5 (4 diferents BiB que actuen sobre un substracte com Ste \ ENZANIOLOGIA (Gener 2003) (Llicenciatura en Bioquimica) 1. Indiquen si son certs ofalses les qiestions segients. Comenteu breument les respostes \@yEls eizims que cataltzen les reactions L-metionina -» D-metionina i ATP + D-ribulosa -» ADP + D- ribulose 5-Pi_s‘anomenen Lemetionina epimerasa i D-rbulosa 9-Pilligisa (ADP), respectivament. Lsplieacié directa del ramal B a la faccié mitoconérial obtinguda a partir d'un extracte isotonic de cor de bow, sense fer ds previ de Trité WR-1339, seria udient per obtenit fa maxima quantitat de succinat deshidrogenasa amb le menor contaminaci6 possible duricasafC Un enzim que a pH ~ 7.5 i baixa forga ‘nica no est etingut en una matsu de bescanvi anidnic, podria tei un pl de 5.8{.FEt rendiment global {tun procés de purificaciS d'un enzim pot caleular-se si es congixen tes quantita de proteina de tes oo Seman sie Rea MS Og a ea Venzim: (DSi Ja desnaturalitzacio térmica d'un enzim, mantingut a 65°C 30 min, s"adapta aun proces sat, Padi cna 0] = d'un inhibitor © parcial dn ensinE donara bead 100% d'intibico: @ Un ofecior que augmenta dc ta mateixa manera Vafinita de 'enzim per ef substrat i eficiencin eataliien seria un activador AC no essencial (i la elaci de as k 'inactivacié d'un enzim per dos inkbidors irreversibles ly if, que actuen sense la formacié dun complexe intermedi reversible, & k(t) / ke ( fe cumplri que ty (1) / Cun (i) = 2,( Si en una cenccid enzimitica bisubstrat els valors cle te Kap) del substrat variable augmenten al incrémentar Ja {substrat constant}, pot afirmar-se que ef mecanisme cingtie de la reacci6 es de tipus ping-non, | ~ 2.-Un sisterma envimdtic que e'adapta al mecsnisme Et Seo 8S > E + P, cumpleix Les condicions de riipid oquilibe! i no presenta inhibiclé por ex deternaina fos veto led » diforenis [$1 i es 110 nim {¢5-9, 597 2270 MT on obtenint-se fos dates segivents v(AAlmin) 0.933.060 O.ORE 9.090.094 Aaa) 0951 0.2065 0355 0,709 6.999 fa Kan (on pM) ide Ha hog (en's) rstjen ‘addieio Cun falsibider dds substrat, Per evaluar cls parimetees cindtics shan 1O* ML reaccié s'ka mesurat Wels valots do p que cemzimatic ieaetin que s'uneix a ta forma sible foial Fal sistema en studi, origina un Gnie comptes wimacica pastinent wand ana afinitnt 4 vegader superior & fa q ho fa S aX. D'alice banda, i prosdacie une {T] ~ 20 4M no modifica 1a ke» ce Veazim quan en 3! medi ie reaceid hi ha una {S]= 4 ml, Es demaaa -Deduir Pequacié de vetocitat det sisteme , amb ef innibidor lactis, per ef métode det ripid equi, -Teehallant amb une |S] - SKra i fffevariables, indicar ila copresentacié Alien de Ti on front de 11] seria finial | quine snrien elevators snmévies del ponden § dle ta inbergcceio en Poix ecdlonades, 5B stad de rowel AEB oP cenziin & seg AB we sips uniate (nendeuts no Uials) respecte de 8 (A no sit). Si se sap que la represeate obtingnida Pestudis de” binding” (d'unio) entre 8 ium ance, esisucaural BA (A) 6s Fa Deduir el meconisore cinttic de quan valdria ta ealacio wma shen ebtingut els result, ).P S5 anninhibids de ae Scatchacd cena Feazin ew esnids, - Si en aquest sistema enzimatic Kmm(A) ~ Kua}, rie de reacei continues ana fA) Km{A) inne 18] Kim) is -Q.esun iohibidor per pendete 40h estudiat fa wd de PATH «un tiga btenwat-se cls romulats seks LAF] lived (mf) ODAS 0.102 0190 9270 9.440 0690 [AEP] Cm (add) 0.0K G05. © 100 9.130 GLK _0.220 A. patty dPaquostes dados es edit si sta ccttes 0 