Nyregyhzi Fiskola

Agrr s Molekulris Kutat Intzet

Dr. Dinya Zoltn

Szathmry Mnika Nagyn Uhrin Henriett Dr. Varga Csaba Dr. Mth Endre

BIOORGANIKUS KMIA GYAKORLATOK I.

Nyregyhza, 2008.

Tartalomjegyzk

ELSZ
Jegyzetnk elsdleges clja a biolgus kpzs keretben a bioanalitikus szakirny kpzsben
rsztvevk

bioorganikus

kmiai

ismereteinek

gyakorlati

elmlytse. A jegyzettel

termszetesen a biolguskpzsben rsztvevk mellet a krnyezettan s kmia szakos

hallgatk is eredmnyesen elmlythetik gyakorlati tudsukat. Msodlagos clunk
megalapozni a kpzs kvetkez szakaszait jelent magasabb szint mszeres analitika
gyakorlatokat. Jegyzetnk egyben PRAKTIKUM s MUNKAFZET is. Alapvet clunk volt
hogy a hallgatk korbbi elmleti s gyakorlati trgyaira ptve, olyan feladatokat
vlogatassunk ssze, melyek valban gyakorlatilag mlytik el a hallgatk elmleti ismereteit
s szmukra gyakorlati jrtassgot adnak bizonyos laboratriumi alapeljrsok, alapismeretek
mvelsre. Alapvet clunk az elvgzett gyakorlatokkal megalapozni a bioorganikus
vegyletek krben vgzend klasszikus kvalitatv analitikai tjkoztat jelleg vizsglatokat
valamint egyszer gyakorlati alapismereteket adni a mszeres analitikai vizsglatokat
megelz izolcis eljrsokbl. A jegyzet eredmnyes hasznlatnak alapjt a megfelel
elmleti trgyak jelentik. A laboratriumi gyakorlat elfogadsnak elfelttele a kzvetlen
megllaptsok, adatok megadsa s helyes rtkelse. Ezen jegyzet egyben KSRLETI
JEGYZKNYV is, az res oldalak biztostjk a helyet, lehetsget a megfigyelsek,
feljegyzsek, kvetkeztetsek s szmszer, valamint grafikus eredmnyek rgztsre,
dokumentlsra. A jegyzknyvi rszt a gyakorlat elvgzse sorn a folyamatosan,
eszttikusan kell vezetni, hiszen az egyes gyakorlatok valamint a teljes flv rtkelshez ez
jelenti az alapot. A jegyzetnkben tbb gyakorlat van, mint amennyit a tanterv ltal
megszabott gyakorlati rakeretben el lehet vgezni. Ez azzal magyarzhat, hogy a gyakorlati
tematiknk nem merev, fokozatosan bvtjk, talaktjuk az ignyeknek megfelelen.
E helyen is ksznetet mondunk mindazoknak, akik hozzjrultak ahhoz, hogy jegyzetnk
megjelenhessen. Ksznjk Dr. Mth Endrnek, hogy a jegyzet megrst tmogatta s a
kziratot. Kvnjuk, hogy a felhasznl hasznos gyakorlati ismeretekkel gazdagodjon.
Nyregyhza, 2008. februr

MINSGI ELEMANALZIS
A biolgiai /termszetes/ eredet vegyletekben, anyagokban a szn, a hidrogn s az oxign
utn a nitrogn, a kn, a foszfor s a halognek a legjellemzbbek. Minsgi
meghatrozsuknak tbbfle mszeres analitikai eljrs /pl. tmegspektrometria (MS),
rntgenfluoreszcens spektrometria (XRF), stb./ ismeretes, de szmos esetben az egyszer,
kalsszikus kmcs mdszernek is van ltjogosultsga.

1. HETEROATOMOK (N, S, Hlg) KIMUTATSA

FIGYELEM! A ksrletek vgrehajtsnak teljes idtartama alatt a vdszemveg s
gumikeszty viselse ktelez!
1.1 Heteroatomok kimutatsa lgos mlesztssel
1.1.1

Nitrogn kimutats
Kb. 100 mg kmcsbe helyezett anyagot 2 csepp vzzel megnedvestnk, majd 2 szem
klium-hidroxidot adunk hozz, s a fogval tartott kmcs tartalmt Bunsen-lnggal
vatosan melegtve megmlesztjk. A kmcs szjhoz tartott fenolftalein oldattal
megcseppentett szrpapr vrs szn lesz.

1.1.2

Kn kimutats
A nitrogn kimutatsnl (1.1.1 pont) nyert lgos(!) mledket csapvzzel lehtjk
majd 8 ml vizet adunk hozz s redsszrn tszrjk. A kapott szrletet hrom
kmcsbe egyenl arnyban elosztjuk /a b c/. Az egyik szrlet rszhez /a/ 3-4
csepp tmny ssavat adunk s megforraljuk. A kmcs szjhoz lom-acetttal
megcseppentett szrpaprt tartunk majd a kmcsbe 2-3 csepp 0.2 M-os briumkloridot adunk. Rgztjk az szlelt vltozsokat. Az lomacettos reakcit vgezzk
el gy is, hogy a tmny ssavval forralt oldat felhez a lehls utn 1-2 ml 10%-os
(v/v) ecetsavat, majd 3-4 csepp 10%-os (v/v) lom-acettot adunk.

1.1.3 Halogn (Hlg) kimutats

Az 1.1.2 pont alatti msodik /b/ szrletrszhez 2-3 csepp tmny saltromsavat majd
ezt kveten 2-3 csepp 0.1 M-os ezst-nitrt oldatot adunk. Megfigyeljk s rgztjk
a vltozsokat. Pozitv prba /csapadk kivls!/ esetn a csapadkrl lentjk az
oldatot, majd a csapadkhoz kb. 1 ml higtott (1:5 v/v) ammnium-hidroxid oldatot
adunk. Ha a csapadk

fehr szn s az ammnis oldatban felolddik: a vizsglt anyag

klrtartalm;

srgsfehr szn s nehezen olddik: brm tartalomra utal,

srgsszn s nem olddik fel: a halogn jd.

1.2 Heteroatomok kimutatsa KALA-mdszerrel

1.2.1

Nitrogn kimutats
Kb. 100 mg vizsgland anyagot szraz kmcsben vatosan kb. 30 mg vzmentes
/elzleg kiizztott!/ ntrium-karbont s ntrium-tioszulft 9:1 (m/m) arny
keverkkel a kmcs oldaln kezdve a zrtvg fel halad melegtssel
megolvasztunk. Vrunk 1-2 percig, majd a kmcsvet csapvzzel lehtjk. A
kmcsben lv anyagkeverkhez 6 ml 2 M-os saltromsavat adunk s az oldatot
redsszrn msik kmcsbe szrjk. Ezen szrlethez 1 csepp 10%-os (m/v) vas(III)klorid oldatot adunk. Pozitv prba esetn mlyvrs sznezds kpzdik.

1.2.2

Kn s halogn kimutats
Kb. 100 mg vizsgland anyagot tiszta porcelntgelyben kb. 100-120 mg mangndioxid s klium-hidroxid 9:1 (m/m) arny keverkkel homogenizlunk, majd
felmelegtjk s enyhn 1 percig izztjuk. A tgelyben lv maradkhoz lehts utn 6
ml vizet adunk s ezt az oldatot forrsig melegtjk. Lehls utn redsszrn
leszrjk s egyenl arnyban hrom kmcsbe elosztjuk /a b c/.

1.2.2.1 Kn kimutats
Az 1.2.2 pont alatti szrlet els rszhez /a/ 5-6 csepp 2 M-os ssavat majd ezt
kveten

2-3

csepp

0.2

M-os

brium-klorid

oldatot

adunk.

Rgztjk

megfigyelsnket.
1.2.2.2 Halogn kimutats
Mint az 1.1.3 pont alatt.
A gyakorlat s faladat rvnyessge:
-

Az 1.1 s 1.2 pontok alatti mdszerekkel a szemlyenknt kiadott vegyletekkel a

nitrogn-, kn- s halogntartalom vizsglata, dokumentlsa;

A kiadott ismeretlen-ben tallhat heteroelemek kimutatsa s az eredmnyek

dokumentlsa.

Ha a kiadott anyagok a gyakorlatot vgz hibjbl a gyakorlat elvgzse eltt elfogynak

vagy megsemmislnek az adott gyakorlat rvnytelen, ismeretlen esetben a teljes gyakorlat
rvnytelen.

2. LETTANILAG LEGFONTOSABB KATIONOK KIMUTATSA

A dnt fontossg kationok (Na+, K+, Mg2+, Ca2+) az emberi test tmegnek kb. 1-1.1%-t,
mg a mikroelemek (Fe, Zn, Cu, stb.) kb. kevesebb mint 0.01%-t alkotjk.
Gyakorlati szinten nem rt az ezekre vonatkoz korbbi kvalitatv analitikai kmiai
ismereteket feleleventeni, kiegszteni.
2.1

Ntrium kimutats
Kb. 100 mg minta 2 ml vzzel vagy 10%-os (v/v) etil-alkohollal kszlt oldathoz
inhomogenits esetn az oldatot szrjk meg! 2 ml 1.5 M-os szda (Na 2CO3)oldatot
adunk s forrsig melegtjk. Az oldathoz 4 ml klium-[hexahidro-antinomt(v)]
oldatot adunk s ismt forrsig melegtjk. Az oldatbl lehlse utn ntrium ion
jelenlte esetn fehr csapadk [Na[Sb(OH)6]] vlik le.

2.2

Klium kimutats

2.2.1

kb. 100 mg minta 2 ml vzzel vagy 10%-os (v/v) etil-alkohollal kszlt oldathoz 1 ml
1.5 M-os Na2CO3 oldatot adunk majd forrsig melegtjk. A lehttt oldathoz 2.2 ml
1M-os borksav oldatot adunk. K+ jelenlte esetn fehr kristlyos csapadk (kliumhidrogn-tartart) vlik le.

2.2.2

Kb. 400 mg minta 1 ml vzzel kszlt oldathoz 1 ml 10%-os (v/v) ecetsavat, majd 1
ml 10%-os (m/v) ntrium-hexanitro-kobaltt [III] vizes oldatot adunk. K+ ionok
jelenlte esetn mly srga szn csapadk vlik le. (Vigyzzunk: a reakcit az NH 4+
ionok is adjk!).

2.3

Magnzium kimutats
Kb. 20 mg minta 2 ml vzzel kszlt oldathoz 1 ml 10%-os (v/v) ammnium-hidroxid
oldatot adunk. A levlt fehr csapadk 10%-os (m/v) ammnium-klorid oldatban
felolddik. Ehhez a tiszta oldathoz 1 ml 20%-os (m/v) Na2HPO4 oldatot adva fehr
kristlyos csapadk vlik le Mg2+ ionok jelenlte esetn.

2.4

Klcium kimutats

2.4.1

Kb. 10 mg vizsgland mintt 2 ml vzben oldunk (ha szksges pH=7.0-ra lltjuk az

oldatot 0.1 M-os NaOH oldattal vagy 0.1 M-os HCl oldattal) majd 1 ml glioxalhidroxianil reagenst, azt kveten 1 ml 0.1M-os NaOH-t, 1 ml 0.1 M-os Na 2CO3
oldatokat s 3 ml kloroformot adunk az elegyhez amit ersen sszerzunk. A
kloroformos fzis Ca2+ jelenlte esetn vrs szn lesz.

2.4.2

Kb. 10 mg vizsgland anyagot 2 ml ecetsavban oldunk s nhny kristlynyi /2-3mg/

K2[Fe(CN)6]-t adunk az oldathoz. A tiszta oldatbl Ca2+ jelenlte esetn fehr csapadk
[(NH4)2[CaFe(CN)6]] vlik le.

2.5

Cink kimutats
Kb. 100 mg mintt 5 ml vzben oldunk s 0.2 ml 6 M-os NaOH oldatot adunk hozz.
Fehr csapadk kpzdik ami tovbb 6 M-os NaOH oldat hozzadsval felolddik.
Ezen oldat 10 ml 2 M-os NH4Cl oldattal elegytve tovbbra is tiszta maard, de 0.1 ml
0.1 M-os ntrium-szulfid oldat hatsra fehr pelyhes csapadk vlik le.

2.6

Vas kimutats

2.6.1

Kb. 100 mg 1 ml vzben oldott minthoz 1 ml 10%-os (m/v) K 3[Fe(CN)6] oldatot adva
0.1 M-os hg ssavban nem oldd kk szn csapadk kpzdik:
Fe2+ + [Fe(CN)6]3-

Fe3+ + [Fe(CN)6]4Fe3+

[FeFe(CN)6]kk
2.6.2

Fe[FeFe(CN)6]3
rosszul oldd kk csapadk

kb. 100 mg minta 3 ml vzzel kszlt oldathoz 1 ml 1 M-os HCl-t s 1 ml 10%-os

(m/v) KSCN oldatot adunk. A kpzd vrs szn oldat felben 5 ml izopentilalkoholt s 5 ml dietil-tert adunk s az elegyet jl sszerzzuk. Kb. 5 percig llni
hagyjuk. A szerves fzis rzsaszn lesz. Az eredeti vrs szn oldat msik felhez 2
ml 10%-os HgCl2 oldatot adva az eredeti vrs szn eltnik. (A Hg 2+ ionok kiszortjk
a vrs komplexbl az Fe3+ ionokat!)

