4. PROCESAMIENTO POSTRANSCRIPCIONAL Los productos inmediatos de la trancripcién, los transcritos primarios, no son necesariamente funcio- nales. Para adquirir su actividad biolégica, muchos de ellos deben ser modificados especificamente de varias maneras: (1) a través de la eliminacion exo y endonu- cleolitica de segmentos de polinucledtidos; (2) por la adicion de secuencias de nuclestidos en sus extremos 3° y 5’; y (3) por la modificacion de nucledsidos especificos. Las tres clases principales de RNA, mRNA, rRNA y tRNA, son modificadas de diversas maneras en los procariotas y en los eucariotas. En esta seccion haremos un breve repaso de estos procesos de modificaci6n postranscripcional. A. Procesamiento del RNA mensajero En los procariotas, la mayoria de los transcritos primarios de mRNA pueden ser traducidos sin mayo- ALos mRNAs eucariéticos poseen una capucha Los mRNAs eucariéticos poseen una peculiar estructu- ra de capucha 0 caperuza (“cap”) enzimaticamente ana- dida, que consiste en un residuo 7-metilguanosina unido al nucledsido inicial del transcrito (5’) a través de un puente 5’-5' trifosfato (Fig. 29-31). La caperuza, que es afiadida por una guanililtransferasa especifica al transcrito en crecimiento antes de que su longitud supere los 20 nucleotidos, define el inicio de traduc- cién eucaridtica (Seccion 30-3C). Una caperuza puede AEl enzima poli(A) polimerasa, que sintetiza las co- las de poli(A) a partir de ATP, es activado para ello por un factor de especificidad que acta tras el reco- nocimiento por parte de esta proteina de la sefial AUUAAA, cosa que realiza sin practicamente toleran- cia por variaciones en la secuencia. Una vez que la cola de poli(A) ha crecido unos 10 restos, la se- cuencia AUUAAA deja de ser necesaria para una944 Secciin 29-4, Procesamiento postranscripeionat Figura 29-36 Microgratia elecvoniea de los espliceosomas on accion Los espiceosomas son as grandes boas stuadas cobra loa premiNhe, extendendase teria y nba|> dei CNA. que 5 Ia ines honzonial [De Stell, uA, 851 Aum 2586) £9 (1988). La mcrogratis eleetrnia es de Yvonne N. Osh.) exin de 5’, FL intrén adopta, en consecuencia, wa mucve estructura de laz0 (‘lariat’). H1 residuo de ‘adenosina de Ia ramificacion del l2z0 ha sido iden tificade como la A de Ia secuencia CURAY [donde Rrepresenta purines (A v G)e Y representa pirimi- dinas {Co Upp, que esti muy conservada en les mRNAs de los vertcbrades y que se encuentra situads tipicamente entre 20 y 50 restos hacia 5” del sitio de corte y empalme por 3° da levadura pose un2 secuenda UACUAAC similar que esta sittads ~ 50 restes hacia 5’ de todos sus sities de corte y empalme por 3). Las mutaclones que modifcan esta A del punto de ramificaciin supri- men el corey empalme en el comespondiente sitio le unin, . EL grupo ¥-OL del exdu de 5°, shor libre, forma un enlace fosfediester con el fosfato 5”-terminal del exon de 3’, con la bberacién final del producto de la renecion de corte y empalme. El intron resulta eliminado en forma de lazo e, in vivo, es rapide: mente degradado, Las mutzciones que modifiean insewo cebeer 180. itt noe al | an rr oases yy tauren Procesamiento posttanscripcional del (RNA de E. col El mapa vuncuripciona! 