Szeberenyi Molekularis Sejtbiologia PDF

Molekulris sejtbiolgia
Szebernyi Jzsef
Created by XMLmind XSL-FO Converter.

Szebernyi Jzsef
Publication date 2014

Szerzi jog 2014 Dialg Campus Kiad
Copyright 2014., Szebernyi Jzsef

Tartalom
Molekulris sejtbiolgia ................................................................................................................... xx
Elsz a harmadik kiadshoz ........................................................................................................... xxi
1. 1. A prokariota s eukariota sejt felptse ..................................................................................... 1
1. Sejtes szervezds ................................................................................................................. 1
2. Genetikai appartus ............................................................................................................... 1
3. Sejtalkotk ............................................................................................................................ 1
4. Citoszkeleton, sejtosztds ................................................................................................... 3
5. Az eukariota sejtek kialakulsa: az endoszimbizis-elmlet ................................................. 3
6. Vrusok .................................................................................................................................. 5
2. 2. Nukleinsavak .............................................................................................................................. 8
1. A nukleinsavak ltalnos jellemzi ....................................................................................... 8
2. A dezoxiribonukleinsav (DNS) ............................................................................................. 9
2.1. DNS, az rkt anyag .............................................................................................. 9
2.2. A DNS szerkezete ................................................................................................... 10
2.3. A DNS-szerkezet szintjei ........................................................................................ 12
3. A ribonukleinsav (RNS) ...................................................................................................... 13
3.1. Az RNS szerkezete ................................................................................................. 13
3.2. Az RNS szerepe. RNS-tpusok ............................................................................... 15
3.3. Kataltikus RNS-ek ................................................................................................. 15
3.4. RNS-vilg ............................................................................................................... 15
3. 3. Fehrjk .................................................................................................................................... 17
1. Aminosavak ........................................................................................................................ 17
1.1. Az aminosavak ltalnos jellemzi ......................................................................... 17
1.2. Az aminosavak osztlyozsa .................................................................................. 17
1.3. A peptidkts .......................................................................................................... 17
2. A fehrjeszerkezet szintjei .................................................................................................. 18
3. Enzimek .............................................................................................................................. 20
4. 4. Sznhidrtok s lipidek ............................................................................................................. 22
1. Sznhidrtok ........................................................................................................................ 22
1.1. A sznhidrtok ltalnos jellemzse ....................................................................... 22
1.2. A sznhidrtok osztlyozsa ................................................................................... 22
2. Lipidek ................................................................................................................................ 24
2.1. A lipidek ltalnos jellemzse ................................................................................ 24
2.2. A lipidek osztlyozsa ............................................................................................ 25
5. 5. Morfolgiai vizsgl mdszerek I.: Fnymikroszkpia ............................................................ 28
1. A kznsges fnymikroszkp ............................................................................................ 28
1.1. A mikroszkp felptse ......................................................................................... 28
1.2. A kpalkots elve .................................................................................................... 29
1.3. Nagyts s feloldkpessg ................................................................................... 30
1.4. Kontrasztfokozs .................................................................................................... 30
2. Klnleges mikroszkpok ................................................................................................... 30
2.1. Fziskontraszt- s differencilis interferencia kontraszt mikroszkp ..................... 30
2.2. Sttltter mikroszkp ........................................................................................ 31
2.3. Polarizcis mikroszkp ......................................................................................... 31
2.4. Fluoreszcencia-mikroszkp .................................................................................... 32
2.5. Konfoklis mikroszkp ........................................................................................... 33
3. Fnymikroszkpos vizsglatok l sejtekben ..................................................................... 34
6. 6. Morfolgiai vizsglmdszerek II.: Elektronmikroszkpia ..................................................... 36
1. Transzmisszis elektronmikroszkp ................................................................................... 36
1.1. Felpts, mkdsi elv .......................................................................................... 36
1.2. A minta elksztse ............................................................................................... 36
1.3. Specilis vizsglati mdszerek ............................................................................... 37
2. Psztz elektronmikroszkp .............................................................................................. 39
7. 7. molekulk nyomon kvetse a sejtben ..................................................................................... 40
1. Radioaktv izotpok alkalmazsa a sejtbiolgiban ............................................................ 40
1.1. Autoradiogrfia ....................................................................................................... 40
iii
1.2. A radioaktvan jellt makromolekulk izollsa s mennyisgi meghatrozsa .... 41

1.3. Radioaktv jells biolgiai folyamatok idbeli lefolysnak vizsglatra ............ 41
2. Nem radioaktv jells ........................................................................................................ 42
2.1. Srsgjells ......................................................................................................... 42
2.2. Immunjells .......................................................................................................... 42
8. 8. Szeparcis mdszerek ............................................................................................................. 44
1. Centrifugls ....................................................................................................................... 44
1.1. Differencil centrifugls ....................................................................................... 44
1.2. Hipopiknikus grdiens centrifugls ...................................................................... 44
1.3. Izopiknikus grdiens centrifugls ......................................................................... 45
2. Kromatogrfia ..................................................................................................................... 45
2.1. Glszrs (glkromatogrfia) ................................................................................. 46
2.2. Ioncserl kromatogrfia ........................................................................................ 46
2.3. Affinits-kromatogrfia .......................................................................................... 47
3. Elektroforzis ...................................................................................................................... 47
3.1. Agarz glelektroforzis ......................................................................................... 47
3.2. Poliakrilamid glelektroforzis ............................................................................... 48
9. 9. A gnszerkezet vizsglmdszerei I.: DNS-szakaszok in vivo s in vitro amplifikcija ....... 52
1. Restrikcis endonuklezok .................................................................................................. 52
1.1. Restrikci s modifikci ....................................................................................... 52
1.2. Restrikcis endonuklezok s modifikcis metilzok .......................................... 52
2. DNS-fragmentumok klnozsa ........................................................................................... 53
3. Genomtrak konstrukcija .................................................................................................. 54
4. Polimerz lncreakci ......................................................................................................... 54
10. 10. A gnszerkezet vizsglmdszerei II.: A DNS szekvencia-analizisnek lehetsgei .......... 57
1. Molekulris hibridizci ..................................................................................................... 57
2. Restrikcis trkpezs ......................................................................................................... 58
3. Southern blot ....................................................................................................................... 59
4. Szekvencia-meghatrozs ................................................................................................... 60
5. Szekvencia-meghatrozs hibridizcival .......................................................................... 62
6. Humn genomprogram ........................................................................................................ 64
11. 11. A gnexpresszi vizsglmdszerei I.: Idegen gnek expresszija ..................................... 66
1. A gnexpresszi vizsglatnak lehetsgei ......................................................................... 66
2. cDNS-klnozs ................................................................................................................... 66
3. Gntranszfer szvettenyszeti sejtekbe ............................................................................... 67
4. Transzgnikus llnyek ..................................................................................................... 68
12. 12. A gnexpresszi vizsglmdszerei II.: Az endogn gnmkds gtlsa .......................... 70
1. Clzott gnroncsols ........................................................................................................... 70
2. Antisense technika. Ribozimek. RNS interferencia ............................................................ 71
3. A fehrjefunkci gtlsa ..................................................................................................... 73
13. 13. A gnexpresszi vizsglmdszerei III.: Specifikus gntermkek azonostsa .................... 75
1. cDNS-tr ksztse .............................................................................................................. 75
2. Northern blot ....................................................................................................................... 75
3. Immunolgiai mdszerek .................................................................................................... 76
3.1. Immuncitokmia ..................................................................................................... 76
3.2. Immunprecipitci .................................................................................................. 76
3.3. Immunoblot (Western blot) mdszer ...................................................................... 77
4. Funkcionlis genomika ....................................................................................................... 77
4.1. A gnexpresszi vizsglata cDNS-chipekkel ......................................................... 77
4.2. Proteomika .............................................................................................................. 78
14. 14. A sejtmag felptse .............................................................................................................. 79
1. A sejtmag elektronmikroszkpos szerkezete ...................................................................... 79
2. A maghrtya ........................................................................................................................ 79
2.1. A maghrtya felptse ........................................................................................... 79
2.2. Magpruskomplexum ............................................................................................. 80
2.3. Nukleocitoplazmatikus transzport .......................................................................... 80
3. A kromatinllomny ............................................................................................................ 82
4. Magmtrix ........................................................................................................................... 82
15. 15. Az eukariota genom organizcija ........................................................................................ 84
1. A genomorganizci vizsglata DNS-renaturcis ksrletekkel ........................................ 84
iv
2. Szatellit-DNS ...................................................................................................................... 85
3. Sztszrtan ismtld szekvencik ..................................................................................... 87
4. Tandem ismtlds gnek ................................................................................................. 87
5. Gncsaldok ........................................................................................................................ 87
6. Egyedi szekvencik ............................................................................................................. 88
7. Mobilis genetikai elemek .................................................................................................... 88
7.1. Transzpozonok ........................................................................................................ 88
7.2. Retrotranszpozonok ................................................................................................ 89
16. 16. A kromatin szervezdse ...................................................................................................... 91
1. A kromatin morfolgiai szervezdse ................................................................................. 91
1.1. A szervezds szintjei ............................................................................................ 91
1.2. A kromatin specilis funkcij rgii ..................................................................... 92
2. A kromatin kmiai sszettele ............................................................................................ 93
17. 17. A sejtciklus I.: Interfzis s sejtosztds .............................................................................. 95
1. A sejtciklus fzisai .............................................................................................................. 95
2. Sejttenyszetek szinkronizlsa .......................................................................................... 96
3. A fzisok hossznak meghatrozsa ................................................................................... 97
18. 18. A sejtciklus II.: Szablyozs ................................................................................................. 99
1. Vizsglmdszerek ............................................................................................................. 99
1.1. Genetikai vizsglatok lesztsejtekben .................................................................. 99
1.2. Sejtfzi .................................................................................................................. 99
1.3. Bka oocitk mikroinjekcija ................................................................................. 99
1.4. Bka oocita extraktumok in vitro alkalmazsa ....................................................... 99
2. Klnbz fzis sejtek fzija .......................................................................................... 99
3. Ciklin/Cdk komplexek: a sejtciklus endogn regultorai .................................................. 100
3.1. A G1 [S tmenet szablyozsa .............................................................................. 100
3.2. Re-replikcis blokk ............................................................................................. 101
3.3. A G2 [M tmenet s az M-fzis szablyozsa ....................................................... 102
3.4. A Cdk-aktivits szablyozsa ............................................................................... 102
4. Ellenrzpontok a sejtciklus szablyozsban .................................................................. 104
19. 19. A sejtosztds ..................................................................................................................... 106
1. Interfzis: felkszls a sejtosztdsra .............................................................................. 106
2. A mitzis szakaszai ........................................................................................................... 106
2.1. Profzis ................................................................................................................. 106
2.2. Metafzis .............................................................................................................. 107
2.3. Anafzis ................................................................................................................ 108
2.4. Telofzis ............................................................................................................... 109
2.5. Citokinzis ............................................................................................................ 110
3. A meizis .......................................................................................................................... 110
20. 20. DNS-replikci I.: A DNS-megkettzds ltalnos jellemzi .......................................... 113
1. A replikci vizsglmdszerei ........................................................................................ 113
1.1. In vitro mdszerek ................................................................................................ 113
1.2. A DNS-szintzis in vivo vizsglata ...................................................................... 114
2. A DNS-replikci szemikonzervatv ................................................................................ 114
3. A DNS-replikci templt- s primerfgg ...................................................................... 115
4. A DNS replikcija ktirny ........................................................................................... 116
5. A DNS-replikci szemidiszkontinuus ............................................................................. 117
21. 21. DNS-replikci II.: A DNS-szintzis mechanizmusa ......................................................... 119
1. A replikci mechanizmusa E. coli sejtekben ................................................................... 119
1.1. Origo-felismer komplex ...................................................................................... 119
1.2. Topoizomerz I ..................................................................................................... 119
1.3. Replikatv DNS-helikz ........................................................................................ 119
1.4. Ssb-fehrjk .......................................................................................................... 120
1.5. Primz ................................................................................................................... 120
1.6. DNS-polimerz III ................................................................................................ 120
1.7. DNS-polimerz I ................................................................................................... 121
1.8. DNS-ligz ............................................................................................................. 121
1.9. Topoizomerz II ................................................................................................... 121
2. Az eukariota replikci specilis jellemzi ....................................................................... 122
2.1. Nagymret DNS-molekulk replikcija ............................................................ 122
v
2.2. Eukariota DNS-polimerzok ................................................................................ 122

2.3. Replikci a kromatinllomnyban ...................................................................... 123
2.4. Telomrreplikci ................................................................................................. 123
22. 22. A DNS lnchibinak kijavtsa ........................................................................................... 126
1. DNS-krosods ................................................................................................................. 126
2. DNS-krosodsok direkt kikszblse ............................................................................ 126
3. Exczis repair ................................................................................................................... 126
3.1. Bzisexczis repair .............................................................................................. 126
3.2. Nukleotid-exczis repair ...................................................................................... 127
3.3. Hibs bzisprok korrekcija (mismatch repair) .................................................. 128
4. Ketts lnc DNS-trsek kijavtsa ................................................................................. 130
23. 23. Transzkripci I.: Az RNS-szintzis s -rs ltalnos jellemzi ........................................ 132
1. A transzkripci vizsglmdszerei ................................................................................... 132
1.1. Az RNS-szintzis in vitro vizsglata .................................................................... 132
1.2. Az RNS-szintzis in vivo vizsglata ..................................................................... 132
2. Transzkripci s RNS-rs prokariotkban ....................................................................... 132
2.1. A prokariota RNS-szintzis ltalnos jellemzi ................................................... 132
2.2. A prokariota RNS-szintzis mechanizmusa .......................................................... 133
2.3. RNS-rs prokariotkban ...................................................................................... 134
3. Az eukariota transzkripci ltalnos jellemzi .................................................................. 134
24. 24. Transzkripci II.: Riboszma-biogenezis eukariotkban .................................................... 136
1. A nukleolusz ..................................................................................................................... 136
2. Riboszma-biogenezis a nukleoluszban ............................................................................ 136
2.1. Az rRNS-szintzis vizualizlsa ........................................................................... 136
2.2. A riboszomlis gnek szerkezete .......................................................................... 137
2.3. SnoRNS-ek ........................................................................................................... 137
2.4. A riboszma kpzdsnek mechanizmusa .......................................................... 138
25. 25. Transzkripci III.: Pre-mRNS-szintzis, cap-kpzds s poliadenilci .......................... 140
1. A pre-mRNS-szintzis inicicija ..................................................................................... 140
2. Elongci .......................................................................................................................... 142
3. Az 5-cap kpzdse ......................................................................................................... 142
4. Terminci s poliadenilci ............................................................................................ 144
26. 26. Transzkripci IV.: Pre-mRNS splicing eukariotkban ....................................................... 146
1. A splicing jelentsge adenovrus mRNS-ek kpzdsben ............................................. 146
2. A splicing mechanizmusa ................................................................................................. 148
3. A splicing rendellenessgei ............................................................................................... 150
4. RNS-editing ...................................................................................................................... 151
27. 27. Transzlci I.: mRNS-ek, tRNS-ek, riboszmk szerepe a fehrjeszintzisben ................. 153
1. A fehrjeszintzis templtja az mRNS .............................................................................. 153
2. A tRNS-ek adapterszerepe ................................................................................................ 153
2.1. A tRNS-ek szintzise s rse .............................................................................. 153
2.2. A tRNS szerkezete ................................................................................................ 153
2.3. Aminoacil-tRNS-ek szintzise .............................................................................. 154
3. A riboszma szerepe a transzlciban ............................................................................... 155
4. A transzlci vizsglmdszerei ....................................................................................... 156
4.1. In vitro mdszerek ................................................................................................ 156
4.2. In vivo mdszerek ................................................................................................ 156
28. 28. Transzlci II.: A genetikai kd ......................................................................................... 157
1. A kdsztr fellltsa ....................................................................................................... 157
1.1. Triplet kd ............................................................................................................ 157
1.2. Szintetikus polinukleotidok in vitro transzlcija ................................................. 158
1.3. Aminoacil-tRNS-ek ktdsnek vizsglata ........................................................ 159
2. A genetikai kd jellemzi ................................................................................................. 160
29. 29. TRANSZLCI III.: A fehrjeszintzis mechanizmusa ................................................... 163
1. Transzlci prokariotkban ............................................................................................... 163
1.1. Inicici ................................................................................................................ 163
1.2. Elongci .............................................................................................................. 164
1.3. Terminci ............................................................................................................ 166
2. Az eukariota transzlci sajtossgai ................................................................................ 167
3. A transzlci ltalnos jellemzi ....................................................................................... 167
vi
4. A fehrjeszintzis gtlszerei ............................................................................................ 168

30. 30. A gnmkds szablyozsa I.: A prokariota operon modell ............................................. 169
1. A gnregulci rsztvevi ................................................................................................. 169
1.1. DNS-szekvenciaelemek ........................................................................................ 169
1.2. Regultor-fehrjk ................................................................................................ 169
1.3. Effektor-molekulk ............................................................................................... 169
2. Lebont anyagcsereutak operonjai .................................................................................... 169
3. Bioszintetikus anyagcsereutak operonjai .......................................................................... 171
31. 31. A gnmkds szablyozsa II.: A gnregulci mechanizmusai eukariotkban .............. 173
1. A gnregulci szerepe az egyedfejldsben .................................................................... 173
1.1. A Gurdon-ksrlet ................................................................................................. 173
1.2. Magtranszplantci emlskben .......................................................................... 174
2. A gnexpresszi szablyozsnak szintjei eukariotkban ................................................. 175
2.1. A transzkripci szablyozsa ................................................................................ 176
2.2. A pre-mRNS-rs szablyozsa ........................................................................... 177
2.3. Az RNS-transzport szablyozsa .......................................................................... 177
2.4. Az mRNS-degradci szablyozsa ..................................................................... 178
2.5. A transzlci szablyozsa ................................................................................... 178
2.6. A fehrje-degradci szablyozsa ....................................................................... 178
2.7. A fehrjefunkci szablyozsa ............................................................................. 178
32. 32. A gnmkds szablyozsa III.: Transzkripcis faktorok ................................................ 180
1. Aktivtorok s represszorok .............................................................................................. 180
2. Transzkripcis faktorcsaldok ........................................................................................... 181
2.1. Hlix-turn-hlix fehrjk ...................................................................................... 182
2.2. Cinkujjfehrjk ..................................................................................................... 182
2.3. Amfipatikus hlixfehrjk .................................................................................... 183
3. A szteroid-receptor szupercsald: ligand-aktivlt transzkripcis faktorok ........................ 183
4. Transzkripcis faktor betegsgek ...................................................................................... 184
4.1. Fejldsi rendellenessgek ................................................................................... 184
4.2. Endokrin krkpek ............................................................................................... 184
4.3. Daganatos betegsgek ........................................................................................... 184
33. 33. Vezikulris transzport I.: Fehrjk s lipidek szintzise az endoplazmatikus retikulumban 186
1. Fehrjeszintzis a durva felszn endoplazmatikus retikulumon ...................................... 186
1.1. Szabad s kttt riboszmk ................................................................................ 186
1.2. Fehrjk kotranszlcis transzportja az endoplazmatikus retikulumba ................ 186
1.3. Fehrjk poszttranszlcis mdosulsa az endoplazmatikus retikulumban .......... 187
2. Membrnlipidek szintzise a sima felszn endoplazmatikus retikulumban ..................... 188
34. 34. Vezikulris transzport II.: A szekrcis t. Fehrje-glikozilci s -szortrozs ................ 190
1. A szekrcis t .................................................................................................................. 190
2. Fehrje-glikozilci ........................................................................................................... 192
2.1. N-kts glikozilci ............................................................................................ 193
2.2. O-kts glikozilci ............................................................................................ 195
2.3. A glikozilci orvosi jelentsge .......................................................................... 195
35. 35. Vezikulris transzport III.: Az endocitotikus t .................................................................. 197
1. Az endocitotikus t ........................................................................................................... 197
1.1. A felvett molekulk sorsa ..................................................................................... 197
1.2. Az endocitzis tpusai ........................................................................................... 197
1.3. Az LDL-partikulumok endocitzisa ..................................................................... 198
1.4. A sejtek koleszterin-felvtelnek veleszletett s szerzett zavarai ....................... 199
2. A vezikulris transzport mechanizmusa ............................................................................ 200
2.1. A transzportgpezet alkotrszei .......................................................................... 200
2.2. A burkolt vezikulk tpusai ................................................................................... 201
36. 36. A sejt vdekezsi mechanizmusai ....................................................................................... 203
1. Xenobiotikumok talaktsa .............................................................................................. 203
2. A lizoszmk szerepe ........................................................................................................ 204
2.1. A lizoszmk tpusai s funkcija ........................................................................ 204
2.2. A lizoszmk kpzdse ....................................................................................... 205
2.3. Lizoszomlis trolsi betegsgek .......................................................................... 205
3. Peroxiszmk .................................................................................................................... 205
4. Szabad gykk kpzdse s semlegestse ..................................................................... 206
vii
4.1. Fagocitzis ............................................................................................................ 206

4.2. A szabad gykk makromolekula-krost hatsai .............................................. 207
4.3. Az oxign szabad gykk semlegestse .............................................................. 207
37. 37. Mitokondrium I.: Felpts s mkds .............................................................................. 209
1. A mitokondriumok ltalnos jellemzi ............................................................................. 209
2. A mitokondriumok szerkezeti elemei ................................................................................ 209
2.1. Kls membrn ..................................................................................................... 210
2.2. Intermembrn tr .................................................................................................. 210
2.3. Bels membrn ..................................................................................................... 211
2.4. Mitokondrium mtrix ........................................................................................... 211
3. Energia-metabolizmus a mitokondriumban ...................................................................... 211
3.1. Citrtciklus ........................................................................................................... 211
3.2. Oxidatv foszforills: a kemiozmzis mechanizmus ........................................... 211
38. 38. Mitokondrium II.: A mitokondrilis DNS s betegsgei .................................................... 214
1. Az endoszimbizis teria .................................................................................................. 214
2. A humn mitokondrilis genetikai appartus jellemzi .................................................... 214
3. Mitokondrilis fehrjeimport ............................................................................................ 215
4. Mitokondrilis betegsgek ................................................................................................ 216
4.1. rkld mitokondrilis betegsgek .................................................................... 217
4.2. Szerzett mitokondrilis betegsgek ...................................................................... 217
4.3. A nukleris DNS mutcii ltal okozott mitokondrilis betegsgek .................... 217
39. 39. Citoszkeleton I.: Mikrofilamentumok ................................................................................. 219
1. A mikrofilamentum-rendszer ............................................................................................ 219
1.1. Az aktinfilamentumok szerkezete s polimerizcija ........................................... 219
1.2. Miozinok szerepe a mikrofilamentumok mkdsben ....................................... 220
1.3. A mikrofilamentumok szervezdse .................................................................... 223
1.4. A mikrofilamentum-rendszer s a sejtmembrn kapcsolata ................................. 223
40. 40. Citoszkeleton II.: Intermedier filamentumok s mikrotubulusok ....................................... 226
1. Intermedier filamentumok ................................................................................................. 226
1.1. Az intermedier filamentumok organizcija ........................................................ 226
1.2. Intermedier filamentum fehrjk .......................................................................... 227
1.3. Intermedier filamentum betegsgek ...................................................................... 227
2. Mikrotubulusok ................................................................................................................. 227
2.1. A mikrotubulusok szerkezete ............................................................................... 227
2.2. Dinamikus instabilits .......................................................................................... 228
2.3. Mikrotubulus motorfehrjk ................................................................................. 229
41. 41. sejtmembrn I.: A lipoprotein membrn szerkezete. Sejtsejt kapcsolatok ........................ 231
1. A sejthrtya szerkezete ...................................................................................................... 231
1.1. A lipoprotein membrnok folykony mozaik modellje ........................................ 231
1.2. A lipid ketts rteg ............................................................................................... 231
1.3. Liposzmk .......................................................................................................... 232
1.4. Membrnfehrjk .................................................................................................. 233
1.5. Specializlt, stabil membrn domnek ................................................................. 234
2. A sejtek kapcsoldsai ...................................................................................................... 234
2.1. Lezr kapcsoldsok ........................................................................................... 235
2.2. Lehorgonyz kapcsolatok ..................................................................................... 236
2.3. Kommunikl kapcsolatok ................................................................................... 236
42. 42. Sejtmembrn II.: Transzport a sejthrtyn keresztl ........................................................... 238
1. Passzv transzport folyamatok ........................................................................................... 238
1.1. Egyszer diffzi .................................................................................................. 238
1.2. Facilitlt diffzi .................................................................................................. 238
2. Aktv transzport folyamatok ............................................................................................. 240
2.1. ATP-fgg transzporterek .................................................................................... 240
2.2. Ionfgg transzporterek ........................................................................................ 241
43. 43. Sejtmembrn III.: A sejthrtya s az extracellulris mtrix kapcsolata .............................. 243
1. Kollagnek ........................................................................................................................ 243
2. Glikzaminogliknok s proteogliknok ........................................................................... 245
3. Multiadhezv fehrjk ....................................................................................................... 246
4. Integrinek .......................................................................................................................... 246
44. 44. Szignltranszdukci I.: Jeltviteli molekulk s receptoraik .............................................. 248
viii
1. A jeltvitel fzisai ............................................................................................................. 248

