Radne

Redoks

Pomone

Gasne

Referente

Metalne
Membranske

RT ln10
aoks
EE
log
nF
ared

E standardni redoks potencijal (V); E=f(T)

(Ako potencijal elektrode zavisi od pH rastvora umesto E u izrazu se koristi E - formalni redoks potencijal)
n - razmenjenih elektrona
aoks i ared aktivitet oksidovanog i redukovanog oblika supstance
R univerzalna gasna konstnta R = 8,314 (JK-1mol-1)
T temperatura (K)
F Faradejeva konstanta F = 96485 (Cmol -1)
Ako je temperatura t = 25oC, RT ln 10 = 0,059 (V)
F

FE IND

rH 2
pH
RT ln10

rH veliina koja takoe definie redoks potencijal sistema

(0< rH < 41,8)
EIND potencijal indiferentne indikatorske elektrode (V)

EE

Mz /M

RTln10

logaMz
zF

z+
EM z / M - standardni redoks potencijal sistema M /M

aMz

- aktivitet metalnoh jona

 Konstantnost

potencijala
Nepolarizovanost
Stabilnost
Reproduktivnost
Kapacitet
Difuzioni potencijal
Temperaturni koeficijent
Elektrina otpornost
Oblik

aox
RTF ln 10
log
EE
ared
nF

RTF ln 10
z
log aM
EE
nF
PMA
RTF ln 10

log
EE
a A
nF

 Srebrna:

E E Ag / Ag

PAgCl
RT

ln 10 log
zF
( CCl ) KCl

Kalomelova

Hg 22 / 2Hg

EE

elektroda:

PHg2Cl 2
RT ln10

log 2
2F
aCl

Zasiena:

E EHg 2 / 2 Hg
2

0,059

log PHg 2Cl2

z

aH
RT ln10
EE
log
F
(pH2 )1/ 2

RTln10
E
pH ; E2H /H 0 (V)
2
nF

 Hinhidronova:

RT ln10
EE
pH
F
Staklena:

o
Ehin
(
25
C ) 0,699V
/ hidr

Est Eu,ref Ea Em
RT ln10
Em
(pHu pHm )
F
RT ln10
Est Eu,ref Ea
(pHu pHm )
F
RT ln10
Est Ek
pHm
F

S RT ln10
Est Ek
pHm
F

(dE dpH)st var no

(dE dpH)teorijsko

(dE dpH)teorijsko

RT ln10
F

 Jon-selektivne

elektrode:

Staklena
Elektrode zasnovane na neorganskim solima
Elektrode zasnovane na organskim izmenjivaima
jona i neutralnim nosaima
Gas-osetljive elektrode
Ostale: enzimske, na bazi PAM, na bazi FET-a

 Jon-selektivne

elektrode:

Anjonske
RT ln10

E EK
log(aK kKIaIzK
zKF

zI

Katjonske:

E EA

RT ln10
log(aA k AIaIz A
z AF

zI

RT ln10
RT ln 10

pM
K
E EK
log aK
zKF
zK F

E E A

RT ln 10
RT ln10
log a A E E A
pA
z AF
zAF

 Indikatorska

elektroda (kombinovana)
Referentna elektroda
Elektrolitika veza

Est Eu,ref

SRT ln10
Ea
(pHu pHm )
F

 Nedostaci:

Asimetrini potencijal (izobestina taka)

Gubitak osetljivosti starenje
Mala mehanika otpornost
Velika elektrina otpornost
Tendencija adsorpcije

 Rastvor

se podvrgava kratkotrajnoj
elektrolizi pri promenljivoj razlici
potencijala
Kvalitativna karakteristika: Er, E1/2
Kvantitativna karakteristika: id
RT ln 10
E E1/ 2
log(( id i / i)
nF
E
2,303RT/nF

E1/2

log(id-d)/i

 Cd2+ +
2Hg

2e

2e

Ilkovieva

Cd(Hg)

Hg2Cl2
jednaina:

id = KCm2/3t1/6D1/2

= f(di/dE)
E = f(d2i/dE2)