Feladatok:
1. A kiadott mintk 2.1 2.6.2 mdszerekkel trtn vizsglata, az szlelsek
dokumentlsa rgztse.
2. Az ismeretlen jellemz fmionjnak meghatrozsa.

3. LETTANILAG FONTOS SZERVES ANIONOK KIMUTATSA

Az adott anionnak megfelel szerves sav a minta vizes oldatnak savanytsa utn hasonlan
kimutathat.
3.1. Acett ion kimutatsa
Kb. 100 mg mintt 100 mg oxlsavval eldrzslnk s kmcsbe helyezzk. A kmcsvet
melegtve mind az ersebb sav (oxlsav) kiszortja a gyengbbet (ecetsav) a sjbl,
ecetsav szag rezhet.
CH3COO- + (COOH)2 CH3COOH + HOOC-COO3.2. Citrt-ion kimutatsa
Kb. 30 mg vizsgland mintt 2 ml vzben oldunk s 2 ml 0,1 M-os knsav oldatot, majd 1 ml
0,1 M-os KMnO4 oldatot adunk a kmcsbe, amit enyhn melegtve az oldat elszntelenedik.
A citrt-ionbl citromsav, abbl aceton kpzdik.
Egyenlet
/A kpzd aceton a ketonokra jellemz reakcikkal (lsd. ksbb!) kimutatand./
Az elszntelenedett oldathoz 2 ml 0,1 M-os knsav oldatot, nhny kristly nitroprusszidntriumot s kb. 30 mg szulfanil-savat adunk. Az gy kapott keverkhez addig csepegtetnk
tmny ammnium-hidroxidot, mg a szulfanil-sav felolddik. A szulfanil-sav felolddsa
utn az oldat ibolya szn lesz.
3.3. Laktt-ion kimutatsa
Kb. 100 mg mintt 3 ml vzben oldunk, majd ehhez az oldathoz 1 ml teltett brmos vizet s
0,5 ml 1 M-os knsav-oldatot adunk. A kmcsvet addig melegtjk, mg az oldat
elszntelenedik. Ehhez a szntelen oldathoz hozzadunk kb. 2 g ammnium-szulftot s
cseppenknt 0,2 ml 1 M-os knsavval kszlt, 10 %-os (m/v) nitroprusszid-ntrium oldatot.
Ezt kveten 1 ml tmny ammnoium-hidroxidot adunk az elegyhez. llni hagyjuk 30
percig szobahmrskleten. A kt folyadkrteg hatrfelletn sttzld gyr jelenik meg.
( a brmos vz a tejsavat piroszlsavv oxidlja, melybl dekarboxilezssel acetaldehid
keletkezik, ami nitrprusszid ntriummal adja az un. Legal-prbt.)

Vgezzk el a ksrletet gy is, hogy a reakcielegyhez nem adunk knsavas nitroprusszid

ntrium oldatot s ammnium-hidroxidot, hanem az aldehidekre jellemz reakcikkal
mutatjuk ki a kpzdtt acetaldehidet.
Egyenlet
3.4. Szalicilt-ion kimutatsa
Kb. 10 mg vizsgland anyagot 2 ml vzben oldunk, majd 0,5 ml 5 %-os (m/v) FeCl 3 oldatot
adunk hozz. Az oldat ibolya szn lesz, mely szn 0,1 ml ecetsav hozzdsra is megmarad.
3.5. Tartart-ion kimutatsa
3.5.1. A vizsgland anyag 10 mg-jt 4 ml vzben oldjuk s 0,05 ml 1 %-os (m/v) FeSO 4,
majd 0,05 ml 1:1 (v/v) arnyban hgtott hidrogn-peroxid oldatot adunk hozz. Az oldat
tmenetileg srgs szn lesz, majd elszntelenedik. Az elszntelenedett oldathoz 1 ml 1M-os
NaOH-ot adva intenzv kk szn alakul ki. Ez az n. Fenton-reakci, melyben a hidrognperoxid Fe2+ ionok jelenltben melyek Fe3+ - oxidldnak a brksavat gyks
reakciban dihidroxi-fumrsavv alaktja, majd ezek egyttesen ibolys-kk szn komplexet
kpeznek.
Egyenlet
Kb. 10 mg vizsgland anyagot 2 ml vzben oldunk, majd az oldathoz 0,1 ml 10 %-os (m/v)
klium-bromid, ezt kveten 0,1 ml 1 %-os (m/v) rezorcin oldatot s vgl 2 ml tmny
knsavat adunk a minta vizes oldathoz. Az oldat enyhe melegtsre sttkkre sznezdik. Az
oldatot folyvz alatt lehtjk s 10 ml hideg vzbe ntjk, gy egy vrs szn oldatot
kapunk. /Ez az n. PESEZ-reakciban a brksavbl dekarboxilezs, dekarbonilezs, majd
dehidratci utn kpzd glikolaldehid glioxil-savv oxidldik. A glioxil-sav kt molekula
rezorcinnal difenil-metn szrmazkk kodenzldik, ami gyrzrdssal laktonn alakul.
Ez a lakton a bromid-ionokkal szubsztitcis reakciba lp s kinoidlis-szerkezett
dehidratldik. Ez a dehidratlt vegylet tmny knsav hatsra intenzv kk sznt mutat.
Egyenlet
Feladatok:
1.

A kiadott mintkkal a 3.1.-3.5. gyakorlatok vgrehajtsa, majd az rtkelsek

dokumentlsa, rgztse.

2.

Az ismeretlen jellemz szerves anionjnak azonostsa.

4. SZERVES VEGYLETEK OLDKONYSGI OSZTLYBA SOROLSA

A szerves vegyleteket klnbz oldszerekben val oldkonysgnak alapjn kilenc

oldkonysgi osztlyba szoks sorolni (lsd. 1. tblzat). Az osztlyba sorols folyamatbrja
mely alapjn a feladat megoldand az 1. sz. brn tallhat.
Gyakorlat vgrehajtsa:
A szilrd mintt drzsmozsrban elportjuk, majd pontosan 100 mg-os
mennyisgeket (annyiszor 100 mg-ot, amennyi az 1. sz. folyamatbra alapjn
szksges) kimrnk belle.
A folykony homogn mintbl a szksges szm 200 l-es mennyisgeket
kimrjk.
Az adott oldszerbl 3 cm3-t adunk a minthoz s erteljesen ha lehet,
kmcsrzt (Vortex) alkalmazva sszerzzuk. Vigyzzunk, hogy kzben a
kmcs tartalmnak hmrsklete ne vltozzon! Ajnlatos az oldat, vagy
szuszpenzi pH-jnak meghatrozsa is.
Ha a vegylet 3 cm3 oldszerben 2 percen bell felolddott, olddst pozitvnak
tekinthetjk.
Vzben trtn oldsnl enyhe melegts alkalmazand, de az szlelst
szobahmrsklet mintknl vgezzk!
Feladat:
1. Vgezzk el a kiadott mintkkal az oldkonysgi osztlyozst, jegyezzk fel
szlelseinket (sznvltozs, gzkpzds, csapadklevls, stb.)!
2. Soroljuk be a kiadott ismeretlent oldkonysgi osztlyba!

1. sz. tblzat Oldkonysgi osztlyok s az egyes osztlyokba tartoz jellegzetes szerves vegyletek tpusai
Oldkonysgi osztly
S1
S2
A1
A2
B
M
N1
N2
Egy funkcis Tbb (azonos, Ers, vagy Gyenge
Bzikus
Semleges N Semleges
Semleges N,
csoport
klnbz)
kzepesen savas
vegyletek
vagy
S N, vagy S vagy
S
tartalm
funkcis
ers savas vegyletek
tartalm
atomot
atomot nem
vegyletek
csoport
vegyletek C>5
vegyletek
nem
tartalmaz
C 5
tartalm
C> 5
tartalmaz vegyletek
vegyletek
vegyletek C>9
C 5
5<C<9
Alkoholok
Karbonilvegyletek
(aldehidek,
ketonok, savak,
szterek, stb.)
Fenolok
Aminok
Nitrilek

Kett s
tbbrtk
alkoholok
Polihodr
oxi-vegyletek
(sznhidrtok)
Tbbrt
k karbonsavak
Aminosa
vak
Poliamin
ok
Aminoalkoholok
Amidok
Szulfons
avak
Sk

Karbonsavak
Nitro s/vagy
klrfenolok
szulfonsavak

fenolok
nitrovegyletek
aminosavak
tioalkoholok
tiofenolok
oximok
SO2-NH2
csoport
tartalm
vegyletek

Aminok
Hidrazin
szrmazkok
Aminosavak
Ikerionos
szerkezetek

S. oldhat; A: savas; B: bzikus; M: kevert; N: semleges; I:inert

Aroms aminok
Szekunder, vagy
tercier amidok
Nitrilek

Nitrz, azovegyletek
N-oxidok
Tiolok
Szulfidok,
diszulfidok
Szulfoxidok
Szulfonok

Alko

ek
tere

Karb
onilvegyletek
(savak
nem)

Alkine

Alkn

holok

k
Polin

ek

Alkoh

olok

terek
Karbo
nil-vegyletek
(savak nem)

I
Inert
vegyletek,
sznhidrognek
s
halognszrmazkaik.

Alknok
Ciklo-alknok
Aroms sznhidrognek
Alkil-, s aril halogenidek

5. GYAKORLAT
SZERVES FUNKCISCSOPORTOK REAKCII/KIMUTATSA
A szerves funkciscsoport prbk sok esetben igen hasznosak az elzetes tjkozdsra,
bizonyos funkciscsoportok jelenltnek valsznstsre, de egyrtelm azonosts csak a
mszeres szerkezetvizsgl mdszerek (IR, MS, NMR) eredmnyei alapjn lehetsges.
5.1. Savi vagy bzikus jelleg kimutatsa
A savi vagy bzikus jelleg a minta vizes vagy nem vizes oldatnak titrimetrijval, pH
mrsvel vagy egyszer kmcsreakcikkal lehetsges.
5.1.1. Vzben oldhat anyagok esetn
Kb. 50 mg mintt 5 ml kiforralt vzben oldunk s a kmhatst 1-2 csepp metilvrs
indiktorral szleljk.
5.1.2. Vzben nem oldhat anyagok esetn
Kmcsbe 5 ml kiforralt vzhez 0,5 ml 0,01 M-os NaOH-oldatot s 3-4 csepp fenolftalein
indiktor oldatot adunk. A vrs oldathoz kb. 10 mg vizsgland anyagok sznunk. A
fenolftalein vrs sznnek eltnse vagy elhalvnyodsa savas funkciscsoport jelenltre
utal.
5.1.3. Bzikus funkciscsoport kimutatsa nem vizes kzegben
1 ml jgecethez 1 csepp gencinibolya indiktort adunk, majd az oldat sznt nhny csepp
0,02 M-os jgecetes perklrsav (HClO 4) oldattal srgszld sznre belltjuk. Ehhez az
oldathoz kb. 20 mg vizsgland anyagot adunk. Pozitv reakci esetn a srgszld szn
ibolyskk vagy kk sznre vltozik.
5.2. Teltetlen sznhidrognek (C=C, CC) kimutatsa
5.2.1. Brmos-prba
Kb. 10 mg vizsgland anyagot 2 ml jgecetben oldunk s 5-6 csepp jgecetes brmoldatot
adunk hozz. Pozitv reakcinl a brmnak a teltetlen ktsre val addcija miatt a brm
vrs szne eltnik.
Megjegyzs
A reakci diklrmetnos vagy szntetrakloridos mintaoldattal (kb. 10 mg minta oldva
200 l adott oldszerben) s megfelel oldszeres 2-4 csepp 2% (v/v) brmoldattal is
elvgezhet;

Szmos, sok C=C vagy CC ktst tartalmaz vegylet (pl. fenolok, enolok,
aromsok, stb.) nem addcis, hanem szubsztitcis reakciban reaglnak a
brmoldattal, elszntelentik azt.

5.2.2. Baeyer-reakci
A C=C vagy CC ktsek semleges kzegben knnyen oxidlhatk.
Kb. 10 mg mintt 1 cm3 vzben vagy acetonban oldunk s hozzadunk 2 csepp 1%-os (m/v)
KMnO4 oldatot. 5-ig vrunk s nha sszerzzuk az oldatot.
A prba akkor pozitv, ha legalbb 3 csepp KMnO4 oldat lila szne megvltozik az oldatban.

