Respirační vzplanutí fagocytů

© Miloš Caha, Jakub Šefr

 JEDNÁ SE O NIČENÍ
MIKROORGANISMŮ POMOCÍ
.
VOLNÝCH RADIKÁLŮ (O , H2O2)

 makrofág, neutrofil, vajíčka vyšších živočichů po

oplodnění
• Děkujeme za
pozornost.
 Použitá literatura

• Hugo, Vokurka- Velký lékařský slovník

• F. W. Ganong- Lékařská Fyziologie
• Výukové materiály ústavu histologie LF HK
• www.nature.com/.../v61/n80s/full/4493036a.html.
• http://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_burst
• http:// pathmicro.med.sc.edu/ghaffar/innate.htm.
• http://www.orpegen.com/gfx_content/products/diagnostics/phagoburst/bur
• http://content.answers.com/main/content/wp/en-commons/3/3d/Neutrophil
• http://tomonthetrib.files.wordpress.com/2007/09/respburstnew.jpg
• http://www.biochemsolutions.org/research-burst-description.php
GRANULOCYTY - NEUTROFILY
- specif. granula s nízkou afinitou k
barvivům a to jak zás. tak kys.
- segmentované jádro (2-5)
- Hynkovo číslo (2,7 pro zralé NFG)
- TYČE! = nezralé NFG, nesegm.j.
- segmenty propojeny
karyoplazmatickými můstky
- Barrovo tělísko (neakt. X chr.)
- mají též terciární granula – ta
umožňují adhezi a fagocytózu proto
MIKROFÁGY
- životnost hod (krev) – dny (tkáně)
- význ. v diagnostice infekč. onem.
- HNIS

- vel. 10-12 µm
MONOCYTY
- mononukleární agranulocyt
- jádro je oválné či ledvinovité,
uložené excentricky
- vel. 12-20 µm
- ve tkáni žijí až 90 dní
- fagocytóza a prezentace Ag
dalším složkám imunity
- nespecifická imunita

- MONOCYT
- MAKROFÁG (histiocyt)
- ANTIGEN PREZENTUJÍCÍ B.
• Fagocyty, když jsou vystaveni určitým
stimulům, mění způsob manipulování
s kyslíkem
• Příjem kyslíku stoupá až 50x a fagocyty
začínají produkovat velké množství
superoxidu a peroxidu vodíku
• Zároveň začínají metabolizovat velké
množství glukosy cestou monofosfátového
zkratu
• Vzhledem k velkému nárůstu příjmu
kyslíku je tento mechanismus znám jako
respirační vzplanutí
 PRINCIP
• Fagocytované bakterie se váží k BM a jejich
obsah je uvolňován do mezib. prostoru a do
fagocytární vakuoly (degranulace)
• Přitom je aktivován enzym NADPH oxidasa
vázaný v BM a jsou produkovány toxické
metabolity kyslíku (superoxid)
• Kombinace toxicity kyslíkových metabolitů a
proteolyt.enzymů z granul neutrofilů umožní
dokonalou likvidaci
• Aktivace NADPH oxidasy je spojena
s prudkým vzestupem spotřeby O2 a
-.
tvorbou O2

• Ten vzniká přenesením jednoho elektronu

na O2 a dvě jeho molekuly vytvářejí H2O2

+ + + -.
NADPH+H + 2 O2 → NADP + 2 H + 2 O 2

2 O2-. + 2 H + → H2O2 + O2
 Dále neutrolily uvolňují myeloperoxidasu …

• katalyzuje přeměnu Cl-, Br-, I-, SCN-

na odpovídající kyslíkaté kyseliny: HOCl, HOBr, které
jsou rovněž silnými oxidanty

hypochlorite by H202
Cl- + H202 →ox OCl- + H20

• Současně je monofosfátovým zkratem metabolizována

glukosa za účelem regenerování NADPH, který byl
spotřebován 0- formujícím a glutathion dependentním
H2O2 detoxikujícím systémem v cytoplazmě fagocytu
 -
• 0 and H202, bezprostřední produkty RV
nejsou použity pro zabíjení mikrobů,
protože jsou jen slabě mikrobicidní
= začáteční materiály pro produkci pravých
mikrobicidních oxidantů fagocytu.

oxidovaných halogenů
oxidovaných radikálů
 Respirační vzplanutí fagocytů
/respiratory burst/

• Objeveno v roce 1933 (1960)

• účelem RV není poskytování energie pro
fagocytózu, ale vytvoření oxidantů pro
zničení mikrobů
Vlastnosti O-formujícího enzymu
• Na respiračním vzplanutí se účastní přes
20 oxidas
• enzym zodpovědný za RV je
s membránou asociovaná NADPH
oxidasa / 1964 Rossi a Zatti

Tento enzym chybí u pac. s chron.

granulomatosou
• ₪ Chronická granulomatóza je vrozená
porucha imunitního systému, při které
fagocytární buňky nejsou schopné zabíjet
některé mikroorganismy. Výsledkem je pak
zvýšená náchylnost k infekcím způsobeným
některými bakteriemi a plísněmi.
* Neschopnost tvorby radikálů vlivem
defektu NADPH oxidasy
= u pacientů nedochází k RV
 respiratory burst oxidasa
• FAD- vyžadující enzym katalizujici tvorbu O2
z kyslíku redukujícího pyridin nukleotid jako
dárce 1 elektronu ( fyziologicky je donorem NADPH )

• v plasmatické membráně s vázanou NADPH na

cytosol. straně → optoptimální rozvržení na
pohlcených mikroorganismech
• 2. donorem elektronu je b-cytochrom ve
fagocytu.
 Aktivace oxidasy
o oxidasa se může aktivovat širokou paletou
agentů (leukotrieny...)
o aktivace je reverzibilní a závislá na energii
o obecně je jí dosaženo změnou
transmembránového potenciálu (depolarizace
nebo hyperpolarizace???)

 Cesty aktivace jsou značně komplexní a

mnohočetné
 Mechanismus usmrcování
bakterií

• Letální zásah zahajuje oxidant

• Destrukce nukleotidu a redox. enzymu
• Fagocyty respiračně vzplanuté musí být
brány jako potenc. karcinogeny pro svoji
manipulaci s volnými radikály
 Detoxikační reakce
• Fagocytující bb mají způsoby ochrany
před účinky toxických kyslíkových
meziproduktů.
• Tyto ochranné reakce obsahují dismutaci
superoxidového anionu a peroxidu vodíku
pomocí superoxid dismutasy a konverzi
peroxidu vodíku na vodu pomocí katalasy.
 - -
H2O2 + Cl → OCl + H2O myeloperoxidasa

OCl- + H2O → O2 +Cl- + H2O

Superoxide dismutase
2O2 + 2H+ → O2-. + H2O2
Catalase
H2O2 → H2O + O2
Děkujeme za
pozornost
 Použitá literatura

• Hugo, Vokurka- Velký lékařský slovník

• F. W. Ganong- Lékařská Fyziologie
• Výukové materiály ústavu histologie LF HK
• www.nature.com/.../v61/n80s/full/4493036a.html.
• http://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_burst
• http:// pathmicro.med.sc.edu/ghaffar/innate.htm.
• http://www.orpegen.com/gfx_content/products/diagnostics/phagoburst/bur
• http://content.answers.com/main/content/wp/en-commons/3/3d/Neutrophil
• http://tomonthetrib.files.wordpress.com/2007/09/respburstnew.jpg
• http://www.biochemsolutions.org/research-burst-description.php