variraju od 20 do 26 C nakon primjene spomenutih korekcijskih faktora. Izraun i izraavanje rezultata Elektrina vodljivost izraunava se prema sljedeoj formuli :

S
gdje je: SH G K

= KG

elektrina vodljivost otopine meda (mS/cm) vodljivost (mS) konstanta elije (cm).

Odjeljak C. Odreivanje reduciranih eera a) Metoda s Fehlingovim otopinama Naelo Ova metoda temelji se na redukciji Fehlingove otopine titracijom s pomou otopine reduciranih eera iz meda uz upotrebu metilenskog modrog bojila kao indikatora.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Reagensi (1) Fehlingova otopina a) Otopina A: otopi se 69,28 g bakrenog sulfata (CuSO4 5H2O) i dopuni se destiliranom vodom do jedne litre. Otopina se pripravi dan ranije prije postupka titracije. b) Otopina B: otopi se 346 g kalijnatrijeva tartarata (C4H4KNaO6 4H2O) i 100 g natrijeva hidroksida (NaOH) u jednoj litri destilirane vode. Otopina se potom filtrira. (2) Standardna otopina invertnog eera (10 g/l vode): izvae se 9,5 g iste saharoze, doda 5 ml otopine klorovodonine (solne) kiseline HCl (oko 36,5 %) i dopuni destiliranom vodom do 100 ml. Otopina se moe pohraniti nekoliko dana, ovisno o temperaturi: na temperaturi od 12 C do 15 C do sedam dana, a na temperaturi od 20 C do 25 C do tri dana. Pripravljena otopina dopuni se vodom do jedne litre. Neposredno prije upotrebe odgovarajui se obujam otopine neutralizira 1 mol otopinom NaOH/1 i zatim se razrijedi do zahtijevane potrebne koncentracije (2 g/l) - standardna otopina. Napomena: 1%-na zakiseljena otopina invertnog eera stabilna je nekoliko mjeseci. (3) Otopina metilenskog modrog bojila: otopi se 2 g metilenskog modrog bojila u destiliranoj vodi, a zatim se razrijedi vodom do jedne litre. (4) Stipsa (alaun) a) Otopina stipse: pripravi se hladno zasiena otopina (K2SO4Al2(SO4)3 24H2O) u vodi. Potom se, uz stalno mijeanje tapiem, dodaje amonijev hidroksid dok otopina ne postane alkalna, to se utvruje lakmus-papirom. Otopina se pusti da se slegne i ispire vodom uz dekantiranje sve dok je voda slabo pozitivna testiranjem na sulfate, to se utvruje otopinom barijeva klorida. Viak vode se odlije, a preostala pasta pohrani u boci s bruenim zatvaraem. Priprava uzorka Postupak I. (primjenjiv na med koji moe sadrati talog) a) Izvae se 25 g (W1) homogeniziranog meda i prenese u odmjernu tikvicu obujma 100 ml, doda se 5 ml stipse i dopuni vodom do oznake, pri temperaturi od 20 C, pa se otopina filtrira. b) U odmjernu tikvicu obujma 500 ml otpipetira se 10 ml uzorka pod a) i razrijedi destiliranom vodom do oznake na tikvici (razrijeena otopina meda). Postupak II. a) Izvae se 2 g homogeniziranog meda (W2), prenese u odmjernu tikvicu obujma 200 ml i otopi u vodi, a zatim se dopuni vodom do oznake na tikvici (otopina meda). b) Odmjeri se 50 ml otopine meda pod a) i dopuni destiliranom vodom do 100 ml (razrijeena otopina meda). Standardizacija Fehlingove otopine Fehlingova se otopina standardizira tako to se otpipetira 5 ml Fehlingove otopine A i pomijea s 5 ml otopine B (Fehlingova otopina). Ta otopina mora potpuno reagirati s 0,050

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 g invertnog eera dodanog u koliini od 25 ml kao standardna otopina invertnog eera (2 g/l). Prethodna titracija Ukupni obujam tvari koje reagiraju na kraju redukcijske titracije mora iznositi 35 ml, to se postie dodavanjem odreene koliine vode prije poetka titracije. Budui da se posebnim propisom o medu i drugim pelinjim proizvodima propisuje vie od 60% reduciranih eera (raunato kao invertni eer), potrebno je prethodno obaviti titraciju da bi se utvrdio toan obujam vode koja se dodaje, kako bi se u postupku analize osigurala redukcija pri stalnom obujmu. Obujam potrebne koliine vode dobiva se oduzimanjem potroenog obujma razrijeene otopine meda u prethodnoj titraciji (X ml) od 25 ml (25 ml X). Pipetom se odmjeri 5 ml Fehlingove otopine A i prenese u stoastu Erlenmeyerovu tikvicu obujma 250 ml, doda se 5 ml Fehlingove otopine B, 7 ml destilirane vode, malo plovuca ili drugog slinog sredstva i 15 ml razrijeene otopine meda iz birete. Medna se mjeavina zagrijava do vrenja i dvije minute odrava da polako vrije. Za vrijeme vrenja otopine, doda se 1 ml 0,2%-ne otopine metilenskog modrog bojila i titracija se zavri za ukupno tri minute, uz ponovno dodavanje razrijeene otopine meda sve dok ne iezne boja indikatora. Potroeni obujam razrijeene otopine meda koji je potpuno reduciran obiljeava se s X ml. Odreivanje. Pipetom se odmjeri 5 ml Fehlingove otopine A i prenese u stoastu Erlenmeyerovu tikvicu obujma 250 ml, te se doda 5 ml Fehlingove otopine B. Zatim se doda (25 ml X ml) destilirane vode, malo kamena plovuca ili drugog odgovarajueg sredstva i iz birete razrijeena otopina meda, tako da za kompletnu titraciju ostane oko 1,5 ml (X ml - 1,5ml). Potom se hladna mjeavina zagrijava do vrenja i dvije minute odrava da umjereno vrije. Za vrijeme vrenja doda se 1,0 ml 0,2%-ne otopine metilenskog modrog bojila, pa se titracija, dodavanjem razrijeene otopine meda do obezbojenja indikatora, mora zavriti ukupno za tri minute vrenja. Potroena koliina razrijeene otopine meda obiljeava se s Y ml. Izraun Invertni eer izraava se u g/100 g meda (%) i izraunava ovisno o nainu priprave uzoraka (postupak I. ili II). Ako se primijeni postupak I, izraunava se prema sljedeoj formuli:

Postotak invertnog ecera C =

25

1000

gdje je: CW1 Y1 -

invertni eer (g) masa uzetog uzorka (g) obujam razrijeene otopine meda potroenog za odreivanje (ml).

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Ako se primijeni postupak II, izraunava se prema sljedeoj formuli:

Postotak invertnog ecera C =

1000

gdje je: CW2 Y2 -

invertni eer (g) masa uzetog uzorka (g) obujam razrijeene otopine meda potroenog za odreivanje (ml).

Napomena: Radi preciznosti i ponovljivosti rezultata, za svaki je pokus nuno odrediti potreban obujam vode koju treba dodati da bi ukupan obujam iznosio 35 ml. U sljedeoj su tablici dane pribline vrijednosti, pod pretpostavkom da je poetna masa uzorka iznosila 25 g odnosno 2 g. Sadraj invertnog eera Potrebna koliina vode, (%) (ml) 60 8,3 65 9,6 70 10,7 75 11,6 Ponovljivost: Razlika izmeu titracija u dva odreivanja izvedena istovremeno ili ubrzo jedno za drugim ne iznosi vie od 0,1 ml. b) Volumetrijska metoda po Luff - Schoorlu Ova metoda temelji se na naelu da u odreenim uvjetima reducirani eer (prirodni invert) prevede Cu2+ ione u Cu+ ione. Nepotroena koliina Cu2+ iona retitrira se otopinom tiosulfata. Iz razlike utroka za slijepi pokus i pokus oitava se koliina eera iz tablice. Nereducirani disaharid (saharoza) mora se predhodno invertirati, odnosno hidrolizirati na nereducirane monosaharide s pomou kiseline, a zatim se odreuju s pomou Luffovog reagensa. Na taj se nain dobiva podatak o ukupnoj koliini eera u ispitivanom uzorku. Razlika izmeu dobivenog ukupnog inverta i prirodnog inverta daje koliinu reduciranih eera nastalih inverzijom saharoze. Reagensi: (1) Luffov reagens: otopina bakrenog sulfata (25g CuSO4 x 5H2O u 100 cm3 destilirane vode); otopina limunske kiseline (50 g C6H8O7 x H2O u 50 cm3 destilirane vode); otopina natrijeva karbonata (143 g bezvodnog Na2CO2 u oko 300 cm 3 tople destilirane vode).

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 U odmjernu tikvicu obujma 1.000 cm3 unese se otopina natrijeva karbonata i uz oprezno mijeanje doda otopina limunske kiseline. Mijea se do nestanka ugljinog dioksida, a zatim se doda otopina bakrenog sulfata te se odmjerna tikvica dopuni destiliranom vodom do oznake. (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) Natrijev tiosulfat, otopina 0,1 mol/dm3; krob, 0,5%-tna otopina; Sumporna kiselina, otopina 6 mol/dm3; Kalijev jodid, 30%-tna otopina; Natrijev hidroksid, otopina 0,1 mol/dm3; Natrijev hidroksid, otopina 1 mol/dm3; Carrez I. (21,95 g Zn(CH3COO)2 x 2H2O ili 24 g Zn(CH3COO)2 x 3H2O i 3 g glacijalne octene kiseline se otopi i dopuni do oznake destiliranom vodom u odmjernoj tikvici od 100 cm3); (9) Carrez II. (10,6 g KFe(CN)6 x 3H2O se otopi u destiliranoj vodi i dopuni do oznake u odmjernoj tikvici od 100 cm3); (10) Solna kiselina, koncentrirana. Postupak Izvae se oko 5 g uzorka (s tonou od 0,001 g). Uzorak se s 200 cm3 destilirane vode kvantitativno prenese u au od 400 cm3. Balastne se tvari uklone dodavanjem po 5 cm3 otopine Carrez I i II. Nakon svakog dodavanja sadraj se dobro promijea. Cijeli se sadraj iz ae prenese u odmjernu tikvicu od 250 cm3, dopuni do oznake destiliranom vodom, promijea i filtrira. To je filtrat I. U odmjernu tikvicu od 100 cm3 otpipetira se 10 cm3 filtrata I. i dopuni destiliranom vodom do oznake na tikvici. Sadraj u tikvici se dobro promijea i u Erlenmeyerovu tikvicu do 300 cm3 otpipetira se 25 cm3 Luffovog reagensa i 25 cm3 razrijeenog filtrata I. Erlenmeyerova se tikvica stavi na zagrijano tijelo i sadraj treba da zavrije za dvije minute, a zatim se na tikvicu stavlja povratno hladilo te sadraj u tikvici treba da vrije 10 minuta. Nakon toga se tikvica hladi pod vodenim mlazom i nakon hlaenja pusti da stoji 5 minuta. Potom se u tikvicu doda 10 cm3 otopine kalijeva jodida i 25 cm3 otopine sumporne kiseline. Sumporna se kiselina dodaje polako i oprezno zbog mogunosti stvaranje pjene. Zatim se sadraj u tikvici titrira otopinom natrijev tiosulfata dok sadraj u tikvici ne dobije svijetloutu boju. Tada se doda nekoliko cm3 otopine kroba i titracija se nastavlja dok se ne pojavi modra boja. Pod istim se uvjetima izvodi i slijepi pokus, s istom koliinom Luffovog reagensa, a umjesto razrijeenog filtrata I. dodaje se 25 cm3 destilirane vode. Od ukupno potroene otopine natrijeva tiosulfata (cm3), za titraciju slijepog pokusa oduzima se potroena otopina natrijeva tiosulfata za probu i za tablice za odreivanje eera po Luffu oita se koliina invertnog eera (mg), koja odgovara toj razlici.

