1953, 65(6):681. J. Bacteriol.

J. Beaman
Joyce A. Mitchell, M. N. Disraely and A.
Morrison Rogosa, R. F. Wiseman,

CELLOBIOSUS NOV SPEC

AND LACTOBACILLUS
SALIVARIUS NOV SPEC
LACTOBACILLUS
DESCRIPTIONS OF
FROM MAN INCLUDING
OF ORAL LACTOBACILLI
SPECIES DIFFERENTIATION
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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI FROM MAN
INCLUDING DESCRIPTIONS OF LACTOBACILLUS SALIVARIUS NOV
SPEC AND LACTOBACILLUS CELLOBIOSUS NOV SPEC
MORRISON ROGOSA, R. F. WISEMAN, JOYCE A. MITCHELL, M. N. DISRAELY, AND As s ISSD
BY A. J. BEAMAN
Na t i o n a l In s t i t u t e o f De n t a l Re s e a r c h , Na t i o n a l In s t i t u t e s o f He a l t h , Pu b l i c He a l t h Se r v i c e , Fe d e r a l Se -
c u r i t y Ag e n c y , Be t h e s d a , Ma r y l a n d
Re c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n De c e m b e r 1 5 , 1 9 5 2
It i s e a s y t o a s s u m e f r o m t h e l i t e r a t u r e t h a t
t h e o r a l l a c t o b a c i l l i a r e a g r o u p o f v a r i a n t s
r e p r e s e n t a t i v e o f t h e s p e c i e s La c t o b a c i l l u s
a c i d o p h i l u s . In d e e d , r e s u l t s o b t a i n e d b y t h e
c o n v e n t i o n a l Ha d l e y ( 1 9 3 3 ) t e c h n i q u e f o r t h e
e n u m e r a t i o n o f o r a l l a c t o b a c i l l i h a v e b e e n
e x p r e s s e d a l m o s t e x c l u s i v e l y a s t h e " L.
a i d o p h i l u s o r L. A. c o u n t " .
Fu r t h e r m o r e , Ro s e b u r y ( 1 9 4 4 ) i n a r e v i e w o n
" Th e Pa r a s i t i c La c t o b a c i l l i " h a s e x p r e s s e d a
p r e v a i l i n g v i e w o f t h e d e n t a l l i t e r a t u r e t h a t
" L. a c i d o p h i l u s i s t h e d e s i g n a t i o n u s e d h e r e t o
i n c l u d e a l l a e r o b i c p a r a s i t i c l a c t o b a c i l l i . "
Be r g e y ' s Ma n u a l ( 1 9 2 3 ) s t a t e s t h a t t h e
l a c t o b a c i l l i a r e m i c r o a e r o p h i l i c . In o r d e r t o a v o i d
c o n f u s i o n , i t s e e m s n e c e s s a r y t o e x p l a i n t h a t t h e
Ha d l e y ( 1 9 3 3 ) t e c h n i q u e i s o n e i n w h i c h a n
a p p r o p r i a t e d i l u t i o n o f s a l i v a i s s t r e a k e d b y
m e a n s o f a g l a s s r o d o n t h e s u r f a c e o f s o l i d
t o m a t o a g a r ( p H 5 . 0 ) p l a t e s . Th e " a e r o b i c
p a r a s i t i c l a c t o b a c i l l i " m e n t i o n e d a b o v e a r e t h o s e
c a p a b l e o f g r o w t h u n d e r t h e s e c o n d i t i o n s .
Ho w e v e r , w i t h t h e s a m e m e d i u m a n d i n c u b a t i o n
u n d e r r e d u c e d o x y g e n t e n s i o n i t i s o b v i o u s t h a t
t h e s e " a e r o b i c p a r a s i t i c l a c t o b a c i l l i " g r o w o p t i -
m a l l y u n d e r m i c r o a e r o p h i l i c , i f n o t a n a e r o b i c ,
c o n d i t i o n s . Ro d r i g u e z ( 1 9 3 0 , 1 9 3 1 ) h a d d e v e l o p e d
a m e t h o d f o r c u l t i v a t i o n o f t h e o r a l l a c t o b a c i l l i
b a s e d o n t h i s p r o p e r t y . In o t h e r w o r d s , t h e o r a l
l a c t o b a c i l l i a r e n o t u n i q u e i n t h i s r e s p e c t
f r o m
t h e g e n e r a l b e h a v i o r o f t h e m e m b e r s o f t h e
g e n u s .
Va r i o u s a t t e m p t s h a v e b e e n m a d e t o d e f i n e
t h e t a x o n o m i c s t a t u s o f t h e o r a l l a c t o b a c i l l i .
X l i g l e r a n d Gi e s ( 1 9 1 5 ) h a v e b e e n q u o t e d
o f t e n
s i n c e t h e y w e r e a m o n g t h e e a r l i e s t w h o s t u d i e d
t h e l a c t o b a c i l l i f r o m t h e m o u t h .
Al t h o u g h t h e y
a c c e p t e d t h e d e s i g n a t i o n Ba c i l l u s a c i d o p h i l u s
( Mo r o ) f o r t h e i r s t r a i n s , t h e y r e c o g n i z e d
3
t y p e s f r o m t h e l i m i t e d n u m b e r o f t e s t s c o n d u c t e d .
Fu r t h e r m o r e , t h e y c o n s i d e r e d t h a t " t h e p l e o -
m o r p h i c b a c i l l u s u n d o u b t e d l y b e l o n g s t o t h e
a c i d o p h i l u s o r a c i d i f i c
g r o u p '
o f o r g a n i s m s f o u n d
i n h u m a n a n d a n i m a l f e c e s . . . . "
De n t a l a n d i n t e s t i n a l s t r a i n s h a v e b e e n
c o m p a r e d b y Mo r i s h i t a ( 1 9 2 8 , 1 9 2 9 ) , Ro s e b u r y ,
Li n t o n , a n d Bu c h b i n d e r ( 1 9 2 9 ) , Ha d l e y a n d
Bu n t i n g ( 1 9 3 2 ) , Ha d l e y , Bu n t i n g , a n d De l v e s
( 1 9 3 0 ) , a n d o t h e r s . Mo r i s h i t a o b s e r v e d d i f -
f e r e n c e s i n a n t i g e n i c i t y a n d t h e u t i l i z a t i o n o f
c a r b o h y d r a t e s w h e r e a s t h e o t h e r s c o n s i d e r e d
t h e s e s t r a i n s a s v a r i a n t s r e p r e s e n t a t i v e o f
" L. a c i d o p h i l u s " . Wa r n e r a n d Ar n o l d ( 1 9 4 1 )
a l s o c o n c l u d e d t h a t " o r a l a c i d u r i c b a c i l l i d o n o t
a p p e a r t o b e a g r o u p s e p a r a t e a n d d i s t i n c t f r o m
La c t o b a c i l l m a c i d o p h i l u s o f Mo r o . " 2
Th e r o l e o f L. a c i d o p h i l u s i n d e n t a l c a r i e s ,
e i t h e r a s a n e t i o l o g i c a l a g e n t o r a n i n d e x o r g a n i s m
o f e x p e c t e d c a r i e s e x p e r i e n c e , h a s b e e n e m p h a -
s i z e d r e p e a t e d l y . At l e a s t 1 0 0 r e f e r e n c e s c a n b e
c i t e d . Oc c a s i o n a l l y t h e t e r m s Ba c i l l u s a c i d o p h i l u s ,
B. a c i d o p h i l u s , La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s - o d o n t y l i -
c u s , L. o d o n t y l i c u s , o r s i m i l a r e p i t h e t s h a v e b e e n
e m p l o y e d .
Th e a u t h o r s h a v e s t u d i e d t h e a v a i l a b l e e x t a n t
s t r a i n s o f An d e r s o n a n d Re t t g e r ( 1 9 3 7 ) , En r i g h t ,
Fr i e s e l l , a n d Tr e s c h e r ( 1 9 3 2 ) , Cu r r a n , Ro g e r s ,
a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 ) , a n d Mo r i s h i t a ( 1 9 2 8 , 1 9 2 9 ) .
Al l t h e i n t e s t i n a l s t r a i n s w e r e t y p i c a l l y L.
a c i d o p h i l u s , a n d n e a r l y e v e r y d e n t a l s t r a i n
r e m a i n i n g f r o m t h e f o r e g o i n g i n v e s t i g a t i o n s w a s
L. c a s e i . It i s n o t s u r p r i s i n g t h e r e f o r e t h a t ,
e x c e p t f o r Cu r r a n , Ro g e r s , a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 )
w h o d i d n o t s t u d y a g g l u t i n a t i o n r e a c t i o n s , t h e s e
1
It a l i c s o u r s .
2
Th e a u t h o r s h a v e s t u d i e d t h i s s t r a i n f r o m t h e
K r a l Co l l e c t i o n a n d h a v e c o n f i r m e d t h e f i n d i n g o f
Or l a - Je n s e n , Or l a - Je n s e n , a n d Wi n t h e r ( 1 9 3 6 ) t h a t
t h i s i s n o t a l a c t o b a c i l l u s b u t r a t h e r Mi c r o b a c -
t e r i u m l a c t i c u m .
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6 8 2 MO- i RISON ROGOSA ET AL.
i n v e s t i g a t o r s h a d t h e c o m m o n e x p e r i e n c e t h a t
n o n e o f t h e a n t i s e r a o f o r a l s t r a i n s
a g g l u t i n a t e d
i n t e s t i n a l t y p e s a t
s i g n i f i c a n t t i t e r 8 .
Ou r c o n s i s t e n t e x p e r i e n c e h a s b e e n - a t t h e
r e m n a n t s o f o r a l l a c t o b a c i l l u s c o l l e c t i o n s f r o m
h u m a n s o u r c e s a r e a l m o s t i n v a r i a b l y a c o m p a c t
g r o u p o f L. c a s e i . Th e s e a r e t h e h a r d i e s t o f t h e
o r a l l a c t o b a c i l l i , a n d u n l e s s d i l i g e n t e f f o r t i s m a d e
i n t h e m a i n t e n a n c e o f c o l l e c t i o n s , n e a r l y a l l t h e
r e m a i n i n g s t r a i n s d i e . It i s a p p a r e n t t h a t a s t u d y
o f s u c h a r e s i d u a l c u l t u r e c o l l e c t i o n i s n o t r e p r e -
s e n t a t i v e o f t h e s p e c i e s d i s t r i b u t i o n i n t h e
m o u t h . It i s n e a r l y c e r t a i n f r o m t h e d a t a a n d i n
r e t r o s p e c t t h a t Mo r i s h i t a ( 1 9 2 8 , 1 9 2 9 ) a n d
Cu r r a n , Ro g e r s , a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 ) , f o r i n s t a n c e ,
a l m o s t a l w a y s s t u d i e d t h e c o m p a r a t i v e c h a r a c -
t e r i s t i c s o f L. c a s e i a s t h e i r o r a l s t r a i n s a n d
L. a c i d o p h i l u s a s t h e i r i n t e s t i n a l s t r a i n s .
Ul i c n y ( 1 9 3 6 ) s t u d i e d a c i d p r o d u c t i o n b y
i n t e s t i n a l a n d d e n t a l s t r a i n s a n d f o u n d t h a t t h e y
w e r e d i s t r i b u t e d i n t o t h o s e p r o d u c i n g s m a l l a n d
l a r g e a m o u n t s o f a c i d . Su l l i v a n , St i l l , a n d
Go l d s w o r t h y ( 1 9 3 9 ) a l s o d i v i d e d d e n t a l s t r a i n s
o n t h e b a s i s o f w e a k a c i d a n d s t r o n g a c i d p r o -
d u c t i o n . Th e y a l s o n o t e d f e r m e n t a t i v e a n d o t h e r
d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e t w o g r o u p s .
Cu r r a n , Ro g e r s , a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 ) w e r e
u n a b l e t o a g r e e w i t h t h e p r e v a i l i n g c o n c e p t o f t h e
d e n t a l l i t e r a t u r e t h a t t h e d e n t a l s t r a i n s w e r e
L. a c i d o p h i l u 8 . Ov e r h a l f o f t h e i r d e n t a l s t r a i n s
s e e m e d t o b e L. c a s e i a n d t h e y w e r e c l e a r t h a t ,
" In s o f a r a s t h e e v i d e n c e f r o m t h i s c o l l e c t i o n
i n d i c a t e s , t h e l a c t o b a c i l l i o c c u r r i n g i n c a r i o u s
t e e t h a r e n o t o f o n e s p e c i e s a n d a r e n o t u s u a l l y
o f t h e a c i d o p h i l u s t y p e . "
Wh a t t h e n m a y b e t h e r e a s o n f o r t h e c o n c e p t
t h a t t h e o r a l l a c t o b a c i l l i a r e s i m p l y v a r i a n t s o f
L. a c i d o p h i l u s ? It i s b a s e d p r i m a r i l y o n t h e w o r k
o f Ha d l e y , Bu n t i n g , a n d De l v e s ( 1 9 3 0 ) a n d
Ha d l e y a n d Bu n t i n g ( 1 9 3 2 ) . Th e s e a u t h o r s h a d
d e s c r i b e d 4 c o l o n i a l t y p e s . Fu r t h e r m o r e , t h e y
m a i n t a i n e d t h a t t h e y c o u l d d i s s o c i a t e t h e s m o o t h
t y p e s t o r o u g h o n e s v e r y e a s i l y . Th i s e a s e o f
d i s s o c i a t i o n c o n v i n c e d t h e m t h a t t h e o r a l
l a c t o b a c i l l i w e r e s i m p l y c o l o n i a l v a r i a n t s o f
L. a c i d o p h i l u s . Th i s v i e w h a s b e e n a c c e p t e d a n d
p e r p e t u a t e d .
An e x a m i n a t i o n o f t h e i r p a p e r s r e v e a l s t h a t
t h e y w o r k e d w i t h t w o m e d i a , o n e a c a s e i n d i g e s t
o l e a t e m e d i u m a n d t h e o t h e r a g l u c o s e i n f u s i o n
m e d i u m . Th e i s o l a t i o n s a l s o w e r e m a d e f i r s t o n
t h e c a s e i n d i g e s t o l e a t e m e d i u m . In r e c e n t y e a r s ,
h o w e v e r , s o m e k n o w l e d g e h a s b e e n g a i n e d
c o n c e r n i n g t h e i n f l u e n c e o f c e r t a i n c u l t u r a l
c o n d i t i o n s o n t h e
r o u g h - * s m o o t h
g r o w t h
t r a n s f o r m a t i o n . Du b o s e t a l . ( 1 9 4 6 ) o b s e r v e d t h a t
My c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s e x h i b i t e d s m o o t h
g r o w t h u n d e r t h e i n f l u e n c e o f p o l y o x y e t h y l e n e
s o r b i t a n m o n o o l e a t e ( " t w e e n 8 0 " ) a n d g r e w
n o r m a l l y i n t h e r o u g h p h a s e i n i t s a b s e n c e .
Ro g o s a a n d Mi t c h e l l ( 1 9 5 0 a ) a l s o d e s c r i b e d t h e
s a m e t e n d e n c y f o r s m o o t h e r g r o w t h i n t h e
p r e s e n c e o f t w e e n 8 0 w i t h a n u m b e r o f s p e c i e s o f
l a c t o b a c i l l i a n d h a v e s i n c e o b s e r v e d t h i s p h e -
n o m e n o n r o u t i n e l y . Fu r t h e r m o r e , t h e y c l e a r l y
d e m o n s t r a t e d t h a t " t h e a l t e r a t i o n o f c o l o n y
m o r p h o l o g y o f e n t i r e p o p u l a t i o n s i s n o t t h e r e s u l t
o f g e n e t i c c h a n g e s , b u t r a t h e r i s a d i f f e r e n c e i n
t h e p h e n o t y p i c e x p r e s s i o n o f g e n e t i c a l l y s i m i l a r
p o p u l a t i o n s i n t w o d i f f e r e n t e n v i r o n m e n t s . "
Mc Do n a l d a n d Fr a z i e r ( 1 9 5 1 ) h a v e c o n f i r m e d
t h i s g e n e r a l p r i n c i p l e a n d h a v e s u m m a r i z e d
s u c c i n c t l y t h e e x p e r i m e n t a l e v i d e n c e a s f o l l o w s :
" Th u s i t a p p e a r s t h a t t h e u s e o f c o l o n y t y p e a s
t h e s o l e c r i t e r i o n f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f t h e
d i s s o c i a t i v e s t a g e o f a c u l t u r e c o u l d p r o v e v e r y
m i s l e a d i n g i f i t w e r e a s s u m e d t h a t c o l o n y t y p e
w a s a c c o m p a n i e d b y c h a n g e d p h y s i o l o g i c a l a n d
b i o c h e m i c a l p r o p e r t i e s . "
Th e a u t h o r s d o n o t w i s h t o l e a v e t h e i m p r e s s i o n
t h a t g e n o t y p i c c h a n g e s d o n o t o c c u r a m o n g t h e
l a c t o b a c i l l i . Ho w e v e r , t h e y a p p e a r w i t h s u c h
i n f r e q u e n c y o n m e d i a n o t c o n t a i n i n g s u b s t a n c e s
c o n d u c i v e t o v a r i a t i o n i n p h e n o t y p i c e x p r e s s i o n
t h a t i n n e a r l y a l l i n s t a n c e s t h e c o l o n i a l t y p e s o n
s t a n d a r d m e d i a a r e d i s t i n c t i v e f o r t h e s p e c i e s .
( Se e An d e r s o n a n d Re t t g e r , 1 9 3 7 ; We i n s t e i n e t
a l . , 1 9 3 3 ; Cu r r a n e t a l . , 1 9 3 3 ; Or l a - Je n s e n , 1 9 1 9 ,
1 9 4 3 ; Or l a - Je n s e n e t a l . , 1 9 3 6 ; Ti t t s l e r e t a l . ,
1 9 4 7 ; Ba r b e r a n d Fr a z i e r , 1 9 4 5 ; Mc Do n a l d a n d
Fr a z i e r , 1 9 5 1 . ) As t h e f o r e g o i n g a u t h o r s h a v e
o b s e r v e d , t h e r e i s a c o n s t a n t t e n d e n c y f o r
r e v e r s i o n t o t h e p r e d o m i n a t i n g s t a n d a r d c o l o n i a l
t y p e o f t h e s p e c i e s . Fu r t h e r m o r e , Or l a - Je n s e n
a n d c o - w o r k e r s ( 1 9 1 9 , 1 9 3 6 , 1 9 4 3 ) u s e d c a s e i n
d i g e s t m e d i a b u t w i t h o u t s u b s t a n c e s c o n d u c i v e t o
v a r i a t i o n i n p h e n o t y p i c e x p r e s s i o n .
It s e e m s t h a t Ro d r i g u e z ( 1 9 3 2 ) h a s e x p r e s s e d
t h e p r e s e n t s t a t u s w e l l . " Fo r y e a r s i t h a s b e e n m y
o p i n i o n , b a s e d o n p e r s o n a l s t u d y a n d o b s e r v a t i o n
o f m a n y t h o u s a n d s o f s t r a i n s o f b o t h d e n t a l a n d
i n t e s t i n a l o r i g i n , t h a t w e a r e d e a l i n g w i t h a v e r y
c o m p l e x g r o u p . . . a c o n d i t i o n c o m p a r a b l e t o
t h e s t a t u s o f t h e g r a m - n e g a t i v e b a c i l l i i n t h e
6 8 2
[ VOL.
6 5

o
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S
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7
,