2. A kmiai jeltvitel fajti .................................................................................................... 249
2.1. Endokrin jeltvitel ................................................................................................ 250
2.2. Parakrin jeltvitel .................................................................................................. 250
2.3. Juxtakrin jeltvitel ................................................................................................ 251
2.4. Autokrin jeltvitel ................................................................................................. 251
2.5. Intrakrin jeltvitel ................................................................................................. 251
3. A receptorfehrjk lokalizcija ....................................................................................... 251
45. 45. Szignltranszdukci II.: Heterotrimer G-proteinek ltal kzvettett jeltvitel .................... 253
1. Heterotrimer G-proteinek .................................................................................................. 253
2. A cAMP-t ........................................................................................................................ 254
3. Az inozitol-foszfolipid t .................................................................................................. 256
46. 46. Szignltranszdukci III.: Jeltvitel tirozin-proteinkinz receptorokrl ............................... 259
1. Nvekedsi faktorok s receptoraik .................................................................................. 259
1.1. A receptoraktivci mechanizmusa ...................................................................... 259
2. A nvekedsi faktor receptorokrl kiindul jelplyk ...................................................... 262
2.1. A foszfolipz C t ................................................................................................. 262
2.2. A Ras-fehrjk ...................................................................................................... 262
2.3. Az ERK-t ............................................................................................................ 265
2.4. A foszfatidilinozitol 3-kinz t ............................................................................. 265
2.5. A Ral t ................................................................................................................. 266
47. 47. Szignltranszdukci IV.: citokinek s egyb mitognek jeltvitele .................................... 268
1. Citokin-jeltvitel ............................................................................................................... 268
2. A TGF--t ....................................................................................................................... 272
3. Hedgehog-jeltvitel ........................................................................................................... 272
4. Wnt-jeltvitel .................................................................................................................... 273
5. Notch-jeltvitel .................................................................................................................. 274
48. 48. Szignltranszdukci V.: Stressz- s integrin-jeltvitel ........................................................ 276
1. Stresszhatsok jeltvitele .................................................................................................. 276
1.1. Stresszaktivlt fehrjefoszforilcis kaszkdok ................................................... 276
1.2. Az NFB-t .......................................................................................................... 276
2. Integrin-jeltvitel ............................................................................................................... 278
49. 49. Szignltranszdukci VI.: ltalnos kvetkeztetsek s gyakorlati vonatkozsok .............. 281
1. A jeltviteli folyamatok ltalnos jellemzi ...................................................................... 281
1.1. A jeltvitel specificitsa ........................................................................................ 281
1.2. Molekulris mechanizmusok a jeltvitelben ......................................................... 281
1.3. Jelamplifikci ...................................................................................................... 282
1.4. Jelterminls ......................................................................................................... 283
1.5. Jeltviteli hlzatok .............................................................................................. 283
2. Klinikai vonatkozsok ....................................................................................................... 284
2.1. Nem inzulindependens (II. tpus) diabetes mellitus ............................................ 284
2.2. Nephrogen diabetes insipidus ............................................................................... 285
2.3. Cholera ................................................................................................................. 285
2.4. Krnikus gyulladsos betegsgek ......................................................................... 285
2.5. Daganatok ............................................................................................................. 285
50. 50. Az egyedfejlds cellulris s molekulris alapjai ............................................................. 287
1. Az emlsk korai egyedfejldse ..................................................................................... 287
2. Az egyedfejlds alapvet cellulris folyamatai ............................................................... 289
2.1. Sejtproliferci ..................................................................................................... 289
2.2. Determinci ........................................................................................................ 289
2.3. Differencici ....................................................................................................... 289
2.4. Sejtmozgsok ........................................................................................................ 289
2.5. Programozott sejthall (apoptzis) ....................................................................... 289
2.6. Alakzatformlds ................................................................................................ 290
3. Szignltranszdukci s embrionlis fejlds ..................................................................... 290
4. Homeotikus szelektor gnkomplexek szerepe ................................................................... 290
5. Az egyedfejlds veleszletett zavarai .............................................................................. 291
51. 51. Programozott sejthall ........................................................................................................ 293
1. Nekrzis s apoptzis ........................................................................................................ 293
2. Az apoptzis fiziolgis szerepe ....................................................................................... 295
ix
3. Az apoptzis legfontosabb regultorai .............................................................................. 295

3.1. p53-fehrje ............................................................................................................ 295
3.2. Bcl-2 csald .......................................................................................................... 295
3.3. Kaszpz-csald ..................................................................................................... 296
4. Apoptzis utak .................................................................................................................. 296
4.1. Extrinsic t ............................................................................................................ 297
4.2. Intrinsic t ............................................................................................................. 297
5. Az apoptzis betegsgei .................................................................................................... 298
52. 52. Daganatbiolgia I.: A tumorsejt ltalnos jellemzi ........................................................... 300
1. A daganatok osztlyozsa ................................................................................................. 300
2. A tumorsejt morfolgija .................................................................................................. 300
2.1. A sejtmag elvltozsai .......................................................................................... 300
2.2. A citoplazma s a sejtfelszn elvltozsai ............................................................. 301
3. A tumorsejt funkcionlis jellemzi .................................................................................. 301
3.1. Szvettenyszeti sejtek transzformcija ............................................................. 301
3.2. A transzformlt sejtek viselkedse ....................................................................... 301
53. 53. Daganatbiolgia II.: Onkogn DNS-vrusok ...................................................................... 304
1. Onkogn vrusok ............................................................................................................... 304
2. Onkogn DNS-vrusok ...................................................................................................... 304
2.1. SV40- s poliomavrus ......................................................................................... 304
2.2. Adenovrusok ....................................................................................................... 306
2.3. Hepatitis B vrus ................................................................................................... 307
2.4. Papillomavrusok .................................................................................................. 307
2.5. Herpeszvrusok ..................................................................................................... 308
54. 54. Daganatbiolgia III.: Onkogn RNS-vrusok ..................................................................... 310
1. A retrovrusok fertzsi ciklusa ........................................................................................ 310
2. Ers s gyenge onkogenits retrovrusok ........................................................................ 311
3. Retrovirlis onkognek ..................................................................................................... 312
4. A retrovirlis onkognek eredete ...................................................................................... 313
5. Humn retrovrusok .......................................................................................................... 315
55. 55. Daganatbiolgia IV.: Cellulris onkognek ........................................................................ 316
1. Onkognek keresse transzfekcis ksrletekkel ............................................................... 316
1.1. Az els emberi onkogn felfedezse .................................................................... 316
2. Az onkogn-aktivci mechanizmusai .............................................................................. 318
2.1. Pontmutci .......................................................................................................... 318
2.2. Inszercis mutagenezis ......................................................................................... 318
2.3. Transzlokci ....................................................................................................... 320
2.4. Delci .................................................................................................................. 322
2.5. Gnamplifikci ................................................................................................... 322
3. Cellulris onkognek, a daganatterpia clpontjai ............................................................ 323
56. 56. Daganatbiolgia V.: Tumor szuppresszor gnek ................................................................ 324
1. A tumor szuppresszor gnek ltnek kimutatsa sejtfzis ksrletekkel ......................... 324
2. Az els humn tumor szuppresszor gn klnozsa ........................................................... 324
3. Tumor szuppresszor gnek s szerepk az emberi daganatkpzdsben .......................... 325
3.1. Rb ......................................................................................................................... 326
3.2. p53 ........................................................................................................................ 326
3.3. Cdk-inhibitorok .................................................................................................... 329
3.4. APC ...................................................................................................................... 329
3.5. WT1 ...................................................................................................................... 329
3.6. NF1 ....................................................................................................................... 329
3.7. BRCA1 s BRCA2 ............................................................................................... 329
3.8. PTEN .................................................................................................................... 329
3.9. VHL ...................................................................................................................... 329
4. Muttor gnek ................................................................................................................... 330
57. 57. Daganatbiolgia VI.: A karcinogenezis tbblpses mechanizmusa .................................. 332
1. Experimentlis karcinogenezis: a daganatok klonlis evolcija ..................................... 332
1.1. Tumor-inicici .................................................................................................... 332
1.2. Tumor-promci ................................................................................................... 332
1.3. Tumor-progresszi ................................................................................................ 333
2. A karcinogenezis klinikai stdiumai ................................................................................. 334
x
2.1. Primr tumor kialakulsa ...................................................................................... 335

2.2. Tumor-invzi ...................................................................................................... 335
2.3. Metasztzis-kpzds ........................................................................................... 336
3. Onkogn-kooperci ......................................................................................................... 336
4. Colon carcinoma: a tbblpses karcinogenezis modellje ................................................ 336
5. A daganatkpzds elmletei ............................................................................................ 337
58. 58. Molekulris medicina I.: Molekulris diagnosztika ............................................................ 339
1. Genomszint diagnosztikai mdszerek ............................................................................. 339
1.1. Citogenetika s strukturlis genomika .................................................................. 339
1.2. Funkcionlis genomika ......................................................................................... 343
2. A gnszint diagnzis mdszerei ...................................................................................... 343
2.1. Mutci analzis .................................................................................................... 343
2.2. Pontmutci kimutatsa ........................................................................................ 344
2.3. Nagyobb kiterjeds lzik kimutatsa ................................................................ 345
2.4. Gnexpresszi analzis ......................................................................................... 346
3. Pldk a molekulris diagnosztika alkalmazsra ............................................................. 346
3.1. Molekulris diagnosztika rkld betegsgekben .............................................. 346
3.2. Daganatok molekulris diagnzisa ....................................................................... 347
3.3. Fertz betegsgek molekulris diagnzisa .......................................................... 347
59. 59. Molekulris medicina II.: Gnterpia ................................................................................. 349
1. Oligonukleotid terpia ....................................................................................................... 349
1.1. Antisense inhibitorok ............................................................................................ 349
1.2. Ribozimek ............................................................................................................. 349
1.3. siRNS-ek ............................................................................................................... 350
2. Valdi gnterpia .............................................................................................................. 350
2.1. A gnterpia tpusai .............................................................................................. 350
2.2. Gnterpis vektorok ............................................................................................ 351
2.3. A gnterpia lehetsgei ....................................................................................... 353
2.4. Klinikai gnterpis tapasztalatok ........................................................................ 354
xi
Az brk listja
1.1. 1.1. bra: A prokariota sejt szerkezete ......................................................................................... 1
1.2. 1.2. bra: Az eukariota sejt szerkezete ......................................................................................... 2
1.3. 1.3. bra: Az eukariota sejtek kialakulsa .................................................................................... 4
1.4. 1.4. bra: Az lvilg evolcija: A sejtmag valsznleg a sejtmembrn betremkedsvel alakult ki,
ezt kvette aerob baktriumok endoszimbiozisval a mitokondriumok megjelense, majd fotoszintetizl
cianobaktriumok endoszimbizisval a kloroplasztiszok ltrejtte. Tbb eukariota-trzs (pl. gombk,
llatok) ksbb elvesztette kloroplasztiszait ...................................................................................... 6
2.1. 2.1.bra: A nukleinsavak bzisai ................................................................................................. 8
2.2. 2.2. bra: A ribz s a dezoxiribz szerkezete ............................................................................. 9
2.3. 2.3. bra: Az ATP s a ciklikus-AMP szerkezete ........................................................................ 9
2.4. 2.4. bra: A DNS ketts hlix: a lncok komplementer s antiparallel kapcsoldsa ............... 10
2.5. 2.5. bra: Hiperkromicitsi grbe .............................................................................................. 12
2.6. 2.6. bra: B-DNS s Z-DNS ..................................................................................................... 12
2.7. 2.7. bra: Az eukariota riboszma 18S rRNS-nek msodlagos szerkezete .............................. 14
3.1. 3.1. bra: Az aminosavak ltalnos szerkezete s a peptidkts kialakulsa ............................. 17
3.2. 3.2. bra: A fehrjk msodlagos szerkezeti elemei: -helix s -lemez ................................... 18
3.3. 3.3. bra: A ribonuklez harmadlagos szerkezete ...................................................................... 19
3.4. 3.4. bra: Az inzulinreceptor domnszerkezete ......................................................................... 19
3.5. 3.5. bra: Az enzim cskkenti a katalizlt reakci aktivlsi energijt .................................... 21
4.1. 4.1. bra: A glukz lineris s gyrs szerkezete: s konfigurci ..................................... 22
4.2. 4.2. bra: A maltz szerkezete ................................................................................................... 23
4.3. 4.3. bra: A cellulz s a kemnyt szerkezete ........................................................................ 24
4.4. 4.4. bra: Triglicerid (A.) s foszfolipid (B.) szerkezete ........................................................... 25
4.5. 4.5. bra: A szfingomielin szerkezete ........................................................................................ 26
4.6. 4.6. A szternvz szerkezete ...................................................................................................... 26
4.7. 4.7. bra: A -karotin szerkezete ............................................................................................... 27
5.1. 5.1. bra: A fnymikroszkp felptse. A: A mikroszkp rszei. B: A fny tja ..................... 28
5.2. 5.2. bra: A kp keletkezse a fnymikroszkpban (F1 s F2 a lencsk fkuszpontjai) ............. 29
5.3. 5.3. bra: A polarizcis mikroszkp mkdsi elve (a: prhuzamos polrszrk; b: keresztezett
polrszrk; c: anizotrp kplet vizsglata keresztezett polrszrk mellett) .................................. 31
5.4. 5.4.bra: A fluoreszcencia mikroszkp felptse s mkdsi elve ......................................... 32
5.5. 5.5. bra: A konfoklis mikroszkp mkdsi elve (A: a fluoreszcens objektum megvilgtsa; B: a
fkuszpontbl s azon kvli rgibl szrmaz fnysugarak sorsa) ............................................... 33
6.1. 6.1. bra: A transzmisszis elektronmikroszkp felptsi elve ................................................ 36
6.2. 6.2. bra: Szgrnykolssal fmgzlt replika ksztse ......................................................... 37
6.3. 6.3. bra: A fagyasztva trs (A) s a fagyasztva marats (B) elve ........................................... 38
6.4. 6.4. bra: A psztz elektronmikroszkp felptsi elve .......................................................... 39
7.1. 7.1. bra: Az autoradiogrfia elve (A) s alkalmazsa a DNS-replikci kimutatsra (B; a sejteket
[3H]timidinnel jelltk; a sms bra als sejtjben replikci folyt a jells idejn, a fels kt sejt viszont
a sejtciklus ms fzisban volt) ........................................................................................................ 41
7.2. 7.2. bra: A szekrcis t vizsglata pulse-chase jellssel. Hasnylmirigy mirigyvgkamra sejteket 3
percig jellt aminosavval kezeltek (A), majd 7 (B), illetve 120 percig (C) jelletlen aminosav jelenltben
folytattk az inkubcit. Az ezt kvet elektronmikroszkpos autoradiogrfia kimutatta, hogy a fehrjk
az endoplazmatikus retikulumban kpzdnek, innen a Golgi-appartusba kerlnek, majd szekrcis
granulumok tjn exocitzissal rlnek ki a sejtbl ......................................................................... 42
8.1. 8.1. bra: A centrifugkban hasznlt szgrotor (A) s kilendl-poharas rotor (B) .................. 44
8.2. 8.2. bra: Sejtfrakcionls differencil centrifuglssal ............................................................ 44
8.3. 8.3. bra: Bakterilis riboszma alegysgek sztvlasztsa szacharz grdiens centrifuglssal 45
8.4. 8.4. bra: DNS s RNS sztvlasztsa cziumklorid grdiens centrifuglssal ......................... 45
8.5. 8.5. bra: Kt makromolekula (a s b) sztvlasztsa oszlopkromatogrfival ......................... 46
8.6. 8.6. bra: A glszrs (A), az ioncserl kromatogrfia (B) s az affinits kromatogrfia (C) elve
46
8.7. 8.7. bra: Emls sejtbl izollt rRNS-ek s mRNS-ek frakcionlsa formaldehid/agarz
glelektroforzissel ........................................................................................................................... 47
8.8. 8.8. bra: Fehrjk sztvlasztsa SDS-poliakrilamid glelektroforzissel ............................... 48
8.9. 8.9. bra: pH 7 izoelektromos pont fehrje viselkedse izoelektromos fkuszls sorn ........ 49
xii
8.10. 8.10 bra: Fehrjk frakcionlsa kt-dimenzis glelektroforzissel (1D: 1. dimenzi, 2D: 2.
dimenzi) .......................................................................................................................................... 50
9.1. 9.1. bra: Rekombinns plazmid ltrehozsa ............................................................................. 53
9.2. 9.2. bra: -fg genomtr ltrehozsa (A.) s a kvnt kln kivlasztsa molekulris hibridizcival
(B.) .................................................................................................................................................... 54
9.3. 9.3. bra: A polimerz lncreakci elve ..................................................................................... 55
9.4. 9.4. bra: A vals-idej kvantitatv PCR reakci elve. 1. lps: polimerizci; 2. lps: a fluoreszcens
festk lehastsa; 3. lps: a prba lebontsa, a polimerizci befejezse (rszleteket l. a szvegben) 56
10.1. 10.1. bra: A nukleinsav hibridizci elve (filter-hibridizci) ............................................... 57
10.2. 10.2. bra: Restrikcis trkpezs: a fragmentumok elektroforetikus kpe (A.) s a cirkulris DNS
trkpe (B.) ....................................................................................................................................... 59
10.3. 10.3. bra: A Southern blot elve .............................................................................................. 59
10.4. 10.4. bra: Sanger lnctermincis szekvencia-meghatroz mdszernek elve .................... 60
10.5. 10.5. bra: A DNS-szekvenciz automata mkdsi elve ..................................................... 61
10.6. 10.6. bra: Szekvencia-meghatrozs oligonukleotid-chippel. A. A mikrochip kpe; B. A chip egy
rszlete felnagytva. Minden mez ugyanazon oligonukleotid szmos pldnyt tartalmazza (a rajz csak 1
pldnyt brzol), a klnbz mezk klnbz oligonukleotidokat; C. Hibridizci a fluoroforral jellt
cl-DNS; D. A mikrochip kpe a fluoreszcencia-mikroszkban ...................................................... 63
10.7. 10.7. bra: A hibridizcin alapul szekvencia-analizl berendezs mkdsi elve ............. 63
11.1. 11.1. bra: A molekulris biolgia informci-ramlsnak centrlis dogmja ...................... 66
11.2. 11.2. bra: A cDNS klnozs menete (A.) s a klnozott gn expresszija E. coli sejtekben (B.)
67
11.3. 11.3. bra: Transzgnikus egerek ltrehozsa embrionlis ssejtek manipullsval ............. 68
12.1. 12.1. bra: A clzott gnroncsols elve. A K.O. vektorral kezelt sejtek sorsa hromfle lehet: 1. ha a
plazmid nem jut be a sejtbe vagy nem pl be a genomba, a sejt neomicinszrmazkkal elpusztthat; 2. a
vletlenszeren integrldott plazmidot tartalmaz sejteket a ganciklovr li meg; 3. a ketts szelekcit
csak azon a sejtek lik tl, melyekben homolg rekombincival kerl a neor-gn a clgnbe ...... 70
12.2. 12.2. bra: mRNS molekula hastsa ribozimmel .................................................................... 71
12.3. 12.3. bra: Az RNS-interferencia elve; specifikus mRNS degradcija a sejtmagban termszetes
mdon kpzd (A.) s a sejtbe kvlrl bejutott siRNS felhasznlsval (B.) ............................... 72
13.1. 13.1 bra: A Northern blot mdszer elve ................................................................................. 75
13.2. 13.2. bra: Az immunprecipitci menete (az autoradiogrammon az 1. minta a teljes fehrjekeverk
a 2. pedig az immunprecipittum kpt mutatja) .............................................................................. 76
13.3. 13.3. bra: Az immunoblot (Western blot) mdszer elve ........................................................ 77
14.1. 14.1. bra: A sejtmag elektronmikroszkpos felptse ........................................................... 79
14.2. 14.2. bra: A magprus komplexum szerkezete (A. fellnzeti kp; B. keresztmetszet) ........ 80
14.3. 14.3. bra: A magfehrjk importjnak (A.) s exportjnak (B.) mechanizmusa .................... 81
14.4. 14.4. bra: mRNP-export a magpruson keresztl .................................................................. 81
15.1. 15.1. bra: E. coli s borj DNS renaturcis grbje ............................................................. 84
15.2. 15.2. bra: Szatellit-DNS izollsa cziumklorid grdiens centrifuglssal ............................ 85
15.3. 15.3. bra: Southern blot alap DNS-fingerprint vizsglat miniszatellit prbval rokonsgi
kapcsolatok tisztzsra .................................................................................................................... 86
15.4. 15.4. bra: Tandem ismtlds gnek .................................................................................... 87
15.5. 15.5. bra: A transzpozci mechanizmusai (A: nonreplikatv transzpozci; B: replikatv
transzpozci; C: retrotranszpozci) ................................................................................................ 88
15.6. 15.6. bra: Alu-szekvencik szerepe a gnduplikci folyamatban ....................................... 89
16.1. 16.1. bra: A kromatin morfolgiai szervezdsnek szintjei ................................................. 91
16.2. 16.2. bra: A kromatoszma szerkezete .................................................................................. 92
16.3. 16.3. bra: Egy emberi metafzikus kromoszma szerkezete .................................................. 92
16.4. 16.4. bra: A telomr-hurok szerkezete ................................................................................... 93
16.5. 16.5. bra: A nukleoszomlis hisztonok acetilcijnak kvetkezmnye: a nukleoszma fellazulsa
94
17.1. 17.1. bra: A sejtciklus fzisai ................................................................................................. 95
17.2. 17.2. bra: A FACS mkdsi elve ......................................................................................... 96
17.3. 17.3. bra: Szinkronizlatlan tenyszet ramlsi citometris kpe DNS-festst kveten ...... 97
18.1. 18.1. bra: Ciklin/Cdk komplexek expresszija emls sejtciklus sorn (R= restrikcis pont) 100
18.2. 18.2. bra: A re-replikcis blokk megvalstsa a licensing faktor teria szerint ................ 101
18.3. 18.3. bra: Az MPF-aktivits s a ciklinszint vltozsa a sejtciklus sorn ............................ 102
18.4. 18.4. bra: A Cdk-szablyozs mechanizmusai ..................................................................... 103
18.5. 18.5. bra: Az MPF-aktivits szablyozsa a sejtciklus sorn ............................................... 103
xiii
18.6. 18.6. bra: Ellenrzsi pontok a sejtciklusban ....................................................................... 104