 Analize

vie depolarizatora pri zajednikim

uslovima (osetljivost, kompenzacija
difuzione struje, itd.)
50 mV razlika polutalasnih potencijala
(klasina 100 mV)
Odnos koncentracije 1000:1 (klasina 50:1)

 iF

= i d + im
ig = i F + i c + i r + i o
Migraciona:

visoka koncentracija pomonog

elektrolita
Kapacitetna:

eliminacija elektrinim putem

do 10-6 mol/l; pulsne tehnike

Mala povrina elektrode (d = 0,02 0,08 mm)

reproduktivnost saoptavanja potencijala
Mogunost ponavljanja analize
Visok nadnapon izdvajanja vodonika
Obnavljanje elektrodne povrine
reproduktivnost procesa
Momentalno uspostavljanje potencijala
Ogranienost anodnog potencijala (+0,4 V)
Diskontinualan rad

 Rezervoar

ive

Kapilara
Mikrometarski
Tipovi:

Visea
Sedea

zavrtanja

 Kiseonini

maksimumi:

Polarografski

maksimumi: I (adsorpcija), II
vrste (konvektivni prenos mase unutar
elektrode)

 Primarna

kulonometrija:

Q
m
F
m masa supstance na generatorskoj elektrodi
Q protekla koliina struje (C = As)
q masa ekvivalenta izdvojene supstance koja reaguje sa jednim molom elektrona (gmol-1)

t el

Q it dt
0

it = iel = const:
E = const

t el

t el

Q it dt i0 ekt dt
Q = iel tel
it = i0e-kt

i0
1 ekt el
k
k

A D

Vr

 Generatorska

G + ne T

Generatorska

anoda:

T G + ne

Pomona

anoda:

G T + ne

Pomona

katoda:

4OH- O2 + 2H2O + 4e

katoda:

T + ne G

2H+ + 2e H2

 Titracija

ireversnog sistema reversnim:

ET ZTT

 Titracija

reversnog sistema ireversnim:

2 S2O32 + J2 S4O62 + 2 J
2 S2O32 + J3 S4O62 + 3 J

2J- J2 + 2e

3J- J3- + 2e

J2 + C6H8O6 2J- + 2H+ + C6H6O6

J3- + C6H8O6 2J- + 2H+ + C6H6O6

Q
2F

Q MJ2 ( J3 )
m
F
2
2 S2O32 + J2 S4O62 + 2 J
2 S2O32 + J3 S4O62 + 3 J

2Q Q

2F F

Promene smera struje se deavaju sporije od fenomena

relaksacije

500 Hz, 1000 Hz

Detektor - osciloskop

 100

MHz
Eliminacija elektrolize

Visoka osetljivost
Mogunost multielementarne analize
Visoka selektivnost
Selektivnost prema razliitim fiziko-hemijskim
oblicima i valentnim stanjima analita
Mogunost direktne analize
Mogunost automatizacije i kontinualnog
monitoringa
Mobilnost in situ analize
Prihvatljiva cena
Mala potronja energije

 Fe2+/Fe3+
Tl+/Tl3+

Sn2+/Sn4+
Sb3+/Sb5+
As3+/As5+
Se4+/Se6+
Mn2+/Mn4+

Sile koje ubrzavaju: F1

Solvodinamike (hromatografske)
Elektrostatiske (razdvajanje u elektricnom

polju)
Elektrolineticke
Gravitacione (sedimentacione metode)

Sile koje usporavaju: F2

Sila trenja
Elektrostatike

Dipol-dipol interakcija
Adsorpcione
Osmotske
Efekti molekulskih sita
Difuzione

Adsorpciona

As Cs` As
ki` Ki

Vm Cm Am
Ws Cs`` Ws
ki` Ki

Wm Cm Wm
k1Cm
Cs`
1 k 2Cm
Cs` k 3Cmx , x 1

Afinitetna
Proteini A i G antitela
Antitela proteini
Boje adsorpcija proteina, enzima
Ligandi, supstrati, kofaktori enzimi
Lektini glukozinolati
Metalni joni proteini bogati His, fosforilovani
proteini
Borna kiselina planarne cis diolne grupe
ugljenih hidrata i komponenata nukleinskih
kiselina
Sekvenca nukleotida complementarna RNK

Afinitetna - elucija
Promena pH (snizavanje)
Dodatak visoke koncentracije soli (NaCl 1

mol/l)
Agensima koji ometaju hidrofobne interakcije
i vodonine veze (urea, tiourea, Na-tiocijanat,
guanidine hidrohlorid)

Na molekulskim sitima

Ve Vm KVi
Ve Vm
K
Vi

Molekulska sita
Kserogeli umreeni dekstran, umrezeni
poliakrilamid
Aerogeli porozno staklo