69 musta eproxtmagament 3 facala, Las lechas mareadas indican las posicones de fos tiferentes tortes nuctealiices y les Nuclease qu Ios 1 AG conservadio de Ta unian de corte y empalme por 3° bloquean este segundo paso de fa roaccin, fungue no interficren en la formacién dl lazo dei intron) Obsérvese que el proceso de corte y empalme tiene ugar sin aporte de energia libre; sus texcciones de transfosforilacién conservan Ia energies libse de cada tnlace fosodieter quo ge rompe gracias @ In fomne- ign conzomitante de uno nuevo, El corte y empalme esti mediado por saRNPs {Como s€ zeconacen Las uniones de corte y empal- m2 y coma se aproximan tino a atte Tos das exones que deben ser unidos entre si? Parte de la respuesta a esta pregunta fue establecida por Joan Steitz, quien partid de la base de que lo que mejor rceonoee a un Acide nuelelco as otro cide nudleleo. Dende Tos anos 60 se sabe que el micleo eucatiotico coniiene numero- sas copias de varios RNAs de 60 a 300 nucleotides de lonyitud, de secuencia muy conservada, denomina- dos RNAs pequeiios nucleares (sn NAS), los cuales forman cumplejos com proteinas, complejas denomi nados ribonucleoproteinas pequefias nucleares (nRNPs; proninciese “srurps’). Steitz descubrié que el extreme 3° de uno de estos snRNAs, et snRNA UL (denominado asi porque es un miembro de la subfa- inilia de snRINAs rica en L), es parcialmente comple- rmentario a la secuencia consenso de 5° de las uniones de core y empalme de los mRNAs. La hipbtesis conse- ccuente, jive Jn siRNP Ud reconvee fa unién de corte y empalme por 5, tue corroborada por |a observacion de gue el corte y empalme resulta inhibido teas la des- truccidn selectiva de las secuencias sa&NI U1 que son complementasias a la union de carte y empalme por &, ast camo por la presencia de anticuerpos ant) topo i producer. [De Asiron, D.. Ghors. B.K., Plant, G., Misra, TK. y Gegenheimer, P., en Sal, D. Abelson JN y Schimmel PR: (Eds), Transfer ANA: Bologica! Aspects, 2. 148, Cold Spring Harbor Lavoratory (1080)sn NP UI (cates anticuerpes son producides per pa~ enlat que pedecen lupus eritematoso sistemico, lana enfermedad atoinmume que a mondo < fatal), Tetudios similares han implicado a la snRNP U2 en el recenocimienta de la tepion del intrin que forma ol punto de ramificaién del lazo,y ala saRINP US en el Teeonoclimiento de ia unin de core yempalme por 5. Bn su conjunto, ~ 65 mucleoidae del pre-m3NA, panlcipan en este proceso de reconocimiento, cosa {que explca por qué el tamaao minima de los intrones ede 65 macleotdos, Er core y empale tlene lugar en une perticula de mire 508 y 608, denomineda esplicensoma (Fg. 23-39. El esplicoosoma rede aun pre-mRNA, alas saRNPs {que lo acompaian, ala saRNP US-U6 (en la cual los snRNA Ut y U6 se acoclan por apareamiente. de hases y que se une a [as ofas snRNPs on Ingar de hacerlo diectamnente al pre-mRNA) y a una vatiedad dle proteinas de unloa al premRNA (la anRNP U- ‘Ue ha sido impilead temabien en Ta teaceion de polia~ denilacion ya descrita. Cbstevene quo el espiceaso- ma es una particela grande; la subunidad grande del ‘bosomta de Ecol, de tamatiosimilas,contiene 2004 ‘nucleotios y 31 potipeptidos, y posee una masa par- feu de 1.6 millones de dtitones (Seecion 0-3) Ta impoctancia bioguimica del corte y empalme Seré dsc en la Seccton 33-2F Estructura cristalina de un motivo proteice de lunién 2 RNA de la soRNP UI Muchas proteinas que reconccen RNAs especiticos contienen Secuondias homblogas de 80 restos, de haminacae motives de reconocimiento del. RNA TRRMs), Foire Tas proteinas que contienen RRMs se fncuentia ta PABP {que cantiene cuetto RKMs), el factor sho (Seccios 29-26), el factor de traduccion flk-tt Que parbipa en el meconocimiento. de Ios Sitios de iniclacon de la teaducci6n de los mRNAS sucarieicos: Seed 30-3C) y los componente pro teicos de las soRNPS U1 y U2. Los analsiscistlo- frilicas de mayos-X indiean que un RRM ce ia proter- fa Adela an&P U1 consste findamentalmente