19.1. 19.1. bra: A mitzis szakaszai .............................................................................................. 106
19.2. 19.2. bra: Az interfzikus s mitotikus mikrotubulus-rendszer felptse ........................... 108
19.3. 19.3. bra: Testvrkromatid kohzi s sztvls .................................................................. 108
19.4. 19.4. bra: Az osztdsi ors megnylsa az anafzis B. szakaszban ................................... 109
19.5. 19.5. bra: Citokinzis osztd llati sejtben ......................................................................... 110
19.6. 19.6. bra: A meizis folyamata. (Az egyszersg kedvrt az bra csak egyetlen kromoszmapr
sorst mutatja.) ............................................................................................................................... 110
19.7. 19.7. bra: Homolg rekombinci. A kiindulsi, hasonl szekvencij DNS-rgikban egyeslnc
lnctrsek trtnnek (A.; nylhegyek). A lncvgek helyet cserlnek s a msik lncvggel egyeslnek. A
lnckeresztezsben ismt trsek trtnnek (B.; nylhegyek), az jabb lncvgeket is DNS-ligz egyesti
(C). .................................................................................................................................................. 111
19.8. 19.8. bra: A gerinces oocitk meizisa ................................................................................ 111
20.1. 20.1. bra: A DNS-szintzis mechanizmusa a Kornberg-rendszerben .................................. 113
20.2. 20.2. bra: A Meselson-Stahl ksrlet .................................................................................... 114
20.3. 20.3. bra: A templt-primer komplex szerepe a DNS-szintzisben ..................................... 115
20.4. 20.4. bra: A replikci ktirny jellegnek bizonytsa rost-autoradiogrfival (Or = origo) 116
20.5. 20.5. bra: A replikcis szemidiszkontinuus jellege. A. a szimmetrikus replikci problmja; B. a
vezet s ksleked lncok szintzise ............................................................................................ 117
21.1. 21.1. bra: A prokariota replikci mechanizmusa. A: A replikcis bubork kialakulsa az ori-
rgiban. B: Egy replikcis villa mkdse s alkotrszei ......................................................... 119
21.2. 21.2. bra: A DNS-polimerz III mkdsi modellje ............................................................ 121
21.3. 21.3. bra: Cirkulris DNS-ek sztvlasztsa ........................................................................ 122
21.4. 21.4. bra: A testvrkromatidok sztvlasztsa az anafzisban ............................................. 122
21.5. 21.5. bra: A vg-replikci problmja ................................................................................ 123
21.6. 21.6. bra: A telomerz-reakci mechanizmusa .................................................................... 124
22.1. 22.1. bra: A bzis-exczis repair mechanizmusa ................................................................ 126
22.2. 22.2. bra: A nukleotid-exczis repair mechanizmusa ......................................................... 127
22.3. 22.3. bra: A mismatch repair mechanizmusa (A. E. coliban; B. eukariota sejtekben) ......... 129
22.4. 22.4. bra: Kettslnc DNS-trsek kijavtsa. A. Nem-homolg lncvgegyests. B. Repair
homolg rekombinci ltal ........................................................................................................... 130
23.1. 23.1. bra: Kapcsolt transzkripci-transzlci prokariotkban: a kromoszma-poliszma komplex
132
23.2. 23.2. bra: A prokariota transzkripci f lpsei ................................................................... 133
23.3. 23.3. bra: A prokariota promter s a hozz kapcsold RNS-polimerz szerkezete .......... 133
24.1. 24.1. bra: A nukleolusz elektron mikroszkpos szerkezete ................................................. 136
24.2. 24.2. bra: Aktvan trd rRNS transzkripcis egysg ...................................................... 136
24.3. 24.3. bra: Tandem rRNS-gnek ........................................................................................... 137
24.4. 24.4. bra: A riboszma-biogenezis folyamata ...................................................................... 138
25.1. 25.1. bra: Eukariota fehrjekdol gnek transzkripcijnak lpsei .................................. 140
25.2. 25.2. bra: Az RNS-polimerz II promterek szerkezete ...................................................... 141
25.3. 25.3. bra: A pre-mRNS-szintzis inicicija ........................................................................ 141
25.4. 25.4. bra: Az 5-cap kpzdsnek reakcii ........................................................................ 143
25.5. 25.5. bra: A cap szerkezete .................................................................................................. 143
25.6. 25.6. bra: Az eukariota pre-mRNS-ek 3-vgi rse ............................................................ 144
26.1. 26.1. bra: A fehrjekdol gnek diszkontinuus szerkezete s a pre-mRNS splicing ......... 146
26.2. 26.2. bra: Intronok azonostsa RNS-DNS hibridek elektronmikroszkpos vizsglatval. A. A
hibridek elektronmikroszkpos vizsglata alapjn kszlt sms rajz. B. A vrus-DNS trkpe az exon- s
intron-rgikkal .............................................................................................................................. 147
26.3. 26.3. bra: Az adenovrus ksi gn-rgijn kpzd pre-mRNS-ek s az alternatv splicing
termkei. (Az bra csak a legrvidebb pre-mRNS-bl kpzd rett mRNS-eket mutatja.) .......... 148
26.4. 26.4. bra: A pre-mRNS splicing lpsei ............................................................................... 148
26.5. 26.5. bra: A spliceoszma felplse s a splicing mechanizmusa ...................................... 149
26.6. 26.6. bra: RNS-szerkeszts. A. Apo-B100 fehrje szintzise szerkesztetlen mRNS-rl. B. Apo-
B48 fehrje szintzise szerkesztett mRNS-rl ............................................................................ 151
27.1. 27.1. bra: A tRNS-ek msodlagos (A.) s harmadlagos (B.) szerkezete .............................. 154
27.2. 27.2. bra: Az aminoacil-tRNS szintetz reakci lpsei. A. aminosav-aktivls; B. aminoacil-tRNS
szintzis .......................................................................................................................................... 154
27.3. 27.3. bra: A riboszmk felptse ....................................................................................... 155
xiv
27.4. 27.4. bra: Poliszmk szacharz grdiens szedimentogrammja. Az a nyllal jellt cscs riboszma
monomreknek, a b s c cscsok pedig hrom, illetve t riboszmt tartalmaz poliszmknak felelnek
meg ................................................................................................................................................. 156
28.1. 28.1.: bra: A triplet kdot igazol genetikai ksrlet elve. T4 bakteriofg DNS-nek egyik gnjbe
egy (B.), kt (C.) vagy hrom (D.) extra nukleotidot vittek be. Az brk a kdolt mRNS egy szakaszt,
illetve az azoknak megfelel aminosav sorrendet mutatjk. (A. vad-tpus gn). A mutci eredmnyeknt
megjelen nukleotidokat kvr betk, a megvltozott aminosavakat satrozs jellik ................... 157
28.2. 28.2. bra: A Nirenberg-fle ktdsi analzis elve ............................................................... 159
28.3. 28.1. tblzat: A genetikai kdsztr ..................................................................................... 159
28.4. 28.3. bra: A kodon-antikodon kapcsolat wobble-pozcija .................................................. 160
28.5. 28.4. bra: Policisztronos prokariota mRNS (A.) s monocisztronos eukariota mRNS (B.) szerkezete
(I = inicicis kodon, S = stopkodon, ORF = open reading frame) ................................................ 161
29.1. 29.1. bra: A prokariota transzlci inicicija. A: inicicis faktorok ktdse a kis riboszma
alegysghez; B: a 30S inicicis komplex ltrejtte; C: a 70S inicicis komplex kialakulsa ..... 163
29.2. 29.2. bra: A prokariota transzlci elongcija. A: aminoacil-tRNS ktds; B: peptidkts-
szintzis; C: transzlokci .............................................................................................................. 165
29.3. 29.3. bra: A prokariota transzlci termincija .................................................................. 166
29.4. 29.4. bra: Poliszma kpzdse a fehrjeszintzis sorn ..................................................... 168
30.1. 30.1. bra: Negatv regulci a laktzoperonon: a lac represszor mkdse. (R = regultor gn; P =
promter; O = opertor; S1, S2, S3 = struktrlis gnek) ............................................................... 170
30.2. 30.2. bra: A laktzoperon transzkripcijnak sszetett szablyozsa. (G = glukz; L= laktz) 170
30.3. 30.3. bra: A triptofnszintzis enzimeit kdol triptofnoperon szablyozsa .................... 171
31.1. 31.1. bra: A Gurdon-ksrlet lnyege ................................................................................... 173
31.2. 31.2. bra: A normlis egyedfejlds s a reproduktv, illetve terpis klnozs sszehasonltsa
175
31.3. 31.3. bra: Az eukariota gnexpresszi szablyozsnak szintjei ......................................... 175
31.4. 31.4. bra: Kalcitonin s CGRP mRNS kpzdse alternatv splicing tjn (E1-E6, exonok) 177
32.1. 32.1. bra: Eukariota aktivtor transzkripcis faktorok funkcionlis osztlyozsa ............... 180
32.2. 32.2. bra: Transzkripcis faktor csaldok ............................................................................ 181
32.3. 32.3. bra: A glukokortikoidok sejtszint hatsmechanizmusa ............................................. 183
33.1. 33.1. bra: Szekrcis fehrje szintzise s transzlokcija az endoplazmatikus retikulumba (ER)
186
33.2. 33.2. bra: Az endoplazmatikus retikulumon szintetizld membrnfehrjk topolgija (a. az
inzulinreceptor -alegysge; b. transzferrinreceptor; c. glukztranszporter; d. -adrenerg receptor) 187
33.3. 33.3. bra: A natv polipeptidlncra jellemz diszulfidktsek kialaktsa a protein diszulfidizomerz
segtsgvel ..................................................................................................................................... 188
33.4. 33.4. bra: Foszfolipidek transzlokcija az endoplazmatikus retikulum membrnban ........ 189
34.1. 34.1. bra: A szekrcis t: lizoszmk kpzdse, szablyozott s folyamatos szekrci .. 190
34.2. 34.2. bra: Vezikulris transzport vkonybl polarizlt epitelilis sejtjeiben ........................ 192
34.3. 34.3. bra: N-kts s O-kts fehrjeglikozilci ............................................................ 192
34.4. 34.4. bra: Az oligoszacharid-protein transzferz reakci ..................................................... 193
34.5. 34.5. bra: Az oligoszacharid prekurzorbl kpzd rett sznhidrttpusok az N-kts
glikoproteinekben ........................................................................................................................... 194
35.1. 35.1. bra: Az endocitotikus vezikulumok sorsa a sejtben: 1. degradci; 2. trols; 3. transzcitzis
197
35.2. 35.2. bra: Az LDL-partikulumok receptor-kzvettett endocitzisa .................................... 198
35.3. 35.3. bra: A vezikulris transzport lpsei: 1. burkolt membrn-kitremkeds kpzdse a donor
membrnon; 2. burkolt vezikula kpzdse; 3. dokkols a clorganellumon; 4. buroklevls; 5. a vezikula
fzija az akceptor membrnnal ..................................................................................................... 200
35.4. 35.4. bra: A membrnfziban rszt vev fehrjk ............................................................. 201
36.1. 36.1. bra: A policiklusos aroms sznhidrogn benzpirn karcinognn alaktsa .............. 203
36.2. 36.2. bra: Lizoszomlis enzimek mannz-6-foszft szignljnak kpzdse ...................... 205
36.3. 36.3. bra: A NADPH-oxidz aktivlsnak eredmnyekppen kpzdtt reaktv
oxignszrmazkok elpuszttjk a fehrvrsejt ltal bekebelezett krokozt ................................. 206
37.1. 37.1. bra: A mitokondrium felptse s metabolikus folyamatai ........................................ 209
37.2. 37.2. bra: A mitokondrium bels membrnjnak kt oldala kztt fellp elektrokmiai
protongrdiens, melynek elektromos eleme a potencil-grdiens, kmiai komponense pedig a pH-grdiens
......................................................................................................................................................... 211
37.3. 37.3. bra: Az ATP-szintz szerkezete .................................................................................. 212
xv
38.1. 38.1. bra: A humn mtDNS gntrkpe. (Az rRNS-gneket fekete, a fekrjekdol szakaszokat
szrke rgik, a tRNS-gneket a megfelel aminosav neve jelzi.) ................................................. 214
38.2. 38.2. bra: Mtrixfehrje importja a mitokondriumba ........................................................... 215
39.1. 39.1. bra: Az aktin-polimerizci mechanizmusa ................................................................ 219
39.2. 39.2. bra: A mikrofilamentum-kpzds taposmalom mechanizmusa (treadmilling) ....... 219
39.3. 39.3. bra: A II. tpus miozin szerkezete ............................................................................. 220
39.4. 39.4. bra: A miozinmkds modellje ................................................................................. 221
39.5. 39.5. bra: Vezikulris transzport mikrofilamentum mentn ................................................. 222
39.6. 39.6. bra: Aktinktegek (A.) s aktinhlzat (B.) szerkezete ............................................... 223
39.7. 39.7. bra: A disztrofin fehrje funkcija .............................................................................. 224
39.8. 39.8. bra: A mikrovillusok szerkezete .................................................................................. 224
40.1. 40.1. bra: Az intermedier filamentumok szerkezete ............................................................ 226
40.2. 40.2. bra: A mikrotubulus szerkezete ................................................................................... 227
40.3. 40.3. bra: A centroszma szerkezete .................................................................................... 228
40.4. 40.4. bra: Mikrotubulus motorfehrjk ................................................................................ 229
41.1. 41.1. bra: A lipoprotein membrnok szerkezete .................................................................. 231
41.2. 41.2. bra: Unilamellris (A.) s multilamellris (B.) liposzmk szerkezete ....................... 232
41.3. 41.3. bra: Liposzma ltal szlltott gygyszerek bejutsa a clsejtbe: diffzi (A.),
lipidkicserlds (B.), endocitzis (C.), membrnfzi (D.) .......................................................... 233
41.4. 41.4. bra: A kaveola szerkezete ........................................................................................... 234
41.5. 41.5. bra: Vkonybl-hmsejtek stabil kapcsoldsai ......................................................... 235
41.6. 41.6. bra: A zonula occludens szerkezete ............................................................................ 235
41.7. 41.7. bra: Az vdezmoszma (A.) s a foltdezmoszma (B.) szerkezete ............................ 236
41.8. 41.8. bra: A rskapcsolat szerkezete .................................................................................... 237
42.1. 42.1. bra: A membrntranszport folyamatok tpusai ............................................................ 238
42.2. 42.2. bra: Az akcis potencil .............................................................................................. 239
42.3. 42.3. bra: A Na+-K+ pumpa mkdse ................................................................................. 240
42.4. 42.4. bra: A multidrog transzporter szerkezete .................................................................... 241
42.5. 42.5. bra: A glukz transzepitelilis transzportja a vkonybl hmsejtjn keresztl ........... 241
43.1. 43.1. bra: Az extracellulris mtrix s a sejtmembrn kapcsolata ....................................... 243
43.2. 43.2. bra: A kollagn tripla-heliklis szerkezete .................................................................. 243
43.3. 43.3. bra: A kollagnkpzds mechanizmusa .................................................................... 244
43.4. 43.4. bra: Aggrekn komplexek felptse ........................................................................... 245
43.5. 43.5. bra: Sejtfelszni proteogliknok .................................................................................. 246
43.6. 43.6. bra: A foklis adhzi (A.) s a hemidezmoszma (B.) szerkezete ............................ 246
44.1. 44.1. bra: A sejtet r krnyezeti hatsok ............................................................................ 248
44.2. 44.2. bra: A kmiai jeltvitel szakaszai ................................................................................ 248
44.3. 44.3. bra: A kmiai jeltvitel tpusai. A: endokrin; B: parakrin; C: juxtakrin; D: autokrin; E:
intrakrin szignalizci (, ligand; , receptor) ................................................................................ 249
44.4. 44.4. bra: Intracellulris (A.) s sejtfelszni (B.) receptorok ................................................ 251
45.1. 45.1. bra: A sejtfelszni receptorokrl indul intracellulris jeltviteli plyk felptsnek elve
253
45.2. 45. 2. bra: Heterotrimer G-fehrje ltal kzvettett jeltovbbts. (A: alapllapot; B: receptor-
aktivls; C: alegysg-disszocici; D: effektor-aktivls; E: GTP-hidrolzis) .............................. 254
45.3. 45.3. bra: A cAMP-t ........................................................................................................... 255
45.4. 45.4. bra: A ciklikus-AMP kpzdse s elbontsa ............................................................. 255
45.5. 45.5. bra: A foszfolipz C reakci (a rvidtseket l. a szvegben) ..................................... 256
45.6. 45.6. bra: Az inozitol-foszfolipid t ..................................................................................... 256
46.1. 46.1. bra: Nhny nvekedsi faktor receptor szerkezete .................................................... 259
46.2. 46.2. bra: A nvekedsi faktor receptorok aktivlsnak mechanizmusa (1. ligandkts; 2. receptor-
dimerizci; 3. autofoszforilci; 4. jeltviteli fehrjk ktdse s foszforilcija [a rvidtsek jelentst
lsd ksbb a szvegben]) .............................................................................................................. 260
46.3. 46.3. bra: SH2- s SH3-domneket tartalmaz jeltviteli fehrjk (a rvidtsek jelentst lsd a
szvegben) ...................................................................................................................................... 262
46.4. 46.4. bra: A nvekedsi faktorok jeltviteli tjai ................................................................. 263
46.5. 46.5. bra: A Ras/MAPK jeltviteli t (a rvidtsek jelentst l. a szvegben) ................... 263
46.6. 46.6. bra: A Ras-ciklus ......................................................................................................... 265
46.7. 46.7. bra: A foszfatidilinozitol 3-kinz reakci (a rvidtseket lsd a szvegben) ............. 266
47.1. 47.1. bra: A citokin jeltvitel (a rvidtsek jelentst l. a szvegben) ............................... 268
xvi
47.2. 47.2. bra: Az interferon fehrjk kpzdsnek szablyozsa s szerepe a vrusfertzs gtlsban
270
47.3. 47.3. bra: A transzforml nvekedsi faktor (TGF-) jeltvitele ....................................... 272
47.4. 47.4. bra: A Hedgehog jeltviteli t ..................................................................................... 272
47.5. 47.5. bra: A Wnt jeltviteli t .............................................................................................. 273
47.6. 47.6. bra: Notch jeltviteli t ............................................................................................... 274
48.1. 48.1. bra: MAPK jeltviteli utak emls sejtekben. (A rvidtsek magyarzatt l. a szvegben. Az
resen hagyott tglalapok olyan, mr azonostott jeltviteli fehrjket reprezentlnak, melyek nevnek
ismertetse meghaladja a knyv kereteit.) ...................................................................................... 276
48.2. 48.2. bra: A stresszvlasz NFB-tja ................................................................................... 277
48.3. 48.3. bra: A foklis adhzi ltal kzvettett integrin-jeltviteli utak (a rvidtsek jelentst l. a
szvegben) ...................................................................................................................................... 279
49.1. 49.1. bra: Jelamplifikci a cAMP-ton .............................................................................. 282
49.2. 49.2. bra: A nvekedsi faktor receptorokrl divergl (A.) s a fos-promteren konvergl(B.)
jelplyk ......................................................................................................................................... 284
49.3. 49.3. bra: Az inzulin jeltviteli plyi. (A rvidtsek jelentst l. a szvegben.) ............... 284
50.1. 50.1. bra: A megtermkenyts s a zigta els mitotikus osztdsa ................................... 287
50.2. 50.2. bra: Az emls egyedfejlds korai szakasza ............................................................... 289
50.3. 50.3. bra: A homeotikus gnkomplexek Drosophilban (A.) s egrben (B.). A komplexek azonos
szmmal jellt gnjei egymssal homolgok. A C. bra a Hox-gnek expresszijnak eloszlst mutatja az
egr embri kzponti idegrendszerben s szelvnyeiben ............................................................. 290
51.1. 51.1. bra: A nekrzis s az apoptzis morfolgiai jellemzi ............................................... 293
51.2. 51.2. bra: A Bcl-2 csald: A. anti-apoptotikus Bcl-2 fehrjk; B. pro-apoptotikus multidomn Bcl-2
fehrjk; C. pro-apoptotikus BH3-domn fehrjk ......................................................................... 295
51.3. 51.3. bra: A Bcl-2 csald tagjainak egymsra hatsai a sejttlls s a sejthall szablyozsban
296
51.4. 51.4. bra: Az apoptzis extrinsic (receptor ltal kzvettett) s intrinsic (mitokondrilis) tja
(rszletek a szvegben) ................................................................................................................... 296
52.1. 52.1. bra: Szvettenyszeti sejtek malignus transzformcija ............................................. 301
53.1. 53.1. bra: Az SV40-polioma vruscsald genomjnak szerkezete (a nyilak a transzkripci irnyt
jellik) ............................................................................................................................................ 304
53.2. 53.2. bra: Az SV40-vrus fertzsi ciklusa. A: ltikus fertzs permisszv sejtekben; B: permanens
transzformci nonpermisszv sejtekben ........................................................................................ 305
53.3. 53.3. bra: A cervix carcinomt okoz HPV-16 vrus genomjnak szerkezete. (E1-E7, a korai rgi
termkei; L1-L2, a ksi rgi termkei; a nyl a transzkripci kezdpontjt s rnyt jelzi.) ..... 307
54.1. 54.1.bra: A retrovirusok vrionjnak szerkezete .................................................................. 310
54.2. 54.2. bra: A retrovrusok fertzsi ciklusa ........................................................................... 310
54.3. 54.3.bra: Bishop s Varmus ksrlete: a v-src onkogn azonostsa .................................... 312
54.4. 54.4. bra: Az avin leukaemia vrus s a Rous sarcoma vrus provrusnak gntrkpe ..... 313
54.5. 54.5. bra: Transzdukl retrovrus kpzdse (a gag a rszlegesen deletlt gag gnt jelli) 314
54.6. 54.6. bra: Transzdukl retrovrus genomjnak kialakulsa ................................................ 314
55.1. 55.1. bra: Az els humn onkogn klnozsa ...................................................................... 316
55.2. 55.2. bra: A c-myc protoonkogn inszercis aktivldsa ALV-fertzst kveten,(E1, E2, E3: a c-
myc gn exonjai) ............................................................................................................................ 318
55.3. 55.3. bra: A Philadelphia-kromoszma (A.) s a bcr/abl fzis gn, (B.) ltrejtte reciprok
transzlokcival .............................................................................................................................. 320
55.4. 55.4. bra: A gnamplifikci mechanizmusa (A.) s kromoszomlis megjelensi formi (B.) 322
56.1. 56.1. bra: Az Rb-gn tumor szuppresszor hatsnak bizonytsa kopasz egerekben ........... 325
56.2. 56.2. bra: A p53/Rb-t. A: A p53-fehrje hatsa a sejtciklusra; B: Az Rb-fehrje
hatsmechanizmusa ........................................................................................................................ 326
56.3. 56.3. bra: A p53-fehrje szablyozsa s effektor mechanizmusai ...................................... 327
56.4. 56.4. bra: A VHL tumor szuppresszor fehrje hatsmechanizmusa A: hipoxis llapot; B:
normoxis llapot ........................................................................................................................... 330
57.1. 57.1. bra: A daganat klonlis evolcija (Az eltr rnyalat, illetve alak szimblumok
genetikailag/epigenetikailag eltr sejteket jellnek.) .................................................................... 333
57.2. 57.2. bra: A brrk stdiumai ............................................................................................... 334
57.3. 57.3. bra: A colon carcinoma genetikai vltozsai ............................................................... 336
58.1. 58.1. bra: Az emberi kromoszma-szerelvny ..................................................................... 339
58.2. 58.2. bra: Az emberi kromoszmaszerelvny Giemsa-svozssal nyert mintzata ............. 340
58.3. 58.3. bra: A komparatv genom-hibridizci elve ................................................................ 342
xvii
58.4. 58.4. bra: Tumorsejt gnexpresszis profiljnak vizsglata (piros fluoreszcencia: cskkent
gnexpresszi a tumorban; zld fluoreszcencia: fokozott gnexpresszi a tumorban; srga fluoreszcencia:
nincs klnbsg; nincs fluoreszcencia: a gn nem expresszldik) ................................................ 343
58.5. 58.5. bra: RFLP-analzis a sarlsejtes anaemit okoz mutci kimutatsra ..................... 344
58.6. 58.6. bra: Az alllspecifikus hibridizci elve (A.) s alkalmazsa sarlsejtes vrszegnysg
molekulris diagnzisra (B.) ......................................................................................................... 344
58.7. 58.7. bra: A vadtpus s mutns PCR-primerek alkalmazsnak elve (A.) s a mdszer
felhasznlsa a sarlsejtes vrszegnysg diagnosztikjban (B.) ................................................. 345
58.8. 58.8. bra: A multiplex PCR elve. A: Exonok (E1-E4) s primerprok (nyilak) egy gnszakaszon; B:
A gnszakasz multiplex PCR-reakcikban amplifiklt s glelektroforzissel sztvlasztott termkei
vadtpus (1. minta) s delcit szenvedett (2-4. minta) DNS-prepartumok esetben ................. 345
59.1. 59.1. bra: A HIV-fertzs gtlsa antisense oligonukleotiddal ............................................ 349
59.2. 59.2. bra: Gnterpia retrovirlis vektorral .......................................................................... 351
59.3. 59.3. bra: Gnterpia adenovrus vektorral .......................................................................... 352
xviii
A tblzatok listja
7.1. 7.1. tblzat: A molekulris sejtbiolgiban ltalnosan hasznlt radioaktv izotpok ............. 40
23.1. 23.1. tblzat: Az eukariota RNS-polimerzok jellemzi ...................................................... 134
38.1. 38.1. tblzat: Az mtDNS-mutcik kvetkezmnyei az egyes szervekben ......................... 216
39.1. 39.1. tblzat: Nhny aktinkt fehrje ............................................................................... 220
46.1. 46.1. tblzat: Polipeptid nvekedsi faktorok ...................................................................... 259
49.1. 49.1. tblzat: Jeltviteli gensek aktivlsnak s inaktivlsnak nhny pldja ............. 283
51.1. 51.1. tblzat: Az apoptzis rendellenessgei ........................................................................ 298
52.1. 52.1. tblzat: A daganatsejtek fbb jellemzi ...................................................................... 302
54.1. 54.1. tblzat: Nhny retrovirlis onkogn jellemzi ........................................................... 313
55.1. 55.1. tblzat: Nhny humn cellulris onkogn jellemzi .................................................. 319
56.1. 56.1. tblzat: A legfontosabb tumor szuppresszor gnek jellemzi ..................................... 325
56.2. 56.2. tblzat: Protoonkognek, tumor szuppresszor gnek s muttor gnek jellemzi ...... 330
59.1. 59.1. tblzat: Gnterpis vektorok jellemzi ...................................................................... 354
xix
Szebernyi Jzsef
Kiads ve: 2011
Nordex Kft. Dialg Campus Kiad, 2011
Szebernyi Jzsef, 2011
ISBN: 978-615-5376-44-3
Kiad: NORDEX KFT. Dialg Campus Kiad
Mszaki szerkeszt: NORDEX KFT. Dialg Campus Kiad
xx
Elsz a harmadik kiadshoz
2009-ben a Johns Hopkins Egyetem Orvostudomnyi Karn - mely az Egyeslt llamok legjobb orvoskarai
kz tartozik radiklis reformmal j orvoskpzsi stratgit vezettek be. Ennek htterben az a frusztrl
tapasztalat llt, hogy mikzben a molekulris biolgia tudomnya az elmlt vtizedekben lankadatlan
sebessggel trt elre, az j eredmnyek kvetkezmnyei a vrtnl s a kvnatosnl lassabban jelennek meg a
klinikai orvoslsban. A szakrtk vlemnye szerint ennek f oka, hogy a molekulris genetika, genomika
oktatsa a gradulis s posztgradulis orvoskpzsben nem elg hatkony, gy a gygyts frontvonalban
dolgoz gyakorl orvosok tbbsgnek nincs eslye arra, hogy lpst tarthasson a tudomny fejldsvel, az
ltala knlt diagnosztikai s terpis lehetsgekkel. A Johns Hopkins reform lnyege a genomilis medicna
(azaz a beteg DNS-e bzissorrendjbl nyerhet informcik klinikai felhasznlsnak tudomnya)oktatsnak
eltrbehelyezse volt a klinikai oktatsban s a tovbbkpzsben.
Hogy az orvoskpzsi reform milyen eredmnyt hoz, azt csak vek mlva tudjuk meg. Az azonban biztos, hogy
a sejtek s gnek tudomnya, a molekulris sejtbiolgia megrkezett a klinikai orvoslsba. A molekulris
patolgia nlklzhetetlen a betegsgek kialakulsi mechanizmusnak tisztzsban, a molekulris diagnosztika
mdszerei rutineljrsokk vlnak s a gnterpival is szmolni kell mr, mint kezelsi alternatvval. A Pcsi
Tudomnyegyetem ltalnos orvos, fogorvos s gygyszersz kpzsnek Molekulris sejtbiolgia trgya
tanknyvnek 3. kiadsa megksrel lpst tartani az elmlt vek fejlemnyeivel.
Az tdolgozott kiads elksztsben nagy segtsget kaptam lektoromtl, Molnr Jnos professzortl. les
szemmel vett szre minden szakmai tvedst, hinyossgot, stilris gyarlsgot a kszl kziratban. Lektori
tevkenysge eredmnyekppen javult a szveg minsge, tartalmi s rthetsgi szempontbl egyarnt.
Javaslatai kzl csak azokat nem tudtam figyelembe venni, melyek a knyv terjedelmt a kvnatosnl jobban
megnveltk volna. Hlval tartozom alapos s lelkiismeretes munkjrt, tancsairt.
A bortn lthat, fibroblaszt sejtkultrt brzol sszetett kp lzer psztz konfoklis fluoreszcencia
mikroszkppal kszlt. A sejtmagok kk szne DNS-fests eredmnye, a vrs szn az immuncitokmia
segtsgvel jellt foszfo-Erk 1 s 2 fehrjk elhelyezkedst mutatja. A szrks htteret a mikroszkp
fziskontraszt zemmdjval, ugyanerrl a lttrrl ksztett szrkeskls kp adja (Berta Gergely felvtele).
2011. jlius
Szebernyi Jzsef
Ajnlott irodalom
Marshall, E. (2011): Waiting for the revolution. Science 331, 526529.
xxi
1. fejezet - 1. A prokariota s
eukariota sejt felptse
1. Sejtes szervezds
A prokariotk elklnlt, nll sejtmaggal nem rendelkez, egysejt llnyek (baktriumok s
cianobaktriumok), elnevezsk a grg prokarion (primitv sejtmag) szbl szrmazik. Az lvilg sszes
tbbi llnye eukariota: sejtjeik a citoplazmtl elklntett sejtmagot tartalmaznak (eukarion: valdi sejtmag).
Az eukariotk kztt egysejtek is vannak, dnt tbbsgk azonban tbbsejt llny, bennk kialakult a
sejtek kztti munkamegoszts (differencici) s kommunikci (jeltvitel) kpessge.
2. Genetikai appartus
A prokariotk egyetlen cirkulris, ketts lnc kromoszomlis DNS-t tartalmaznak, amely nhny milli
bzisprbl ll. A DNS nagyobb rsze fehrjk szintzist irnyt mRNS-eket s stabil RNS-eket (rRNS,
tRNS) kdol, kisebb rsze nem kdol. Ersen felcsavarodott, szuperheliklis llapotban van jelen a sejtben, a
membrnnal nem hatrolt nukleoidot alkotva. A prokariotkban a nveked mRNS-lncokhoz mr riboszmk
kapcsoldnak: kromoszma-poliszma komplexek kpzdnek, melyeken az RNS-szintzis (transzkripci) s
fehrjeszintzis (transzlci) egyidben folyik. A DNS nagyrszt csupasz, kevs fehrjemolekult kt. A
prokariotk extrakromoszomlis DNS-t is tartalmazhatnak: a plazmidok a kromoszomlis DNS-tl fggetlen
replikcira kpes, kismret, cirkulris DNS-molekulk, tbb pldnyban is jelen lehetnek a sejtben. Nem
szksgesek a sejt letben maradshoz, de a sejt szmra hasznos gneket hordozhatnak (pl. antibiotikum-
rezisztencia gneket). A plazmidok egyik fajtja az F-faktor (fertilitsi faktor); az ezt hordoz F+-sejtek hm,
mg az F sejtek nstny jellegek. Baktrium-konjugci sorn az F-faktor egyik lnca tjut az F-sejtbe,
mikzben mind a donor, mind a recipiens sejt plazmidlnca megkettzdik. Az F-faktor cellulris gneket is
vihet magval; az F-sejt j tulajdonsgaibl a gnek kromoszomlis lokalizcijra lehet kvetkeztetni
(gntrkpezs).
Eukariota sejtek tbb nagymret, lineris DNS-molekult tartalmaznak, ezek fehrjkkel kapcsoldva a
kromatinllomnyt alkotjk. A DNS felcsavarsa, tmrtse teht fehrjk (hisztonok s nem hiszton fehrjk)
ltal trtnik. A genom mrete mintegy ezerszerese a prokariotknak, tbb millird bzispr. Ennek csak
tredke irnytja fehrjk s stabil RNS-ek szintzist, a genom 9899 szzalka nem kdol. Eukariota
sejtekben a maghrtya megakadlyozza az RNS- s fehrjeszintzis kapcsoldst, a transzkripci a
sejtmagban, a transzlci a citoplazmban folyik. Az RNS-ek intenzv rsi folyamaton mennek keresztl.
Mindezek a jelensgek a gnmkds komplex szablyozst teszik lehetv.
3. Sejtalkotk
A prokariotk nhny mikromter tmrj sejtek, melyeket sejthrtya s azon kvl elhelyezked vkony
sejtfal hatrol (1.1. bra).
1.1. bra - 1.1. bra: A prokariota sejt szerkezete
1
1. A prokariota s eukariota sejt
felptse
A sejtfal peptidoglikn termszet: poliszacharid lncok kztt rvid peptidek alkotnak keresztktst (ennek
kpzdst gtolja a penicillin). A sejthrtya ltalban sima, a sejtfal alakjt kveti, betremkedseket csak
elvtve tartalmaz (mezoszma). Aerob baktriumokban a sejtmembrn tartalmazza az energiametabolizmushoz
szksges appartust: protongrdienst tart fenn, respircis enzimeket, ATP-szintzt tartalmaz. (llati sejtekben
ezek a mitokondrium jellemzi [l. 37. fejezet].) A sejthrtya bels felsznhez riboszmk kapcsoldnak, ezek
membrnfehrjket s szekretlt enzimeket szintetizlnak. A citoplazmban nagyszm szabad riboszma
lthat, ezeken kpzdnek az intracellulris fehrjk.
Az eukariota sejtek (1.2. bra) tmrje 10100 m, ami a prokariota sejtnl akr tbbezerszer nagyobb
trfogatot jelenthet. A sejt tllse csak gy biztostott, ha membrnfelsznei is ennek arnyban nvekednek. A
sejthrtyn ltrejtt betremkedsek, majd ezek levlsa a felsznrl s a sejt belsejbe sllyedse membrnnal
hatrolt sejtorganellumokat hozott ltre: maghrtyt, endoplazmatikus retikulumot, Golgi-appartust,
lizoszmkat. Ms sejtalkotk (mitokondrium, peroxiszma, plasztiszok) kismret prokariotk bekebelzsvel
jttek ltre (l. ksbb). Ez a kompartmentalizci az eukariota sejtek fontos jellemzje. A sejthrtyhoz
riboszmk nem ktdnek, azok az endoplazmatikus retikulum felsznn s a citoplazmban szabadon lthatk.
A sejtmembrnnak protongrdienst nem kell fenntartania (az a mitokondrium dolga), helyette bonyolult
iontranszport rendszerek s jeltviteli appartusok alakultak ki benne, amelyek a membrnon keresztl,
elektromos s kmiai szignltranszdukcit biztostanak.
1.2. bra - 1.2. bra: Az eukariota sejt szerkezete
2
felptse
4. Citoszkeleton, sejtosztds
Sokig azt hittk, hogy a prokariotk nem rendelkeznek fehrje rostokbl ll sejtvzzal. Az utbbi idben
azonban kiderlt, hogy a baktriumokban jelen vannak aktinhoz, tubulinhoz, intermedier filamentum
proteinekhez hasonl fehrjk s ezek fonalakba rendezdve primitv citoszkeletont alkotnak, amely segti a
sejtosztdst, a megkettzdtt kromoszomlis s plazmid-DNS sztvlst, a sejt alakjnak meghatrozst.
Bonyolultabb feladatokat azonban ez a rendszer nem tud elltni: nem kpes a sejthrtya mozgatsra
(endocitzis, exocitzis), osztdsi ors hinyban pedig a sejtek ketthasadssal szaporodnak. Baktriumokban
motorfehrjket (l. 39. s 40. fejezet) sem mutattak ki eddig.
Eukariota sejtekben bonyolult citoszkeleton alakult ki, amelyet mikrofilamentumok, intermedier filamentumok
s mikrotubulusok alkotnak. A sejtvz szabja meg a sejt alakjt, mozgatja a sejtalkotrszeket s a membrnt. A
centriolumokbl ltrejv osztdsi ors mikrotubulusai irnytjk a kromoszmavndorlst a mitzis s meizis
sorn.
5. Az eukariota sejtek kialakulsa: az endoszimbizis-