Megjegyzs: a prbt szmos knnyen oxidlhat vegylet (pl. primer-, szekunder alkoholok,
tiolok, aldehidek, fenolok, stb.) is adja.
5.3. Aroms sznhidrognek kimutatsa FRIEDEL-CRAFTS-reakcival (aluminium-klorid
prba)
A FRIEDEL-CRAFTS-reakciban az aroms sznhidrognekbl trifenil-metn
szrmazkokon t sznes (pl. benzol s alkil szrmazkainl narancsvrs; aril-halogenideknl
vrs; naftalinnl kk; fenantrn esetn bborvrs, antracn esetn zld, stb.) karbniumsk
kpzdnek.
Kb. 100 mg (100 l) minthoz adjunk 2 cm 3 kloroformot, rzogatssal oldjuk fel azt. Az
oldathoz adjunk 300 mg vzmentes AlCl3-at. Nhny perc mlva figyeljk meg az oldat
esetleg a kmcs faln maradAlCl3 kristlyok sznt. (lass reakcinl az elegyet enyhn
melegthetjk!).
Megjegyzs: Szmos aroms gyrt tartalmaz vegylet (pl. karbonil- vagy nitrovegyletek) nem adja ezt a prbt.
5.4. Szerves halognszrmazkok kimutatsa
Akkor alkalmazzuk, ha az elemanalziskor halogn jelenltt szleltk.
5.4.1. BEILSTEIN-prba
Kiizztott rzdrtot mrtsunk kb. 10 mg minta 1ml vzzel kszlt oldatba vagy elg ha 1-2
kristly rajtamarad a rzdrt felletn! -, majd a drtot tartsuk gzlngba, ahol az illkony
rzhalogenidek miatt kkeszld lngfestst szlelnk. (Vigyzat! A prbt a br vegyletek is
adjk).
5.4.2. Alkoholos ezst-nitrt prba

R-X
Ar-X

hidegen
+AgNO3

AgX csapadk + (R- vagy Ar-O-NO3)

melegen

Kb. 40-60 mg (2-3 csepp) vizsgland mintt adunk kmcsben lv 2 cm 3 2%-os (m/v)
etilalkoholos AgNO3 oldathoz s jl sszerzzuk. Az elegy szobahmrskleten ll 4-ig s ha
nem szlelnk csapadk-levlst (AgX) jl melegtsk meg a kmcsvet. Figyeljk meg
mennyi id mlva zavarosodik meg az oldat, milyen szn a csapadk, majd adjunk hozz 1
csepp 10%-os HNO3 oldatot. Ha a csapadk nem olddik fel, akkor az valban ezsthalogenid
(ha felolddik karbonsav-ezsts!).
Megjegyzs: A vzoldhat vegyletek (pl. sk) ltalban mr hidegen csapadkot adnak
AgNO3 oldattal. A jd vegyletek ltalban lassabban reaglnak mint a brm vagy klr
szrmazkok.

5.5. Hidroxivegyletek (alkoholok, enolok s fenolok) kimutatsa

5.5.1. Etilalkohol kimutatsa
Kmcsben elhelyezett 1 cm3, 3%-os (m/v) klium-dikromt tartalm 10%-os (v/v) knsav
oldathoz lassan rzogats mellett csepegtessk hozz az etilalkoholt. Figyeljk meg, hogy
mennyi alkohol hozzadsa utn kvetkezik be a sznvltozs. (A reakci kb. 5 alatt
lejtszdik)
5.5.2. Etil- s metil-alkohol megklnbztetse
Egy-egy kmcsbe ntsnk 1-1 cm3 etil- illetve metil-alkoholt, majd mindketthz 3 csepp
5%-os (v/v) foszforsavat, illetve utna 6 csepp 3%-os (m/v) KMnO 4 oldatot adunk. Kb. 5
perces lls utn adjunk mindketthz 0,5 ml teltett ntrium-oxaltot, 4 ml 75%-os (v/v)
knsavat, majd 4 ml 2%-os (m/v) kromotrpsav vizes oldatot adunk. A kmcsveket 20-ig
90C-hmrskleten tartjuk, majd csapvzzel lehtjk. rtkeljk a ksrletet, rgztjk a
megfigyelseket.
5.5.3. Crium-ammnium-nitrt prba
Az alkoholok crium-ammnium-nitrttal szerkezetktl fgg szn komplexet kpeznek.
10 mg (vagy 100 l) minta 500 l dioxnnal kszlt oldathoz 200 l reagens oldatot (10g
crium-ammnium-nitrt 25 ml 2M-os HNO3-ban enyhe melegtssel oldva) adunk s
megfigyeljk a vltozsokat.
megjegyzs: a reakcit a sznhidrtok is adjk.
5.5.4. Lucas-prba
Alacsony sznatomszm (C6) alkoholok rendsgre kapunk informcit a Lucasprbval.
R-OH

ZnCl2
HCl

[R+Zn(OH)Cl2-]

R-Cl + H2O + ZnCl2

A kpzd alkil-halogenid (R-Cl) a reakcielegy opalizcijval szekunder s tercier

alkoholoknl kdkpzdst, majd 5-10 mlva kt fzis megjelenst okozza. A primer
alkoholok szobahmrskleten nem reaglnak, esetnkben zavarosods bekvetkezik, de
fzissztvls nem.
0,5 cm3 vizsgland minthoz (vagy 5 mg minta 200 l dioxnnal kszlt oldathoz) 5 cm 3
reagens oldatot (60g vzmentes ZnCl2 42 cm3 tmny (37%-os) ssavban - hts mellett
feloldva) adunk, majd sszerzzuk, s szobahmrskleten llni hagyjuk. Megfigyeljk,
rgztjk az idpontokat, amikor vltozsokat, reakcit szlelnk.
5.5.5. JONES-reakci
Primer s szekunder alkoholok krmsav (CrO3 + H2SO4) hatsra aldehidd, ketonn
oxidldnak, mikzben a Cr6+ Cr3+ reakci jellegzetes sznvltozssal jr.
10 mg (50 l) mintt 1 cm 3 acetonban oldunk, majd 10 csepp reagens oldatot (5g CrO 3 5 cm3
ccH2SO4-ban oldva, majd kevergets mellett vatosan, 15 cm3 vzhez ntve) adunk hozz s
megfigyeljk a vltozsokat.
5.5.6. Fenolok s enolok reakcija Fe3+ ionokkal

A fenolos vagy enolos hidroxilcsoportot tartalmaz vegyletek Fe 3+ ionokkal klnbz szn

(kk, zld, vrs, stb) komplexet kpeznek.
6*Ar-OH

3*enol

Fe3+

Fe3+

Fe(ArOH)6 + 3H+

[Fe3+(enolt-)3] + 3 HCl

Kb. 100 mg mintt 10 cm3 vzben ha szksges forralssal oldunk (az oldatot szksg
esetn megszrjk!), majd a tiszta oldathoz 50 l (1 csepp) 1 %-os (m/v) FeCl 3 oldatot adunk.
A jobb szlels rdekben clszer a kialakult szerves oldatot a vele azonos trfogat minta
nlkli FeCl3 oldat sznvel sszehasonltani. A minta rosszabb vzoldhatsgbl add
negatv eredmny ellenrzse cljbl vgezzk el a prbt a minta etilalkoholos oldatval is!
5.5.7. Brmosvz-prba
A reakci alapja az, hogy a fenolok aroms gyrje elektronszv szubsztituens (pl. NO 2,
COR, COH, stb.) hinyban knnyen brmozdik. Ezen reakciban fehr, hatrozott
olvadspont, vzben kevss/alig oldd, kristlyos csapadk keletkezik
10 mg (50 l) mintt szksg esetn melegtssel 2 ml vzben oldunk (ha zavaros az oldat
megszrjk!), majd a tiszta oldathoz lassan, cseppenknt, rzogatva brmos vizet adunk
addig, amg a brm halvny szne megmarad. A fehres csapadk megjelense jelzi a pozitv
prbt.
5.5.8. Saltromsav-prba
Fenolok (a nitro- s para-szubsztitult szrmazkok kivtelvel) saltromsavval parahelyzetben knnyen nitrozldnak, majd a nitroznvegylet egy jabb fenol molekulval
reaglva indofenol jelleg - pH-ra rzkeny szn termket eredmnyeznek.
10 mg (50 l) minthoz vagy 10 mg (50 l) minta 250 l dioxnnal kszlt oldathoz 3
csepp reagenst (100mg NaNO2 s 5 cm3 cc H2SO4 oldata) adunk s kb. 2-ig llni hagyjuk,
majd 3 cm3 vizet adunk hozz. Megfigyeljk az oldat eredeti, majd nhny csepp 1M-os
NaOH oldat hatsra fellp sznt.
5.5.9. Triazil-metn-sznezk prba
A szabad orto helyzet fenolok lgos kzegben kloroformmal formilezdnek (REINERTIEMANN reakci), majd az orto-hidroxi-benzaldehid szrmazk jabb fenol molekulkkal
triazil-metn szrmazkot kpez, ami oxidcira sznes kinoidlis formt vesz fel.
100 mg minta 1 cm3 vzzel kszlt oldathoz 6 csepp kloroformot s 0,3 cm3 10%-os (m/v)
NaOH oldatot adunk, sszerzzuk, s enyhn melegtjk. Lehls utn 50 l hidrognperoxid oldatot adunk az elegyhez. Megfigyeljk s rgztjk a vltozsokat.
5.6. Oxocsoport kimutats
A karbonilcsoportot tartalmaz vegyleteket oxovegyleteknek nevezzk.
Elssorban az aldehideket (R1=H, R2=C), illetve a ketonokat (R1=R2=C) soroljuk ide, a
karbonsavakat (R1=HC, R2=OH), illetve szrmazkaikat kln trgyaljuk. A

karbonilvegyletekre az oxidcis (elssorban az aldehidekre!), az addcis s kondenzcis

reakcik a jellemzek.
5.6.1. Ntrium-biszulft prba
A prba aldehidek s egyszerbb (pl. di-alkil) reaktv ketonok kimutatsra szolgl. (A
ksrletet vgezhetjk pl. benzaldehiddel, acetonnal, stb.) Alapja a kvetkez, semleges
kzegben lejtszd addcis reakci.
R-CHO

NaHSO3

Ar-CHO

R1-CO-R2

NaHSO3

OH

R
Ar

CH
SO3Na

R1

OH
CH

R2

SO3Na

Kb. 100 mg (5-6 csepp) minthoz 1 cm 3 friss teltett ntrium-biszulfit reagenst adunk. (A
reagens frissen kell kszteni! 15 cm3 50%-os ntrium-biszulfit oldathoz 4 cm3 etil-alkoholt
adunk, a kivlt stl az oldatot megszrve hasznljuk). Az oldatot tbbszr sszerzzuk,
pozitv prba esetn fehr csapadk kpzdik.
5.6.2. Fenil-hidrazin prba
A fenil-hidrazin (vagy 2,4,-dinitro-fenil-hidrazin) prba kondenzcis reakcin alapul,
melynek eredmnye srga (narancssrga) szn csapadk. Elssorban az aldehidek, ketonok s
gy az egyszer sznhidrtok kimutatsra szolgl.
Kb. 100 mg (0,2 ml) minta 20 cm 3 etilalkohollal kszlt oldathoz mely 1-2 csepp tmny
ecetsavat is tartalmaz 3 cm3 10%-os (m/v) fenil-hidrazin reagenst adunk (A reagenst 5g
fenil-hidrazin ssavas sjnak 50 cm3 vzben enyhe melegtssel trtn oldsval lltjuk
el.) A lehlt oldathoz 9 g (kristlyvz tartalm) ntrium-acettot adunk. A kapott oldatot 10ig 100 C-on tartunk, majd szobahmrskletre htjk. Pozitv prbnl srga kristlyos
csapadk (vagy ritkbban olajos kivls) jelenik meg. A kiszrt, tkristlyostott csapadk
olvadspontja alapjn az oxovegylet azonostsra is alkalmas.
5.6.3. 2,4,-dinitro-fenil-hidrazin prba
Aldehidek s ketonok azonostsra hasonlan de rzkenyebben alkalmas mint az 5.6.2.
pont alatti egyszer fenil-hidrazin prba. A DNP-szrmazkok oldkonysga alacsony.
Kb. 2-3 csepp (50mg) mintt adunk 2 cm3 DNP-reagenshez s jl sszerzzuk. (reagens: 400
mg DNP-t 3 cm3 cc. H2SO4-be oldunk s kevers mellett vatosan, 30 cm3 desztilllt (96%
(v/v) etilalkoholhoz ntjk s az oldatot vzzel 100 cm 3 egsztjk ki, majd leszrjk.)
Narancssrga csapadk (esetleg olaj) vlik le pozitv prbnl.
5.6.4. Klium-permangant prba
A prba semleges kzegben oxidcin alapul, gy az aldehidekre (de a nem aroms teltetlen
sznhidrognekre is!) jellemz.

R-CHO

ox.

