AL MICROBIOLOGIA FRANK ZEGERS Universidad Agricola de Wageningen Holanda‘A. MICROBIOLOGIA 1 DESCOMPOSICION ANAEROBICA DE MATERIA ORGANICA 1.1 INEFICIENCIA DE LA DESCOMPOSICION ANAEROBICA La descomposicién angerébica de materia orgénica involucra procesos me tabélicos que son menos eficientes que el metabolismo aerébico. Basan dose en esta baja eficiencia, se pueden distinguir los ambientes micro Diolégicos que carecen de aire de los que si tienen. Los organismos anaerébicos casi siempre liberan materia orgénica rica en enerpla del sus trato que ilustra como estos no utilizan completamente la energia po tencial que reciben. Por ejemplo, el proceso de fermentacién resulta en 1a descomposicién de azicar a alcohol y acido acético; o el proceso de metenogénesis resulta en la descomposicién de Acido acético a metano. Estos misnos substrates se transformarian totalmente en H,0. y C0, en los ambientes aerébicos. Una consecuencia importante de le ineficien cia de las bacterias anaerdbicas es que hay menos energia disponible para el crecimiento (de las células microbiales) en el substrato consu mido. Por esto, los microorgenismos anaerébicos producen menos mate ria celuler por unidad de substrato consumido que los microorganismos aerdbicos. Otra consecuencia importante, es que la velocidad de creci miento y la actividad de bacterias anaerébicas son menores que le de las bacterias aerébicas. Ciertos aspectos de 1a ineficiencia metabélica pueden ser considerados como ventajosos para el tratamiento de aguas residuales. La baja pro duccién de materia celular minimiza 1a cantidad de lodo que debe ser eliminado (una gran desventaja del tratamiento aerébico). La libera cién de productos metabélicos ricos en energia (como metano) puede ser1.2 muy fitil pare minimizar los gastos de energia. La baja velocidad de crecimiento y actividad de las bacterias anserébi cas es una desventaja para el tratamiento de aguas residuales. La ba ja actividad metabélica puede compensarse manteniendo un alto nivel de Jodo microbial en el reactor. La baja velocidad de crecimiento hace necesarios largos periodes de tiempo (hasta un afio) y una especial aten cién para el primer arranque del UASB. Esta desventaja no existe si hay lodo anaerébico adaptado de otro reactor. En cuelquier caso, una dificultad asociada es el tiempo necesario para rearrancar si por alg(in accidente el lodo sufre deterioro. TTRANSFORMACIONES DE LA DQO-SUBSTRATO EN EL AMBIENTE ANAEROBICO Compuestos orgénicos (DQ0) que eventualmente pueden ser utilizados com substrato en un determinado ambiente anaerdbico (DQ biodegradable = DQ0gp) son degradados por 1a combinacién de 1a actividad de cuatro gran des tipos de bacterias anaerébicas. Una versién simplificada del curso de 1a DQgy en el ambiente anaerdbico se presenta en 1s Figura 1. La degradacién de substratos poliméricos de plantas como celulosa, protei nas y grasas es ilustrada en esta figura. Estos substratos poliméricos son inicialmente hidrolizados por enzimas extracelulares. Estos compuestos son hidrolizados fuera de 1a célula bacterial por ser demasiado grandes para penctrar a través de 1a membrana celular. Las enzimas extracelulares son producidas dentro de les bacterias fermentatives y excretadas fuera de 16 célula. En el exte rior, estas pueden atacar los substratos poliméricos e hidrolizarlos hasta monémeros m&s pequefios (azicares, amino&cidos y grasas) que pue den atravesar f4cilmente la membrana celular de les bacterias fermenta tivas.Sustratos Poliméricos HIDROLISIS. = Enzimos Extracelulares Sustratos | Monomericos METANOGENESIS METANOGENESIS AUTOTROFICA ACETOCLASTICA FIGURA 1 Flujo del sustrate como D0, a través de una comunidad micro biolégica anaerébica. Los procesos encerrados en circulo ocu rren dentro de las células bacteriales Cintracelular). Los procesos que no