elmlet
4,6 millird ves Fldnkn az els llny amely primitv prokariota egysejt volt mintegy 3,7 millird
vvel ezeltt jelent meg. Az eukariota sejtek kialakulsa 3 millird ve kezddhetett s br kzvetlen ksrleti
bizonytkokkal termszetesen nem rendelkezhetnk ennek mechanizmusra vonatkozan, a ma l pro- s
eukariota sejtek, sejtalkotk tzetes vizsglata alapjn fellltott endoszimbizis-elmletet a tudomnyos
kzssg szles krei fogadjk el. Az eukariota sejt kialakulsnak f llomsai a kvetkezk lehettek (1.3.
bra). (I) Az eukariota sejtek se kismret, heterotrf prokariota lehetett, amely szerves tpllkt a
3
felptse
krnyezetbe szekretlt emsztenzimekkel bontotta le, majd vette fel. (II) Ez a sejt elvesztette sejtfalt, csak
rugalmas sejthrtyja maradt meg; az emszts tovbbra is extracellulrisan folyt. (III) A csupasz sejthrtya
nagyobb sejtnvekedst tett lehetv, s hogy az optimlis felszn/tmeg arny megmaradjon, a sejthrtyn
betremkedsek jelentek meg. (IV) Egyes membrn-invagincik teljesen lefzdhettek s mivel
emsztenzimeket tartalmaztak, a sejt belsejbe kerlt vezikulumok ltrehoztk a primitv lizoszmkat. (V) A
membrnlefzdsekkel fokozdott a kompartmentalizci: kialakult a maghrtya s egyb citomembrnok is
kpzdhettek; a citoszlban citoszkeletonrostok jelentek meg, aktv organellum- s membrnmozgst biztostva
a sejtben. (VI) Az endocitzis s a lizoszmk mr egy primitv fagocita jellemzi. (VII) A fagocita egyszer
aerob prokariott kebelezett be, amely peroxiszmaknt mkdve megvdte a sejtet az idkzben a lgkrben
felszaporodott oxign mrgez hatstl (a peroxiszma a hidrognperoxidot s az oxign szabadgykket
inaktivl enzimeket tartalmaz). (VIII) Ms aerob baktriumok fagocitlsval a sejt mitokondriumokra tett
szert, melyek nemcsak eloxidlni tudtk a szerves molekulkat, hanem a felszabadul energival ATP-t is
termeltek. (IX) Fotoszintetizl cianobaktriumok bekebelezsvel kloroplasztiszok jelentek meg a sejtben,
ltrehozva az els nvnyi sejteket. Az endoszimbizissal szerzett j sejtalkotk genomja vmillirdok alatt
teljesen (peroxiszma) vagy nagyrszt (mitokondrium, plasztiszok) thelyezdtt a nukleris genomba.
1.3. bra - 1.3. bra: Az eukariota sejtek kialakulsa
4
felptse
Az 1.4. bra az lvilg trzsfjn mutatja be a fent lertakat. Az eukariota sejtek kialakulsnak els lpse a
sejtmag megjelense volt, ezt kvette a mitokondrium, majd a kloroplasztisz megszletse (utbbiak ksbb
tbb llny-csoportbl eltntek).
6. Vrusok
5
felptse
A vrusok nem sorolhatk a sejtes felpts llnyek kz. Obligt intracellulris parazitk: csak a fertztt
gazdasejtben kpesek szaporodni, annak anyagcsere appartust felhasznlva. Legegyszerbb kpviselik
kismret nukleinsavgenombl ((DNS vagy RNS) s nhny fehrjbl plnek fel. Baktriumok, nvnyek,
llatok egyarnt szolglhatnak gazdaknt vrusok szmra.
A bakteriofgok rtkes objektumai a molekulris biolgiai kutatsoknak. A fertztt baktriumban gyorsan

elszaporodnak, elpuszttva azt (ltikus fertzs), vagy DNS-k beplhet, integrldhat a gazdasejt genomjba, a
tovbbiakban azzal egytt replikldva (lizogn fertzs). Az llati vrusok vltozatos fajti ismertek, tbb
pldjukkal a ksbbiekben foglalkozni fogunk.
1.4. bra - 1.4. bra: Az lvilg evolcija: A sejtmag valsznleg a sejtmembrn

betremkedsvel alakult ki, ezt kvette aerob baktriumok endoszimbiozisval a
mitokondriumok megjelense, majd fotoszintetizl cianobaktriumok
endoszimbizisval a kloroplasztiszok ltrejtte. Tbb eukariota-trzs (pl. gombk,
llatok) ksbb elvesztette kloroplasztiszait
Ajnlott irodalom
Cooper, G. M., Hausman, R.E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D.C., USA,
312.
Dye, N. A., Shapiro, L. (2007): The push and pull of the bacterial cytoskeleton. Trends Cell Biol. 17, 239245.
6
felptse
Goodsell, D. S. (2009): Illustrating the machinery of life: Escherichia coli. Biochem. Mol. Biol. Educ. 37, 325
332.
Goodsell, D. S. (2011): Illustrating the machinery of life: Eukaryotic cell panorama. Biochem. Mol. Biol. Educ.
39, 91101.
de Duve, C.: The birth of complex cells. Scientific American, 1996/4, 3845.
Gyurjn I. (1998): Az let szervezdse: Az eukariota sejt endoszimbionta-elmlete. Termszet Vilga 129, 194
198.
Lehninger, A. L., Nelson, D. L., Cox, M. M.: Principles of Biochemistry. Worth Publishers, New York, 1993,
2148.
7
2. fejezet - 2. Nukleinsavak
1. A nukleinsavak ltalnos jellemzi
A nukleinsavak (dezoxiribonukleinsav [DNS] s ribonukleinsav [RNS]) lineris, el nem gaz polimerek,
amelyek nukleotidokbl plnek fel. (Mint ksbb ltni fogjuk, az RNS-rs sorn elgaz RNS-molekulk is
megjelennek [l. 26. fejezet], kivtelknt erstve a szablyt.) Az albbiakban lert szerkezetk kpess teszi ket
a genetikai informci trolsra, tvitelre s kifejezsre (expresszijra).
A nukleotidok hrom komponensbl plnek fel. Heterociklusos bzisaik purinok (A s G) s pirimidinek (C,
RNS-ben U, DNS-ben T; 2.1. bra). Pentzuk ribz (RNS) vagy dezoxiribz (DNS), amely a nukleinsavakban 5
atombl ll gyr formban fordul el (2.2. bra). A cukormolekula 1-sznatomjhoz kapcsoldik a bzis,
nukleozidot alkotva (adenozin, guanozin, citidin, uridin, timidin). A harmadik alkotelem a foszforsav, amely
szabad nukleotidok esetben ltalban az 5-OH csoportot szteresti (5-nukleozid-monofoszft). A
foszftcsoporthoz nagy energij savanhidrid ktssel tovbbi foszftcsoportok ktdhetnek, 5-nukleozid-
difoszftokat s -trifoszftokat ltrehozva. Neutrlis pH mellett a nukleotidok bzisai protont nem ktnek, tlts
nlkliek, disszocilt foszftcsoportjaik negatv tltse dominl; ez a nukleinsavakra is jellemz. A nukleotidok
3, 5-foszfodiszter-ktssel sszekapcsoldva nhny egysgbl ll oligonukleotidokat, illetve nagyobb
mret polinukleotidokat alkotnak. Szabad llapotban energiatrol (pl. ATP), reaktv csoportokat, molekulkat
(pl. monoszacharidokat) szllt nukleotidokknt, koenzimek (pl. nikotinamidadenin-dinukleotid [NAD+]
alkotrszeknt, jeltviteli molekulkknt (pl. ciklikus AMP) mkdhetnek (2.3. bra). Az egyes
nukleotidszrmazkok biolgiai jelentsgrl a megfelel fejezetekben ejtnk szt.
2.1. bra - 2.1.bra: A nukleinsavak bzisai
8
2. Nukleinsavak
2.2. bra - 2.2. bra: A ribz s a dezoxiribz szerkezete
2.3. bra - 2.3. bra: Az ATP s a ciklikus-AMP szerkezete
2. A dezoxiribonukleinsav (DNS)
2.1. DNS, az rkt anyag
A DNS biolgiai szerept tisztz ksrletek korszakalkot jelentsgek voltak a molekulris biolgia
trtnetben.
Baktriumtranszformci. Br a DNS-t Miescher mr 1868-ban azonostotta fehrvrsejtek magjban, majd

ksbb a kromoszmkban is kimutattk, funkcijnak tisztzsra mg hossz ideig vrni kellett. Griffith
1928-ban a Pneumococcus baktriumok patogenitst vizsglta. Az S-varins sejtek, amelyek vastag vdtokkal
rendelkeznek, elpuszttottk a beoltott egereket; a tok nlkli R-varins sejtek hatstalannak bizonyultak.
Amikor a kutat az R-trzsbeli sejteket hvel ellt S-sejtekkel keverte ssze, a beoltott llatok tdgyulladsban
elhullottak s tdejkbl S-trzsbeli sejteket tenysztettek ki. A ksrletben teht az S-sejtek egy hrezisztens
anyaga rkld mdon talaktotta, virulenss transzformlta az R-trzsbeli sejteket. A transzformcis faktor
kmiai azonostst 1944-ben Avery s munkatrsai vgeztk el: korszakalkot munkjukban tiszttott DNS-sel
sikerlt megismtelnik Griffith ksrlett, igazolva, hogy az rkt anyag nem fehrje mint ahogy azt addig
hittk , hanem DNS.
Fgfertzs. A DNS trkt szerept 1952-ben Hershey s Chase colifgok vizsglata sorn erstette meg. E.
coli sejteket 32P- s 35S-atomokkal jellt bakteriofgokkal fertztek: a foszfor a fg-DNS-be, a kn a
kapszidfehrjkbe plt be. A sejtekbe csak a 32P-radioaktivits jutott be, majd az utdfgokban is megjelent; a
35
S-radioaktivitst a sejtek nem vettk fel. Mivel a fertztt sejtben tbb szz utdfg kpzdik s
9
2. Nukleinsavak
molekuliknak szintzist a fg rkt anyaga irnytja, a ksrlet igazolta, hogy a fg genetikai informcijt a
DNS, nem pedig a fgfehrjk hordozzk.
Gntranszfer eukariota sejtekbe. A baktriumtranszformcival analg gntviteli mdszereket a 70-es vekben

dolgoztak ki eukariota sejtekre. rkletes tulajdonsg tiszttott DNS-sel tvihet gerinces sejtekbe (a mdszer
neve transzfekci). Gntranszfer ksrletekkel azonostottk az emberi daganatkpzdsrt felels onkogneket
s ezek a mdszerek kpezik a kifejleszts alatt ll gnterpis eljrsok alapjt is (l. ksbb).
2.2. A DNS szerkezete

A WatsonCrick modell. A molekulris biolgia tudomnynak szletst jelent felfedezshez kt fontos
ksrletsorozat vezetett. Rntgendiffrakcis vizsglatokkal (Franklin s Wilkins) informcit gyjtttek a DNS
molekulris architektrjra vonatkozan: az eredmnyek a ketts lnc szerkezetet valsznstettk. Chargaff
ksrletei a DNS kmiai sszettelt analizltk: savas hidrolzissel alkotrszeire bontott DNS-hidroliztumbl
kromatogrfival sztvlasztotta a bzisokat s megllaptotta azok arnyt. Klnbz forrsokbl szrmaz
DNS-prepartumokban az egyes bzisok eltr arnyban fordulnak el, bennk azonban az A s T, illetve a C s
G azonos molris arnyban van jelen.
A rntgendiffrakcis eredmnyek s a Chargaff-szablyok ismeretben 1953-ban Watson s Crick fellltotta a

ketts hlix modellt (2.4. bra). Eszerint a DNS-t kt polinukleotid lnc alkotja: a lncok cukorfoszft-gerince a
hlix felsznn, a bzisok a tengely fel fordulva helyezkednek el. A kt lncszemben lev bzisai a
komplementer bzisprosods trvnynek megfelelen hidrognktsekkel kapcsoldnak egymshoz: az A s
T kztt kt, a G s C kztt hrom H-hd alakul ki. A kt lnc gerincben a foszfodiszter-ktsek ellenttes,
antiparallel orientcijak: a 2.4. brn a bal oldali lnc 35, a jobb oldali pedig 53 irny. A
komplementarits s az antiparallelits minden nukleinsavnukleinsav kapcsoldsra rvnyes, ltalnos
trvnyszersg. A lncok kztti H-ktsek viszonylag knnyen felszakthatk: hevts, lgos kzeg, kmiai
anyagok (formamid, urea) denaturcit okoznak, ami egytt jr a DNS-oldat ultraibolya abszorpcijnak
jellegzetes nvekedsvel (hiperkromicits). Egy adott DNS hdenaturcija az olvadsponttal (Tm)
jellemezhet: azzal a hmrsklettel, amelyen a DNS fele egyes, msik fele ketts lnc (2.5. bra). Egy DNS-
molekula olvadspontja egyenesen arnyos a GC-tartalommal. Hdenaturlt DNS lass htse sorn a
komplementer lncok megtallhatjk egymst, jra sszekapcsoldnak (renaturci). Ha a renaturci sorn az
elegyhez jellt nukleinsavat (n. prbt) adnak, az megkeresi s gy azonostja a vele komplementer
szakaszokat. Ez kpezi minden molekulris hibridizcin alapul mdszer lnyegt (l. ksbb).
2.4. bra - 2.4. bra: A DNS ketts hlix: a lncok komplementer s antiparallel
kapcsoldsa
10
2. Nukleinsavak
11
2. Nukleinsavak
2.5. bra - 2.5. bra: Hiperkromicitsi grbe
2.3. A DNS-szerkezet szintjei

Elsdleges szerkezet. A DNS-lncokat ngyfle nukleotid pti fel. Ezek sorrendje trolja a genetikai
informcit, adja a lnc elsdleges szerkezett.
Msodlagos szerkezet. Vizes kzegben a DNS ktfle konformcit vesz fel. A stabil, termszetes B-forma
jobbmenetes csavar, egy fordulatot 10 bzispr alkot, a cukorfoszft-gerincek szablyos hlixet kpeznek (2.6.
bra). A kevsb stabil, szablytalan Z-forma balmenetes, cikkcakkos hlix, olyan rgikban fordul el, ahol
purinok s pirimidinek vltakoznak. Fiziolgis szerepe nem vilgos; valsznleg fehrjk felismersi helye s
ezltal szablyoz funkcija lehet.
Harmadlagos szerkezet. Kinyjtott llapotban a sejt DNS-e nagysgrendekkel hosszabb lenne, mint a sejt
tmrje; a szmra biztostott helyen gy csak ersen felcsavarodott, szuperheliklis formban fr el. Az egyik
lnc tvgsa a szuperhlix ellazulshoz vezet. Alakjt tekintve a DNS-molekula cirkulris (prokariota DNS-
ek, egyes vrusok genomja, mitokondrilis DNS) vagy lineris (egyes vrusok DNS-e, eukariota nukleris DNS)
lehet. Utbbi esetben a DNS-molekula szabad vgeinek megkettzdse klnleges problmt jelent a sejt
szmra (l. ksbb).
2.6. bra - 2.6. bra: B-DNS s Z-DNS
12
2. Nukleinsavak
Negyedleges szerkezet. Prokariota sejtekben a DNS nagyrszt csupasz formban van jelen, csak kevs fehrje
kapcsoldik hozz. Eukariotk sejtmagjban viszont a DNS nagy mennyisg fehrjvel komplexldva
kromatinllomnyt alkot. A dezoxiribonukleoprotein (DNP) fehrji strukturlis, katalitikus s szablyoz
funkcit tltenek be.
3. A ribonukleinsav (RNS)
3.1. Az RNS szerkezete
A DNS-hez hasonlan az RNS-t is nukleotidok alkotjk, egymshoz 3,5-foszfodiszter-ktssel kapcsoldva.
A cukorfoszft-gerinc pentz komponense a ribz, ennek 2-OH csoportja cskkenti a polinukleotidlnc
stabilitst hidrolizl hatsokkal (pl. lg) szemben. Az RNS-ben a timint uracil helyettesti, amely ugyancsak
adeninnel kpes bzisprt alkotni kt H-kts kialaktsval.
13
2. Nukleinsavak
Az RNS-molekulk elsdleges szerkezett is a nukleotidsorrend hatrozza meg. A legtbb RNS egyes lnc,
msodlagos szerkezetket azonban ketts lnc, hajtszer rgik teszik vltozatoss. Ezek a szerkezetek olyan
szakaszokon alakulnak ki, ahol a lnc nkomplementer, visszahajolva bzisprosods jhet ltre, akr tvoli
RNS-rszek kztt is. A DNS-molekulknl mr lert antiparallel orientci ezekre a hajtszer RNS-rgikra is
rvnyes. A ketts lnc rgik kialakulsa teht nagymrtkben specifikus az egyes RNS-molekulkra, hiszen
a lnc elsdleges szerkezettl fgg.
2.7. bra - 2.7. bra: Az eukariota riboszma 18S rRNS-nek msodlagos szerkezete
Klnsen jellemz a tRNS-ekre s az rRNS-ekre (2.7. bra). A msodlagos szerkezeti elemek kztt nem
kovalens egymsrahatsok alakulnak ki, harmadlagos struktrt, funkcionlis domneket ltrehozva. Az rRNS-
ek esetben az ersen specifikus s konzervlt domnszerkezet biztostja a riboszomlis fehrjk rgispecifikus
ktdst s a mkdkpes riboszma sszeszerelst. A fehrjekomplexek kialaktsa a tRNS-ek
kivtelvel, amelyek szabadon, oldhat formban vannak jelen a citoszlban ltalnos jellemzje az RNS-
eknek: negyedleges szerkezetkre az RNP-forma jellemz. Az utbbi vek jelents felismerse volt, hogy a
14
2. Nukleinsavak
ribonukleoprotein (RNP) partikulumokban a biolgiai funkcit ltalban az RNS ltja el, a fehrjknek inkbb
csak mdost, segt szerepk van.
3.2. Az RNS szerepe. RNS-tpusok

Az l sejtek rkletes tulajdonsgait a DNS-kben lev gnszakaszok bzissorrendje hatrozza meg,
megvalstsukrt pedig a gnek ltal kdolt fehrjk a felelsek. A DNS azonban kzvetlenl nem irnythatja
fehrjk szintzist; ennek egyik nyilvnval bizonytka az a tny, hogy eukariota sejtekben a DNS-t
tartalmaz kromatin s a fehrjeszintzist vgz riboszmk trben is elklnlnek egymstl. Hogy a gnek s
a fehrjk kztt RNS-ek kzvettenek, azt mr Watson s Crick is felvetette a ketts hlix modell
megalkotsnak idejn. A ksbbiek sorn egyrtelmen beigazoldott, hogy a sejtben lev klnbz RNS-
tpusok a genetikai informci kifejezsben, a gnexpresszi egyes fzisaiban tltenek be fontos szerepet.
Ennek els bizonytkt Brenner s munkatrsai szolgltattk 1961-ben. E. coli sejtek T2 bakteriofg fertzst
kveten lell a gazdasejt makromolekulinak szintzise, a fertztt sejt fgpartikulumokat termel, majd
elpusztul. Brennerk ksrletben a fgfertzst kveten a baktrium riboszmin jonnan szintetizlt, rvid
letidej RNS-ek jelentek meg. Mivel a gazdasejt RNS-einek kpzse ebben a fzisban mr megsznt, ezek az
RNS-ek csak a fg DNS-nek irnytsval kpzdhettek s a fg fehrjinek szintzist irnytottk. Ksbb
igazoldott, hogy ezek a fgspecifikus RNS-ek messenger RNS-ek (mRNS-ek), amelyek a fehrjeszintzis
templtjai: bzissorrendjkkel meghatrozzk a fehrjk aminosavsorrendjt. Prokariota, klnsen pedig
eukariota sejtek nagyszm, klnbz mRNS-t tartalmaznak, mreteloszlsuk heterogn, hiszen klnbz
nagysg fehrjket kdolnak.
A fehrjeszintzis gpezete szmra felsznt biztost riboszmk alkotrszei a riboszomlis RNS-ek (rRNS-ek)
(prokariotkban 5S, 16S, 23S, magasabb rend eukariotkban 5S, 5.8S, 18S, 28S szedimentcis llandval
jellemezhetk). rRNS-ek teszik ki a citoplazmatikus RNS-ek 8090%-t. Stabilak, nagy fokban konzervlt
elsdleges szerkezettel s konformcival rendelkeznek.
A transzfer RNS-ek (tRNS-ek) a legkisebb mret RNS-ek kz tartoznak (4S szedimentcis lland, kb. 80
nukleotid). Aminosavakat kovalensen ktnek s az mRNS nekik megfelel bzishrmashoz szlltjk ket
(adapter funkci).
A fehrjeszintzis folyamathoz kapcsoldik az eukariota sejtek 7SL RNS-e is: RNP-partikulum alkotrszeknt
segdkezik nveked fehrjelncoknak az endoplazmatikus retikulum membrnjn trtn tjuttatsban.
Ms RNS-ek eukariota sejtmagokban a pre-mRNS-ek vagy a pre-rRNS-ek rsi folyamataiban mkdnek kzre
RNP-partikulumok formjban (snRNS-ek [small nuclear], illetve snoRNS-ek [small nucleolar]). A
fehrjeszintzis folyamatban kzvetlenl rszt nem vev, n. ncRNS-ek (noncoding) szma folyamatosan n. A
telomerz RNS a replikciban, az siRNS-ek (small interfering) s az miRNS-ek (micro) a gnmkds
szablyozsban, az mRNS-ek lebontsban, ms ncRNS-fajtk a kromatinszerkezet szablyozsban vesznek
rszt.
Az egyes RNS-fajtk tulajdonsgaival, szerepvel a megfelel fejezetekben foglalkozunk.
3.3. Kataltikus RNS-ek

