第十五章 吸 光 光 度 法

概述

§1 吸光光度法的基 本原理

§2 分光光度计

§3 显色反应及 显色条件的选 择

§4 吸光光度法 的应用

课件制作：谢新媛
暨南大学化学系分析化学教研室
 概述
 吸光 光度 法 （ absorption
spectrophotometry ）
利用物质 对光的选择 性吸收 与物
质的组 成、结构和 含量等化学 信息之间 的
关系而 建立起来的 分析方法。 又称为 分光
光度法 。

 吸光 光度 法的分 类
紫外分光光度法
可见分光光度法
红外分光光度法
 吸光光 度法的 特点

1. 灵敏度 高：测定下 限可达 10 － 5 ～ 10 －

6
mol/L
2. 准确度 高：能够满 足微量 组分 的测定 要
求：
相对 误差 2
～ 5％
3. 应用： 广泛
4. 操作： 简便、 快速。
§1 吸光光度法的基本原理
 一、物质的颜色 和光的关系

光学光 谱区

远紫外 紫外 可见 近红外 红外

（真空紫 外
）
10nm~200nm 200nm 400nm 750 nm 2.5 m
~400nm ~ 760nm ~ 2.5 m ~ 1000 m
如果把两种不同颜色的光按一定的比例
混合，可以得到白光，这两种颜色的光就
叫互补色光。物质的颜色是由于它选择性
的吸收了可见光中某一波长颜色的光 而产
生 的 。 当白 光通 过溶液 时， 如果溶 液对
各种波 长的光 都不 吸收， 溶液 就没有 颜色 。
如果溶 液吸收 了其 中一部 分波 长的光 ，透
过其它 波长的 光， 则溶液 就呈 现透过 溶液
后剩余 部分光 的颜 色。物质的 颜色由 透过
光的颜 色决定 。
不同颜 色的可 见光 波长及 其互 补
光
λ/nm 颜色 互补光

400-450 紫 黄绿

450-480 蓝 黄

480-490 绿蓝 橙

490-500 蓝绿 红

500-560 绿 紫红

560-580 黄绿 紫

580-610 黄 蓝

610-650 橙 绿蓝

650-760 红 蓝绿
 二、光吸收 基本定 律 : Lambert-Beer 定律
(P198)
有色 均匀 溶液
朗伯定 律 (1 760 )
I0 A=lg(I0/I)=k1l
I
l 比尔定 律 (1852)
A=lg(I0/I)=k2c
Lambert-Beer 定律的
A=lg(I0/I)=Elc 意义： 当一束 平行单 色
光通过单 一均 匀的， 非
吸光 度 介质 厚 散射的吸 光物 质溶液 时
度 (cm) ，溶液的 吸光 度与 溶液
浓度和液层厚 度乘积成
正比。
 I
T －透 光率（透射 比 T=
） （ Transmittance ） I0

A = lg (I0/I) = lg(1/T) = -lgT = Elc

T = 10 -Elc = 10 -A
 A=lg(I0/I)=Elc

E 吸光系数 Absorptivity

当 c 的单位用 mol·L-1 ； l 的单位用 cm

表示时 ，用 表示 .
－摩尔吸光系数 Molar
Absorptivity 的单 位 : L·mol-
1
·cm-1
A＝ lc
 的物理意 义：
数值上等 于 1mol/L 的吸 光物 质在 1cm 光程中 的吸
光度
（ 1 ） ε—— 吸光物 质在特 定波 长和溶 剂中 的一 个特征
常数
（ 2 ） ε 值愈大 ，方法 的灵敏 度愈 高（显 色反 应愈好 ）
ε 值可以从 实验 中得到 。