R-COOH

Kb. 20 mg (4-5 csepp) mintt 0,5 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd rzogats kzben
hozzadunk 1 ml 1%-os (m/v) KMnO4 oldatot.
Megjegyzs:
Az 5.5.5. alatt megismert oxidatv hats JONES-reagens is kitnen hasznlhat a dimetilformamidban feloldott aldehidek (gyorsan oxidldnak!) vagy ketonok kimutatsra.
5.6.5. BENEDICT-prba
A redox-reakci alifs (aromsok nem adjk) aldehidek s redukl cukrok kimutatsra
alklmas.
R-CHO + 2 CuO

R-COOH + Cu2O (csapadk)

Kb. 100 mg minta 3 cm3 vzzel kszlt oldathoz 2,5 ml reagens-oldattal forrsig melegtjk.
Az oldatbl a minta mennyisgtl fgg szn (srga, pirosas, zld) csapadk vlik le.
(negatv prba esetn az oldat tiszta marad!) (reagens: 17,3 g ntrium-citrtot s 10 g
vzmentes Na2CO3-ot 80 cm3 vzben melegtve feloldunk. Ezen oldathoz mg melegen,
kevers mellett 1,73 g rz-szulft 10 cm3 vzzel kszlt oldatt adjuk, megszrjk (ha
szksges) s 100 ml-re vzzel kiegsztjk.
5.6.6 TOLLENS-prba
Az aldehidek kimutatsaira szolgl redox-prbt melyben az Ag + ion fmezstt
redukldik (mikzben a formilcsoport /CHO/ karboxilcsoportt /COOH/ oxidldik)
ami tkrz felletknt vagy fekete csapadkknt (aroms aldehideknl) jelenik meg
ezsttkr-prbnak is nevezzk.
AgNO3 + 2NH4OH
kplet

[Ag(NH3)2]+*2OH-

[Ag(NH3)2]+ NO3- + 2 H2O

kplet + 2 Ag + 3NH3 + H2O

1 ml friss reagenshez tiszta, saltromsavval tmosott kmcsben 1-2 csepp /30 mg/
mintt adunk, majd 2-3 percig llni hagyjuk. Ha nincs vltozs, az elegyet vatosan
melegtjk. (Reagens: frissen kell kszteni: 4 ml 5%-os (m/v) AgNO 3 oldathoz kett
csepp 10%-os (m/v) NaOH oldatot adunk, majd rzogats mellett, vatosan
csepegtetve annyi 2%-os (v/v) NH4OH-t adunk hozz, hozz hogy a keletkezett Ag 2O
csapadkot feloldja, komplexbe vigye).
Megjegyzs: Bizonyos fenol-szrmazkok is pozitv prbt adhatnak!

5.6.7

FEHLING-prba
A szintn redox jelleg FEHLING-reakci taln a legismertebb aldehid-prba. Csak az
alifs aldehidek adjk, az aromsok s a ketonok nem. Ers reduklszerek pl. a
fenil-hidrazin adjk a reakcit.
kplet + 2Cu2+ + 3 OH-

kplet

2 Cu+ + 2 H2O
Cu2O /csapadk/

50 mg mint 2 ml vzzel kszlt oldathoz 1 ml reagens oldatot adunk, majd enyhn

forralva melegtjk az oldatot. Pozitv prba esetn vrs /lehet srga is/ csapadk
vlik ki.
(Reagens: a FEHLING-reagenst mindig frissen ksztjk a FEHLING I s FEHLING
II oldatot 1:1 (v/v) arny elegytsvel.
FEHLING I-oldat: 3.4 g CuSO4X 5 H2O 50 ml vzzel kszlt oldata
FEHLING II-oldat: 17.3 g klium-ntrium tartart /Seignette-s/ s 7 g NaOH 50 ml
vzzel kszlt oldata.
A kt reagens elegyben stabil, ers oxidl hats Cu2+- tartart komplex kpzdik.
Kplet
5.6.8

LIEBEN-(jodoform)-prba
A klium-jodidos jd oldattal (LUGOL-oldat) megvalstott redox-reakci pozitv
eredmnye a kmcs aljn sszegylt jellegzetes szag srga szn jodoform
/CHI3/.
kplet + 3 NaOI

kplet + 3 NaOH

CHI3 + kplet

Pozitv prbt mutatnak a kvetkez vegylettpusok:

CH3 CHO,

kplet, kplet, CH3 CH2 OH , kplet, stb.

Kb. 50 mg mintt rzogats mellett 3 ml dioxnban feloldunk. Hozzadunk 0.5 ml

10%-os (m/v) NaOH oldatot, majd lassan csepegtetve annyi reagens oldatot, melynl
az oldat szne a jdfeleslegtl stt marad. A kmcsvet 3 percig 60-65 oC-on
temperljuk (kzben a reagens cseppenknti adagolsval a stt sznt fenntartjuk!). A

temperlst megszntetve pr csepp 10%-os (m/v) NaOH oldattal megszntetjk a

jdfelesleget az oldat stt sznt majd 4-5 ml vzzel higtjuk a kmcs tartalmt s
10 percig llni hagyjuk. Pozitv prba esetn a jodoform levlik.
5.6.9

LEGAL-prba
Az -metil -, vagy metil-csoportot tartalmaz ketonok lgos kzegben nitroprusszidntriummal -helyzetben izonitrozldnak, majd sznes komplex alakul.
Reakci egyenlet
Kb. 30 mg /2 csepp/ minta 2 ml vzzel vagy 50%-os (v/v) etil-alkohollal kszlt
oldathoz 0.5 ml 10% -os (m/v) nitroprusszid-ntrium majd ezt kveten 0.5 ml 30%os (m/v) NaOH oldatot adunk. 1 perc mlva nhny csepp tmny ecetsavval
savanytjuk le az oldatot.
Diabeteszes betegek vizeletbl a keton-tesztek /pl. aceton/ kimutatsa LEGALprbn alapszik.

5.7

Karbonsavak s szrmazkaik kimutatsi reakcii

5.7.1

Hangyasav s ecetsav megklnbztetse TOLLENS- s FEHLING prbkkal

A feladatot a 5.6.6. s 5.6.7 pontoknak megfelelen vgezzk el.

5.7.2

Hangyasav kimutatsa
1 ml 5%-os (v/v) hangyasav oldathoz adjunk 1 ml 20%-os (v/v) knsav oldatot.
Melegtsk a kmcs tartalmt 60 oC-ra, majd 2 csepp 2%-os (m/v) KMnO4-oldatot
adjunk a kmcs tartalmhoz. Figyeljk meg a vltozsokat.

5.7.3

szterek lgos hidrolzise

Reakci egyenlet
Kmcsben 2 ml vzhez adjunk 200 l vagy 20 mg vizsgland anyagot, majd 0.6 ml
20%-os (m/v) ntrium-hidroxid oldatot. A kmcs tartalmt rzogats mellett enyhn
forraljuk s figyeljk meg a vltozsokat, illetve az ezeket jellemz idket.

5.7.4

Savamidok lgos hidrolzise

Reakci egyenlet

A savamidok lgos hidrolzisnl ammnia /primer aldehidek/ alkil-amin/ szekunder

aminok/ vagy dialkil-amin/ tercier amidok/ szabadul fel. Ezek a melegtett kmcs
szjhoz tartott nedves fenolftaleines szrpaprral vagy 25-os (m/v) rz-szulft
oldattal megnedvestett szrpaprral sznvltozsuk alapjn kimutathatk.
20 mg /2 csepp/ minta 1 ml 20%-os (m/v) NaOH oldat elegyt melegtjk s a kmcs
szjhoz tartott nedves kmlel paprcskot, tartunk. Megfigyeljk a vltozsokat.
5.7.5 Karbonsav-szrmazkok hidroxnsavas prbja
A klnbz alifs vagy aroms savszrmazkok /szterek, laktonok, savkloridok stb./
hidroxnsavval Fe3+ onok jelenltben vrs szn komplexeket kpeznek.

Reakci egyenlet
30 mg /3 csepp/ minthoz 1 ml 0.5 M-os etil-alkohollal kszlt hidroxil-ammniumklorid oldatot, majd 6 csepp 20%-os (m/v) NaOH oldatot adunk. Felforraljuk az
oldatot majd csapvzzel szobahmrskletre htjk. A lehlt olatot nhny csepp 1Mos 10%-os ssavoldattal pH paprral ellenrizve! pH = 3-ra lltsuk be, majd
adjunk az elegyhez 3 csepp 5%-os FeCl 3 oldatot. Figyeljk meg s rgztsk az oldat
sznvltozst.
5.8

Nitrocsoport kimutats
A prba a nitrocsoport redukcijn alapszik s elssorban az aroms nitrovegyletek
kimutatsra szolgl.
Reakci egyenlet
20 mg (4 csepp) mintt 1 ml vz s 1 ml 96%-os (v/v) etil-alkohol elegyben oldunk.
Ezutn 200 mg cinkport s 200 mg ammnium-kloridot adunk hozz, majd rzogats
mellett forrsig melegtjk s 6-8 percig llni hagyjuk. Reds szrpapron tszrjk
az oldatot s a tiszta szrlettel elvgezzk a TOLLENS-prbt (5.6.6 pont). A kapott
ezsttkr pozitv prbra utal.

5.9

Aminok fbb kimutatsi reakcii

5.9.1 Saltromsavas prba

Az aminok saltromsavval megvalstott reakcija kimutatsa s rendsgk
meghatrozsra alkalmas.

Primer alkil-aminokbl /R NH2/ saltromossav hatsra labilis diazoniumsn t

nitrogn fejldik s alkohol kpzdik. Az aroms primer aminok a diazoniums azokapcsolsos reakcival mutathat ki. A szekunder aminokbl saltromossav hatsra
ersen rkkelt N-nitrozo vegylet kpzdik, mely srga olajos formban kivlik a
reakcielegybl. Ha ms prba szekunder aminra utal, ne vgezznk saltromsavaprbt! Alifs tercier aminok nem adjk a satromsavas-prbt, de az aroms tercier
aminok saltromsavval reaglva sznes, vzben alig oldd, vegyletet kpeznek mely
lgostsra sznt vlt, az oldat rendszerint zld szn lesz.
Reakci egyenletek
0.5 ml tmny ssav s 0.5 ml vz elegyben oldjunk fel kb. 30 mg /5 csepp/ mintt
majd ss jggel htsk le 0 oC-ra az oldatot. 500 mg NaNO2 2 ml vzzel kszlt, 0 oCra lehttt oldatbl rzogats mellett addig csepegtetnk a minta httt, ssavas
oldathoz mg a saltromossav az elegyben feleslegben marad (ellenrzs: HNO2
felesleg esetn az eleggyel megcseppentett klium-jodidos kemnyts papron kk
szn folt kpzdik). Ha a NaNO 2 oldat adagolsakor srga olaj vlik ki, szekunder
amin volt jelen. Ha a kivlt olaj megszilrdul s nhny csepp 1 M-os NaOH oldat
hatsra a kivlt csapadk zld szn lesz, a prba aroms tercier aminra utal. Ha az
eredeti reakci elegy egy rszt vatosan melegtjk s gzfejldst (N 2) szlelnk,
alifs vagy aroms primer amin volt jelen. Ennek tisztzsra az eredeti httt reakci
elegy egy rszben csepegtessnk nhny csepp -naftol oldatot (reagens: 100 mg naftol oldva 2 ml 10%-os (m/v) NaOH oldatban narancsvrs /vrs szn megjelense
aroms primer amin jelenltt igazolja.
5.9.2

Alifs szekunder amin-prba

A prba alapja az alifs szekunder aminbl ammnia jelenltben szndiszulfid
hatsra kpzd ditiokarbamtok Ni2+-ionnal sznes, rosszul oldd st alkot.
Reakci egyenletek
Kb. 20 mg /2 csepp/ mintt 5 cm3 kett csepp a cc. HCl-t tartalmaz vzben oldunk.
Egy msik kmcsben 1 ml NiCl2 reagens oldathoz /reagens: 500 mg NiCl2 100 ml
vzben oldva s csepegtetve rzogatva, annyi szndiszulfidot (CS2) adunk hozz, hogy
az edny aljn a CS2 klnll cseppekben megjelenjen/ 0.5 ml tmny NH 4OH

oldatot, majd 0.5 ml mintaoldatot adunk s megfigyeljk a sznvltozst. /Zavarossg

vagy csapadk levls esetn nhny csepp cc. HCl-t adjunk a reakcielegyhez./
5.9.3

SONNENSCHEIN-prba
Tercier aminok /pl.alkaloidok/ kimutatsaira szolgl, primer s szekunder aminok nem
adjk ezt a prbt. Kb. 50 mg /5 csepp/ minta 2 ml 5%-os (v/v) ssavval kszlt
oldathoz 2 ml 1%-os (m/v) foszfor-molibdnsav oldatot adunk, mellyel a tercier amin
csapadkot ad melynek szne nhny csepp cc. NH4OH hatsra vltozik.

5.9.4

KALIGNOST-prba
A prbt csak a kvaterner aminok adjk melyek lgos kzegben tetrafenil-borttal
fehr csapadkot kpeznek. Kb. 50 mg mintt 2 ml vzben oldunk majd hozzadunk 56 csepp 2 M-os NaOH oldatot s 4-5 csepp KALIGNOST-reagenst. Fehr csapadk
kivlsa pozitv prbt jelez.

