Čvrsto-tečna ekstrakcija

(SPE)
• Selektivna
ekstrakcija analita i
prečišćavanje uzorka,
priprema uzorka za
HPLC, GC, RIA,UV i
VIS, itd. -
• Prekoncentracija
rastvora uzorka

Uređaj za SPE

Prednosti SPE nad Tečno-Tečnom

ekstrakcijom
• Bolja Recovry vrednost: ali se preporučuje koriščenje IS
• Dostupni rastvarači za ispiranje
• Minimalno isparavanje - bolja stabilnost za labilne
komponente
• Bezbednija metoda zbog manje upotrebe organskih
rastvarača
• Ne stvaraju se emulzije sa vodenim rastvorima koje je
teško ekstrahovati
• Lako se može automatizovati, više uzoraka
analizirati istovremeno, male zapremine uzorka
• Prekoncentrisavanje uzorka

Nedostatk: sorbensi nisu stabilni

U alkalnim rastvorima!

Sorbens – smešten u formu

plastičnog šprica

1
 Dva koncepta izolovanja analita
a) propuštanje analita

Slika 1 Slika 2
• Interferirajuće komponente se zadržavaju na sorbensu

b) zadržavanje analita

Interferirajuće komponente se ispiraju

Izvođenje SPE
4-5 koraka ekstr:

1. Kondicioniranje
sorbensa, ispiranje
2. Adsorpcija uzorka
3-4. Ispiranje
interferirajućih
komponenti
5. Eluiranje uzorka sa
kolone

2
 Kondicioniranje(ispirnje)
sorbensa
• A) bez
kondicioniranja

• B) delimično
kondicionirana

• C) sasvim
kondicionirana

Vrste sorbensa
1. Revezno fazni: Nosač: silikagel
R:
• -(CH3)2 C18H37
• -C18H37
• -(CH3)2
• -C2H5

Stiren divinilbenzenski polimerni gelovi

Upotreba: za nepolarne komponente

Mehanizmi retencije – nepolarne

interakcije Van der Waals privlačenja

3
Interakcije amina sa ostacima silanolnih grupa
na lipofilnim površinama silikagela

Ekstrakcija na lipofilnim
sorbensima

• Bazne komponente:
• Nakon ispiranja alkalnim puferom, vodom
(metanolom)
• Bazne komponente se adsorbuju iz
vodenih uzoraka doterivanjem baznog pH.
• Eluiranje kiselim puferom ili metanolom

Primer: Oralna suspenzija

hlorpromazina
• Sadrži: Hlorpromazin, Metilparaben,
neutralnu u hidrofilnu boju, Na-laktatni
pufer, lipofillni korigens ukusa
• U 5ml uzoraka doda se 0.5ml amonijačnog
pufera pH 9.5
• Kondicioniranje sorbensa: amonijačnim
puferom

4
• Hlorpromazin se nalazi u formi slobodne
baze i adsorbuje se na ODS SPE adsorbens
• Sve komponente rastvorljive u vodi pri
baznom pH se ispiraju sa adsorbensa
• Uzorak hlorpromazina se eluira 0.5M
fosfatnim puferom pH 2.0/metanol (95:5) i
dopuni volumen potreban za UV
spektrofotometriju.

• Kisele komponente:
• Ispiranje sorbensa: razblaženom kiselinom,
vodom (metanolom)
• Kisele komponente se adsorbuju iz vodenih
uzoraka doterivanjem kiselog pH.
• Eluiranje: metanolom, acetonitrilom, THF
ili alkalnim puferom

Neutralne komponente:

• Mogu biti ekstrakovane bez kontrolisanja pH

• Ispiranje sorbensa: r. kiselinom, alkalnim puferom

(uklanjanje ionizabilnih supstanci) ili smešom
metanol/voda

• Eluiranje: MeOH, C2H5OH, CHCl3

5
2. Normalno-fazni:
R:
• -(CH2)3 NH2
• -(CH3)2 (CH2)3 CN
• -(CH2)3OCH2CH(OH)CH2OH

