Bacillus anthracis

Bacillus anthracis
- opte osobine Gram pozitivan bacil
raspored: pojedinano i u parovima (u direktnom
preparatu) ili u lancima (na preparatu iz kulture)
nepokretan
kapsula proteinskog sastava:
- polimer D-glutaminske aminokiseline
- rijetko se uoava na preparatu iz kulture
sporogen: centralna spora koja ne deformie tijelo
bacila

spora 92000

spora

Bacillus anthracis
- faktori virulencije kapsula

Bacillus anthracis
- faktori virulencije egzotoksin (A-B toksin): 3 komponente
protektivni antigen (B):
vezuje se za receptore na razliitim elijama
(mozak, srce, crijeva, plua, pankreas,
makrofagi...)
letalni faktor (A):
metaloproteaza smrt elije (nedovoljno poznat
mehanizam)
edem faktor (A):
poveava koncentraciju cAMP
edem

Egzotoksin: A-B toksin

PA: protektivni antigen = B

LF: letalni faktor = A
EF: edem faktor = A

Bacillus anthracis
- epidemiologija spore prisutne u zemlji
od antraksa oboljevaju prije svega
travojedi

Bacillus anthracis
- epidemiologija -

Bacillus anthracis
- epidemiologija -

Bacillus anthracis
- bolesti koni antraks inokulacija
pluni antraks - inhalacija
gastrointestinalni antraks - ingestija

spore u
pluima

svaki od 3 oblika antraksa moe

prei u sepsu

Koni antraks

Bacillus anthracis
- bakterioloka dijagnostika uzorci: bris lezije na koi, sputum, stolica, krv
direktni preparat: Gram pozitivni bacili u lancima; moe
se uoiti kapsula, rijetko spora
sputum

krv

kapsula

kapsula
kapsula

Mikrobioloka dijagnoza
konana dijagnoza na osnovu
morfolokih, kulturelnih i biohemijskih
osobina
Bioloki ogled- inokulacija suspenzije
miu
Ascolijeva reakcija termoprecipitacije
ELISA, pasivna hemaglutinacija

Bacillus anthracis
- bakterioloka dijagnostika izolacija: krvni agar
identifikacija:
ispitivanje mikroskopskih osobina

preparat sa kulture:
bacili u lancima,
centralna spora
koja ne deformie
tijelo bacila

Bacillus anthracis
- bakterioloka dijagnostika ispitivanje kulturelnih osobina
krupne hrapave (R) kolonije bez hemolize

Bacillus anthracis
- bakterioloka dijagnostika ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina
- razlikovanje B. anthracis-a od drugih Bacillus-a
molekularne metode (PCR)
test pokretljivosti

nepokretna
B. anthracis

pokretna

Bacillus anthracis
- prevencija i kontrola vakcinisanje ivotinja (iva atenuisana vakcina)
vakcinisanje ovaca 1882.

spaljivanje leeva ivotinja

uginulih od antraksa

Bacillus anthracis
- prevencija i kontrola potpuna kontrola i eradikacija
nije mogua zbog spora
vakcine za humanu upotrebu (mrtva
cijeloelijska, acelularni filtrat - protektivni
antigen)

Kolika je opasnost od napada

antraksom?
Antraks je 2001. g. bio namjerno razaslan u
potanske ustanove irom Sjedinjenih Drava
putem pisama koja su sadravala prah sa
antraksom. Centri za kontrolu i spreavanje
bolesti klasificiraju antraks kao agens A
kategorije. Agensi A kategorije se smatraju
najveom prijetnjom za nacionalnu sigurnost
zbog lakoe prenoenja, te visoke smrtnosti i
ozbiljnosti oboljenja.

Bacillus anthracis: bioloko oruje

Dobili ste pismo!