5.9.5

N-heteroaroms-prba
Nitrogn tartalm heteroaroms vegyletek / s az aroms aminok SCN- ionok
jelenltben Cu2+ ionokkal sznes, ltalban zld szn komplexet [Cu(amin) 2](SCN)2
kpeznek. 1 ml vzben oldott kb. 20 mg /2-3- csepp/ minthoz rzogats mellett 0.5 ml
0.1 M-os ammnium-rodanid (NH4SCN) oldatot adunk, az ezt kvet 3-4 csepp 10%os (m/v) CuSO4 oldat adagols hatsra zld szn csapadk levlsa pozitv prbt
jelez. Vgezzk el a reakci anilinnel s piridinnel.
6. SZNHIDRTOK KIMUTATSA

A sznhidrt-prbk az oxo- illetve a hidroxilcsoportok olyan reakciin alapszanak, melyek

jellemz sznvltozssal vagy/s csapadkkpzdssel jrnak. A sznhidrtok els
megkzeltsben polihidroxi-aldehidek /aldzok/ vagy polihidroxi-ketonok /ketzok/. Minden
aldz redukl hats (az oligoszaharidok kzl csak a szabad glikozidos hidroxilcsoportot
tartalmazk) teht adjk az 5. fejezetben az aldehidekre jellemz redukcin alapul
reakcikat , a ketz-tpus monoszaharidok kzl csak azok reduklnak, melyek a
ketocsoport ltal aktivlt hidroxilcsoporttal rendelkeznek.
A fentebb megismert hidroxil-, formil- s ketocsoport reakcik mellett ismeretesek ltalnos
sznhidrt reakcik /pl. MOLISCH-, TROMMER-, SELIWANOFF-, BIAL- prbk), illetve a
mr megismert redukcis prbkon tlmenen tovbbiak is ismeretesek redukl cukrok
kimutatsaira /pl. NYLANDER-, BARFOED-, ENKER-reakcik/.

6.1

BENEDIKT-, TOLLENS- s FEHLING-prbk

Vgezzk el a kiadott sznhidrt mintkkal az 5.6.5, 5.6.6 s 5.6.7 pontok alatt
megismert aldehid kimutatsi reakcikat s rgztsk szlelseinket.

6.2

MOLISCH-prba
A

sznhidrtokbl

ers

svnyi

savak

hatsra

dehidratcik

utn

furfurolszrmazkok kpzdnek, melyekbl tmny svnyi savak hatsra kisebb

sznatomszm jnnek ltre, melyek klnbz fenolszrmazkokkal (pl. -naftol,
rezorcin stb.) sznes, triazil-metn tpus, kondenzcis termkeket redmnyeznek. A
reakci ltalban a ketzokra rzkenyebb, valamint az oligo,- s poliszacharidok is
adjk, mivel ezek savas kzegben mono,- s diszacharidokra hidrolizlnak.

Reakci egyenlet
2 ml 1%-os (m/v) vizes minta oldathoz 0.2 cm 3 20%-os (m/v) etil-alkohollal kszlt naftol oldatot adunk, majd vatosan a kmcs bels falra, a folyadkszint fl 0.8
ml tmny knsavat csepegtetnk. (Ajnlatos hteni a kmcsvet!). Rzogats utn
figyeljk meg a vltozsokat.
6.3

SELIWANOFF-prba
Ezen prba, mely a ketzok kimutatsra szolgl s a mono- s diszacharidok gyarnt
adjk, lnyegben egy mdostott MOLISCH-reakci. Pozitv prba esetn etilalkoholban oldd piros vagy sttvrs-barna csapadk kpzdik.
Kb. 30 mg mintt 1 cm3 vzben oldunk, majd hozzadunk 1 ml reagenst. sszerzs
utn az oldatot 5 percig 80 oC-on melegtjk, majd lehtjk s megfigyeljk a
vltozsokat. (Reagens: 0.5 g rezorcint 100 ml cc. HCl-ben oldunk).
Megjegyzs: a szacharz mivel belle hidrolzissel fruktz kpzdik! hosszabb
forrals utn kzepesen pozitv sznreakcit mutat.
A szacharz teszt knnyen elvgezhet, ha 100 mg szacharzt 3 cm 3 vzben oldunk,
majd hozzadunk 0.2 ml 10%-os (v/v) knsav oldatot. A reakci elegyet kb. 15 percig
forr (100 oC) vzfrdbe helyezzk. Lehtjk az oldatot s kb. 2 ml 10%-os (m/v)
NaOH oldattal indiktorpapros ellenrzs mellett semlegestjk. Vgezzk el
SELIWANOFF- /s FEHLING-/ prbt a hidrolzis eltt s utn.

6.4

BIAL-prba

A prbt a mono-s diszacharidok egyarnt adjk s a pentzok /C 5/ s a hexzok /C6/

megklnbztetsre szolgl, mivel a reakciban kpzd triaril-metan tpus sznes
anyag pentzok esetben ltalban zldeskk szn, mg a hexzok esetben vltoz
szn, a szn zldessrgtl vrsbarnig vltozhat.
20 mg mintt 1 ml vzben oldunk, majd az oldathoz 0.2 ml /6-8 csepp/ reagens-oldatot
adunk s a reakcielegyet forrsig melegtjk, majd csapvzzel lehtjk. /Reagens: 300
mg orcin (1,3-dihidroxi-5-metil-benzol) 100 ml tmny HCl-el kszlt oldathoz 0.3
ml 10%-os (m/v) FeCl3-oldatot adunk.)
6.5

NYLANDER-prba
A prbt redukl mono- s diszacharidok adjk. Pozitv prba esetn a Bi 3+ ionok
redukcijval fekete fmbizmut csapadk keletkezik.
50 mg mintt 1 ml vzben oldunk, majd hozzadunk 0.3 ml frissen ksztett reagenst,
majd forrsig melegtjk az oldatot. Lehls utn szleljk a vltozsokat.

6.6.

BARFOED-prba
Ez a prba a FEHLING-reakcihoz hasonl, reduktv prba, azonban a kzeg enyhn
savas jellege miatt a sznhidrt szerkezetbl add redukler sokkal jobban
rvnyesl. gy pldul a redukl monoszacharidok azonnal vagy 20-3 msodperces
melegts / forrals utn pozitv prbt adnak, mg a redukl diszacharidok sokkal
lassabban, vagy egyltaln nem reaglnak.
Kb. 200 mg mintt 1 ml vzben oldunk, majd hozzadunk 0.5 cm 3 reagenst. A kmcs
tartalmt sszerzzuk, s lassan melegtjk / forraljuk. A reakcielegy lehlse utn
megfigyeljk a vltozsokat. (Reagens: 6.6 g rz(II)-acettot s 0.8 ml tmny
ecetsavat 100 ml vzben oldunk.)

6.7

EKKER-prba
Az EKKER-reakci lehetv teszi redukl mono- s diszacharidok gyors
kimutatst. Pozitv prbt a sttkk-ibolya szn megjelense jelenti.
Kb. 100 mg mintt 1 ml vzben oldunk, majd hozz adunk 5 csepp 5%-os (m/v) etilalkoholos m-dinitro-benzol-oldatot s ezt kveten 2-3 csepp 10%-os (m/v) NaOHoldatot. A reakcielegyet 5 msodpercig melegtjk, majd lehls utn megfigyeljk a
sznvltozst.

6.8

TROMMER-prba
A reakcit mely rokon a FEHLING-rekcival mono- s diszacharidok adjk. A
reakciban a cukormolekula polihidroxi oldallnca komplexbe viszi a Cu2+-ionokat,

majd a formilcsoport oxidcija miatt bonyolult sszettel vrses szn, rztartalam csapadk vlik le.
Kb. 100 mg tmeg mintt 10 cm3 vzben oldunk, majd az oldathoz 5 csepp 10%-os
(m/v) CuSO4-oldatot s enyhe rzogats mellett 10 csepp 10%-os (m/v) NaOH-oldatot
adunk. A kapott reakcielegyet 2-3 percig forraljuk, majd lehls utn megfigyeljk a
vltozsokat.
7. AMINOSAVAK S FEHRJK REAKCII
7.1

Fehrjk kicsapsa
Az oldott fehrjk kicsapsa lehet reverzibilis s irreverzibilis. Reverzibilis
kicsapsnl a fehrjk megrzik eredeti tulajdonsgaikat, az eredeti oldszerben jbl
feloldhatk. Irreverzibilis kicsapsnl a fehrjk mlyrehat vltozsokat szenvednek,
tulajdonsgaik megvltoznak s az eredeti oldszerben jbl nem oldhatk fel.

7.1.1

Fehrjk kiszsa
Az ltalban ammnium-skkal vgezett fehrje kicsaps reverzibilis.
Tegynk centrifugacsbe 2 cm3 tojsfehrje oldatot, majd adjunk hozz 2 cm 3 teltett /
770 g s olddik 1000 ml vzben!/ ammnium-szulft oldatot. Centrifugljuk az
oldatot 5 percig 7000 fordulat/perc sebessggel. A fellszt vigyk t kmcsbe s
adjunk hozz 4-5 nagyobb NH4SO4 kristlyt. Figyeljk meg a vltozsokat.

7.1.2

Fehrjk kicsapsa etil-alkohollal

1 cm3 kmcsben lv tojsfehrje oldathoz adjunk kb. 10 mg NaCl-t, majd 2 cm 3 etilalkoholt. Rzzuk ssze a kmcs tartalmt s figyeljk meg a vltozst. Hgtsuk meg
a kmcs tartalmt hromszorosra s figyeljk meg mi trtnik a korbban kivlt
csapadkkal.

7.1.3

Fehrjk kicsapsa hvel

Tegyen ngy kmcsbe 1-1 cm3 tojsfehrje oldatot. Az 1. sz. kmcsvet lassan
melegtse forrsig s figyelje meg a vltozsokat. A 2. kmcsbe ntsn 2 csepp 1%os (v/v) ecetsavat, a 3.-ba 0.5 cm3 10%-os (v/v) ecetsavat, a 4.-be 0.5 cm3 5%-os (m/v)
NaOH-oldatot. A kmcsvek tartalmt melegtse forrsig s figyelje meg a
vltozsokat.

7.1.4

Fehrjk kicsapsa nehzfmskkal

ntsn hrom kmcsbe 2 cm3 tojsfehrjt. Az elsbe csepegtessen nhny csepp

10%-os (m/v) lom-acettot, a msodikba 10% (m/v) rz-szulftot, a harmadikba
10%-os (m/v) ezst-nitrt oldatot. Figyelje meg a vltozsokat.
7.1.5

Fehrjk kicsapsa ers svnyi s szerves savakkal

Tegynk 1-1 ml tojsfehrje-oldathoz 0.2 ml tmny HCl-t, HNO 3-t, 0.5 ml 10%-os
(m/v) triklr-ecetsav /TCA/ oldatot s 0.5 ml 10%-os (m/v) szulfoszalicilsav-oldatot.

7.2 Aroms gyrt tartalmaz aminosavak reakcii

7.2.1

Xantoprotein-reakci
Az aroms gyrt tartalamz -aminosavak (fenil-alanin, tirozin, triptofn stb.), vagy
azok a fehrjk melyek sok aroms aminosavat tartalmaznak tmny saltromsavval
az aroms gyr nitrldsa utn srga sznt adnak.
Kmcsvekben lv 1 cm3 1%-os (m/v) fenol-oldathoz (kontrol) 1 cm 3 5%-os (m/v)
aminosav illetve tojsfehrje oldathoz adjon 8 csepp cc. HNO3-t. Lgostsa meg az
oldatokat 10%-os (m/v) NaOH-oldattal. Vgezze el a ksrleteket fenil-alaninnal,
triptofnnal, triozinnal s alaninnal s figyelje meg a vltozsokat.

7.2.2

MILLON-reakci
A reakcit a triozin illetve a tirozin tartalm fehrjk adjk, amikor is vrs csapadk
jelenik meg. 1 cm3 5%-os (m/v) tirozin, illetve tojsfehrje oldathoz adjunk 2-3 csepp
MILLON-reagenst (ami Hg(NO3)2 hgtott HNO3-al kszlt oldata (1 g fm Hg-t
oldjunk fel 20 cm3 cc. HNO3-ban, majd vzzel 40 cm3-re hgtjuk; egy jjel ll
szobahmrskleten, majd leszrjk redsszrn)), majd a kmcsvek tartalmt
vatosan melegtsk. Figyeljk meg a vltozsokat.

7.2.3

ADAMKIEWICZ-prba
A reakcit a triptofn, illetve a triptofn tartalm fehrjk adjk.
0.5 cm3 5%-os (m/v) aminosav vagy tojsfehrje oldathoz adjunk 1 cm3 ecetsavat s 1
cm3 cc. H2SO4-t s enyhn melegtjk az oldatot. Az ecetsavban jelenlv glioxilsavval
/CHO-COOH/ a triptofn kondenzcis reakciba lp s ibolya szn termk
kpzdik.

7.3

Kntartalm aminosavak, fehrjk kimutatsa

A kntartalm aminosavak / fehrjk-bl lg hatsra a kn Na 2S formjban kihasad,
ami lom(II)-acetttal fekete PbS csapadkot kpez.
Adjunk 3 kmcsbe 0.5-0.5 ml 5%-os (m/v) lom-acett oldatot, majd annyi 20%-os
(m/v) NaOH-oldatot, hogy a kivl csapadk (Pb(CH)2) felolddjk. Ezutn adjon a

kmcsvek tartalmhoz 1-1 cm3 5%-os (m/v) cisztein, metionin s tojsfehrje

oldatot, majd melegtse a kmcsvek tartalmt.
7.4

NINHIDRIN-prba
A REAKCI CSAK -aminosavakra s megfelel fehrjkre jellemz! Az aminosavak ninhidrinnel oxidatv dezaminls s dekarboxilezssel

- a prolin-

kivtelvel ibolyaszn termket eredmnyez.