Kombinovani Agaroza, Sefaroza, S/DVB

Slabi katjonski:
-

karboksilna, fenolna, amidoacetatna

Jaki katjonski:
-

sulfonatna

Jaki anjonski:
- kvaternerne amonijum grupe

Slabi anjonski:
- dimetil amino, trimetilamino, amino

2
L

L
H

2
L

L( / L) L( w / 4 L) L( w / 4tr )
2

w 4

w/ 4
2

4tr
tr
N L/ H
16
w
w

b1/ 2

2,354
tr

N 5.545
b1/ 2

n = L/H
H = L(w/tr)2
H = H1+H2+H3

n broj ekvivalentnih teorijskih podova

H visina ekvivalenta teorijskih podova

A 2d p

- faktor pakovanja
dp - precnik cestica

- lavirint faktor, manji, 1

B 2Dm

Dm koeficijent difuzije u mobilnoj fazi

C Cm Cs
Cm

d p2

- konstanta zavisna od

Dm

kapacitetnog faktora i nacina

pakovanja
f(k`) konstanta zavisna od kapacit
Ds koeficijent difuzije u stacionar

Cs f (k `)

2
f

Ds

H A
H

B
u

B
u

Cu

(Cs Cm )u

H Au

1/ 3

B
u

Cu

Van Deemter

Hawkes

Knox

Metode kvantifikacije u TLC

Kalibraciona kriva
Denzitometrija

Merenje intenziteta radioaktivnog zracenja

Eluiranje: spektrofotometrija, IR, MS,

elektroanalitika, NMR

HPTLC

Piezoelektrini uredjaji za nanoenje

2D
Smanjena nesigurnost polozaja i povrine mrlje
Niza cena analize
Krae vreme analize
Niska cena odravanja
Jednostavna priprema uzoraka
Mala potronja rastvaraa
Mogucnost vizuelne detekcije

HPTLC

TLC

Debljina sloja

100 um

250 um

Efikasnost

Visoka

Umerena

Razdvajanje

3-5 cm

10-15 cm

Trajanje analize

Znatno krace

Duze

Sorbent

Silika gel, C8, C18

Silika gel, Aluminium oksid,

Kieselguhr

Razvijanje

Uz znatno manji utrosak

mobilne faze

Dosta mobilne faze

Nanosenje uzorka

Autosampler

Manuelno

Detekcija

UV/VIS fluorescentni skener

uz denzitometar I automatsku
kvalitativnu I kvantitativnu
analizu

Runa

Eluciona

Frontalna
A+B
+C
A+B+C

A+B+C

B+C

B+C

Metoda istiskivanja

A
B

A
B

Asimetrija pika:
Loa rezolucija
Pogrena procena broja ekvivalentnih teorijskih
podova
Netana kvantifikacija

Gubitak manjih pikova

Loa reproduktivnost

Kapacitet kolone
nc 1

N
4

ln

Vmax
Vmin

10,000 30 ml
nc 1
ln
86 jedinjenja
4
1 ml

Vmax i Vmin maksimalna i minimalna zapremina mobilne faze

u kojoj se analit moze eluirati i detektovati

Injektovanje uzorka
Gasna slavina

Split injektor
Spiltless injektor
Direktno na kolonu
Programmed Temperature Vaporizing Injection

(PTV)
Sa koncentrovanjem isparljivih analita (Purge and
Trap)

Qk

d2 l
tm

Detektori
Detektor termike provodljivosti (TCD)

Vodonikov plameno-jonizacioni detektor (FID)

Elektron-apsorbujui detektor (ECD)
NP detektor
Maseni spektrometar (MS)

Termike provodljivosti

Plameno-jonizacioni

Elektron-apsorbujui

NP detektor

MS detektor

GC MS interfejs
Analiti se ne smeju kondenzovati niti raspadati

Interfejs se mora nalaziti na temperaturi iznad

take kljuanja supstanci

Sloeniji kod instrumenata sa punjenim
kolonama
More complicated in instruments with packed
columns

Headspace tehnika
1950. god. uvedena
Tehnika pripreme uzoraka za odredjivanje

isparljivih supstanci u cvrstim i tecnim

uzorcima
Jednostavna
ista

Kriogeno koncentrovanje
Kriogeno koncentrovanje - konstantna T
Kriofokusiranje temperaturni gradijent

1. Vece zapremine gasa nosaa koji sadri komponentu se

prevodi preko hladnog sorbera
2. Brzim zagrevanjem sorbera akumulirani analiti se
oslobadjaju

