GENETIKI INENJERING

PITANJA
DA LI ZNATE TA JE GENETIKI

INENJERING? DA LI ZNATE TA SU GENETIKI MODIFIKOVANI ORGANIZMI? JESTE ULI ZA POJAM TRANSGEN?

GENETIKI INENJERING GENETIKO INENJERSTVO

Genetiko inenjerstvo (ili rekombinantna
DNK tehnologija) je VETAKO FORMIRANJE NOVIH KOMBINACIJA NASLEDNOG MATERIJALA ugradnjom molekula DNK iz elije jedne vrste, posredstvom prenosioca (plazmida, virusa...) ili direktno u organizam domaina (koji prirodno ne sadri takvu DNK, ali u kome je sposobna da se umnoava).

Genetiko inenjerstvo u zavisnosti od dela genetikog materijala koji se prenosi moe biti:

HROMOZOMSKO GENOMSKO

GENSKO

U osnovi se radi o HORIZONTALNOM PRENOSU GENA za razliku od uobiajenog vertikalnog, odnosno sa roditeljske generacije na generaciju potomaka.

METODA GENSKOG GENETIKOG INENJERSTVA KORISTI MOGUNOSTI:

1. IDENTIFIKACIJE POJEDINIH GENA

KOJI DOVODE DO IZRAAVANJA POJEDINIH OSOBINA, 2. IZREZIVANJA TOG GENA IZ GENOMA DAVAOCA I 3. PRENOS U GENOM DOMAINA, IME SE ELJENA OSOBINA DAVAOCA PRENOSI NA DOMAINA PRIMAOCA.

Prenos gena moe da se vri IZMEU JEDINKI ISTE VRSTE, kada se radi o ubrzavanju i usmeravanju prirodnih procesa UKRTANJA I SELEKCIJE i

IZMEU JEDINKI RAZLIITIH VRSTA

 CUT PASTE princip! IZREZIVANJE GENA IZ GENOMA

DAVAOCA OBAVLJA SE POMOU TZV. RESTRIKCIONIH ENZIMA, A PRENOS U GENOM DOMAINA POMOU VEKTORA. LIGAZE

 1944. hemijska priroda naslednog

Otkria znaajna za razvoj genetikog inenjerstva:

materijala 1953. sekundarna struktura DNK 1958. replikacija DNK i uloga enzima nukleza i ligaza 1965. priroda genetikog kodauniverzalnost genetike ifre 1973. tehnika kloniranja DNK 1973. prvi himerni genom, tj. rekombinantna DNK, Cohen i Boyer u bakterijski genom ugradili gen za rRNK abe

Hronoloki prikaz najvanijih uspeha genetikog inenjerstva: 1975. i 1977. u Cold Spring Harboru dobijen je transgeni mi u koji je ubaen gen majmuna 1982. transgeni mi sa genom za hormon rasta pacova 80-ih je ugraen ljudski gen za insulin u bakteriju Escherichia coli 1989. geni zeca ubaeni u majmunske hromozome i ljudski geni u miji genom (ONKOMIEVI)

 1996. proizvodnja duvana, soje, kukuruza,

pamuka, pirina, uljane repice, krompira, paradajza... sa genima stranog porekla 1997. kloniran je prvi sisar (tanije, te godine su objavljeni rezultati), ovca Doli Transgena krava Rouz sa humanim genom za proizvodnju humanog mleka Transgena ovca Poli stvara protein za leenje hemofilije Transgene koze za proizvodnju humanih krvnih proteina

Majmun sa genom meduze (zelene fluorescentne boje) Akvarijumske ribice sa ugraenim genom za proizvodnju fluorescentnog proteina Formirani su genetski izmenjeni komarci koji ne mogu da prenesu izazivae malarije Radi se na proizvodnji transgenih svinja iji organi bi bili podesni za transplantaciju kod ljudi Iz ribe IVERAK izolovan je antifriz gen za dobro podnoenje niskih t (protein se dodaje sladoledu koji je ve u upotrebi u SAD i paradajzu)

METODE

GENSKI TRANSFER POSREDOVAN

EMBRIONALNIM STEM ELIJAMA GENSKI TRANSFER POSREDOVAN VIRUSIMA

MIKROINJEKCIJA DNK

METODE
Ugradnja genskog konstrukta u

MIKROINJEKCIJA DNK

pronukleus jajne elije Vraanje u jajovod enke Ukoliko se ugraen gen eksprimira i prenosi na potomstvo dobijene su tzv. ivotinje RODONAELNICI

METODE
GENSKI TRANSFER POSREDOVAN EMBRIONALNIM STEM ELIJAMA Manipulacija sa naslednim materijalom (DNK) embrionalnih stem elija Izvaenim iz BLASTOCISTE i njihovo vraanje u nju; Dobijaju se HIMERE, vano je da germ elije sadre transgen!