Reakci egyenlet
1 cm3 5%-os (m/v) aminosav (alanin, fenil-alanin, prolin, lizin) s tojsfehrje
oldathoz adjunk 4-5 csepp 1%-os (m/v) etil-alkoholos ninhidrin-oldatot, majd az
elegyet forraljuk fel.
7.5

BIURET-reakci
Rgen ismert, hogy az aminosavak, peptidek, fehrjk Cu 2+-ionokkal di-,
oligopeptidek amidcsoportjnak kimutatsra a szekunder amidkts (peptidkts)
lgos kzegben lejtszd deprotonldsval vgbemen un. BIURET-reakci
alkalmas. A BIURET-reakcit a szerin, hisztidin s treonin kivtelvel az aminosavak nem adjk. A BIURET karbamidbl ammnia felszabaduls mellett
kpzdik h hatsra. Tegynk 200 mg karbamidot szraz kmcsbe s vatosan
melegtsk. A karbamid megolvad majd megszilrdul s biuret kpzdik.
Reakci egyenlet
Htsk le csapvzzel a kmcsvet, a tartalmhoz adjunk 2ml 10%-os (m/v) NaOHoldatot, az anyagot rzogats mellett oldjuk fel. Az oldathoz adjunk nhny csepp
BIURET-reagenst s figyeljk meg az oldat sznvltozst. (BIURET-reagens: 150 mg
CuSO4, 600 mg K-Na-tartart (Seignette-s) s 3 g NaOH 100 ml vzben oldva).
Vgezzk el a BIURET-prbt szerinnel, lizinnel s egy dipeptiddel gy, hogy ezen
anyagokbl 1 ml 5%-os (m/v) vizes oldatot ksztsnk, hozzadunk 2 pasztilla NaOHt, amit rzogats mellett feloldunk. A kapott oldathoz 3-4 csepp BIURET-reagenst
adunk s megfigyeljk a sznvltozsokat.
Az -aminosavak Cu2+ vagy Fe3+ ionokkal jellegzetes szn komplexet kpeznek.
Vgezzk el ezeket a reakcikat klnbz aminosavakkal gy, hogy az
aminosavakbl 5%-os (m/v) oldatok 1 cm3-hez 2-3 csepp 10%-os (m/v) CuSO4 msik

esetben 10%-os (m/v) FeCl2 oldathoz adunk. Savanytsuk meg indiktoros ellenrzs
mellett az oldatokat nhny csepp 1M-os HCl oldattal. Figyeljk meg a vltozsokat.
8. KOFFEIN IZOLLSA TEBL
A koffein tbbfle nvnyben (pl. kv, tea stb.) elfordul lnkt hats, de gygyszatban
is hasznlatos purinszrmazk. Tebl knnyen kinyerhet.
Kplet
8.1

500 cm3-es csiszolatos gmblombikba 10 g portott zldtet s 200 ml vizet adunk,

majd a lombik tartalmt ultrahangos frdben 10 percig rzatjuk. A lombikba 1-2
szem forrkvet tesznk s visszafoly (golys) ht alatt, elektromos ftkosrral 10
percig melegtjk. Ezutn 20 cm3 10%-os (m/v) lom-acett oldatot adunk hozz s
jbl 10 percig forraljuk. A lombikot lehtjk szobahmrskletre. A kapott keverket
10 percig 5000 fordulat/perc gyorsulssal centrifugljuk. A kapott fellszt
redsszrn tszrjk. A kapott tiszta oldatot 2 x 80 ml kloroformmal rztlcsrben
extrahljuk. Az egyestett szerves fzisokat kb. 10 g izztott magnzium-szulfton
vzmentestjk, majd redsszrn, elre lemrt 250 cm 3-es csiszolatos gmblombikba
szrjk, vgl rotcis vkuumbeprln oldszermentestjk. Meghatrozzuk a
kinyert anyag mennyisgt.

8.2

Azonosts
Az azonostst kmiai reakcikkal, IR spektrofotometrival s vkonyrtegkromatogrfival vgezzk.

8.2.1

Azonostsi reakcik
Kb. 10 mg anyagot porceln csszbe 1 csepp tmny H 2O2 oldattal s 5-6 csepp 2:1
(v/v) arnyban hgtott ssavval megnedvestjk, majd IR lmpa alatt beszrtjuk. A
narancsvrs szn maradk nhny csepp tmny NH4OH hatsra bbor vrs sznt
eredmnyezve felolddik.

8.2.2 kb. 2 mg anyagot feloldunk 1 ml vzben, majd nhny csepp 0.5 M-os AgNO 3 oldattl
zavarosodst, anyagkivlst nem tapasztalunk /a teobromin s teofillin esetn igen/.
8.2.3 5 ml vizet 50 l 0.1 M-os NaOH-oldattal s 2 csepp fenolftalein-oldattal elegytjk. Az
oldathoz 50 mg anyagot adunk. Az oldat eredeti piros szne szemben a teobromin
vagy a teofillinnel koffein esetben forrals utn is megmarad.
8.2.4

IR vizsglatok

Az extrakcival kapott minta IR sznkpt KBr tabletta technikval felvesszk, majd a

kapott sznkpet sszehasonltjuk a koffein standard sznkpvel.
8.2.5

Vkonyrteg-kromatogrfia
Az extrakcival kapott s a standard koffein mintkbl 1 mg/ml etil-alkohollal kszlt
oldatot ksztnk. Ezt az oldatot visszk fel a kromatogrfis lemezre.
Vkonyrteg lemez: Kieselgel F254 (Merck)
Eluens: UV lmpa (254 nm); knsavas-vanilin-reagens (10 percig 120 oC-on szrtva a
lemez a reagenssel (3 g vanilin + 2 ml cc. H 2SO4 100 ml-re kiegsztve 96%-os EtOHval).
Megjegyzs: A kloroform egszsgre rtalmas, gzt ne llegezzk be!

9. FAHJOLAJ ELLLTSA
rlt fahjbl oldszeres extrakcival, vagy vzgz-desztillcival llthatunk el
illolajokat. Az oldszeres extrakcival kapott olaj jval nagyobb szm sszetevt tartalmaz,
mivel a vzgz-desztillcinl csak a vzgzzel ill vegyletek jelennek meg a lecsapd
prlatban.
A gyakorlat sorn lltsunk el fahjolajat oldszeres extrakcival, illetve vzgzdesztillcival, mutassuk ki az olajokbl a fahjaldehidet (mint f sszetevt) s hasonltsuk
ssze az olajok IR s UV spektrumt.
9.1. Oldszeres extrakci
20 g rlt fahjat 200 ml 96%-os etil-alkohollal, plusz 10 ml vzzel 2 rig 500 ml-es
gmblombikban, visszafolys ht alatt elektromos melegtssel forralunk. Az oldatot
melegen, reds szrn megszrjk. A szrn marad anyagot 10 ml etanollal lemossuk. Az
egyestett alkoholos oldatot elre lemrt gmblombikban, rotcis vkuumbeprlval
oldszermentestjk. Meghatrozzuk a kapott, vrses olaj tmegt.
9.2. Vzgz-desztillci
A vzgz-desztilll gmblombikjba helyeznk 20 g rlt fahjat s 250 ml vizet. Az oldaton
tvezetjk a msik lombikban ellltott vzgzt. Az eredeti lombikot enyhn melegtjk, gy,
hogy a desztillci ne legyen gyors, de egyenletes legyen. A szedlombikban kb. 100-130 ml
desztilltumot gyjtnk, majd kb. 20 g ntrium-kloridot oldunk fel benne. Az olajos kivlst
mutat vizes oldatot rztlcsrben 2X60 ml diklr-metnnal extrahljuk, majd a levlasztott,
egyestett szerves fzist izztott ntrium-szulfton megszrtjuk. Leszrjk elre lemrt
gmblombikba, melybe belekerl a szrn marad anyagot tmos 20 ml friss diklr-metn
is. Rotcis vkuumbeprl alkalmazsval a diklr-metnt eltvoltjuk s megmrjk a
kapott olaj tmegt.
9.3. Az olajok IR s UV sznkpnek meghatrozsa
10.3.1. Az olajok IR sznkpt AgCl-lemezen, folyadkfilm technikval vesszk fel s
sszehasonltjuk
10.3.2. Az olajok UV-VIS sznkpt 1 mg/ml-es koncentrcij trzsoldat 100X-ra trtn
hgtsval vesszk fel. A kapott spektrumokat sszehasonltjuk.
9.4. Fahjaldehid kimutatsa az olajokbl
A kapott olajokkal elvgezzk az aldehidek kimutatsra megismert
TOLLENS-, (5.6.6.) s FEHLING (5.6.7.) prbkat.

DNP (5.6.3.),

9.5. Vkonyrteg kromatogrfia

A kapott olajokat s a standard 1 mg/ml-es koncentrcij metanolos fahjaldehid oldatot
vkonyrteg kromatogrfival vizsgljuk. Elssorban a fahjaldehid kimutatsa a cl. Kt
futtatst vgezznk. Az egyiket knsavas vanilin, a msikat 2,4-DNP reagenssel hvjuk el.
Vkonyrteg lemez: Kieselgel F254 (Merck).
Eluens: toluol:kloroform 2:8 (v/v)
Elhvs: UV lmpa (254 nm),
- knsavas vanilin-reagens (lefjs utn a rteget 120 C-on 10 -ig szrtjuk),

- 2,4-DNP (2,4-dinito-fenol-hidrazin) reagens ( a rteget nem kell szrtani!)

(2,4-DNP reagens: 3 g 2,4-DNP 50 %-os (v/v) knsavban oldva, 100 ml-re vzzel feltltve s
reds szrn tszrve)
Megjegyzs: a diklr-metn mrgez. Gzt ne llegezzk be!
10. KAROTINOIDOK IZOLCIJA, KIMUTATSA
A konjugult polin vegyletek kz tartoz jellegzetes szn, lipofil jelleg karotinoidok (pl.
-karotin, likopin, stb.) s oxigntartalm vltozataik a xantofilok (pl. a lutein) lettani
szempontbl alapveten fontosak.
Elssorban nvnyi, de llati termkekben (pl. tojs) is elfordulnak. Kinyersk, analitikai
vizsglatuk alapvet, mindennapi feladat.
Jelen gyakorlat keretben a kapott extraktokat vkonyrteg-fkomatogrfival s UV-VIS
spektrofotometrival vizsgljuk.
Kpletek
10.1. Likopin s -karotin kimutatsa paradicsombl
80 g kimagozott paradicsomot egy kis doboz paradicsomprvel sszeturmixolunk. A kapott
nvnyi keverket 100 ml etilalkohollal tmossuk egy 500 ml-es gmblombikba s 3 ml 80%os (m/v) KOH oldat hozzadsa utn 70 0C-on 30-ig visszafolys ht s elektromos
melegts mellett melegtjk, enyhn forraljuk. (Ezzel a klorofilt illetve a klnbz lipideket
eltvoltjuk!) A kapott oldatot lehtjk, 100 ml vzzel tmossuk egy 1000 ml-es rztlcsrbe,
melybe 20 ml teltett NaCl oldatot adunk, s ktszer 200 ml n-hexn:toluol:metanol:aceton =
2:1:1:1 (v/v) elegyvel extrahljuk.
A szerves fzist levlasztjuk s 200 ml vzzel mossuk. Az gy levlasztott szerves fzist
izztott ntrium-szulfton szrtjuk, majd szrs utn rotcis vkuumbeprln
oldszermentestjk. A kapott maradkot 2 ml tetrahidro-furnban oldjuk s az analitikai
vizsglatokig alufliba burkolva troljuk (vigyzzunk: fnyrzkeny!).
10.2. Karotinoidok kinyerse zldsgekbl
A 10.1. pont alatt a paradicsomnl ismert eljrs a gymlcsk s egyb zldsgek
esetben is jl alkalmazhat. Alkalmazhatunk azonban egy msik szintn hatkony
eljrst is.
100 g gymlcst (pl. narancsot, narancshjat) vagy zldsget (pl. brokkolit, pritamin
paprikt, spentot) sszeturmixolunk de prselhetnk levet is bellk -, majd 200 ml
acetonnal 500 ml-es Erlenmeyer lombikban, ultrahangos frdben 20-ig rzatjuk a keverket.
A kapott keverket 10-ig 5000 1/min fordulaton centrifugljuk, majd a fellsz rsz
leszvatsa utn reds szrpapron tszrjk. A kapott tiszta oldathoz 20 ml teltett NaCl
oldatot adunk s rztlcsrben ktszer 200 ml n-hexn:metanol:aceton = 3:1:1 (v/v) eleggyel
extrahljuk. A levlasztott szerves fzist izztott ntrium-szulfton szrtjuk, majd rotcis
vkuumbeprln oldszer-mentestjk. A kapott maradkot 2 ml tetrahidro-furnban (vagy
toluolban) oldjuk s fnytl vdve tartjuk.
Figyelem! A 10.1 s 10.2. pontok alatt szerepl toluol, metanol, aceton mrgez s
tzveszlyes!
10.3. UV-VIS spektrum felvtele

