Espectrometria de masas Desvio y desintegracién de gotitas iquidas al pasar junto a un alambre que sa encuentra # “+6000 V. [Tomade de DB. Hicen y NJ. Dover *Beha“or of Meroscopie Laud Droplets Near a Stong ctrosate Fel. Dropet Exectosprays, Anal Chem 1904, €6, 1593. Ver tambien D. 8. Hacer, NJ. Dower J Kussen y P Keser, Droplet Blecrosory Mass ‘Spectometry, Anal Chem. 1994, 66 2044), En la espectrometria de masas se utiliza la electronebulizacién para expulsar hacia la fase gzaseosa moléculas Ue proteinas cargadas, En el experimento que se muestra, gotitas de facetona de un diémetro de 16 jLm caen delante de un alambre de Pt, que se mantien & +6000 V respecto a la boquilla de salida de las gotitas, Este elevado voltaje crea una des- ‘carga eléetriea con corona brillante (un plasma contiene electrones y iones positivos) alte: ddedor del alambre, pero la descarga no Se ve en esta foto. Las gotitas que atraviesan la des- carga se cargan positivamente. y son repelidas por el alambre de forma que desvian st trayectoria hacia la derecha, Cuando pasan cerca del alambre gotitas eargadas posiivar mente, se observa una fina corriente de liquido que se aleja del alambee cargado positive mente. Las gotitas microscépicas de este fino nebulizado se evaporan ripidamente. Si el {quido fuera una disolucidn acuosa de protefnas el agua se evaporaria y dejaria moléeulas de profefna cargadas en la fase wascoss. La especies de mash sid dart cho emg oa erent pa tar capo ear eurctan orn, Lara al cop | eta TEs Ineo cond Je ferns meine gu cpus conse a pi A mie de don Lt epecuometa masts ex Suan eS Disco ces, pg et especie demas caper Ge cit bs tare compucsos qu leyenda column rele Usingut diesen asta Sears Beh teen, Acute a pce demise Tx pen cata I sconce amos en pretis, de thon nsx en DNA Y Uareaneara compe Ge biaioe de Francis W. Aston (1877-1945) consinuy® en 1919 un nespectrégralo de masass. que podin sseparar jones que diterian en s6io 1% de masa, ¥ Jos enfocaba en una placa ttogrética, Al poco tempo, Aston ancontrd que ef nedn const de 2is6topos (Ne y Ne, y hag’ a descute 212 e los 281 wdtopos que se presentan natural mente Recs el premo Nobel de Quimica en 1922. sitmos a B05 me 207 Be 29 mr Figura 22.1 Espectro de masas que muestra Jos Is6topos naturates del plomo abservados ‘como una impureza dal bronce. Terao de ¥ Su ¥ Dum y Z Jn. «Dewwoprert and Erakaton of @ Glow Dacharge Merownve-hduced Pasma Tandem Source fr Tine-oFlgnt Mass Spectometiys. Anat ‘Chem, 2000, 72, 5800) La varabiidad do las sbundancias ssot6picas del plomo en fuentos: ratursies es la causa do la gran incertidumbre de su masa attrrica (207.2 = 0,1), como apare- ‘pe en ia tabla perdcica en las guardas delante- a8 del Wro, (ERY {Qué es la espectrometria de masa La espectrometria de masas es una técnica para estudiar ls masas de étomos, moléeulas 6 fragmentos de molécalas.! Para obtener un espectro de masas, 1s moléculas gaseoras o fas especies desorbidas de fases condensadas se fonizan los jones se aceleran en un campo cléctiea y » continuacion se separan segiin su relacin masalcarga (m/s) Si todas las car~ fs son +1, m/z = m, El espectro de masas de la figura 22.1 es un grifico que represenia fa respuesta del detector frente a m/. Este expectro muestra cuatro istopos naturales de ‘lomo, separados como iones Pb. Tedricamente, el rea debajo de cada pico es propor- ional a a abundancia de cada is6topo. El recuadro 22.1 define la masa nominal, que es la masa de la que hablamos rormalmente en este capitulo. ‘La figura 22.2 muestra un espectrémetro de mnasas de sector magnético, que utiliza tun campo magnético para seleccionar ones de una determinada m/z, pasindolos de la fuente de iones al detector? El espectro de masas se obtiene modificando sucesivamente la fuerza del campo magnético, Las moléculas gaseosas que entran por la parte superior igquierda se convierten en iones (normalmente positives), que son acelerados por un ‘campo eléetrico, y que pasan al tubo analizador donde quedan sometidos # un campo mag nético perpendicular Ia direccidn de su trayectoria. El tubo se mantiene a un alto grado de ‘yacio (10-5 Pa), de forma que los iones no se desvian por colisiones con moléculas del ‘gs de fondo, El campo magnético desvia los jones hacia el detector situado