METODE
GENSKI TRANSFER POSREDOVAN VIRUSIMA Korienje virusa kao prenosioca jer oni umnoavaju sopstvenu DNK ili RNK u eliji domainu pa tako mogu da obezbede siguran unos transgena

GENETIKI MODIFIKOVANI ORGANIZMI, GMO

GENETIKI MODIFIKOVANI ORGANIZAM TRANSGENI ORGANIZAM u genetikom smislu, jeste novi, sintetski organizam koji ne postoji u prirodi jer nastaje odreenom genetikom manipulacijom. Pod genetikom manipulacijom podrazumevamo prenos gena ili paketa gena jedne vrste u drugu vrstu posredstvom vektora ili direktno mikronjekcijom.

Vektori mogu biti virusi ili plazmidi.

Mora imati: irok spektar domaina Mesto za delovanje restrikcionih enzima Mora biti podloan amplifikaciji

Zato se to radi? 1. Genetiko inenjerstvo je savremena biotehnologija. PROIZVODNJA MIKROBA ZNAAJNIH ZA PROIZVODNJU IVOTNIH NAMIRNICA. Biotehnologija je nauka XXI veka Prva etapa korieni su celi mikrobi Druga etapa korieni su njihovi enzimi Trea etapa upotreba celih transgenih mikroba

Zato se to radi?
2. Oekivana dobit za oveanstvo koje donosi tehnologija rekombinantne DNK i NJENA PRIMENA U MEDICINI I FARMACIJI, npr. u leenju genetski uslovljenih bolesti ili u proizvodnji lekova je nemerljiva. 3. PROIZVODNJA HRANE - Obezbeivanje dovoljne koliine hrane.

4. Genetiko inenjerstvo biljaka naglo se razvilo iz komercijalnih razloga.

PROIZVODNJA BILJNIH KULTURA BOLJIH

I NOVIH OSOBINA (POVEANJE PRINOSA, POVEANJE OTPORNOSTI NA HERBICIDE, INSEKTE, POVIENJE KVALITETA sadraja amino-kiselina, Fe, vitamina A itd.)

 PROIZVODNJA BIOMATERIJALA
Transgene koze sa genom za proizvodnju pauine (iz pauka Nephila clavipes) Biomaterijal za proizvodnju hirukog konca, padobrana, vodootpornih materijala...)

Tenja da se proizvedu BIORAZGRADIVI

MATERIJALI u cilju zatite ivotne okoline

Praktini ciljevi formiranja GMO bili su razliiti (primena u industriji, poljoprivredi, medicini, farmaciji...), ali im je sutina zajednika: to je proizvodnja STRANIH PROTEINA na bazi funkcije genetikih elemenata stranog porekla.

Ve dvadesetak godina genetikim inenjerstvom se proizvodi HUMANI REKOMBINANTNI INSULIN koji je dijabetiarima omoguio kvalitetan ivot.

Na isti nain se proizvodi VAKCINA

PROTIV HEPATITISA B. Tei se proizvodnji VONE VAKCINE!

Primeri

Za 1g interferona potrebno je 300t krvi ili

1500 slezina Za 1g somatotropina potrebno je 700 hipofiza INSULIN, dva polipeptida - dva gena od 63 nukleotida i od 90 nukleotida

NE MOGU SE PROIVODITI POLNI HORMONI JER NISU PROTEINSKE STRUKTURE!

 Svoju najveu praktinu primenu

rekombinantna DNK tehnologija je nala U POLJOPRIVREDI gde se koriste za stvaranje biljnih kultura novih i boljih osobina (boljih u smislu poveanja prinosa, poveanja otpornosti na bolesti i delovanje hemikalija, povienje kvaliteta i dr.)

 Danas u Svetu postoji oko 50

vrsta GM biljaka koje su u komercijalnoj primeni (NAJVIE SOJA, KUKURUZ, PAMUK I DUVAN) na oko 90 miliona ha poljoprivrednih povrina, a vie od pola ukupne svetske proizvodnje soje ini GM soja.