Az 1980-as vek egyik legvratlanabb molekulris biolgiai felismerse Cech s Altman nevhez fzdik:
RNS-ek enzimekknt mkdhetnek. Ezek a ribozimek kpesek lehetnek szakaszokat kihastani magukbl s a
megmaradt rgikat sszekapcsolni (auto-splicing), RNS-molekulkat meghatrozott helyen hastani
(endonuklez hats), oligonukleotidokat sszekapcsolni (ligz aktivits), peptidktst ltrehozni
(peptidiltranszferz funkci) s egyb reakcikat katalizlni.
3.4. RNS-vilg
Az RNS-funkcik sokrtsge megoldhatja a molekulris evolci kutatinak rgta fennll dilemmjt: a mai
lvilgban nukleinsavszintzis csak fehrjk kzremkdsvel folyhat, fehrjk pedig csak a nekik megfelel
polinukleotid-szekvencik irnytsval kpzdhetnek. Hogyan jhetett ltre az els l sejtben ez az egymsra
utalt, bonyolult nukleinsav-fehrje rendszer?
Egy lehetsges vlasz ez lehet: a legprimitvebb sejtekben RNS-molekulk mkdhettek nreprodukcira

kpes rkt anyagknt s a legfontosabb metabolikus reakcikat katalizl ribozimekknt. Ksbb
15
2. Nukleinsavak
kzremkdskkel lassan megjelentek a genetikai informcit stabilabban s hitelesebben rz DNS-

molekulk s a hatkonyabban katalizl fehrjk, vget vetve ezzel az RNS-vilgnak.
Ajnlott irodalom
4951, 107109, 112113.
Hall, S. S.: James Watson and the search for biologys Holy Grail. Smithsonian 1990/2, 4049.
Joyce, G. F. (1998): Nucleic acid enzymes: playing with a fuller deck. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5845
5847.
Joyce, G. F. (2002): The antiquity of RNA-based evolution. Nature 418, 214221.
Mattick, J. S., Makunin, I.V. (2006): Non-coding RNA. Human Mol. Genet. 15, R17R29.
Miller, R. V.: Bacterial gene swapping in nature. Scientific American, 1998/1, 4651.
16
3. fejezet - 3. Fehrjk
A fehrjk a sejt alapvet fontossg makromolekuli. Sokfle funkcit tlthetnek be: lehetnek a sejt szerkezeti
komponensei (pl. citoszkeleton fehrjk), ellthatnak vdfunkcit (pl. antitestek, stresszfehrjk), lehetnek
transzportproteinek (pl. importin), extracellulris (pl. hormonok) s intracellulris jeltviteli fehrjk (pl. adapter
proteinek), szablyoz fehrjk (pl. transzkripcis faktorok), receptorok (pl. hormonreceptorok), mindenekeltt
azonban enzimek, amelyek a sejt tbb ezer metabolikus reakcijt katalizljk. A sokrt funkcikat egysges
elv alapjn felpl molekulk ltjk el: a fehrjket lineris, el nem gaz, aminosavakbl felpl
polipeptidlncok alkotjk.
1. Aminosavak
1.1. Az aminosavak ltalnos jellemzi
A fehrjket alkot 20 aminosavra jellemz, hogy kt f funkcis csoportjuk, az amino- (-NH2) s a karboxil-
(-COOH) csoport, ugyanahhoz a sznatomhoz kapcsoldik (-aminosavak; 3.1. bra). A C-atom maradk
vegyrtkeit egy H-atom s az aminosav minsgt meghatroz oldallnc (R-csoport) foglalja le. A C-atom
teht aszimmetrikus (kirlis), a fehrjket felpt aminosavak L sztereoizomrek. Fiziolgis pH-viszonyok
mellett az aminosavak dipolris ionokknt viselkednek: mindkt funkcis csoportjuk ionizlt (-NH3+,-COO).
3.1. bra - 3.1. bra: Az aminosavak ltalnos szerkezete s a peptidkts kialakulsa
1.2. Az aminosavak osztlyozsa

Oldallncuk alapjn az aminosavakat ngy funkcionlis kategriba lehet sorolni. A bzikus aminosavak (lizin,
arginin, hisztidin) oldallncukban proton megktsre kpes aminocsoportot, a savasaminosavak
(aszparaginsav, glutaminsav) pedig egy msodik karboxilcsoportot tartalmaznak. Fehrjkben ezek az
aminosavak molekuln belli vagy molekulk kztti ionos ktsek kialaktsra kpesek. A tlts nlkli
polros aminosavak (szerin, treonin, tirozin, aszparagin, glutamin) a fehrjk kls felsznn lokalizldnak, a
polipeptidlnc kmiai mdosulsnak (foszforilci, glikozilci) gyakori clpontjai. Az apolros aminosavak
(alanin, valin, izoleucin, leucin, metionin, fenilalanin, triptofn, cisztein, glicin, prolin) vzzel nem rintkez
rgikban (a fehrjk belsejben, membrnok belsejben) helyezkednek el, egyes fajtik specilis funkcit
lthatnak el (pl. cisztein: diszulfidhd kialaktsa).
1.3. A peptidkts
Az amionosavak amino- s karboxilcsoportja kztt vzkilpssel alakul ki peptidkts (3.1. bra). A CO-NH
kts atomjai s a hozz kapcsold kt C-atom egy skban vannak, a C-atomok ktsei krl azonban rotci
lehetsges, lehetv tve a polipeptidlnc felcsavarodst, hromdimenzis fehrjeszerkezet kialakulst. A
17
3. Fehrjk
polipeptidlnc gerinct hrom csoport (-CO-NH-CH-) monoton ismtldse alkotja, ez elfelttele a szablyos
msodlagos struktrk ltrejttnek.
Brmilyen hossz egy fehrjelnc, egyik vgn szabad aminocsoport (N-vg vagy N-terminlis), a msik vgn
szabad karboxilcsoport (C-vg vagy C-terminlis) van. A polipeptidlnc teht polarizlt. Ha egy fehrjelnc
elsdleges szerkezett kell lernunk, azt mindig az N-terminlis vgtl kezdjk.
2. A fehrjeszerkezet szintjei
Hasonlan a nukleinsavakhoz, a fehrjk esetben is tbb, egymsra pl strukturlis szintet klnbztetnk
meg.
Az elsdleges szerkezet a fehrjt felpt aminosavak sorrendje, azaz a polipeptidlnchoz kapcsold

oldallncok minsge hatrozza meg.
3.2. bra - 3.2. bra: A fehrjk msodlagos szerkezeti elemei: -helix s -lemez
Msodlagos szerkezet alatt a polipeptidlnc gerincnek trbeli elhelyezkedst rtjk. Ez lehet vletlenszer
felcsavarods, amit ktsek nem stabilizlnak. Szablyos szerkezet jellemz az -hlixre s a -lemezre (3.2.
bra). Az -hlixben a polipeptidlnc rugszeren felcsavarodik, egy menetre kb. 3.5 aminosav esik. A
szerkezetet az egymshoz kzel kerl -CO- s -NH- csoportok kztt ltesl H-hidak stabilizljk. A -
lemezben enyhn hullmos polipeptidlnc-rgik futnak egymssal prhuzamosan, kztk H-ktsek
kpzdnek. Ezeket a szablyos, msodlagos struktrkat kanyarulatok, hurkok trik meg (3.3. bra).
Harmadlagos szerkezet . Az elzkben felsorolt msodlagos szerkezeti elemek trbeli elrendezdst, tovbbi
felcsavarodst nevezzk tercier struktrnak (3.3. bra). A szerkezetet az egymshoz kzel kerl aminosav-
oldallncok kztt ltesl egymsrahatsok (hidrofb, van der Waals, ionos klcsnhatsok, diszulfid-hidak)
stabilizljk. Ezek kialakulsnak lehetsge termszetesen fgg attl, milyen aminosavak vannak jelen a
polipeptidlnc kritikus helyein. Szmos megfigyels altmasztja, hogy a fehrjk trszerkezett,
konformcijt dnten meghatrozza elsdleges szerkezetk. Ez azt is jelenti, hogy klnbz fehrjk
hasonl aminosavsorrend rgii hasonl trszerkezetet vesznek fel (azonos pH, ionkoncentrci, hmrskleti
viszonyok kztt).
18
3. Fehrjk
3.3. bra - 3.3. bra: A ribonuklez harmadlagos szerkezete
A szekvenciahomolgia ezen kvetkezmnye klnbz fajok hasonl szerkezet fehrjire, illetve egy egyed
adott fehrjecsaldjnak tagjaira is rvnyes. Ezt az elvet hasznlja fel egy j s gyorsan fejld tudomnyg: a
fehrjestruktra molekulris modellezse szmtgpes programokat alkalmaz proteinek trszerkezetnek
szimullsra primr szerkezetk alapjn. Ezeknek a vizsglatoknak risi jelentsge van fehrje clpont
gygyszerek kifejlesztsben.
Sok fehrje tmren felcsavarodott, harmadlagos szerkezeti modulokbl, domnekbl pl fel (pl. kataltikus,
transzmembrn, DNS-kt domn). A 3.4. bra egy sejtfelszni receptor jellegzetes domnszerkezett mutatja.
Br a fehrjk konformcija elsdleges szerkezetk irnytsval spontn is kialakul, lteznek olyan fehrjk,
amelyek ezt a folyamatot a sejtben meggyorstjk. A chaperone fehrjk a sejt minden rszben megtallhatk,
s fontos szerepet jtszanak a natv fehrjeszerkezet kialaktsban, multiprotein komplexek sszelltsban,
fehrjk transzportjban, szortrozsban.
Negyedleges szerkezet azokat a fehrjket jellemzi, amelyek tbb polipeptidlncbl plnek fel (multimer
proteinek). A lncokat nem-kovalens ktsek, de diszulfidhidak is sszetarthatjk (3.4. bra).
3.4. bra - 3.4. bra: Az inzulinreceptor domnszerkezete
19
3. Fehrjk
A sejt mkdsben egyre kiemelkedbb szerepet tulajdontanak idleges vagy tarts fehrje
fehrjekapcsolatok kialaktsnak. A bonyolult biokmiai folyamatok legtbbjt hatalmas mret, gyakran tbb
tucat polipeptidlncbl ll fehrjekomplexek hajtjk vgre. Pldaknt emlthet a DNS-megkettzdst vgz
repliszma, az RNS-szintetizl transzkriptoszma, a fehrjeszintzishez felsznt biztost riboszma, a sejtmag
s a citoplazma kztt kzvett magprus-komplexum (l. rszletesen ksbbi fejezetekben). Ezekben a
fehrjegpezetekben metabolikus energia befektetsvel (ATP- vagy GTP-hidrolzissel) rendezett
konformcivltozsok jtszdnak le, melyek a komplex ltal vgrehajtand reakcik optimlis feltteleit,
nagyfok koordincijt biztostjk. A bonyolult fehrjekomplexek mkdsnek megrtse a molekulris
biolgia, biokmia s biofizika kzs erfesztse eredmnyekppen a kvetkez vekben vrhat.
3. Enzimek
A sejtek letjelensgeit a bennk lezajl anyagcsere-folyamatok tartjk fenn. A legtbb l sejtre jellemz
hmrskleten ezek a kmiai reakcik rendkvl lassan mennnek vgbe. A fehrjk elssorban azrt
ltfontosak, mert katalizljk a sejtet letben tart metabolikus reakcikat. Egy tlagos llati sejtben tbb ezer
klnbz enzim mkdik.
20
3. Fehrjk
Az enzimek mint biokataliztorok cskkentik a kmiai reakcik lezajlshoz szksges aktivlsi energit,
anlkl, hogy a szubsztrtok s termkek energiaszintjt befolysolnk (3.5. bra). Enzimhatsra a reakci
sebessge tbbmilliszorosra nvekedhet.
3.5. bra - 3.5. bra: Az enzim cskkenti a katalizlt reakci aktivlsi energijt
A reakci az enzim aktv helyn zajlik le. A szubsztrt s az aktv hely trszerkezete egymst kiegszti,
ktdskor a szubsztrtmolekula s az aktv centrum pontosan illeszked felletei kztt gyenge ktsek
alakulnak ki, ezek mintzata biztostja az enzim fajlagossgt (kulcs-zr mechanizmus). Az is elfordulhat, hogy
az optimlis aktv hely konformcit a szubsztrt ktdse hozza ltre (induklt illeszkeds mechanizmus). A
szubsztrtktdst mindenesetre a kmiai reakci lezajlsa kveti, majd a termkek felszabadulnak.
Az enzimmkdst szmos tnyez befolysolja. A molekulk hmozgsa s az enzim trszerkezete is fgg a

hmrsklettl. A krnyezet pH-ja s iontartalma elssorban az enzim konformcijt befolysolja. Sok enzim
mkdshez van szksg koenzimekre. Ezek kis molekulk, melyek az enzimreakci sorn irreverzibilis
vltozst nem szenvednek (pl. NAD+, koenzim A stb.).
Ajnlott irodalom
Alberts, B. (1998): The cell as a collection of protein machines: Preparing the next generation of molecular
biologists. Cell 92, 291294.
dm, V., Farag A., Machovich R., Mandl, J.: Orvosi biokmia. Semmelweis Kiad, Budapest, 336, 1996.
Bienstock, R. J.: Molecular modeling of protein structures. Science & Medicine, 1998/1, 5463.
Lehninger, A. L., Nelson, D. L., Cox, M. M.: Principles of Biochemistry. Worth Publishers, New York, 111
237, 1993.
5258.
21
4. fejezet - 4. Sznhidrtok s lipidek
1. Sznhidrtok
1.1. A sznhidrtok ltalnos jellemzse
A sznhidrtok sznbl, hidrognbl s oxignbl ll szerves vegyletek, amelyekben a H s O arnya
ltalban 2:1; sszettelk a (CH2O)n ltalnos kplettel rhat le. Mivel ez all a szably all szmos kivtel
ltezik, ennl jellemzbb tulajdonsguk, hogy tbb alkoholos hidroxilcsoportot, illetve cukoregysgenknt egy
oxocsoportot is tartalmaznak (polihidroxi aldehidek, illetve ketonok). A sznhidrtok aszimmetrikus (kirlis)
sznatomokat tartalmaznak, gy ugyanaz az sszegkplet szmos biolgiailag is eltr sztereoizomert takarhat.
A sznhidrtok energiaforrsknt, struktraalkot molekulkknt s makromolekulk, sejtek azonostst
szolgl markerekknt is szolglhatnak.
1.2. A sznhidrtok osztlyozsa

Monoszacharidok. Az egyszer sznhidrtok vzben olddnak, des zek, ezrt cukroknak is nevezzk ket.
Csoportostsuk sznatomszmuk alapjn lehetsges. Biolgiai fontossggal a trizok, pentzok s hexzok
rendelkeznek. A trizok (3 sznatomos cukrok) kz tartoz gliceraldehid s dioxiaceton fontos anyagcsere-
folyamatok kzti termkei. A pentzok (5 sznatomos cukrok) kz tartoz ribz s dezoxiribz a nukleozidok,
nukleotidok, nukleinsavak alkotrszei (l. 2. fejezet). A hexzok (6 sznatomos cukrok) legjelentsebb
kpviselje a glukz (szlcukor), a sejtek legfontosabb energiaforrsa, szmos sszetett sznhidrt alkotrsze.
A glukzaldehidcukor, amely lineris formban is ltezik, biolgiai rendszerekben azonban inkbb hatatomos
gyrs formjban van jelen, amelyben az 1. s 5. sznatomot oxignhd kti ssze. Az trendezds
kvetkeztben az 1. sznatom is aszimmetrikuss vlik, gy a glukznak ktfle sztereoizomrje ltezik: s
(4.1. bra). A gyrs szerkezet egybknt minden pentzra s hexzra jellemz. A mannz s a galaktz a
glukz sztereoizomrjei, a fruktz viszont ketohexz. Az l rendszerekben nemcsak egyszer cukrok, hanem
azok klnbz szrmazkai is elfordulnak (pl. glukuronsav, N-acetilglukzamin, N-acetilgalaktzamin,
szilsav stb.). Ezek glikoproteinek, glikolipidek, glikzaminogliknok alkotelemei (l. ksbb).
4.1. bra - 4.1. bra: A glukz lineris s gyrs szerkezete: s konfigurci
22
4. Sznhidrtok s lipidek
Diszacharidok. Cukrok hidroxilcsoportjai kztt vzkilpssel kovalens kts (glikozidos kts) alakulhat ki. A
diszacharidok legismertebb kpviseli a szacharz (rpacukor; glukz 1 2 fruktz), a maltz (maltacukor;
glukz 1 4 glukz, 4.2. bra) s a laktz (tejcukor; galaktz 1 4 glukz).
4.2. bra - 4.2. bra: A maltz szerkezete
Oligoszacharidok. Nhny cukor, cukorszrmazk egysgbl felpl sznhidrtok, melyek fehrjkhez,

lipidekhez kapcsoldnak kovalens ktssel. Fehrjk sejteken belli lokalizcijt, illetve a sejtek identitst
meghatroz markerekknt mkdnek.
Poliszacharidok. Nagyszm hexz egysgbl felpl makromolekulk. A cellulz a nvnyi sejtfal

mechanikai stabilitst biztost sszetett sznhidrt. Poli (1 4 glukz) lncai kinyjtott, el nem gaz
rostok, melyek egymshoz H-hidakkal kapcsoldva ktegeket alkotnak. A nvnyi tartalk tpanyag kemnyt
ugyancsak glukzpoliszacharid, szerkezete azonban nem hasonlt a cellulzhoz (4.3. bra). 1 4 ktsei
heliklis konformcit biztostanak a lncok szmra, amilz alkotrsze elgazsokat nem tartalmaz, az
23
amilopektin komponensben viszont egy-egy 16 kts elgazst hoz ltre. Az llati tartalk tpanyag glikogn
szerkezete az amilopektinhez hasonlt.
4.3. bra - 4.3. bra: A cellulz s a kemnyt szerkezete
Specilis poliszacharidok a glikzaminogliknok. Ismtld diszacharid egysgekbl plnek fel, amelyeket

hexzszrmazkok alkotnak. A legtbb glikzaminoglikn (kondroitin-szulft, heparin, dermatn-szulft stb.)
egyes hidroxilcsoportjait knsav szteresti; a szulftcsoportok ers negatv tltst adnak a molekulnak, ami
vizet ktve glt kpez. Ez a hidratlt, kocsonys anyag adja az extracellulris mtrix alapllomnyt. A
glikzaminogliknok ltalban fehrjkhez ktve hatalmas makromolekulris komplexeket, proteogliknokat
alkotnak.
2. Lipidek
2.1. A lipidek ltalnos jellemzse
A lipidek kmiai szerkezet szempontjbl heterogn szerves vegyletcsoport. Tagjainak kzs jellemzje, hogy
hidrofb jelleg molekulk: vzben rosszul, szerves oldszerekben (ter, kloroform stb.) viszont jl olddnak.
Egyes lipidek (pl. trigliceridek) f funkcija az energiatrols: lebontsuk sorn nagy mennyisg energia
szabadul fel, amit a sejt ATP-szintzisre hasznl fel. A lipidek egy nagy csoportja (foszfolipidek, glikolipidek,
24
koleszterin) amfipatikus jelleg: molekuljuk hidrofb s hidrofil rgit is tartalmaz. Ezek a lipidek alkotjk a
biolgiai membrnok lipid ketts rtegt. Szmos lipid jeltviv molekula: kzvettknt mkdik a sejtek
kztti (pl. szteroid hormonok, retinoidok) s a sejten belli (pl. szteroidok, retinoidok, foszfatidilinozitol
szrmazkok, ceramid) szignl transzdukcis folyamatokban.
2.2. A lipidek osztlyozsa

Trigliceridek. Ezek a lipidek a glicerinnek 3 hossz sznlnc zsrsavval alkotott szterei (4.4. bra). A
zsrsavak lehetnek teltettek (azaz nem tartalmaznak ketts ktseket, pl. palmitinsav, sztearinsav) s teltetlenek
(egy vagy tbb ketts kts van bennk, pl. olajsav). A trigliceridek vzben gyakorlatilag oldhatatlanok, a sejtek
citoplazmjban zsrcseppekknt troldnak.
4.4. bra - 4.4. bra: Triglicerid (A.) s foszfolipid (B.) szerkezete
A foszfolipidek kzs jellemzje, hogy foszftcsoportot tartalmaznak, amely hidrofil csoportot alkot a
molekulkban. A glicerinfoszfolipidekben a glicerin hidroxilcsoportjait kt zsrsav s egy foszforsav szteresti,
utbbihoz szterktssel valamilyen alkohol kapcsoldhat. A glicerinfoszfolipidek elnevezse az
alkoholkomponens alapjn trtnik (foszfatidilkolin, -etanolamin, -szerin, -inozitol). A foszfolipidek msik
csoportja a szfingomielinek: ezekben egy hossz sznlnc alkohol (szfingozin) zsrsavval kapcsoldva
ceramidot hoz ltre, amit foszfokolin szterest (4.5. bra).
Glikolipidek. Sznhidrttartalm membrnlipidek, amelyek a membrnok exoplazmatikus (azaz a citoszllal

ellenttes oldali) lemezben helyezkednek el. A sejtfelszni glikolipidek fontosak a sejtek felismersben (pl.
25
vrcsoportanyagok). A cerebrozidokban a cukorkomponens ceramidhoz ktdik, a gangliozidok kzs

jellemzje pedig, hogy egy specilis cukorszrmazkot, a szilsavat tartalmazzk.
A szteroidok szerkezete teljesen eltr az eddig lert lipidektl. Hrom hatsznatomos s egy tsznatomos
gyrbl ll szternvz alkotja alapstruktrjukat, a vzhoz kapcsold csoportok szabjk meg minsgket
(4.6. bra). A szteroidok prototpusa a koleszterin, amely amfipatikus lipid lvn eukariota membrnok
komponense, msrszt viszont egyb szteroidok (pl. szteroid hormonok) elanyaga.
A karotinoidok konjuglt ketts ktseket tartalmaz, sznes molekulk. A -karotin (4.7. bra) nvnyi sejtek
fotoszintetikus pigmentje. A retinal a gerinces szem plcikiban a rodopszin prosztetikus csoportja. A
retinoidok (pl. retinsav) a gerincesek embrionlis fejldsben fontos szerepet jtsz A-vitamin szrmazkok.
4.5. bra - 4.5. bra: A szfingomielin szerkezete
4.6. bra - 4.6. A szternvz szerkezete
26
4.7. bra - 4.7. bra: A -karotin szerkezete
Ajnlott irodalom
Lehninger, A. L., Nelson, D. L., Cox, M. M.: Principles of Biochemistry. Worth Publishers, New York, 240
266, 298323, 1993.
4449.
27
5. fejezet - 5. Morfolgiai vizsgl
mdszerek I.: Fnymikroszkpia
Mita a XVII. szzad msodik felben Hooke angol tuds megszerkesztette az els tbb lencsbl ll sszetett
mikroszkpot, majd a holland Leeuwenhoek elszr figyelt meg l sejteket, a fnymikroszkp a
sejtbiolgusok, szvettanszok, patolgusok alapvet vizsgleszkze. Br egyes paramterei (pl.
feloldkpessg) javtsnak az optika trvnyei hatrt szabnak, szmtgpes technikk segtsgvel a
kpalkotsi eljrsok jabb lehetsgei nylnak meg. Napjainkban ezrt a fnymikroszkp az informatika
forradalmnak ksznheten jabb aranykort li.
1. A kznsges fnymikroszkp
1.1. A mikroszkp felptse
Az sszetett mikroszkp kt, tandem elhelyezkeds nagyt lencserendszerbl, az objektvbl s az okulrbl
ll (5.1. bra). A modern mikroszkp optikai rendszert jrulkos lencserendszerek s fnyforrsok egsztik ki.
A megvilgts lehet transzmisszis (a vizsglt trgyon tmen) s reflexis (az objektum ltal visszavert
sugarakat ad). A kznsges transzmisszis mikroszkp fnyforrsbl szrmaz fnyt a kondenzor
lencserendszer sszpontostja a trgyasztalon elhelyezett objektumra, annak a vizsglat cljt legjobban
szolgl megvilgtst biztostva. A mikroszkp klnbz nagyts trgylencsit (objektvjeit) mozgathat
revolverfoglalat tartja. Az objektvbl atubuson keresztl a szemlencskbe (okulrokba) vagy a mikroszkpra
szerelhet fnykpezgpbe vagy videokamerba juthatnak a fnysugarak. A megvilgts erssge, a
lencserendszerek helyzete belltcsavarokkal vltoztathat. A klnbz alkotrszeket a mikroszkp
llvnyra rgztik.
5.1. bra - 5.1. bra: A fnymikroszkp felptse. A: A mikroszkp rszei. B: A fny