A kapott karotinoid extraktok tetrahidro-furnos oldatbl kivesznk 100 l-t s 5 ml

trfogatra hgtjuk. Az gy kapott oldatnak vesszk fel az UV-VIS spektrumt.
10.4. Vkonyrteg-kromatogrfia (VRK)
A VRK vizsglatot az extraktokkal rvid idn bell vgezzk el. Az azonostsnl hasznljuk
a standardok 0,1 mg/ml koncentrcij tetrahidro-furnos oldatait. Vkonyrteg lemez:
Szilikagl 60 F254.
Eluens: n-hexn:diklrmetn = 10:3 (v/v) elegye.
Elhvs: UV (254 s 365 nm)
A foltok elhvs nlkl is sznesen ltsznak.
(a nvekv retenci sorrendjben): xantofilok (narancsvrs/vrs)likopin (narancssrga)
-karotin (srga).
11. NIKOTIN KINYERSE DOHNYBL
A nikotin mely ersen mrgez!!! a dohny f nitrogntartalm alkaloidja.
Kplet
Vgezzk el a dohny nikotin izolcijt a kapott anyagbl a nitrogn, illetve a tercier amin
kimutatst, illetve a vkonyrteg-kromatogrfis vizsglatot.
11.1. Extrakci
A gyakorlat teljes ideje alatt viseljnk gumikesztyt s mivel a nikotin ers mreg igen
vatosan jrjunk el.
150 mg szrtott dohnyt 25 ml-es vegdugs Erlenmeyer-lombikba 10 ml
acetonitril:ecetsav:vz = 20:5:75 (v/v) oldszer eleggyel ultrahangos frdben 10-ig rzatjuk,
majd reds szrpapron leszrjk. A szrletet 25 ml-es gmblombikban max. 30 C-os
hmrskleten rotcis vkuumbeprln kb. 2 ml trfogatra betmnytjk s ezzel az oldattal
vgezzk el a tovbbi vizsglatot.
11.2. A nikotin bzisformban nem stabil, de a srga szn pikrinsavas sja a nikotindipikrt, mely knnyen elllthat -, stabil. A betmnytett oldat kb. -ed rszhez adjunk
500 l teltett pikrinsav oldatot. A dipikrt srga csapadk formjban kivlik.
Kplet
11.3. A tercier nitrogn kimutatst az 5.9.3. pont alatt megismert SONNENSCHEINreakcival vgezzk.
12. POLIFENOLOK EXTRAKCIJA NARANCSHJBL
A citrusflk hja gazdag antioxidns hats polifenolokban, mindenek eltt flavonoidokban.
A gyakorlat keretben ellltunk egy flavonoid keverket s elvgezzk UV-VIS s VRK
vizsglatt.
12.1. Izolci
1 g szraz, portott narancshjat 100 ml-es centrifugacsbe elszr 80 ml metanol:vz =1:1
(v/v), majd ezt kveten 80 ml aceton:vz=7:3 (v/v) eleggyel ultrahangos frdben 30-30
percig extrahlunk. (Az els extrakci utn az elegyet 10-ig 3000 1/min fordulaton

centrifugljuk, majd a fellszt leszvatjuk s elhelyezzk egy 250 cm 3-es Erlenmeyer

lombikban. A centrifugacsben maradt anyaghoz hozzadjuk a maradk extrahl oldszer
elegyet, s mint az els extrakcinl, elvgezzk a mveleteket). Az egyestett fellszkat
reds szrpapron tszrjk egy 250 cm3-es gmblombikba s rotcis vkuumbeprln
oldszermentestjk. A maradkot 1 ml etanolban oldjuk.
12.2. UV-VIS vizsglat
Az izolcinl kapott etanolos oldat 300 l-t 3 ml-re hgitjuk etanollal s felvesszk a
sznkpt.
12.3. Vkonyrteg-kromatogrfia
A vkonyrteg-kromatogrfis vizsglatot egy s ktdimenzis formban is elvgezzk.
12.3.1. Egydimenzis VRK
Kromatogrfis lemez: Szilikagl 60 F254 (20x20 cm)
Eluens: etilacett:hangyasav:ecetsav:vz = 100:11:11:27 (v/v)
Elhvs: UV (254 s 365 nm) Naturstoff reagens (lsd 8.2. pont)
12.3.2. Ktdimenzis VRK
Kromatogrfis lemez: cellulz
Eluens: 1. dimenzi: etilacett:ecetsav:vz = 80:20:20 (v/v)
2. dimenzi: 15 %-os (v/v) ecetsav
Elhvs: UV (254 s 365 nm) ammniagz
13. KVERCETIN KIMUTATSA VRSHAGYMBL
A vrshagyma egyike az antioxidns hats kvercetin-glikozidokban leggazdagabb
nvnyekben. A gyakorlat keretben izolljuk a vrshagyma kvercetin-glkozidjait kvercetin
aglkon formban, majd kimutatjuk a fenolos hidroxil- csoportok, illetve a glkz jelenltt
s vkonyrteg-kromatogrfival azonostjuk a kvercetint.
Kplet
13.1. Izolci
1 g vrshagyma porhoz 250 ml-es gmblombikba 80 ml 40 %-os (v/v) metanolt s 20 ml
6M-os ssavat adunk s a lombik tartalmt elektromosan, visszafolys ht alatt 2 rig
forraljuk. Az elegyet lehtjk, majd 10-ig centrifugljuk 3000 1/min fordulaton. A fellszt
elklntjk s ha szksges reds szrpapron tszrjk. Az tszrt oldathoz 100 ml
metanolt adunk s rotcis vkuumbeprln kb. 1-2 cm3-re koncentrljuk.
13.2. Fenolok kimutatsa
Az 5.5.6. pont alatti fenol-prbval (Fe3+) kimutatjuk a kvercetin fenolos OH csoportjait.
13.3. Glkz kimutatsa
A kapott extrakt 1 cm3-jvel elvgezzk a FEHLING s a BARFOED prbkat.
13.4. Vkonyrteg-kromatogrfia
A 8.2. alatti mdon standard birtokban azonostjuk az extraktbl a kvercetint.
14. FITOSZTEROLOK KIMUTATSA NAPRAFORGOLAJBL

A klnbz nvnyi olajoknak a trigliceridek mellett a fitoszterolok jellegzetes sszetevi.

Ezeknek szerepk van bizonyos patolgis llapotok pl. rfal betegsg megelzsben.
Legjellegezetesebb kpviselik a sztigmaszterol, a -szitoszterol s a kampesztrol.
Kpletek
14.1. Izolci
3 ml napraforg olajat s 50 cm3-es gmblombikban 10 ml 20 %-os (m/v) (80%-os (v/v)
metanollal kszlt) KOH oldatot 1 rig forralunk elektromos melegts s visszafoly-hts
mellett. A lehttt oldathoz 30 ml 5 g NaCl-ot tartalmaz vizet adunk s 2M HCl-al pH=8-9re lltjuk. Az gy kapott reakcielegyet 2x20 ml kloroform:metanol = 2:1 (v/v) eleggyel
extrahljuk. A levlasztott egyestett szerves fzist 2x20 ml vzzel mossuk, majd izztott
ntrium-szulfton szrtjuk. Szrs utn a kapott oldatot rotcis vkuumbeprln oldszermentestjk. A kapott olajat 1 ml kloroform:metanol=2:1 (v/v) elegyben oldjuk.
14.2. Vkonyrteg-kromatogrfia
A standardokbl (sztigmaszterol, -szitopszterol s kampesztrol) kloroform:metanol=2:1 (v/v)
oldszer eleggyel 1mg/ml koncetrcij oldatot ksztnk s ezt hasznljuk az azonostshoz.
Kromatogrfis lemez: Szilikagl 60 F254 (20x20 cm)
Eluens: kloroform:metanol:vz = 85:15:5 (v/v)
Elhvs: nizs-aldehid reagenssel (reagens: 0,5 cm3 nizs-aldehid + 85 cm3 metanol + 10 ml
ccH2SO4 + 10 ml ecetsav oldata)

15. AOAC mikrokmiai tesztek

A vilg legmegbzhatbb/legjobb validlt ltalnos jelleg analitikai mdszer elirat
gyjtemnye az AOAC monogrfia (Association of Analytical Chemists, Washington D.C.,
USA) tartalmazza, melynek jelenleg a 18-ik kiadsnl tartunk. Az AOAC mdszerei kztt,
a forgalomban lv nhny fbb gygyszerhatanyagra ismeretesek egyszer, olcs
mikroszkp trgylemezen gyorsan elvgezhet, majd mikroszkp alatt megfigyelhet
jellegzetes kristly s sznformkat eredmnyez, mikrokmiai tesztreakcik, melyekkel adott
vegylet elzetesen arnylag j biztonsggal azonosthat. risi jelentsge van ennek a
toxikolgiban, a gygyszervegyszeti gyakorlatban, illetve az igazsggyi orvosi
vizsglatokban (pl. kbtszerek elzetes azonostsban). A kvetkezkben vgezzk el
nhny olyan vegylet mikrokmiai azonostst, melyet a korbbi gyakorlatok sorn nvnyi
forrsokbl ellltsra kerltek (nikotin, szalicilsav, koffein, illetve a teofillin s teobromin
xantinszrmazkok). A reakcikat a mikroszkp-trgylemezen vgezzk. A trgylemez (A)
mrete a szoksos (76 mm X 25 mm X 1 mm), a ngyeztalak fedlemez (B) mrete 22 mm
X 22 mm. Az A trgylemezen egyms mellett elvgezhet a minta s a standardok egyidej
vizsglata, majd kpi kirtkelse. Az oldatot vegkapillrissal, a keverst tmr vg
vegkapillrissal vgezzk.
15.1. Nikotin kimutatsa
A vizsgland anyagbl 2 mg-ot 50 mikroliter 0.1 M-os HCl-ben oldunk az A trgylemezen.
A kapott oldathoz hozzadunk 1 csepp HgCl2 oldatot (5 g HgCl2 100 ml vzben oldva), majd
nhny
csepp
(5-10
l)
10
(v/v) %-os H2SO4 oldatot, lefedjk B lemezzel. Hasonl mdon vgezzk a reakcit a
standard oldattal is. A B lemezt mikroszkpba helyezve 100-500 X-os nagytsban vizsgljuk
idben is! - a kapott kristlyok alaki s szn jellemzit s rgztsk. Hasonltsuk ssze a
minta s a standard jellemzit! A nikotin HgCl 2-dal tltsz, sugrirnyban elhelyezked
lemezeket kpez.
15.2. Szalicilsav kimutatsa
Szalicilsav standardbl 2-3 pici kristlyt, mell pedig a japn akc B extraktbl (16.1. pont)
50 l-t elhelyeznk. Mindketthz 30 l 10 (v/v) %-os HCl oldatot adunk, s jl elkeverjk
a mintval.
15.2.1.
A standardhoz, illetve a minthoz 1 csepp Br -/BrO2- reagenst adunk. (reagens: 1,2 g KBr s
0,3 g KBrO3 100 ml vzben feloldva). A reagens hatsra talak kristlyok nvekednek a
standardnl a szalicilsav kristlyokbl kiindulva. A trgylemezt nem szksges lefedni,
mikroszkp alatt kzvetlenl vizsgljuk.
15.2.2.
Ismteljk meg a fenti mveletsort, de reagensknt 1 csepp PbEt3N-reagenst alkalmazunk.
(reagens: 1 g kristlyos lom-acettot (Pb(OAc) 2 X 2 H2O) 20 ml vzzel kszlt oldathoz 1
ml trietil-amint adunk. A trgylemezt nem szksges lefedni, mikroszkp alatt vizsglva t s
rvid rd alak kristlyok jelennek meg ( a standardnl a szalicilsav kristlyokbl kiindulva)
15.3. Xantin szrmazkok vizsglata
A xantin N-metil-szrmazkai, a teofillin, teobromin s a koffein melyek alkaloid
nvnyekben fordulnak el (tea, kvbab, kakabab, kladi, stb.) gygyszatban
alkalmazhatk. Kzlk a koffein nem veszlytelen lvezeti cikk.
Kplet