Kriogeno koncentrovanje
1. Kada je potrebno u GC uvesti vee zapremine
gasne faze (nie koncentracije, mali K)
2. Kada je unosenje uzorka suvie dugo trajalo
3. Kada je desorpcija u dinamikoj head space
dugo trajala

Kriogeno koncentrovanje
1. Kada je potrebno u GC uvesti vee zapremine
gasne faze (nie koncentracije, mali K)
2. Kada je unoenje uzorka suvie dugo trajalo
3. Kada je desorpcija u dinamikoj head space
dugo trajala

Sistemi kriogenog fokusiranja

1. Mala predkolona (3 cm) koja se hladi
tenim azotom (40x)
2. Cela kolona se hladi tenim azotom
3. Dinamiko hladjenje

Problemi
1. TT likvidnih faza zamrzavanje i
zadrzavanje analita nedefinisanim
mehanizmom (adsorpcija, zamrzavanje)
2. Voda iz uzorka suenje LiCl na
Chromosorb-u
3. Kriogene kolone aktivne!!!

HPLC
Mobilna faza tenost u kojoj su analiti rastvorni
Znaajna uloga mobilne faze u retenciji analita
Stacionarna faza vrsta, tena ili gel
Pritisci 400 bar
Kolone i detektori moraju biti otporni na visoke
pritiske
Znaajna uloga pufera kontrola jonizacije

Filtri, guard kolone

Zatita analitikih kolona
Filtri 10 -30 m
Pojedine pumpe takodje poseduju filtre
Velik broj filtera nepoeljno zbog otpora
protoku i formiranja mehurova
Saturacione kolone pre analitike, tite od
degradacije uzrokovane puferima visoke pH

Delovi od nerdjajueg elika

Vodovi, liner-i se pasiviziraju
Spreavanje korozije uzrokovane visokom (do 200

mmol/l) koncentracijom halida

Predkolonu i kolonu je potrebno ukloniti
Pasivizacija provodjenjem 20% azotne kiseline i
ispiranje vodom
Uklanjanje iskristalisanih pufera i nataloenih
organskih materijala
Za vee koncentracije halida preporuuje se
primena delova od titanijuma i primena pumpi sa
polimernim glavama (PEEK)

Pumpe
Moraju obezbediti stabilan protok od 10 l/min

2 ml/min
Kod HPLC MS protok zavisi od
primenjenog interfejsa
Elektronski-kontrolisane pumpe
Najee su klipne pumpe
- sa jednosmernim kretanjem klipa
- sa naizmeninim kretanjem klipa
- sa klipovima smaknutim u fazi

HPLC
Podeona 80% svih aplikacija
Na izmenjivaima jona 15%
Drugo 5%

Izokratski

Jednostavnije
Bre
Nia cena
Jedna pumpa
Mea nije potreban
Neophodna reekvilibracija sistema izmedju
analiza
Ograniena selektivnost

Gradijentno
Pri razdvajanju supstanci razliitih polarnosti
U hromatografiji na obrnutim fazama bra elucija

kasnih pikova
Razdvajanje preklopljenih pikova
Sporije razdvajanje
Vea fleksibilnost
Vie pumpi - via cena

HPLC Kolone

Kolone
Nerdjajui elik ispolirane unutranje povrine

(kompleksiranje od strane gvodja, hroma i nikla)

Nerdjajui elik prevuen staklom
Staklo
Stopljena silika
Polimeri
Meki spoljanji polimeri
Porozne frite 0.5 m; 2 m

Stacionarne faze
Hemijski vezane faze na bazi silika gela
Hemijska modifikacija odredjuje polarnost

Polimerizacija na nosau
Za razliku od GC stacionarna faza ne daje

pozadinski um u detektoru osim ako

neadekvatan pH ne izaziva njenu degradaciju

Porozne mikrosfere
Najee primenjivane
Dostupne, efikasne, dugotrajne, praktine

Razliitih prenika, veliina pora, specifine

povrine

vrste
Dostupne razliitih prenika 1,5 2,5 m
Ogranien kapacitet

Otri pikovi

Perfuzione
Velike pore: 4000 8000 A
Manje pore: 300 - 1000 A

Preparativno izolovanje makromolekula

(proteini)