tja
28
5. Morfolgiai vizsgl mdszerek
I.: Fnymikroszkpia
1.2. A kpalkots elve

A mikroszkpban keletkez kpet az objektv s okulr lencserendszer hozza ltre (5.2. bra). A vizsglt
objektum a trgylencse fkuszpontjn kvl helyezkedik el, rla az objektv fordtott lls, nagytott, valdi
intermedier kpet hoz ltre. A mikroszkp tubust gy tervezik meg, hogy ez a kp az okulr fkuszpontjn
bellre essen. Az eredmny: a trgyhoz kpest fordtott lls, ersen nagytott, ltszlagos kp.
5.2. bra - 5.2. bra: A kp keletkezse a fnymikroszkpban (F1 s F2 a lencsk

fkuszpontjai)
29
I.: Fnymikroszkpia
1.3. Nagyts s feloldkpessg

A mikroszkp nagytst (a kp s a trgy mretnek hnyadost) az objektv s az okulr sajt nagytsnak
szorzata adja. A lefnykpezett kpet azutn fototechnikai ton elvileg korltlan mrtkben tovbb lehetne
nagytani. Ennek azonban nem sok rtelme lenne, mert a nagyts nvelsvel nem lehet tovbbi rszleteket
lthatv tenni a kpen.
A mikroszkpok feloldkpessgt (kt kzeli pont megklnbztetsnek a kpessgt) az alkalmazott

sugrzs hullmtermszete korltozza. A vizsglt objektum optikai rcsknt viselkedik: a rajta tmen hullmok
elhajlst (diffrakcit) szenvednek s a fellp interferenciajelensgek sszezavarjk a kpzd kpet. A hats
annl kifejezettebb, minl kzelebb vannak egymshoz a vizsglt trgy diffrakcit elidz elemei. A
mikroszkp feloldsi hatra (az egymstl mg megklnbztethet pontok tvolsga) nagysgrendben
megfelel az alkalmazott sugrzs hullmhossznak. Lthat fnnyel (l = 400700 nm) mkd fnymikroszkp
maximlis feloldkpessge kb. 200 nm. A feloldsi hatr (d) az albbi egyszer kplettel szmthat:
ahol a fny hullmhossza, NA pedig a numerikus apertra, amely az objektv fnysszegyjt kpessgt
fejezi ki; fgg az objektv frontlencsjnek erssgtl s a trgy s az objektv kztti kzeg trsmutatjtl
(leveg: 1, immerzis olaj: 1.4).
1.4. Kontrasztfokozs
Hogy egy kplet megfigyelhet-e a mikroszkpban, kt tnyeztl fgg: a feloldkpessgtl s a
kontraszthatsoktl, azaz attl, hogy fnyabszorpcija eltr-e a krnyezettl. A kznsges
fnymikroszkpban a lttr vilgos, a vizsglt objektumoknak jelents fnyabszorpcit kell produklniuk az
rzkelhet kontrasztossg elrshez. Ezt leggyakrabban a vizsglt szvet fixlsval, metszsvel s festsvel
rik el. l sejtek tanulmnyozsra a kznsges fnymikroszkp ltalban nem alkalmas, ehhez specilis
optikai rendszerekre van szksg.
2. Klnleges mikroszkpok
2.1. Fziskontraszt- s differencilis interferencia kontraszt
mikroszkp
A kontraszthatsokat a vizsglt metszet klnbz rszei kztt fellp fnyabszorpci-eltrsek okozzk. l
sejtek esetben ezek a klnbsgek ltalban cseklyek. A transzparens s abszorbel terleteken thalad
fnysugarak kztt ltrejn ugyan kismrtk fziseltolds, az interferencia azonban nem okoz jl rzkelhet
fnyamplitd-vltozst. A fziskontraszt-mikroszkpban, illetve a differencilis interferencia kontraszt
30
I.: Fnymikroszkpia
mikroszkpban optikai eszkzkkel lltanak el a sejten thalad fnysugarak kztt optimlis mrtk
fziseltoldst, mely ers amplitdvltozshoz (erstshez vagy kioltshoz) vezet.
A kapott kp videokamerval is rgzthet, elektronikus formban trolhat. A videomikroszkppal nyert kpet

digitlis ton, a httr cskkentsvel tovbb lehet javtani. A szmtgpes kontrasztfokozs a
fnymikroszkpia j, sokat gr mdszere.
2.2. Sttltter mikroszkp

Specilis kondenzor segtsgvel elrhet, hogy a vizsglt objektumot ne a mikroszkp optikai tengelyben,
hanem oldalrl vilgtsk meg. Ebben az esetben az objektvbe csak a trgy ltal sztszrt sugarak egy rsze jut
be, a httr stt marad. A sttltter mikroszkpban a vizsglt trgy klnbz rszei kztt fellp
minimlis fnyintenzitsbeli eltrsek is rzkelhetk a fekete httr eltt.
2.3. Polarizcis mikroszkp

Az anizotrp (kettsen tr) struktrkra jellemz, hogy trsmutatjuk kt egymsra merleges skban eltr.
Ennek kvetkeztben kpesek arra, hogy trbeli orientcijuktl fggen a rjuk es polros fnysugarak
rezgsi skjt elforgassk. Az anizotrp anyagok (a biolgiai struktrkban ilyenek pldul bizonyos szervetlen
kristlyok, rendezett struktrk, fehrjerost-ktegek) polarizcis mikroszkppal jl vizsglhatk (5.3. bra).
A vizsglt minta kt polrszr (polariztor s analiztor) kztt helyezkedik el. Ha a kt szr rezgsi skja
prhuzamos, a polariztor ltal ltrehozott polros fnysugr akadlytalanul tjut az analiztoron s megvilgtja
a ltteret. A polrszrk keresztezett llsa stt ltteret eredmnyez. Ha azonban a vizsglt objektum
kettsen tr struktrkat tartalmaz, azok sajt rezgsi skjai elforgathatjk a polarizlt fnysugr rezgsi skjt
s az az analiztoron thatolva vilgoss teszi az anizotrp rgikat, mg a trgy tbbi, izotrp rsze s a lttr
stt marad. A polarizcis mikroszkppal vgzett vizsglatok gy az objektum szubmikroszkpos, molekulris
szerkezetre is kvetkeztetni engednek.
5.3. bra - 5.3. bra: A polarizcis mikroszkp mkdsi elve (a: prhuzamos
polrszrk; b: keresztezett polrszrk; c: anizotrp kplet vizsglata keresztezett
polrszrk mellett)
31
I.: Fnymikroszkpia
2.4. Fluoreszcencia-mikroszkp
A vizsglt objektum fluoreszcens festkekkel (fluorokrmokkal) is festhet. Ezek az anyagok meghatrozott
hullmhossz fnysugarakat elnyelnek s kisebb energij (nagyobb hullmhosszsg) sugarakat bocstanak
ki. A modern fluoreszcencia- mikroszkpban (5.4. bra) a fnyforrs sugaraibl specilis filterrel (elsdleges
szr) lltjk el a kvnt hullmhossz megvilgt fnyt. Ezt dikroikus (sugrsztvlaszt)tkr irnytja a
trgyra: a tkr a kisebb hullmhossz sugarakat visszaveri, a nagyobb hullmhosszakat (pldul a trgy ltal
kibocstottakat) viszont tengedi. A megvilgt fny a vizsglati objektumban fluoreszcencit kelt, az emittlt
sugarakat az objektv gyjti ssze, majd, miutn egy msodlagos filter kiszri kzlk a nemkvnatos
sugarakat, az okulrba jutnak.
5.4. bra - 5.4.bra: A fluoreszcencia mikroszkp felptse s mkdsi elve
32
I.: Fnymikroszkpia
A fluoreszcencia-mikroszkp alkalmazsi lehetsgei egyre bvlnek. Fluorokrmokkal meghatrozhat az

intracellulris Ca++-koncentrci, pH, fluoreszcens festkkel (pl. fluoreszceinnel, rodaminnal) specifikus
antitestek, nukleinsavprbk jellhetk meg. (Az ezeket felhasznl immunfluoreszcencia-mikroszkpia, illetve
in situ hibridizci mdszereivel ksbbi fejezetekben foglalkozunk.)
2.5. Konfoklis mikroszkp

A fluoreszcencia-mikroszkpok ernye a stt httr eltt elrhet nagy rzkenysg s kitn kontraszthats.
Htrnyuk azonban, hogy emittlt sugarak a fkuszsk alatti s feletti metszetrtegekbl is rkezhetnek,
elmosdv tve a kpet. A konfoklis mikroszkpban a fluoreszcencia-mikroszkpia s az elektronikus
kpanalzis eszkzeinek kombinlsval megoldottk ezt a problmt.
A konfoklis mikroszkp rendkvl bonyolult s drga mszer, mkdsi elve azonban egyszer (5.5. bra). Az
ramforrsbl rkez sugarakkal egy optikai rs segtsgvel a vizsglt objektumban pontszer megvilgtst
alkalmaznak. A fluoreszcens festk ltal emittlt sugarakat egy, a megvilgt rsnek megfelel, azzal
konfoklis nylson keresztl tovbbtjk a mikroszkp detektorba. A fkuszlt, pontszer megvilgts
minimliss teszi a megclzott ponttl eltr helyen keltett fluoreszcencit, az gy keletkez gyenge sugrzst
is kiszri a msodik fnyrekesz (5.5.B. bra). A detektorba jutott kpet videokamera rgzti, a kp tovbbi
tiszttsa digitlis ton trtnik. A megvilgtott pont vltoztatsval a vizsglt sejt vgigpsztzhat, st,
annak klnbz mlysg rtegeinek lekpezsbl a komputer hromdimenzis kpet tud szerkeszteni
(optikai metszetkszts).
5.5. bra - 5.5. bra: A konfoklis mikroszkp mkdsi elve (A: a fluoreszcens
objektum megvilgtsa; B: a fkuszpontbl s azon kvli rgibl szrmaz
fnysugarak sorsa)
33
I.: Fnymikroszkpia
3. Fnymikroszkpos vizsglatok l sejtekben

A fluoreszcens jells technolgijnak fejldse s a nagy teljestmny fnymikroszkpok kifejlesztse
lehetv tette a fixlatlan l sejtek folyamatainak vizsglatt, az l sejt mikroszkpia megjelenst. A sejtbe
fluorokrmmal jellt molekulkat (pl. lipideket, fehrjket, nukleinsavakat, organellum-specifikus festkeket
stb.) juttatnak, majd azok sorst konfoklis mikroszkpban ksrik figyelemmel. A sejtek letkpessgnek
fenntartsra a trgyasztal specilis kamrjban optimlis feltteleket (hmrsklet, pratartalom, a leveg
sszettele) kell biztostani s korltozni kell a megvilgts ltal kivltott sejtkrosodst is.
Az l sejt mikroszkpit leggyakrabban fehrjk sejten belli mozgsnak, fehrje-fehrjekapcsolatok

kialakulsnak tanulmnyozsra hasznljk. A terlet fejldst nagy mrtkben meggyorstotta egy
medzafajban azonostott autofluoreszcens fehrje, az n. zld fluoreszcens protein bevezetse a
mikroszkpiba. A rekombinns DNS technolgia mdszereinek felhasznlsval (l. 9. fejezet) a zld
fluoreszcens fehrjt brmilyen proteinhez hozz lehet kapcsolni s a fzis fehrjt a vizsgland sejtben lehet
termeltetni, fluoreszcencijt pedig konfoklis mikroszkpival lehet tanulmnyozni az l sejtben. Ms
llnyekbl jabb fluoreszkl fehrjket izolltak, illetve a zld fluoreszcens fehrje gnjnek clzott
mutcijval szmos, ms sznben fluoreszkl fehrjt is ellltottak, tovbb szlestve ezen fehrjk
sejtbiolgiai alkalmazsnak lehetsgeit.
Az l sejt mikroszkpia a sejtbiolgia s a biofizika gyorsan fejld terlete. Mivel nemcsak sejtkultrkban,
hanem az l szervezetben is alkalmazhat, vrhatan az emberi betegsgek diagnosztikjban is jelents jv
vr erre a tudomnyterletre.
Ajnlott irodalom
2128.
Lichtmann, J. W.: Confocal microscopy. Scientific American, 1994/8, 3035.
Stephens, D. J., Allan, V. J. (2003): Light microscopy techniques for live cell imaging. Science 300, 8286.
34
I.: Fnymikroszkpia
Wiedenmann, J., Oswald, F., Nienhaus, G. U. (2009): Fluorescent proteins for live cell imaging: opportunities,
limitations, and challenges. IUBMB Life 61, 10291042.
35
6. fejezet - 6. Morfolgiai
vizsglmdszerek II.:
Elektronmikroszkpia
A mikroszkpokkal elrhet maximlis feloldkpessget az alkalmazott sugr hullmhossza szabja meg (l. 5.
fejezet). A fnymikroszkp esetben ezt a hatrt (kb. 200 nm) mr a XIX. szzad vgn elrtk. A mikroszkpia
azta vgbement fejldse a kpminsget, kontraszthatsokat, festsi s mintaelksztsi eljrsokat
tkletestette, a feloldkpessget azonban mr nem javthatta. A felismers, hogy az elektronsugarak
hullmhossza nagysgrendekkel kisebb mint a fnysugarak, gy velk a fnymikroszkpnl sokkal jobb
felbonts rhet el, az 1930-as vekben az elektronmikroszkpok kifejlesztshez vezetett. A transzmisszis
elektronmikroszkpban a vizsglt mintn thatol, mg a psztz elektronmikroszkpban az objektum
felletrl sztszrt elektronok hozzk ltre a kpet.
1. Transzmisszis elektronmikroszkp
1.1. Felpts, mkdsi elv
A transzmisszis elektronmikroszkpban (6.1. bra) az elektronsugr forrsa az elektrongy. A katdbl a
gyorstfeszltsg hatsra kilp elektronok az and nylsn keresztl jutnak a mikroszkp kpalkot
rendszerbe. A vkuumban szguld elektronokat a fnymikroszkpban alkalmazott optikai lencserendszerekkel
analg elektromgneses lencsk (kondenzor, objektv s projektor lencsk) fkuszljk. A kondenzor s az
objektv kztt elhelyezett objektum klnbz elektronszrs rgiin az thalad elektronok tja eltr
mrtkben vltozik meg. A szrdott elektronokat kiszrik, az irnyvltozs nlkl thalad sugarakat pedig
fluoreszkl ernyn vagy fotolemezenkpezik le.
A mikroszkp feloldkpessgt elssorban a gyorstfeszltsg hatrozza meg, hiszen ennek rtke fordtottan
arnyos az elektronsugr hullmhosszval. Hagyomnyos elektronmikroszkp esetben, biolgiai anyagok
vizsglatnl, 100 kV-os gyorstfeszltsggel kb. 0.1 nm-es maximlis feloldkpessg rhet el.
Nagyfeszltsg elektronmikroszkpban tbb milli voltos gyorstfeszltsg is alkalmazhat. A megnvelt
felolds mellett ennek elnye, hogy vastag metszetek, prepartumok vizsglatra, trhats kp nyersre is
alkalmas.
1.2. A minta elksztse

A nagy feloldkpessg miatt az elektronmikroszkpos mintapreparls alapvet clja kell, hogy legyen a
vizsglati anyag kmletes, a finom szerkezetet minl jobban megrz rgztse. ltalban ketts fixlst
alkalmaznak: aldehidekkel (formaldehid, glutraldehid) a fehrjk kztt hoznak ltre keresztktseket, az
ozmiumtetroxid pedig a teltetlen zsrsavakhoz ktdve elssorban a membrnokat rgzti. A kmiai
fixatvumokon kvl kriofixls is alkalmazhat: kismret objektumok hirtelen lehtssel a sejtszerkezet
minimlis krosodsval rgzthetk. A szvetblokkot begyazssal teszik alkalmass a metszsre. Erre
ltalban mgyantkat (rezineket) hasznlnak. Htrnyuk, hogy krostjk a magasabb rend sejtek
citoplazmatikus s nukleris fehrjefonal-hlzatait. A citoszkeleton s a magmtrix vizsglatra jabban n.
rezinmentes,ultravkony metszeteket hasznlnak.
6.1. bra - 6.1. bra: A transzmisszis elektronmikroszkp felptsi elve
36
6. Morfolgiai vizsglmdszerek
II.: Elektronmikroszkpia
A begyazott vizsglati blokkbl ultramikrotommal ultravkony (50100 nm vastagsg) metszeteket

ksztenek, melyeket fmrcsra (gridre) visznek fel. A vizsglat sorn az elektronok szrdsa a mintban
jelenlev elemek rendszmtl fgg: a kpalkotshoz szksges elektronszrssal csak nehzfmek
rendelkeznek. A fixlshoz hasznlt ozmium a clnak megfelel, a kontrasztfokozs rdekben azonban ltalban
utfestsre van szksg. Utkontrasztostsra leggyakrabban urn- vagy lomskat hasznlnak. Az ilyen
hagyomnyos eljrssal nyert kpeken az elektronszrv tett organellumok (membrnok, kromatin,
riboszmk stb.) stt kpletekknt jelennek meg.
1.3. Specilis vizsglati mdszerek

Fmgzls (rnykols). A fmgzls egyenetlen felsznek, izollt makromolekulk, partikulumok
vizsglatra alkalmas. A vizsglati anyagot zrt trben, vkuumban elprologtatott nehzfmmel (pl. platinval)
vonjk be. A fmgzls trtnhet egy meghatrozott irnybl (szgrnykols) vagy az objektum forgatsa
kzben (krrnykols). Elbbi esetben (6.2. bra) a felszn egyes rszei rnykban maradhatnak: nem
rakdnak le rjuk fmszemcsk. A fmrteget szilrdt karbonfilmmel vonjk be, majd a biolgiai mintt
specilis oldszerrel eltvoltjk alla. Az elektronmikroszkpban a karbonrtegbl s platinabevonatbl ll
replika vizsglata trtnik. A szgrnykolssal kapott kp trhats; az rnykok hossznak s a fmgzls
szgnek ismeretben az egyes kpletek (vrusok, RNP-szemcsk) magassga is meghatrozhat.
Krrnykolst ltalban hossz, filamentzus kpletek (DNS, RNS, kromatinfonalak) vizsglatra hasznlnak;
a kp nem trhats, de kontrasztos.
6.2. bra - 6.2. bra: Szgrnykolssal fmgzlt replika ksztse
37
Fagyasztva trs/marats. Ha a vizsgland sejteket folykony nitrognben 196 C-on hirtelen

megfagyasztjk, a vz apr kristlyok formjban fagy meg, a sejten belli struktrk kevss krosodnak. A
megfagyott blokkot mikrotomkssel kett lehet pattintani (fagyasztva trs [angol kifejezssel freeze-
fracture]). A trs skja ltalban a membrnfelszneknl, gyakran egy hrtya kt lipidrtege kztt halad. A
prepartumrl fmgzlses replika kszthet a trsi felszn vizsglatra: a ketthastott membrnok
transzmembrnfehrji ilyenkor az egyik felsznen intramembrn partikulumokknt jelennek meg. Ha a replika
elksztse eltt vkuumban a jeget szublimltatjk a trsi felsznrl, a kimardott felsznrl kszlt replika a
sejtorganellumok felsznrl, topogrfiai viszonyairl ad trhats kp formjban informcit (az eljrs neve:
fagyasztva marats [angolul freeze-etch]).
Negatv fests. Izollt organellumok, rszecskk, makromolekulk olyan elektronszr festkkel is lthatv
tehetk, mely a vizsglt anyaghoz nem ktdik, krnyezett viszont elektronszrv teszi. A karbonfilmen
szlesztett partikulumokat lecseppentik a festk oldatval (pl. uranilacetttal), beszrtjk s transzmisszis
elektronmikroszkppal vizsgljk a prepartumot. A negatv kontrasztosts a partikulumok felszni
viszonyainak tanulmnyozsra klnsen alkalmas.
6.3. bra - 6.3. bra: A fagyasztva trs (A) s a fagyasztva marats (B) elve
38
2. Psztz elektronmikroszkp
A psztz (angolul scanning) elektronmikroszkp prototpust mr az 1930-as vekben megalkottk, a
sejtbiolgiai vizsglatokra alkalmas kszlkek azonban csak az 1960-as vektl kezdtek elterjedni. Az
rnykolsi technikkhoz hasonlan a vizsglt objektum felszni viszonyairl ad hromdimenzis kpet (6.4.
bra). A minta felsznt vkony nehzfmrteggel (pl. platinval) vonjk be, majd egy fkuszlt
elektronsugrral vgigpsztzzk. A becsapod elektronok szrdnak, illetve msodlagos elektronok
kibocstst gerjesztik a fmbevonatban. A felsznrl visszaverd szekunder elektronokat detektor gyjti ssze
s TV-kpernyn hozza ltre a trhats kpet. A psztz elektronmikroszkpok htrnya, hogy
feloldkpessgk (nhny nanomter) elmarad a hagyomnyos transzmisszis kszlkektl.
6.4. bra - 6.4. bra: A psztz elektronmikroszkp felptsi elve
Ajnlott irodalom
2830.
Komromy L.: Biolgiai gyakorlatok (egyetemi jegyzet). Pcs, 133164, 1990.
Penman, S. (1995): Rethinking cell structure. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 52515257.
39
7. fejezet - 7. molekulk nyomon
kvetse a sejtben
Az l sejt dinamikus struktra: benne makromolekulk kpzdnek, mdosulnak, esetleg helyket vltoztatjk,
vgl lebomlanak. A hagyomnyos mikroszkpos vizsglatok (de sok biokmiai, molekulris biolgiai mdszer
is) a sejt egy adott pillanatra jellemz llapotrl ksztenek pillanatfelvtelt, kevs informcit szolgltatnak az
l anyagban llandan vgbemen vltozsokrl. Ebben a fejezetben azokrl a sejtbiolgiai mdszerekrl lesz
sz, melyek a sejt egyes molekulinak kpzdst, rst, lebontst, a molekulk sorst kpesek nyomon
kvetni.
1. Radioaktv izotpok alkalmazsa a sejtbiolgiban

Az izotpok ugyanazon elemnek klnbz tmegszm varinsai: bennk a protonok (s elektronok) szma
azonos, a neutronok szmban azonban klnbznek. Az azonos rendszm azonos kmiai viselkedst jelent, a
sejt ezrt ugyanazon elem klnbz izotpjai kztt nem tud klnbsget tenni, egyformn pti be ket
molekuliba. A radioaktv izotpok (radioizotpok) instabil atommaggal rendelkeznek: vletlenszer
elbomlsuk radioaktv sugrzst eredmnyez (pl. -sugrzst [elektronokat], -sugrzst), amely megfelel
mszerrel rzkelhet.
Az l anyagot felpt szmos elem radioizotpja alkalmas intracellulris folyamatok tanulmnyozsra (a

leggyakrabban alkalmazottak nhny jellemzjt foglalja ssze a 7.1. tblzat). A radioizotpot olyan
molekulban hozzk ltre, mely a sejtbe bejutva a vizsglat trgyt kpez clmolekulba pl be. Az ilyen
jellt prekurzor sejten belli sorsnak kvetsre tbbfle lehetsg addik.
1.1. Autoradiogrfia
A fny- s elektronmikroszkpos autoradiogrfia alkalmas lgy -sugrz izotppal (pl. 3H-mal) jellt
prekurzor molekulk sejten belli detektlsra. Az in vivo vagy sejtkultrban vgrehajtott jells utn a
vizsglati anyagbl mikroszkpos prepartumot ksztenek, a metszetet vkony fotoemulzis rteggel vonjk be
(7.1.A. bra), majd megfelel ideig expozcit vgeznek. A vizsglt sejtekbe beplt radioaktv prekurzor
molekulkbl szrmaz elektronok az ezstbromid kristlyokban fotokmiai reakcit idznek el. Ezek elhvs
utn fekete ezstszemcsk (angol kifejezssel grainek) formjban jellik a metszet felett a radioaktvv vlt
rgikat. Az autoradiogrfival sokfle makromolekula szintzise vizsglhat: jellt timidinnel pldul a DNS-
replikci (7.1.B. bra), uridinnel az RNS-szintzis, aminosavakkal a fehrjeszintzis, monoszacharidokkal a
fehrjeglikozilci folyamata tanulmnyozhat.
Az autoradiogrfia nemcsak mikroszkpos eljrs, bizonyos szeparcis mdszerekkel sztvlasztott radioaktv,

vagy az eljrs sorn radioaktvv tett makromolekulk detektlsra is alkalmas. Vkony gllemezben, papron
vagy membrnon vgzett elektroforzist, vkonyrteg kromatogrfit (l. 8. fejezet) kveten a sztvlasztott
radioaktv molekulkat gy mutatjk ki, hogy a glre vagy lemezre rntgenfilmet helyeznek, expozcit, majd
elhvst vgeznek. A rntgenfilmen a radio-jellt anyagok fekete foltokat, cskokat eredmnyeznek, ezek
elhelyezkedsbl a jellt molekulk tulajdonsgaira (molekulatmeg, tlts, oldkonysg stb.), erssgbl
pedig a radioaktv jelltsg mrtkre kvetkeztethetnk.
Tulajdonkppen az autoradiogrfia specilis, tovbbfejlesztett vltozata az n. phosphor imaging (foszfor-

kpalkots). A radioaktv glt vagy membrnt nem rntgenfilmmel fedik be, hanem egy foszforkristlyokat
tartalmaz rteggel bevont lemezzel. A kristlyok elnyelik a radioaktv sugrzst s ksbb vrs lzerfnnyel
trtn megvilgts sorn az energit kk fny formjban kisugrozzk. A fnykibocsts az erre a clra
szolgl mszerben (phosphor imager) detektlhat, megfelel szoftver segtsgvel rszletes analzis
vgezhet, az eredmnyek digitlisan trolhatk. A foszforkristlyos lemezrl a kp letrlhet, a lemez
ismtelten hasznlhat. A phosphor imaging rzkenyebb, gyorsabb, sokoldalbb, mint a rntgenfilmes
autoradiogrfia, fokozatosan kiszortja azt a molekulris biolgiai kutatsokbl.
7.1. tblzat - 7.1. tblzat: A molekulris sejtbiolgiban ltalnosan hasznlt

radioaktv izotpok
40
7. molekulk nyomon kvetse a
sejtben
Radioizotp Kibocstott Flletid Plda a felhasznlsra (jellt

sugrzs prekurzor/vizsglt folyamat)
3
H rszecske 12.35 v
[3H]nukleozid/ in vivo nukleinsavszintzis
[3H]aminosav/fehrjeszintzis
[3H]cukor/glikozilci
14
C rszecske 5730 v (hasonl a 3H-hoz)
35
S rszecske 87.5 nap [35S]metionin/fehrjeszintzis
32
P rszecske 14.3 nap
[32P]ortofoszft/in vivo fehrjefoszforilci
[-32P]nukleozidtrifoszft/in vitro
nukleinsav-szintzis
[-32P]ATP/in vitro fehrje-foszforilci