en el extremo {del tubo (ver recuadro 22.2). Los tones mas pesados no se desvian suficientemente, y los jones mis ligeros se desvian demasiado, Figura 22.2 especeemavo do | enayh inayat 2 Nh on baammnaalfin ef detector muliplicador de electromes. cada ion que Hega deseneadena nina cascada Je electrones, del mismo modo que un fot6n fo hace en un tubo foromultiplicador (figura 20.12). En un multplicador de electrones una serie de dinodos multiplica el iimero de elec= ones por ~10 antes de llegar al Snodo, donde se mide la corriente, El especto de masas moestra la Corriente del detector en funcién de lam seleceionada por el campo magnética. ‘Los espectnémetros de masas operan de la mism manera con fones negativus y poniti- vos, con slo invertr el voltaje cuando se forman y detectan fos tones. Puru detectar ones negaivos, se coloca un dnodo de conversién a un potencia positivo antes dl detector con- vencional, Cuando este dinodo recibe los impacios de iones negativos, lbera jones posit vos, que son acelerados denuro del multiplicador de electrones, amplificando as seal lonizacion electronica Las moléculas que entran en la fuente de ionizacién de la figura 22.2 se convierten tones por ionizacién electrénica, Los electrones emitidos por un filament caliente (como el de tina bombilla) son acelerados a través de un potencial de 70 V antes de que interactien con Jas moléculas que entran, Algunas moléculas (~0,01%) de analito (M) absorbem entre 12 y 15 eV, que es suiciente para su ionizacivn Mot oem OME oe cote oe WEY oamolccular ~S5eV Le Casi todas las moléculas estables tienen un niimero par de electrones, Cuando se piende un clectrén, el catidn que resulta con un electrin desaparcado se designa por M*, ef lon molecular. Después de la jonizacién, el ion M*" normalmente tiene suficiente energia {interna residual (~1 eV) para romperse ea fragments. ‘La fuente de jones tiene una placa repulsora, que se encuentra a un pequetio potencial positive, y que empuja los iones hacia el tubo analizador, y asimismo, unas placas focali- Zadoras, que se encuentran también a un pequefo potencial, y que focalizan el har de jones. Aplicando wn ato voltae (~1000 ~10 000 V) a las placas de aceleracin, fos tones positivos adquieren una gran velocidad a medida que pasan de la fuente de jones al campo magnético, antes de ser repelidas por fa base del cain inico ‘La energia cinética de los electrones de 70 eV es mucho mayor que la energia de Yoni- zaci6a de las moléculas con las que colisionan. Consideremos la molécula de formaldehido dela figura 22.3, cuyos orbitales moleculares se ven en la figura 18-10. Los electrones que se pierden mis ficilmente son fos procedentes del orbital no enlazante (~pares solitarioss), Jocalizados en el oxigeno, de una energia de 11,0 eV. Esto significa que 11.0 eV es sufi- ‘lente para climinar un electrn no enlazante del formaldehido, Para eliminar an electra = enlazamte de una molécula de formaldehido se requieren 14,1 eV. y para eliminar et elec: trén de maxima energia s enlazante de la molécula neutra se requieren 15,9 eV. [La interccién con electrones de 70 eV eliminark con muchisima probubyidad los elect ‘es que tienen la minima energia de onizacién. El ion molecular resultante, Mi°", poede tener tun exceso tan grande de energia que se romp en fragmentos, hasta tal grado qoe el pico de [M™ puede ser pequeti e incluso estar ausente en lun espectro de masas. El espectro de mass iCoarr Uso t ‘La masa atémica es ta media ponderads de las masa de los isto- ‘pos de un elemento. El bromo consta de tn $0,09% de "Be, con | una masa de 78.918 34 Da, y un 49.31% de "Br, coo wna mass de 80,916.29 Da. Por tanto, su masa es (0,506) (78.918 34) + (0.493) (80,916 29) = 79,904. La unidad de masa atémica es ef Dalton. ‘Da, definido como 1/12 de Ia masa del °C. Los espectrometristas de masas prefieren el simbolo su», que significa unidad de masa _atémica unificada. Da y u con sinénimos. En este lito se ma Alene el simbolo Du. Figura 22.3. Energias de tntzacon de toe electones de valencia det formaidenido (Deas reso ae CR Banos A Pome WA Fam YH Buen -Petore ects = ‘ete ee Caos tet Otras energias 60 primera tonkzacon CHYCHCHCM, 108 4 (gma) (CHyCHCH,CH, ‘S6 ev io (CHCH)D 9.6 eV (ro ertazante) fe 0 (ro orsazarnay OQ a2