Anthrax pisma, listopad 2001

Bacillus cereus
- opte osobine Gram-pozitivan bacil
pokretan
nema kapsulu
centralna spora koja
ne deformie tijelo bacila

flagele

Bacillus cereus
- faktori virulencije spora
enterotoksini:
- termolabilan - dijarealni toksin (A-B toksin)
poveava koncentraciju cAMP
dijarea
- termostabilan - emetiki toksin
cereolizin (hemolizin)
fosfolipaza C (lecitinaza)

Bacillus cereus
- epidemiologija spore ubikvitarne

Bacillus cereus
- bolesti trovanje hranom:
dijarealni tip (meso, povre)

emetiki tip (ria)

Bacillus cereus
- bolesti infekcije oka: panoftalmitis
(nakon traume oka)

oportunistike infekcije (infekcije rana i opekotina,

sepsa, meningitis, apscesi mozga, endokarditis...)
* kontaminant

Bacillus cereus
- bakterioloka dijagnostika uzorci: ostaci hrane (stolica - esta kolonizacija
digestivnog trakta), brisevi....
direktni preparat: Gram pozitivni
bacili u lancima; moe se
uoiti spora
izolacija: krvni agar
identifikacija:
ispitivanje mikroskopskih
osobina

Bacillus cereus
- bakterioloka dijagnostika ispitivanje kulturelnih osobina:
krupne hrapave (R) kolonije, beta hemoliza

Bacillus cereus
- bakterioloka dijagnostika ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina
- razlikovanje B. cereus-a od drugih Bacillus-a

Identifikacija na osnovu
biohemijskih i kulturelnih
osobina

Corynebacterium spp.

Corynebacterium
- opte osobineGram pozitivni
bacili (oblik palice)

Corynebacterium
- opte osobineraspored: kineska slova, X, V, Y...
fakultativno anaerobni
nesporogeni
nepokretni
rastu na obogaenim
hranljivim podlogama
neke vrste su dio fizioloke mikroflore

Corynebacterium spp.
specifian sastav elijskog zida: polimeri
arabino-galaktana, kratkolanane mikoline
kiseline: CMN grupa
(Corynebacterium
Mycobacterium
Nocardia
grupa)

Corynebacterium diphtheriae
- faktori virulencije adherencija1
DIFTERIJSKI
TOKSIN
tox gen2 bakteriji donosi lizogeni
bakteriofag ( fag)
samo lizogeni sojevi stvaraju toksin

 Somatski Ag-glikolipidni, zajedniki za

CMN grupu (visok procenat masnih
kiselina u elijskom zidu)
Cord faktor-nosilac virulencije
Egzotoksin:faktor A(invazin i nekrozin) i
faktor B(inaktivira sintezu elijskom zidu)
Produkuju ga sojevi inficirani beta fagom

Corynebacterium diphtheriae
- faktori virulencije -

DIFTERIJSKI
TOKSIN

C region

B
R i T regioni

Corynebacterium spp.

Corynebacterium diphtheriae
striktno patogena i najvanija vrsta
difteroidi1
ostale vrste

Corynebacterium diphtheriae
- epidemiologija humani patogen
kapljina infekcija; direktan kontakt
kliconotvo

PATOGENEZA
C.diphtheriae vee se na sluznicu respiratornog trakta ili
kou gdje se razmnoava i lui difterini toksin to
dovodi do nekroze sluznice
Toksin
B-fragment - vee na stanine receptore
A (aktivni) fragment ulazi u stanicu, dovodi do smrti stanice
Neke stanice pokazuju veu osjetljivost na toksin: srane
(miokarditis), perifernih ivaca (demijelinizacija) i bubrega
(tubularna nekroza)

Nastaje sivkastosmea pseudomembrana

(drijelo, tonzile, nos ili sve do traheobronhalnog stabla)
est uzrok smrti je guenje zbog aspiracije membrane.