2
0
1
3

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f
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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
i n t e s t i n e s o f m a n a n d c e r t a i n a n i m a l s b e f o r e t h e
s e p a r a t i o n o f t h e t y p h o i d , p a r a - t y p h o s i s , a n d c o l i
t y p e s , b u t a s i n t h e l a t t e r i n s t a n c e , c a p a b l e o f
e v e n t u a l t a x o n o m i c c l a s s i f i c a t i o n . "
EX PERIMENTAL METHODS
Is o l a t i o n o f s t r a i n s . Pa r a f f i n s t i m u l a t e d s a l i v a
w a s c o l l e c t e d f r o m 1 3 0 c h i l d r e n i n t h e e l e m e n t a r y
s c h o o l g r a d e s 1 t o 7 . Th e s a l i v a s w e r e s t r e a k e d
a t a d i l u t i o n o f 1 / 5 0 o n t h e s u r f a c e o f t o m a t o
a g a r ( Ja y a n d Ar n o l d , 1 9 4 6 ) a n d i n c u b a t e d f o r
f o u r d a y s a t 3 7 C.
Re p r e s e n t a t i v e c o l o n i e s i n a p p r o x i m a t e r e l a t i o n
t o t h e d i f f e r e n t i a l c o u n t w e r e s e l e c t e d w i t h t h e a i d
o f a w i d e - f i e l d m i c r o s c o p e f o r i s o l a t i o n i n t o a
m e d i u m o f t h e f o l l o w i n g c o m p o s i t i o n , h e r e b y
d e s i g n a t e d a s m e d i u m 1 : Tr y p t o n e ( Di f c o ) , 2 0 g ;
t r y p t o s e ( Di f c o ) , 5 g ; y e a s t e x t r a c t ( Di f c o ) , 5 g ;
t o m a t o j u i c e , 2 0 0 m l ; w a t e r s o l u b l e l i v e r e x t r a c t
( Wi l s o n La b o r a t o r y ) , 1 g ; g l u c o s e , 3 g ; l a c t o s e ,
2 g ; t w e e n 8 0 , 5 0 m g ; d i s t i l l e d w a t e r t o o n e l i t e r ;
p H 6 . 5 .
Th e s e 5 0 0 i s o l a t e s w e r e r e p l a t e d a t l e a s t o n c e
a n d a s o f t e n a s w a s d e e m e d n e c e s s a r y t o e n s u r e
t h e e s t a b l i s h m e n t o f a p u r e c u l t u r e . Th e c o l o n i a l
t y p e s o f t h e r e i s o l a t e d s t r a i n s a g a i n w e r e n o t e d .
Th e f o l l o w i n g p r e l i m i n a r y p r o c e d u r e s w e r e
p e r f o r m e d : Gr a m s t a i n e m p l o y i n g t h e Bu r k e
m o d i f i c a t i o n , c a t a l a s e t e s t s , a n d t e s t s f o r t h e
r e d u c t i o n o f n i t r a t e t o n i t r i t e . Pr e c a u t i o n s w e r e
t a k e n t o t e s t f o r r e s i d u a l n i t r a t e a n d t o m a k e
s u r e t h a t g o o d g r o w t h o c c u r r e d i n t h e n i t r a t e
m e d i u m . On l y g r a m p o s i t i v e , c a t a l a s e n e g a t i v e ,
n i t r a t e n e g a t i v e r o d s w e r e r e t a i n e d f o r f u r t h e r
s t u d y .
Pr e l i m i n a r y t e s t f o r g a s p r o d u c t i o n . Im m e d i a t e l y
a f t e r t h e p r i m a r y i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f t h e
i s o l a t e s , h e a v y i n o c u l a t i o n s f r o m a c t i v e l y g r o w -
i n g c u l t u r e s w e r e m a d e i n t o 1 0 m l o f m e d i u m 1
s u p p l e m e n t e d w i t h 2 p e r c e n t a g a r . Th e t u b e d
m e d i u m h a d b e e n m e l t e d p r e v i o u s l y a n d h e l d a t
4 5 C. Af t e r s o l i d i f i c a t i o n , t h e m e d i u m w a s l a y e r e d
w i t h a n a d d i t i o n a l d e p t h o f a p p r o x i m a t e l y
o n e - q u a r t e r i n c h o f n o n n u t r i e n t 2 p e r c e n t
a g a r , o v e r w h i c h a t h i n l a y e r o f h e a v y m i n e r a l
o i l w a s a d d e d . Ga s p r o d u c t i o n w a s n o t e d b y
c r a c k s o r d i s t u r b a n c e o f t h e a g a r . Ve r y o f t e n
s u f f i c i e n t g a s ( CO2 ) w a s p r o d u c e d t o f o r c e t h e
p l u g o f a g a r o u t o f t h e t u b e .
Ac i d i t y i n m i l k . Ni n e m l o f s k i m m i l k w e r e
s t e r i l i z e d i n 1 6 b y 1 5 0 m m t u b e s , i n o c u l a t e d b y
l o o p , a n d i n c u b a t e d f o r t w o w e e k s a t 3 7 C. Th e
c o n t e n t s o f t h e t u b e s w e r e w a s h e d i n t o Er l e n -
m e y e r f l a s k s ( a s t i r r i n g r o d a i d i n g t h e b r e a k i n g
o f t h e c l o t w h e r e i t w a s f o r m e d ) a n d t i t r a t e d w i t h
N/ 1 0 Na OH, u s i n g p h e n o l p h t h a l e i n a s t h e
i n d i c a t o r . Th e a c i d i t y v a l u e s w e r e c o r r e c t e d
a p p r o p r i a t e l y f o r c o n t r o l a c i d i t y .
Te m p e r a t u r e l i m i t s f o r
g r o w h .
Th e o r g a n i s m s
w e r e t e s t e d f o r t h e i r a b i l i t y t o g r o w i n m e d i u m 1
a t 4 5 C d u r i n g o n e w e e k o f i n c u b a t i o n i n t h e
w a t e r b a t h . Th e t u b e s w e r e s t o p p e r e d w i t h
s t e r i l e r u b b e r s t o p p e r s t o a v o i d e v a p o r a t i o n a n d
s u r f a c e c o o l i n g o f t h e t u b e s w h i c h , i n a n u m b e r
o f i n s t a n c e s , w o u l d h a v e l e d t o f a l s e p o s i t i v e
r e s u l t s .
In i t i o l Wt e o n t h e f e r m e n t a t i o n o f c a r b o h y d r a t e s .
Fe r m e n t a t i o n t e s t s w e r e c o n d u c t e d o n t h e
f o l l o w i n g s u b s t r a t e s a t a c o n c e n t r a t i o n o f 0 . 5 p e r
c e n t : D- g l u c o s e , D- l e v u l o s e , i a r a b i n o s e , D- l a c t o s e ,
D- m a n n i t o l , D- m a n n o s e , D- m e l e z i t o s e , D- m e l i b i o s e ,
D- r a f f i n o s e , D- s u c r o s e , s a l i c i n , D- t r e h a l o s e ,
D- x y l o s e , a d o n i t o l , D- c e l l o b i o s e , d u l c i t o l , D- g a l a c -
t o s e , i n o s i t o l , i n u l i n , D- m a l t o s e , i - r h a m n o s e ,
D- s o r b i t o l , L- s o r b o s e , a - m e t h y l - D- g l u c o s i d e , a n d
a - m e t h y l - D- m a n n o s i d e . Th e c a r b o h y d r a t e s u b -
s t r a t e s w e r e Pf a n s t i e h l p r o d u c t s w h o s e s p e c i f i c
r o t a t i o n s w e r e i n e x c e l l e n t a g r e e m e n t w i t h
a c c e p t e d v a l u e s . Pr e l i m i n a r y t e s t s d e m o n s t r a t e d
t h a t a r a b i n o s e , x y l o s e , m a n n o s e , g a l a c t o s e ,
l e v u l o s e , s o r b o s e , a n d m a l t o s e r e q u i r e d s t e r i l i z a -
t i o n b y f i l t r a t i o n . Th i s w a s a c c o m p l i s h e d b y
e m p l o y i n g s i n t e r e d g l a s s i f i t e r s w i t h o u t t h e
a p p l i c a t i o n o f h e a t a t a n y t i m e .
Th e i n i t i a l s c r e e n i n g t e s t s w e r e c o n d u c t e d i n
t h e f o l l o w i n g b a s a l m e d i u m , h e r e b y d e s i g n a t e d
m e d i u m 2 : Tr y p t i c a s e ( BBL) , 0 . 5 p e r c e n t ;
y e a s t e x t r a c t ( Di f c o ) , 0 . 3 p e r c e n t ; b e e f s p l e e n
e x t r a c t ( Wi l s o n La b ) , 0 . 2 5 p e r c e n t ; Mg SO4 .
7 H2 0 , 0 . 0 5 p e r c e n t ; v i t a m i n s u p p l e m e n t , 1 m l ;
a n d b r o m c r e s o l p u r p l e , 0 . 0 0 1 6 p e r c e n t . Th e b e e f
s p l e e n e x t r a c t w a s i n f u s e d w i t h 5 0 m l b o i l i n g
d i s t i l l e d w a t e r a n d a f t e r s o m e c o o l i n g w a s
c e n t r i f u g e d . Th e s u p e r n a t a n t f l u i d w a s f i l t e r e d
b y s u c t i o n i n a Bu c h n e r f u n n e l t h r o u g h p a p e r
c o a t e d w i t h a f i l t e r a i d . Th e r e m a i n i n g i n g r e d i e n t s
w e r e d i s s o l v e d i n t h e n o w c l e a r b e e f s p l e e n
i n f u s i o n . Th e v i t a m i n s u p p l e m e n t c o m p r i s e d t h e
f o l l o w i n g i n t e r m s o f m i c r o g r a m s p e r 1 0 0 m l o f
m e d i u m : n i c o t i n i c a c i d , 1 0 0 ; t h i a m i n h y d r o -
c h l o r i d e , 5 0 ; c a l c i u m p a n t o t h e n a t e , 5 0 ; r i b o f l a v i n ,
5 0 ; p y r i d o x a m i n e h y d r o c h l o r i d e , 2 0 ; p y r i d o x a l
h y d r o c h l o r i d e , 1 0 ; p y r i d o x i n e , 2 0 ; i n o s i t o l , 1 ,0 0 0 ;
c h o l i n e c h l o r i d e , 1 ,0 0 0 ; b i o t i n , 1 ; p - a m i n o -
1 9 5 3 1 6 8 3

o
n

S
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7
,

2
0
1
3

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d

f
r
o
m

MORRISON ROGOSA ET AL.
b e n z o i c a c i d , 1 ; a n d f o l i c a c i d , 1 . Th e p H o f t h e
m e d i u m w a s b r o u g h t t o 6 . 6 t o 6 . 8 a n d t h e v o l u m e
a d j u s t e d t o 1 0 0 m l .
Th e m e d i u m w a s d i s p e n s e d i n 2 m l q u a n t i t i e s
i n t o 1 0 b y 7 5 m m t u b e s w h i c h w e r e s t e r i l i z e d i n
r a c k s . Th e a u t o c l a v e w a s b r o u g h t q u i c k l y t o
1 1 5 C a t t h e e x h a u s t , t h e s t e a m s u p p l y c l o s e d
i m m e d i a t e l y , a n d t h e p r e s s u r e a l l o w e d t o r e t u r n
t o a t m o s p h e r i c p r e s s u r e . Th i s m i n i m a l h e a t
a p p l i c a t i o n w a s f o u n d t o b e a d e q u a t e w h e n t h e
f o r e g o i n g c o n d i t i o n s w e r e m a i n t a i n e d . Th e i n -
o c u l a g e n e r a l l y w e r e p r e p a r e d b y m a k i n g t w o
p r e l i m i n a r y t r a n s f e r s , o r i n t h e c a s e o f t h e
s l o w e r g r o w i n g s t r a i n s , a f t e r a p e r i o d i n w h i c h
g o o d g r o w t h h a d a p p e a r e d . Th e s e c o n d t r a n s f e r s
w e r e w a s h e d t w i c e w i t h d i s t i l l e d w a t e r a n d t h e
Fi g u r e 1 . Bu f f e r
m e d i u m .
t o 1 2 1 4 1 I* 2 0
ML M/ 1 0 LACTIC ACID
c u r v e o f b a s a l f e r m e n t a t i o n
i n o c u l a c o m p r i s e d o n e d r o p b y p i p e t t e . Th e
i m p o r t a n c e o f e m p l o y i n g c u l t u r e s w h i c h h a d b e e n
b r o u g h t t o a v i g o r o u s s t a t e o f a c t i v i t y b e c a m e
e v i d e n t e a r l y i n t h i s s t u d y a n d w i l l b e d i s c u s s e d
l a t e r .
Re p e t i t i o n o f t h e f e r m e n t a t i o n t e a t 8 . Tw o y e a r s
a f t e r t h e c o m p l e t i o n o f t h e o r i g i n a l f e r m e n t a t i o n
t e s t s t h e y w e r e r e p e a t e d . Du r i n g t h i s p e r i o d
m e d i a h a d b e e n s t u d i e d i n t e n s i v e l y , a n d a h i g h l y
s e l e c t i v e m e d i u m h a d b e e n d e v e l o p e d f o r t h e
p r i m a r y i s o l a t i o n o f l a c t o b a c i l l i ( Ro g o s a e t a l . ,
1 9 5 1 a ,b ) f r o m o r a l , i n t e s t i n a l , a n d v a g i n a l
s o u r c e s . Th e r e f o r e , t h e s e l e c t i v e m e d i u m f o r
p r i m a r y i s o l a t i o n w a s a d a p t e d f o r t h e l e s s
r i g o r o u s r e q u i r e m e n t s o f p u r e c u l t u r e s t u d y t o
b e c o m e a n e x c e l l e n t b a s a l m e d i u m f o r t h e
r e p e a t e d f e r m e n t a t i o n s t u d y . Th e p r i m a r y
s e l e c t i v e m e d i u m ( SL a g a r ) j . Wa s m o d i f i e d b y
r e d u c i n g t h e s o d i u m a c e t a t e t o 1 . 5 p e r c e n t ,
o m i t t i n g t h e a g a r , g l u c o s e , a n d a c e t i c a c i d , a n d
b y t h e a d d i t i o n o f a l i z a r i n e r e d S a s i n d i c a t o r a t
a c o n c e n t r a t i o n o f 0 . 0 0 4 p e r c e n t . Th e m e d i u m
h a d a f i n a l p H a f t e r s t e r i l i z a t i o n o f 5 . 9 . Th i s i s
d e s i g n a t e d a s m e d i u m 3 . St e r i l i z a t i o n w a s
e f f e c t e d e x a c t l y a s d e s c r i b e d p r e v i o u s l y . Th e
c a r b o h y d r a t e s w e r e a d d e d t o t h i s m e d i u m a t a
c o n c e n t r a t i o n o f 2 p e r c e n t e x c e p t f o r g a l a c t o s e
w h i c h w a s p r e s e n t a t a c o n c e n t r a t i o n o f 1 . 4 p e r
c e n t .
Th e i n d i c a t o r w a s o b s e r v e d d a i l y f o r a t l e a s t
t w o w e e k s a n d a n o t a t i o n m a d e t h e d a y i t
c h a n g e d c o l o r d i s t i n c t l y . In a d d i t i o n , i n t h e
r e p e a t e d f e r m e n t a t i o n s t u d y , t h e p H o f t h e
c o n t e n t s o f e a c h t u b e w a s d e t e r m i n e d a f t e r t w o
w e e k s o f i n c u b a t i o n . In o r d e r t o r e l a t e t h e p H
r e a d i n g s t o t o t a l a c i d i t y , a s c e r t a i n i m p o r t a n t
a n d f u n d a m e n t a l i n v e s t i g a t i o n s ( Or l a - Je n s e n ,
1 9 1 9 , 1 9 4 3 ; Or l a - Je n s e n e t a l . , 1 9 3 6 ; Pe d e r s o n ,
1 9 2 9 a ,b , 1 9 3 0 , 1 9 3 6 , 1 9 3 8 ) h a v e d o n e , t h e
b u f f e r c u r v e o f t h e b a s a l m e d i u m i s s h o w n i n
f i g u r e 1 .
Ad d i t i o n a l t e s t s 8 . Te s t s n o t p e r f o r m e d i n t h e
o r i g i n a l s c r e e n i n g p r o g r a m w e r e t h o s e f o r t h e
h y d r o l y s i s o f s o d i u m h i p p u r a t e , e s c u l i n , a n d t h e
p r o d u c t i o n o f a m m o n i a . Fo r t h e h i p p u r a t e
h y d r o l y s i s t e s t s m e d i u m 3 w a s m o d i f i e d b y 1 p e r
c e n t s o d i u m h i p p u r a t e a n d 2 p e r c e n t g l u c o s e .
Af t e r 2 w e e k s ' i n c u b a t i o n a t 3 7 C, 3 m l o f 5 0 p e r
c e n t H2 S0 4 w e r e a d d e d t o 2 m l o f t h e m e d i u m . 3
In p o s i t i v e r e a c t i o n s t h e c h a r a c t e r i s t i c c r y s t a l s o f
b e n z o i c a c i d w e r e o b s e r v e d . Te s t s f o r t h e h y -
d r o l y s i s o f e s c u l i n w e r e m a d e i n p l a t e s p o u r e d
f r o m m e d i u m 4 . Th i s w a s m e d i u m 3 m a d e s o l i d
b y 1 . 5 p e r c e n t a g a r a n d s u p p l e m e n t e d w i t h 0 . 3
p e r c e n t e s c u l i n , 2 p e r c e n t g l u c o s e , 0 . 5 p e r c e n t
a r a b i n o s e , a n d 0 . 5 p e r c e n t f e r r i c c i t r a t e . Th e
t y p i c a l b l a c k e n i n g o f t h e m e d i u m i n s t r o n g l y
p o s i t i v e t e s t s w a s d i s t i n c t i v e . Ho w e v e r , a
s u f f i c i e n t n u m b e r o f d e l a y e d a n d e q u i v o c a l
r e a c t i o n s w a s o b s e r v e d s o t h a t t h e e s c u l i n r e s u l t s ,
a l t h o u g h s u g g e s t i v e o f d i f f e r e n t i a l v a l u e , w i l l b e
p r e s e n t e d w i t h s o m e r e s e r v e . Am m o n i a w a s
d e t e c t e d q u a l i t a t i v e l y b y d i r e c t n e s s l e r i z a t i o n i n
m e d i u m 1 .
Op t i c a l r o t a t i o n o f l a t i c a c i d . Th e m e d i u m
e m p l o y e d ( 5 ) w a s a m o d i f i c a t i o n o f SL a g a r i n
8 Th e e x p e r i e n c e o f s o m e i n v e s t i g a t o r s , i n c l u d -
i n g u s , i s t h a t t h e f e r r i c c h l o r i d e t e s t f o r h i p p u r a t e
h y d r o l y s i s i s u n r e l i a b l e .
2
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[ VOL.
6 5