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Sadraj prirodnog inverta izraunava se prema sljedeoj formuli: Izraun:
Sadraj prirodnog inverta (%) = V V 2 a 100

Ok V 1 V 3 1000

gdje je: V V1 V2 V3 a Ok

cm3 matine otopine cm3 filtrata I. cm3 razrijeenog filtrata I. cm3 razrijeenog filtrata I. u kojem se odreuju eeri koliina invertnog eera oitana iz tablice (mg) izvagana koliina uzorka (g).

Koliina ukupnog inverta odreuje se tako to se otpipetira 10 cm3 filtrata I. u odmjernu tikvicu od 100 cm3, razrijedi se s 30 cm3 destilirane vode i doda 0,5 cm3 koncentrirane solne kiseline. Odmjerna tikvica sa sadrajem stavi se u kipuu vodenu kupelj da bi se izvrila inverzija u trajanju od 30 minuta. Nakon toga se sadraj tikvice neutralizira otopinom natrijeva hidroksida koncentracije 1 mol/dm3 i dopuni destiliranom vodom do oznake na tikvici. Iz odmjerne se tikvice otpipetira 25 cm3 uzorka za titraciju, a daljnji je postupak isti kao i kod prirodnog inverta. Sadraj ukupnog inverta izraunava se prema sljedeoj formuli: Izraun:
Sadraj ukupnog inverta (%) = V V 2 a 100

Ok V 1 V 3 1000

gdje je: V V1 V2 V3 a Ok

cm3 matine otopine cm3 filtrata I. cm3 razrijeenog filtrata I. nakon inverzije cm3 razrijeenog filtrata I. u kojem se odreuju eeri koliina invertnog eera oitana iz tablice (mg) izvagana koliina uzorka (g).

Sadraj saharoze (%) u uzorku izraunava se prema sljedeoj formuli:

Sadraj saharoze (%) = (B A ) 0,95

gdje je: A B postotak prirodnog inverta postotak ukupnog inverta.

Tablica za odreivanje koliine eera s 23 cm3 Luffovog reagensa

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Otopina natrijeva tiosulfata C = mol/dm3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Glukoza, fruktoza ili invertni eer mg | razlika 2,4 | 4,8 | 2,4 7,2 | 2,4 9,7 | 2,5 12,2 | 2,5 14,7 | 2,5 17,2 | 2,5 19,8 | 2,6 22,4 | 2,6 25,0 | 2,6 27,6 | 2,6 30,3 | 2,7 Otopina natrijeva tiosulfata C = 0,1 mol/dm3 Glukoza, fruktoza ili invertni eer mg | razlika 33,0 | 2,7 35,0 | 2,7 38,5 | 2,8 41,3 | 2,8 44,2 | 2,9 47,1 | 2,9 50,0 | 2,9 53,0 | 3,0 56,0 | 3,0 59,1 | 3,1 62,2 | 3,1 |

13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

Odjeljak D. Odreivanje saharoze Naelo Ova metoda temelji se na hidrolizi saharoze, redukciji Fehlingove otopine titracijom s reduciranim eerima iz hidrolizata meda uz metilensko modro bojilo. Reagensi (1) Fehlingova otopina (A i B), utvrena metodom odreivanja reduciranih eera; (2) Standardna otopina invertnog eera, utvrena metodom odreivanja reduciranih eera; (3) Solna kiselina C (HCl) = 6,34 mol/l; (4) Otopina natrijevog hidroksida C (NaOH) = 5 mol/l; (5) 2%-tna otopina metilenskog modrog bojila (2 g/1). Priprava uzorka Postupak I. Izvae se 25 g (W1) homogeniziranog meda i prenese u odmjernu tikvicu obujma 100 ml, doda se 5 ml stipse, dopuni se vodom do oznake na tikvici, pri temperaturi od 20 C, pa se otopina filtrira. Odmjeri se 10 ml te otopine i dopuni destiliranom vodom do 250 ml otopine meda (za odreivanje saharoze). Postupak II.