例 已 知含 Fe2+ 浓度为 12.5μg/25ml 的溶液 ，与 邻二

氮菲 反应 生成橙 红色 络合物 以测 定 Fe2+ ，在波 长
508nm ，比色 皿厚度 为 2cm 时，测 得吸 光度为 0.19 ，
计算 摩尔 吸光系 数 ε 。
 1%
E
比吸光 系数 1cm
 又称 百分吸光系 数。
 指在 一定波长时 ，溶液浓度 为 1 ％
（ W/V ），液层厚 度为 1cm 的吸光
度。 E1cm
1%

ε 和 的 关系是：
M 1%
  gE1cm
10
 吸光度具有加和 性。

A总  A1  A2  L  An  1lc1   2lc2  L  n lcn

 三、吸收曲线

将不同波 长的光 透 max

过某 一固 定浓度 和厚 度
Ⅰ
的有 色溶 液，测 量每 一
波长 下有 色溶液 对光 的 Ⅱ

吸收 程度 （即吸 光度 ） Ⅲ
，然 后以波长为 横坐 标
，以 吸光 度为纵 坐标 作
图， 可得 一曲线 。这 曲 邻菲 罗啉－ 亚铁 溶液的 吸收 曲
线描 述了 物质对 不同 波 线

长光 的吸 收能力 ，称 吸 浓度 大小 ：Ⅰ >Ⅱ>Ⅲ

收曲 线或 吸收光 谱。如
图： 返回
问题：
从吸收 曲线 可以得 到 max
什么 ？
Ⅰ
1. 同一浓 度的有 色溶 液对 Ⅱ
不同 波长 的光有 不同 的吸
光度 ; Ⅲ
2. 对于同 一有色 溶液 ，相
同的 入射 光波长 ，浓 度愈
大， 吸光 度也愈 大；
3. 对于同 一物质 ，不 论浓 邻菲罗 啉－ 亚铁溶 液的 吸收曲
度大 小如 何， 最大吸 收峰 线
所对 应的 波长 ( 最大 吸收
波长 λ ma x ) 不变 . 并且 浓度 大小： Ⅰ >Ⅱ>Ⅲ
曲线 的形 状也完 全相 同。
4. 吸收曲线 可作为 吸光 光度法 中波 长选定 的依 据
，测定时 一般选 择 λm ax 的单色 光作为 入射光 。
 四、标准曲线（ 校正曲线） （ P210 ）

A
A＝ lc

。
0.8
在进 行分 析工作
*

。 。
时， 在与 测标准 系列 同 0.6
样条 件下 测得未 知溶 液 0.4
的吸 光度 值，从 标准 曲

。
0.2
线上 即可 求出未 知溶 液
的浓 度。 这种方 法对 于 0
批量 分析 工作非 常简 便 0 1 2 3 4 mg/ml
快速 。

返回
如：采用 啉菲罗 啉分 光光度 法（ 标准曲 线法 ）
测定地面 水中微 量铁 的含量 。

图 2-4 标准溶液系列
 五、 偏离朗伯－ 比耳定律的 原因
(P19 9)
1. 非单 色光引 起的 偏离（ 物理 因素） ：

为克服 非单 色光引 起的 偏离
，
a. 应尽 量使用 比较 好的
单色器 ，从 而获得 纯度 较高
的“单 色光 ”，使 标准 曲线
有较宽 的线 性范围 。
b. 应将入 射光的 波长 选
择在被 测物 质的最 大吸 收处
。
c. 测定 时应选 择适 当的浓
度范围 ，使 吸光度 读数 在标
2. 化学因 素引起的偏 离

a. 朗伯－比耳定律 仅适用 于稀溶液。

b. 由于溶液本身的 化学反 应引起的偏

离:

橙色
黄色
3. 吸光度 读数范围的 选择
Er10

8
c 0.434
 T 6
c T lg T
4
2
20(36.8)
40 60 80 T%
T  36.8%( A  0.434) 0
0.7 0.4 0.2 0.1 A
0.434