Corynebacterium diphtheriae
- bolesti Respiratorna difterija
Kutana difterija
patogeneza:
adherencija
multiplikacija i
produkcija toksina
lokalni i sistemski
efekti

Corynebacterium diphtheriae
- bolesti lokalni efekti:
nekroza epitelnih elija
pseudomembrane1

inflamacija

sistemski efekti:
apsorpcija toksina
sistem (paralize),...

miokard, periferni nervni

KLINIKA SLIKA
Difterija prednjega dijela nosa
gusti mukopurulentni iscjedak iz nosa
sistemski simptomi su minimalni do umjereni
Tonzilarna difterija
najei je oblik difterije
nagli poetak s vruicom, malaksalou, grloboljom
na tonzilama sivkaste membrane sa zelenkastim
krpicama ili crnim nekrotinim dijelovima, koje se ire
i na uvulu, meko nepce, orofarinks i nazofarinks
tekoe s gutanjem, oteklina i limfadenopatije vrata
(volovski vrat)

"bull-neck1"

pseudomembrane

kutana difterija1

KOMPLIKACIJE
Miokarditis
nakon 1 2 tjedna bolesti, esto ve u toku
poboljanja.
od asimptomatskog miokarditis do zatajenja srca i
cirkulatornog kolapsa

Neuroloke komplikacije
polineuritis 20%
neuropatije perifernih i kranijalnih ivaca
paraliza mekog nepca i stranjeg farinksa smetnje
gutanja

Corynebacterium diphtheriae
- dijagnostika -

Direktni preparat (Gram, specijalno bojenje za

metahromatske granule)

Kultivisanje
- krvni agar

bris rane

Lffler podloga (koagulisan serum)

insdalova podloga
selektivne podloge Clauberg II (sa kalijum teluritom)
Biotipovi:mitis, gravis i intermedius
Kolonije su crne, glatke, sjajne sa ili bez uzdignutog centra

Corynebacterium diphtheriae
- dijagnostika Identifikacija
ispitivanje mikroskopskih osobina
metahromatske
granule

ispitivanje kulturelnih
osobina
C. diphtheriae:
kolonije na podlozi
sa teluritom

C. diphtheriae:
kolonije na krvnom
agaru

ispitivanje fizioloko biohemijskih osobina sa Hisovim

eerima (glukoza, maltoza i saharoza)
ispitivanje toksigeninosti izolata C. diphtheriae

Elekov test1
PCR
(detekcija tox
gena u uzorcima,
kulturi)

LIJEENJE
Difterini antitoksin (konjski hiperimuni
antiserum)
neutralizira cirkulirajui toksin, ali ne i onaj koji
se ve vezao za stanice ili uao u njihovu
unutranjost tako da nema specifine terapije
miokarditisa ili neuritisa

Antibiotici
penicilin ili eritromicin 7-14 dana

Corynebacterium diphtheriae
- prevencija vakcina:
toksoid (anatoksin) difterijskog toksina
DiTePer (DTP)

Difteroidi
oportunisti
dio fizioloke mikroflore
kliniki znaaj u porastu
Znaajne vrste:
bolniki
C. Jeikeium
oportunistiki
patogeni
C. amycolatum
urinarne infekcije
C. urealyticum
C. pseudotuberculosis mogu da nose tox gen
C. ulcerans

Difteroidi
bakterioloka dijagnostika
kultivisanje (krvni agar, podloge sa teluritom)
identifikacija: razlikovanje na osnovu biohemijskih
testova
izvetaj iz laboratorije:
"Difteroidi"
"Corynebacterium spp.
antibiogram (u zavisnosti od situacije) - problem
rezistencije na antibiotike
Tumaenje nalaza: procjena znaajnosti

Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes
- opte osobine -

Gram pozitivan bacil, esto tvori palisade

pokretan na 25C, ali ne i na 37C

fakultativno anaeroban
psihrotolerantan - raste i na 4C, ali je
optimalna temperatura za rast 37C

Listeria monocytogenes
- Gram-pozitivni bacili -

Rod Listeria

Klasifikacija
L.monocytogenes
L.ivanovii
L.seeligeri
L.welshimeri
L.iinnocua
L.grayi
L.murray

Kultivacija
Obine hranjive podloge, bolje uz dodatak krvi
Aerobni uvjeti, bolje uz 5-10% CO2
Kolonije male, okrugle, glatke, prozirne,
sivkasto-bijele
Ispod kolonija uska zona -hemolize
Pozitivan CAMP test sa vrstom S.aureus
Hidrolizira eskulin
Selektivne podloge za izdvajanje listerija