 Jedna od najee korienih

povoljnih osobina, koja se metodom genetikog inenjeringa, postigla kod biljaka jeste TOLERANCIJA NA HERBICIDE GLIFOSFAT I GLUFOSINAT. Time se postie manje propadanje kulturnih biljaka herbicidnim tretmanom.

 Takoe, uspeno je preneta osobina

OTPORNOST NA TETOINE. Primer je kukuruz s genom zemljine bakterije Bacillus thuringiensis, koja se ve 40 godina koristi za unitavanje larvi komaraca i drugih insekata. Takav kukuruz sam stvara tzv. BT-toksin, kojim postaje otporan na tetoine (kukuruznog moljca, kukuruznu zlaticu...) bez dodatnih insekticidnih tretmana.

 Interesantan je i primer PARADAJZA SA

BLOKIRANIM ENZIMOM KVARENJA (TRULJENJA) koji je normalno prisutan u njemu, ime paradajz postaje dugotrajan. Neka od drugih karakteristika koje se nastoje ugraditi ovom tehnologijom u biljke koje se uzgajaju za proizvodnju namirnica jesu POBOLJANA NUTRITIVNA VREDNOST, ODNOSNO POVEANI SADRAJ PROTEINA, VITAMINA (pirina sa provitaminom A zlatni pirina i paradajz sa poveanim sadrajem likopena) I MODIFIKOVAN SADRAJ MASNOA.

50%-60% biljnih semena koji se u SAD prodaju su GMO U Engleskoj se ostvaruje 70.000t proteina za stonu hranu pomou GMO; za poveanje miine mase znaajni su proteini koji sadre vie LIZINA I TRIPTOFANA, a aditivi su upravo takve strukture

DA LI SE GMO MOE UPOTREBITI ZA DALJU REPRODUKCIJU? Da i ne, zavisi od vrste transgenog organizma. Ukoliko je transgena bakterija, nju samelju i iz nje ekstrahuju npr. insulin, znai NE. U sluaju transgene animalne vrste moe. U sluaju sojine same koja ostaje poto iz nje ekstrahujemo proteine, ulje nemogue je reprodukovati biljku u prirodnim uslovima. Ako je raspolaemo semenskom robom moe.

DA LI SE TREBA BAVITI GENETIKIM INENJERSTVOM? DA JER... Ova istraivaka oblast je mono sredstvo za prouavanje funkcije i organizacije gena;

Nain za veu proizvodnju lekova; Mogunost da se pronae lek za kancer...

ALI... NEOPHODNA JE DRUTVENA KONTROLA OVAKVIH ISTRAIVANJA, KONTROLA UPOTREBE NAUNIH DOSTIGNUA, POTREBNO JE USAGLAAVANJE NAIH ZAKONA SA ZAKONIMA EVROPSKE UNIJE

STRATEGIJA PROCENE RIZIKA ZA GMO UKLJUUJE: INFORMACIJE O KARAKTERISTIKAMA MODIFIKACIJE UKLJUUJUI FUNKCIJU I OSOBINE NOVOG GENA, ISPITIVANJE NEKODLJIVOSTI I PREHRAMBENE VREDNOSTI SUPSTANCIPRODUKATA FUNKCIJE STRANIH GENA, IDENTIFIKACIJA I EVALUACIJA SVIH PROMENA U SASTAVU MODIFIKOVANIH PROIZVODA, UTICAJ MODIFIKACIJE NA TOKSIKOLOKA SVOJSTVA...

 Za konvencionalne namirnice smo,

korienjem vekovima, postigli ravnoteu i poznati su nam njihov SASTAV, NAMENA I MOGUNOSTI TETNOG DELOVANJA, dok za GM namirnice to ne moemo rei, jer se sve desilo poslednjih desetina godina.

 Zato je SVETSKA ZDRAVSTVENA

ORGANIZACIJA RAZVILA PROCENE NEKODLJIVOSTI GENETSKI MODIFIKOVANIH NAMIRNICA TO PODRAZUMEVA TOKSIKOLOKA, ALERGOLOKA, PREHRAMBENA I DRUGA ISPITIVANJA. Princip ekvivalentnosti, koji se primenjuje (ocenjuje se da li namirnica ima iste okvire varijacija kljunih nutritijenata i toksikanata kao konvencionalni pandan ili ne).