Poroshell
1,7 m vrsto jezgro od silike sa 0,5 m

poroznim spoljanjim slojem

Uniformna raspodela veliina gusto pakovanje
vea efikasnost

Poroshell
Proizvodnja slaganjem slojeva

Usavrena proizvodnja - koacervacija

Usavrena rezolucija
2 m frita, otporne na zapuenje
80-90% bolja efikasnost razdvajanja uz manje
otpore
Mogunost transfera na UHPLC

estice od silike

Najvie koriene
Dostupne razliite poroznosti (7, 30, 100 nm)
Dostupne razliitih veliina (3, 5, 10 m)
Dostupne pravilnog sfernog i nepravilnog
oblika

estice od silike

Ne menjaju zapreminu u kontaktu sa rastvaraem

Ne smeju se koristiti na pH>8
Nedostatak kiseli karakter
Otporne
Dug vek trajanja
Modifikovane - kompatibilne sa vodenim i
organskim rastvorima

Porozni polimeri
Nesubstituisani pogodni za razdvajanje na

obrnutim fazama
PS DVB
Substituisani metakrilat
Polivinil alkohol
irok raspon pH: 1-13
Porozne mikrosfere i vrste
irokih pora preparativna, za uklanjanje
proteina

Porozni polimeri

Jaka hidrofobna retencija

N = N (silika)
Bubrenje izraenije kod gradijentnog reima
Modifikovani:
- C18
-NH2
-CN
-COOH
-SO3H
-NR3+

Grafitisani ugljenik
Za razdvajanje na obrnutim fazama
Porozne mikrosfere razliitih veliina

Geometrijski izomeri
U irokom opsegu pH i temperature
Izuzetno jaka adsorpcija neistoa
Kolone malih duina i skupe

Aluminijum-oksid
Razliitih veliina pora
Za razdvajanje na normalnim fazama umereno

polarnih analita
Za razdvajanje na obrnutim fazama prevlaenje
polimernom fazom (polibutadien)
Do pH 12
Ne sme se koristiti za uzorke koji sadre
karboksilne kiseline
Ne pokazuje izrazite prednosti u odnosu na siliku

Na bazi cirkonijuma
Porozne mikrosfere i neporozne ultramikrosfere
Komercijalno polimerom prevuene cirkonijum

mikrosfere
pH: 1 14
Za razdvajanje izrazito baznih jedinjenja
T: do 100C
Ugljen-dioksid, F, fosfati, Luisove kiseline,
karboksilne i sulfonske kiseline moraju u
potpunosti biti uklonjen iz uzorka

Karakteristike kolone
Broj teorijskih podova (N)
Faktor asimetrinosti pikova

Selektivnost
Pad pritiska
Reproduktivnost retencionih faktora
Koncentracija vezane faze

N raste kod:

Dobro pakovanih kolona

Duih kolona
Manjih protoka
Manjih estica
Mobilnih faza manjeg viskoziteta
Manjih molekula analita

Gubitak performansi kolone:

Blokiranje friti ili punjenja kolone

Apsorpcija/adsorpcija neistoa
Mehaniko ili termijsko oteenje
Hemijsko oteenje

HPLC Detektori:
UV/VIS (varijabilni UV)

DAD detektor (Diode Array Detector)

Fluorescentni
Refraktometrijski

Elektrohemijski
Konduktometrijski
ELSD detektor (ELSD)

Viskozimetrijski
MS

Zahtevi detektora
Minimalna disperzija pika
Osetljivost
Linearnost
Selektivnost

Vie redno vezanih detektora

dU out
Si
dci ,det

dU out
Si
di

2
2
2
2
tot
inj
col
det

UV/VIS

I I 0 10

bc

Signal elektronski linearizovan

Za velike A nelinearnost usled nejednakosti apsorpcionog
koeficijenta
Velika A veliki um i pozadinska apsorpcija
Kod rastvaraa koji intenzivno apsorbuju - smanjuje
se odnos S/N

Varijabilni UV
Optike elije od kvarca (190 650 nm)
8 l za punjene kolone

1 l za kapilarne kolone
Detektori koji prate signal na jednoj talasnoj

duzini ivina lampa na 254 nm

Varijabilni volframova i D lampa
Difrakcione reetke: 2-5 nm
Promena talasnih duina omoguava da se za
svaki pik nadju uslovi najvee osetljivosti

Varijabilni UV

DAD
Rotirajua ili vibrirajua difrakciona reetka ispred
elije (1 s)
Polihromatska svetlost prolazi kroz eliju
DAD polihromator se nalazi iza elije
Dispergovana svetlost pada na 200-500 dioda
Svaka dioda odgovara odredjenoj talasnoj duini i
deo je strujnog kola
Ciklus merenja <1 ms
U prvom pristupu - vie LOD zbog kratkog vremena
uzorkovanja signala