 - hemoliza

CAMP test - L.monocytogenes i

S.aureus

Oxford agar

Selektivna i diferencijalna podloga

Litij-klorid (selektivnost) sprijeava rast
gram-negativnih
i nekih gram-pozitivnih bakterija
Eskulin i ioni eljeza (diferencijacija)
Eskulin 6,7-dihidroksi-kumarin + Fe
crne kolonije

Oxoid kromogena podloga za

listerije
-glukozidaza (sve
listerije) plave
kolonije
Fosfolipaza C
(patogene listerije)
prozirni prsten oko
kolonija

Antigenski sastav
O i H antigen serotipizacija (5 serogrupe i 16
serotipova)
Hemolizin - listeriolizin O
Fosfolipaza C (specifina za patogene
listerije)
Lipidna frakcija
Proteinska frakcija
Kompleks Ei de Patocka-slian endotoksinu

Listeria monocytogenes
- faktori virulencije fakultativno intracelularna bakterija
invazija elija i intercelularno irenje
internalin (membranski protein):
olakava ulazak u eliju (makrofag,
epitelna elija)
listeriolizin O (hemolizin): razgrauje
membranu fagocitne vakuole (stvara
pore)
fosfolipaza: hidrolizuje membranu
fagozoma i membranu elije to
omoguava irenje u neinficirane elije
ActA protein: nalazi se na povrini
bakterije i indukuje reorganizaciju
aktinskih vlakna elije domaina

Listeria monocytogenes
- intracelularna patogeneza zeleno: aktin
crveno: L. monocytogenes

Listeria monocytogenes
- intracelularna patogeneza zeleno = aktin;
crveno = L. monocytogenes

Listeria monocytogenes
- bolesti imunitet primarno posredovan T limfocitima
1. intrauterina infekcija: granulomatosis infantiseptica
(apscesi u jetri, slezini, pluima, CNS-u)
mrtvoroenost
2. neonatalna listerioza: meningitis,
meningoencefalitis, sepsa, pneumonija
3. listerioza odraslih: najee asimptomatski
imunokompromitovani: meningitis,
meningoencefalitis, sepsa...

novoroene:
makulopapulozna ospa

Listeria monocytogenes
- epidemiologija iroko rasprostranjena u prirodi
transmisija:
1. transplacentarna transmisija
2. u toku poroaja
(kolonizacija vagine)

Listeria monocytogenes
- epidemiologija 3. hrana: nepasterizovano mleko, sir,
sirovo povre,...

Putevi prenoenja

Transplacentarni put
Aerogeni put (inhalacijom aerosola)
Kontakt sa inficiranom ivotinjom
Spolni kontakt
Alimentarni put

Dijagnostika listerioze
Materijal za pretragu:
Vaginalni i cervikalni bris, krv iz vene i
pupanika, placenta, likvor
Izolacija i identifikacija uzronika
Imunofluorescencija, test aglutinacije na ploici
pomou dijagnostikih seruma, RVK
histoloka pretraga
Bioloki pokus:
Antonov test inokulacija u konjuktivu kunia
ili zamorca nakon 24-36h gnojni
keratokonjuktivitis

Listeria monocytogenes
- bakterioloka dijagnostika uzorci: krv, likvor, sadraj apscesa, bris
vagine
jednostavni nutritivni zahtevi
identifikacija: biohemijske osobine
serologija: nepouzdana !!!

Zastupljenost
Proirena svugdje u okolini
Tlo, voda, povrina biljaka, silaa,
kanalizacija, probavni sustav mnogih
vrsta ivotinja i ovjeka
Sirova i obarena hrana, mlijeko i
mlijeni proizvodi, mekani sirevi, meso,
povre i morska hrana

Listeria monocytogenes
- prevencija i kontrola mikrobioloka ispravnost
hrane

...KRAJ