10

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Izvae se 2 g (W2) homogeniziranog meda i prenese u odmjernu tikvicu, otopi u destiliranoj vodi i dopuni u tikvici do 200 ml (otopina meda). Hidroliza uzorka Otopina meda (50 ml) prenese se u odmjernu tikvicu obujma 100 ml i doda 25 ml destilirane vode. Termometar se uroni u pripravljeni uzorak i zagrijava se do 65 C u kipioj vodenoj kupelji. Tikvica se zatim iznese iz vodene kupelji i doda 10 ml solne kiseline [C(HCl) = 6 mol/1]. Otopina se pusti da se hladi 15 minuta, zatim se temperatura ugodi na 20 C i neutralizira 5 mol otopinom NaOH/l, uz upotrebu lakmus-papira kao indikatora, ponovno se ohladi (20 C) te se dopuni do 100 ml (razrijeena otopina meda). Odreivanje Odreivanje je istovjetno odreivanju reduciranih eera, a odnosi se na prethodnu titraciju i postupak odreivanja koliine invertnog eera prije inverzije. Izraun Prvo se obraunava postotak invertnog eera nakon inverzije, pri emu se primjenjuje formula predviena za odreivanje postotka invertnog eera prije inverzije. Saharoza se izraava u g/100 g meda i izraunava prema sljedeoj formuli: masa saharoze, g/100 g = koliina invertnog eera nakon inverzije koliina invertnog eera prije inverzije x 0,95 Odjeljak E. Odreivanje vode u medu a) Refraktometrijsko odreivanje Naelo Ova metoda temelji se na refraktometrijskom odreivanju. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme potreban je i refraktometar. Priprava uzorka Uzorak se pripravlja na nain odreen za metodu priprave uzorka za analizu, a zatim se indeks refrakcije uzorka odredi refraktometrom, pri stalnoj temperaturi od 20 C. Na temelju indeksa refrakcije izrauna se koliina vode (% m/m), pri emu se koristi priloena tablica. Ako se indeks ne odredi na temperaturi od 20 C, u obzir se uzima korekcija temperature i rezultati se svode na temperaturu od 20 C.

11

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Tabela za izraun sadraja vode u medu

Indeks refrakcije (20 oC) 1,5044 1,5038 1,5033 1,5028 1,5023 1,5018 1,5012 1,5007 1,5002 1,4997 1,4992 1,4987 1,4982 1,4976 1,4971 1,4966 1,4961 1,4956 1,4951 1,4946 1,4940

Sadraj vode (%) 13,0 13,2 13,4 13,6 13,8 14,0 14,2 14,4 14,6 14,8 15,0 15,2 15,4 15,6 15,8 16,0 16,2 16,4 16,6 16,8 17,0

Indeks refrakcije (20 oC) 1,4935 1,4930 1,4925 1,4920 1,4915 1,4910 1,4905 1,4900 1,4895 1,4890 1,4885 1,4880 1,4875 1,4870 1,4865 1,4860 1,4855 1,4850 1,4845 1,4840 1,4835

Sadraj vode (%) 17,2 17,4 17,6 17,8 18,0 18,2 18,4 18,6 18,8 19,0 19,2 19,4 19,6 19,8 20,0 20,2 20,4 20,6 20,8 21,0 21,2

Indeks refrakcije (20 oC) 1,4830 1,4825 1,4820 1,4815 1,4810 1,4805 1,4800 1,4795 1,4790 1,4785 1,4780 1,4775 1,4770 1,4765 1,4760 1,4755 1,4750 1,4745 1,4740

Sadraj vode (%) 21.4 21.6 21.8 22.0 22,2 22,4 22,6 22,8 23,0 23,2 23,4 23,6 23,8 24,0 24,2 24,4 24,6 24,8 25,0

Napomena: korekcija temperature - indeks refrakcije: - temperatura via od 20 oC - dodati 0,00023 za svaki oC, - temperatura do 20 oC - oduzeti 0,00023 za svaki oC. b) Odreivanje vode metodom suenja, standardni postupak Naelo Metoda odreivanja vode suenjem temelji se na suenju uzoraka do stalne mase u raznim vrstama suionika. Suenje u obinom suioniku.

12

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Postupak: Posuda za suenje s odgovarajuim poklopcem (staklena, aluminijska i niklana posuda za vaganje) sui se u suioniku najmanje 1 sat na temperaturi od 100 do 105 oC, ohladi se u eksikatoru do sobne temperature i izmjeri s tonou 0.001 g. U posudu se brzo stavi odreena koliina meda (1 2 g), pokrije poklopcem i mjeri. Posuda s uzorkom stavi se u suionik, s koso postavljenim poklopcem. Sui se odreeno vrijeme (4 5 sati). Nakon to suenje zavri posuda se pokrije poklopcem i stavlja u eksikator, te se nakon hlaenja (od 45 minuta do 1 sata) vae. Ponovno se stavi u suionik sata 1 sat, hladi i ponovno vae. To se ponavlja dok se ne postigne stalna masa. Izraun: Iz razlike u teini posude s uzorkom prije i poslije suenja izraunava se sadraj vode:
Sadraj vode = a 100 Ok

gdje je: a razlika u teini posude s uzorkom prije i poslije suenja (g) Ok izvagana koliina uzorka (g) Odjeljak F. Odreivanje netopljivih tvari u vodi (gravimetrijska metoda) Priprava uzorka Izvae se 20 g uzorka s tonou 10 mg, otopi se u odreenoj koliini destilirane vode na temperaturi od 80 C i dobro izmijea. Odreivanje Pripravljeni uzorak prvo se filtrira kroz osuen i izvagan sinterirani lijevak, veliine pora od 15 do 40 m. Talog se ispere vruom vodom (80 C), pri emu se oslobodi eer, to se utvruje testom po Mohru. Lijevak se osui za jedan sat na temperaturi od 135 C, ohladi i vae s tonou od 0,1 mg. Izraun Koliina tvari netopljivih u vodi izraava se u postotcima (m/m) i izraunava prema sljedeoj formuli: postotak tvarinetopivih u vodi = 100 kolicina ostatka izvagani uzorak

Odjeljak G. Odreivanje pepela Naelo

13

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Ova metoda temelji se na postupku izgaranja uzorka na 600 oC do stalne mase. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme, upotrebljava se: (1) (2) (3) (4) platinska posuda, posuda od silicija ili loni za arenje; vodena kupelj; pjeana kupelj ili Bunsenov plamenik; pe za arenje.

