See

discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/287640601

Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk

Fermentasi

Article December 2015

CITATIONS READS

0 473

1 author:

Riky Lim
Bandung Institute of Technology
1 PUBLICATION 0 CITATIONS

SEE PROFILE

All content following this page was uploaded by Riky Lim on 21 December 2015.

The user has requested enhancement of the downloaded file. All in-text references underlined in blue are added to the original document
and are linked to publications on ResearchGate, letting you access and read them immediately.
 Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi
Riky*

Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Institut Teknologi Bandung

Jalan Ganesa No. 10, Bandung, Indonesia
*Corresponding Author: rikylim@students.itb.ac.id

Abstrak
Streptomyces griceus merupakan salah satu bakteri penghasil antibiotik jenis streptomisin.
Streptomisin merupakan antibiotik yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram
positif maupun bakteri Gram negatif. Streptomisin memiliki peranan yang penting dalam
dunia medis. Oleh karena itu, upaya untuk memperoleh streptomisin menjadi hal yang vital
untuk dipelajari. Namun hasil fermentasi bakteri Streptomyces griceus tidak hanya
mengandung streptomisin, dapat juga mengandung beragam enzim ekstraseluler dan
inhibitor. Untuk mendapatkan streptomisin dari larutan hasil fermentasi perlu dilakukan
berbagai upaya pemurnian. Beberapa cara yang dapat dilakukan adalah memanfaatkan
karbon aktif sebagai adsorben, resin penukar ion, kolom kromatografi, dan ekstraksi
pelarut.. Penggunaan karbon aktif pada suasana asam ataupun basa dapat meningkatkan
perolehan streptomisin sebesar 50 60% dibandingkan penggunaan adsorben pada kondisi
netral. Resin penukar ion dapat digunakan untuk memurnikan streptomisin dalam bentuk
menara yang berisi resin penukar kation. Keunggulan dari penggunaan resin penukar ion
adalah dapat digunakan pada proses berulang kali. Kolom kromatografi juga dapat
digunakan untuk memurnikan streptomisin, namun terdapat kesulitan untuk memprediksi
kapan eluat yang diinginkan keluar dari kolom kromatografi. Pemurnian streptomisin
secara kontinu dapat dilakukan dengan ekstraksi pelarut.
Kata kunci : streptomisin, pemurnian, karbon aktif, resin penukar ion, kromatografi,