estan encerrados en cfrculos, ocurren fuera de las células (extracetutar). asLas bacterias fermentativas metabolizan estos substratos monoméricos dentro de 1a célula. Generalmente, solo una pequefia cantidad de le energia potencial en le DQpp es utilizada para la fermentacién. Una gran proporcién de la DQyy consumida (= 80%) es luego excretada fuera de 1a célula en forma de alcoholes, Scidos grasos volatiles (AGV) y gas inidyégeno . En el caso de un cultivo natural de bacterias (lodo y agua residual), los productos principales de la fermentacién son AGV (écidos acético, propiénico y butirico). El resultado total de la fermentacién es la conversién de substratos neutros, tal como aziicares y aminodcidos, en Acidos orgénicos relativamente fuertes. Por ello, “acidificacién" es también un término adecuado para denominar a la fer mentacién. Al final de a fermentacién, 1a mayorfa de 1a DBO, se encuentra en cuatro compuestos : fcido acktico (C,); Acido propiénico (C4); acido butirico (C,)y gas hidrégeno. En un ejemplo tipico de degradacién de azicares y amindfcidos (662 y 34% de 1a DQ0,)), 1a distribucién de le D5 al final de la fermentacién fue : 53% : 30% : 17% para c, : (Cy + C,) + Hy (Gujer y Zehnder, 1983). Los productos finales Cy y c, de la fermentacién no son substratos directos de las bacterias meta nogénicas. Otro grupo de organismos, denominados bacterias acetogéni cas, toman C, 0 C, dentro de sus células. Estas bacterias oxidan (anacrébicamente) el C, 0 C, hasta C) y Hy, que son excretados fuera de la célula, La DQpp degradada a C) y Hy proviene en una parte de le fermentacién yen otra de la acetogénesis. Estos dos compuestos son los verdaderos substratos metanogénicos. Ambos son tonados dentro de las células bac teriales netanogénicas y metabolizados a metano, que @ su vez es excre tado fuera de la célula. Dependiendo de la cantidad del substrato me tanogénico usado, se pueden clasificar las bacterias metanogénicas en dos grupos principales : bacterias metanogénicas autétroficas (utili zan Hp); y bacterias metanogénicas acetoclasticas (utilizan C,). En a4- un caso tipico, 30% y 70% del metano formado se atribuye a las bacte - rias metanogénicas autétroficas y acetoclasticas, respectivamente. 1.3 ASOCIACIONES SINTROPICAS Sintropia se refiere a la dependencia entre grupos de bacterias. En el ambiente anaerébico, se presentan relaciones sintrépicas. Un ejem plo importante, es le dependencia de las bacterias acetogénicas por le metanogénesis autotréfica. La oxidacién anaerébica de C, y C, en le acetogénesis es inhibida por uno de sus productos finales, Hp. Por es = ta razén, la degradacién de C, y C, depende de una poblacién metanogé nica autotréfica activa que elimine el Hy del medio. En caso de inhi os bicién completa de 1a metanogénesis autétrofica, séie-.el C, es conver tido en metano (= 53% de 1a DQO fermentado), mientras el C,, C, y Hy no son utilizados. - 2 CRECIMIENTO Y ACTIVIDAD DE LAS CELULAS BACTERIALES ANAEROBICAS 2,1 PRODUCCION CELULAR Durante el metabolismo anaerobio, parte de 1a DQgp es convertida en = nuevo material celular de bacterias anaerobias (DQ,.,)- Se conside ran como células a 1a biomasa, lodo o 861idos suspendidos, ya que es tos son una forma de DQO producida a partir de DQO,, soluble. En Ja Tabla No. 1 se reportan factores de produccién de lodo promedios obte nidos en la literatura para bacterias fermentatives (acidogénicas), _ acetogénicas y metanogénicas, asi como aerobias. Los factores de pro duccién celular se representan en términos de sélidos suspendidos vol& = tiles (ssv) generados por unidad de DQ0,) consumida. La DQ0..) produ AS1 | } 1 ' 1 ' 1 t 1 ' 1 1 1 Ig souyaupied so) Jeulua3zap eved opesn o3e3sns ©) Soujawpued $0) Jeulwiazap esed opesn o3e435n$ ey 7 4 £5 uosesn a5 soszaupsed soy seupusazap eved 79 ay sueonze gsn as Soujaupied $0) JeUjwsazap eyed + 4210199 upLaonposd e} £ a}eiqop sp odue}3 1ap 4LqJed e a3UaWeD}J9a9 epe} nayeo “sepedspul se{sa32eq Se} ap Ound OALa}ND UN ap SOIUBLALA S21N199 SP ASS SO] 4p 4e1NIa2 PEPLALIIE OT +¥ sopiwnsuos opa ap pepiun sod eppanposd 4eyn}99 Oba © jen6y sas agap y*| oped! jdy27nw JoVen 3383 “ORG BP OUEYD 40d ASS ap Ug}22NpOJd @) So 4eIN]90 UpL2INPOsd eT» eujauesouesy * xpagoueaay * 25 Se913SP790300 2 soaysquaoany S| soup6oueray seayupborace seivazdeg Yye2y spsaugb03a0y Seapzequausas se.vai9ea suptoeo ts tpLoy se}qguae se.aqoeg #sopent3ze sopo7 P x ass 6/000 6 ova 6/ass 6 seyp er INTADQVOIATLOY. «= -¥UVINTAD NOTIINGOYd =— ar 3d OAWITL VIvaLvG 30 OdTL (Q9SE A OF V NVLNOGRE 3S S¥YOWA S01) SOITAOYSY SOGVATLOV SOd07 A SVOTEOUAYNY SWIYALIVE 30 OLNZTWIDAYD 30 SOULaNVEYd — | WIEVL a62.2 cide por unidad de DQ0,) consumida puede ser calculada asumiendo que tun factor normal de conversién SSV,,1 a DQO,,@8de 1.4 g} DQ0 g? ssv. Las bacterias aerobias poseen el mayor coeficiente de produccién celu lar debido a su més eficaz uso del substrato. Generalmente un poco mas de la mitad (56%) de 1a DQO consumida por las bacterias aerobias es transformada en materia celular. Las bacterias fermentativas tie nen un coeficiente de produccién menor, pero en cualquier caso, este es suficientemente alto para que una fraccién significativa (202) de 1a DQ0,y fermentada sea convertida en DQ0..1- Existen importantes diferencias en coeficientes de produccién celular entre los grupos de bacterias que conforman 1a comunidad anaerobia. Por esta razén 1a composicién del agua residual puede ser un factor determinante de la cantidad producida de DQO,,; en 1a digestién anaerébica, Substratos no acidificados tales como celulosa, azficares, proteinas y amino&cidos atravesarén ambos la fermentacién (acidifica cién) y 1a metanogénesis, de tal forma que aproximadamente el 22% de 14 DQpp consumida es convertida en DQO,,; en su degradacién anaeré bica hasta metano. Los substratos ya acidificados, tales como AGV, s6lo atraviesan la comunidad metanogénica y su degradacién anaerébica resulta en una baja produccién celular metanogénica (3% de la POyp consumida). En el caso hipotético de que la retencién de células fer mentativas y metanogénicas en el reactor fuera igual, el lodo anaeré bico cultivado en el reactor fuera igual, el lodo anserébico cultivado en substratos no acidificados tendria una concentracién de bacterias metanogénicas menor que el cultivado en AGV, puesto que este diltino no estaria diluido con células de bacterias fermentativas. TASA DE CRECIMIENTO Tiempos de duplicacién (dias) promedios de bacterias anaerbbicas se A?recogen en la Tabla No.1. El tiempo de duplicacién es el tiempo nece sario para que le poblacién bacterial se reproduzca al doble de su ni mero inicial. La tasa de crecimiento especifico es el nuevo crecimien to por unidad de tiempo expresado como fraccién de 1a poblacién ya existente. Puede ser calculado a partir del tiempo de duplicacién de acuerdo con la siguiente relacién : uo = 0,693/td donde. : uo = tasa de crecimiento especifico (dias td = tiempo de duplicacién (dias) La Tabla indica que las bacterias fermentetivas se reproducen a una velocidad mucho mas répida (= 10 a 60 veces mas rapido) que las metano génicas. La baja tasa de crecimiento de las bacterias metanogénicas acetoclasticas es el factor que contribuye de una forma mis importante @ los lergos tiempos de arranque. Adicionalmente, esta baja tasa de crecimiento implica que, en reactores sin retencién celular. no pueden aplicarse TRH inferiores a 2 - 10 dias. En la Tabla No. 1 se menciona que e1 tiempo de duplicacién de las bacteria metanogénica acetoclastica mis comin es 7 dias, Asumiendo condiciones éptimas para el arranque (incluida retencién total del lodo), se requeriraén 7 dias para que la Poblacién