SADRAJ

METODE U MIKROBIOLOGIJI

UVOD___________________________2 1.TEMA__________________________3
1.1. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE_____________________3 1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE_____4-5 1.3. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- INKUBACIJA________6 1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- ZONE INHIBICIJE_________________________7-8 1.5. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PREDNOSTI ,OGRANIENJA I TUMAENJE REZULTATA DISKDIFUZIONOG METODA _______________9

ZAKLJUAK_____________________10

Metode u mikrobiologiji

UVOD

METODE U MIKROBIOLOGIJI

Antibiogram je metoda ispitivanja osjetljivosti

bakterija prema antibakterijskim lijekovima. Prije primjene nekog antibakterijskog lijeka u terapiji oboljenja potrebno je in vitro ispitati ponaanje mikroorganizma izolovanog u istoj kulturi, na odreena antibakterijska sredstva. Ovo ispitivanje se vri na 2 naina : difuzionim i dilucionim metodama. MIK - minimalna inhibitorna koncentracija najmanja koncentracija antibiotika koja sprecava rast i razmnoavanje bakterija. MBK - minimalna baktericidna koncentracija najmanja koncentracija antibiotika koja izaziva smrt bakterija.

Slika 1. Metode antibiograma

Metode u mikrobiologiji

1.

TEMA

METODE U MIKROBIOLOGIJI

1.1. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE

Zasniva se na principu difuzije antibiotika kroz vrstu hranljivu podlogu (agar) (najee Mueller-Hinton) prethodno zasijanu ispitivanom bakterijskom kulturom. Disk metoda ( metoda tablete ) to je najee primenjena metoda. Upotrebljavaju se diskovi ili tablete obloeni tano odreenom koncentracijom antibakterijskog lijeka, koja je odgovarajua onoj koja se postie u organizmu primenom terapijskih doza tog lijeka.

Slika 2. Mueller-Hinton podloga (RAZLIVENANA PETRIJEVU PLOU)

ZONA INHIBICIJE

ANTIBIOTSKI DISK

HRANLJIVA PODLOGA SA ZASIJANOM ISTOM KULTUREOM ISPITIVANOG SOJA

-Sastav Mueller-Hinton podloge:

Slika 3. Izgled disk difuzione metode primjenjene na razliitim bakterijama.

1. 2. 3. 4. 5.

Extrakt mesa 2g Kazein-hidrolizat 17.5g krob 5g Agar 17g Destilovana voda 1000

-pH 7.3 -Sterilizacija: autoklav 121 C 15 min

Metode u mikrobiologiji

1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE

Iz iste bakterijske kulture uzeti 4-5 kolonija ezom.

Slika 4. Escherichia Coli zasijana na hranjivu podlogu

Slika 5. Eze za kultivaciju bakterija na hranjive podloge (jednokratne eze)

Pravljenje suspenzije odrene gustine od ispitivane bakterijske kulture. Bris natopiti suspenzijom bakterija i ocediti viak tecnosti lakim pritiskom o zidove epruvete.

Slika 6. Pravljenje suspenzije.

Ravnomerno nanoenje bakterijske suspenzije brisem na celu povrinu agara (najee Mueller-Hinton) da bi se dobio konfluentan porast.

Slika 7. Nanoenje suspenzije na podlogu. Metode u mikrobiologiji 4

1.2. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE- PRIPREMANJE

Stavljanje diskova sa odreenim (standardnim) koncentracijama antibiotika pincetom.

24mm

10 -15mm

Slika 8. Oxacillin - disk difuzijona metoda za identifikaciju MRSA

Slika 9. Raspored diskova

antibioticima

Inkubacija u termostatu : od 16 do 24 h 37C Poslije inkubacije vri se oitavanje prenika zone inhibicije.
Ako su svi uslovi standardizovani ( pritisak, temperatura, pH, vrijeme inkubacije ) onda je prenik zone inhibicije proporcionalan koncentraciji datog antibakterijskog sredstva.

Slika 10. Termostat za inkubaciju.

Metode u mikrobiologiji

1.3. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-INKUBACIJA

U toku inkubacije dolazi do umnoavanja bakterija na hranjivoj podlozi. Antibiotik difunduje kroz hranjivu podlogu. Koncentracija antibiotika postepeno i radijalno opada sa udaljavanjem od diska sve do tacke gde vie nijen inhibitorna i gde se pojavljuje porast bakterija. Nastaje zona inhibicije rasta. .

vrsta hranljiva podloga zasijana istom bakterijskom kulturom

Antibiogram diskovi

37C/24h

itanje rezultata
Slika 11. Disk-difuzioni metod

Metode u mikrobiologiji

1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-ZONE INHIBICIJE

Zona inhibicije rasta: okrugla zona oko diska sa antibiotikom u kojoj nema vidljivog porasta bakterija.