falses fes questions segtents, justifican-ne fos resposies: bar molgcala encieitica bg un flréwer am contres identies ( independents que fenee wa conan dafinitat pes PAT <2. mM, sai de Hadie-Seatchaed (v' S” en feont dev" ) 65 (COL eM) por la denies de La didlisi on Meguili, una cob, cl valor de abscisa det seu may és 4 ila velacio [ATP /[ATPhy ~“VAL, -La conba do storie Fonzim per PAP sein hipe ambun valor de ht NOTA: 1a [ATPjay in Vou del sistema, Ala representacio doble logaritmica de 1ill seria finial suposn que e8 coucixen fos v inicials de rencei6 n diferents (ATR),ENZIMOLOGIA(Gener de 2004) (Liicenciatura en Bioquimica) |= Indiqueu si sn certes falses les questions segients Comenteu breument les respostes: -Els enzims que catalitzen les reaccions L-aspartat -> L-alanina + CO, i GTP + manose > GDP + Sanomenen L-aspartat carboxi hidrolasa i manosa-I-P; ligasa (GDP), respestivament, - « His cihazimssconeguts fins al moment actual tenen exclusivament una activitet hidrolites, -Liscivtat de ‘ Ju(ATPas§ podria determinar-se per un métode discontinu i per un assaig ndirecte continu, -Per purifcar und Trsitinasa, tal com Vaspertat aminotransferase, mitjangant una cromacografia dafinitat seria molt a ligand un anileg,estuctural del substrat oxodcid enlloc Si un enzim E actua sobre dos substats altematius S, AS (ecaKim= 1.10° M's") iS, (Reav/Km = 1.[0'W'S"), of soguiment del seu procés de purificacio amb S, donaria lloc a un grau de purificacié 100 vegades superior al que s‘obtindria emprant el substrat $3, Si ta desnaturaitzaci6 tGomica dun enzim, mantingut a 60°C 45 min, sadapla aun procés reversible N ¢> D amb un valor de Ky, = 0,02, cal esperar que souest enzim seguiria aproximadamen te tet d'Arrhenw quan actués sobre ei seu substrt en el marge de T de (25°07), -Kn oa anibicis init parcial (c.> 1, <1) les representacions de L/int i de WApte front a 1/ [1] son finials i permeten caleulara, BiK;, ‘valor de lz kyy de Ia inactivacié d'un enzim per un inhibidor irreversible tendeix ac» quan la {I} >, -Si en una reacib enzimtica es compleix Sep Sq = .5 es pot dir que lenzit té cooperativtat negativa en fa fixacié de S; -Per una proteina tetramérica que presenta cooperetivitat homotropica positiva maxima en In unié d'un {ligand L, la ropresentacié de Scatchard seri no linial mentre que fa cepresentacié doble Jogaritmica de Hill sera linial i el valor de h sera 2. 2. st vrs (5) dn sisten eric que span mecniame F +S e985 -+ 5-4 # (Er |= 8M; tamnp6 de fosfat de sod 50 miM, pH 7.4, 25°C) os varan obtenis les sogitents vinicnls de rexcei fS] (M)-: 210%; 333.105; v (uM) 1.43 2 Caleutar als velox deta Ki peesonmcé de Lin Se sap gue quan Tex en pe dor reversible total 1 Ou), afs valors de x Krnfap) t de Iu Ven(ap) On ia meita i ia cinquona part, rospectivament, dels que sobtenien en abstucit del compost {. Ea « de aiidor £1 Ae coloular ols valors de les < serien ols val constants 3 esecites a fa tala recta oblinguda on Ia representacié doble ierseocié en Peix Cordenades rmaitel, Dedui In natwrnloon dol eompost % | cxtoulac cls valore dels parkmetecs clndties idor {es substitueix per an compost X (5 mM) | es treballa gerd le séncia de [Ex] = (nM), el pendent de in nov superior (en reciproca es el mateix que of de la recie control mentze que el valor de Ie ink fo roduels @ cnicospononts, ‘sup quo el sistema encimitié de ingia a tos condisinas ee eid aguiibs! 