ekstraksi

1. Pendahuluan griceus maupun bakteri Streptomyces

bikiniensis yang tergolong dalam
Antibiotik merupakan produk metabolit
kelompok Actinomycetes [3]. Bakteri ini
sekunder yang dihasilkan pada fasa
memiliki bentuk seperti filamen, bersifat
pertumbuhan stasioner oleh beberapa
aerobik, gram positif, dan banyak
kelompok mikroorganisme [1]. Antibiotik
ditemukan dalam tanah. Streptomisin
tidak diperlukan untuk pertumbuhan
dapat dihasilkan melalui proses
mikroba, tetapi memiliki peranan penting
fermentasi dengan menggunakan beragam
di alam, terutama di bidang kesehatan.
substrat seperti tebu, bagas, kulit jeruk
Streptomisin merupakan salah satu contoh dan kulit nenas.
antibiotik yang dikelompokkan ke dalam
[1] Streptomisin merupakan antibiotik yang
golongan aminoglycosides .
menghambat pertumbuhan bakteri gram
Streptomisin dapat diperoleh dengan
positif dan bakteri gram negatif.
menginokulasi mikroorganisme pada
Streptomisin terbagi atas dua jenis, yaitu
medium yang steril dan membiarkan
Streptomisin A dan Streptomisin B [4].
proses fermentasi terjadi secara aerobik
Streptomisin yang digunakan untuk
selama 48 96 jam[2]. Streptomisin dapat
pengobatan adalah Streptomisin A.
dihasilkan oleh bakteri Streptomyces
Pengunaan antibiotik ini dilakukan
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
melalui sistem injeksi. Streptomisin
memiliki tingkat toksisitas yang rendah
dan dapat digunakan untuk mengatasi
infeksi yang resisten terhadap penisilin [5]
[6]
. Akumulasi streptomisin dalam tubuh
manusia dapat menyebabkan serangkaian
reaksi alergi seperti bercak-bercak merah
pada kulit [7].
Hasil fermentasi bakteri Streptomyces
griceus tidak hanya menghasilkan
streptomisin, tetapi juga mnghasilkan zat
lain seperti mannosidostreptomisin
(Streptomisin B), serta beberapa enzim
ekstraseluler dan inhibitor. Oleh karena
itu, untuk memperoleh streptomisin dari
kaldu hasil fermentsai diperlukan beragam
proses pemisahan dan pemurnian.
Gambar 1. Poros karbon aktif [8]
Proses pemurnian streptomisin banyak
menggunakan bantuan karbon aktif
sebagai adsorben. Karbon aktif
merupakan suatu material dengan
porositas yang tinggi. Karena memiliki
jumlah pori yang sangat besar, karbon
aktif sering digunakan sebagai adsorben
untuk menghilangkan pengotor.
Penggunan karbon aktif akan diikuti
dengan proses elusi dan presipitasi untuk
mendapatkan endapan streptomisin. Zat
yang biasa digunakan untuk
mengendapkan streptomisin adalah aseton
ataupun eter. Selain kedua zat tersebut, zat
pewarna Naphthol Blue-Black juga
diketahui dapat menghasilkan garam
streptomisin yang sukar larut [9].
2
Selain menggunakan karbon aktif,
pemurnian streptomisin dapat juga
dilakukan dengan menggunakan bantuan
resin penukar ion. Resin penukar ion
terdiri dari sebuah matriks tak mudah
larut yang terbuat dari polimer organik.
Umumnya resin penukar ion memiliki
bentuk bulat dan memiliki poros yang
banyak. Resin penukar ion memiliki sisi
aktif pada permukaannya yang dapat
membentuk kesetimbangan dengan ion
yang ada dalam larutan [10]. Sisi aktif ini
memiliki ion yang dapat ditukar seperti
H+, OH-, Na+, atau Cl-. Ketika
ditempatkan dalam larutan yang memiliki
ion dengan afinitas yang tinggi terhadap
sisi aktif dari resin, terjadi pertukaran ion
pada sisi aktif dari resin. Sama seperti
karbon aktif, resin penukar ion dapat
digunakan untuk menghilangkan pengotor
yang tidak diinginkan.
Gambar 2. Resin penukar ion [11]
Cara lain yang dapat digunakan untuk
memurnikan streptomisin adalah
menggunakan proses ekstraksi pelarut.
Selain itu, pemurnian streptomisin dapat
juga dilakukan dengan prinsip
kromatografi [12].
2. Pemurnian dengan Karbon Aktif
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
Streptomisin dapat diperoleh dari kaldu
hasil fermentasi setelah melalui berbagai
tahap pemisahan dan pemurnian. Salah
satu cara yang dapat digunakan untuk
mendapatkan streptomisin dari kaldu hasil
fermentasi adalah dengan menggunakan
bantuan karbon aktif. Proses pemurnian
yang digunakan adalah sebagi berikut [13] :
1. Adsorpsi dengan karbon aktif
dilakukan pada pH 6 8 dengan
penambahan 1 2 % (v/v) asam
fosfat
2. Readsorpsi eluat dari karbon aktif