Odreivanje U uarenoj platinskoj ili porculanskoj posudi izvae se od 5 do 10 g uzorka i zagrijava u vodenoj kupelji dok vei dio vode ne ispari. Potom se uzorak stavi na pjeanu kupelj ili Bunsenov plamenik do pougljenja. Ostatak se zatim ari u pei za arenje na temperaturi 600 oC do stalne mase. Prije vaganja uzorak se ohladi. Izraun Masa pepela izraava se u g/100 g proizvoda i izraunava prema sljedeoj formuli:

masapepela g 100 g =

ostatak 100 izvagani uzorak

Odjeljak H. Odreivanje kiselosti Naelo Pripravljeni se uzorak titrira, uz fenolftalein, otopinom 0,1 mol/l natrijeva hidroksida do pojave svijetloruiaste boje. Aparatura i pribor Pri odreivanju stupnja kiselosti upotrebljava se uobiajena laboratorijska oprema. Reagensi (1) Otopina natrijeva hidroksida, c (NaOH) = 0,1 mol/l (bez karbonata); (2) 1%-na otopina fenolftaleina (m/V) u etanolu, neutralizirana; (3) destilirana voda bez CO2, dobivena kuhanjem a zatim ohlaena. Odreivanje Izvae se 10 g uzorka i otopi u 75 ml destilirane vode.

14

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Pripravljeni se uzorak titrira s 0,1 mol otopinom (NaOH)/l, uz 4-5 kapi fenolftaleina kao indikatora. Na kraju titracije boja mora biti postojana 10 sekundi. Za uzorke tamne boje izvae se manja koliina uzorka. Alternativno se moe upotrijebti pH-metar i titrirati uzorak do pH - 8,3. Izraun Kiselost se iskazuje u milimolima kiseline/kg i izraunava se prema formuli:

kiselost = 10 V
gdje je: V broj potroenih ml 0,1 mol (NaOH)/1 za neutralizaciju 10 g meda. Odjeljak I. Odreivanje aktivnosti dijastaze Naelo Naelo ove metode temelji se na hidrolizi 1%-ne otopine kroba enzimom iz 1 g meda tijekom jednog sata na temperaturi od 40 C. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme, upotrebljavaju se: (1) (2) (3) (4) (5) odmjerne tikvice obujma 1 litre, 0,5 litre i 0,1 litre; stoasta tikvica obujma 0,250 l; plamenik; vodena kupelj temperature 40 0,2 C; spektrofotometar s oitavanjem na 660 nm.

Reagensi (1) Matina jodna otopina: otopi se 8,8 g joda p.a., pomijea se s 22 g kalijeva jodida i otopi u 30 - 40 ml vode, a zatim razrijedi do jedne litre. (2) Jodna otopina se pripravlja u odmjernoj tikvici obujma 500 ml tako to se otopi 20 g kalijeva jodida p.a. u 30 - 40 ml vode. Zatim se doda 5 ml matine jodne otopine i dopuni vodom do oznake.
Jodna otopina c ( J 2 0,0007 mol/l) : u odmjernoj tikvici 2

(3) Acetatni pufer - pH 5,3: otopi se 87 g natrijeva acetata (CH3COONa 3H2O) u 400 ml vode, doda oko 10,5 ml ledene octene kiseline i dopuni vodom do 500 ml. Ako je potrebno, pH-vrijednost se dotjera natrijevim acetatom ili octenom kiselinom do 5,3 uz upotrebu pH-metra, prema potrebi.

15

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 (4) Otopina natrijeva klorida, c(NaCl) = 0,5 mol/l: otopi se 14,5 g natrijeva klorida u prokuhanoj destiliranoj vodi i dopuni do 50 ml. Rok trajanja te otopine je ogranien. (5) Priprava topljivog kroba: u stoastoj tikvici s povratnim hladilom koja je uronjena u vodenu kupelj izvae se 20 g kroba, doda se mjeavina 100 ml 95 %-nog etanola i 7 ml 1 mol/l solne kiseline i ostavi da vrije jedan sat. Otopina se ohladi, filtrira kroz filter (veliine pora od 90 do 150 m) i ispire vodom sve dok voda za ispiranje prestane pokazivati reakciju na kloride. krob se potpuno osui na zraku temperature 35 C. krobna se otopina mora pohrati u dobro zatvorenu tikvicu. (6) Odreivanje vode u topljivom krobu Izvae se oko 2 g topljivog kroba i u tankom sloju rasporedi po dnu posudice promjera 5 cm. Sui se 1,5 sat na temperaturi od 180 C. Zatim se ohladi u eksikatoru i izvae. Gubitak mase na 100 g jest koliina vode. Koliina vode pripavljenog kroba mora iznositi od 7% do 8% (m/m), ovisno o vlanosti zraka na kojem je uzorak osuen. (7) krobna otopina Upotrebljava se krob ija je plava vrijednost izmeu 0,5 i 0,55 odreena prema nie opisanom postupku i oitana u kiveti od 1 cm. Izvae se koliina kroba koja odgovara masi od 2,0 g bezvodnog kroba i izmjea s 90 ml vode u stoastoj tikvici obujma 250 ml. Odmah se prenese na plamenik, preko kojega je postavljena azbestna mreica, i pusti da polako vrije tri minute. Potom se otopina skloni s plamenika, pokrije i ostavi da se postupno ohladi do sobne temperature. Otopina se zatim prenese u odmjernu bocu obujma 100 ml i stavi u vodenu kupelj zagrijanu na 40 C. Kada otopina dostigne tu temperaturu, dopuni se vodom do oznake na boci. Utvrivanje plave vrijednosti kroba Koliina kroba koja odgovara masi od 1 g bezvodnog kroba otopi se prema opisanom postupku, ohladi se i doda 2,5 ml acetatnog pufera te dopuni vodom u odmjernoj tikvici do 100 ml. U odmjernu tikvicu obujma 100 ml doda se 75 ml vode, 1 ml
J 1 mol/l (HCl) i 1,5 ml otopine 0,02 mol/l 2