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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
t h e f o l l o w i n g r e s p e c t s : o m i s s i o n o f t h e a g a r ;
r e d u c t i o n o f t h e s o d i u m a c e t a t e a n d t w e e n 8 0
c o n c e n t r a t i o n s t o 1 a n d 0 . 0 3 p e r c e n t , r e -
s p e c t i v e l y . Ar a b i n o s e a n d x y l o s e a t c o n c e n t r a -
t i o n s o f 0 . 5 p e r c e n t w e r e a d d e d i n t h e c a s e s o f
c e r t a i n h e t e r o f e r m e n t a t i v e s t r a i n s w h i c h o t h e r -
w i s e d i d n o t p r o d u c e s u f f i c i e n t l a c t a t e f o r
a n a l y s i s . Th e m e d i u m w a s d i s p e n s e d i n 3 0 0 m l
q u a n t i t i e s i n t o 5 0 0 m l f l a s k s , 1 0 g o f c a l c i u m
c a r b o n a t e a d d e d , a n d s t e r i l i z e d a t 1 5 l b s t e a m
p r e s s u r e f o r 1 5 m i n u t e s . Th e f l a s k s w e r e i n -
o c u l a t e d h e a v i l y a n d i n c u b a t e d f o r 2 w e e k s a t
3 5 C. Vo l a t i l e a c i d s w e r e d i s t i l l e d o f f a n d z i n c
l a c t a t e s p r e p a r e d f r o m t h e e t h e r e x t r a c t s . Th e
a n a l y s e s w e r e p e r f o r m e d a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d
o f Cu r r a n , Ro g e r s , a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 ) .
St u d i e s o f n u t r i t i o n . Th e " c o m p l e t e " m e d i u m
c o n t a i n e d t h e f o l l o w i n g i n g r e d i e n t s p e r l i t e r o f
f i n a l s t r e n g t h m e d i u m : a c i d h y d r o l y z e d c a s e i n
o r Di f c o " v i t a m i n - f r e e " c a s a m i n o a c i d s , 5 g ;
L- c y s t i n e , 0 . 1 g ; DL- t r y p t o p h a n , 0 . 1 g ; DL-
a s p a r a g i n e , 0 . 2 5 g ; a m m o n i u m c i t r a t e , 2 g ;
K H2 PO4 , 3 g ; K 2 HPO4 , 3 g ; s o d i u m a c e t a t e
h y d r a t e , 1 6 . 5 g ; a d e n i n e , g u a n i n e , u r a c i l ,
x a n t h i n e , e a c h 0 . 0 1 g ; t w e e n 8 0 , 1 g ; g l u c o s e ,
2 0 g ; Di f c o c a s i t o n e , 2 . 5 g ; s o d i u m t h i o g l y c o l a t e ,
1 g ; L- c y s t e i n e , 0 . 1 g ; s a l t s o l u t i o n , 5 m l ; c h o l i n e
c h l o r i d e a n d i n o s i t o l , 2 0 m g e a c h ; p - a m i n o b e n z o i c
a c i d , p t e r o y l g l u t a m i c a c i d , a n d b i o t i n , 1 0 j g
e a c h ; n i a c i n , 2 ,0 0 0 j ,g ; t h i a m i n h y d r o c h l o r i d e ,
c a l c i u m p a n t o t h e n a t e , a n d r i b o f l a v i n , 1 ,0 0 0 g
e a c h ; p y r i d o x a m i n e a n d p y r i d o x i n e , 4 0 0 ,u g
e a c h ; p y r i d o x a l , 2 0 0 ,g ; a n d c r y s t a l l i n e v i t a m i n
B1 2 , 0 . 2 5 p g .
Th e s a l t s o l u t i o n w a s m a d e a s f o l l o w s :
Mg SO4 . 7 H2 0 , 1 1 . 5 g ; Fe SO4 . 7 H2 0 , 0 . 6 8 g ;
Mn SO4 . 2 H2 0 , 2 . 4 g ; a n d d i s t i l l e d w a t e r t o 1 0 0 m l .
Th e c a s a m i n o a c i d s o r a c i d h y d r o l y z e d c a s e i n
w a s t r e a t e d a s f o l l o w s : 1 0 0 g w e r e d i s s o l v e d i n
a p p r o x i m a t e l y 7 5 0 m l d i s t i l l e d w a t e r , p H b r o u g h t
t o 4 w i t h h y d r o c h l o r i c a c i d , 2 5 g Da r c o G6 0
a d d e d , a n d s t i r r e d w i t h a n e l e c t r i c s t i r r e r f o r 3 0
m i n u t e s . Th e f i l t r a t e s w e r e r e c o v e r e d . Fo u r s u c h
a d s o r p t i o n s w i t h Da r c o G6 0 w e r e m a d e a n d t h e
f i n a l f i l t r a t e b r o u g h t t o a v o l u m e o f o n e l i t e r .
Th e c a s i t o n e w a s t r e a t e d i n t h e s a m e w a y
e x c e p t t h a t t h e f i n a l v o l u m e w a s b r o u g h t t o 2
l i t e r s .
Th e i n o c u l a w e r e p r e p a r e d , a s w a s c u s t o m a r y ,
f r o m a c t i v e l y g r o w i n g c e l l s p r e v i o u s l y c a r r i e d
t h r o u g h a t l e a s t t w o t r a n s f e r s i n m e d i u m 1 o r 3 .
Th e c e l l s w e r e w a s h e d t w i c e i n d i s t i l l e d w a t e r
a n d u s u a l l y b r o u g h t t o a f i n a l v o l u m e i n d i s t i l l e d
w a t e r o f 1 0 t i m e s t h a t o f t h e o r i g i n a l c u l t u r e . Th e
f i n a l d i l u t i o n w a s s o m e t i m e s l e s s d e p e n d i n g o n
t h e a b i l i t y o f t h e p a r t i c u l a r c u l t u r e t o g r o w i n
t h e " c o m p l e t e m e d i u m " . Ho w e v e r , t h e i n o c u l a
w e r e k e p t a s c o n s t a n t a s w a s p o s s i b l e i n d i f f e r e n t
e x p e r i m e n t s . Th e f i n a l i n o c u l a w e r e a d d e d i n
d u p l i c a t e t o t h e t e s t m e d i a i n o n e d r o p a l i q u o t s
f r o m 1 m l p i p e t t e s . Th e s a m e p i p e t t e w a s u s e d i n
i n o c u l a t i n g f r o m a n i n d i v i d u a l c u l t u r e s u s p e n s i o n
i n a n y e x p e r i m e n t .
RESULTS
Fo r p u r p o s e s o f o r i e n t a t i o n a s u m m a r y o f t h e
c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e h o m o f e r m e n t a t i v e l a c t o -
b a c i l l i i s p r e s e n t e d i n t a b l e 1 . Th i s s u m m a r y w a s
p r e p a r e d o r i g i n a l l y b y R. P. Ti t t s l e r a n d i s
b a s e d o n t h e d a t a o f Ti t t s l e r , Ge i b , a n d Ro g o s a
( 1 9 4 7 ) a n d Ro g o s a , Ti t t s l e r , a n d Ge i b ( 1 9 4 7 ) ,
w h i c h p r e v i o u s l y h a v e b e e n p r e s e n t e d i n a b s t r a c t
f o r m o n l y .
A s t u d y o f t h e d e s c r i p t i o n s o f t h e h e t e r o -
f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i i n Be r g e y ' s Ma n u a l
( Br e e d e t a l . , 1 9 4 8 ) m a k e s i t a p p a r e n t t h a t c l e a r -
c u t d i f f e r e n t i a t i o n o f t h e s e s p e c i e s i s m o s t
d i f f i c u l t .
La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s . Th e c o n c e p t o f
L. a c i d o p h i l u s s t e m s f r o m t h e d e s c r i p t i o n s o f
Mo r o ( 1 9 0 0 a ,b ) , w h o d e s c r i b e d o r g a n i s m s o f
i n t e s t i n a l o r i g i n , f o r m i n g i r r e g u l a r a n d f u z z y
c o l o n i e s . Th i s t y p e o f c o l o n y w a s t e r m e d t h e X
t y p e b y Re t t g e r a n d h i s a s s o c i a t e s . In f r e q u e n t l y ,
s o m e c u l t u r e s d e v e l o p s o m e c o l o n i e s w h o s e e d g e s
a r e e n t i r e ( t h e Y t y p e o f Re t t g e r ) . Ne v e r t h e l e s s ,
t h e s e s m o o t h o r Y c o l o n i e s , d u r i n g 1 5 y e a r s o f
o b s e r v a t i o n , a l w a y s h a v e r e v e r t e d i n t i m e t o t h e
X t y p e o r m i x t u r e s i n w h i c h t h e X t y p e i s
h i g h l y p r e d o m i n a n t . It s e e m s s t r a n g e t o u s t h a t
t h e c o l o n i e s o f L. c a s e i s h o u l d b e c o n f u s e d w i t h
t h e v a r i a n t s m o o t h c o l o n i e s o f L. a c i d o p h i l u s .
Al t h o u g h o l d e r c o l o n i e s o f L. c a s e i m a y e x h i b i t
l o c a l a r e a s i n w h i c h t h r e a d - l i k e p r o j e c t i o n s m a y
a p p e a r , t h e r e i s a c o n s t a n t t e n d e n c y f o r r e v e r s i o n
t o a s m o o t h , r e l a t i v e l y l a r g e , d i s c , o r l e n s - s h a p e d
c o l o n y i n d e e p c u l t u r e . Th e r e a r e o t h e r d i f -
f e r e n c e s i n t h e c o l o n i e s t h e m s e l v e s , s u c h a s s i z e ,
r a t e o f d e v e l o p m e n t , c o l o r , p h y s i c a l a p p e a r a n c e ,
a n d t e x t u r e . Va r i a n t c o l o n i e s o f L. a c i d o p h i l u s
a n d L. c a s e i a r e s h o w n i n f i g u r e s 2 , 3 , a n d 4 ,
r e s p e c t i v e l y .
Th e t a c i t a s s u m p t i o n t h a t o r a l a n d i n t e s t i n a l
s o u r c e s a r e m u t u a l l y
e x c l u s i v e f o r t h e s a m e
1 9 5 3 1
6 8 5

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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
Fi g u r e 2 . Ty p i c a l X o r r o u g h c o l o n y o f La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s i n t h e d e p t h o f t o m a t o a g a r
Ma g n i f i c a t i o n 4 6 X .
Fi g u r e 3 . Sm o o t h p h e n o t y p i c v a r i a n t c o l o n y o f
La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s . Th i s r e v e r t s i n o n e
t r a n s f e r o n t o m a t o a g a r t o t h e r o u g h t y p e s h o w n
i n f i g u r e 2 . Ma g n i f i c a t i o n 4 6 X .
o r g a n i s m s h a s i n c i t e d a f u t i l e c o n t r o v e r s y .
Pe r s o n a l h a b i t s , d i e t , e t c . , a n d s i m i l a r e a s e o f
i m p l a n t a b i l i t y i n d i f f e r e n t y e t r e l a t e d a n a t o m i c a l
Fi g u r e 4 . Ty p i c a l s u b - s u r f a c e c o l o n y o f La c t o -
b a c i l l u s c a s e i i l l u s t r a t i n g d i s c t y p e s . No t e d i f f e r -
e n c e i n s i z e f r o m p h e n o t y p i c v a r i a n t o f La c t o -
b a c i l l u s a c i d o p h i l u s i n f i g u r e 3 a n d d i f f e r e n c e s i n
r e f l e c t i o n o f l i g h t . Ma g n i f i c a t i o n 4 6 X .
r e g i o n s s h o u l d m a k e i t n o t s u r p r i s i n g t h a t
L. a c i d o p h i l u s , o r i g i n a l l y i s o l a t e d f r o m t h e
i n t e s t i n e , s h o u l d b e f o u n d a l s o i n t h e h u m a n
m o u t h . It i s a c o m m o n e x p e r i e n c e t o i s o l a t e
a b u n d a n t n u m b e r s o f f e c a l s t r e p t o c o c c i f r o m t h e
m o u t h . In t h e p r e s e n t s t u d y , L. a c i d o p h i l u s w a s
f o u n d i n v a r y i n g n u m b e r s i n a b o u t 2 1 . 5 p e r c e n t
o f t h e 1 3 0 s a m p l e s b u t c o n s t i t u t e d o n l y 1 1 p e r
c e n t o f t h e 5 0 0 i s o l a t e s . Th e m o s t p r e v a l e n t
h o m o f e r m e n t a t i v e s p e c i e s , h o w e v e r , w a s L. c a s e i .
Ta b l e 2 p r e s e n t s t y p i c a l d a t a d i f f e r e n t i a t i n g t h e
s p e c i e s .
6 8 7 1 9 5 3 1

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MORRISON ROGOSA ET AL.
TABLE 2
Di s t i n g u i s h i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f La c t o b a c i l l u s
a c i d o p h i l u s a n d La c t o b a c i l l u s c a s e i
La c t o s e . . . . . .
Ma i i n i t o l . . . .
Me l e z i t o s e . . .
Me l i b i o s e . . . .
Ra f f i n o s e . . . .
Su c r o s e . . .
X y l o s e . . . . . .
Ad o n i t o l . . . .
Du l c i t o l . . . . .
In o s i t o l . . . . .
In u l i n . . . . . . .
Ma l t o s e . . . . .
Rh a m n o s e . . .
So r b i t o l . . . . .
So r b o s e . . . . . .
Hi p p u r a t e . . .
Gl u c o s e . . . . .
a - Me t h y l -
g l u c o s i d e . .
a - Me t h y l -
m a n n o s i d e .
Ba s a l . . . . . . .
Nu t r i t i o n a l
p a t t e r n * . . .
La c t a t e . . . . . .
Co l o n y .
Ac i d i t y -
m i l k - %. . . .
Gr o w t h
4 5 C. . . . . . .
Gr o w t h
1 6 C. . . . . . .
La c t o b a c i l l u s
a c i d o p h i l u s
4 . 0 + 1
5 . 5 -
5 . 3 -
5 . 7 -
5 . 7 -
4 . 0 + 1
5 . 5 -
5 . 8 -
5 . 3 -
5 . 4 -
5 . 7 -
4 . 1 + 1
5 . 5 -
5 . 8 -
5 . 7 -
4 . 1 + 1
5 . 7 -
5 . 8 -
5 . 8 -
2
I
RI
0 . 2 6 - 1 . 4 3
Me a n =
0 . 5
La c t o b a c i l l u s c a s e i
v a r . v a r .
c s i
a l a c -
l o s u s
4 . 1 + 1 5 . 9 -
4 . 1 + 1 4 . 3 + 1
4 . 0 + ' 4 . 0 + 1
5 . 4 - 5 . 4 -
5 . 9 - 6 . 0 -
4 . 5 + 4 4 . 6 + 4
5 . 3 - 5 . 5 -
5 . 11
4
6 . 0 -
5 . 7 - 4 . 0 + '
5 . 2 4 - 1 4 5 . 8 -
5 . 9 - 5 . 9 -
4 . 5 + 3 4 . 7 + 3
5 . 5 - 5 . 6 -
4 . 1 + 2 4 . 1 + '
4 . 0 + 2 4 . 0 + 2
+ +
4 . 1 + ' 4 . 1 + '
4 . 1 + 1 4 4 . 2 + ' o 4 . 6 + 3
5 . 6 -
6 . 0 -
5 . 9 -
6 . 0 -
1
DL
s
0 . 0 9
+
1 i
DL
s
. 5 1 ,
+
*
Re f e r s t o n u t r i t i o n a l d a t a o f t a b l e 3 .
Al l s t r a i n s f e r m e n t m a n n o s e , t r e h a l o s e , s a l i c i n ,
c e l l o b i o s e , g a l a c t o s e , a n d l e v u l o s e . No n e f e r m e n t s
a r a b i n o s e a n d g l y c e r o l , o r h y d r o l y z e s e s c u l i n .
Su p e r s c r i p t s i n a l l t a b l e s s i g n i f y d a y o f i n c u -
b a t i o n a t w h i c h i n d i c a t o r w a s o b s e r v e d t o c h a n g e
c o l o r d i s t i n c t l y .
i i n d i c a t e s w e a k , i n c o m p l e t e , o r v a r i a b l e r e -
a c t i o n .
DL i n d i c a t e s t h a t D- l a c t i c a c i d i s t h e p r e d o m i -
n a n t o p t i c a l f o r m .
S =s m o o t h c o l o n i e s ; I = i n t e r m e d i a t e o r i r -
r e g u l a r ; a n d R =r o u g h c o l o n i e s . .
In t h e n o t a t i o n o f f e r m e n t a t i v e d a t a , s u p e r -
s c r i p t s h a v e b e e n i n c l u d e d t o i n d i c a t e t h e f i r s t
d e f i n i t e l y o b s e r v e d c h a n g e . Th i s h a s b e e n
c o n s i d e r e d i m p o r t a n t s i n c e o n e d e t e r m i n a t i o n o f
a c i d i t y a f t e r e x t e n d e d i n c u b a t i o n m a y y i e l d n o
i n f o r m a t i o n c o n c e r n i n g t h e p r o b a b l e a d a p t i v e
n a t u r e o f c e r t a i n f e r m e n t a t i o n s . Ma n y c a s e s
h a v e b e e n o b s e r v e d i n w h i c h s i g n i f i c a n t q u a n t i t i e s
o f a c i d h a v e a c c u m u l a t e d w i t h e x t e n d e d i n c u b a -
t i o n , b u t i n w h i c h t h e a p p a r e n t i n i t i a t i o n o f
f e r m e n t a t i o n w a s d e l a y e d s i g n i f i c a n t l y a n d o f t e n
c o n s i s t e n t l y . Th e s p e c i e s h a v e b e e n e v a l u a t e d b y
m e a n s o f a c o r r e l a t i o n o f c h a r a c t e r i s t i c s i n w h a t
i s b e l i e v e d t o b e a n a t u r a l t a x o n o m i c a p p r o a c h .
Th e a u t h o r s h a v e r e c o g n i z e d 4 v a r i a n t t y p e s o f
L. a c i d o p h i l u s . Mo r e t h a n 8 0 p e r c e n t o f t h e
s t r a i n s f o r m e d a c o m p a c t u n i t o f
i d e n t i t y
( g r o u p 1 ) . Ab o u t 2 p e r c e n t v a r i e d f r o m t h e
m o d a l b e h a v i o r o f t h e s p e c i e s i n f e r m e n t i n g
m e l i b i o s e s l o w l y a n d w e a k l y ( g r o u p 2 ) , 4 p e r c e n t
v a r i e d i n f e r m e n t i n g s o r b i t o l a n d b e i n g d e r i v e d
f r o m a s m o o t h c o l o n y o n i s o l a t i o n ( g r o u p 3 ) , a n d
1 4 p e r c e n t i n f e r m e n t i n g r a f f i n o s e v e r y s l o w l y
a n d v e r y w e a k l y ( g r o u p 4 ) . It i s e v i d e n t t h a t t h e
v a r i a t i o n s w e r e l a r g e l y i n t e r m s o f s l o w a n d w e a k
r e a c t i o n s . To c o n s e r v e s p a c e o n l y t h e t y p i c a l
r e a c t i o n s o f g r o u p 1 a r e s h o w n i n t a b l e 2 .
La c t o b a c i l l u s c a s e i . Pr e v i o u s l y Or l a - Je n s e n
( 1 9 1 9 ) o b s e r v e d 2 v a r i e t i e s , o n e o f w h i c h f e r -
m e n t e d r h a m n o s e a n d g r e w a t 4 5 C, a n d s u g -
g e s t e d t h a t t h e y m i g h t w e l l b e r e g a r d e d a s
s e p a r a t e s p e c i e s . Or l a n d ( 1 9 5 0 ) h a s s h o w n t h a t
t h e s e 2 v a r i e t i e s p o s s e s s d i s s i m i l a r a n t i g e n i c
c o m p o n e n t s .
Th e a u t h o r s r e c o g n i z e 3 v a r i e t i e s : L. c a s e i
v a r . c a s e i v a r . n o v . w h i c h d o e s n o t f e r m e n t
r h a m n o s e b u t f e r m e n t s l a c t o s e ; L. c a s e i v a r .
a l a c t o s u s v a r . n o v . w h i c h d o e s n o t f e r m e n t e i t h e r
r h a m n o s e o r l a c t o s e ; a n d L. c a s e i v a r . r h a m n o s u s
v a r . n o v . w h i c h f e r m e n t s r h a m n o s e .
De s p i t e t h e s e v a r i a t i o n s , a l l t h e s t r a i n s w e r e
i d e n t i c a l p o s i t i v e l y i n t h e f e r m e n t a t i o n o f 1 2
s u b s t r a t e s . Th e y a l s o w e r e i d e n t i c a l i n n o t
f e r m e n t i n g 8 s u b s t r a t e s o r i n f e r m e n t i n g t h e m
o n l y v e r y w e a k l y a n d s l o w l y . In a d d i t i o n , a l l t h e
s t r a i n s p o s s e s s e d s o m e f u n d a m e n t a l e n z y m a t i c
i d e n t i t i e s . Th e l a c t a t e a c c u m u l a t i n g i n c u l t u r e s
w a s i n v a r i a b l y a m i x t u r e o f t h e D a n d L f o r m s
w i t h t h e o p t i c a l l y a c t i v e D- l a c t i c a c i d a l w a y s i n
e x c e s s . Th e s t r a i n s a l s o b e h a v e d a l i k e i n n u -
t r i t i o n a l t e s t s a n d i n g r o w t h a t c e r t a i n e x t r e m e s
o f t e m p e r a t u r e ( 1 6 C) . Th e c o l o n i a l t y p e a l s o w a s
i d e n t i c a l .
On l y d a t a f o r g r o u p 1 o f L. c a s e i v a r . c a s e i a r e
s h o w n i n t a b l e 2 . Th e d e t a i l e d d a t a f o r g r o u p s
6 8 8
[ VOL.
6 5