131
I rszecske 8.1 nap in vitro fehrjejells
7.1. bra - 7.1. bra: Az autoradiogrfia elve (A) s alkalmazsa a DNS-replikci

kimutatsra (B; a sejteket [3H]timidinnel jelltk; a sms bra als sejtjben
replikci folyt a jells idejn, a fels kt sejt viszont a sejtciklus ms fzisban volt)
1.2. A radioaktvan jellt makromolekulk izollsa s

mennyisgi meghatrozsa
A morfolgiai informcit ad mikroszkpos autoradiogrfia mellett egyb mdszerek is rendelkezsre llnak a
radioizotp sejtbe plsnek tanulmnyozsra. A jellt makromolekula a feltrt sejtekbl kinyerhet,
klnbz szeparcis mdszerek (l. 8. fejezet) segtsgvel tisztthat s biokmiailag jellemezhet. A
radioaktivits mennyisgi meghatrozsra tbbfle lehetsg van. A Geiger-szmlla sugrzs ionizl
hatst mri. Folyadk-szintillcis szmllval az a fluoreszcencia hatrozhat meg, amit a - s -sugrzs
specilis sszettel szcintillcis folyadkban kelt.
1.3. Radioaktv jells biolgiai folyamatok idbeli lefolysnak

vizsglatra
Ha egy ksrlet clja egy makromolekula sejten belli tjnak, talakulsnak, lebomlsnak vizsglata, clszer
rvid, impulzusszer jellst (angolul pulse), majd izotphigtst (chase) alkalmazni. A 7.2. bra szekretlt
fehrjk pldjn mutatja be a pulse-chase jells lnyegt. Ha mirigysejteket rvid ideig radioaktv
aminosavval jellnek, a radioaktivits a fehrjeszintzis helyn (az endoplazmatikus retikulumban) mutathat ki
41
sejtben
autoradiogrfival. Ha ezutn a jellt aminosavat eltvoltjk a tenysztoldatbl s jelletlen prekurzorral

helyettestik, az ekkor kpzd fehrjk mr nem lesznek radioaktvak. Az izotphigtst kveten klnbz
idpontokban vett sejtek autoradiogrfis vizsglatval a jellt fehrjk tja nyomon kvethet a sejtben.
7.2. bra - 7.2. bra: A szekrcis t vizsglata pulse-chase jellssel. Hasnylmirigy

mirigyvgkamra sejteket 3 percig jellt aminosavval kezeltek (A), majd 7 (B), illetve 120
percig (C) jelletlen aminosav jelenltben folytattk az inkubcit. Az ezt kvet
elektronmikroszkpos autoradiogrfia kimutatta, hogy a fehrjk az endoplazmatikus
retikulumban kpzdnek, innen a Golgi-appartusba kerlnek, majd szekrcis
granulumok tjn exocitzissal rlnek ki a sejtbl
2. Nem radioaktv jells

A radioizotpokkal vgzett biolgiai ksrletek legnagyobb elnye rzkenysgk: a jellt molekulk olyan kis
mennyisge is kimutathat, mely kmiai analzissel nem detektlhat. Bizonyos ksrleti szitucikban azonban
a nem teljesen veszlytelen hiszen a ksrletez kutatnak sugrterhelst jelent radioizotpos mdszer nem
radioaktv jellssel helyettesthet. Ezek a trekvsek megfelelnek a trsadalomban a radioaktv
szennyezssel szemben egyre nvekv ellenrzseknek is.
2.1. Srsgjells
Specilis, a vizsgland makromolekulkba bepl prekurzor molekulkkal azok srsge megnvelhet.
Baktriumok esetben ez viszonylag egyszeren elrhet, ha tptalajukba 15N-izotpot tartalmaz
ammniumkloridot kevernek. A N-tartalm makromolekulk (nukleinsavak, fehrjk) srsge nagyobb lesz
mint a kznsges 14N-izotpot tartalmazk. Az izollt makromolekulk, partikulumok srsge specilis
centrifuglsi mdszerrel (izopiknikus grdiens centrifuglssal; l. a kvetkez fejezetet) meghatrozhat.
Hasonl hats rhet el nukleinsavak halognezett nukleozid-szrmazkokkal (pl. bromodezoxiuridinnel [BrdU],
bromouridinnel [BrU]), vgzett jellsvel. A srsgjells felhasznlsi terlete sokkal szkebb mint a
radioizotp mdszerek, nhny mrfldkvet jelent ksrletben azonban mgis ezt a megkzeltst
vlasztottk: a DNS-szintzis mechanizmusnak tisztzsra (l. 20. fejezet), a riboszmk transzlcis
viselkedsnek vizsglatra.
2.2. Immunjells
A sejtek makromolekuliba olyan prekurzorokat is be lehet pteni, melyek antign hatsak: a jellt
makromolekula azutn a prekurzor elleni antitest segtsgvel kimutathat. Mivel az immuncitokmiai
mdszerek(melyekkel rszletesen ksbb foglalkozunk) a fny- s elektronmikroszkpia rzkeny, elegns s
egyre npszerbb techniki, a nem radioaktv jells ezen fajtja vrhatan a jvben mind szlesebb krben
fog elterjedni. Antign hats prekurzorknt hasznlhatk pldul a mr emltett BrdU s BrU vagy
42
sejtben
biotinmolekulkkal jellt prekurzurok. A detektls azutn anti-BrU, antibiotin antitestekkel vgezhet.

Autoradiogrfis vizsglat esetn az ezstszemcse nem felttlenl a radioizotpot tartalmaz metszetrsz felett
jn ltre (l. a 7.1. brt), gy a lokalizci pontatlan. Mivel az immunkomplexek valban ott keletkeznek a
vizsglt objektumban, ahol a specifikus antign jelen van, detektlsuk nemcsak pontos lokalizcit tesz
lehetv, hanem megfelel modern kpanalizl eljrs segtsgvel akr trhats kp is kszthet a
vizsglt makromolekulk eloszlsrl.
Ajnlott irodalom
Komromy L.: Biolgiai gyakorlatok (egyetemi jegyzet). Pcs, 115121,164169, 1990.
43
8. fejezet - 8. Szeparcis mdszerek
A modern sejtbiolgia s a molekulris biolgia kialakulst s fejldst nagymrtkben felgyorstotta azoknak
a mdszereknek a kifejlesztse, melyekkel a sejtek organellumait s makromolekulit egymstl
sztvlasztottk, tiszta formban izolltk. A szeparcis mdszerek segtsgvel lehetv vlt az l anyag
kmiai sszettelnek, a sejtorganellumok mkdsnek vizsglata, sejtmentes rendszerek ltrehozsa,
biokmiai folyamatok analzise. Ebben a fejezetben rviden foglalkozunk a molekulris sejtbiolgiban
leggyakrabban hasznlt szeparcis eljrsokkal, a centrifuglsi, kromatogrfis s elektroforetikus
mdszerekkel.
1. Centrifugls
A nehzsgi gyorsuls (g) sokszorosnak kitett sejtorganellum-szuszpenziban vagy makromolekula-oldatokban
a diszperglt rszecskk mretktl, alakjuktl s srsgktl fggen klnbz mrtkben lepednek. A
centrifugkban ezt gy rik el, hogy nagyteljestmny motorral fmrotort forgatnak, melyben a
centrifugacsvek rgztett helyzetben (szgrotor) vagy a centrifugls alatt vzszintes pozcit felvve
(kilendl-poharas rotor) forognak (8.1. bra). A legnagyobb teljestmny ultracentrifugkban 600 000 g
gyorsuls is elrhet. Biolgiai clra a centrifugls klnbz tpusai hasznlhatk.
8.1. bra - 8.1. bra: A centrifugkban hasznlt szgrotor (A) s kilendl-poharas

rotor (B)
1.1. Differencil centrifugls

A mdszer clja az eukariota sejtek organellumainak izollsa, tiszttsa: a sejtek frakcionlsa. A vizsglt
sejteket, szvetet elszr vizes kzegben homogenizljk: a sejthrtyt ozmotikus sokkal, ultrahanggal vagy
ms mechanikai behatssal roncsoljk. A homogentumot ezutn ismtelt, mind nagyobb sebessg
centrifuglssal frakcionljk (8.2. bra): elszr a sejtmagokat, azutn a mitokondriumokat, majd az
endoplazmatikus retikulum sszetredezsbl kpzd vezikulkat (mikroszmkat), vgl a szabad
riboszmkat leptik ki. Az utols centrifuglssal nyert fellsz a sejt oldd anyagait tartalmaz citoszl.
8.2. bra - 8.2. bra: Sejtfrakcionls differencil centrifuglssal
1.2. Hipopiknikus grdiens centrifugls
44
8. Szeparcis mdszerek
A mdszer eltr tmeg, szedimentcis llandj makromolekulk, partikulumok sztvlasztsra alkalmas.

A centrifugacsben a cs alja fel fokozatosan nvekv tmnysg szacharz oldatot helyeznek el (kontinuus
grdienst alkalmaznak), a sztvlasztand mintt a grdiens tetejre rtegezik, majd mindaddig centrifugljk,
amg a kvnt szeparcit el nem rik. (A hipopiknikus elnevezs arra utal, hogy a grdiens srsge kisebb mint
a sztvlasztott rszecskk.) A centrifugls utn a manyag cs aljt kiszrjk, a grdienst lecsepegtetve
kmcsvekbe frakcikat gyjtenek s meghatrozzk bennk a vizsglt anyagok koncentrcijt, fehrjk,
nukleinsavak esetn az ultraibolya fny abszorpcijval, jellt anyag esetn radioaktivits-mrssel stb. (8.3.
bra). A kapott rtkek grafikonon brzolva adjk a szedimentogrammot. Vrusok, sejtmagok, ms
sejtalkotrszek nagy tisztasg prepartumnak ellltsra diszkontinuus grdiens centrifuglst
alkalmaznak. Kt-hrom eltr srsg oldatot rtegeznek egymsra, a szennyezdsek ezeken a
rteghatrokon akadnak fenn.
8.3. bra - 8.3. bra: Bakterilis riboszma alegysgek sztvlasztsa szacharz

grdiens centrifuglssal
1.3. Izopiknikus grdiens centrifugls

Makromolekulk, rszecskk srsg szerinti sztvlasztsra nagy srsg oldatbl (pl. cziumkloridbl)
kszlt grdiens alkalmas. A sztvlasztand mintt belekeverik a cziumklorid-oldatba (8.4. bra), majd az ezt
kvet nagy sebessg ultracentrifugls sorn a soldatban srsggrdiens alakul ki, a minta molekuli pedig
a nekik megfelel srsg rtegbe vndorolnak. (Innen szrmazik az elnevezs: izopiknikus, vagyis azonos
srsg.) A frakcik gyjtse, a sztvlasztott anyagok kimutatsa a frakcikban s a szedimentogramm
megrajzolsa a hipopiknikus centrifuglsnl ismertetett mdon trtnik.
8.4. bra - 8.4. bra: DNS s RNS sztvlasztsa cziumklorid grdiens centrifuglssal
2. Kromatogrfia
45
A kromatogrfis szeparls sorn a sztvlasztand molekulk oldatt (a mozg fzist) szilrd mtrixon (az
ll fzison) bocstjk t; ha az oldott molekulk eltr klcsnhatst alaktanak ki a mtrixszal,
sztvlaszthatk egymstl. A szilrd fzistl fggen a kromatogrfia klnbz technikkkal hajthat vgre
(pl. papr-, vkonyrteg-kromatogrfia stb.); a biolgiban leginkbb az oszlopkromatogrfia terjedt el (8.5.
bra). A mtrixot veg- vagy manyag oszlopba tltik, a mintt a tetejre rtegezik, majd az oszlop als
vgnek kinyitsval kmcsvekbe frakcikat gyjtenek. A mtrixra fellrl elcis oldatot tltenek: ezzel
mossk t a mintt az oszlopon. Ha a sztvlasztand molekulk eltr sebessggel haladnak t az oszlopon,
kln frakcikban foghatk fel. A frakcik vizsglatval nyerhet grafikon a kromatogramm.
8.5. bra - 8.5. bra: Kt makromolekula (a s b) sztvlasztsa oszlopkromatogrfival
Biolgiai makromolekulk sztvlasztsra elssorban a glszrs, az ioncserl s az affinits-kromatogrfia

hasznlatos (8.6. bra).
8.6. bra - 8.6. bra: A glszrs (A), az ioncserl kromatogrfia (B) s az affinits
kromatogrfia (C) elve
2.1. Glszrs (glkromatogrfia)

A glkromatogrfis oszlopok kismret, porzus glszemcskbl llnak (8.6.A. bra). A mtrixgyngyk
kszlhetnek agarzbl, poliakrilamidbl, dextrnbl, ezek az anyagok trhlt alkotnak, meghatrozott mret
prusokat hoznak ltre. Az oszlopra felvitt minta nagy molekuli kizrdnak a glszemcsk prusaibl s a
szemcsk kztt gyorsan thaladnak az oszlopon; a kis molekulk viszont behatolnak a szemcsk belsejbe is,
nagyobb folyadktrben oszlanak meg s ezrt ksve jelennek meg a kromatogrfis frakcikban. A glek
klnbz prusnagysg szemcskkel kszthetk, gy a glszrs szles molekulasly-tartomnyban alkalmas
molekulk (pl. fehrjk) mret szerinti frakcionlsra.
2.2. Ioncserl kromatogrfia
46
Az ioncserl oszlopokat olyan glgyngykkel tltik meg, melyek felszne pozitv vagy negatv tlts
(8.6.B. bra): a sztvlasztand molekulk kzl az ellenttes tltssel rendelkezk megktdnek az
ioncserln, a tbbi pedig gyorsan thalad az oszlopon. A glszemcsken adszorbeldott molekulk a
mosfolyadk ionerssgnek (skoncentrcijnak) nvelsvel vagy pH-jnak vltoztatsval elulhatk. Az
ioncserl kromatogrfit elssorban fehrjk tlts szerinti szeparlsra hasznljk, de ms molekulk
frakcionlsra is alkalmas (pl. a hidroxilapatit kromatogrfia egyes s ketts lnc nukleinsavak
sztvlasztsra).
2.3. Affinits-kromatogrfia
A kromatogrfis mtrix s az izolland molekulk kztt biolgiailag specifikus kts is kialakulhat (8.6.C.
bra). Ha a glszemcskhez olyan ligandotkapcsolnak kovalens ktssel, melyet a tiszttand makromolekula
kpes felismerni s vele specifikus klcsnhatst kialaktani, a mtrixon csak az a molekula fog megktdni, az
elegy tbbi komponense szabadon keresztlhalad az oszlopon. A kts jellegtl fggen azutn az oszlopon
maradt anyag elulhat. A kapcsolat fajlagos jellege kvetkeztben az affinits-kromatogrfia a tisztts
leghatkonyabb mdszere: a kiszemelt molekula egyetlen kromatogrfis lpssel nagymrtkben feldsthat a
mintban. Az affinits-kromatogrfia rendkvl szles krben alkalmazhat: enzimek tiszttsra szubsztrt
molekulk, antignekre antitestek, DNS-kt fehrjkre oligonukleotidok, poli(A)+ mRNS-ekre oligo(dT)
hasznlhat ligandknt s a sort sokig lehetne folytatni.
3. Elektroforzis
Az elektroforetikus mdszerek a fehrjk s nukleinsavak frakcionlsban mra minden egyb szeparcis
technikt fellmltak rzkenysgben, sokflesgben s npszersgben. Lnyegk, hogy vizes kzegben
ltrehozott elektromos trben a tltssel rendelkez molekulk elmozdulnak az ellenttes tlts elektrd fel s
ha vndorlsuk irnya vagy sebessge klnbz, egymstl fizikailag elvlaszthatk. A szeparci javtsra
klnbz szilrd mtrixokat hasznlnak (pl. paprt, specilis membrnokat, kemnytt), molekulris biolgiai
szempontbl azonban a legfontosabbak a glelektroforetikus mdszerek: az agarz s poliakrilamid
glelektroforzis.
3.1. Agarz glelektroforzis

Az agarz poliszacharid, melynek vizes szuszpenzija hevts, majd lehts utn gll dermed. Az
agarzlncok egymssal hidrognhidakkal kapcsoldva trhlt hoznak ltre, melynek srsge az
agarzkoncentrcitl fgg. Az agarz gleket nukleinsavak frakcionlsra hasznljk, a futtats vzszintes
gllemezben trtnik. Elektroforzis sorn a gl szrhatst gyakorol: a prusokon keresztl mozogva a
nukleinsav-molekulk sztvlnak, hiszen a kicsik gyorsabban, a nagyok lassabban vndorolnak. RNS-ek
esetben formaldehid tartalm glt hasznlnak, hogy a molekulk denaturlt, kinyjtott llapotban
vndoroljanak s a szeparls a mret szerinttrtnjen (8.7. bra). Az agarz glelektroforzis DNS-
fragmentumok frakcionlsnak is rutinmdszere (l. 10.2. brt). A futtatst kveten etdiumbromiddal vagy
ms fluoreszcens festkkel teszik lthatv a nukleinsavakat a glben.
8.7. bra - 8.7. bra: Emls sejtbl izollt rRNS-ek s mRNS-ek frakcionlsa
formaldehid/agarz glelektroforzissel
47
3.2. Poliakrilamid glelektroforzis

Akrilamid s biszakrilamid polimerizcijval kovalens ktsekkel trhlstott, ktn fizikai tulajdonsgokkal
rendelkez elektroforetikus mtrix kszthet. A monomerek koncentrcijval szablyozhat a gl
prusnagysga. A poliakrilamid gleket ltalban kt veglap kztt, gllemez formjban polimerizljk, az
elektroforzis fggleges helyzetben trtnik. Szmos alkalmazsi lehetsget dolgoztak ki.
SDS-poliakrilamid glelektroforzis. Ez a mdszer a leghatkonyabb, rutinszeren alkalmazott fehrje-

szeparcis mdszer (8.8. bra). A mintt ntrium-dodecil-szulft (angol nevnek rvidtse: SDS) s
merkaptoetanol jelenltben forraljk. Az SDS ers ionos detergens: hossz sznlnc alkohol s knsav
sztere. Apolros lncval a fehrjk hidrofb aminosavaihoz kapcsoldik, a ktd nagyszm SDS-molekula
szulftcsoportjai pedig ers negatv tltst adnak a proteinmolekulnak. A tltsek taszt hatsa kvetkeztben
a fehrjelnc kiterl, ms molekulkkal ltrehozott nem kovalens ktsei felszakadnak. A polipeptidlncokon
belli vagy azok kztti diszulfidhidakat a merkaptoetanol reduklja. Az egysgesen negatv tlts fehrjk az
elektroforzis sorn mretktl fgg sebessggel vndorolnak. Az SDS-poliakrilamid gleketroforzis nemcsak
molekulasly szerinti sztvlasztsra, de a fehrjk molekulaslynak meghatrozsra is alkalmas.
8.8. bra - 8.8. bra: Fehrjk sztvlasztsa SDS-poliakrilamid glelektroforzissel
48
Fehrje-elektroforzis nem denaturl glben. Poliakrilamid gleketroforzis SDS-mentes glben is

vgezhet. Ilyen krlmnyek kztt a fehrjk megrzik sajt nett tltsket, mretk s alakjuk mellett ez is
meghatrozza elektroforetikus mobilitsukat. Az izoelektromos fkuszls (8.9. bra) sorn a fehrjk
sztvlasztsa kizrlag eltr tltsk, pontosabban izoelektromos pontjuk alapjn trtnik. Vkony csben
polimerizlt glben pH-grdienst hoznak ltre, majd a sztvlasztand fehrjekeverket ebben
elektroforetizljk. A fehrjk addig vndorolnak, amg a csben el nem rik az izoelektromos pontjuknak
megfelel pH-t: ekkor netto tltsk megsznik s gy mozdulatlann vlnak.
8.9. bra - 8.9. bra: pH 7 izoelektromos pont fehrje viselkedse izoelektromos

fkuszls sorn
49
Ktdimenzis elektroforzis . A hagyomnyos, egyirnyban vgzett elektroforetikus mdszerek

feloldkpessge korltozott: optimlis esetben taln 80100 protein vlaszthat szt. A ktdimenzis
poliakrilamid glelektroforzis feloldsa nagysgrenddel jobb ennl. A mdszer lnyege, hogy a
fehrjekeverket kt, egymstl eltr, egymsra merleges irny futtatssal frakcionljk (8.10. bra). Az 1.
dimenziban a sztvlaszts izoelektromos fkuszlssal, tlts szerint trtnik. A glcskot ezutn SDS-
tartalm gllemezbe ptik be, s a 2. dimenziban SDS-poliakrilamid glelektroforzissel molekulasly szerinti
szeparlst vgeznek. A fehrjk vizualizls (fests, autoradiogrfia) utn foltokknt jelennek meg a gl kpn.
Specifikus fehrjket immunolgiai mdszerekkel tesznek lthatv (l. 13. fejezet)
8.10. bra - 8.10 bra: Fehrjk frakcionlsa kt-dimenzis glelektroforzissel (1D: 1.

dimenzi, 2D: 2. dimenzi)
50
Nukleinsavak elektroforzise. Poliakrilamid glelektroforzissel RNS-, DNS-molekulk, nukleoprotein

komplexek is frakcionlhatk. Ezek kzl a mdszerek kzl emltsre leginkbb a szekvencia-analzisre
hasznlt denaturl glelektroforzis mlt. A hossz, uret tartalmaz, nagy feszltsggel futtatott glekben 1
nukleotidnyi hosszklnbsgek is feloldhatk (l. 10. fejezet s 10.4. bra). A gllemezben trtn elektroforzis
nagyfelolds alternatvja a kapillris glelektroforzis: a DNS-molekulk sztvlasztsa hossz, igen vkony
vegcsbe tlttt poliakrilamid glben trtnik. A miniatrizlt elektroforetikus eljrs kidolgozsa
nagymrtkben hozzjrult a DNS-szekvenciz automatk kifejlesztshez (l. 10. fejezet).
Ajnlott irodalom
Komromy L.: Biolgiai gyakorlatok (egyetemi jegyzet). Pcs, 52114, 1990.
Stryer, L.: Biochemisry. W. H. Freeman and Company, New York, 4350, 1988.
Szebernyi J. (1976): Affinits-kromatogrfia s a sejtkutats. Termszet Vilga 107, 404406.
51
9. fejezet - 9. A gnszerkezet
vizsglmdszerei I.: DNS-szakaszok
in vivo s in vitro amplifikcija
A molekulris biolgia az rkletes informci trolsnak s kifejezsnek mechanizmusait vizsgl
tudomny, mdszereinek clmolekuli teht a nukleinsavak s a fehrjk. Fejldsnek hossz ideig gtja volt,
hogy ezen makromolekulk elsdleges szerkezetnek megllaptsa a molekulk mrete miatt rendkvl
nehzkesnek (fehrjk, RNS-ek) vagy teljesen lehetetlennek (DNS) bizonyult. Az 1970-es vek elejn
kirobban metodikai forradalom azutn a DNS vizsglmdszereinek rohamos fejldshez vezetett s ez
paradox mdon egy csapsra megoldotta a kisebb informcis molekulk szerkezetvizsglatt is: a DNS-rgi
bzissorendjbl ugyanis egyrtelmen megllapthat az ltala kdolt RNS, illetve fehrjemolekula elsdleges
szerkezete. A DNS-metodikk tkletestse lehetv tette hasznos fehrjk (pl. inzulin) nagyzemi termelst,
a molekulris genetika mind tbb jelensgnek megrtst, rkld s szerzett genetikai betegsgek
molekulris szint tanulmnyozst, molekulris diagnosztikai s gnterpis eljrsok kidolgozst, egy j
tudomnyg, a molekulris medicina megjelenst. Ez az ttrs 1968-ban a restrikcis endonuklezok
felfedezsvel kezddtt.
1. Restrikcis endonuklezok
1.1. Restrikci s modifikci
1953-ban Luria megfigyelte, hogy ha E. coli sejteket egy msik E. coli trzsben honos -bakteriofgokkal
fertz, a fgpartikulumok dnt tbbsge nem jr sikerrel: a fertztt sejtek kivdik, korltozzk (restrikci) a
tmad fg szaporodst. Ha a kevs sikeres fg ltal elpuszttott baktriumokbl (melyek a lemezen plakkot,
tarfoltot alkotnak) izollt fgprepartummal ismtelte meg a ksrletet, a fertzs sikeres volt, nagyszm tarfolt
jelent meg. Az els fertzst tll fgok teht a gazdasejtre specifikus mdosulson mentek keresztl, ami az
jabb fertzs sorn mr megvdte ket (modifikci). Ksbb bebizonyosodott, hogy a restrikci feladata a
gazdasejt vdelme idegen DNS tmadstl, a modifikci pedig a sejt DNS-t vdi sajt restrikcis
rendszervel szemben.
1.2. Restrikcis endonuklezok s modifikcis metilzok