Otopina se pusti jedan sat na tamnom mjestu i oita se apsorpcija na spektrofotometru pri 660 nm, u kiveti od 1 cm, prema slijepom pokusu sa svim sastojcima osim krobne otopine. Oitana apsorpcija = plava vrijednost. Odreivanje Priprava uzorka za odreivanje Uzorak za analizu ne smije se zagrijavati. Izvae se 10 g uzorka i prenese u au obujma 50 ml, doda se 5 ml acetatnog pufera i 20 ml vode da bi se uzorak otopio i promijea

16

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 tapiem. Uzorak se ve na hladnom potpuno otopi. Zatim se u odmjernu tikvicu obujma 50 ml doda 3 ml otopine natrijeva klorida i otopina meda te se dopuni vodom do oznake. Uzorak mora biti puferiziran prije mijeanja s natrijevim kloridom. Priprava standardne otopine krobna otopina zagrijava se na temperaturi od 40 C, a zatim se 5 ml otopine otpipetira u 10 ml vode, ija je temperatura 40 C, i dobro izmijea. Od pripravljene otopine otpipetira se 1 ml i doda u 10 ml
J2 0,0007 mol/l 2 jodne otopine se razrijedi s 35 ml vode i dobro izmijea.

Nastala boja oitava se na 660 nm prema slijepom pokusu. Vrijednost apsorbancije treba iznositi 0,760 0,020. Ako je potrebno, moe se dodati odreeni obujam vode kako bi se dobila ispravna apsorbancija. Odreivanje apsorbancije Pipetom se odmjeri 10 ml otopine meda, prenese u graduirani cilindar od 50 ml i stavi u vodenu kupelj temperature 40 C 0,2 C, zajedno s posudom u kojoj je krobna otopina. Nakon 15 minuta pipetom se odmjeri 5 ml krobne otopine i doda otopini meda, promijea i ukljui sat. U razmacima od pet minuta izdvoji se 1 ml alikvote i doda u 10 ml 0,0007 mol/l (J2/2) /l jodne otopine Promijea se i razrijedi do obujma 35 ml (priprava uzorka za odreivanje). Apsorbancija se odmah odreuje na 660 nm, nastavi se uzimati alikvota sve dok se apsorbancija ne smanji do vrijednosti od 0,235. Izraun i izraavanje rezultata U grafikon se unosi vrijednost apsorbancije kao funkcije vremena (min). Kroz najmanje tri posljednje toke povue se ravna crta da bi se odredilo vrijeme kad reakcijska smjesa dostie vrijednost apsorbancije od 0,235. Podijeli se 300 s vremenom izraenim u minutama da bi se dobio broj dijastaze (DN). Taj broj izraava aktivnost dijastaze kao ml 1%-ne krobne otopine koja je hidrolizirana enzimom u 1 g meda jedan sat pri 40 C. Broj dijastaze odgovara broju na Gotheovoj ljestvici. Aktivnost dijastaze DN = ml 1%-ne krobne otopine po g meda/h pri temperaturi od 40 C. Napomena : broj dijastaze = 60 0,10 1,0 300 = t 0,01 2 t

17

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 gdje je: t redukcija u minutama. Odjeljak J . Odreivanje hidroksimetilfurfurola a) Fotometrijska metoda po Winkleru Naelo Ova metoda temelji se na reakciji hidroksimetilfurfurola s barbiturnom kiselinom i ptoluidinom, pri emu nastaje ruiasta boja koja se mora mjeriti na valnoj duljini od 550 nm. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme, upotrebljavaju se: (1) odmjerne tikvice obujma 50 ml i 100 ml; (2) vodena kupelj; (3) spektrofotometar (oitavanje na 550 nm). Reagensi (1) Otopina barbiturne kiseline: izvae se 500 mg barbiturne kiseline i sa 70 ml vode prenese u odmjernu tikvicu obujma 100 ml. Stavi se u vodenu kupelj da se otopi, a zatim se ohladi i dopuni vodom do oznake. (2) Otopina p-toluidina: izvae se 10 g p-toluidina i polako zagrijavajui u vodenoj kupelji otopi u priblino 50 ml izopropanola. S izopropanolom se prenese u odmjernu tikvicu obujma 100 ml i doda 10 ml ledene octene kiseline, ohladi i dopuni izopropanolom do oznake. Otopina se uva na tamnom mjestu i ne upotrebljava najmanje 24 sata. (3) Destilirana voda bez kisika: kroz vruu vodu proputa se duik. Voda se zatim ohladi. Priprava uzorka Uzorak se pripravlja na nain odreen za metodu priprave uzorka za analizu, bez zagrijavanja. Odreivanje Izvae se 10 g uzorka i bez zagrijavanja otopi u 20 ml destilirane vode bez kisika. Zatim se prenese u odmjernu tikvicu obujma 50 ml i dopuni do oznake (otopina meda). Odmah nakon priprave nastavlja se odreivanje. Od pripravljenog uzorka odmjeri se pipetom 2 ml, prenese se u svaku od dviju epruveta i doda 5 ml p-toluidina. U jednu epruvetu pipetira se 1 ml vode, a u drugu 1 ml otopine barbiturne kiseline, pa se sadraj dobro promijea. Epruveta u kojoj je voda slui za slijepi pokus. Reagens treba dodavati bez prekida i sve zavriti za 1-2 minute. Kada intenzitet boje dostigne maksimum (3-4 minute), oita se apsorbancija na 550 nm u kiveti od 10 mm.