pada pH 7
3. Elusi dengan acidified methanol
4. Evaporasi pada tekanan rendah
5. Presipitasi streptomisin dengan
penambahan aseton pada eluat
Tabel 1. Efek pH Terhadap Efisiensi
Adsorpsi Streptomisin [13]
Streptomisin
Efisiensi
pH dalam kultur
adsorpsi
adsorpsi filtrat setelah
(%)
adsoprsi (g/ml)
4 67 53
5 30 80
6 < 11 > 93
7 < 11 > 93
8 < 11 > 93
Jenis karbon aktif yang paling cocok
digunakan untuk adsorpsi streptomisin
dari filtrat kultur adalah Farnell 14 [13].
Perbandingan jumlah arang dan filtrat
kultur yang digunakan adalah 1 % (w/v) .
Filtrat kultur yang digunakan adalah 148
g/ml. Pada pH kurang dari 6, pigmen
adsorpsi meningkat sementara total
padatan dan streptomisin yang teradsorpsi
berkurang. Pada pH 2, diperoleh filtrat
bebas pigmen tanpa adanya adsorpsi
streptomisin yang signifikan. Efek dari
pH kultur filtrat terhadap efisiensi
3
adsorpsi streptomisin dapat dilihat pada
Tabel 1.
Adsorpsi streptomisin dapat dilakukan
dengan mengalirkan kaldu hasil
fermentasi ke dalam static charcoal beds
maupun dengan charcoal suspensions.
Efisiensi adsoprsi melalui kedua metode
tersebut tidak jauh berbeda. Static
charcoal beds dapat digunakan untuk
proses adsorpsi yang berulang tanpa
adanya akumulasi padatan yang berarti.
Satu bed dapat digunakan untuk tujuh kali
proses adsorpsi.
Setelah tersuspensi selama 30 menit,
dilakukan filtrasi dengan membilas bed
dengan air yang dilanjutkan dengan
pembilasan dengan metanol netral. Tujuan
pembilasan dengan metanol netral adalah
untuk menghilangkan material tak aktif
dan menurunkan kadar air dalam charcoal
bed. Kegagalan dalam menghilangkan air
pada charcoal bed akan menghasilkan
endapan streptomisin hidroklorida yang
lengket.
Elusi dipengaruhi oleh suspensi dari
karbon aktif yang telah dibilas dalam
metanol yang mengandung 2% (v/v) HCl
(pH 1,5 2,0) dengan pengadukan selama
30 menit. pH larutan dicek setelah diaduk
selama 15 menit, usahakan agar pH
mencapai 1,5 (tambahkan asam bila
perlu). Karbon aktif yang telah terpakai
kemudian dipisahkan dengan filtrasi dan
charcoal bed dibilas 3 kali dengan 5
volume acid-methanol. pH eluat dibuat
mencapai 6 dengan menambahkan 80%
(w/v) soda kaustik. Kalsium fosfat yang
terbentuk kemudian diendapkan.
Eluat yang telah difiltrasi dan dinetralkan
kemudian dipekatkan hingga mencapai
1/8 volume awal melalui proses evaporasi
tekanan rendah pada 30 - 40 oC yang
dilanjutkan dengan proses filtrasi.
Material tak aktif seperti natrium klorida
dibuang pada saar pemekatan.
Penambahan aseton sebanyak 5 kali
volume konsentrat akan menghasilkan
endapan putih berupa streptomisin
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
hidroklorida. Endapan ini kemudian
disaring dan dikeringkan pada tekanan
rendah. Kehilangan streptomisin pada
proses pemurnian tidak lebih dari 1% .
Efisiensi keseluruhan proses ini dimulai
dari filtrat kultur hingga menjadi endapan
sebesar 40%.
3. Pemurnian dengan Karbon Aktif
pada Asam
Pada metode ini, larutan streptomisin
yang ingin dimurnikan diproses pada
kondisi asam (pH 1 4) dengan karbon
aktif. Dengan metode ini, pengotor seperti
pirogen akan teradsorp ke permukaan
karbon aktif sementara streptomisin tetap
tertinggal di dalam larutan [14]. Jika pH
yang digunakan lebih dari 4, akan terjadi
sedikit kehilangan streptomisin akibat
teradsorp oleh karbon aktif[15].
Pemisahan pengotor dari filtrat kultur
streptomisin dengan karbon aktif dalam
kondisi asam sebaiknya diikuti oleh
proses adsorpsi oleh karbon aktif pada
kondisi netral. Kemudian proses ini
dilanjutkan dengan elusi oleh larutan
alcoholic-acid. Asam yang digunakan
pada proses ini dapat berupa mineral
nonoksidatif atau asam karboksilat
organik.
Pada larutan yang telah diasamkan,
ditambahkan sebanyak 1 5% (% berat)
karbon aktif dan dilakukan pengadukan
selama 15 menit. Karbon aktif kemudian
difiltrasi dan dibilas dengan air (sebanyak
volume larutan awal). Cake yang
terbentuk lalu dibuang.
Filtrat yang terbentuk diatur hingga
mencapai pH 6,6 dengan menambahkan
30% natrium hidroksida. Segala endapan
yang terbentuk pada proses ini dipisahkan
dengan filtrasi. Kemudian ditambahkan
sebanyak 1 5% karbon aktif ke dalam
