Respirační vzplanutí fagocytů

Respirační vzplanutí fagocytů /respiratory burst/ bylo objeveno v roce 1933,

ale bylo ignorováno po vice jak čtvrt století. Zájem byl znovu obnoven až kolem
roku 1960, kdy se zjistilo, že účelem RV není poskytování energie pro
fagocytózu, ale vytvoření oxidantů pro zničení mikrobů. Od té doby se čím dál
tím více vědců začalo zajímat touto problematikou…

JEDNÁ SE O NIČENÍ MIKROORG. POMOCÍ VOLNÝCH RADIKÁLŮ (O, H2O2).

| makrofág, neutrofil, vajíčka vyšších živočichů po oplodnění.

Respirační vzplanutí hraje důležitou roli v imunitním systému a je základní reakcí

fagocytů. Fagocyty, když jsou vystaveni určitým stimulům, mění způsob
manipulování s kyslíkem. Příjem kyslíku v takovémto případě stoupá až 50x a
fagocyty začínají produkovat velké množství superoxidu a peroxidu vodíku.
Zároveň začínají metabolizovat velké množství glukosy cestou monofosfátového
zkratu. Vzhledem k velkému nárůstu příjmu kyslíku je tento mechanismus znám
jako respirační vzplanutí.

PRINCIP

Obalené bakterie se váží k BM a jejich obsah je uvolňován do mezib. prostoru a

do fagocytární vakuoly/degranulace. Přitom je aktivován enzym NADPH oxidasa
vázaný v BM a jsou produkovány toxické metabolity kyslíku. Kombinace toxicity
kyslíkových metabolitů a proteolys.enzymů z granul neutrofilů umožní dokonalou
likvidaci. Aktivace NADPH oxidasy je spojena s prudkým vzestupem spotřeby O2
a tvorbou O2-. Ten vyniká přenesením jednoho elektronu na O2 a dvě jeho
molekuly vytvářejí H2O2

NADPH+H+ + 2O2 → NADP+ + 2H+ + 2O2-

2O2- + 2H+ →H2O2 + O2

H2O2 a O2- jsou ox. činidla s baktericidními úč.

Dále neutrolily uvolňují enzym myeloperoxidasu, katalyzující přeměnu Cl-, Br- I-
a SCN- na odpovídající kyslíkaté kyseliny: HOCl, HOBr,…, které jsou rovněž
silnými oxidanty.
Současně je monofosfátovým zkratem metabolizována glukosa za
účelem regenerování NADPH, který byl spotřebován 0- formujícím a glutathion
dependentním H2O2 detoxikujícím systémem cytoplazmě fagocytu.
0- and H202, bezprostřední produkty OV nejsou použity pro zabíjení mikrobů,
protože jsou jen slabě mikrobicidní. Místo toho jsou použity jako začáteční
materiály pro produkci pravých mikrobicidních oxidantů fagocytu.
Tyto mikrobicidní oxidanty spadají do dvou tříd: oxidovaných halogenů a
oxidovaných radikálů.
Produkce oxidantů začíná myeloperoxidasou katalyzovanou oxidací Cl- na
hypochlorite by H202 (2):
CF- + H202 -ox OC1- + H20. myeloperoxidase

Hypochlorite-produkt oxidovaných halogenů je mocný mikrobicidní agent a

zároveň také prekursor chloraminů, skupiny mikrobicidních oxidovaných
halogenů které vznikají reakcí mezi hypochloridem a aminy
OCl- + R-NH3 → R-NH2C1 + OH
Oxidované radikály, třída dalších mikrobicidních agentů vznikají v reakcích
zahrnujících O°.

Vlastnosti O-formujícího enzymu

Na respiračním vzplanutí se ucastni pres 20 oxidas. Některé jako pokusné,

některé pusobici po celou dobu. V posledni dobe se ukazalo, ze enzym
zodpovedny za respiracni vzplanuti je s membranou asociovana pyridine
nukleotid oxidasa /prvne popsana v r. 1964 Rossim a Zattim. Tento enzym
chybi u pac. s chron. granulomatosou

₪ Chronická granulomatóza je vrozená porucha imunitního systému, při které fagocytární buňky
nejsou schopné zabíjet některé mikroorganizmy. Výsledkem je pak zvýšená náchylnost
k infekcím způsobeným některými bakteriemi a plísněmi.