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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
2 , 3 , a n d 4 a r e o m i t t e d . Th e g r o u p s w i t h i n t h i s
v a r i e t y d i f f e r e d a m o n g t h e m s e l v e s i n e i t h e r
w e a k l y f e r m e n t i n g o r n o t f e r m e n t i n g a d o n i t o l ,
i n o s i t o l , a n d v e r y i n f r e q u e n t l y , x y l o s e . Gr o u p 2
( 1 5 s t r a i n s ) d i f f e r e d f r o m g r o u p 1 ( 7 3 s t r a i n s ) i n
f e r m e n t i n g i n u l i n , w h i l e g r o u p 3 ( 1 7 s t r a i n s )
d i f f e r e d f r o m g r o u p 1 i n f e r m e n t i n g i n u l i n a n d
i n n o t f e r m e n t i n g m e l e z i t o s e a n d s o r b o s e . Gr o u p
4 ( 6 s t r a i n s ) v a r i e d f r o m g r o u p 1 i n f e r m e n t i n g
i n u l i n a n d f e e b l y f e r m e n t i n g d u l c i t o l .
Gr o u p s 1 ( 2 6 s t r a i n s ) , 2 ( 2 s t r a i n s ) , a n d 3 ( 2
s t r a i n s ) o f L. c a s e i v a r . a l a c t o s u s d i d n o t f e r m e n t
l a c t o s e . Th i s w a s s u r p r i s i n g t o u s , b u t i t s h o u l d
b e r e m e m b e r e d t h a t p r e v i o u s l y d e s c r i b e d i s o l a t e s
o f L. c a s e i h a v e b e e n o b t a i n e d a l m o s t e x c l u s i v e l y
f r o m d a i r y p r o d u c t s . Th e d e t a i l e d d a t a f o r
g r o u p s 2 a n d 3 a r e o m i t t e d f r o m t a b l e 2 . Gr o u p 2
d i f f e r e d f r o m g r o u p 1 i n f e r m e n t i n g r a f f i n o s e a n d
i n o s i t o l w e a k l y a n d s l o w l y , i n f e r m e n t i n g i n u l i n ,
a n d i n n o t f e r m e n t i n g s o r b o s e . Gr o u p 3 v a r i e d
f r o m g r o u p 1 i n q u e s t i o n a b l e f e r m e n t a t i o n s o f
i n o s i t o l a n d r h a m n o s e , a n d i n n o t f e r m e n t i n g
s o r b o s e .
On l y d a t a f o r g r o u p 1 ( 4 5 s t r a i n s ) o f L. c a s e i
v a r . r h a m n o s u s a r e s h o w n i n t a b l e 2 . Gr o u p 2
( 2 s t r a i n s ) w a s d i f f e r e n t f r o m g r o u p 1 i n f e r -
m e n t i n g d u l c i t o l , s l o w l y f e r m e n t i n g i n u l i n , a n d
n o t f e r m e n t i n g s o r b o s e . Gr o u p 3 ( 8 s t r a i n s ) a l s o
f e r m e n t e d d u l c i t o l , d i d n o t f e r m e n t s o r b o s e , a n d
w a s w e a k a n d v a r i a b l e i n h i p p u r a t e .
Si x o f 1 9 6 s t r a i n s o f L. c a s e i , o r i g i n a l l y f e r -
m e n t i n g i n u l i n , w e r e u n a b l e t o d o s o o n f u r t h e r
t e s t i n g , a n d 2 s t r a i n s , o r i g i n a l l y n e g a t i v e i n
s u c r o s e , a c q u i r e d a s l o w f e r m e n t a t i o n . Ho w e v e r ,
a s l o w , a d a p t i v e f e r m e n t a t i o n o f s u c r o s e b y
L. c a s e i v a r . r h a m n o s u s c h a r a c t e r i s t i c a l l y i s n o t
u n c o m m o n .
Th e g r e a t m a j o r i t y o f t h e v a r i a t i o n s w i t h i n t h e
v a r i e t i e s o f L. c a s e i w a s i n t h e c a s e s o f s u b s t a n c e s
w h i c h w e r e a t t a c k e d e i t h e r w e a k l y o r n o t a t a l l .
Di s t i n g u i s h i n g c h a r a c t e r i s t i c s o f L. a c i d o p h i l u s
a n d L. c a s e i . In t h e e x p e r i e n c e o f t h e a u t h o r s
w i t h a b o u t 1 ,0 0 0 s t r a i n s o f L. c a s e i a n d 2 0 0 o f
L. a c i d o p h i l u s , L. c a s e i h a s a l w a y s f e r m e n t e d ,
a n d L. a c i d o p h i l u s h a s n e v e r f e r m e n t e d , m a n n i t o l .
Th i s f i n d i n g f o r L. a c i d o p h i l u s a g r e e s w i t h Or l a -
Je n s e n , Or l a - Je n s e n , a n d Wi n t h e r ( 1 9 3 6 ) ,
Ha r r i s o n a n d Ha n s e n ( 1 9 5 0 c ) , a n d Ti t t s l e r ,
Ge i b , a n d Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) ; a n d t h e o b s e r v a t i o n f o r
L. c a s e i i s i n a g r e e m e n t w i t h Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 ,
1 9 4 3 ) . A s t r a i n o f L. a c i d o p h i l u s h a s n o t b e e n
e n c o u n t e r e d y e t w h i c h i s c a p a b l e o f h y d r o l y z i n g
s o d i u m h i p p u r a t e . In c o n t r a s t , 9 8 p e r c e n t o f a l l
s t r a i n s o f L. c a s e i t e s t e d h y d r o l y z e d s o d i u m
h i p p u r a t e r e a d i l y . Al l s t r a i n s o f L. c a s e i f e r -
m e n t e d a - m e t h y l - D- g l u c o s i d e s l o w l y , w h e r e a s n o
s t r a i n o f L. a c i d p h i l u s f e r m e n t e d t h i s s u b s t r a t e .
Th e s e 2 s p e c i e s d i f f e r e d f u n d a m e n t a l l y i n t h e
p r o d u c t i o n o f l a c t i c a c i d . In r e p e a t e d t e s t s a l l
s t r a i n s o f L. a c i d o p h i l u s a c c u m u l a t e d p r i m a r i l y
o p t i c a l l v i n a c t i v e l a c t i c a c i d , a n d n o s t r a i n o f
L. c a s e i d i d t h i s . No s t r a i n o f L. a c i d o p h i l u s
c o u l d g r o w a t 2 0 t o 2 2 C. Th i s o b s e r v a t i o n
a g a i n a g r e e s w i t h We i n s t e i n , An d e r s o n , a n d
Re t t g e r ( 1 9 3 3 ) , Or l a - Je n s e n ( 1 9 4 3 ) , a n d Or l a -
Je n s e n , Or l a - Je n s e n , a n d Wi n t h e r ( 1 9 3 6 ) . In d e e d ,
TABLE 3
Nu t r i t i o n a l p a t t e r n s o f t h e l a c t o b a c i l l i
HOMOFERMEN- HETEROFER-
TATIVE MENTATIVE
1 2 3 4 5 6 7 8
Co m p l e t e . . . . . . . + + + + 4 +
Ni a c i n . . . . . . . . . - _
Th i a m i n . . . . . . . . . . - +
+ + + +
_
Pa n t o t h e n a t e . . . . . . . . . . . . -
- .
Ri b o f l a v i n . . . . . . . . - - - + -
- + +
-
Vi t a m i n
B6 . . . . . . . . F 4 - + + + + + 4
Fo l i c a c i d . . . . . . . - - + - _i -
Vi t a m i n B1 2 . . . . . . . +
-
+ + + + _4 _
1 . + e q u a l s g r o w t h i n t h e a b s e n c e o f a d d e d
s u b s t r a t e .
2 . : i e q u a l s s i g n i f i c a n t l i m i t a t i o n o f g r o w t h i n
a b s e n c e o f a d d e d s u b s t r a t e .
3 . F e q u a l s s e v e r e l i m i t a t i o n o f g r o w t h i n
a b s e n c e o f a d d e d s u b s t r a t e .
4 . In t h e a b s e n c e o f v i t a m i n B1 2 b u t i n t h e
p r e s e n c e o f d e s o x y r i b o s i d e s La c t o b a c i l l u s a c i d o p h -
i l u s e x h i b i t s g r o w t h .
a l l s t r a i n s o f L. c a s e i g r e w
a t 1 0 C a n d a
g r e a t
n u m b e r a t 6 C. Th e t w o s p e c i e s
a l s o d i f f e r e d
f u n d a m e n t a l l y
i n t h e i r n u t r i t i o n a l b e h a v i o r ,
a s
c a n b e s e e n i n t a b l e 3 .
Fi n a l l y ,
w e w i s h t o
r e p e a t
t h a t t h e m o d a l c o l o n i a l
t y p e s
w e r e
e n t i r e l y
d i f f e r e n t .
La c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m . Am o n g
t h e h o m o -
f e r m e n t a t i v e t y p e s
t h e r e w e r e 1 6 s t r a i n s w h i c h
s e e m e d t o b e r e l a t e d t o L.
p l a n t a r u m .
Th e s e
i s o l a t e s r e s e m b l e o r g a n i s m s p r e v i o u s l y
s t u d i e d i n
o t h e r i n v e s t i g a t i o n s b y Ti t t s l e r , Ge i b ,
a n d
Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) , Ro g o s a , Ti t t s l e r ,
a n d Ge i b
( 1 9 4 7 ) , Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 , 1 9 4 3 ) ,
Ha r r i s o n a n d
Ha n s e n ( 1 9 5 0 b ,c ) ,
a n d Pe d e r s o n
( 1 9 2 9 b , 1 9 3 6 ) .
Th e r e h a s b e e n s o m e l a c k o f
c l a r i t y
i n t h e
6 8 9 1 9 5 3 ]

o
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MORRISON ROGOSA ET AL.
d e f i n i t i o n o f L. p l a n t a r u m . Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 ) h a s
d e f i n e d a g r o u p w h i c h p r o d u c e s p r i m a r i l y
i n a c t i v e l a c t i c a c i d a n d " . . . p r e f e r s a s a r u l e
m a l t o s e a n d c a n e s u g a r t o l a c t o s e . . . " Th e
l a t t e r c o n d i t i o n , h o w e v e r , s e e m s a s o m e w h a t
t e n u o u s b a s i s f o r t h e d e f i n i t i o n o f a s p e c i e s . In
s u m m a r i z i n g h i s o w n f u r t h e r s t u d i e s Or l a - Je n s e n
( 1 9 4 3 ) h a s d e l i n e a t e d t h e s p e c i e s m o r e c l e a r l y . It
w a s f o u n d , f o r i n s t a n c e , t h a t a l l s t r a i n s o f L.
p l a n t a r u m n f e r m e n t e d m e l i b i o s e . Th u s , t h e y
TABLE 4
La c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m g r o u p
GROUP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
No . s t r a i n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Ar a b i n o s e . . . . . . . . . . . . .
Me l e z i t o s e . . . . . . . . . . . .
Me l i b i o s e . . . . . . . . . . . . .
Ra f f i n o s e . . . . . . . . . . . . . .
Rh a m n o s e . . . . . . . . . . . .
Hi p p u r a t e . . . . . . . . . . . .
Gl u c o s e . . . . . . . . . . . . . . .
a - Me t h y l - D- g l u c o s i d e . .
a - Me t h y l - D- m a n n o -
s i d e . . . . . . . . . . . . . . . . .
Es c u l i n . . . . . . . . . . . . . . .
Ba s a l . . . . . . . . . . . . . . . . .
Nu t r i t i o n a l p a t t e r n * .
La c t a t e . . . . . . . . . . . . . . .
Co l o n y . . . . . . . . . . . . . . . .
Ac i d i t y m i l k - %. . . . . .
Gr o w t h 4 5 C. . . . . . . . . .
Gr o w t h 1 6 C. . . . . . . . . .
4 . 2 + '
5 . 6 -
4 . 2 + '
4 . 2 + '
5 . 3 T
4 . 1 + 1
4 . 1 + 7
5 . 7 -
5 . 7 -
3
I
S
0 . 5 0
2
6
4 . 2 + 2
4 . 0 + '
4 . 0 + 1
4 . 1 + 1
5 . 4 T
+
4 . 1 + '
5 . 4 -
4 . 4 + 2
+
5 . 7 -
4
I
S
0 . 5 0
3
5
5 . 5 -
4 . 0 + 1
4 . 1 + '
4 . 3 + 2
5 . 1 +
+
4 . 1 + '
4 . 7
" I
4 . 1 + 3
5 . 7 -
3
I
S
0 . 5 0
*
Re f e r s t o n u t r i t i o n a l d a t a o f t a b l e 3 .
Al l s t r a i n s f e r m e n t l a c t o s e , m a n n i t o l , m a n n o s e ,
s u c r o s e , t r e h a l o s e , s a l i c i n , c e l l o b i o s e , g a l a c t o s e ,
m a l t o s e , s o r b i t o l , a n d l e v u l o s e . No n e f e r m e n t s
a d o n i t o l , d u l c i t o l , i n o s i t o l , g l y c e r o l , i i l u l i n , a n d
x y l o s e . On e s t r a i n v a r i a b l e i n s o r b o s e .
=
n e g a t i v e o r w e a k .
i
=s l o w .
c o u l d b e d i f f e r e n t i a t e d i n t h i s r e s p e c t ( a s w e l l
a s i n o t h e r s ) f r o m L. c a s e i , w h o s e s t r a i n s d i d n o t
f e r m e n t m e l i b i o s e . Ne i t h e r c o u l d t h e l a t t e r b e s o
a d a p t e d . Ne v e r t h e l e s s , t h e d a t a p r e s e n t e d b y
Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 , 1 9 4 3 ) f o r L. p l a n t a r u m i s
c l e a r l y f o r a g r o u p o f v a r i e t i e s w i t h i n a s p e c i e s i f
n o t f o r d i f f e r e n t s p e c i e s .
Th e s u m m a r y o f t y p i c a l d a t a o b t a i n e d f o r t h e
L. p l a n t a r u m g r o u p i n t h i s s t u d y i s p r e s e n t e d i n
t a b l e 4 . Th r e e s u b - g r o u p s w e r e f o u n d . In c n n -
f i r m a t i o n o f Or l a - Je n s e n ( 1 9 4 3 ) , Ti t t s l e r , Ge i b ,
a n d Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) , a n d Ha r r i s o n a n d Ha n s e n
( 1 9 5 0 c ) , a l l t h e s t r a i n s f e r m e n t e d m e l i b i o s e
r e a d i l y . Pr e v i o u s l y , Ro g o s a , Ti t t s l e r , a n d Ge i b
( 1 9 4 7 ) h a d i d e n t i f i e d t w o t y p e s , o n e r e q u i r i n g
r i b o f l a v i n f o r g r o w t h a n d o n e n o t r e q u i r i n g i t .
Th e s a m e d i v i s i o n o f t y p e s w a s f o u n d i n t h e
p r e s e n t s t u d y .
Al t h o u g h g r o u p s 1 a n d 3 a r e a l i k e n u t r i t i o n a l l y
i n r e q u i r i n g r i b o f l a v i n f o r g r o w t h , t h e y a r e
d i f f e r e n t f r o m e a c h o t h e r i n f o u r m a j o r r e s p e c t s .
Gr o u p 3 h y d r o l y z e s h i p p u r a t e , f e r m e n t s
a - m e t h y l - D- g l u c o s i d e a n d m e l e z i t o s e , a n d d o e s
n o t f e r m e n t a r a b i n o s e , w h e r e a s g r o u p 1 b e h a v e s
o p p o s i t e l y . Gr o u p s 1 a n d 3 a r e i d e n t i c a l w i t h
v a r i e t i e s p r e v i o u s l y s t u d i e d a s L. p l a n t a r u m s y n .
St r e p t o b a c t e r i u m p l a n t a r u m b y Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 ]9 )
a n d o t h e r s .
Or l a - Je n s e n ( 1 9 4 3 ) s t a t e d t h a t St r e p t o b a c t e r i u m
p l a n t a r u m g r e w w e l l i n t h e a b s e n c e o f r i b o f l a v i n .
Th i s c o n c l u s i o n i s b a s e d o n w o r k d o n e b e f o r e
1 9 3 6 . Th e a u t h o r s h a v e t e s t e d s o m e o f Or l a -
Je n s e n ' s s t r a i n s a n d h a v e f o u n d t h a t t h e y d o
r e q u i r e r i b o f l a v i n f o r g o o d g r o w t h i n a d e q u a t e l y
c o n t r o l l e d t e s t s . Ha r r i s o n a n d Ha n s e n ( 1 9 5 0 c )
a g r e e w i t h t h e p r e s e n t a u t h o r s t h a t L. p l a n t a r u m
d o e s n o t g r o w i n a n a p p r o p r i a t e m e d i u m u n l e s s
r i b o f l a v i n i s a d d e d . Th e r e i s n o r e a s o n a b l e d o u b t
t h a t t h e l i m i t a t i o n s o f Or l a - Je n s e n ' s e a r l y
t e c h n i q u e l e d h i m t o a n e r r o n e o u s c o n c l u s i o n .
Gr o u p 2 i s d i s t i n c t l y d i f f e r e n t f r o m t h e o t h e r
g r o u p s o f L. p l a n t a r u m i n g r o w i n g w e l l i n t h e
a b s e n c e o f r i b o f l a v i n a n d h y d r o l y z i n g e s c u l i n . In
a d d i t i o n , i t i s d i f f e r e n t f r o m g r o u p 1 i n h y -
d r o l y z i n g h i p p u r a t e , f e r m e n t i n g a - m e t h y l - D-
m a n n o s i d e s t r o n g l y , a n d i n f e r m e n t i n g m e l e z i t o s e .
Al s o , i t i s d i f f e r e n t f r o m g r o u p 3 i n f e r m e n t i n g
r a f f i n o s e o n p r i m a r y i s o l a t i o n a n d i n f e r m e n t i n g
a r a b i n o s e . Th u s , t h e s t r a i n s i n g r o u p 2 d i f f e r
n u t r i t i o n a l l v a n d i n 4 o t h e r r e s p e c t s f r o m t h o s e
i n g r o u p 1 . Th e y a l s o d i f f e r n u t r i t i o n a l l y a n d i n 2
o t h e r m a j o o r c h a r a c t e r s f r o m t h o s e i n g r o u p 3 .
Th e g r o u p 2 s t r a i n s a r e i d e n t i c a l w i t h s t r a i n s
d e s i g n a t e d a s La c t o b a c i l l u s a r a b i n o s u s b y Fr e d ,
Pe t e r s o n , a n d An d e r s o n ( 1 9 2 1 ) a n d a l s o s t u d i e d
b y Ti t t s l e r , Ge i b , a n d Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) . Or l a n d
( 1 9 5 0 ) h a s d i s c o v e r e d a n e w m a j o r a n t i g e n ( G)
i n L. a r a b i n o s u s . In t h e j u d g m e n t o f t h e p r e s e n t
a u t h o r s L. a r a b i n o s u s Fi e d e t a l . i s a d i s t i n c t
s p e c i e s .
Th e a n t i g e n i c s t r u c t u r e o f g r o u p s 1 a n d 3 ,
L. p l a n t a r u m , i s n o t y e t k n o w n , b u t i t i s p r o b a b l e
6 9 0 [ VOL. 6 5