18

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Koliina hidroksimetilfurfurola izraava se u mg/100 g meda i grubo izraunava prema formuli: mg HMF/100 g meda = apsorbancija 19,2 debljina sloja

Napomena: koliina HMF moe se izraunati s pomou badarnog dijagrama, primjenom standardnih otopina od 5 do 300/g. b) Odreivanje hidroksimetilfurfurola na dvije valne duljine (metoda po Whiteu) Naelo Odreivanje sadraja hidroksimetilfurfurola utemeljeno je na apsorbanciji hidroksimetilfurfurola u UV dijelu spektra od 284 nm. Kako bi se sprijeila interferencija drugih komponenata na ovoj valnoj duljini, odreuju se razlike izmeu apsorbancije iste solucije meda i nakon dodavanja disulfita. Reagensi Carrez I: - otopiti 15 g K4Fe (CN)6 x 3H2O u vodi i doliti 100 ml u odmjernu tikvicu Carrez II: - otopiti 30 g Zn (CH3COO)2 X 2H2O i dopuniti do 100 ml u odmjernu tikvicu natrijeva bisulfit otopina - 0,20 gr/100 g Otopiti 0,20 g vrstog NaHSO3 (metabisulfit) i razrijediti do 100 ml. Dnevno se pripravlja svjea otopina. Oprema Spektrofotometar - valna duljina od 284 i 336 nm; kvarcne kivete, 1 cm; filter-papir. Postupak Izvagati 5 g meda i otopiti u 25 ml destilirane vode. Kvantitativno prenijeti otopinu u odmjernu tikvicu obujma 50 ml, dodati 0,5 ml Carrez I. otopine i promijeati, a zatim dodati 0,5 ml Carrez II, ponovno promijeati i dopuniti do crte s destiliranom vodom (moe se dodati kapljica etanola da bi se sprijeilo stvaranje pjene). Sadraj tikvice profiltrirati kroz filter-papir, s tim to se prvih 10 ml odbaci. Od filtrata otpipetiramo 5 ml u svaku od pokusnih epruveta (18 x 150 mm). Dodati 5 ml vode u jednu od pokusnih

19

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 epruveta i dobro izmijeati (otopina s uzorkom), a u drugu dodati 5 ml 0,2%-tne otopine natrijeva bisulfita i dobro izmijeati (referentna otopina). Dodati u pokusne epruvete Inicijalna otopina meda Voda Na-bisulfat Otopina s uzorkom 5,0 ml 5,0 ml Referentna otopina 5,0 ml 5,0 ml

Odrediti apsorbanciju otopine s uzorkom spram referentne otopine na 284 i 336 nm u kvarcnoj kiveti od 10 mm tijekom jednoga sata. Ako apsorbancija na 284 nm premauje vrijednost od 0,6 - potrebno je razrijediti otopinu uzorkom destilirane vode, a referentnu otopinu Na-bisulfatom u jednakom omjeru kako bi se dobila dovoljno niska apsorbancija. Ako je otopinu potrebno razrijediti, nuno je korigirati rezultate. D= konana otopina uzorka 10

Rezultati HMF u mg/kg = ( A284 A336 ) X 149,7 X 5 X D/W A284 - apsorbancija na 284 A336 - apsorbancija na 336

126 x 1000 X 1000 49,7 = = faktor 16 830 x 10 x 5 126 - molekulska masa HMF 16 830 - molarna apsorbancija na 284 nm 1000 - pretvaranje g u kg 5 - teoretska teina uzorka D - faktor razrjeenja, ako je razrjeivanje potrebno W - teina uzorka meda (g) - 284 nm.

20

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Rezultati se izraavaju u mg/kg na jednu decimalu. Odjeljak K. Bioloka metoda peludne analize meda Izvae se 10 g dobro izmijeanog meda i otopi u 20 ml vode te stavi u vodenu kupelj na temperaturu od 45 C. Otopina se centrifugira 15 minuta na 3.500 okretaja. Tekui dio se odlije, a sediment se prenese mikropipetom na predmetno staklo i ravnomjerno razmae na povrinu 15 x 20 mm. Pripravak se osui u termostatu na temperaturi ne vioj od 45 C i uklopi u glicerinsku elatinu. Nakon toga se pripravak boji dodavanjem kapi fuksina u glicerinsku elatinu. Uzorak se pokrije pokrovnim staklom i vraa u termostat na suenje. Uvijek se rade dva paralelna uzorka istog meda. Mikroskopira se pri poveanju od 200 do 600 puta. Mijenjaju se vidna polja dok se ne izbroji 300 peludnih zrnaca. Prebrojana peludna zrnca razvrstavaju se prema biljnoj vrsti. Biljne se vrste odreuju prema obliku peludnog zrnca, veliini peludnog zrnca, grai stijenke, te prema vrsti, obliku i broju pora klijanja. Peludna zrnca usporeuju se s referentnim pripravcima i slikom iz atlasa. Ovom se analizom utvruje botaniko podrijetlo meda. Odjeljak L. Odreivanje vode u matinoj mlijei i cvijetnom prahu Naelo Ova metoda temelji se na predestilaciji vode iz ispitnog uzorka u specijalnom aparatu, s pomou organskog otapala koje se ne mijea s vodom, a zatim se predestilirana koliina izmjeri u graduiranoj menzuri. Metoda se primjenjuje pri odreivanju vode u matinoj mlijei i cvijetnom prahu. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme, upotrebljavaju se: (1) aparat za odreivanje vode po Dean-Starku (slika 2) obujma 250 ml, (2) analitika vaga, (3) menzure obujma 10 ml i 100 ml. Reagens: ksilol Odreivanje Izvae se 5 g matine mlijei odnosno 30 g cvjetnog praha, stavi u tikvicu za destilaciju i prelije sa 150 ml ksilola. Zatim se aparat sastavi, voda pusti kroz hladnjak i pone destilacija. Smjesa se polako destilira, pri emu se vodena para i para organskog otapala kondenziraju i skupljaju u graduiranoj cijevi, a viak otapala vraa se natrag. Destilacija traje sve dok kondenzat ne postane potpuno bistar. Tada se zagrijavanje prekida i kondenzat ostavi izvjesno vrijeme da se voda potpuno izlui. Donji (vodeni) sloj ispusti se u menzuru i oita se koliina vode. Izraun