filtrat yang dihasilkan. Streptomisin akan
teradsorp ke dalam karbon aktif. Karbon
aktif selanjutnya dibilas dengan air atau
alkohol dan ditambahkan metanol atau
4
etanol untuk membentuk slurry dan
dilanjutkan dengan filtrasi.
Streptomisin kemudian dielusi dari
karbon aktif dengan menambahkan air
dan asam organik atau mineral
nonoksidatif yang kuat sampai pH
mencapai 1 4 ( diharapkan mencapai pH
2,2 ). Hasil elusi kemudian difiltrasi .
Filtrat yang dihasilkan dipekatkan dengan
proses pemanasan pada 50 oC.
Streptomisin kemudian diperoleh dari
konsentrat dengan presipitasi.
Melalui metode ini, produk yang
dihasilkan 50 60% lebih besar dari
produk yang dihasilkan dengan metode
pemurnian konvensional.
4. Pemurnian dengan Karbon Aktif
pada Basa
Proses ini dilaksanakan pada pH 8 -11
dengan bantuan karbon aktif [16]. Proses
selanjutnya adalah menyaring adsorbat
karbon aktif-streptomisin, membilas cake
sampai netral, lalu mengelusi streptomisin
dari karbon aktif menggunakan asam
mineral maupun asam alifatik lemah.
Kondisi basa bertujuan agar streptomisin
dapat teradsorp dengan lebih cepat
dibandingkan dengan kondisi netral.
Selain itu kondisi basa juga mengurangi
jumlah pengotor teradsorp ke dalam
karbon aktif.
Untuk hasil yang lebih baik, sebaiknya
larutan hasil fermentasi diproses dengan
kondisi pH asam agar pengotor yang
terdapat dalam larutan teradsorp ke dalam
karbon aktif dan menyisakan streptomisin
di dalam larutan. Agar larutan memiliki
pH antara 8 11, dilakukan penambahan
basa seperti KOH, NaOH, Ba(OH)2,
maupun Ca(OH)2.
Sebanyak 1- 5% (% berat) karbon aktif
ditambahkan ke dalam larutan dan
dilakukan pengadukan. Kemudian
adsorbat dibilas dengan air sampai
mencapai pH 7 -7,5. Volume air yang
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
digunakan sekitar volume filtrat.
Karbon aktif kemudian direaksikan
dengan alkohol alifatik lemah (asam
format, asam propionat), difiltrasi, dan
dielusi dengan mengatur pH mencapai 2 -
3 melalui penambahan mineral
nonoksidatif yang kuat seperti HCl.
Karbon aktif kemudian difiltrasi dan
filtrat yang dihasilkan dipekatkan dengan
pemanasan pada temperatur 50oC. Jika
pada proses elusi digunakan asam mineral
maka sebelum dipekatkan larutan harus
dinetralkan terlebih dahulu. Hal ini dapat
dilakukan dengan penambahan asam
maupun melewatkan larutan pada resin
penukar ion.
Konsentrat yang dihasilkan kemudian
dilarutkan dalam metanol dan
ditambahkan aseton untuk memebentuk
endapan streptomisin. Rasio aseton
terhadap metanol yang digunakan adalah
10 : 1 (perbandingan volume).
Streptomisin yang dihasilkan pada metode
ini 50 - 60% lebih banyak dibandingkan
dengan metode konvensional.
5. Resin Penukar Ion
Selain memanfaatkan karbon aktif,
pemurnian streptomisin dapat juga
dilakukan dengan memanfaatkan resin
penukar ion [17] [18] . Resin penukar ion
yang digunakan memiliki gugus asam
karboksilat. Resin jenis ini dapat
menghasilkan streptomisin dengan tingkat
kemurnian yang cukup tinggi. Resin ini
juga memiliki selektivitas yang tinggi
terhadap streptomisin dibandingkan
dengan zat lain yang terdapat dalam kaldu
fermentasi [19]. Adsorpsi streptomisin
pada resin penukar kation terkarboksilasi
dapat terjadi secara maksimum pada pH 7
-8. Adsorpsi maksimum dapat juga terjadi
bila pH larutan awal berkisar antara 7 8
dan resin yang digunakan telah
terkonversi sebagian dalam bentuk garam
yang mudah melepas kation seperti ion
natrium, kalium, maupun amonium.
5
Secara ringkas, proses pemurnian
streptomisin berlangsung sebagai berikut.
Streptomisin dipisahkan dari kaldu
fermentasi dengan mengalirkan kaldu
fermentasi melewati resin penukar ion.
Kemudian resin dicuci dengan asam dan
diregenerasi dengan basa untuk digunakan
kembali pada proses selanjutnya. Oleh
karena itu tidak diperlukan pelarut
organik dan resin penukar ion dapat
digunakan secara berulang.
Dalam praktek industri, pemurnian
streptomisin menggunakan resin penukar
ion dapat dilakukan dengan
memanfaatkan menara adsorpsi [20].
Jumlah menara adsorpsi yang dibutuhkan
minimal berjumlah dua untuk memastikan
proses adsorpsi berlangsung dengan lebih
baik. Sebelum diumpankan ke dalam