o
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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
t h a t s p e c i f i c a n t i g e n i c i t y m a y e x i s t f o r e a c h
g r o u p .
La c t o b a c i l l u s 8 a l w a r i u s n o v . s p . Th e f i n a l
h o m o f e r m e n t a t i v e g r o u p s e e m s t o u s u n -
q u e s t i o n a b l y a h i t h e r t o u n d e s c r i b e d s p e c i e s , a n d
w e d e s i g n a t e i t a s La c t o b a c i l l u s a l i w a r i u s .
Ob v i o u s l y , t h i s s p e c i e s i s a g r a m p o s i t i v e , n o n -
s p o r e f o r m i n g , n i t r a t e n e g a t i v e r o d , p r o d u c i n g
m a i n l y l a c t i c a c i d f r o m t h e f e r m e n t a t i o n o f
a v a i l a b l e h e x o s e s . Al t h o u g h c h i e f l y i n a c t i v e l a c t i c
a c i d i s p r o d u c e d b y t h e m a j o r i t y , s o m e s t r a i n s
p r o d u c e c o n s i d e r a b l e q u a n t i t i e s o f a r o t a t o r y
l a c t i c a c i d . Gr o w t h i s g o o d a t 3 7 C.
Tw o v a r i e t i e s a r e r e c o g n i z e d . Th e f i r s t i s
d e s i g n a t e d a s La c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s v a r .
s a l i v a r i u s . It p r o d u c e s s i g n i f i c a n t a c i d i t y i n
g l u c o s e , l e v u l o s e , m e l i b i o s e , t r e h a l o s e , l a c t o s e ,
m a n n i t o l , m a n n o s e , r a f f i n o s e , s u c r o s e , g a l a c t o s e ,
m a l t o s e , r h a m n o s e , a n d s o r b i t o l . It d o e s n o t
f e r m e n t a r a b i n o s e , x y l o s e , c e l l o b i o s e , m e l e z i t o s e ,
a - m e t h y l - D- g l u c o s i d e , a - m e t h y l - D- m a n n o s i d e , s a l -
i c i n , g l y c e r o l , a n d s o r b o s e . Es c u l i n a n d h i p -
p u r a t e a r e n o t h y d r o l y z e d .
Th e s e c o n d v a r i e t y w e n a m e La c t o b a c i l l u s
8 a l i v a r n u s v a r . s a l i c i n i u s . It d i f f e r s f r o m t h e t y p e
v a r i e t y i n f e r m e n t i n g s a l i c i n a n d n o t f e r m e n t i n g
r h a m n o s e .
Th i s s p e c i e s r e q u i r e s p t e r o y l g l u t a m i c a c i d a n d
n i a c i n f o r g o o d g r o w t h . Ri b o f l a v i n i s m a r k e d l y
s t i m u l a t o r y . Go o d g r o w t h d o e s n o t t a k e p l a c e i n
n u t r i t i o n a l t e s t m e d i a i n t h e a b s e n c e o f p o l y -
o x y e t h y l e n e s o r b i t a n m o n o o l e a t e ( t w e e n 8 0 ) .
El e v e n i s o l a t e s f r o m 8 d i f f e r e n t h u m a n
s u b j e c t s h a v e b e e n s t u d i e d i n d e t a i l . In a d d i t i o n ,
1 0 6 s t r a i n s f r o m 5 7 o r a l s a m p l i n g s o f Cr i c e t u s
a u r a t u s h a v e b e e n i n v e s t i g a t e d e x t e n s i v e l y . Th i s
s p e c i e s i s t h e p r e d o m i n a t i n g h o m o f e r m e n t a t i v e
o r a l l a c t o b a c i l l u s i n t h e h a m s t e r .
Th e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h i s o r g a n i s m w i l l b e
d e s c r i b e d m o r e f u l l y
i n a s u b s e q u e n t p u b l i c a t i o n .
La c t o b a c i l l u s f e m e n i . Th e d a t a f o r 1 4 8 s t r a i n s
d e s c r i b i n g 1 2 v a r i a n t t y p e s o f L. f e r m e n t i a r e
p r e s e n t e d i n t a b l e 5 . Li k e a l l o t h e r h e t e r o -
f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i t e s t e d , t h i s s p e c i e s
p r o d u c e s i n a c t i v e l a c t i c a c i d . Th e m a j o r i t y ( 5 6
p e r c e n t ) d i d n o t f e r m e n t a r a b i n o s e a n d x y l o s e .
Ne a r l y a l l t h e s t r a i n s g r e w w e l l a t 4 5 C f r o m
s m a l l i n o c u l a , a n d a b o u t 9 5 p e r ' c e n t b e h a v e d
i d e n t i c a l l y i n n u t r i t i o n a l t e s t s . Th e s e s t r a i n s
r e q u i r e d n i a c i n , t h i a m i n , a n d p a n t o t h e n a t e b u t
d i d n o t r e q u i r e e x t r i n s i c r i b o f l a v i n , p y r i d o x i n e ,
p y r i d o x a m i n e , o r p y r i d o x a l , p t e r o y l g l u t a m i c
a c i d , a n d v i t a m i n B1 2 f o r g r o w t h . Eq u i v o c a l
n u t r i t i o n a l r e s u l t s w e r e o b t a i n e d w i t h t h e
r e m a i n i n g 5 p e r c e n t e i t h e r b e c a u s e o f i n h i b i t i n g
s u b s t a n c e s i n t h e n u t r i t i o n a l t e s t m e d i u m o r
b e c a u s e t h e y m a y r e a l l y b e d i f f e r e n t .
Gr o u p s 1 a n d 2 a r e e a s i l y r e c o g n i z a b l e a s
i d e n t i c a l w i t h t y p e s d e s i g n a t e d a s Be t a b a c t e r i u m
l o n g u m Or l a - Je n s e n s y n . L. f e r m e n t i Be i j e r i n c k .
Tw e n t y - e i g h t t e s t s w h i c h h a d b e e n c o n d u c t e d o n
t h e 1 2 g r o u p s o f f r e s h l y i s o l a t e d s t r a i n s w e r e
r e p e a t e d n e a r l y t h r e e y e a r s l a t e r . Si x t y - e i g h t o f
8 3 s t r a i n s i n g r o u p 1 , a n d g r o u p s 3 , 5 , 6 , 9 , 1 0 ,
a n d 1 2 , o r 6 6 p e r c e n t o f t h e t o t a l n u m b e r o f
s t r a i n s , w e r e i d e n t i c a l i n a l l c h a r a c t e r s i n b o t h
t e s t s . Th e c h i e f v a r i a t i o n i n r e p e a t e d t e s t i n g
w a s i n t h e f e r m e n t a t i o n o f 1 s u b e t r a t e , n a m e l y ,
m a n n o s e . So m e s t r a i n s g a i n e d a n d s o m e s t r a i n s
l o s t t h e c a p a c i t y t o f e r m e n t i t ; b u t m a n n o s e
w h e n f e r m e n t e d o r i g i n a l l y w a s a t t a c k e d v e r y
s l o w l y a n d w e a k l y . It m a y b e n o t e d f r o m t h e
d a t a t h a t t h e f e r m e n t a t i o n o f m a n n o s e b y
L. f e r m e n t i i n t h e m o r e r e c e n t t e s t s a l s o w a s
d e l a y e d . El e v e n s t r a i n s i n g r o u p 4 a n d 4 s t r a i n s
i n g r o u p 1 1 , o r i g i n a l l y n e g a t i v e i n l a c t o s e ,
a d a p t e d t o t h i s f e r m e n t a t i o n . Th e 2 6 r e m a i n i n g
f e r m e n t a t i v e c h a r a c t e r s o f g r o u p s 4 a n d 1 1 ,
h o w e v e r , w e r e t h e s a m e i n b o t h t e s t s . Th e 3
m e l i b i o s e l e s s a n d r a f f i n o s e l e s s s t r a i n s o f g r o u p 9
m a y b e c o n s i d e r e d a s p r o b a b l e m u t a n t s s i n c e
o t h e r w i s e t h e y w e r e r e p e a t e d l y i d e n t i c a l w i t h
t h e t y p i c a l s t r a i n s o f g r o u p 1 .
So m e v a r i a n t s h a v e b e e n i n c l u d e d i n t h i s
s p e c i e s w h i c h f e r m e n t e i t h e r a r a b i n o s e o r x y l o s e .
La t e r , i t w i l l b e s e e n t h a t c e r t a i n o t h e r s p e c i e s ,
p a r t i c u l a r l y La c t a c i l l u s b u c h n e r i a n d La c t o -
b a c i l l u s b r e v i s , a r e c h a r a c t e r i z e d b y t h e i r a b i l i t y
t o f e r m e n t b o t h a r a b i n o s e a n d x y l o s e , o r
a r a b i n o s e o n l y . It s e e m s a p p r o p r i a t e , h o w e v e r , t o
d e f i n e t h e s e s p e c i e s b y w h a t s e e m s t o b e a n a t u r a l
s y s t e m , p e r m i s s i v e o f m i n o r v a r i a t i o n a b o u t a
m o d a l t y p e o f b e h a v i o r . Th e r e m a i n i n g v a r i a t i o n s
f o r L. f e r m e n t i w e r e c h i e f l y i n t h e c o n s i s t e n t
f e r m e n t a t i o n o f t r e h a l o s e b y l e s s t h a n 1 5 p e r
c e n t o f t h e s t r a i n s .
La c t o b a c i l u s b u c h n e r i . Tw e n t y - f i v e s t r a i n s
d e s i g n a t e d a s L. b u c h n e r i w e r e i s o l a t e d f r o m 1 3
i n d i v i d u a l s . In a d d i t i o n t o t h e s e 2 5 o r a l i s o l a t e s ,
6 5 s t r a i n s f r o m o t h e r s o u r c e s w e r e s t u d i e d . Th e
l a t t e r g r o u p w a s i d e n t i c a l w i t h L. b u c h n e r i
f r o m o r a l s o u r c e s . Th e c h a r a c t e r i s t i c s o f v a r i a n t
g r o u p s o f L. b u c h n e r i a r e s h o w n i n t a b l e 6 .
A d e f i n i t i o n o f L. b u c h n e r i i s m o s t d i f f i c u l t
6 9 1 j
1 9 5 3 ]

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MORRISON ROGOSA ET AL.
s i n c e t h e o r i g i n a l i n c o m p l e t e d e s c r i p t i o n w a s c o n s i s t e n t l y . Th i s i s a u n i q u e p r o p e r t y f o r
b a s e d o n o n e s t r a i n w h i c h i s n o t a v a i l a b l e f o r h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i w i t h i n t h e s c o p e
s t u d y . Ho w e v e r , t h i s s p e c i e s i s d e f i n e d b y o f t h e p r e s e n t i n v e s t i g a t o r s ' e x p e r i e n c e o r t h e
Be r g e y ( Br e e d e t a l . , 1 9 4 8 ) a s s y n o n y m o u s w i t h p r e v i o u s l i t e r a t u r e .
Ba c t e r i u m m a n n i t o p o e u m , La c t o b a c i l l u s m a n n i t o - Al t h o u g h Pe d e r s o n ' s s t r a i n s f e r m e n t e d b o t h
p o e u m , o r La c t o b a c i l l u s m a n n i t o p o e u s . Co m - a r a b i n o s e a n d x y l o s e , o n l y 1 4 p e r c e n t o f t h e
p a r i s o n s w e r e m a d e w i t h s t r a i n s s t u d i e d b y p r e s e n t s t r a i n s f e r m e n t e d b o t h t h e s e s u b s t r a t e s
Pe d e r s o n ( 1 9 2 9 a ,b , 1 9 3 0 ) a n d i s o l a t i o n s f r o m a n d w e r e i d e n t i c a l w i t h Pe d e r s o n ' s i n a l l r e s p e c t s .
s o u r c e s o t h e r t h a n t h a t f r o m w h i c h t h e 2 5 o r a l Th e r e m a i n i n g 8 6 p e r c e n t f e r m e n t e d a r a b i n o s e
s t r a i n s w e r e o b t a i n e d . In t h e f o r e g o i n g s t u d i e s b u t n o t x y l o s e . Ho w e v e r , o r g a n i s m s f r o m s p o i l e d
TABLE 5
La c t o b a c i l l u s f e r m e n t i a n d v a r i a n t s
GROUP . . . . . . . . . . . 1
No . s t r a i n s. . . . . . . 3
Ar a b i n o s e . . . 5 . 5 -
La c t o s e . . . . . . 4 . 5 + '
Ma n n o s e . . . . 4 . 8 + 1 0
Me l i b i o s e . . . . 4 . 5 + 1
Ra f f i n o s e . . . . 4 . 6 + 1
Tr e h a l o s e . . . . 5 . 5 -
X y l o s e . .
. . 5 . 5 -
Ga l a c t o s e . . . . 4 . 7 + 1
Gl u c o s e . . . . 4 . 5 + 1
a - Me t h y l - D-
g l u c o s i d e . . 5 . 5 -
Ba s a l . . .. . 5 . 7 -
Nu t r i t i o n a l
p a t t e r n * . . . 6
Co l o n y . . . . . . I- S
Ac i d i t y
m i l k - % . . . 0 . 1 5
Gr o w t h 4 5 C0 . +
5 . 8 -
4 . 6 + '
5 . 9 -
4 . 6 + 1
4 . 7 + 1
5 . 9 -
4 . 1 + 1
4 . 9 + 1
4 . 6 + 1
4 . 6 + 2
4 . 6 + 1
5 . 1 : 4 1 1 1
4 . 8 + 1
4 . 7 + 1
5 . 9 -
5 . 7 -
5 . 0 + 1
4 . 7 + 1
4 . 3 + 2
5 . 2 4 - 1 0
5 . 1 : 4 1 0
4 . 6 + '
4 . 7 + 1
4 . 7 + 1
5 . 8 -
4 . 8 +
2
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1 0 5 . 3 4 - 1 4 5 . 7 -
5 . 9 - 6 . 0 - 5 . 9 -
6
I- S
6
I- S
0 . 2 0 0 . 2 3
6
I- S
0 . 0 3
+
5 . 6 -
4 . 6 + 2
4 . 9 + 7
4 . 9 + '
5 . 0 + 2
5 . 1 & ; 4
5 . 6 -
5 . 2 4 - 1 0
4 . 5 + 1
5 . 8 -
5 . 8 -
6
I- S
0 . 2 8
4 . 1 + 1
4 . 5 + '
4 . 6 + 1 0
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1
5 . 8 -
4 . 1 + 1
4 . 8 + '
4 . 6 + 1
4 . 6 + 7
5 . 8 -
6
I- S
0 . 1 0
+
5 . 8 -
4 . 6 + 7
5 . 7 -
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1
4 . 1 + 3
4 . 7 +
4
4 . 5 + 1
4 . 5 + 1 1
5 . 8 -
6
I- S
0 . 0 7
+
5 . 7 -
4 . 6 + 7
4 . 7 + 1 4
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1
4 . 6 + 1
4 . 2 + '
4 . 8 6 + 4
4 . 6 + 1
5 . 5 -
4 . 5 + 1
4 . 6 + 1 0
5 . 8 -
5 . 4 -
5 . 6 -
5 . 6 -
4 . 8 + 1
4 . 6 + 1
4 . 1 + 1
4 . 6 + 4
4 . 6 + 1
4 . 6 + 4
4 . 6 + 1
4 . 2 + 1
4 . 8 + 1
4 . 6 + 1
5 . 8 -
4 . 9 + '
6 . 0 -
4 . 9 + 5
4 . 9 + '
5 . 9 -
5 . 6 -
5 . 1 + '
5 . 1 + '
4 . 5 + 1 1 5 . 3 4 t 1 4 4 . 6 + " 1 5 . 9 -
5 . 9 - 5 . 8 - 5 . 9 - 6 . 1 -
6
I- S
0 . 0 6
+
6
I- S
0 . 1 8
+
6
I- S
0 . 2 7
+
I- S
0 . 0 6
+ 1
+ 1
+ 2
+ 1 I
+ 1
+ 1
I- S
0 . 0 3
4 i
*
Re f e r s t o n u t r i t i o n a l d a t a o f t a b l e 3 .
Al l s t r a i n s f e r m e n t s u c r o s e , l e v u l o s e , a n d m a l t o s e . No n e f e r m e n t s m a n n i t o l , m e l e z i t o s e , s a l i c i n ,
a d o n i t o l , c e l l o b i o s e , d u l c i t o l , i n o s i t o l , i n u l i n , r h a m n o s e , s o r b i t o l , s o r b o s e , g l y c e r o l , a n d a - m e t h y l - D
m a n n o s i d e . No n e h y d r o l y z e s h i p p u r a t e a n d e s c u l i n . No n e g r o w s a t 1 6 C. Al l s t r a i n s p r o d u c e i n a c t i v e
l a c t i c a c i d .
=w e a k , i n c o m p l e t e , o r q u e s t i o n a b l e r e a c t i o n s .
Pe d e r s o n t h o r o u g h l y i n v e s t i g a t e d a g r o u p o f
h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i o b t a i n e d f r o m
s p o i l e d t o m a t o p r o d u c t s a n d s a u e r k r a u t w h i c h h e
d e s i g n a t e d a s L. m a n n i t o p o e u m o r L. b u c h n e r i . Of
a l l t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i o n l y L.
m a n n i t o p o e u m s y n . L. b u c h n e r i f e r m e n t e d
m e l e z i t o s e . Th i s i s c l e a r f r o m Pe d e r s o n ' s d a t a
a l t h o u g h h e o m i t t e d t o s t r e s s t h i s f e r m e n t a t i o n
a s a d i s t i n c t i v e c h a r a c t e r i s t i c f o r t h e d i f f e r e n t i a -
t i o n o f L. b u c h n e r i ( 1 9 3 8 ) . Al l 9 0 s t r a i n s o f t a b l e
6 w e r e t e s t e d r e p e a t e d l y d u r i n g a t h r e e y e a r
p e r i o d a n d w e r e f o u n d t o f e r m e n t m e l e z i t o s e
t o m a t o p r o d u c t s o r c e r t a i n n a t u r a l f e r m e n t a t i o n s
e a s i l y m a y h a v e b e e n s u b j e c t e d t o t h e n a t u r a l
p r e s u r e s o f c o m p e t i t i o n a n d s e l e c t i o n s o t h a t a
s i n g l e t y p e o n l y m a y h a v e b e e n i s o l a t e d . Ev e n
Pe d e r s o n ' s s t r a i n s f o r m e d o n l y a p p r o x i m a t e l y
h a l f a s m u c h m e a n a c i d i t y i n x y l o s e a s c o m p a r e d
t o a r a b i n o s e .
It m a y b e n o t e d i n t a b l e 6 t h a t a l t h o u g h t h e
g r e a t m a j o r i t y o f t h e s t r a i n s w a s u n a b l e t o
h y d r o l y z e h i p p u r a t e , v a r i a b l e r e s u l t s a r e r e p o r t e d
f o r t h i s c h a r a c t e r a s w e l l a s t h e i r b e h a v i o r i n
n u t r i t i o n a l t e s t s . A f e w s t r a i n s d i d n o t g r o w w e l l
2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
1 5 1 1 1 1 2 7 4 2 3 2 4 4
[ VOL.
6 5
6 9 2

