‫שחר אברמוביץ' ‪42834770‬‬

‫תהילה בוקרה‪-‬שתיוי ‪392840231‬‬

‫גבור בני ‪40590697‬‬
‫מדריך‪ :‬אלעד‬
‫שאלות סיכום מעבדה מס' ‪: 6‬‬
‫‪.1‬גרף מצורף‪.‬‬

‫‪ OD‬לאחר‬ ‫‪ OD‬לפני‬ ‫ממוצע‬ ‫מס' פאג'ים‬ ‫מיהול‬ ‫פלק‬ ‫זמן‬

‫פקטור‬ ‫פקטור‬ ‫זמן‬ ‫‪3.49E+08‬‬ ‫‪1.00E+06‬‬ ‫‪349‬‬
‫‪0.36‬‬ ‫‪0.408‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪3.40E+08‬‬ ‫‪0‬‬
‫‪3.30E+08‬‬ ‫‪1.00E+07‬‬ ‫‪33‬‬
‫‪0.389‬‬ ‫‪0.437‬‬ ‫‪10‬‬ ‫‪1.87E+08‬‬ ‫‪1.00E+06‬‬ ‫‪187‬‬
‫‪0.377‬‬ ‫‪0.425‬‬ ‫‪20‬‬ ‫‪4.69E+08‬‬ ‫‪3.20E+08‬‬ ‫‪1.00E+07‬‬ ‫‪32‬‬ ‫‪10‬‬
‫‪0.22‬‬ ‫‪0.268‬‬ ‫‪30‬‬ ‫‪9.00E+08‬‬ ‫‪1.00E+08‬‬ ‫‪9‬‬
‫‪0.131‬‬ ‫‪0.179‬‬ ‫‪40‬‬ ‫‪1.00E+09‬‬ ‫‪1.00E+06‬‬ ‫‪1000‬‬
‫‪0.062‬‬ ‫‪0.11‬‬ ‫‪50‬‬ ‫‪9.80E+08‬‬ ‫‪1.00E+07‬‬ ‫‪98‬‬
‫‪0.048‬‬ ‫‪0.096‬‬ ‫‪60‬‬ ‫‪3.20E+09‬‬ ‫‪25‬‬
‫‪1.80E+09‬‬ ‫‪1.00E+08‬‬ ‫‪18‬‬
‫‪9.00E+09‬‬ ‫‪1.00E+09‬‬ ‫‪9‬‬
‫‪1.00E+09‬‬ ‫‪1.00E+06‬‬ ‫‪1000‬‬
‫‪9.13E+08‬‬ ‫‪6.40E+08‬‬ ‫‪1.00E+07‬‬ ‫‪64‬‬ ‫‪40‬‬
‫‪1.10E+09‬‬ ‫‪1.00E+08‬‬ ‫‪11‬‬
‫‪1.00E+09‬‬ ‫‪1.00E+06‬‬ ‫‪1000‬‬
‫‪1.21E+09‬‬ ‫‪1.02E+09‬‬ ‫‪1.00E+07‬‬ ‫‪102‬‬ ‫‪60‬‬
‫‪1.60E+09‬‬ ‫‪1.00E+08‬‬ ‫‪16‬‬

‫‪ .2‬עקומת ה ‪ OD‬מראה את התקופה הסמויה‪ ,‬בה אנו רואים עליה ב ‪ , OD‬כנראה מהמשך‬
‫גדילת התאים ‪ .‬לאחר בין ‪ 20‬ל‪ 30 -‬דקות מתחיל שלב ה ‪ , Burst‬בו החיידקים עוברים‬
‫ליזיס ואנו רואים ירידה ב ‪ .OD‬את הירידה ההדרגתית ב ‪ OD‬ניתן להסביר בכך שהתרבית‬
‫איננה סינכרונית ‪ .‬תוך ‪ 50‬דקות מתחילת המדידה מתו כל החיידקים ונשארו שאריות‬
‫ממברנת החיידקים וה‪ OD -‬כמעט קבוע ‪.‬‬
‫מפני שלקחנו חיידקים שנושאים את הפאג' וזרענו אותם‪ ,‬בזמן ‪ 0‬בעקומת הספירה החיה‬
‫ניתן לראות כי מס' הפאג'ים כמעט זהה למס' החיידקים שניתן לחשב ע"פ גרף ה‪. OD-‬‬
‫המשמעות היא שהפאג'ים לא הספיקו לעבור לחיידקים אחרים ומס' הפלקים מייצג את מס'‬
‫החיידקים בתמיסה‪.‬‬
‫‪ .3‬על פי הנוסחא ‪burst = germs = 3.4⋅108 = 3.56 ≈ 4 :‬‬
‫‪plaque‬‬ ‫‪1.21⋅109‬‬

‫‪ .4‬פיצוץ החיידקים בעזרת כלורופורם בזמנים שונים יוביל לתוצאות הבאות ‪:‬‬
‫‪ )1‬מייד אחרי הספיחה – לא יתקבלו פלקים ‪ ,‬שכן אמנם הפאז'ים הזריקו את הדנ"א שלהם‬
‫אך לא הספיקו להיבנות ‪.‬‬
‫‪ 15 )2‬דקות – מס' פלקים בודד או בכלל לא ‪,‬שכן מחזור חיי פאג' הוא כ ‪ 25‬דקות ‪.‬‬
‫‪ )3‬לאחר ‪ 30‬דקות – נקבל את מס' פלקים יחסי ל ‪.PFU*burst size‬‬

‫ה‪ .‬בידוד מוטנטים לפאג' תעשה ע"י זריעה לבידוד מתוך תמיסה עם פאג'ים וחיידקים‪ ,‬ביחס‬
‫של ‪( 5:1‬יותר פאג'ים)‪ ,‬לקיחתם וזריעתם במצע עשיר נוזלי לקבלת כמות גדולה‪ .‬ניתן לחזור‬
‫על הניסוי פעמים נוספות כדי להבטיח שאכן כל אלו ששרדו אכן עמידים‪.‬‬