menara adsorpsi, pH kaldu hasil
fermentasi terlebih dahulu agar berada
pada kisaran 7 8. Menara pertama
mengandung resin penukar kation
terkarboksilasi dalam bentuk garam dan
menara kedua mengandung resin penukar
kation dalam bentuk asam bebas. Kaldu
hasil ferementasi dialirkan terus sampai
resin dalam menara pertama mengadsorp
streptomisin sebesar 50 100%. Pada
proses ini, kemungkinan terdapat 2-15%
streptomisin yang tidak terserap oleh
menara pertama. Streptomisin yang tidak
terserap ini akan diserap pada menara
kedua. Akibatnya sebagian resin pada
menara kedua akan terkonversi menjadi
resin garam.
Setelah proses adsorpsi berakhir, menara
pertama akan dilepaskan dari aliran dan
streptomisin dielusi dari resin
mengunakan asam (larutan HCl). Resin
penukar ion terkarboksilasi memiliki
afinitas yang tinggi terhadap ion H+
sehingga streptomisin dapat dipisahkan
secara langsung pada keadaan asam.
Proses elusi ini menyebabkan resin dalam
menara pertama akan terkonversi menjadi
resin asam bebas yang dapat digunakan
pada menara kedua.
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
Proses ini akan menguntungkan jika
dilaksanakan dengan tiga menara resin
penukar kation. Ketiga menara ini diisi
dengan resin penukar kation dengan
jumlah yang sama. Larutan hasil
fermentasi kemudian dialirkan ke dalam
menara. Setelah proses adsorpsi selesai,
menara pertama akan dilepas dari aliran
dan menara kedua akan berfungsi sebagai
menara pertama dan menara ketiga akan
berfungsi sebagai menara kedua.
Streptomisin kemudian dielusi dari resin
pada menara pertama dan
akanmenghasilkan resin asam bebas.
Resin asam bebas ini akan berfungsi
sebagai menara kedua yang selanjutnya
akan dipasang dengan menar ketiga.
Proses ini dapat dilakukan secara
berulang.
6. Kolom Kromatografi
Metode yang digunakan untuk pemurnian
streptomisin adalah menggunakan prinsip
kolom kromatografi [21]. Proses adsorpsi
dilakukan dalam kolom kromatografi.
Adsorben yang dapat digunakan cukup
beragam, dimulai dari karbon aktif, acid-
washed charcoal, alumina, dan acid-
washed alumina [22]. Adsorben kemudian
disusun dalam kolom kromatografi
dengan jumlah sekitar 10 30 gram
adsorben untuk setiap gram garam
antibiotik yang akan diproses. Pelarut
yang hendak digunakan untuk proses elusi
dimasukkan ke dalam kolom dan
dibiarkan sampai tersisa sekitar 1 2 mm
lapisan pelarut.
Garam antibiotik lalu dilarutkan dalam
pelarut yang cocok dan kemudian
dialirkan ke dalam kolom dari bagian atas
kolom. Ketika larutan antibiotik telah
berada dalam adsorben, ke dalam kolom
ditambahkan pelarut baru. Eluat yang
dihasilkan kemudian ditambahkan dengan
5cc aseton atau eter untuk menguji
6
keberadaan padatan. Jika telah terbentuk
padatan, maka eluat akan ditampung tiap
selang waktu tertentu.
Pengambilan eluat dapat dilakukan
dengan mudah jika terbentuk pita warna
dalam kolom kromatografi. Jika tidak
terbentuk pita warna, maka perlu
dilakukan beberapa run dengan
mengambil eluat pada selang waktu
tertentu dan menentukan jumlah produk
yang diinginkan pada tiap fraksi eluat.
Antibiotik kemudian diisolasi dari eluat
dengan menambahkan aseton atau eter
sehingga terbentuk endapan antibiotik.
Endapan yang terbentuk kemudian
dipisahkan dari pelarut dan dimurnikan
dengan prosedur konvensional
7. Ekstraksi Pelarut
Metode pemurnian menggunakan karbon
aktif memiliki beberapa kekurangan,
diantaranya adalah kesulitan dalam
mengelusi semua streptomisin yang
teradsorp oleh karbon aktif. Pada proses
presipitasi, terdapat streptomisin yang
hilang karena terlalu terlarut ataupun
mengandung terlalu banyak pengotor
untuk dimurnikan kembali.
Streptomisin dapat dipisahkan dari
komponen lain dalam hasil fermentasi
dengan mengubah bentuknya menjadi
garam karboksilat [23]. Hal ini dilakukan
dengan menambahkan natrium, kalium,
maupun amonium ke dalam kaldu hasil
fermentasi. Larutan yang dihasilkan
kemudian diekstraksi dengan pelarut
organik seperti alkohol beratom karbon 4
6.
Ekstrak alkohol kemudian dibilas dengan
air atau larutan logam alkali halida untuk
menghasilkan garam streptomisin yang
terlarut dalam alkohol. Garam
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10 7