当测 量小于 0.2 和大于 0.7 吸光度 时， 误差会 迅

速增 加。 为了使 测量 误差落 在 0.2 ～ 0.7 之间，可 以控
制试 样的 称取量 。对于组分 含量 高的试 样， 可减少 称取 量
，或 是稀 释 ; 对于含量 低的 溶液可 增加 称样量 或浓缩 的方
法来 提高 浓度。
 §2 分光光度计
光源 单色器 吸收池 检测系统

光电管 暗盒 部件

分光光 度计 结构方 框图
在可 见光 区测量 时通 常使用 6 ～ 12V 的钨丝灯
，能 发出 波长约 为 320nm 至 2500nm 的连续 返回
单色器的 作用 是将光 源发 出的连 续光谱 分解 为单
色光，分 为棱镜和光栅，视频显 示为棱 镜单 色器
。 返回
吸收 池： 也称比 色皿 。用于 盛放 试液 的容器 。
它是 由无 色透明 、耐 腐蚀、 化学 性质相 同、厚
度相 等的 玻璃制 成的 ，按其 厚度 分为 0. 5cm 、
1c m 、 2c m 、 3cm 等。 返回
721/721-100/721B 型 WFJ7200 型可见分光光度计
分光 光度 计
§3 显色反应及显色条件的选择 (P222)
 一、显色反应的 选择
* 定量
* 灵敏度高 ，一般 ε >10 4
* 选择性好
* 显色剂在测定波 长处无明显 吸收。
对照性 好 , ∆λ max >60 nm .
* 反应生成的有色 化合物 组成恒定， 稳
定。 返回
 二、显 色条件的 选择

 显色剂 用量
显色 反应 一般可 以用 下式表 示：
M + R ＝ MR
（待 测组 分） （显 色剂 ） （有 色络 合物）

为了 减少 反应的 可逆 性，根 据同 离子效 应，加

入过 量的 显色剂 是必 要的， 但过 量太多 ，有时 会有 副
反应 产生 ，反而 不利 。
下图是 吸光 度与显 色剂 用量关 系的 几种情 况
。

图 吸光度与显色剂用量的关系

从三 个图 中可以 得到 ：
• 可以 选用 的用量 较宽
• 可以 选用 的用量 较窄
• 表明 随着 显色剂 用量 的增加 ，吸光 度也 不断增 大。
2. 酸度：
a. 影响显色剂的平衡浓度和颜色
b. 影响被 测金 属离子 的存 在状态
显色反 应的适 宜酸 度是通 过实 验来确 定的
。

3. 显色时 间及温 度
实验 确定
pH
pH1<pH<pH2
 §4 吸光光度法的 用
单一组分的测定 （ P209 ）
（一） 吸光系数 法（绝对法 ）
A
c ε 可从 手册 或文献 中查 到
 gl 。

（二） 校正（标 准）曲线法

（三） 对照法
As  Ecs l As cs Ax
 cx  cs
Ax  Ecx l Ax cx As
 配合 物组 成及稳 定常 数的测 定— —摩尔 比法
固定 cM , 改变 c R

1: 3:1
1
1.0 2.0 3.0 c(R)/c(M)
 弱酸（ 碱）离解常 数的测定
 
以一 元弱 酸 HA 为例 HA ƒ H   A K a  [ H ][ A ]
： [ HA]

测定 过程 如下：

① 首先 配制 一系列 总浓 度（ c ）相等 ，而 pH 不同的 HA

溶液 ，用 酸度计 测定 各溶液 的 pH 值。
② 在酸 式（ HA ）或碱 式（ A- ）有最 大吸 收的波 长处 ，
用 1c m 比色皿 测定 各溶液 的吸 光度 A 。则：

 c[H +
]  A - cK a
A= HA [HA]+ A- [A ] =
- 
HA
+
+ + （1
K a +[H ] K a +[H ] ）
  HA c[H +] A cK a