metanogénica se duplique (igual al tiempo de duplicacién de Ja capacidad de carga). Ya que las bacterias mis necesarias poseen un tiempo de duplicecién tan largo, el éxito del primer arranque de cual quier tratamiento anaerdbico (de cargas elevadas) depende casi total mente de un crecimiento adecuado de las bacterias metanicas y de que el material celular metanogénico generado sea retenido en el reactor como lodo bacterial. AB2.3 AFINIDAD POR EL SUBSTRATO 2.4 Las tasas de crecimiento recogidas en 1a Tabla No. 1 han sido determi nadas @ elevadas concentraciones de substrato. Sin embargo, cuando la concentracién de substrato es baja, la velocidad de transporte del substrato al interior de las células es menor. Consecuentemente, la tase de metabolismo y crecimiento se ven también afectadas. Los facto res "Ks" en la Tabla No. 1 indi¢an les afinidades por el substrato de bacterias anzerobias. La Ks es 1a concentracién de substrato para la cual 1a tasa de crecimiento es el 50% de le méxima. Al disminuir Ja concentracién Ks 1a afinidad por el substrato se incrementa. La afinidad por el substrato tiene un papel importante en el proceso UASB ya que existe competencia ecolégica entre dos bacterias metanogé nicas acetocl4sticas. La m4s comin, methanothrix, presenta una tasa de crecimiento menor pero una mayor afinidad por el substrate (menor Ks). Esta es la mas comin de las dos, .pues durante el tratamiento el efluente se mantiene tan limpio como es posible. Normalmente esto im plica que la concentracién de AGV en el reactor es muy baja. La otra bacteria meténica acetocléstica, methanosarcina, posee una tesa, de crecimiento muy elevada. Sin embargo, cuando 1a concentracién de subs trato es baja, su tasa de crecimiento es menor a la de methanothri: metanosarcina seré la bacteria dominante si el contenido del reac tor se presentan con frecuencia AGV, ACTIVIDAD DE BACTERIAS ANAEROBICAS Y ETAPAS LIMITANTES Las actividades de utilizacién de DQ0,) promedio de cultivos bacteria les puros se recogen en 1a Tabla No. 1. Estos valores se refieren a Ja utilizacién de DQ) por unidad de materia celular (SSV) viva. En la prctica el lodo no es un cultivo puro de bacterias metanogénicas. Los mejores lodos pueden tener sélo de un 25 a 502 de Ja actividad aocitada en le Tabla No. 1, El lodo contiene bacterias fermentativas y células muertas asi como materia organica inerte. Por otra par te, la tasa de crecimiento de las bacterias fermentativas es tan al ta que el lodo de reactores de acidificacién puéde ser reletivamente puro en bacterias fermentativas vivas. En este caso le actividad pe de cor'similar a las citedas en la Tabla No. 1. Cuando 1a DQyp esté compuesta por substrate fécilmente biodegrada bles, tales como azticar o aminodcidos, 1a etapa limitante de la diges tién anaerébica es la metanogénesis. Las bacterias fermentativas aci difican un substrato a una velocidad 8 veces mis répida que las bacte vias metanogénicas (methanothrix) consumen los AGV. Como resultado, Ja capacidad de utilizacién de DQgp total de 1a poblacién metanogé nica en el reactor determina 1a méxima carga de DQ) que puede apli carse. Si la velocidad de carga excede 1a capacidad metanogénica se produciré una acumulaci6n de AGV en el reactor, e1 pH disminuiré y como consecuencia los AGV pueden ser muy téxicos. 