Primena DAD
Utvrdjivanje istoe pika
Odredjivanje povrine nedovoljno razdvojenih pikova
(deconvolution)
Identifikacija pikova biblioteke spektra pomau
u identifikaciji
Identifikacija pikova pri promeni redosleda elucije

Fluorescencija:
Omoguava jedan od najselektivnijih naina

detekcije posto je redak fenomen

Molekuli nakon ekscitacije UV zracima emituju
fotone
U ekscitovanom stanju : 1-100 ns
Emitovan spektar dosta sloen
Emitovano zraenje je uvek vee talasne duine

kf
k f ki

I det q I 0 (l 10bc )

f efikasnost fluorescencije
kf konstanta brzine fluorescentnog
procese
ki konstanta brzine alternativnih procesa
Idet intenzitet emitovanog zraenja
f q efikasnost instrumenta u prikupljanju
fluorescentnog zraenja

Fluorescentni
Fluorescentni signal je priblizno linearan pri malim koncentracijama
Nelinearnost moe biti uzrokovana i apsorpcijom emitovanog zraenja
prisutnim molekulima
Izvor ivina ili pulsna ksenonova lampa; laser u minijaturizovanim HPLC
Overtoni se izbegavaju filtriranjem zraenja
Pozadinski signal potie od rasipanja zraenja na zidovima, fluorescentnih neistoa,
Rejlijevog i Ramanovog rasejanja

Predkolonska derivatizacija:
Pre hromatografskog razdvajanja
Uvodi se kovalentnim vezivanjem grupa koja
fluorescira
Visok prinos fluorescencije
Derivatizacija treba da se odvija selektivno, sa

jednim tipom funkcionalnih grupa

Reakcija derivatizacije treba da proizvodi jedan,
stabilan produkt
Viak reagensa ne sme fluorescirati i treba da se
jednostavno uklanja od analita

Postkolonska derivatizacija:
Ako jedan analit proizvodi vie proizvoda
dobija se jedan pik
Visoka reproduktivnost ak i za nestabilne

proizvode i za nepotpuno iskorienje reakcije

usled reproduktivnog reakcionog vremena
Reagens ne sme biti fluorescentan
Reakcioni uslovi moraju biti kompatibilni sa
uslovima razdvajanja

Refraktometrijski:
Univerzalni, jedinjenja koja ne poseduju

hromofore, u gel hromatografiji

Jedan od prvih razvijenih detektora
Meri se razlika indeksa refrakcije mobilne faze i
eluirane supstance
Temperature moraju biti iste!!
Zavisnost je nelinearna
Pri niim koncentracijama se moe aproksimirati
linearnom
Izvor zraenja emituje vidljivu svetlost

Refraktometrijski

n n0 k (ni n0 ) Ci
Za nie koncentracije analita
-n0 index refrakcije mobilne faze
- ni - index refrakcije analita

Elektrohemijski detektor
Potenciometrijski relativno neosetljiv
Amperometrijski signal pogodan za merenje,
mobilna faza mora biti elektroprovodna (obrnute faze)

Ox + ne

Red

Elektrohemijski
Transport molekula analita konvekcijom do

povrine elektrode
Transfer elektrona izmedju elektrode i analita
Transfer produkata reakcije od elektrode
Faze transfera mase (prvi i trei korak)
ograniavajue, odredjeni geometrijom elije
Brzina transfera elektrona odredjena primenjenim
potencijalom
Selektivnost odredjena potencijalom
Opseg potenijala odredjen raspadom rastvaraa

Elektrohemijski
Elektrode najee od staklastog ugljenika
Redukciona tehnika tankoslojna ivina elektroda
2 tipa elija tankoslojne i sa poroznom

elektrodom

D 2 / 3 Ael2 / 3 q1/ 3
C0
i 1,47nF
2/3
b

C0 koncentracija u celiji
Ael povrsina elektrode
b debljina kanala
q - protok
D koeficijent difuzije

Elektrohemijski
Na poroznim elektrodama potpuna konverzija
Kalibracija bespotrebna - Faradejev zakon
Poveanja osetljivosti dve elektrode
Druga elektroda slui da redukuje oksidovane produkte ili

obrnuto
Drugi pristup: Prva elektroda je na niem potencijalu i
sluzi da oksiduje neistoe, hromatogram je preien
Trei pristup: Primena elektroda od specijalnih materijala,
hemijski-modifikovanih