Tumaenje rezultata disk difuzionog metoda:

Slika 12. Mjerenje prenika zone inhibicije

Postoje 3 kategorije osetljivosti:

S/osjetljiv - verovatnoa uspjeha

terapije je visoka nakon primjene uobiajenih doza antibiotika, datih na uobiajeni nain.

I/intermediarno

- (umjereno) osjetljiv mogui uspjeh terapije ako se antibiotik da u maksimalnim koncentracijama i pareneteralnim.

R/rezistentan-

nikada se ne primjenjuje u terapiji; bez obzira na dozu, terapija je vrlo vjerovatno neuspjena.
Slika 13. Mjerenje prenika zone inhibicije
Metode u mikrobiologiji 7

1.4. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-ZONE INHIBICIJE

Na irinu zone inhibicije mogu da utiu sljedei faktori:

Osobine podloge Veliina inokuluma Faza raazmnoavanja u kojoj se nalazi ispitivana bakterija Stabilnost antibakterijskog sredstva Da bi se otklonio uticaj ovih faktora za izvoenje antibiograma se koristi standardna Mueller Hintonova podloga.

Slika 14. Bakterija moe da savlada ekstrakt antibiotika, i ponovo rasti u zoni inhibicije

Zona inhibicije rasta (R) rezistentan

Zona inhibicije rasta (S) osjetljiv

Slika 15. Podloga Mueller Hinton / bakterija pseudomonas aeruginosa.

Metode u mikrobiologiji

1.5. DISK-DIFUZIONA METODA ISPITIVANJA OSJETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE-PREDNOSTI ,OGRANIENJA I TUMAENJE REZULTATA DISK-DIFUZIONOG METODA

PREDNOSTI

OGRANIENJA

Istovremeno se ispituje osjetljivost Ne moe se odrediti na vei broj antibiotika MIK Jednostavan i jeftin Relativno brz (24 h)
PRIMER PREPORUENIH ZONA Staphylococcus aureus Ampicilin Impienem Meticilin Hloramfenikol Gentamicin Ciprofloksacin Trimetoprim+ Sulfametoksazol Vankomicin Escherichia coli Ampicilin Impienem Meticilin Hloramfenikol Gentamicin Ciprofloksacin Trimetoprim+ Sulfametoksazol Vankomicin DIJAMETAR ZONE INHIBICIJE RASTA S I R >29 / <28 14-15 <13 >16 >14 10-13 <9 >18 13-17 <12 >15 13-14 <12 >21 16-20 <15 >16 11-15 <10 >15 S >17 >16 / >18 >15 >21 >16 / / I 14-16 14-15 / 13-17 13-14 16-20 11-15 / / R <13 <13 / <12 <12 <15 <10 / Uporediti izmjerene prenike zona inhibicije ispitivane bakterije sa standardnim preporuenim zonama za odreenu bakteriju i odreeni antibiotik.

Kvalitativna metoda disk difuzioni metod antibiograma (rezultati S, I, R) postoji opasnost od prevelike ili marginalno efektivne doze.

Posebno kod tekih pacijenata sa invazivnim bakterijskim infekcijama i sa primarnim osnovnim oboljenjem (insuficijencija jetre, bubrega...) kod kojih je vano precizno dozirati lijek. Poznavanje MIK odreenog antibiotika za dati bakterijski soj koji je izolovan od pacijenta omoguava individualno doziranje antibiotika. MIK se smatra referentnim kriterijumom za definisanje osjetljivosti mikroorganizama.
Metode u mikrobiologiji 9

ZAKLJUAK METODE U MIKROBIOLOGIJI

MIKROBIOLOG Odreivanje MIK antibiotika za odreeni soj bakterija izolovan od pacijenta.
FARMAKOLOG Poznavanje farmakolokih parametara za taj antibiotik (zadravanje u organizmu,vrijeme eliminacije, penetracija u tkiva...).

Izbor najboljeg antibotika u odgovarajuoj dozi za datog pacijenta.

KLINIAR Postavljanje ispravne dijagnoze i sagledavanje svih faktora rizika kod pacijenta.

Metode u mikrobiologiji

10

LITERATURA METODE U MIKROBIOLOGIJI

BAKTERIOLOGIJA/
MIRSADA HUKI I SARADNICI

MEDICINSKA MIKROBIOLOGIJA /UNIVERZITET U SARAJEVU

/MEDICINSKI FAKULTET/EDINA BELAGI I SARADNICI

http://wwwold.med.bg.ac.rs /dloads/studenti/2011/mikrobi/vezba_5_Antibi ogram.pdf SLIKE http://www.google.ba/imghp?hl=bs&tab=wi

Metode u mikrobiologiji

11