de tina Lin fide coatro eadenas antiparalelas, con dos helices c empaquetadas contza una de las caras ce la lamina. Euston ace segraentos muy conservades, de 6 y de 8 residuos respectivamente, que se disponen lado a Indo sobre Ins dos casts B centrales. La proteina condene uns gran proporcion de residues de Tye y Arg, al igual qe otras protemas que s8 nen 3 Scidos nuceicus. Mas de lat ited de estos restos Ihiseos estan sitvados eos lazos de un extreme de In lamina B, y of andisis muracional indica que me- shoe de elles gon importantes para Ie union con el RIA Ul. Fstas abservactones sugicren que cl RNA se tune 4 estos lazos ya le lamin By EL mRNA esta metilado en ciertos restos adenilato ‘Durante le sintesis de os pre-mRNAs de los vere bradas,o poco tempo despues de acabada, ~ 0.1 % Cento 29 Trenseriveton 948 de sas restos A eatin metilados en la posicion NU6} Estas mids Genden a apurccer en la secuenca RRMACX, donce X zaramente es una G. A posat de que el significado funcional de estas As menladas es dexconodido, debe rsaltase que ung flaccan impor tante de ella forma party de les mRNAs maduros co respandientes. B. Procesamiento del RNA ribosomico Los siete operones de rRNA de E. coli contienes tena eopin eth Mlensica de cada ano de low tes pos Ge genes de FRNA (Section 29-38). Sus transcnios _pitiarios policstronicos, gue tienen un longitu s- petior a les 5500 nudlestdes, contienen ol RNA de 168 en sus exiremas § al que siguen les transeritos pura] 02 iRNAS, para el oRNA de 235, el de 8 y, en leunos operones de RNA, 1 0-2 {RNAS adicionales ene. extremo 3 (Pig. 29-37). Las etapas en el process Diente de estos trarscritos primarios hasta las formas ‘nluras de 2RNA (Fig, 29-37) fueron dlacidadas con Ia ayuda de mutantes defeciuosos en uno o en mas de low enzinas responsables del procesamiente, Fl procesaraiento inicial, que da productes conosi= ios como pre-rRNAs, comienza mientras el ans {a primanie esta siendo aun sintebvade. Se tara de cortes endonuclcoltcos espectficos, relizades por Tow encimas RNase MH, RNaba F, RNasa E y RNasa F cn los sites indicads nla Fig. 29.37. La socuonet Ge baves del fransento primanio supiore que enter ‘arias herquilos de bases sparcadas. Los cortee porls RNasa IT teen higar en una borquilla de secuencias complomentarie Fangueane de los extreme 5. y 3° diel segmento de 235 (Fig. 29-38), ast cory por la hotguiin contesponciente sl Segmento de 165, Pres mmiblemerte, hay cieztas caractersicas de estas hor= aguillas que constizuyen ol sitio de reconacimionto de Th Ras Ul os extremes 5° y 3° de los pro-RNAs son recorta dos en etapas de procesamiento secundsvias (Fig. 29- 37), 9 avs de fe aceiin de las RNasas M16, M23 'y M5, para producit Ios rRNAs maduros. Los cortes finales onen lugar despuaes de que los pre TRNAS se fasocian a las proteinas sbosomales [Los RNAs ribosomicos estin metilados Durante Ia constitucion del riasoma, ios #RNA® de 165 y de 238 estan metilados en un total de 24 hnclesidas especies. Las veaeciones de metilacicn, que uillzan S-adenosiimetionina (Seccion 24-28) mw denante del grupo metilo, dan lager aa apan- din de restos 8 VEdimetladenina y O©-metib boss. Se plenea que los grupos OF melo protegen a log enlaces fostoigsrr alyacences de sor degrada: ‘por KNasas ntraclulares (ol mecanismo de hidolivie xtalizado por las RNasas implica la utlizacion de les [grupos 2-OH libres de la cibosa para climinas el Ssustinayemte del gropo 3 -fosforllo, a tres de la for macion de wn intermeciario eicico 2.3'fostato; Sec- én 28-1), Sin embargo, la funcion ce la metilackin {de Tas bases ex dercomcida