streptomisin dapat dipisahkan dari larutan
dengan menambahkan asam sulfat atau
asam klorida.
dengan tingkat kemurnian yang lebih
tinggi dalam bentuk streptomisin benzoat.
Proses pemurnian streptomisin dengan
ekstraksi pelarut dapat juga dilakukan
sesuai dengan mengikuti skema pada
Gambar 6. Larutan hasil fermentasi
Streptomyces griceus dimasukkan ke
dalam kolom A bersamaan dengan larutan
natrium stearat pada aliran 2 yang
berpapasan secara counter current. Sisa
feed dibuang melalui aliran 14 dan
menghasilkan larutan yang mengandung

Gambar 5. Solvent Extraction of

Streptomycin [23]

Proses ekstraksi pelarut dari streptomisin

dapat dilihat pada Gambar 5. Aliran 1
menyatakan aliran hasil fermentasi beserta
natrium benzoat yang mengalir ke bagian
bawah kolom A. n-butanol (aliran 7)
dialirkan secara counter current terhadap
aliran 1. Sebagian besar streptomisin akan
terekstraksi ke dalam pelarut beserta
sebagian kecil pengotor. Larutan pelarut
akan keluar dari kolom A pada bagian
atas (aliran 2) dan masuk ke kolom B Gambar 6. Solvent Extraction of
melalui bagian bawah. Streptomycin [23]
Aliran 2 akan mengalami kontak dengan
aliran 4 (berupa air maupun larutan
ekstrak streptomisin dan pengotor organik
garam) yang akan mengekstraksi pengotor
pada aliran 3. Pada aliran 3 jga terdapat
(termasuk natrium benzoat) yang masih
kelebihan natrium stearat . Aliran 3
terkandung dalam aliran 2. Hasil ekstraksi
kemudian diumpankan ke dalam kolom B
keluar dari kolom B melalui aliran 5 dan
pada bagian bawah dan mengalir ke atas
dialirkan kembali ke kolom A dari bagian
secara counter current terhadap aliran 4
atas.
yang mengandung natrium klorida. Aliran
Dengan mengatur jumlah natrium 5 mengandung banyak pengotor seperti
benzoat, laju alir butanol, aliran 1 dan streptomisin B serta sebagain kecil
aliran 4, sebagian besar pengotor dapat streptomisin dan streptidin memasuki
dipisahkan dan dikeluarkan melalui aliran kolom C pada bagian atas. Aliran 5 ini
3. Aliran 6 akan mengandung ekstrak bersifat counter current terhadap larutan 6
pelarut yang mengandung streptomisin yang mengandung natrium stearat dalam
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
pelarut. Aliran 7 yang mengandung
streptomisin dalam jumlah yang besar
diumpankan kembali ke dalam kolom B.
Aliran 8 yang keluar dari kolom C
mengandung banyak pengotor dan
sebagian kecil streptomisin.
Aliran 9 yang meninggalkan kolom B
mengandung streptomisin dalam bentuk
streptomisin stearat dan sedikit natrium
stearat serta streptidin. Pada kolom D dan
E, sebagian besar dari natrium stearat
dihilangkan dengan meminimalkan
kehilangan streptomisin. Air digunakan
sebagai larutan pengekstrak pada kolom
D. Pada kolom E digunakan pelarut
berupa alkohol alifatik.
Pada kolom D, sebagian besar natrium
stearat terkestraksi ke dalam air. Aliran 10
kemudian diumpakan ke dalam kolom E
untuk mengekstrak streptomisin ke dalam
pelarut menghasilkan aliran 11 yang
diumpankan kembali ke dalam kolom D.
Aliran 13 membawa natrium stearat yang
terekstraksi pada kolom D dan kolom E.
Aliran 12 yang keluar dari kolom D akan
terbebas dari natrium stearat serta
pengotor organik seperti streptomisin B
dan mengandung streptomisin stearat
yang memiliki tingkat kemurnian tinggi.
Penambahan 1/10 volume air dan asam
sulfida yang cukup akan menghasilkan pH
sekitar 3 6. Hal ini menyebabkan
streptomisin dan streptidin terekstraksi ke
dalam larutan. Streptidin dapat dipisahkan
sebagai garam sulfat yang tak larut dalam
air. Streptomisin sulfat dapat diisolasi.
Untuk produksi eluat streptomisin pada
konsentrasi konstan secara kontinu, dapat
digunakan tujuh kolom adsorpsi yang
melibatkan kontak langsung antara dua
aliran serta resirkulasi penukar ion dalam
setiap kolom [24].
8
8. Kesimpulan
Metode yang paling umum digunakan
dalam permurnian streptomisin adalah
pemanfaatan karbon aktif sebagai
adsorben. Untuk meningkatkan perolehan
streptomisin, maka penggunaan karbon
aktif dapat dilakukan pada suasana asam
maupun basa sehingga diperoleh
pengingkatan perolehan streptomisin