o
n

S
e
p
t
e
m
b
e
r

7
,

2
0
1
3

b
y

g
u
e
s
t
h
t
t
p
:
/
/
j
b
.
a
s
m
.
o
r
g
/
D
o
w
n
l
o
a
d
e
d

f
r
o
m

SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
i n t h e m e d i u m u s e d i n t h e n u t r i t i o n a l s t u d i e s , b u t
i n a l l c a s e s e x t r a n e o u s p t e r o y l g l u t a m i c a c i d w a s
n o t r e q u i r e d f o r g r o w t h w h e n t h e g r o w t h w a s
g o o d a n d u n e q u i v o c a l i n t h e c o n t r o l c o m p l e t e
m e d i u m . Th e r e i s l i t t l e d o u b t f r o m c o n t i n u i n g
w o r k i n t h i s l a b o r a t o r y t h a t t h e v a r i a n t s o f
L. b u c h n e r i a r e i n r e a l i t y f u n d a m e n t a l l y i d e n t i c a l
i n t h e i r n u t r i t i o n a l b e h a v i o r a n d t h a t s e n s i t i v i t y
t o i n h i b i t o r y s u b s t a n c e s i n t h e n u t r i t i o n a l t e s t
f e r m e n t e d o r c o u l d b e a d a p t e d t o f e r m e n t
m e l e z i t o s e . If g r o u p 4 i s e x c e p t e d , a l l t h e s t r a i n s
f e r m e n t e d a r a b i n o s e a n d x y l o s e r e a d i l y . No n e o f
o u r s t r a i n s f e r m e n t e d m a n n o s e . Th i s s p e c i e s m a y
f e r m e n t l a c t o s e , r a f f i n o s e , s u c r o s e , a n d m a n n i t o l
s l o w l y a n d w e a k l y . Oc c a s i o n a l l y , s o m e s t r a i n s
m a y f a i l t o f e r m e n t e v e n o n e o r m o r e o f t h e s e
s u b s t r a t e s . Al l t h e s t r a i n s h y d r o l y z e d h i p p u r a t e
r e a d i l y a n d r e q u i r e d p t e r o y l g l u t a m i c a c i d . Th e y
TABLE 6
La c t o b a c i l l u s b u c h n e r i a n d v a r i a n t s
GROU' P . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 3 4 5 6 7
No . s t r a m i n s . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 3 4 8 1 5 2 8 3
Ar a b i n o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 1 + 1 4 . 2 + 1 4 . 3 + 1 4 . 2 + 1 4 . 2 + 1 4 . 3 + 1 4 . 2 + 1
La c t o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 5 + 2 4 . 7 + 3 4 . 6 + 9 4 . 7 + 3 5 . 3 4 5 . 3 1 0 4 . 6 + 1 0
Ma n n i t o l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 . 3 X 1 4 5 . 4 t 1 4 5 . 8 - 5 . 4 4 1 4 5 . 8 - 5 . 2 - 1 0 5 . 1 '
1 4
Me l e z i t o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + 2 4 . 6 +
2
4 . 7 + 2 4 . 7 + 2 4 . 6 + 2 4 . 7 + 2 4 . 6 + 6
Me l i b i o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + 5 4 . 7 + 2 4 . 7 + ' 4 . 7 + 2 4 . 6 + 4 4 . 7 + 2 4 . 6 + 5
Ra f f i n o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + ' 2 4 . 7 + 3 4 . 7 + 7 4 . 7 + 4 4 . 6 + 6 4 . 7 + 6 4 . 7 + 1 0
Su c r o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + 2 4 . 6 + 1 4 . 8 + 2 4 . 7 + 2 4 . 9 + 6 4 . 7 + 4 4 . 6 + '
X y l o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 . 7 - 5 . 7 - 5 . 8 - 5 . 7 - 4 . 2 + 2 4 . 2 + 2 4 . 2 + 1
Ga l a c t o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 8 + 2 4 . 9 + ' 4 . 9 + 2 4 . 9 + 2 4 . 8 + ' 4 . 9 + 4 4 . 8 + 9
Hi p p u r a t e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . _ T + 4 + + +
Gl u c o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + 2 4 . 7 + 2 4 . 7 + 2 4 . 7 + 2 4 . 6 + 2 4 . 7 + 2 4 . 6 + 6
Le v u l o s e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 . 8 + ' . 4 . 7 + 2 4 . 7 + 4 4 . 7 + 2 5 . 0 + 6 4 . 7 + 3 4 . 6 + 7
a - Me t h y l - D- g l u c o s i d e . . . . . . . . . . . . . 4 . 6 + 1 0 4 . 7 + 7 4 . 6 + 1 0 4 . 7 + 1 0 4 . 6 +
4
4 . 7 + B 4 . 6 + 1 0
Es c u l i n . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
- - - - - -
+
Ba s a l . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 . 9 - 5 . 9 - 5 . 9 - 5 . 9 - 5 . 9 - 5 . 9 - 5 . 9 -
Nu t r i t i o n a l p a t t e r n * . . . . . . . . . . . . . 6 ,8 6 ,8 6 ,8 6 ,8 6 ,8 6 ,8 6 ,8
Co l o n y
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I- R I- R I- R I- R I- R I- R I- R
Ac i d i t y m i l k - % . . . . . . . . . . . . . . . . . 0 . 0 7 0 . 1 0 0 . 0 1 0 . 0 7 0 . 0 4 0 . 0 3 0 . 2 4
Gr o w t h 4 5 C . .T
- - - -
_4 _
+
Gr o w t h 1 6 C. . . . .. . . . -
-
*
Re f e r s t o n u t r i t i o n a l d a t a o f t a b l e 3 .
No n e f e r m e n t s m a n n o s e , t r e h a l o s e , s a l i c i n , a d o n i t o l , c e l l o b i o s e , d u l c i t o l , i n o s i t o l , i n u l i n , r h a m n o s e ,
s o r b i t o l , s o r b o s e , g l y c e r o l , a n d a - m e t h y l - D- m a n n o s i d e . Al l s t r a i n s f e r m e n t m a l t o s e .
Al l s t r a i n s p r o d u c e i n a c t i v e l a c t i c a c i d .
d
e q u a l s i n c o m p l e t e a n d s l o w r e a c t i o n s i n f e r m e n t a t i o n t e s t s .
Fo r h i p p u r a t e d a t a o n l y
F d e n o t e s m o s t s t r a i n s n e g a t i v e a n d d e q u a l s m o s t s t r a i n s p o s i t i v e .
m e d i u m p r o b a b l y r e s u l t e d i n t h e p o o r g r o w t h o f
a s m a l l m i n o r i t y o f t h e c u l t u r e s .
Ex c e p t f o r o n e s t r a i n , o r i g i n a l l y n e g a t i v e i n
l a c t o s e b u t l a t e r a d a p t i n g t o t h i s f e r m e n t a t i o n ,
u n v a r y i n g r e s u l t s w e r e o b t a i n e d f o r a l l s t r a i n s i n
a l l c h a r a c t e r i s t i c s i n r e p e a t e d t e s t s .
La c t o b a c i l l u s b r e v i s . Th i r t y - o n e s t r a i n s w h i c h
w e r e d e s i g n a t e d a s L. b r e v i s w e r e i s o l a t e d i n t h i s
o r a l s a m p l i n g f r o m 2 2 i n d i v i d u a l s . Th e d a t a a r e
p r e s e n t e d i n t a b l e 7 . Fo u r v a r i a n t g r o u p s a r e
i n c l u d e d , b u t i t i s c o n c e d e d t h a t g r o u p 4 m a y b e
d i f f e r e n t f r o m L. b r e v i s . No n e o f t h e s t r a i n s
a l s o h y d r o l y z e d e s c u l i n s t r o n g l y i n t h e g r e a t
m a j o r i t y o f c a s e s a n d t o s o m e e x t e n t i n a l l
c a s e s . Pe d e r s o n ( 1 9 2 9 a ,b , 1 9 3 0 ) h a s s t u d i e d
t h o r o u g h l y a n u m b e r o f s t r a i n s w h i c h h e
d e s i g n a t e d a s L. b r e v i s a n d w h i c h s e e m t o b e
i d e n t i c a l w i t h Be t a b a c t e r i u m b r e v e Or l a - Je n s e n .
So m e o f t h e s e a v a i l a b l e s t r a i n s w e r e c o m p a r e d
d i r e c t l y w i t h t h e g r o u p s o f o r a l s t r a i n s i n t a b l e 7
a n d w e r e f o u n d t o b e i d e n t i c a l . Th e r e w e r e n o
v a r i a t i o n s o f a n y c h a r a c t e r o f a n y i n d i v i d u a l
s t r a i n o f L. b r e v i s i n r e p e a t e d t e s t s .
La c t o b a c i l l u s c e l l o b i o s u s n o v . s p . Si x s t r a i n s o f a
6 9 3 1 9 5 3 ]

o
n

S
e
p
t
e
m
b
e
r

7
,

2
0
1
3

b
y

g
u
e
s
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h
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p
:
/
/
j
b
.
a
s
m
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g
/
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o
w
n
l
o
a
d
e
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f
r
o
m

MORRISON ROGOSA ET AL.
n e w h e t e r o f e r m e n t a t i v e s p e c i e s w e r e a m o n g t h e
5 0 0 i s o l a t e s . Or g a n i s m s o f t h i s t y p e h a v e b e e n
f o u n d i n s m a l l n u m b e r s i n a n e x t e n d i n g s e r i e s o f
o r a l s a m p l e s o f w i d e g e o g r a p h i c d i s t r i b u t i o n .
Th e c o l o n i a l m o r p h o l o g y , f e r m e n t a t i v e a n d o t h e r
c h a r a c t e r i s t i c s a r e d i s t i n c t i v e f r o m a n y h i t h e r t o
d e s c r i b e d h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l u s .
Th e r e f o r e , w e d o n o t h e s i t a t e t o d e s c r i b e i t a s a
TABLE 7
La c t o b a c i l l u s b r e v i s a n d v a r i a n t s
GROUP . . . . . . . . . . . . . . . . .
No . s t r a i n s . . . . . . . . . . . . .
Ar a b i n o s e . . . . . . . .
La c t o s e . . . . . . . . . . .
Ma n n i t o l . . . . . . . . .
Me l i b i o s e . . . . . . . . .
Ra f f i n o s e . . . . . . . . .
Su c r o s e . . . . . . . . .
Sa l i c i n . . . . . . . . . . .
X y l o s e . . . . . . . . . . .
Ga l a c t o s e . . . . . . . . .
Ma l t o s e . . . . . . . . . .
Gl u c o s e . . . . . . . . . .
a - Me t h y l - D-
g l u c o s i d e . . . . . . .
Ba s a l . . . . . . . . . . . .
Nu t r i t i o n a l
p a t t e r n * . . . . . . . .
Co l o n y . . . . . . . . . . .
Ac i d i t y m i l k - %. .
Gr o w t h 4 5 C.
Gr o w t h 1 6 C.
1
1 9
4 . 2 + 1
5 . 3 - t 1 4
5 . 7 -
4 . 7
+ 4
4 . 8 + 4
4 . 7 + 4
4 . 7 + 1
4 . 9 7 + 7
5 . 9 -
7
R- I
0 . 0 4
2
7
3 4
~ ~ I
4
4 . 2 + 1 4 . 0 + 2 4 . 2 + 2
4 . 5 + 6 5 . 1 4 ' 4 4 . 5 + 2
5 . 3 4 1 4 5 1 4 1 4 4 5 . 0 4 1 4
4 . 6 + 5 1 4 . 5 + 2 4 . 6 + 2
5 . 1 + 6 4 . 5 + 2 5 . 1 4 1 4
4 . 7 + 8 4 . 5 + 2 1 5 . 7 -
5 . 7 - 5 . 8 - 1 5 . 9 -
4 . 3 + 1 4 . 1 + 1 5 . 7 -
4 . 8 + 7 4 . 8 + 2 4 . 9 + 3
4 . 6 + 2 4 . 5 + 1 4 . 6 + 2
4 . 9 + ' 4 . 5 + 2 4 . 6 + 3
4 . 8 + 7 4 . 7 + 7 5 7 -
5 . 8 - 5 . 8 - 6 . 0 -
7 7 8 ?
R- I R- I I
0 . 0 1 1 0 . 0 0 0 . 0 2
I
4
*
Re f e r s t o n u t r i t i o n a l d a t a o f t a b l e 3 .
No n e f e r m e n t s m a n n o s e , m e l e z i t o s e , t r e h a l o s e ,
a d o n i t o l , c e l l o b i o s e , d u l c i t o l , i n o s i t o l , i n u l i n ,
r h a m n o s e , s o r b i t o l , s o r b o s e , g l y c e r o l , a n d a -
m e t h y l - D- m a n n o s i d e .
Al l p r o d u c e i n a c t i v e l a c t i c a c i d a n d h y d r o l y z e
h i p p u r a t e a n d e s c u l i n .
i e q u a l s s l o w a n d w e a k i n f e r m e n t a t i o n d a t a
a n d q u e s t i o n a b l e g r o w t h a t 4 5 C a n d 1 6 C.
n e w s p e c i e s a n d d e s i g n a t e i t a s La c t o b a c i l l u s
c e l l o b i o s u s n o v . s p .
Th i s o r g a n i s m p o s s e s s e s t h e c o m m o n c h a r a c -
t e r i s t i c s o f t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i
a n d t h e r e f o r e p r o d u c e s f r o m t h e f e r m e n t a t i o n o f
a v a i l a b l e c a r b o h y d r a t e s c o n s i d e r a b l e q u a n t i t i e s o f
v o l a t i l e p r o d u c t s , p a r t i c u l a r l y CO2 , i n a d d i t i o n
t o i n a c t i v e l a c t i c a c i d . It f e r m e n t s a r a b i n o s e ,
m e l i b i o s e , r a f f i n o s e , s u c r o s e , t r e h a l o s e , c e l l o b i o s e ,
g a l a c t o s e , m a l t o s e , g l u c o s e , a n d l e v u l o s e .
Al t h o u g h o n e s t r a i n f e r m e n t e d x y l o s e o n l y
s l i g h t l y , t h i s s u b s t r a t e g e n e r a l l y i s f e r m e n t e d
r a t h e r w e l l . Ma n n o s e i s f e r m e n t e d s l o w l y a n d
o f t e n w e a k l y . La c t o s e a n d s a l i c i n a r e f e r m e n t e d
s l o w l y a n d o c c a s i o n a l l y a r e n o t a t t a c k e d .
Ma n n i t o l , m e l e z i t o s e , a d o n i t o l , d u l c i t o l , i n o s i t o l ,
i n u l i n , r h a m n o s e , s o r b i t o l , s o r b o s e , g l y c e r o l ,
c a - m e t h y l - D- g l u c o s i d e , a n d a - m e t h y l - D- m a n n o s i d e
a r e n o t f e r m e n t e d . Es c u l i n i s h y d r o l y z e d b u t
TABLE 8
Fr e q u e n c y d i s t r i b u t i o n o f o r a l l a c t o b a c i l l i
SAMPLES IN
ISOLATES WHIICH SPECIES
SPECIES APPEAR
No .
IPe r
c e n t No . IPe r c e n t
Ho m o f e r m e n t a t i v e
La c t o b a c i l l u s c a s e i . . . . . 1 9 6 3 9 . 2 7 7 5 9 . 2
La c t o b a c i l l u s a c i d o p h -
i l u . 5 5 1 1 . 0 2 8 2 1 . 5
La c t o b a c i l l u s s a l i v a r i u s
n o v . s p
. . 1 1 2 . 2 8 6 . 2
La c t o b a c i l l u s p l a n -
t a r u m . . 1 0 2 . 0 3 2 . 3
La c t o b a c i l l u s a r a b i n o -
u s . . 6 1 . 2 4 3 . 1
Un i d e n t i f i a b l e . . 2 0 . 4 2 1 . 5
He t e r o f e r m e n t a t i v e
La c t o b a c i l l u s f e r m e n t i . 1 5 4 3 0 . 8 5 9 4 5 . 4
La c t o b a c i l l u s b u c h n e r i . 2 5 5 . 0 1 3 1 0 . 0
La c t o b a c i l l u s b r e v i s . 3 1 6 . 2 2 2 1 6 . 9
La c t o b a c i l l u s c e l l o b i o -
s u s n o v . s p . . . . . . . . . . 6 1 . 2 2 1 . 5
Un i d e n t i f i a b l e . 4 0 . 8 2 1 . 5
To t a l . 5 0 0 1 0 0 . 0 1 3 0 -
h i p p u r a t e i s n o t . Th e r e i s l i t t l e o r n o a c i d i t y i n
m i l k . No g r o w t h t a k e s p l a c e a t 4 5 C. It s n u -
t r i t i o n a l b e h a v i o r c o n f o r m s t o p a t t e r n 6 a s s h o w n
i n t a b l e 3 .
Th i s s p e c i e s w i l l b e d i s c u s s e d m o r e c o m p l e t e l y
i n a s u b s e q u e n t p u b l i c a t i o n .
Un i d e Wi f i a b l e s t r a i n s . A s m a l l g r o u p o f 4
h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i w a s i s o l a t e d f r o m
2 i n d i v i d u a l s . We a r e f r a n k t o s t a t e t h a t t h e s e
s t r a i n s w e r e o d d l y i n d i v i d u a l a n d c o u l d n o t b e
p l a c e d i n a n y g r o u p o f w h i c h w e h a d a n y k n o w l -
e d g e . Tw o o t h e r s t r a i n s , i n s o m e w a y s r e s e m b l i n g
6 9 4 [ VOL. 6 5

o
n

S
e
p
t
e
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b
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7
,

2
0
1
3

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o
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f
r
o
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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
L. p l a n t a r u m , b u t p r o d u c i n g d e x t r o l a c t i c a c i d
b y m e a n s o f a h o m o f e r m e n t a t i o n , a l s o a r e
t e r m e d u n i d e n t i f i a b l e .
Sp e c i e s d i s t r i b u t i o n . Ta b l e 8 s u m m a r i z e s t h e
f r e q u e n c y d i s t r i b u t i o n o f t h e s p e c i e s f o u n d i n t h e
p r e s e n t s a m p l i n g . L. a c i d o p h i l u s c o m p r i s e d 1 1
p e r c e n t o f t h e t o t a l n u m b e r o f i s o l a t e s b u t w a s
f o u n d i n 2 1 . 5 p e r c e n t o f t h e s a m p l e s . L. c a s e i
a n d L. f e r m e n t i w e r e t h e p r e d o m i n a t i n g o r g a n i s m s
s i n c e t h e y c o n s t i t u t e d 7 0 p e r c e n t o f t h e i s o l a t e s .
L. c a s e i w a s p r e s e n t i n 7 7 a n d L. f e r m e n t i i n 5 9
o f a t o t a l o f 1 3 0 s a m p l e s .
DISCUSSION
It h a s b e e n d e m o n s t r a t e d t h a t t h e l a c t o b a c i l l i
f o u n d i n a s i z a b l e s a m p l i n g o f s a l i v a s c o m p r i s e d
a s p e c t r u m o f s p e c i e s o f w h i c h 5 6 p e r c e n t o f t h e
i s o l a t e s w e r e h o m o f e r m e n t a t i v e a n d 4 4 p e r c e n t
w e r e h e t e r o f e r m e n t a t i v e . Al s o , h o m o f e r m e n t a t i v e
s p e c i e s w e r e i s o l a t e d f r o m 9 4 p e r c e n t a n d
h e t e r o f e r m e n t a t i v e s p e c i e s f r o m 7 5 p e r c e n t o f
t h e p o s i t i v e s a m p l e s . At l e a s t t w o s p e c i e s w e r e
p r e s e n t s i m u l t a n e o u s l y i n 6 0 p e r c e n t a n d t h r e e
s p e c i e s i n 2 3 p e r c e n t o f t h e s a m p l e s .
Cu r r a n , Ro g e r s , a n d Wh i t t i e r ( 1 9 3 3 ) f o u n d
t h a t m o r e t h a n h a l f o f t h e i r d e n t a l s t r a i n s w e r e
L. c a s e i a n d t h a t t h e o r a l l a c t o b a c i l l i a v a i l a b l e
t o t h e m w e r e n o t u s u a l l y L. a c i d o p h i l u s . Pe d e r s o n
( p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) h a s e m p h a s i z e d t o u s
t h a t m a n y o f t h e o r a l s t r a i n s h e w a s a b l e t o s t u d y
a r e h e t e r o f e r m e n t a t i v e . Ha r r i s o n ( 1 9 3 9 ) o b s e r v e d
g a s i n 3 3 p e r c e n t o f h i s c u l t u r e s . Al t h o u g h Be r g e y
( 1 9 2 3 ) h a d d i v i d e d t h e g e n u s o n t h e b a s i s o f
h o m o - a n d h e t e r o f e r m e n t a t i o n a n d Or l a - Je n s e n
( 1 9 1 9 ) h a d e v e n c r e a t e d s e p a r a t e g e n e r a f o r t h e
t w o t y p e s , d e n t a l i n v e s t i g a t o r s b e f o r e 1 9 5 0 d i d
n o t t a k e a d v a n t a g e o f t h i s n a t u r a l a p p r o a c h f o r
t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f s p e c i e s .
Ti l d e n a n d Sv e c ( 1 9 5 0 ) i n a p r e l i m i n a r y
r e p o r t i d e n t i f i e d 5 8 o f 1 0 1 o r a l s t r a i n s . Fo r t y - f i v e
w e r e L. c a s e i a n d 1 3 w e r e L. f e r i n e n t i . Th e y
s t a t e d t h a t n o n e o f t h e i r c u l t u r e s r e s e m b l e d
L. a c i d o p h i l u s Be r g e y ( Br e e d e t a l . , 1 9 4 8 ) a n d a s
a l s o d e f i n e d b y An d e r s o n a n d Re t t g e r ( 1 9 3 7 ) ,
We i n s t e i n , An d e r s o n , a n d Re t t g e r ( 1 9 3 3 ) , Or l a -
Je n s e n ( 1 9 1 9 , 1 9 4 3 ) , Or l a - Je n s e n , Or l a - Je n s e n ,
a n d Wi n t h e r ( 1 9 3 6 ) , a n d Ti t t s l e r , Ge i b , a n d
Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) . Th e i r s p e c i a l m e d i u m f o r i s o l a t i o n
m a y n o t h a v e b e e n e s p e c i a l l y f a v o r a b l e f o r t h e
g r o w t h o f t h e l a t t e r s p e c i e s . Ne v e r t h e l e s s , i t i s
s i g n i f i c a n t t h a t t h e i r r e s u l t s a r e i n s u b s t a n t i a l
a g r e e m e n t w i t h t h o s e r e p o r t e d i n t h i s p a p e r i n
t h a t L. c a s e i a n d L. f e r m e n t i c o m p r i s e d t h e b u l k
o f t h e c u l t u r e s .
Th e c o n c e p t o f c e r t a i n i n v e s t i g a t o r s t h a t t h e
o r a l l a c t o b a c i l l i a r e u n i q u e l y i n d i g e n o u s t o t h e
o r a l e n v i r o n m e n t m e r i t s r e e x a m i n a t i o n i n v i e w o f
p r e s e n t l y a v a i l a b l e e v i d e n c e .
L. a c i d o p h i l u s h a s b e e n f o u n d i n t h e i n t e s t i n a l
t r a c t o f a n i m a l s a n d m a n . L. f e r m e n t i a n d
L. p l a n t a r u m h a v e b e e n f o u n d i n f e c a l m a t e r i a l
f r o m t u r k e y s . Th e o r a l l a c t o b a c i l l i f r o m t h e
h a m s t e r a r e p r e s e n t i n l a r g e n u m b e r s i n t h e f e c e s .
L. b u h n e r i , L. f e r m e n t i , L. p l a n t a r u m , a n d
L. a r a b i n o s u s h a v e b e e n f o u n d i n a w i d e v a r i e t y
o f f e r m e n t i n g m a t e r i a l s s u c h a s s a u e r k r a u t ,
p i c k l e s , b e e t s , t o m a t o p r o d u c t s , s i l a g e , p o t a t o e s
a n d c h e e s e . L. c a s e i i s f o u n d c o m m o n l y i n
c h e e s e s a n d d a i r y p r o d u c t s . So m e o f t h e m e n -
t i o n e d s p e c i e s h a v e b e e n i s o l a t e d f r o m g r a i n s ,
m a s h , y e a s t , a n d s o u r d o u g h . It i s c l e a r t h e r e f o r e
t h a t t h e l a c t o b a c i l l i i n t h e m o u t h a r e i d e n t i c a l
w i t h s p e c i e s f o u n d u b i q u i t o u s l y i n f e r m e n t i n g
m a t e r i a l s i n n a t u r e .
Of t e n i t i s f o r g o t t e n t h a t t h e d e t e r m i n a t i o n s
m a d e i n t h i s a n d s i m i l a r s t u d i e s a r e o f t h e
c h a r a c t e r i s t i c s o f b a c t e r i a l p o p u l a t i o n s . In t h e
a b s e n c e o f s p e c i a l t e c h n i q u e s f o r t h e i s o l a t i o n a n d
s e l e c t i o n o f m u t a n t s o r s p e c i a l v a r i a n t s , w h a t i s
d e t e r m i n e d i s t h e r e s u l t a n t m a s s c h a r a c t e r o f t h e
t o t a l b a c t e r i a l p o p u l a t i o n .
Mu c h h a s b e e n w r i t t e n c o n c e r n i n g t h e v a r i a -
b i l i t y o f t h e l a c t o b a c i l l i , p a r t i c u l a r l y i n f e r m e n t a -
t i o n t e s t s . Ho w e v e r , g r o s s v a r i a t i o n o f i n d i v i d u a l
s t r a i n s i n r e p e a t e d t e s t i n g h a s b e e n u n c o m m o n i n
o u r e x p e r i e n c e . In t h e r a r e i n s t a n c e s i n w h i c h
v a r i a t i o n h a s o c c u r r e d , i t h a s b e e n n e a r l y a l w a y s
i n t h e c a s e s o f s u b s t r a t e s w h i c h w e r e f e r m e n t e d
v e r y s l o w l y o r w e a k l y i n t h e f i r s t t e s t o n p r i m a r y
i s o l a t i o n , o r i n s u b s t a n c e s o f d o u b t f u l p u r i t y ,
c o m p o s i t i o n , o r h e a t s t a b i l i t y . Th i s a l s o h a s b e e n
t h e e x p e r i e n c e o f Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 , 1 9 4 3 ) ,
Ti t t s l e r , Ge i b , a n d Ro g o s a ( 1 9 4 7 ) , a n d Ha r r i s o n
a n d Ha n s e n ( 1 9 5 0 a ,c ) . In d e e d , Or l a - Je n s e n ( 1 9 4 3 )
h a s r e t e s t e d s t r a i n s a f t e r 3 0 y e a r s a n d h a s
o b t a i n e d r e m a r k a b l y s i m i l a r r e s u l t s i n r e p e a t e d
t e s t s i n n u t r i t i o n a l l y a d e q u a t e m e d i a . Ro g o s a
( u n p u b l i s h e d d a t a ) h a s t e s t e d 1 1 s t r a i n s o f
L. a c i d o p h i l u s , f i r s t s t u d i e d i n 1 9 3 3 , a n d r e t e s t e d
i n 1 9 3 8 , 1 9 4 3 , 1 9 4 7 , a n d 1 9 5 0 . Th e s a m e t y p e o f
l a c t i c a c i d , t h e s a m e h o m o f e r m e n t a t i o n , a n d a
r e p l i c a t i o n o f t h e f e r m e n t a t i v e b e h a v i o r w e r e
o b t a i n e d i n a l l c a s e s . A s i m i l a r r e p e t i t i o n o f
d e t e r m i n a t i o n s f i r s t m a d e i n 1 9 3 9 w a s p e r f o r m e d
6 9 5
1 9 5 3 ]