21

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 Koliina vode izraava se u postotcima i izraunava prema sljedeoj formuli: postotak vode = gdje je: a B 100 a B

broj ml oitane vode, izvagani uzorak (g).

Ksiol

Voda

Grijanje

Slika 2. Aparat za destilaciju po Dean-Starku Odjeljak M. Odreivanje bjelanevina u matinoj mlijei Naelo Ova metoda temelji se na biuretskoj reakciji odnosno reakciji bakra s peptidnom vezom, pri emu nastaje ljubiasta boja koja se odreuje spektrofotometrijski na 546 nm. Izmjerena apsorbancija je razmjerna koncentraciji bjelanevina u otopini. Aparatura i pribor Osim uobiajene laboratorijske opreme, upotrebljavaju se: (1) (2) (3) (4) spektrofotometar; analitika vaga; centrifuga; odmjerna tikvica obujma 100 ml i 1.000 ml;

22

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 (5) kiveta; (6) pipeta obujma 1 ml i 10 ml. Reagensi (1) Biuretski reagens: 4,5 g kalijnatrijeva tartarata otopi se u 40 ml NaOH 0,2 mol/l, doda se 1,5 g CuSO4 x 5H2O prethodno otopljenog u 10 ml destilirane vode i 0,5 g kalijeva jodida. Otopina se polako promijea, kvantitativno prenese u odmjernu tikvicu obujma 100 ml i dopuni do 100 ml s 0,2 mol/l otopine NaOH. Otopina mora biti bistra i bez taloga. (2) Otopina natrijeva hidroksida, c(NaOH) = 0,2 mol/l: u odmjernu tikvicu obujma 1.000 ml otopi se 8,4 g NaOH u oko 950 ml destilirane vode. Otopina se ohladi i dopuni vodom do oznake. (3) Otopina za stabilizaciju: otopi se 5 g kalijeva jodida u 0,2 mol/l NaOH i dopuni otopinom 0,2 mol/l NaOH do 1.000 ml. (4) Bjelanevinski standard 6 g/l: krvni serum u kojemu je poznata koliina bjelanevina ili kristaliziran ljudski albumin. Odreivanje Na aluminijskoj foliji dimenzija 15 mm x 15 mm izvae se na analitikoj vagi 100 mg matine mlijei. Sve se prenese u kivetu za centrifugiranje i s pomou staklenog tapia potopi do dna kivete. Pipetom se doda 8 ml otopine za stabilizaciju i jo jednom dobro promijea da bi se mlije rastopila. Centrifugira se 10 minuta na 3.000 okretaja. Nakon centrifugiranja se izvae 4 ml otopine mlijei, prenese u drugu kivetu i doda 1 ml biuretskog reagensa. Istovremeno se pripravi uzorak za slijepi pokus od 4 ml reagensa za stabilizaciju i 1 ml biuretskog reagensa. Nakon 30 minuta mjeri se apsorbancija na valnoj duljini od 546 nm. Pod istim se uvjetima odreuje i apsorbancija standardne otopine. Izraun Koliina bjelanevina izraava se u postotcima i izraunava prema sljedeoj formuli:
postotak bjelanjel na =

(Av - As1

f 2 100 ) a

gde je: Av apsorbancija uzorka Asl apsorbancija slijepog pokusa

f - faktor = As As1 Cs

23

Za slubenu upotrebu koristiti tekst propisa objavljenog u Slubeni glasnik BiH, broj 37/09 a As Cs koliina uzorka (mg) apsorbancija standarda koliina bjelanevina u standardu.

Odjeljak N. Odreivanje ekstrakta propolisa u alkoholnoj otopini Aparatura i pribor Za odreivanje ekstrakta propolisa u alkoholnoj otopini upotrebljava se uobiajena laboratorijska oprema. Reagens: etanol Odreivanje Izvae se 5 g propolisa i prenese u stoastu tikvicu (Erlenmeyerovu), prelije s 50 g etanola i pusti da se preko noi ekstrahira na sobnoj temperaturi. Nakon toga se tekuina filtrira i uzima alikvota od 3 g filtrata koji se dva sata sui u suioniku, na temperaturi od 105 C. Nakon dva sata se uzorak izvadi iz suionika, stavi u eksikator i ohladi. Ohlaen se uzorak vae. Izraun Koliina suhe tvari (ekstrakta) izraava se u postotcima i izraunava prema sljedeoj formuli: postotak ekstrakta = gdje je: a b c d masa filtrata (g) masa otapala (g) masa suhog ostatka (g) masa uzorka (g). 100 b c d (a c )

24