sebesar 50 60% dari metode
konvensional. Namun penggunaan karbon
aktif sebagai adsorben memiliki
kekurangan diantaranya harga yang relatif
mahal. Setelah digunakan, karbon aktif
sulit untuk digunakan kembali sebagai
adsorben pada operasi selanjutnya karena
proses regenerasi yang lumayan
kompleks. Selain itu proses ini juga
cenderung mahal karena kapasitas
adsorpsi karbon aktif yang rendah.
Untuk mengatasi kekurangan dari proses
pemurnian menggunakan karbon aktif,
digunakan resin penukar ion
terkarboksilasi sebagai adsorben.
Penggunan resin penukar ion dapat
diaplikasikan ke dalam dua sampai 3
kolom menara yang berisi resin penukar
ion.. Resin penukar ion dapat dielusi
dengan asam dan dibersihkan dengan basa
sehingga dapat digunakan untuk proses
selanjutnya. Metode ini memiliki
keunggulan karena dapat digunakan untuk
proses adsorpsi secara terus-menerus.
Selain itu, resin penukar ion
terkarboksilasi juga memiliki selektivitas
yang tinggi terhadap streptomisin
sehingga tingkat perolehan streptomisin
dari kaldu fermentasi akan lebih besar jika
dibandingkan dengan penggunaan karbon
aktif sebagai adsorben.
Pemurnian streptomisin dapat juga
dilakukan dengan prinsip kromatografi.
Adsorben yang digunakan dapat berupa
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10
karbon aktif maupun alumina. Namun
metode ini memiliki kelamahan.
Kelemahan dari metode ini adalah
kesulitan dalam menentukan kapan eluat
yang diinginkan keluar dari kolom
kromatografi (jika tidak ada perubahan
yang dapat diamati).
Ekstraksi pelarut dapat digunakan untuk
memisahkan streptomisin dari pengotor
yang ada pada larutan. Keunggulan dari
proses ekstraksi streptomisin dari pelarut
adalah dapat dilaksanakan secara kontinu.
Oleh karena itu, jika proses pemurnian
streptomisin dilakukan secara batch, maka
proses pemurnian yang paling
menguntungkan adalah pemanfaatan resin
penukar ion terkarboksilasi sebagai
adsorben. Jika ingin dilakukan proses
pemurnian secara kontinu, maka metode
pemurnian yang paling tepat adalah
dengan ekstraksi pelarut.
Daftar Pustaka
[1] J. Mamatha, B. Sudipa, M. Mahesh,
Production of Streptomycin From
Streptomyces Griceus Under Solid
State Fermentation, & Its Production
Enhancement by Mutation and
Analysis by HPLC, World Journal of
Pharmacy and Pharmaceutical
Sciences. (2014) 907-922.
[2] R.C. Daniel, M. Kalamsoo. Process
for Production of Streptomycin
Using Fermentation Solubles. U.S.
Patent (1946) 2,504,067.
[3] R.G. Benedict, L.A. Lindenfelser,
F.H. Stodola, and D.H. Traufler.
Studies on Streptomyces
Griseocarneus and the Production of
Hydroxystreptomycin. Northern
Regional Research Laboratory,
Illinois. 1951
9
[4] H. Val and R. Jeff. Determination of
Streptomycin and Impurities Using
HPAE-PAD
[5] E.C. Charter, R.K. Clark Jr., S.R.
Dickman, Y.H. Loo, P.S. Skell, W.A.
Strong, Isolation and Purification of
Streptomycin. University of Illinois
(1945)
[6] Jr.H.W. Rhodehamel, W.B. Fortune
and Jr.S.L. McCormick. A Solvent
Extraction for Purifying
Streptomycin. 1951
[7] J.J. Li, M. Yang, D.Q. Huo, C.J.
Hou, X.L. Li, G.M. Wang and D.
Feng. Molecularly Imprinted
Polymers on the Surface of Silic
Microspheres via Sol-Gel Method for
the Selective Extraction of
Streptomycin in Aqueous Samples.
College of Bioengineering,
Chongqing University. Chongqing.
2012
[8] Planet Power. Biochar from Biomass
Gasification (Pyrolysis) Available :
http://www.treepower.org/biochar/m
ain.html , diakses pada & November
2015 pukul 21.09 WIB
[9] P.R. Peter, A.S. Isaiah, and H.
Jackson. Recovery of Streptomycin
from Fermentation Broths. U.S.
Patent (1951) 2,538,847
[10] C. Zaharia, D. Suteu, D.Bilba. The
Recovery of Streptomycin From
Industrial Effluents. Transilvania
University of Brasov. 2009.
[11] Aquamart. Cat Ion Exchanged Resin
Available :
http://www.aquamart.com.pk/product
/cat-ion-exchanged-resin/ , diakses
pada 7 November 2015 pukul 21.23
WIB
[12] J.V.B. Milton, N.W. Arne, H.D.
William, H. Roberta and F.C.
George. Extraction and Purification
 Riky, Proses Pemurnian Streptomisin Dari Produk Fermentasi, 2015, 1-10 10