Upotreba: za polarne komponente

Mehanizam retencije: polarne

interakcije: dipol-dipol, H-veza

Ekstrakcija na polarnim
sorbensima
• Kolona se ispira sa rastvaračem koji će biti
korišten kao eluent
• Uzorak je rastvoren u rastvaraču koji je
slabiji od eluenta
• Ispiranje sorbenta: alkohol/metilen hlorid
• Eluiranje baznog polarnog analita:
metanol/kiseli pufer
• Eluiranje kiselog polarnog analita:
metanol/bazni pufer

6
 3. Jonoizmenjivačke smole

Punila: Neorganska (silikagel) ili organska-

visokomolekularni polimeri
(stirenske i akrilne smole)

Kationski izmenjivači

• Sulfonske kis. – (Jaki KI)

• Karbonske kis. – (Slabi KJ)

Anionski izmenjivači

• Kvaternerna amonijumova jed.-(Jaki AI)

• 1°, 2° i 3°amini (Slabi AI).

Jaki - širi opseg pH, slabi aktivni

samo pri 1pH jedinici iznad i
ispod pKa vrednosti analita

Vrste JI sorbensa
Kationski izmenjivači

JK SK

Anionski izmenjivači

JA SA

Ekstrakcija na anionskim
izmenjivačima
• Kondicioniranje: ispiranjem puferom
pH bliskog uzorku (0.01-0.1M) koji
sadrži ione: C2H5COO-, CH3COO-, F-
(lako izmenljivi)
• Uzorak: Kiseli rastvor uzorka (pH 1-2
jedinice oko pKa analita)

7
 Ekstrakcija meticilina

• Može se ekstrakovati na JA i SA jer je

relativno jaka kiselina
• Ispiranje sorbensa: pufer, deionizovana
voda, organski rastvarač
• Uzorak: Rastvor u puferu (pH 3.8-4.8)
• Eluiranje: pufer koji sadrži suprotan ion u
visokoj koncentraciji; (1MNaCl ili citrat).

Mehanizam retencije: ionska izmena

Ekstrakcija na kationskim
izmenjivačima

• Kondicioniranje: ispiranjem puferom

pH bliskog uzorku (0.01-0.1M) koji
sadrži ione: K-, Na-, NH4+ (lako
izmenljivi sa kationom smole)
• Uzorak: Rastvor uzorka u puferu (pH
1-2 jedinice oko pKa analita)

8
 Ekstrakcija adrenalina
• Ispiranje sorbensa: pufer, deionizovana
voda, organski rastvarač
• Uzorak: rastvor u puferu NH4Cl (pH 8.3)
• Eluiranje: pufer koji sadrži suprotan ion u
visokoj koncentraciji; (1M NH4Cl). Za
lipofilnije supstance: metanol ili etanol

Mehanizam retencije: ionska izmena

Mehanizmi razdvajanja su
hromatografski procesi

9
 Sorbensi vezanih faza
a) Monofunkcionalne RP silike

CH3 Si OH
Si CH3
OH

Cl Si C8H17 Si
Si O Si C8H17 HCl
OH
CH3 Si OH
Si OH CH3

Površina silike Monohlordimetiloktilsilan C8 sorbens,

modifikovana površina silike

Za polarnije analite sa
baznim grupama!

b)Trifunkcionalne RP silike

Cl Si OH
Si OH

Cl Si C 8H17 Si O
Si OH Si C 8H17 HCl
Cl Si O
Si OH
OH
Si OH

Površina silike Trihloroktilsilan C8 sorbens,

modifikovana površina silike

Za kiselo pH analita!

C) "END Capped" sorbensi

CH3 CH3
H3C
Cl Si CH3 Si HN Si CH3
H3C
CH3 CH3 CH3

Trimetilhlorsilan Heksametildisilazan

Hidrofobna površina, smanjena mogućnost sekundarnih interakcija!

10
 Za povećanje selektivnosti kod ekstrakcije
složenih uzoraka koriste se: Kombinovane s.f.
RP i Kationske -"mixed mode resins”

• Polimerne s. f. : polimeri mono- i trifunkcionalnih

silika, stiren-divinilbenzena (stabilne pri pH 1-14,
veća ukupna površina, veći kapacitet (čak i za polarne
supstance), hidrofobnije su i služe za RP i JI)

11