o
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e
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f
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o
m

MORRISON ROGOSA ET AL.
i n 1 9 4 7 w i t h 3 8 s t r a i n s o f L. c a s e i , 4 0 o f La c t o -
b a c i l l u s b u l g a r i c u - s s y n . Th e r m o b a c t e r i u m j u g u r t
Or l a - Je n s e n , 1 7 o f La c t o b a c i l l u s l a c t i s , 1 0 o f
La c t o b a c i l l u s h e l v e t i c u s , 1 o f La c t o b a c i l l u s d e l -
b r u e c k i i , 3 o f La c t o b a c i l l u s l e i c h m a n n i i , 6 o f
L. p l a r t a r u m , a n d 2 5 d i v e r s e h e t e r o f e r m e n t a t i v e
l a c t o b a c i l l i . Wi t h o n e e x c e p t i o n , t h e r e s u l t s o f
t h e d i f f e r e n t d e t e r m i n a t i o n s w e r e t h e s a m e .
L. d e l b r u e c k i i o r i g i n a l l y f e r m e n t e d m a l t o s e b u t
f a i l e d t o d o s o i n l a t e r t e s t s . Th e f o r e g o i n g
r e p e a t e d t e s t i n g s a r e i n d e p e n d e n t o f t h e r e p e a t e d
t e s t s o n t h e p r e s e n t s a m p l i n g o f o r a l l a c t o b a c i l l i .
Tw e n t y - e i g h t t h o u s a n d t e s t s o f i n d i v i d u a l
c h a r a c t e r i s t i c s w e r e m a d e i n t h i s s t u d y . Di s -
c r e p a n c i e s b e t w e e n t h e f i r s t t e s t o n i s o l a t i o n a n d
t e s t s p e r f o r m e d a t l e a s t t w o y e a r s l a t e r o c c u r r e d
i n 7 4 i n s t a n c e s . Th i s i s a t a r a t e o f a p p r o x i m a t e l y
0 . 5 p e r c e n t . It s h o u l d b e n o t e d a l s o t h a t n e a r l y
a l l t h e c u l t u r e s w e r e t r a n s f e r r e d i n a v a r i e t y o f
s t o c k m e d i a a n d s t o r e d i n t h e r e f r i g e r a t o r f o r
v a r y i n g p e r i o d s . On l y a v e r y s m a l l n u m b e r o f
t h e c u l t u r e s i n t h e l a t e r t e s t s w e r e d e r i v e d f r o m
l y o p h i l i z e d m a t e r i a l .
It i s i n c o n c e i v a b l e t h a t t h e f e r m e n t a t i v e
v a r i a b i l i t y c l a i m e d b y s o m e p r e v i o u s w o r k e r s
c a n n o t b e e x p l a i n e d . Ha r r i s o n ( 1 9 3 9 ) o b s e r v e d
n e a r l y 1 0 0 p e r c e n t c h a n g e s i n t h e f e r m e n t a t i o n
o f a r a b i n o s e a n d x y l o s e i n d i f f e r e n t t e s t s . Th e s e
c a r b o h y d r a t e s h a d b e e n s t e r i l i z e d w i t h t h e
m e d i u m a t 1 0 l b f o r 2 0 m i n u t e s . Ev e n w i t h t h e s e
p e n t o s e s s t e r i l i z e d b y f i l t r a t i o n , i t h a s b e e n o u r
e x p e r i e n c e t h a t c e r t a i n i n d i c a t o r s c h a n g e
m a r k e d l y i n t h e i r p r e s e n c e i n u n i n o c u l a t e d
m e d i a d u r i n g i n c u b a t i o n . Th i s i s t r u e a l s o f o r
c e r t a i n o t h e r s u b s t r a t e s . Wh a t h a s s o m e t i m e s
b e e n r e p o r t e d a s a f e r m e n t a t i o n h a s b e e n m e r e l y
a d e g r a d a t i v e c h a n g e o f a n i n d i c a t o r i n p o o r l y
b u f f e r e d a n d s o m e t i m e s i n a d e q u a t e m e d i a . In
t h e a b s e n c e o f m e a s u r e m e n t s o f a c i d i t y , i t h a s
b e e n t h e g e n e r a l e x p e r i e n c e o f s o m e o u t s t a n d i n g
i n v e s t i g a t o r s o f t h e l a c t o b a c i l l i , a l r e a d y c i t e d
h e r e i n , t h a t i t i s h i g h l y d o u b t f u l p r a c t i c e t o
a s s u m e p o s i t i v e f e r m e n t a t i o n r e a c t i o n s f r o m
r e a d i n g s o f d e g r a d e d i n d i c a t o r s . Th i s h a s b e e n
p r o v e d t o o u r u n c o n d i t i o n a l s a t i s f a c t i o n i n
t h o u s a n d s o f i n d i v i d u a l i n s t a n c e s . Mo r e o v e r ,
s o m e h i g h l y q u e s t i o n a b l e c h o i c e s o f i n d i c a t o r s ,
p e c u l i a r l y u n s u i t a b l e f o r t h e p H r a n g e o f b a c t e r i a l
a c t i v i t y a n d t h e b u f f e r i n g c a p a c i t y o f t h e
m e d i u m , h a v e b e e n m a d e i n s o m e i n v e s t i g a t i o n s
o f t h e o r a l l a c t o b a c i l l i .
It n e e d n o t b e l a b o r e d a t t h i s t i m e t h a t t h e
n u t r i t i o n o f t h e l a c t o b a c i l l i i s c o m p l e x . Or l a -
Je n s e n ( 1 9 1 9 ) a n d Or l a - Je n s e n , Ot t e , a n d
Sn o g - K j a e r ( 1 9 3 6 ) r e c o g n i z e d t h i s e a r l y . Hi s
f e r m e n t a t i o n r e s u l t s a r e r e p o r t e d f o r a v a r i e t y
o f b a s a l m e d i a . Ev e n c a s u a l i n s p e c t i o n o f h i s
d a t a s h o w s t h a t f e r m e n t a t i o n o f s o m e c o m p o u n d s
d e p e n d e d c r i t i c a l l y o n t h e n u t r i t i o n a l a d e q u a c y
o f t h e b a s a l m e d i a . Ev a n s a n d Ni v e n ( 1 9 5 1 ) h a v e
d e m o n s t r a t e d t h a t c e r t a i n i n f u s i o n m e d i a , w i d e l y
u s e d p r e v i o u s l y a s b a s a l m e d i a i n t h e s t u d y o f
f e r m e n t a t i o n s , a r e d e f i c i e n t i n m a n g a n e s e f o r t h e
h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i f o u n d i n c e r t a i n
m e a t p r o d u c t s . Th e y a l s o d e s c r i b e d a s i m u l -
t a n e o u s l y f a v o r a b l e e f f e c t o f c i t r a t e . On e o f u s
( M. R. ) o b s e r v e d t h i s s o m e y e a r s a g o a n d h a s
s i n c e u s e d c i t r a t e w i t h s a l t s u p p l e m e n t s r o u t i n e l y .
Th i s c i t r a t e - s a l t r e l a t i o n s h i p w a s e x p l o i t e d i n t h e
d e v e l o p m e n t o f a h i g h l y s e l e c t i v e m e d i u m f o r
c e r t a i n l a c t o b a c i l l i b y Ro g o s a , Mi t c h e l l , a n d
Wi s e m a n ( 1 9 5 1 a ,b ) . Th e r e p e a t e d f e r m e n t a t i o n
r e s u l t s r e p o r t e d i n t h i s p a p e r w e r e o b t a i n e d i n a
m e d i u m c o n t a i n i n g c i t r a t e a n d r e q u i r e d s a l t s .
Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 ) d i s c o v e r e d t h a t c e r t a i n
m e d i a w e r e d e f i c i e n t i n m a g n e s i u m a n d a d d e d i t
r o u t i n e l y t o h i s c a s e i n d i g e s t m e d i a . Th i s e x -
p e r i e n c e o f Or l a - Je n s e n h a s b e e n c o n f i r m e d b y
Ro g o s a a n d Mi t c h e l l ( 1 9 5 0 b ) . Th e p r e s e n t
i n v e s t i g a t o r s h a v e i n d e e d o b t a i n e d m a r k e d l y
v a r i a b l e r e s u l t s i n s o m e s u b s t r a t e s w i t h i n d i v i d u a l
s t r a i n s o f l a c t o b a c i l l i i n b a s a l m e d i a d e f i c i e n t
i n m a g n e s i u m , m a n g a n e s e , o r o t h e r f a c t o r s . In
s u c h c a s e s c e r t a i n s u b s t r a t e s o n l y m a y b e
f e r m e n t e d , a n d a v a r i e t y o f m a t e r i a l s n o r m a l l y
f e r m e n t e d i n a n a d e q u a t e b a s a l m e d i u m m a y n o t
b e f e r m e n t e d a t a l l . Fo r e x a m p l e , i n d e f i c i e n t
m e d i a c e r t a i n s t r a i n s o f L. f e r m e n t i m a y f e r m e n t
s u c r o s e o n l y , o r L. b r e v i s m a y p r o d u c e a c i d f r o m
a r a b i n o s e a n d x y l o s e o n l y .
Un l e s s t r a n s f e r s w e r e f i r s t m a d e i n f a v o r a b l e
m e d i a t o s t i m u l a t e g o o d g r o w t h a n d t h e e x -
p r e s s i o n o f t h e r e u l t a n t m a s s c h a r a c t e r o f t h e
c u l t u r e , s u c h e r r a t i c r e s u l t s a l s o h a v e b e e n
o b t a i n e d o c c a s i o n a l l y w i t h c u l t u r e s h e l d f o r
e x t e n d e d p e r i o d s i n t h e r e f r i g e r a t o r .
In c o n c l u d i n g , i t s e e m s p r o f i t a b l e t o m e n t i o n
s o m e g e n e r a l p r o p e r t i e s o f t h e l a c t o b a c i l l i . NVe
h a v e n o t y e t s t u d i e d a l a c t o b a c i l l u s w h i c h
f e r m e n t s g l y c e r o l a c t i v e l y o r d o e s n o t r e q u i r e
n i a c i n f o r g o o d g r o w t h . Al l o f t h e h e t e r o f e r -
m e n t a t i v e s p e c i e s s t u d i e d a r e i n c a p a b l e o f
f e r m e n t i n g a d o n i t o l , d u l c i t o l , i n o s i t o l , i n u l i n ,
r h a m n o s e , s o r b i t o l , s o r b o s e , g l y c e r o l , a n d
6 9 6 [ VOL. 6 5

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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
a - m e t h y l - D- m a n n o s i d e . Ex c e p t f o r L. c e l l o b i o s u s ,
n o h e t e r o f e r m e n t a t i v e s t r a i n f e r m e n t e d c e l -
l o b i o s e . Th e f e r m e n t a t i o n o f t r e h a l o s e w a s
e f f e c t e d o n l y b y L. c e l l o b i o s u a n d c e r t a i n s t r a i n s
o f L. f e r m e n t i , a n d m a n n o s e w a s f e r m e n t e d v e r y
s l o w l y a n d g e n e r a l l y w e a k l y , i f a t a l l . Sa l i c i n
w a s n o t f e r m e n t e d b y t h e v a s t n u m b e r o f
h e t e r o f e r m e n t a t i v e s t r a i n s , a n d i f f e r m e n t e d i t
w a s d e g r a d e d s l o w l y .
Th e c l e a v a g e o f t h e g e n u s La c t o b a c i l l u s i n t o
h o m o f e r m e n t a t i v e a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e s p e c i e s
d e s e r v e s s o m e c o m m e n t . It m a y b e a r g u e d t h a t
t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i s h o u l d a s s u m e
t h e r a n k o f a s e p a r a t e , i n t e r m e d i a t e g e n u s .
Mo r p h o l o g i c a l l y , t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e o r g a n -
i s m s m a y a s s u m e b i - p o l a r o r b a r r e d f o r m s c l o s e l y
r e s e m b l i n g s o m e m e m b e r s o f b o t h t h e g e n e r a
Co r y n e b a c t e r i u m a n d Pr o p i o n i b a c t e r i u m . Th i s h a s
b e e n d e m o n s t r a t e d b y v a r i o u s t e c h n i q u e s i n -
c l u d i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y . Th e h e t e r o f e r -
m e n t a t i v e s t r a i n s t e s t e d d i f f e r f r o m t h e h o m o -
f e r m e n t a t i v e s p e c i e s i n p r o d u c i n g s i g n i f i c a n t
q u a n t i t i e s o f CO2 f r o m t h e d i s s i m i l a t i o n o f
c a r b o h y d r a t e s , i n r e q u i r i n g t h i a m i n f o r g o o d
g r o w t h , a n d i n p r o d u c i n g a m m o n i a . Ex c e p t f o r
t h e l a c k o f p r o d u c t i o n o f p r o p i o n i c a c i d , t h e
f e r m e n t a t i o n p r o d u c t s o f t h e s e h e t e r o f e r m e n t a -
t i v e o r g a n i s m s r e s e m b l e t o a c o n s i d e r a b l e e x t e n t
t h e c a r b o n d i s t r i b u t i o n o f t h e p r o p i o n i b a c t e r i a .
Te s t s m a d e b y Or l a - Je n s e n ( 1 9 4 3 ) i n d i c a t e t h a t
t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e t y p e s m a y u t i l i z e l a c t a t e
t o s o m e d e g r e e a n d p r o b a b l y s i m i l a r l y t o t h e
p r o p i o n i b a c t e r i a . Th e f i n a l p H o f t h e h o m o -
f e r m e n t a t i v e o r g a n i s m s i s s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t
i n g l u c o s e . Ge n e r a l l y , t h e p H p r o d u c e d b y t h e
h o m o f e r m e n t a t i v e s t r a i n s w a s a t l e a s t 0 . 5 u n i t
l o w e r t h a n t h a t f o r t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e
s p e c i e s .
Th e s e d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e h o m o - a n d
h e t e r o f e r m e n t a t i v e g r o u p s a r e f u n d a m e n t a l , a n d
v e r y p r o b a b l y m o r e b a s i c d i f f e r e n c e s w i l l b e
d i s c o v e r e d w i t h f u r t h e r s t u d y . Th e s e d i f f e r e n c e s
a r e a l s o g r e a t e r t h a n t h o s e e x i s t i n g b e t w e e n
c e r t a i n o t h e r g e n e r a n o w r e c o g n i z e d . Th e r e f o r e , i t
i s r e c o m m e n d e d t h a t t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e
s p e c i e s , w h i c h a r e n o w p l a c e d b y Be r g e y ( Br e e d
e t a l . , 1 9 4 8 ) i n a s u b - g r o u p o f t h e g e n u s La c t o -
b a c i l l u s , b e s e p a r a t e d f r o m t h e h o m o f e r m e n t a t i v e
s p e c i e s a n d p l a c e d
i n a s e p a r a t e g e n u s f o r w h i c h
t h e n a m e Be t a b a c t e r i u m Or l a - Je n s e n ( 1 9 1 9 ) i s
a v a i l a b l e . Th i s a r r a n g e m e n t w o u l d k e e p t h e
n a m e La c t o b a c i l l u s Be i j e r i n c k f o r t h e h o m o f e r -
m e n t a t i v e s p e c i e s .
Th e a u t h o r s a r e d e p o s i t i n g a p p r o p r i a t e c u l t u r e s
i n t h e Am e r i c a n Ty p e Cu l t u r e Co l l e c t i o n .
SUMMARY
Fi v e h u n d r e d r e p r e s e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i w e r e
i s o l a t e d f r o m f r e s h s a l i v a s p e c i m e n s o b t a i n e d
f r o m 1 3 0 c h i l d r e n i n t h e e l e m e n t a r y s c h o o l
g r a d e s 1 t o 7 . Th e c o n c e p t h e l d p r e v i o u s l y , t h a t
t h e o r a l l a c t o b a c i l l i a r e t h e o n e s p e c i e s La c t o -
b a c i l l u s a c i d o p h i l u s , i s n o t s u b s t a n t i a t e d b y t h e
e v i d e n c e . In s t e a d , t h e y c o m p r i s e d a s p e c t r u m o f
s p e c i e s o f w h i c h L. a c i d o p h i l u s w a s o n l y o n e
c o n s t i t u e n t . At l e a s t t w o s p e c i e s w e r e p r e s e n t
s i m u l t a n e o u s l y i n 6 0 p e r c e n t a n d t h r e e s p e c i e s
i n 2 3 p e r c e n t o f t h e s a m p l e s .
Th e p e r c e n t a g e s o f t h e i s o l a t e s a n d p e r c e n t a g e s
o f t h e s a m p l e s i n w h i c h t h e y a p p e a r e d w e r e ,
r e s p e c t i v e l y : L. c a s e i , 3 9 . 2 a n d 5 9 . 2 ; L.
a c i d o p h i l u s , 1 1 a n d 2 1 . 5 ; L. s a l i v a r i u s n o v . s p . ,
2 . 2 a n d 6 . 2 ; L. p l a n t a r u m , 2 . 0 a n d 2 . 3 ; L. a r a b i -
n o s u s , 1 . 2 a n d 3 . 1 ; a n d h o m o f e r m e n t a t i v e
u n i d e n t i f i a b l e s p e c i e s , 0 . 4 a n d 1 . 5 . Am o n g t h e
h e t e r o f e r m e n t a t i v e s p e c i e s t h e d i s t r i b u t i o n w a s :
L. f e r m e n t i , 3 0 . 8 a n d 4 5 . 4 ; L. b u c h n e r i , 5 . 0 a n d
1 0 . 0 ; L. b r e v i 8 , 6 . 2 a n d 1 6 . 9 ; L. c e l l o b i o s u s n o v .
s p . , 1 . 2 a n d 1 . 5 ; a n d h e t e r o f e r m e n t a t i v e u n -
i d e n t i f i a b l e s t r a i n s , 0 . 8 a n d 1 . 5 .
Th e a b o v e d i s t r i b u t i o n h a s b e e n c o n f i r m e d
l a r g e l y i n i s o l a t e s f r o m o t h e r g r o u p s o f c h i l d r e n
a n d f r o m a d u l t s i n d i f f e r e n t g e o g r a p h i c a r e a s . In
a l l c a s e s , L. c a s e i a n d L. f e r m e n t i c o n s t i t u t e d t h e
b u l k o f t h e s t r a i n s .
Th e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e f o r e g o i n g k n o w n
s p e c i e s a r e d e s c r i b e d . Th e t w o n e w m e n t i o n e d
s p e c i e s a r e d e s c r i b e d b r i e f l y .
Th e e c o l o g i c a l r e l a t i o n s h i p s o f t h e o r a l l a c t o -
b a c i l l i a r e d i s c u s s e d a l s o , a n d i t i s s h o w n t h a t t h e
k n o w n s p e c i e s o f o r a l l a c t o b a c i l l i a r e i d e n t i c a l
w i t h o r g a n i s m s p r e v i o u s l y f o u n d i n a w i d e
v a r i e t y o f f e r m e n t i n g m a t e r i a l s i n n a t u r e .
Ne w a n d m o r e e x t e n s i v e t e s t s , i n c l u d i n g d a t a
o f n u t r i t i o n a l r e q u i r e m e n t s , h a v e b e e n a p p l i e d t o
t h e s t u d y o f s i g n i f i c a n t n u m b e r s o f s t r a i n s . Th e
s p e c i e s h a v e b e e n c o n c e i v e d b y m e a n s o f a
c o r r e l a t i o n o f c h a r a c t e r i s t i c s i n w h i c h d a t a o f
a d a p t i v e f e r m e n t a t i o n s h a v e b e e n c o n s i d e r e d .
Re p e a t e d t e s t s o n f e r m e n t a t i v e a n d o t h e r
c h a r a c t e r i s t i c s i n n u t r i t i o n a l l y a d e q u a t e m e d i a
d e m o n s t r a t e d t h a t v a r i a t i o n o f i n d i v i d u a l s t r a i n s
w a s i n s i g n i f i c a n t .
6 9 7
1 9 5 3 ]

