Validacija in uporaba UV-Vis spektrofotometri ne metode

Nekateri od korakov do uporabe analizne metode:

1. Razvoj metode ali prenos v na laboratorij Vaja UV-Vis = minimalen razvoj - dolo itev (nekateri pogoji, kot je pH medija itd. so e podani) Razvoj metode je pogosto najzahtevneji del analize! 2. 3. Validacija metode Kaj je validacija? Kaj lahko validiramo? Katere parametre lahko validiramo v sklopu validacije analizne metode? Uporaba analizne metode Dolo anje koncentracije preiskovane spojine v vzorcu, dolo anje fiz-kem lastnosti vzorca, dolo anje identitete iste spojine, ki je vzorec, itd.

1. Razvoj metode - dolo itev primerne valovne doline za fotometri no dolo anje koncentracije
0.6 0.55 0.5 A b s o rb a n c e (A U) 0.45 0.4 0.35

0.25

0.15 220 240 260 280 300 320 340 360 Wav elength (nm)

1.1 Spekter in 1. odvod spektra...

0.6 0. 55

305

0.2

2 31

0.3

26 5

Absorbance (A ) U

0. 45 0.4 0. 35

0. 25

0. 15

0.005 d1(Absorbance)

-0.005

255

0. 01

228

-0.01

277

335

220

240

260

280

300

305

0.2

231

0.3

265

0.5

320

340

360

368

3 68
Wav elength (nm )

-0.015 220 240 260 280 300 320 340 360 Wav elength (nm )

397

399

2.1 Validacija metode - Kaj je validacija?

Validacija je dokumentiran postopek preizkuanja in potrjevanja,
da katerikoli material, proces, postopek, aktivnost, sistem, oprema ali mehanizem uporabljen pri razvoju, proizvodnji, kontroli in distribuciji

lahko dosega, dosega in bo dosegal predpisane rezultate.

2.2 Validacija metode - Kaj lahko validiramo?

Iz definicije: material, proces, postopek, aktivnost, sistem, opremo ali mehanizem

uporabljen pri razvoju, proizvodnji, kontroli in distribuciji zdravil oz. drugih proizvodov.

Tudi: zgradbe, prostore, ljudi, metode, itd.

2.3 Validacija metode - Katere parametre lahko validiramo v sklopu validacije analizne metode?
(Primer validacije UV-Vis analizne metode za kvantifikacijo 3-hidroksimetil nitrofurantoina)

!! Navodila za vaje: - 1 Natan nost (ponovljivost, precision), - 2 to nost (pravilnost, accuracy), - 3 linearnost, - 4 mejne vrednosti dolo anja.

2.4 Validacija metode - Parametri NATAN NOST IN TO NOST

2.4 Validacija metode - Parametri NATAN NOST IN TO NOST

NATAN NOST opredelimo z relativno standardno deviacijo rezultatov. TO NOST opredelimo s primerjavo nae meritve koncentracije standarda s pravo vrednostjo. Potrebujemo primeren standard ali pa referen no metodo!

2.4 Validacija metode - Parametri

LINEARNOST - Beer-Lambertov zakon! (veljavnost tega zakona dolo a zgornjo mejo linearnosti pri UV-Vis metodi) - LINEARNOST opredelimo s Pearsonovim koef. korelacije (r) za izra unano umeritveno premico.

2.4 Validacija metode - Parametri

MEJNE VREDNOSTI DOLO ANJA - Meja detekcije

LOD =

3 SD b

"SD" je v tem primeru standardni odklon slepega vzorca,

- Meja kvantifikacije

LOQ =

10 SD b

"b" je naklon umeritvene premice

3.1 Uporaba metode - priprava umeritvene premice

1,400

Koncentracija [mg/L] 1,2 2,4 4,8 7,5 9,0 12,0 15,0 18,0 20,0

A1 0,077 0,145 0,304 0,477 0,572 0,707 0,926 1,142 1,254

1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 0,000 0,0

y = 0,0625x - 0,0017

10,0

20,0

3.2 Uporaba metode - Izra un koncentracije 3-hidroksi metil nitrofurantoina v vzorcu

Na osnovi grafi no predstavljene umeritvene premice (doma a naloga); Na osnovi izra unane umeritvene premice; Na osnovi najblije standardne raztopine; Na osnovi 1. odvoda.