Amperometrijski

PAD pulsni amperometrijski

eeri se teko oksiduju
Na platinskim i zlatnim elektrodama i visokim pH

vrednostima je mogua njihova oksidacija

Da ne bi doslo do deaktivacije elektroda primenjuju
se pulsevi potencijala:
1. Adsorpcija eera

2. Oksidacija na umerenom potencijalu

3. Primena jo pozitivnijeg potencijakla radi

ienja elektroda

Konduktometrijski detektor
U jonskoj gromatografiji elucija jona izaziva promenu elektrine
provodljivosti
Struja se prati izmedju radne platinske i referentne elektrode od

nerdjajueg elika
Primenjuje se promenljivi potencijal sa amplitudom od nekoliko volti
Sinusni, pravougaoni impulsi potencijala

Za minimiziranje pozadinskog uma elektroliti niske koncentracije ili

kompenzacija elektronskim putem (dve serije para elektroda)
Hemijski nain minimiziranja uma nakon razdvajanja zamena jona
pufera neutralnim molekulima:

H+ + HCO3- CO2 + H2O

Konduktometrijski detektor

Ci
0
i

i AC

E AC

Rras (1 / fCel )

provodljivost rastvora
i provodljivost jona

Eac potencijal
Rras otpornost rastvora
Cel kapacitet kondenzatora,
tj. elektrinog dvojnog sloja na
elektrodama
f frekvencija sinusnog signala

Za jako velike frekvencije, 1kHz,

poto je otpornost obrnuto proporcionalna provodljivosti, :

iAC K
K konstanta proporcionalnosti zavisna od amplitude,
naponskog impulsa, dimenzija elektroda i geometrije elije

Evaporativni detektor na bazi praenja

rasipanja svetlosti (ELSD)
Alternativa refraktometrijskom
Pneumatsko rasprivanja eluenta
Formirane kapljice se unose strujom azota ili vazduha
i zagrevanu (100 250C) zonu
Nakon otparavanja rastvaraa vrste naisparljive estice se
prenose do optike jedinice
Prati se rasipanje svetlosti dovedene iz lasera ili polihromatske lampe

n2 1

I sc kI0 2
n 2

NV 2

I0 intenzitet upadne svetlosti

n indeks refrakcije vrstih estica
N broj cestica po jedinici zapremine
V zapremina estica
k konstanta proporcionalnosti
- talasna duina svetlosti

ELSD
Nelinearan odziv
Efikasnost transporta kapljica do komore za otparavanje zavisi od njihove veliine
Univerzalni detektor za polimere
LOD 10-100 ng
Odsustvo uma usled potpunog otparavanja rastvaraa

Viskozimetrijski detektor
Najvea primena u tehnologiji polimera
Prati se pad pritiska kroz kapilaru
Pad pritiska je proporcionalan viskozitetu

rastvora
Diferencijani nain merenja se primenjuje za
eliminisanje uticaja pulsiranja pumpe i
temperature
Druga kapilara se postavlja nakon rezervoara sa
eluatom

Ostali detektori
IR zahteva malu zapreminu elije zbog apsorpcije od strane rastvaraa
Polarimetrijski za optiki-aktivne, hiralne supstance. Prati se obrtanje

ravni polarizovane svetlosti

Merenje radioaktivnosti visokoselektivan; teko se povezuje sa HPLC

posto merenje zahteva vreme

Najznaajniji radioizotopi - 3H, 14C, 35S i 32P
Radioaktivno zraenje se apsorbuje tenim ili vrstim scintilatorima
Energija se prevodi u fotone (350 600 nm)
Teni scintilatori organski rastvara, fluorofor i PAM
vrsti scintilatori granularni antracen, staklo i plastika dopirana
fluroforom
Povezivanje HPLC i GC detektora pod ispitivanjem

UHPLC
1,7 um estice

Veci rizik od zapuenja, neophodni finiji filteri

3-5- puta vei protok
P = 600-1200 bar
Skraivanje vremena analize
Manji utroak rastvaraa
Redizajniranje ostalih delova (pumpe, injektori,

spojevi)!!!

