A vitamin (retinol)

1.HPLC
2.Hemijske
a.Carr Price spektrofotometrijsksa metoda, koristi antimon trihlorid u hloroformu
b.Neeld Pearson korisiti trifluorsircetnu kiselinu koja reaguje sa elektronima na dvostrukim vezama
vitamina A i stvara obojeni spoj (plav)
HPLC je specifian I reproducibilan, taan, moze se automatizirati
Hemijske metode su nespecifine, korozivni reagensi, ne mogu se automatizirati
Retinol: retinol binding protein: transtiretin je 1:1:1 u serumu, a s obzirom da se mogu mjeriti oba,
na osnovu toga se moe procijeniti koncentracija retinola

D vitamin (kalciferol)
Kod svih metoda postoje tri stepena
1.Deproteinizacija od vitamin d binding proteina, najcesce uz acetonitril
2.Hromatografija na koloni radi razdvajanja raznih oblika vitamina d, lipida etc
3.Kvantifikacija metodama ovisnim o tome sta se odreuje
a.za 25(OH)d3 koristi se metoda kompetitivnog vezanja sa vitamin d binding proteinom I HPLC
b.za 1,25(OH)2d3 koristi se RIA nakon razdvajanja sa HPLC te RIA nakon ekstrakcije
1,25 oblik je 1000x vie zastupljen u serumu od 25 oblika

E vitamin (tokoferol)
1.HPLC je metoda izbora
2.Spektrofotometrijske ili fluorimetrijske metode, gdje se tokoferol oksidira sa ferihloridom u
tokoferilkinon, a nastalo (II) eljezo se odredi sa batofenantrolinom, tenastaje crvena boja. U ovoj
metodi interferira karoten, koji se moze otkloniti hromatografijom

K vitamin (fitomenadion)
1.HPLC sa elektrohemijskom ili fluorimetrijskom detekcijom
2.Na osnovu koncentracije des-gama-karboksitrombina ili nekarboksiliranog trombina (nastaje zbog
gubitka ili antagonizma vitamina k), odredi se imunohemijski
3.Funkcionalna metoda na osnovu uinka izostanka vitamina k na protrombinsko vrijeme (normalno
je 10 14 sekundi, kada ga fali oko 30 sekudi)

Vitamin B1 tiamin
U analitici tiamina postoje 2 pristupa:
1. Ispitivanje funkcije TPP-a kao enzimskog kofaktora odreivanjem aktivnosti eritrocitne
transketolaze prije i nakon dodatka egzogenog TPP-a;
2. Mjerenje koncetracije TPP-a izravno u eritrocitima ili punoj krvi preporuena metoda je
HPLC.
Postoji i odreivanje mikrobiolokom metodom, kojom su u mokrai obuhvaeni i metaboliti
tiamina, te odreivanje fluorimetrijskim i spektrofotometrijskim metodama.

Vitamin B2 riboflavin
Postoje tri naina odreivanja:
1. Odreivanje koncentracije riboflavina izluenog mokraom (fluorimetrijski ili mikrobioloki, a
najbolja je HPLC u kombinaciji sa fluorimetrijskom detekcijom);
2. Odreivanje aktivnosti FAD ovisne glutation reduktaze (odreivanje promjene apsorpcije na
340 nm uzrokovane oksidacijom NADPH-a);
3. Izravno mjerenje riboflavina ili njegovih metabolita u plazmi ili eritrocitima (HPLC s
detekcijom fluorescencije nakon taloenja proteina, ili kapilarna elektroforeza).

Vitamin B6 piridoksin, piridoksamin, piridoksal

1. Izravno odreivanje pojedinih oblika vitamina i njegovih metabolita (mikrobioloke metode
upotrebom specifinih sojeva bakterije Saccharomyces carlsbergensis za sva tri oblika
vitamina, Enterococcus faucinum za piridoksal i piridoksamin, te Lactobacillus casei za
piridoksal);
2. Ispitivanje funkcije vitamina (mjerenje koncentracije PLP-a u plazmi ili eritrocitima, te
njegovog metabolita 4-piridoksinske kiseline u mokrai ili plazmi);
3. Funkcionalna procjena statusa piridoksina mjeri se odreivanje aktivnosti eritrocitnih AST-a i
ALT-a, te njihovih koeficijenata nakon inkubacije PLP-om.

Vitamin B12 cijanokobalamin

1. Direktne metode (mikrobioloke u kojima se odreuje rast mikroorganizama koji za to
trebaju kobalamin, poput Euglena gracilis, i imunohemijske RIA)
2. Indirektne metode (odreivanje koncentracije homocisteina u plazmi i metilmalonske
kiseline u mokrai i serumu);
3. Odreivanje koncentracije ukupnog homocisteina vri se HPLC-om u fluorescentni detektor,
zatim uz pomog GC-MS i enzimatskih metoda.

Vitamin B9 folna kiselina

Koriste se imunohemijske metode, uglavnom s CPBA. U metodi kompetetivnog vezivanje s prirodnim
proteinom koji specifino vee folat (FBP), folat obiljeen biotinom i folat iz seruma konkuriu za
vezna mjesta na FBP. Danas se ipak ee koristi HPLC s elektrohemijskom ili MS detekcijom.

Vitamin B3 niacin
Odreuje se koncentracija njegovih metabolita u mokrai, s HPLC-om. U tu svrhu razvijene su i
metode kapilarne elektroforeze, pri emu se mjeri odnos N'-metilnikotinamida i N'-metil-2-piridon-5karboksamida.

Vitamin C askorbinska kiselina

Odreuje se izravno u plazmi, mokrai ili tkivu spektrofotometrijskim metodama.
Sa 2,4-dinitrofenil hidrazinom daje crveni bis-hidrazon.
Sa 2,4-dihloro fenol redukuje se u bezbojni oblik, to se prati na 520 nm.
Postoji i fluorimetrijsko odreivanje, te HPLC. Faze kod HPLC-a:
Vitamin C + Cu(II) oksid dehidroaskorbat
Dehidroaskorbat + 2,4-dinitrofenil hidrazon bis hidrazon (520 nm)