Správná funkce fagocytů závisí na sledu velmi složitých dějů. Fagocyt musí být především
schopen doputovat na místo průniku cizích mikroorganizmů, například pod kůži, pod povrch
sliznice nebo některého z vnitřních orgánů jako jsou plíce nebo játra. Dále pak musí daného
mikroba pohltit a dopravit do nitra buňky. Řetězec velmi složitých metabolických pochodů uvnitř
fagocytu, který se spustí po pohlcení mikroba, nakonec vede ke smrti dané bakterie či plísně.

Fagocytární buňky pacientů s chronickou granulomatózou doputují sice do místa infekce, tam
pohltí cizí mikroorganismy, ale v důsledku porušených metabolických dějů uvnitř buňky nejsou
pak schopny některé z těchto mikroorganizmů zabít.

Některé bakterie, jako například pneumokoky a streptokoky, tvoří svoje vlastní kyslíkaté radikály
a ty pak fagocytární buňky úspěšně využívají k zabití těchto mikroorganismů. Pacienti
s chronickou granulomatózou proto netrpí zvýšenou náchylností k pneumokokovým a
streptokokovým infekcím. Naproti tomu trpí opakovanými infekcemi způsobenými bakteriemi,
které netvoří vlastní kyslíkaté radikály, jako jsou například již výše zmíněné stafylokoky.

Pacienti s chronickou granulomatózou mají normální počet a funkci T lymfocytů, normální

množství protilátek a normální systém komplementu. Funkce všech složek imunitního systému
s výjimkou fagocytárních funkcí je u nich neporušena. /

U techto lidi tedy nedochazi k respiracnimu vzplanuti.

respiratory burst oxidasa je FAD- vyžadující enzym katalizujici tvorbu O2
z kysliku redukujiciho pyridin nukleotid jako darce elektronu. Fyziologicky je
donorem NADPH
Oxidasa je pritomna v plasmaticke membrane s vazanou NADPH na cytosol.
strane. To umoznuje jeji optimalni rozvrzeni na pohlcenych mikroorganismu. 2.
donorem elektronu je z b-cytochromu ve fagocytu.

Aktivace oxidasy
o oxidasa se může aktivovat širokou paletou agentů (leukotrieny...)
o aktivace je reverzibilní a závislá na energii
o obecně je jí dosaženo změnou transmembránovéno potenciálu
(depolarizace nebo hyyperpolarizace???)

Cesty aktivace jsou značně komplexní a mnohočetné- látka schopná vyvolat u bb

RV - phorbol myristate acetate, který se váže a aktivuje s membránou
asociovaný fosforylovaný enzym známý jako cytochrom c

Mechanismus usmrcovani bakterii

Letální zasah zahajuje oxidant. Oxidovane halogeny nici mnoho bakt. komponent
vcetne nukleotidu a redox. enzymu- a to velmi rychle a jeste rychleji zpusobuji
vlastni smrt bakterie.

Fagocyty respiracne vzplanute musi byt brany jako potenc. karcinogeny pro svoji
manipulaci s volnymi radikaly

Jak již bylo řečeno v úvodu, během fagocytózy se zvyšuje spotřeba glukosy a
kyslíku, tomuto ději je referováno jako respiračnímu vzplanutí. Jako důsledek
těchto dějů je zvýšený počet kyslík obsahujících částic, které zabíjejí
fagocytované bakterie.

Během fagocytosy je glukosa metabolizována skrze pentoso-monofosfátový

zkrat za vzniku NADPH. Cytochrom B, který je součástí specifických buněčných
granul se kombinuje s NADPH oxidasou vázanou v buněčné memebráně a
aktivuje ji. Aktivovaná NADPH oxidasa pak využívá kyslík k oxidaci NADPH.
Výsledkem je produkce superoxidového anionu. Část superoxidového anionu je
přeměněna na peroxid vodíku a volný kyslík – enzymem superoxid dismutázou.
Výsledkem těchto všech reakcí je produkce toxického O2-, H2O2, O2 a
hydroxylového radikálu (OH•).

Detoxikační reakce

Fagocytující bb mají způsoby ochrany před účinky toxických kyslíkových meziproduktů.

Tyto ochranné reakce obsahují disputaci superoxidového anionu a peroxidu vodíku
pomocí superoxid dismutasy a konverzi peroxidu vodíku na vodu pomocí katalasy.
Milí kolego,

zásadní připomínka - pokud bude značit radikály symboly, pak pro superoxid musí být
O2-. a pro hydroxylový radikál OH. Ty tečky jsou tam velmi důležité, to právě označuje
ten radikál. Přžijeme, když z toho neuděláte indexy, jak je zvykem. Až to budete mít v
ppt, pak mi to pošlete.