Relativne metode kvantifikacije

Metoda normalizacije metoda 100%
Metoda kalibracione krive
Metoda standarda
Metoda untranjeg standarda

Metoda standardnog dodatka

Metoda normalizacije

Ai Ki wi
Ai
Ki
Ci
wi (%)

Ai
n

A
i 1

100%

Modifikovana metoda normalizacije

Ai Cs
fi f s
As Ci

wi (%)

fi odziv detektora za supstancu i

fs odziv detektora za standardnu supstancu
Ai povrina pika komponente i
As povrina pika standardne komponente
Ci koncentracija analita i
Cs koncentracija standardne komponente

Ai f i

100%

A f
i 1

Metoda kalibracione krive

Povrina pika

Koncentracija

Metoda standarda

Ai
Ki
Ci

Ai
Ci
Ki

Metoda unutranjeg standarda

K i Ai Cs
fi

K s As Ci

As
Ks
Cs

fi odziv prema analitu i

Ai povrina pika komponente i
As povrina pika unutranjeg standarda
Ci koncentracija analita i u standardnoj smei
Cs koncentracija unutranjeg standarda

Ki f i K s

Ai
Ci
Ki

Metoda dodatka standarda

Ai K i Ci
Ai s K i Ci s
Ai
Ci

Ai s Ci s
Poto je: Ci+s = Ci + Cs:

Ai
Ci

Ai s Ci Cs

Cs Ai
Ci
Ais Ai

Metoda visetrukog dodatka

standarda

EI

source: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Schematic_diagram_of_an_EI_ion_source.jpg

FAB

MALDI

Source:http://www.magnet.fsu.edu/education/tutorials/tools/ionization_maldi.html

Maseni analizator
Razdvajanje jona razliitog m/z

Rezolucija (R):

Analizatori male rezolucije R < 1000

Sa duplim fokusiranjem

Kvadrupolni

source: http://murr.missouri.edu/ps_analytical_ICP_quadrupole.php

Ion trap

TOF
Linearni

Sa reflektronom

source: http://www.fi.tartu.ee/labs/ltl/tof-ms.html

MS MS
Primenjuje se kod svih tipova jonizacije

Praenje produkt jona - Product ion scan

Praenje prekursor jona - Precursor ion scan
Praenje neutralnog gubitka - Neutral loss

monitoring
SDM (Selected Decomposition Monitoring)

QQQ

QTOF

Spektrometrija
Emisija ili apsorpcija elektromagnetnog zraenja

od strane molekula, atoma ili jona

Omoguava kvalitativnu i kvantitativnu analizu
Kvantitativne karakteristike intenzitet
apsorbovanog ili emitovanog elektromagnetnog
zraenja
Kvalitativne karakteristike talasna duina
apsorbovanog ili emitovanog zraenja

Spektrofotometrija

A=lC

Greke
Hemijske prirode:
Solvatacija
Disocijacija
Stvaranje kompleksa
Fizike prirode:
Temperatura
Elektrolit
Greka talasne duine, nekalibrisanog

spektrofotometra

Jednozrani spektrofotometar

I0 =Ia + It + Ir + IR

Dvozrani spektrofotometar

Plamena fotometrija
Emisiona spektralna metoda
Kvantitativno odredjivanje alkalnih i

zemnoalkalnih metala (3-5 eV)

Cu, Ni, Pb, Fe, In, Mn, Cr, Co, Tl, B, Al
plamena spektrometrija

Plamena fotometrija
Uvodjenje uzorka:
Posredno rassprivanje
Neposredno rasprivanje

Atomska apsorpciona
spektrofotometrija

M
-h

Jonizacija
M

M
-h

Atomizcija

MX
Isparavanje
Desolvtacija

+*

uplja katodna lampa

AAS sa kontinualnim izvorom

Monohromatori visoke rezolucije predmonohromator i

monohromatori dobijeni fotolitografskim tehnologijama

Intenzitet zraenja za red veliine vei nego kod klasine
AAS
Visokonaponska ksenonova lampa elektrinog luka
CCD (Charge Coupled Device) detektor (200 pixel-a)

Smetnje
Spektralne

Hemijske
Fizike
Jonizacione
Usled apsorpcije pozadine

Plazma
Oblik materije sa znaajnim udelom elektrona
(>1%), pozitivnih jona, radikala, neutralnih

atoma i molekula
Elektrino provodna
Podlona dejstvu magnetnog polja

ICP-OES
Multielementarna analiza
irok dinamiki linearni opseg

Smanjen uticaj interferencija matriksa

Poboljana granica detekcije za elemente sa

visokom temperaturom isparavanja

ICP MS
Visoka osetljivost (ppt)
Jednostavni maseni spektri

Brza kvalitativna analiza

Interferencije od strane molekulskih jona