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MORRISON ROGOSA ET AL.
REFERENCES
ANDERSON, T. G. , AND RETTGER, L. F. 1 9 3 7
Ac i d o g e n i c a n d a c i d u r i c b a c t e r i a o f t h e m o u t h
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J. De n t a l Re s e a r c h , 1 6 , 4 8 9 - 5 0 5 .
BARBER, F. W. , AND FRAZ IER, W. C. 1 9 4 5 Di s -
s o c i a n t s o f l a c t o b a c i l l i . J. Ba c t . , 5 0 , 6 3 7 - 6 4 9 .
BERGEY, D. H. , HARRISON, F. C. , BREED, R. S. ,
HAMMER, B. W. , AND HUNTOON, F. M. 1 9 2 3
Be r g e y ' s m a n u a l o f d e t e r m i n a t i v e b a c t e r i o l o g y ,
l t e d . , 4 4 2 p p . Th e Wi l l i a m s & Wi l k i n s Co . ,
Ba l t i m o r e , Md .
BREED, R. S. , MURRAY, E. G. D. , AND HITCHENS,
A. P. 1 9 4 8 Be r g e y ' 8 m a n u a l o f d e t e r m i n a t i v e
b a c t e r i o l o g y , 6 t h e d . Th e Wi l l i a m s & Wi l k i n s
Co . , Ba l t i m o r e , Md .
CURRAN, H. R. , ROGERS, L. A. , AND WHITTIER,
E. 0 . 1 9 3 3 Th e d i s t i n g u i s h i n g c h a r a c t e r -
i s t i c s o f La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s . J. Ba c t . ,
2 5 , 5 9 5 - 6 2 1 .
DUBOS, R. J. , DAVIS, B. D. , MIDDLEBROOK , G. ,
AND PIERCE, C. 1 9 4 6 Ef f e c t o f w a t e r s o l u b l e
l i p i d s o n t h e g r o w t h a n d b i o l o g i c a l p r o p e r t i e s
o f t u b e r c l e b a c i l l i . Am . Re v . Tu b e r c . , 5 4 ,
2 0 4 - 2 1 2 .
ENRIGHT, J. J. , FRIESELL, H. E. , AND TRESCHER,
M. S. 1 9 3 2 St u d i e s o f t h e c a u s e a n d n a t u r e
o f d e n t a l c a r i e s . J. De n t a l Re s e a r c h , 1 2 ,
7 5 9 - 8 2 7 .
FVANS, J. B. , AND NIVEN, C. F. , JR. 1 9 5 1 Nu -
t r i t i o n o f t h e h e t e r o f e r m e n t a t i v e l a c t o b a c i l l i
t h a t c a u s e g r e e n i n g o f c u r e d m e a t p r o d u c t s .
J. Ba c t . , 6 2 , 5 9 9 - 6 0 3 .
FRED, E. B. , PETERSON, W. H. , AND ANDERSON,
J. A. 1 9 2 1 Th e c h a r a c t e r i s t i c s o f c e r t a i n
p e n t o s e - d e s t r o y i n g b a c t e r i a , e s p e c i a l l y a s c o n -
c e r n s t h e i r a c t i o n o n a r a b i n o s e a n d x y l o s e .
J. Bi o l . Ch e m . , 4 8 , 3 8 5 - 4 1 2 .
HADLEY, FAITH P. 1 9 3 3 A q u a n t i t a t i v e m e t h o d
f o r e s t i m a t i n g Ba c i l l u s a c i d o p h i l u s i n s a l i v a .
J. De n t a l Re s e a r c h , 1 3 , 4 1 5 - 4 2 8 .
HADLEY, F. P. , AND BUNTING, R. W. 1 9 3 2
Fu r t h e r s t u d i e s o n t h e r e c o g n i t i o n o f B.
a c i d o p h i l u s . J. Am . De n t a l As s o c . , 1 9 , 2 8 - 3 6 .
HADLEY, F. P. , BUNTING, R. W. , AND DELVES,
E. A. 1 9 3 0 Re c o g n i t i o n o f Ba c i l l u s a c i -
d o p h i l u e a s s o c i a t e d w i t h d e n t a l c a r i e s . J. Am .
De n t a l As s o c . , 1 7 , 2 0 4 1 - 2 0 5 8 .
HARRISON, A. P. , JR. , AND HANSEN, P. A. 1 9 5 0 a
Th e b a c t e r i a l f l o r a o f t h e c e c a l f e c e s o f h e a l t h y
t u r k e y s . J. Ba c t . , 5 9 , 1 9 7 - 2 1 0 .
HARRISON, A. P. , JR. , AND HANSEN, P. A. 1 9 5 0 b
A m o t i l e La c t o b a c i l l u s f r o m t h e c e c a l f e c e s o f
t u r k e y s . J. Ba c t . , 5 9 , 4 4 4 - 4 4 6 .
HARRISON, A. P. , JR. , AND HANSEN, P. A. 1 9 5 0 c
La c t o b a c i l l i f r o m t u r k e y s . J. Ba c t . , 6 0 , 5 4 3 -
5 5 5 .
HARRISON, R. W. 1 9 3 9 St u d i e s o n l a c t o b a c i l l i .
I. Fe r m e n t a t i o n r e a c t i o n s o f s t r a i n s i s o l a t e d
f r o m h u m a n m o u t h s . J. In f e c t i o u s Di s e a s e s ,
6 5 , 1 4 2 - 1 4 6 .
JAY, P. , AND ARNOLD, F. A. , JR. 1 9 4 6 De n t a l
c a r i e s a n d f l u o r i n e . La n c a s t e r , Pa . , Sc i e n c e
Pr e s s , p . 4 6 .
K LIGLER, I. J. , AND GIES, W. J. 1 9 1 5 Ch e m i c a l
s t u d i e s o f t h e r e l a t i o n s o f o r a l m i c r o - o r g a n -
i s m s t o d e n t a l c a r i e s . 3 . A b i o c h e m i c a l s t u d y
a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f o r a l b a c t e r i a w i t h s p e -
c i a l r e f e r e n c e t o d e n t a l c a r i e s . ( c o n t i n u e d )
( II) . J. Al l i e d De n t a l So c . , 1 0 , 2 8 2 - 3 3 0 .
MCDONALD, I. J. , AND FRAZ IER, W. C. 1 9 5 1
Va r i a t i o n i n m o r p h o l o g y o f c o l o n i e s o f l a c t o -
b a c i l l i . J. Ba c t . , 6 1 , 6 2 7 - 6 3 7 .
MORISHITA, T. 1 9 2 8 Co m p a r a t i v e s t u d y o f c e r -
t a i n a c i d u r i c o r g a n i s m s o f i n t e s t i n a l a n d
d e n t a l o r i g i n . Pr o c . So c . Ex p t l . Bi o l . Me d . ,
2 5 , 6 5 4 - 6 5 6 .
MORISHITA, T. 1 9 2 9 St u d i e s o n d e n t a l c a r i e s ,
w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o a c i d u r i c o r g a n i s m s
a s s o c i a t e d w i t h t h e p r o c e s s . J. Ba c t . , 1 8 ,
1 8 1 - 1 9 8 .
MORO, E. 1 9 0 0 a Ue b e r d i e n a c h Gr a m f a r b -
b a r e n Ba c i l l e n d e s Si u g l i n g s s t u h l e s . Wi e n .
k l i n . Wo c h s c h r . , 1 3 , 1 1 4 - 1 1 5 .
Mo Ro , E. 1 9 0 0 b Ue b e r d e n Ba c i l l u s a c i d o p h i l u s
n . s p e c . Ja h r b . K i n d e r h e i l k . , 5 2 , 3 8 - 5 5 .
ORLA- JENSEN, S. 1 9 1 9 Th e l a c t i c a c i d b a c t e r i a .
M6 m . a c a d . r o y . s c i . , Da n e m a r k , Se c t . s c i . ,
8 s 6 r . , 5 , 8 1 - 1 9 7 .
ORLA- JENSEN, S. 1 9 4 3 Th e l a c t i c a c i d b a c t e r i a .
Er g i i n z u n g s b a n d . M6 m . a c a d . r o y . s c i . ,
Da n e m a r k , Se c t . s c i . b i o l . , 2 , ( 3 ) , 1 - 1 4 5 .
ORLA- JENSEN, S. , ORLA- JENSEN, A. D. , AND WIN-
THER, 0 . 1 9 3 6 Ba c t e r i u m b i f t d u m u n d Th e r -
m o b a c t e r i u m i n t e s t i n a l e . Z e n t r . Ba k t . Pa r a -
s i t e n k . , II, 9 3 , 3 2 1 - 3 4 3 .
ORLA- JENSEN, S. , OTTE, N. C. , AND SNOG- K JAER,
A. 1 9 3 6 Th e v i t a m i n a n d n i t r o g e n r e q u i r e -
m e n t s o f t h e l a c t i c a c i d b a c t e r i a . M6 m .
a c a d . r o y . s c i . , Da n e m a r k , Se c t . s c i . , 9 s 6 r . ,
6 , 1 - 5 2 .
ORLAND, F. J. 1 9 5 0 A c o r r e l a t i o n o f a n t i g e n i c
c h a r a c t e r i s t i c s a m o n g c e r t a i n b a c t e r i a o f t h e
l a c t o b a c i l l u s g r o u p . J. In f e c t i o u s Di s e a s e s ,
8 6 , 6 3 - 8 0 .
PEDERSON, C. S. 1 9 2 9 a Th e f e r m e n t a t i o n o f
g l u c o s e , f r u c t o s e , a n d a r a b i n o s e b y o r g a n i s m s
f r o m s p o i l e d t o m a t o p r o d u c t s . Bu l l . N. Y.
St a t e Ag r i c . Ex p t l . St a . , 1 5 1 , 1 - 2 2 .
PEDERSON, C. S. 1 9 2 9 b Th e t y p e s o f o r g a n i s m s
f o u n d i n s p o i l e d t o m a t o p r o d u c t s . Bu l l . N.
Y. St a t e Ag r i c . Ex p t l . St a . , 1 5 0 , 1 - 4 6 .
PEDERSON, C. S. 1 9 3 0 Fl o r a l c h a n g e s i n t h e f e r -
m e n t a t i o n o f s a u e r k r a u t . Bu l l . N. Y. St a t e
Ag r i c . Ex p t l . St a . , 1 6 8 , 1 - 3 7 .
6 9 8 [ VOL. 6 5

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SPECIES DIFFERENTIATION OF ORAL LACTOBACILLI
PEDERSON, C. S. 1 9 3 6 A s t u d y o f t h e s p e c i e s
La c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m ( Or l a - Je n s e n ) Be r g e y
e t a l . J. Ba c t . , 3 1 , 2 1 7 - 2 2 4 .
PEDERSON, C. S. 1 9 3 8 Th e g a s p r o d u c i n g s p e c i e s
o f t h e g e n u s La c t o b a c i l l u s . J. Ba c t . , 3 5 ,
9 5 - 1 0 8 .
RODRIGUEZ , F. E. 1 9 3 0 A m e t h o d o f d e t e r m i n i n g ,
q u a n t i t a t i v e l y , t h e i n c i d e n c e o f La c t o -
b a c i l l u s a c i d o p h i l u s - o d o n t y l i c u s i n t h e o r a l
c a v i t y . J. Am . De n t a l As s o c . , 1 7 , 1 7 1 1 - 1 7 1 9 .
RODRIGUEZ , F. E. 1 9 3 1 Qu a n t i t a t i v e i n c i d e n c e
o f La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s i n t h e o r a l c a v i t y
a s a p r e s u m p t i v e i n d e x o f s u s c e p t i b i l i t y t o
d e n t a l c a r i e s . J. Am . De n t a l As s o c . , 1 8 ,
2 1 1 8 - 2 1 3 5 .
RODRIGUEZ , F. E. 1 9 3 2 Co m m e n t o n p a p e r b y
En r i g h t , J. J. , Fr i e s e l l , H. E. , a n d Tr e s c h e r ,
M. S. i n t h e s a m e i s s u e o f J. De n t a l Re s e a r c h
c i t e d a b o v e . J. De n t a l Re s e a r c h , 1 2 , 8 3 8 - 8 4 2 .
ROGOSA, M. , AND MITCHELL, J. A. 1 9 5 0 a In -
d u c e d c o l o n i a l v a r i a t i o n o f a t o t a l p o p u l a t i o n
a m o n g c e r t a i n l a c t o b a c i l l i . J. Ba c t . , 5 9 , 3 0 3 -
/ 3 0 8 .
ROGOSA, M. , AND MIr CHELL, J. A. 1 9 5 0 b Th e
i n d i s p e n s a b i l i t y o f m a g n e s i u m f o r La c t o b a c i l -
l u 8 h e l v e t i c u s a n d i t s u n a v a i l a b i l i t y i n a m a g -
n e s i u m - a z i d e c o m p l e x . Ba c t . Pr o c . , 1 9 5 0 ,1 3 0 .
ROGOBA, M. , MITCHELL, J. A. , AND WISEMAN,
R. F. 1 9 5 1 a A s e l e c t i v e m e d i u m f o r t h e
i s o l a t i o n a n d e n u m e r a t i o n o f o r a l a n d f e c a l
l a c t o b a c i l l i . J. Ba c t . , 6 2 , 1 3 2 - 1 3 3
ROGOs A, M, MITCHELL, J. A. , AND WISEMAN,
R. F. 1 9 5 1 b A s e l e c t i v e m e d i u m f o r t h e
i s o l a t i o n a n d e n u m e r a t i o n o f o r a l l a c t o b a c i l l i .
J. De n t a l Re s e a r c h , 3 0 , 6 8 2 - 8 8 9 .
ROGOBA, M. , TITTSLER, R. P. , AND GEIB, D. S.
1 9 4 7 Co r r e l a t i o n o f v i t a m i n r e q u i r e m e n t s
a n d c u l t u r a l a n d b i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s
o f t h e g e n u s La c t o b a c i l l u s . J. Ba c t . , 5 4 , 1 3 - 1 4 .
ROSEBURY, T. 1 9 4 4 Th e p a r a s i t i c l a c t o b a c i l l i .
Ar c h . Pa t h . , 3 8 , 4 1 3 - 4 3 7 .
ROSEBu RY, T. , LINTON, R. W. , AND BUCHBINDER,
L. 1 9 2 9 A c o m p a r a t i v e s t u d y o f d e n t a l a c i -
d u r i c o r g a n i s m s a n d La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s .
J. Ba c t . , 1 8 , 3 9 5 - 4 1 2 .
SULLIVAN, H. R. , STILL, J. L. , AND GOLDSWORTHY,
N. E. 1 9 3 9 Ac i d p r o d u c t i o n a s a b a s i s f o r
c l a s s i f y i n g l a c t o b a c i l l i f r o m c a r i o u s t e e t h .
J. De n t a l Re s e a r c h , 1 8 , 5 1 3 - 5 2 4 .
TILDEN, E. B. , AND SVEC, M. 1 9 5 0 Ty p e s o f
l a c t o b a c i l l i i s o l a t e d f r o m s a l i v a . J. De n t a l
Re s e a r c h , 2 9 , 6 5 9 .
TITT5 LER, R. P. , GEIB, D. S. , AND ROGOSA, M.
1 9 4 7 Ta x o n o m y o f t h e g e n u s La c t o b a c i l l u s ,
w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o c o r r e l a t i o n s o f d i f -
f e r e n t i a l c h a r a c t e r i s t i c s . J. Ba c t . , 5 4 , 1 2 - 1 3 .
ULICNY, H. P. 1 9 3 6 Co m p a r a t i v e s t u d i e s o f
La c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s a s s o c i a t e d w i t h c a -
r i e s . J. De n t a l Re s e a r c h , 1 5 , 3 2 6 .
WARNER, M. E. , AND ARNOLD, L. 1 9 4 1 Mo r p h o -
l o g i c a l , b i o c h e m i c a l , a n d s e r o l o g i c a l s t u d y o f
a c i d u r i c b a c i l l i . J. De n t a l Re s e a r c h , 2 0 , 4 9 -
5 8 .
WEINSTEIN, L. , ANDERSON, T. G. , AND RETTGER,
L. F. 1 9 3 3 An a t t e m p t t o d i s s o c i a t e c e r t a i n
o r a l a n d d e n t a l s t r a i n s o f l a c t o b a c i l l i a n d s o m e
n o t e s o n d i f f e r e n t i a t i o n o f t h e r o u g h v a r i a n t s
f r o m i n t e s t i n a l l a c t o b a c i l l i . J. De n t a l Re -
s e a r c h , 1 3 , 3 2 3 - 3 2 8 .
1 9 5 3 1 6 9 9

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