A= HA [HA]+ A - [A ] =
-  -
+
+
K a +[H ] K a +[H +] （ 1
）
③ 在高酸度 时， 弱酸几 乎全 部以酸 式形式 存在 ，即 c
＝ [H A], 测得 的吸 光度为 A HA ，则：
AHA   HAc （ 2
）
在低 酸度 时，弱酸 几乎 全部 以碱式 形式 存在（ 即 c ＝
[A-] ），测得 的吸 光度为 AA- ，则：
AA   A c （ 3
）
④ 将（ 2 ）（ 3 ）式代入 （ 1 ）式， 得：

AHA[H +] AA K a
A= +
K a +[H ] K a +[H +]
+

整理 得： AHA - A A - A A-
K = [H+ ] 或
a A - AA- pK a = pH + lg
A -A HA
⑤ 也可用图 解法 求 pK a 值，如 图。

A - A A-
pK a = pH + lg
A HA- A
问题： 怎样用吸光 光度法测定 水样中铁
的含量 ？

1. 显色 剂（即 显色 反应） 的选 择
2. 实验 条件的 选择
3. 测定 ：常用 标准曲 线法
（ 1 ）制作 标准曲 线
（ 2 ）水样 中铁含 量的 测定
1. 显色剂 （即 显色反 应） 的选择
铁的 吸光光 度法 所用的 显色 剂较多 ，
有邻二 氮菲 （又称 邻菲 啰啉， 菲绕 林）及 其衍
生物、 磺基 水杨酸 、硫 氰酸盐 、 5-Br-
PADAP 等。
如何选 择？ 依据
其中 邻二氮 菲分 光光度 法灵敏度高 、
稳定性 好， 干扰容 易消 除，是 目前 普遍采 用的
一种方 法。
邻二 氮菲与 Fe2+ 作用， 生成稳 定的
橘红色 配合 物。如 果试 样中的 铁为 +3 价，如
何测定 ？
2. 实验 条件的 选择
a. 测量 波长的 选择 ：
作吸收曲线
b. 显色条 件的选 择： 做实验 确定
酸度 的选择
显色 剂用量 的选 择
显色 时间的 选择
 多组分 定量分析方 法
理论依 据：吸光度 具有 加和性
A总  A1  A2  L  An  1lc1   2lc2  L  n lcn
⑴ 若各组 分的吸 收曲 线互
不重叠， 则可 在各自 最大吸 收
波长处分 别进 行测定 。这本 质
上与单组 分测 定没有 区别。
⑵ 若各组 分的吸 收曲 线互
有重叠， 则可 根据吸 光度的 加
合性求解 联立 方程组 得出各 组
分的含量
a b
。 a
A1  A1  A1  E1 ca l  E1b cbl
b a

A2a b  A2a  A2b  E2a ca l  E2b cbl

（ 3 ）双波长法
1. 等吸收 双波长消去 法
A1  A1a  A1b
A2  A2a  A2b
A1b  A2b

A  A1  A2  A1a  A2a  ( E1a  E2a )ca l

选择波 长的原则 ：
（ 1 ） A2b ＝ A1b ；
（ 2 ）△ Aa 足够大 。
2. 系数倍 率法

A  K C X l
'
 本 章 小 结
1 了解 分子 对光的 吸收 与溶液 颜色 的关系 . 吸收曲 线
—定性 分析 的基础 。
掌握 定量 分析的 基础 —朗伯 - 比尔定 律： A=ε bc=-
lgT 式中各 参数 的物理 意义， 定量 计算 。
2 了解分 光光度 法的 特点， 分光 光度 计的基本 部件。
3 掌握灵 敏度的 表示 —摩尔吸光 系数 的意义 和计 算；
准确度 —适 宜的测 量范 围、 偏离比 尔定 律的原 因。
4 显色反 应及条 件的 确定 : 显色 剂用 量、酸 度、 时间
、温度 。
5 应用 : 单一组 分测 定：吸 光系 数法 、校正 曲线 法、
对照法 ，酸 碱离解 常数 的测 定。多 组分 的测定 ，等 吸
收双波 长消 去法， 系数 倍率 法。
《无机及分析化学》这
门课到这里就圆满结束
了，预祝各位