3 INHIBICION DE LA METANOGENESIS POR LOS PRODUCTOS FINALES DE LA FERMEN TACION 3.1 TOXICIDAD DE AGV Los AGV son téxicos para 1a metanogénesis solamente en la forma no jonizeda. A un pH dado, existe un equilibrio entre las formas ioni zadas (Ar + H+) y no ionizadas (HA). A los valores de pH generalmen te deseados en el tratamiento anaerébico (7-8), los dcidos organicos est4n mayoritariamente (> 99%) en la forma ionizada (no téxica). Cuando el pHi disminuye, los AGV estén menos disociados (téxicos). A un pH de 5, los AGV estén disociados en un 50% aproximadamente. Una concentracién de C) y C, en la forma no disociada de 16 y 6 mg DOL An10respectivamente, causa-un 50% de inhibicién de le actividad me tanogénica. En la Tabla No. 2 puede concentrarse la concentracién total de AGV que corresponde a una inhibicién del 50% a diferentes PH. La Tabla ilustra claramente que el pH es un factor muy importan te que determina 1a toxicided. Ya que 1a toxicided de AGV depende fuertemente del pH, se debe afia dir la suficiente cantidad de base al agua residual para evitar que una acumilacién de AGV cause una caida del pil. 4 FACTORES AMBIENTALES 4.1 pH La presencia de AGV en la forma no ionizada hace que cuando el pH es inferior a 6.0, una severa inhibicién de las bacterias metanogéni cas pueda ser anticipada. Por otra parte, las bacterias fermentati vas son ain activas hasta un pH de 4.5. Cuando la capacidad metanogé nica esté continuamente sobrecargada y no se afiade 1a base necesaria para neutralizar los AGV presentes, el sistema de tratamiento se con vertird en un reactor de acidificacién. EL pH de este efluente seré préximo a 4.5 - 5.0, Se recomienda mantener el contenido del reactor en un intervalo de pH entre 7.0 y 7.5. La actividad de las bacterias metanogénicas tam bién disminuye si el pH aumenta por encima de 7.5. 4.2 TEMPERATURA De acuerdo con la temperatura los ambientes anaerébicos pueden divi Am+5 sooyupidoud 4 -25 0043908 sopiog S01 9p upioe.s0sip ap aqueysucD e7 X opeztuo} ou UD{UpDIO OLE 1p UPLDIGLYUL e7 augos sepeseg seperno7e9 UOUaN) ZO 1p SEJOPLGLYU} S2U0{Ie4qUBDUOD se] » «2a onvaaow * Voeg 6a ‘%OS_T VIMOLIGIHNI NOTIVOINIONOD ud 3a SBYOWA SOTUVA ¥ SODINVSYO SOGTIV 34 STSANSDONVISN VU¥d “XOS 13d VINOLIGIHNT NOTIYULNZINOD Vz VIBVL Ante43 dirse en tres categorias : psicrofilicos (0 a 20%); mesofilico (20 @ 40°%C)y termofilico (45 a 65°C). Las bacterias que crecen en cada uno de estos intervalos de temperatura son organismos diferen tes. Si el intervalo de temperatura en el reactor cambia, es nece sario arrancar el reactor de nuevo. Una nueva poblacién bacterial tiene que ser cultivada. .. Durante este seminario, nos centraremos en el intervalo mesofilico. En este rango, la actividad y el crecimiento de las bacterias dismi nuye en un 50% por cada 10°C de descenso por debajo de 35°C. Los pa rémetros de crecimiento en la Tabla No. 1 son dados de 30 a 35°C. Cambios de temperatura en el intervalo mesofilico pueden ser normal mente tolerados, pero cuando 1a temperatura desciende la carga tan bién debe ser disminufda de acuerdo con el descenso de 1a activided esperada. No es acondejable aumentar le temperatura de reactores mesofilicos por encima de 42°, ya que a tenperaturas més altas ocurre un répido deterioro de las bacteries. NUTRIENTES La digestién anaerébica por ser un proceso biolégico requiere ciertos sutrientes inorgénicos esenciales para el crecimiento; En defecto de estos nutrientes el crecimiento esté limitado. La mayorfa de las aguas residuales no presentan una deficiencia. Sin embargo, algunos afluen tes producidos en la fabricacién de papel, almidén y alcohol pueden ser deficientes en los micronutrientes esenciales. En la Tabla No. 3, puede encontrarse la composicién inorgénica de las bacterias metanogénicas. Estas contienen los nutrientes esenciales normales, tales como N, P y S, pero algunos micronutrientes, tales como Ni, Fe y Co, estén presentes en concentraciones m4s altas que en otros organisuos. Esto indica un requerimiento particular de estos micronu trientes por las bacterias metanogénicas. A-13ova 6 = seg7ax is oa 8 = gL X ASS 8 + Ouexou yep sejuayoeq eved UPLsYEAUC? °P seuoyed ‘FaTUSTTMUOIT seoas sb7n}29 By/6u NoTOVULNBDNOD one (£86) “N3UaHDS) TaTINUOITH seoas seynyso 6y/60 NOTIVELN3ONOD OuNaWa7 oNVAgH 720 S¥IYaLDVE SVT 3d TINAW2T3 NOTITSOEWOD © viv. Ath