RIZICI!!! Ni jednu vrstu, pa ni transgenu, ne smemo posmatrati nezavisno od drugih jer se svaka ukljuuje u odreeni ekosistem i u odreenu interakciju sa drugim vrstama.

Ukljuivanje ovakvih biljaka u prirodu nosi rizik od mogue pojave rezistentnih korovskih biljaka i njihovo nekontrolisano irenje.

Drugi rizik jeste produkcija proteina koji indukuju ALERGIJSKE REAKCIJE.

Primer ekspresije gena brazilskog oraha unetog u graak (i soju), koji se transformisao u jak imunogen, izazivajui fatalne posledice u pluima mia, ukazuje na ozbiljnost rizika korienja GM hrane. OBAVEZAN JE INFORMISANI IZBOR obeleavanje GM hrane

ETIKI PROBLEMI TERMINATOR TEHNOLOGIJA!!! Ova tehnologija spreava mogunost korienja komercijalnog GM semena za drugu setvu. Terminator tehnologija ukljuuje modifikaciju koja spreava klijanje sledee generacije semena, a pri tome ne utie na kvalitet hrane koja nastaje od tog semena.

 Terminator tehnologija je osmiljena da

ubaci farmere u krug kupovine semena ili hemikalija za prskanje svake sezone

Statistiki podaci
Od 1996. do 2005. ukupna povrina
zasejana komercijalno genetiki modifikovanim usevima u svetu poveala se na 90 mil. ha. Broj drava u kojima se gaje GMO poveao se sa 17 na 21 (za 1 godinu)

ETIKO-MORALNA PITANJA VEZANA ZA

1. GENSKU TERAPIJU

GENSKA TERAPIJA JE KOREKCIJA OTEENIH GENA ODGOVORNIH ZA NASTANAK BOLESTI

POD POJMOM GENSKA TERAPIJA PODRAZUMEVA SE SVAKA MANIPULACIJA NASLEDNIM MATERIJALOM U TERAPEUTSKE SVRHE

Postoje 3 vida genske terapije: 1. Korekcija oteenog gena (zamena mutiranog gena normalnim, tj. ubacivanje funkcionalnog gena u bolesnu eliju) 2. Antisens terapija (blokada primarnog produkta gena, tj. iRNK) 3. Ukljuivanje mikro RNK molekula u terapeutske svrhe

Razliiti pristupi ugraivanja normalnog gena: 1. VEKTORSKI 2. NEVEKTORSKI (NEVIRUSNI) - Direktno ugraivanje terapeutske DNK u ciljnu eliju - Korienje lipozoma kao prenosioca - Hemijskim vezivanjem za molekule koji prepoznaju receptore 3. UVOENJEM 47.og HROMOZOMA

Ostale mogunosti: 1. Zamena mutiranog gena normalnim genom kroz HOMOLOGU TRANSLOKACIJU 2. Reparacija oteenog gena REVERZNOM MUTACIJOM 3. DIRIGOVANA MUTAGENEZA reaktiviranih protoonkogena

Virusni vektori u genskoj terapiji:

RETROVIRUSI ADENOVIRUSI ADENO-ASOCIRANI VIRUSI HERPES-SIMPLEKS VIRUSI

TIPOVI GENSKIH TERAPIJA SOMATSKA genska terapija GERMINATIVNA genska terapija

Nedostaci praktine primene genske terapije: 1. NESTABILNOST TERAPEUTSKE DNK 2. IMUNI ODGOVOR 3. VIRUSNI VEKTORI 4. MULTIFAKTORIJALNE BOLESTI 5. RIZIK ZA INDUKOVANJE TUMORA INSERCIONOM MUTAGENEZOM 6. ETIKI PROBLEMI

DOSTIGNUA IZ DOMENA GENSKE TERAPIJE

2008. Uspena genska terapija jedne vrste slepila London 2006. Uspean tretman kancera (melanoma) Meriland 2006. leenje mijeloidne leukemije Uspeno se lei imunodeficijencija AGAMAGLOBULINEMIJA izazvana nedostatkom enzima adenozin-deaminaze. Talasemija, cistina fibroza, Parkinsonova bolest reparacijom mutacija na iRNK

PROBLEMI

1999. etiri dana od poetka tretmana preminuo 18godinji deak zbog otrog imunog odgovora na vektor koji je bio adenovirus
Od 20-oro pacijenata leenih od imunodeficijencije (retrovirusi), troje je dobilo leukemiju