of Streptomycin With a Note on [22] P.M. George. Purification of

Streptothricin. The Upjohn Company Streptomycin Salts by Means of
Research Laboratories. Kalamazoo. Alumina. Wellcomb Research
1946 Laboratories. 1946
[13] T.J. Woodthorpe and D.M. Ireland, A [23] E.J. Goet, Bronx, and J.T. Roy.
Method for Extracting and Purifying Solvent Extraction of Streptomycin
Streptomycin Suitable for Large- (1954) U.S. Patent 2,676,960
Scale Production. The Wellcome [24] N.I. Gelperin, L.M. Klyueva, and
Physiological Research Laboratories, L.L Stremovskii. Investigation of the
Beckenham, Kent (1947) Continuous Extraction of
[14] E.H. Eugene, Linden, and T. Max. Streptomycin in a Multisection
Pyrogen Removal from Streptomycin Column with a Semiliquid Layer of
Salts. U.S. Patent (1950) 2,532,403 Ion Exchanger.
[15] D.B. Robert and T. Max. Selective
Carbon Adsoprtion of Impurities
from Acidic Streptomycin Solutions.
U.S. Patent (1946) 2,521,770
[16] A.B. William, Plainfield and D.B.
Robert. Purification and Recovery of
Streptomycin. U.S. Patent (1951)
2,540,238
[17] B.F. Oliver, Liverpool and A.K.
Murray. Purification of
Streptomycin. U.S. Patent (1956)
2,754,295
[18] R.B. Charles, B. Bernard, Westfield,
L.B Wilbur, and B. New. Process for
the Purification of Streptomycin.
U.S. Patent (1956) 2,765,302
[19] E.H. Eugene, B.N.J. Brook, P. Irvin.
Purification of Streptomycin by
Carboxylic Acid Type Ion Exchange
Resins. U.S. Patent (1951) 2,541,420
[20] J.T. Roy, G.H. Key. Two Tower
Process for Recovery of
Streptomycin Employing Cation-
Exchange Resins. U.S. Patent (1950)
2,528,188
[21] L.P. Robert, N.J. Plainfield.
Chromatographic Purification of
Streptomycin and Streptothricin
Hydrochloride. U.S.Patent (1951)
2,540,284

View publication stats