Kimutatsukra a gygyszerknyvekben az n. MUREXID-reakci ma is alkalmazott. Ezen

reakciban a xantin szrmazk ssavval H2O2 jelenltben szrazra prolva narancsszn
maradkot hagy, mely pr csepp ammnia-oldattl bborvrs sznre sznezdik. A
mikroreakcinl H2O2 oxidlszer helyett KClO3 at hasznlunk.
15.3.1. MUREXID-reakci
Kb. 1 mg/nhny kristlynyi minthoz (pl. tea extrakt) A trgylemezen 1-2 kristly KClO3 at
adunk, majd rcseppentnk 1 csepp 1:1 (v/v) arnyban higtott ssavat. Hajszrtval
vatosan kezdve, majd ersebben melegtjk. Kb. 1-(2) perc mlva narancs, majd vrs szn
lesz az anyag, ami 1 csepp cc. NH 4OH-tl mlyvrs sznre vltozik. Figyeljk a
sznklnbsget, valamint mikroszkp alatt a kristlyformkat!
16. SZALICIN S SZALICILSAV IZOLLSA ENERGIAFZBL
A japnfz (Salix japonica) ma egyike a leggretesebb zld energiaforrsoknak. Rgta
ismert tovbb, hogy a fzflk (Salix sp.) krgbl, barkjbl fztt tea lz- s
fjdalomcsillapt, valamint gyulladsgtl hats. A fzfbl ellltott szalicilsav vezetett el
a mltszzad utols harmadban a mai napig egyik legfontosabb gygyszernk az ASPIRIN
(acetil-szalicilsav) megszletshez.
A gyakorlat clja a RET program keretben a Mtszalka trsgben termelt energiafz
szaligenin, szalicilsav s szalicin ami a szalicil-alkohol -glikozidja tartalmnak
vizsglata.
Kpletek
A szalicilsav a szaligeninbl mely a szalicilsavbl hidrolzissel jn ltre oxidcival
kpzdik s mindketten szemben a szalicinnel adjk a fenolok jellegzetes reakciit.
16.1. Izolci s vizsglat
20 g szrtott, portott, japnfz (szr+levl+barka) mintt 200 ml 80%-os vizes
metanol:etanol 1:1 (v/v) eleggyel 500 cm 3-es gmblombikban elektromos melegts s
visszafolys ht alkalmazsval 60-ig forraljuk. A kapott oldatot melegen redsszrn
leszrjk, majd a kiszrt anyagot tmossuk 20 ml extrahl eleggyel, amit hozzadunk az
eredeti szrlethez. Az egyestett szobahmrskletre httt szrletet 3000 1/min fordulaton
10-ig centrifugljuk, majd a fellszt levlasztjuk s kt azonos trfogat rszre osztjuk. Az
egyik rszt rotcis vkuumbeprln oldszermentestjk kb. 2-5 ml vgtrfogatra srtjk
(A-extrakt). Ezzel az A-extrakttal elvgezzk a fenol reakcikat illetve a vkonyrteg
kromatogrfis vizsglatot s standardok birtokban vizsgljuk a szalicin jelenltt. A szrlet
msik rszhez 2 ml tmny HCl-t adunk s 30-ig forraljuk az oldatot. A mg meleg oldathoz
5 g mangn (II)-oxidot (MnO2) adunk tovbbi 20-ig forraljuk az oldatot, amit melegen
leszrnk. A szrt oldatot rotcis vkuumbeprln 2-5 ml vgtrfogatig tmnytjk (Bextrakt). Ezzel a B-oldattal elvgezzk a fenolokra, Fe 3+, a glkzra, a FEHLING s a
BARFOED prbkat, valamint VKR vizsglatot, standardok birtokban vizsgljuk a
szalicilsav jelenltt.
Megjegyzs: a szalicilsav Fe3+-al kpzett ibolyaszn oldatnak szne eltnik, ha az oldatot
etanollal meghgtjuk.
16.2. Vkonyrteg kromatogrfia
Az A- s B-extraktokkal valamint a standard vegyletekkel elvgezzk a VRK vizsglatokat.

Vkonyrteg lemez: szilikagl (kieselgel) 60 F254

Eluens: toluol:kloroform = 1:1 (v/v)

Elhvs: knsavas-nizsaldehid reagenssel (Ekkert-reagens)
Ekkert-reagens: 1 ml nizsaldehid s 2 ml ccH2SO4 oldata ecetsavval 100 ml-re
kiegsztve.
A futtats utn a lemezt meleg levegvel megszrtjuk, majd a szraz lemezt
lepermetezzk az Ekkert-reagenssel. A lepermetezett lemezt 10-ig 100 C
hmrskleten tartjuk, majd UV-fnnyel ( = 365 nm) megvilgtva
kirtkeljk.

Megjegyzs: Az aroms-karbonsavak, fenolok, stb. vizsglatra alkalmas fent emltett

VRK krlmnyek mellett az albbi futtat s elhvszerek is kitnen alkalmazhatk:

Eluens: di-izopropil-ter:hangyasav:vz = 90:7:3 (v/v)

Elhvs: a szrtott lemezt elszr 1 ml cc H 2O2 + 99 ml vz eleggyel permetezzk le,
majd meleg levegvel megszrtjuk. Az gy kezelt szraz lemezt n. tiobendazolreagenssel (3 ml H2O2+ 97 ml 10%-os (v/v) ecetsavoldat) permetezzk le s 100 0Con 10-ig szrtjuk, majd UV-fnnyel ( = 365 nm) megvilgtva kirtkeljk.

17. Tetraciklin-antibiotikumok kimutatsa sertshsbl

A szles spektrum tetraciklin antibiotikumokat fleg az oxitetraciklint (Tetran), a
tetraciklint s a klr-tetraciklint - ma mr dnten az llattartsban (tpokhoz keverve) s az
llatgygyszatban alkalmazzk. Szermaradvnyknt hsokban, hsksztmnyekben gyakran
jelen vannak, gy analitikai vizsglatuk elsrenden fontos feladat. A gyakorlat keretben
sertshsbl az esetleg jelenlv tetraciklin antibiotikumokat szilrd fzis extrakcis
mdszerrel (SPE) izolljuk, majd elzetes kmcsreakcikkal megklnbztetjk ket. Vgl
vkonyrteg kromatogrfival azonostjuk az oxitetraciklint.
Kplet
R1
H
H
Cl

R2
H
OH
H

Vegylet neve
Tetraciklin
Oxitetraciklin
Klrtetraciklin

17.1. Izolci
-

5 g darlt sertshst 2X 25-25 cm 3 0.1M-os Na2 EDTA tartalm, McIlvainepufferrel, (pH=4,0) 15-15-ig UH-ban rzatunk. A kapott zavaros oldatokat
egyestjk, majd 15 -ig 5000 fordulat/perc gyorsulssal centrifugljuk. A
fellszt lentjk, majd redsszrn megszrjk.
500 mg C18 adszorbenst tartalmaz mikrooszlopot elszr 2 cm 3 metanol
vkuumtszivatsval aktivlunk
Az aktivlt oszlopon lassan tszvatjuk a centrifugls utn kapott
fellszt, majd lemossuk az oszlopot tovbbi 5 ml Na2 EDTA tartalm,
McIlvaine-pufferel (pH=4,0)
tmossuk az oszlopot 20 ml vz tszvatsval, majd 5-ig vkuummal
szvatjuk az oszlopot, hogy a tltet megszradjon.
Az oszlop C18 adszorbense ltal megkttt tetraciklin antibiotikumokat 20
ml metanol:etil-acett = 5:95 (v/v) arny oldszer eleggyel oldjuk le, majd
a kln tiszta ednybe felfogott elutumot rotcis vkuumbeprln, 2030C-os hmrskleten oldszermentestjk.
A kapott maradkot 1 ml metanolban feloldjuk s ezzel vgezzk a
kimutatsi, illetve a VRK-vizsglatokat.

Na2 EDTA tartalm, McIlvaine-puffer: 28,4 g vzmentes dintrium-hidrogn foszftot 1000

ml-es mrlombikba tesznk, majd feloldjuk 200 ml vzben, majd 1000 ml-re feltltjk. Egy
msik 1000 ml-es mrlombikba 21 g citromsav-monohidrtot mrnk, majd 1000 ml-re
feltltjk desztilllt vzzel. Egy 2000 ml-es mrlombikba az els lombik tartalmbl 625 ml
dintrium-hidrogn foszftot oldatot s a msodik lombikbl 1000 ml citromsav-monohidrt
oldatot. lltsuk be a pH-t 4,0-re hozzcsepegtetve vagy 0,1 M-os HCl, vagy 0,1M-os
NaOH-ot.
(0,1 M-os HCl: 8,3 ml cc HCl/1000 ml desztvz
0,1 M-os NaOH: 4g NaOH/1000 ml desztvz)
Az 1625 ml McIlvaine-pufferhez adjunk 60,5 g Na2 EDTAX2H2O-t s rzogatssal oldjuk fel
benne.

17.2. Az extrtakcis maradkot kb. 300 ml metanolos oldathoz ngy csepp cc. H 2SO4-et, 1
csepp knsav-paradimetil-amino-benzaldehid reagenst adunk. Megfigyeljk a sznreakcit,
majd utbbi reagenssel kapott oldatot megmelegtjk.
Az egyes tetraciklinek az emltett reagenssel a kvetkez szneket eredmnyezik:

Vegylet
Tetraciklin
Klrtetraciklin
Oxitetraciklin

cc. H2SO4
Ibolya
Sttkk-zld
Piros

Reagens
H2SO4-DMAB
hidegen
Narancs
Barna
Srga

H2SO4-DMAB
hidegen
Iboly
Kk
Zld

rtkeljk a kapott eredmnyeket!

17.3. Vkonyrteg kromatogrfia
Vgezzk el az extrakt s a standardok VRK vizsglatt. A standardokbl 0,3 mg/ml
koncentrcij metanolos oldatot ksztnk.
A-mdszer:
- vkonyrteg lemez: cellulz
- eluens: 0,2 M-os CaCl2 oldat
- elhvs: UV-fny (=365 nm) alatt a foltok fluoreszklnak.
hRf-rtkek:
tetraciklin: 67
oxitertaciklin: 68
klrtetraciklin:59
B-mdszer:
- vkonyrteg lemez: TLC RP-18 F 254
- eluens: 0,5 M-os oxlsav vizes oldat: metanol:acetonitril = 6:2:2 (v/v)
- elhvs: UV-fny (=365 nm) alatt a foltok fluoreszklnak.
hRf-rtkek:
tetraciklin: 45
oxitertaciklin: 38
klrtetraciklin:56

18. ATRAZIN KIMUTATSA KUKORICA OLAJBL

Az atrazin a kukorica termesztsben az egyik leggyakrabban alkalmazott herbicid. Jelen
gyakorlat clja az atrazin maradvny kimutata kukorica olajbl.
Kplet
18.1

Izolci
-

2 ml kukorica olajat 20 ml vgtrfogtra higtunk n-hexnnal.

Egy diol tpus adszorbenssel tlttt mini oszlopot (cartridge) /tltet: 300
mg/ elszr 3 ml metanol, 3 ml vz majd 3 ml metanol tszvatsval
aktivlunk, majd 5 percig vkuummal szvatva megszrtjuk.

A szraz oszlopon vkuummal a hexnnal hgtott olajat lassan tszvatjuk,

majd 10 ml tiszta n-hexnnal az oszloprl lemossuk az olajat illetve az
egyb lipid jelleg zavar komponenst. (megjegyzs: A diol-adszorbens
H-hidak segtsgvel csak az atrazint kti meg, majd elcival ezen Hhidakat szaktjuk fel egy ersebb oldszer (pl. metanol) alkalmazsval.
Kplet

Az oszlopon kttt atrazint 2 ml metanol tszvatsval oldjuk le

/deszorpci/.

A metanolos oldatot mikrobeprl berendezssel nitrognrammal kb. 100

l-re koncentrljuk. Az gy kapott oldattal vgezzk a vkonyrteg
vizsglatot.

18.2.

Vkonyrteg-kromatogrfia
Az extraktban lv atrazint standard birtokban vkonyrteg kromatogrfia
segtsgvel azonostjuk.
-

vkonyrteg lemez: Szilikagl 60 F254

eluens: kloroform: aceton = 7:3 (v/v)

detektls: UVfny = 254 nm

A standard atrazinbl 1 mg/ml koncentrcij metanolos oldatot ksztnk, s ebbl

visznk a rtegre 2 l-t.

19. PATULIN KIMUTATSA ALMBL, ALMASRTMNYBL

A patulin a gymlcskben fleg az almaflkben s a termkeikben gyakran elfordul (pl.
Aspergillus s Penicillium) gombk ltal termelt mikotoxin.
Kplet
19.1.

Izolls
-

50 g homogenizlt mintt vagy 50 ml almasrtmnyt 500 cm3-es

Erlenmeyer lombikban ultrahangos frdben 1 rig rzatunk. A kapott
keverket 15 percig 5000 fordulat/perc gyorsulssal centrifugljuk. A
fellszt lentjk.

A lenttt fellszt rztlcsrben 2x60 cm3 n-hexnnal extrahlva

zsrmentestjk.

Az acetonitriles fzist rotcis vkuumbeprln oldszermentestjk. A

maradkot 1 ml kloroformban oldjuk s ezzel vgezzk el a VRK
vizsglatokat.

19.2.

Vkonyrteg-kromatogrfia
-

Vkonyrteg lemez: Szilikagel 60 F254

Eluens: toluol: aceton: kloroform = 45:35:35 (v/v)

Kirtkels:
- UV fny ( = 254 nm)
- Az UV rtkels utn a lemezt bepermetezzk 3%-os (v/v) NH 4OH
oldattal, majd megszrtjuk meleg levegvel. Szrads utn a lemezt
lepermetezzk 4%-os (m/v) fenil-hidrazin vizes oldatval, majd 100 oCon 10 percig szrtjuk a lemezt. A patulin vilgossrga sznnel
jelentkezik.