4 segucix ws ‘ondicions oxperintentiais wiitzades 8 63 P+ Q we anp que ie anbiets p> las Hons saturents 4 ide Boperd que nn succesix el mateix quan P es substitueix per ut anilog esiuuclural P. Daltre banda Q és ua inhibidgr competitiu de Peaziza (A «qe i ante cle (Q) &s un inte ate” GEE Ti GA A Ge warble 2 “Deduir el mecanisme cinétic al que sadapta Verzim ei esd, : a faturalesa «ets complexes abortius que jusificarien ana inhibicid mixte (ni no lia) per un inbifejpr dead cod I quon 3 és variable i A oc sat; -Discuti si en preséncia dus (I) ao sat i na (B] sat serfpossible trl tar fa inbibiei® per exegs del substeat A, independentment ce quina fos ta seva aaturalesa, aan A ery Vey bah!ENZIMOLOGIA(Gener 2005) (Liiconciatura en Bioguimica) indiqueu si s6n certes o falses les questions segitents. Comenten broument les respostes: Els enzims que catalitzen les reaccions acetoacetat -> acetona + CQy i CTP + fosfat detenolamina -» PP, + CDP-etamolamina s'anomenen acetoscetat cacboxihidrolasa i CDP- etanolamina Vligasa (PP,, respectivament, \Liactivitat de Taspartat aminotransferesa podria determinar-se per un ussuig indirecte contims, La CM-Sepharose és un bescanviador cationic que a pH 6 i en condicioss de baixe forga idnica retindria a una proteina de pi 4; -Un enzim pur t6 un P.M. = 100,000 g/mol i el seu turnover és de 80.000 mol $ /min, mol E, Si VA.E, dma mostra aquest enzim és de 800 1.U/ma, pot dirse que el preparat enzimitic és homogeni: Per un enzim amb dos restes ionizables en el centre actiu i en él que fa forma activa és [EHS]. ‘woballa en proséncja duns {S] sat. i de [H°] molt elevades es compleix aproximadament la sogtent equacié” 105 (Vay 1 Va) — pH pK; 9 gran dinhibiis produit per wn inhibidor NC parcial & independent de la {S] present en el medi de reaceié; ‘YeUn efector que augments de la mateixa manera Safinitet de Venzim per el substrat i Veficiéncia catalitica seria un activador AC no essencisl; A¢Si la relacié de les k d'inactivaci6 d'un cazim per dos inhibidors imeversibles 1, (que no forma un complexe intermedi reversible en el sex mecanisme inbibici6) i h (que forma un complexs intermedi reversible) és k(Ih)/ k(la) ~ 2 os cumplira que tun (li) tha (le) = 2; 2CSi on una reacci6 enzimatica s'obté que Sia / Sao ~ 1.5, podria deduir-se que Venzim presentaria cooperativitat homotrépica positiva amb un valor deh 2, - Per a una proteina tetramérica amb cehtres idéntics i independents en Ia unid dun Rigand L, la representacié de Scatchard seia Tinial (a 4)i la representacié doble logaritmien de Hill també seria Hinial (hr 4) tic dol lipus a Set on presencia de (8) O° M, i= 04. D’altra banda s'obté un valor mateixa concontracié Cinbibidor i nia {81 1s, pot el métode del Api cn proséncia dl, ~ 1.101 M. Quan ol inhibidor tos subs total b, stobserva que Ia cepresentacid doble reeiproca dona Loc aus paraiicies ‘que en resénein d'una [3] Ke/2 ide fh = 11! M, 1 0.4, Bs desman que es radia tea questions segtients: Les constanta @inhibicis del mpostos I, i ly 6m iddntiquess saci ANF Vedsall Syl) Soule) SHE Un ensim que catlivza fa regecid bisubstiat A | Be P 4 Q dsiibt Compeltivaman! per P 4 substuat, varie, (8) st Si se sap que un anateg We" {Q) sabibeix a fenzim * que lenzim presenta ana inhibicad per exces dei subsiral B de tipus acompetitin xespecte del substeat, A, es d Deduic ef mecanisme nitic de Yenzim en estudi i la naturaiesa dels cliferenis complexes inactius existents, Justificar si an inhibidor dead end { podeia inhibir a Pemzim en prestacia de [A] 9 t de [BI A