PITANJA ta je genetiki inenjering? Objasnite zato je rekombinantna DNK tehnologija horizontalan prenos gena. Koja su tri kljuna koraka u genetikom inenjeringu? ta se koristi kao vektor u genetikom inenjerstvu? Rekombinantna DNK tehnologija kao biotehnologija XXI veka. Koji se virusni vektori koriste u genskoj terapiji? Tipovi genskih terapija? Koji su nedostaci primene genske terapije? Dostignua u oblasti genske terapije?

 ta su transgeni ili GMO? Koji su praktini ciljevi formiranja GMO? Da li se GMO mogu upotrebiti za dalju

reprodukciju? Navedite razloge zbog kojih treba formirati GMO. Navedite rizike formiranja GMO. Navedite primere korienja GMO u medicini. Navedite primere korienja GMO u poljoprivredi. ta podrazumeva terminator tehnologija? Koje GM biljne vrste se gaje u komercijalne svrhe? Da li je proizvodnja GMO u porastu? Statistiki podaci.

 Genetiki inenjering podrazumeva

a) b) c)

_____________ novih kombinacija _____________________. ta omoguuje formiranje rekombinovanih molekula koji se sastoje iz DNK koje vode poreklo iz razliitih organizama? Univerzalnost polimeraze bakterije omoguava ugraivanje gena Supresija restrikcionih enzima u bakteriji Univerzalnost genetikog koda

 a) b) c)
a) b) c)

d)

ta prepoznaju restrikcione endonukleaze? eoni niz u DNK Ukosnicu-umnoak GC parova Specifine nukleotide u dvolananoj DNK nazvane palindromske sekvence Koji od ponuenih odgovora se odnosi na plazmid kao vektor za kloniranje? Vektor za kloniranje je izolovani deo bakterijske hromozomske DNK To je kruni molekul DNK koji postoji u nekim baketrijama i ima sposobnost da se replikuje nezavisno od bakterijske DNK Sadri neke neophodne gene za metabolizam laktoze bakterije Svi odgovori su tani

 Genetiki inenjering je: a) Manipulacija genetikim materijalom b) Prenoenje genetikog materijala iz jednog c)

d) a) b) c) d) e) f)

organizma u drugi Dobijanje organizama sa drugaijom kombinacijom gena Svi odgovori su tani Genetiki inenjering ima primenu u: Medicini Veterini Poljoprivredi Ratarstvu Industriji Svi odgovori su tani

 Da bi se u eliji bakterije sintetisao protein a) b) c) d) a) b)

c)

d)

oveka, koji od ponuenih molekula mora biti prenet u bakteriju? Gen za taj protein RNK oveka tRNK Svi navedeni molekuli Obelei tanu tvrdnju: postoji gensko i genomsko inenjerstvo Od biotehnologije se oekuje da povea proizvodnju hrane Primena inenjerstva moe da bude u zatiti ovekove okoline Svi odgovori su tani

 Da li se genetikim inenjeringom moe

da dobije estrogen? a) da b) ne Bioloki bioreaktori su?

a) E. coli b) Pseudomonas
c) Obe vrste

 U bakterijskim kulturama moe da se

a)
b) c)

dobije niz ____________ neophodnih u medicini. Genetiko inenjerstvo omoguava da se: U eliji bakterije sintetie insulin, koji ne izaziva imunoloku reakciju posle dugotrajne upotrebe U bakteriji sintetie hormon rasta Oba navoda su tana

 Koji od sledeih odgovora je taan? a) Prenoenje genetikog materijala iz jednog

b) c) d)

a)
b) c) d)

ivog sistema u drugi naziva se genetiko inenjerstvo Presaivanje jedra iz jedne elije u drugu je genomsko inenjerstvo Geni se najee prenose pomou plazmida Svi odgovori su tani Tehnikom genetskog inenjerstva se mogu dobiti: Biljke rezistentne na delovanje herbicida i insekticida Biljke sa veim prinosom ploda Biljke krupnih cvasti i lepih boja Sve navedene

 Koji od navedenih hormona ne moe da se

a) b) c) d) a) b) c)

dobije genetiim inenjeringom? Humani insulin Testosteron Hormon rasta Svi navedeni molekuli U sluaju ovce Doli: Doli je nastala kao klon iz somatskih elija Doli je nastala iz jajne elije jedne vrste ovce koja je nakon oploenja ubaena u drugu ovcu Doli je dokaz da su u somatskim elijama svi geni prisutni