Az els restrikcis enzimet a 60-as vek vgn izolltk E. colibl, majd a kvetkez vekben tucatjval
azonostottak j enzimeket klnbz baktriumokbl. Ezek kzs jellemzje, hogy szekvencia-specifikus
endonuklezok: 48 bzispr hosszsg rgit ismernek fel, melyben (vagy annak krnyezetben) mindkt
lncot elhastjk. A restrikcis enzimfelismer helyek palindroma szerkezetek: a kt lnc szekvencija 5 3
irnyban olvasva azonos. Pldaknt szerepeljen itt a EcoRI s AluI enzimek felismerhelye (a nyilak a hastott
foszfodiszter-ktseket jellik).
A pldkbl az is kitnik, hogy ktfle hasts lehetsges: az egyik esetben az enzim egymssal szemkzti
foszfodiszter-ktseket hidrolizl (direkt hasts, pl. AluI), ilyenkor tompa vgek jnnek ltre; ms enzimekkel
a hasts lpcszetes s egylnc, ragads vagy kohezv vgek kpzdnek (pl. EcoRI). Az utbbi esetben
ltrejv valamennyi DNS-darab mindkt vgn ugyanaz a kohezv vg van jelen (ez a palindroma szerkezet
eredmnye), a DNS-darabok teht egymshoz korltlanul kapcsoldhatnak bzisprosodssal. A sejt sajt DNS-
nek restrikcis helyeit gy vdi meg, hogy egy modifikcis metilzzal mindkt lnc egyik nukleotidjt
metillja. Az EcoRI metilz esetben:
52
9. A gnszerkezet vizsglmdszerei
I.: DNS-szakaszok in vivo s in vitro
amplifikcija
A metilcsoport megvd a restrikcis enzim haststl. A metillatlan, idegen DNS daraboldik, majd gyorsan
degradldik.
2. DNS-fragmentumok klnozsa
A fentiekbl kvetkezik, hogy kt, klnbz DNS-prepartumbl ugyanazon restrikcis enzimmel nyert
ragads vg DNS-darab bzisprosodssal sszekapcsoldhat. A kapcsolat DNS-ligzzal kovalenss tehet:
foszfodiszter-ktsekkel stabilizlt DNS-kimera, rekombinns DNS hozhat ltre (9.1. bra).
9.1. bra - 9.1. bra: Rekombinns plazmid ltrehozsa
A klnozs alapja a rekombinns DNS-technolgia. DNS-klnozs sorn egy DNS-fragmentumot megfelel

gazdasejtben sokszorostanak, amplifiklnak. Ez azonban csak gy lehetsges, ha a DNS-darab a gazdasejtben
autonm replikcira kpes vektor DNS-hez kapcsoldik. Baktriumokban vektorknt leggyakrabban
plazmidokat vagy -fg DNS-t hasznlnak. A plazmidok (l. 1. fejezet s 9.1. bra) kismret, cirkulris DNS-
molekulk, tartalmazzk az nll replikcihoz szksges origot (l. ksbb). A bennk lev antibiotikum
rezisztencia gnek (pl. ampR , ampicillin-rezisztencia gn) szelekcis markerknt hasznlhatk: a rekombinns
plazmiddal vgzett transzformci utn az antibiotikum jelenltben csak azok a sejtek maradnak letben,
melyek felvettk a plazmidot. (Az eljrs rszleteit a gyakorlatos jegyzet tartalmazza.) Ezek a sejtek
elszaporthatk, bellk nagymennyisg plazmid, abbl pedig DNS-fragmentum nyerhet. A rekombinns -
fgokkal vgzett fertzs nagyon hatkony mdja a gnklnozsnak. A kozmidok mestersges vektorok, melyek
egyestik a plazmidok s fgok elnyeit. Emls sejtekben vrusokat (pl. adenovrusok, retrovrusok) hasznlnak
vektorknt. Igen nagymret DNS-darabok klnozsra (megabzis klnozs) mestersges kromoszmkat
fejlesztenek ki, ezek kzl az leszt mestersges kromoszmt (YAC, yeast artificial chromosome) mr
hasznljk a gyakorlatban. Bztat ksrletek folynak mestersges emls kromoszmavektorok kifejlesztsre is.
A fentiekben lert n. inszercis vektorokban gyakorlatilag brmilyen DNS-fragmentum tetszleges
mennyisgben szaporthat.
53
amplifikcija
3. Genomtrak konstrukcija
A genomtr egy sejt teljes DNS-llomnyt tartalmazza megfelel mret DNS-fragmentumokra darabolva,
vektormolekulkba beptve. Erre a clra az elz fejezetben trgyalt inszercis vektorok brmelyike
hasznlhat, a -fg klnsen npszer (9.2. bra). A -DNS kzps harmada cellulris DNS-sel
helyettesthet: az EcoRI hastssal nyert -karokatEcoRI enzimmel darabolt genomilis DNS-sel keverik ssze,
liglst vgeznek, majd a rekombinns DNS-molekulkat fgfehrjkkel becsomagoljk s fertzssel
bejuttatjk az E. coli sejtekbe. Ha a genomtrbl egy meghatrozott szekvencival rendelkez DNS-darabot
akarnak kihalszni, a bakteriolgiai lemezen ltrejtt tarfoltok DNS-t egy filterre viszik t, majd molekulris
hibridizcival vlasztjk ki a kvnt klnt. (A hibridizcival meghatrozott szekvencij DNS-darabokat lehet
azonostani; a mdszer rszleteivel a kvetkez fejezetekben foglalkozunk.) A rekombinns fg elszaporthat
s a kinyert DNS-inszerttel tovbbi vizsglatok vgezhetk. Genomtrakbl gnrszletek, szablyoz
szekvencik (pl. fehrjekt rgik) egyarnt izollhatk.
9.2. bra - 9.2. bra: -fg genomtr ltrehozsa (A.) s a kvnt kln kivlasztsa
molekulris hibridizcival (B.)
4. Polimerz lncreakci
A kiss nehzkes, hosszadalmas in vivo DNS-amplifikci helyettestsre Mullis 1985-ben in vitro DNS-
szintetizl mdszert dolgozott ki, mellyel rvid DNS-szakaszok nhny ra alatt lncreakciszeren millis
54
amplifikcija
pldnyszmban termelhetk. A mdszer neve polimerz lncreakci, kzkelet rvidtssel: PCR
(polymerase chain reaction). A reakcielegyben jelen van az a DNS-prepartum, amely az amplifikland
szakaszt tartalmazza. A szakasz kt vghez denaturcit kveten egy-egy rvid komplementer szintetikus
oligonukleotidot kapcsolnak bzisprosodssal. Ezek a DNS-szintzis sorn primerknt fognak mkdni: a
DNS-polimerz az oligonukleotidok 3-vghez kapcsolja a szintzis sorn a templtlnc ltal meghatrozott,
komplementer nukleotidokat. (A DNS-szintzis rszleteivel ksbb foglakozunk.) Mindkt lncnak meg kell
kettzdnie, az egyik primer teht az egyik, a msik pedig a msik DNS-lnccal bzisprosodik. A primerek 3-
vge egyms fel nz, ez biztostja, hogy a kzttk lev rgi amplifikldjon. Az elegy a 4
dezoxiribonukleozid-trifoszftot (a szintzis szubsztrtjai) s DNS-polimerzt is tartalmaz. A PCR-reakci
hrom lps ciklikus ismtldsbl ll (9.3. bra): 1. denaturci (95 C); 2. primerktds (55 C); 3. DNS-
szintzis (72 C). A ciklusok ismtldst komputervezrelt PCR-kszlk (thermocycler) biztostja. Az extrm
krlmnyekhez hforrsokban l baktriumokbl izollnak DNS-polimerzt (pl. Taq polimerz). Sikeres
amplifikci esetn a clszekvencia kpiaszma az inkubci sorn exponencilisan n: 2030 ciklus (nhny
rs inkubci) millis-millirdos nagysgrendben sokszoroz.
9.3. bra - 9.3. bra: A polimerz lncreakci elve
A mdszer klnbz mdozatai elrasztottk az alap- s alkalmazott kutatst, belertve a diagnosztikt is. Az
amplifiklt DNS-termk mennyisgnek pontos meghatrozsra kidolgozott eljrs a vals-idej (real-
time)PCR. A mdszer lnyege, hogy a reakcielegyekben az amplifikci elrehaladsval arnyosan ersd
fluoreszcencit idznek el s ezt a specilis thermocycler folyamatosan mri. A vals-idej PCR egyik
vltozatt mutatja be a 9.4. bra. A reakcielegy a szoksos alkotrszeken kvl tartalmaz egy, az
amplifikland rgi kzephez bzisprosodssal kapcsoldni kpes prbt is, ennek 5-vghez fluoreszcens
festket, 3-vghez pedig egy olyan molekult kapcsolnak, mely kioltja a kzelben lev festk
fluoreszcencijt. Mkdse sorn a Taq polimerz (mely rendelkezik 5 3 exonuklez aktivitssal is [l.
21. fejezet]) lehastja a fluoreszcens festket, majd a prbt is lebontja. A PCR-ciklusok sorn gy mind tbb
festkmolekula szabadul fel, a fluoreszcencia nvekedsbl a mszer folyamatosan regisztrlni kpes az
amplifiklt DNS mennyisgt.
55
amplifikcija
A PCR-eljrs ma mr a nagyobb klinikai laboratriumokban rutin diagnosztikai mdszernek szmt. A
polimerz lncreakci elvnek, alkalmazsi terleteinek ismerete ezrt a gyakorl orvostl is elvrhat.
9.4. bra - 9.4. bra: A vals-idej kvantitatv PCR reakci elve. 1. lps: polimerizci;
2. lps: a fluoreszcens festk lehastsa; 3. lps: a prba lebontsa, a polimerizci
befejezse (rszleteket l. a szvegben)
Ajnlott irodalom
Berg, P., Singer, M. F. (1995): The recombinant DNA controversy: Twenty years later. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 92, 90119013.
Cohen, S. N.: The manipulation of genes. Scientific American 1975/7, 2533.
118124, 127129.
Grobstein, C.: The recombinant-DNA debate. Scientific American 1977/7, 2233.
Mullis, K. B.: The unusual origin of the polymerase chain reaction. Scientific American 1990/4, 3643.
Old, R. W., Primrose, S. B.: Principles of Gene Manipulation. Blackwell Scientific Publications, London, 186,
1991.
White, T. J. (1996): The future of PCR technology: diversification of technologies and applications. TIBTECH
14, 478483.
56
10. fejezet - 10. A gnszerkezet
vizsglmdszerei II.: A DNS
szekvencia-analizisnek lehetsgei
1. Molekulris hibridizci
A DNS direkt szekvencia-vizsglatt a restrikcis endonuklezok felfedezse s a DNS-klnozs mdszernek
kidolgozsa tette lehetv: ezek a technikk a nagymret DNS-molekulk rvid, specifikus restrikcis enzim
hastsi helyek ltal hatrolt fragmentumainak izollst s analizlhat mennyisgben trtn kinyerst
eredmnyeztk. Kzvetett szekvencia-analizl mdszert azonban mr a restrikcis enzimek hasznlata eltt
kifejlesztettek: ez a molekulris hibridizci (10.1. bra).
10.1. bra - 10.1. bra: A nukleinsav hibridizci elve (filter-hibridizci)
57
10. A gnszerkezet
Ha denaturlt nukleinsavat valamilyen mdon (pl. radioaktv atommal vagy fluoreszcens festkkel) jellt
nukleinsavprba jelenltben renaturlnak, a jellt prba bzisprosodni kpes a vizsglt mintban esetleg jelen
lev komplementer lncokkal, azaz hibrid kpzdik, ami kimutathat. A nukleinsav-hibridizci segtsgvel
teht megvizsglhat, hogy kt nukleinsavlnc komplementer-e s ha igen, milyen mrtkben (erre a hibrid
olvadspontjbl lehet kvetkeztetni).
A hibridkpzds detektlsra klnbz lehetsgek addnak, a hibridizci gy szmos molekulris biolgiai

technika alapjt kpezi. A legegyszerbb esetben (filter-hibridizci) a denaturlt vizsgland nukleinsavat
specilis membrn felsznhez ktik, a radioaktv prbt ehhez adjk hozz. A renaturci utn a nem ktdtt
prbamolekulkat lemossk, majd a filter radioaktivitsnak meghatrozsval megllaptjk a hibridkpzds
mrtkt (10.1. bra). In situ hibridizci sorn fixlt sejtekben lgos denaturcit vgeznek, majd radioaktv
vagy fluoreszcens prbval hibridizlnak; elbbit autoradiogrfival, utbbit pedig fluoreszcencia-
mikroszkppal teszik lthatv. A fluoreszcens in situ hibridizci (FISH) mint genetikai betegsgek
diagnosztikai eljrsa, mr a klinikumban is ltjogosultsgot nyert.
2. Restrikcis trkpezs
58
10. A gnszerkezet
Mivel a restrikcis enzimek ltal felismert nukleotidszakaszok mr a valdi szekvencia-analizl mdszerek
kifejlesztse eltt ismertek voltak, korltozott szekvencia-informcit szolgltathatott a restrikcis trkpezs
is. Ennek clja, hogy a vizsglt DNS-fragmentumban meghatrozzk klnbz restrikcis endonuklezok
hastsi helyeit s azok egymstl val tvolsgt. A mdszer lnyege (10.2. bra): a tiszttott DNS-molekula
prepartumot in vitro krlmnyek kztt klnbz enzimekkel s azok kombincijval hastjk, majd a
kpzdtt fragmentumokat glelektroforzissel sztvlasztjk, s etdiumbromid festssel lthatv teszik. A
cskok pozcijbl kvetkeztetnek a fragmentumok mretre, abbl pedig a hastsi helyekre. A mdszer
kismret DNS-ek (plazmidok, vrus-DNS-ek, klnozott DNS-fragmentumok) vizsglatra alkalmas.
10.2. bra - 10.2. bra: Restrikcis trkpezs: a fragmentumok elektroforetikus kpe

(A.) s a cirkulris DNS trkpe (B.)
3. Southern blot
Nagy genomok (pl. humn DNS) restrikcis trkpezse az elz fejezetben lert mdon nem vgezhet el, mert
egyetlen restrikcis enzimmel emsztve is tbb szzezer klnbz mret fragmentumot adnak, amelyek
egymstl glelektroforzissel szt sem vlaszthatk. A problma megoldsra dolgozott ki 1975-ben Southern
egy olyan mdszert, melyben a restrikcis trkpezs s a molekulris hibridizci mdszert kombinlta. A
Southern blot technika clja, hogy nagy molekulasly DNS-bl azonostson olyan restrikcis
fragmentumokat, amelyek a ksrlet szempontjbl rdekes DNS-rgit hordoznak. A DNS-prepartumot
restrikcis enzimmel hastjk (10.3. bra), majd a fragmentumokat agarz glelektroforzissel sztvlasztjk,
lgos kzegben denaturcit vgeznek s a DNS-darabokat a glbl nitrocellulz vagy nylon membrnra viszik
t (innen szrmazik az elnevezs: blotting, azaz titats). A radioaktv prbval a hibridizcit a membrnon
vgzik el: a keresett szekvencit tartalmaz DNS-fragmentumok az autoradiogrammon cskok formjban
fognak megjeleni. A Southern blot kiterjedten alkalmazott mdszer specifikus gnszakaszok, a bennk
keletkezett mutcik kimutatsra.
10.3. bra - 10.3. bra: A Southern blot elve
59
10. A gnszerkezet
4. Szekvencia-meghatrozs
Nhny szz bzispr mret DNS-darabok elsdleges szerkezetnek meghatrozsra Maxam s Gilbert,
illetve Sanger 1975-ben dolgoztak ki mdszereket.
A Maxam-Gilbert-fle kmiai mdszer lnyege, hogy a DNS-molekulkat bzisspecifikus gensekkel

elhastjk, a ltrejv lncok mrett glelektroforzissel megllaptjk s ebbl kvetkeztetnek a nukleotid
szekvencira.
Az ltalnosan hasznlt s automatizlsra is alkalmas szekvencia-analizl mdszer Sanger lnctermincis

eljrsa (10.4. bra). Alapja egy in vitro DNS-szintetizl rendszer, amely tartalmazza a DNS-fragmentum
molekulit, 5-vgen radioaktvan jellt szintetikus primer molekulkat, a 4 dezoxiribonukleozid-trifoszftot s
DNS-polimerzt. A primerkapcsolds utn a reakcielegyet 4 egyenl rszre osztjk, majd
didezoxiribonukleozid-trifoszftokat adnak hozzjuk, mindegyikhez msikat. (A didezoxinukleotidok
pentzban nemcsak a 2-, hanem a 3-pozcibl is hinyzik az oxign [a dezoxiribz kplett l. a 2.2. brn].)
Inkubls sorn a reakcielegyekben DNS szintetizldik a templtknt hasznlt DNS-lnc irnytsval: a
DNS-polimerz a nveked lnc 3-vghez nukleozid-monofoszftokat kapcsol. Vletlenszeren a
reakcielegyekben kis koncentrciban jelen lv didezoxinukleotid is beplhet s mivel 3-OH-csoporttal
nem rendelkezik, az a lnc szintzisnek vgt jelenti. Az egyes reakcielegyekben klnbz hosszsg
lncok szintetizldnak, az egy elegyben lev valamennyi termk 3-vgn ugyanaz a didezoxinukleotid van. A
ngy mintt uret tartalmaz denaturl poliakrilamid glben egyms mellett elektroforetizljk,
autoradiogrfit vgeznek, majd az egyes cskok pozcija alapjn leolvassk a szekvencit: az autoradiogramm
aljrl indulva a szintetizlt lnc bzissorrendje 5 3 irnyban olvashat le. Egy primer segtsgvel nhny
szz bzis szekvencija llapthat meg, ennek alapjn j primer szintetizlhat s a DNS-szakasz szekvencia-
meghatrozsa folytathat.
10.4. bra - 10.4. bra: Sanger lnctermincis szekvencia-meghatroz mdszernek

elve
60
10. A gnszerkezet
A Sanger-mdszer alapjn tbb szekvencia-meghatroz automatt fejlesztettek ki, amelyek napi hozama
sokszorosa a fent lert hagyomnyos mdszernek. Az egyik bevlt eljrs, hogy a primert nem radioaktvan,
hanem fluoreszcens festkkel jellik, mind a 4 reakcielegyben ms sznvel (10.5. bra). Az eljrs egybknt
teljesen megegyezik a manulis mdszerrel, de DNS-szintzis utn a 4 mintt sszekeverik, egytt futtatjk a
glben. A gl aljt lzersugrral vilgtjk meg, amely az egyes cskokban eltr szn fluoreszcencit kelt, azt
egy detektor regisztrlja s a hozz csatlakoztatott szmtgp, ahogy a cskok elrik a gl aljt, folyamatosan
kirja a szekvencit.
10.5. bra - 10.5. bra: A DNS-szekvenciz automata mkdsi elve
61
10. A gnszerkezet
Az automatizlt szekvencia-meghatrozsnak szmos jabb vltozata ismeretes. A didezoxinukleotidok is

jellhetk 4 klnbz fluorokrmmal, ilyenkor a DNS-szintzisre egyetlen reakcielegy hasznlhat, melyben
mind a ngy lnctermintor jelen van. Nagy haladst jelentett a szekvencia-analzisben a kapillris
glelektroforzis bevezetse: a jelenlegi legjobb automatkban egyszerre 96 kapillrisban folyik szeparls. A
mintafelvitel, elektroforzis s szekvencia-leolvass is teljesen automatizlt.
5. Szekvencia-meghatrozs hibridizcival
A molekulris hibridizci elvn alapul szekvencia-meghatroz mikrochipek (DNS-chipek szles krben
hasznlt msik angol nevkn microarray-k) forradalmian j lehetsgeket teremthetnek gyors s teljesen
automatizlt bzissorrend-analzisre. A mdszer lnyege, hogy az ismeretlen szekvencij DNS-t (vagy RNS-t)
fluoreszcens festkkeljellik, majd hibridizltatjk egy szilrd felsznen meghatrozott sorrendben rgztett,
ismert bzissorrend oligonukleotid-kollekcival vgzett hibridizcis reakciban (10.6. bra).
A chipek esetn a jelletlen oligonukleotidot nevezzk prbnak, a fluoreszcens DNS-molekulkat pedig cl-
DNS-nek. A jellt nukleinsav azokkal az oligonukleotidokkal kpez stabil hibridet, melyek tkletesen
komplementerek valamely rgijval. Ha a mikrochip minden lehetsges szekvencia-kombincit tartalmaz, a
62
10. A gnszerkezet
fluoreszcens prba hibridizcis mintzatbl szekvencija meghatrozhat. Ha oktamr oligonukleotidokat
hasznlnak, a 48 = 65 536 kombinci elfr egy 3 3 cm-es lemezen (10.7.
bra), hosszabb prba-molekulkat tartalmaz chipeken azonban a szekvencia-kombincik szma tbbmilli is
lehet. A fluoreszcens cl-DNS-sel a hibridizcit egy specilis kamrban hajtjk vgre, majd a mikrochip
hibridizcis mintzatt fluoreszcencia-mikroszkpban analzljk. Az informci videokamera kzvettsvel
szmtgpbe jut, mely a fluoreszcens kp alapjn rekonstrulja a szekvencit.
10.6. bra - 10.6. bra: Szekvencia-meghatrozs oligonukleotid-chippel. A. A

mikrochip kpe; B. A chip egy rszlete felnagytva. Minden mez ugyanazon
oligonukleotid szmos pldnyt tartalmazza (a rajz csak 1 pldnyt brzol), a
klnbz mezk klnbz oligonukleotidokat; C. Hibridizci a fluoroforral jellt
cl-DNS; D. A mikrochip kpe a fluoreszcencia-mikroszkban
10.7. bra - 10.7. bra: A hibridizcin alapul szekvencia-analizl berendezs

mkdsi elve
Az oligonukleotid-chipek egyre szlesebb krben terjednek. Ha a technikai nehzsgeket lekzdik, gyors,

viszonylag olcs szekvencia-meghatroz mdszer ll rendelkezsre. A jelenleg kereskedelmi forgalomban lev
63
10. A gnszerkezet
chipek orvosi szempontbl fontos gnek mutciinak kimutatsra, illetve a genomunkban nagy szmban
elfordul egyedi nukleotidvaricik (single nucleotide polymorphism, SNP) azonostsra szolglnak. A
sejtjeinkben kpzd mRNS-ekkel komplementer DNS-szekvencikat (cDNS-eket) hordoz chipek
alkalmazsval a normlis s kros sejtek gnmkdse vizsglhat (l. 13. fejezet). Az oligonukleotid- s DNS-
chipek mr ma is npszerek s a kzeli jvben fontos, rutinszeren alkalmazott diagnosztikai eszkzkk
fognak vlni.
6. Humn genomprogram
A technikai fejlds (PCR, szekvenciz automatk kifejlesztse, informatikai forradalom) nagyszabs
program elindtst tette lehetv 1990-ben: a teljes emberi genom szekvencijnak meghatrozst. A James
Watson irnytsval elkezdett humn genom program idtartamt 15 vre, kltsgeit mintegy 3 millird
dollrra terveztk. A bioinformatika gyors fejldsnek s a kapillris szekventorok kifejlesztsnek
ksznheten azonban a programot 5 vvel korbban fejeztk be, s az eredetileg becslt sszegnek csak a
tizedt kltttk r. A humn genom szekvencijnak meghatrozsa egy nemzetkzi konzorcium (melyben az
USA, Anglia, Franciaorszg, Japn, Nmetorszg s Kna laboratriumai vettek rszt) s egy magncg, a
Celera Genomics kzs erfesztseinek eredmnye. A program tudomnyos jelentsgt hangslyozand,
befejezst 2000 nyarn a Fehr Hzban jelentettk be, majd az elkszlt szekvencit 2001 februrjban a
legnevesebb folyiratokban publikltk: a konzorcium a Nature-ben, a Celera pedig a Science-ben. (A teljes
szekvencia valjban csak adatbzisokban elrhet, kinyomtatva ugyanis mintegy fl milli oldal terjedelm
lenne.)
A genom szekvencia-analzise s a belle nyerhet informcik (struktrlis genomika) nagy jelentsg, nha
meglep eredmnyeket hoztak. Jelenleg valjban nem a teljes genom, hanem az aktv rgi (eukromatin) nagy
rsznek bzissorrendje ismert; a heterokromatikus, jrszt ismtld szekvencikbl ll rgik szekvencia-
meghatrozsa technikailag nehezebb (s a gnek hinya miatt kevsb rdekes is). Gnjeink szma lnyegesen
kisebb (2025 000-re tehet) mint korbban hittk (80100 000), szerkezetk viszont
sokkal bonyolultabb, komplexebb, mint az alacsonyabbrend llnyek. (A komplexits a mRNS-ek s a
fehrjk szintjn rvnyesl. A mechanizmusokkal ksbb foglalkozunk [l. 26. s 31. fejezet].) Az egyni
eltrsek nagyon kis mrtkek: a 3.2 millird bzisprnyi genomban csak mintegy 1.4 milli SNP-t,
nukleotidvaricit azonostottak. Kzlk 60 000 helyezkedik el kdol rgiban. Ezek vizsglata
klnsen jelents lesz az rkld betegsgek patomechanizmusnak tisztzsa szempontjbl.
A humn genom program jvbeni gyakorlati hozadka szinte felmrhetetlen: a legszernyebb jslsok szerint
is jabb forradalmat fog jelenteni az lettudomnyok, klnsen pedig az orvostudomny terletn. Az
oligonukleotid-chipekkel vgrehajtott SNP-analzissel rutin szrvizsglatok llnak majd rendelkezsre
nemcsak az egyetlen gnpr ltal rktett (monognikus) betegsgek, hanem a sokgnes, multifaktorlis
krkpek (hipertonia, skizofrnia, cukorbetegsg stb.) diagnzisban is. Lehetv vlik majd az egyes
betegsgekre val hajlam, prediszpozci megllaptsa is. A farmakogenomika tudomnya lehetv fogja tenni
az egyes gygyszerekkel szembeni egyni rzkenysg genetikai htternek vizsglatt, a szemlyreszabott
gygyszerrendels megvalstst.
Br, a szerkezeti genomika eredmnyeinek hatsait mr most is rezzk, ltalnosan elfogadott nzet, hogy a
szekvencia csak a kezdet. Az igazn lnyeges krds az, hogy a gnek, melyek bzissorrendjt ismerjk,
hogyan mkdnek, hogyan szablyozdnak, termkeik, RNS-ek s fehrjk, hogyan hajtjk vgre mindazokat a
folyamatokat, melyek eredmnye az l sejt. Ezekkel a tudomnyos problmkkal a funkcionlis genomika
foglalkozik (l. 13. fejezet).
Ajnlott irodalom
Brown, K.: The human genome business today. Scientific American 2000/7, 5055.
Church, G. M.: Genomes for ALL. Scientific American 2006/1, 3240.
Cooper, G.M., Hausman, R.E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D.C., USA,
124, 130-133.
64
10. A gnszerkezet
Falus, A., Vradi, A., Rask, I. (1997): DNS-chipek. Termszet Vilga 128, 491494.
Hoheisel, J. D. (1997): Oligomer-chip technology. TIBTECH 15, 465469.
Old, R. W., Primrose, S. B. (1991): Principles of Gene Manipulation. Blackwell Scientific Publications,
London, 319, 99107.
Orosz L. (2000): A Humn Genom Program: nem gntrkp, hanem az ember genetikai kdja. Termszet
Vilga 131, 386387.
Shreeve, J. (1998): The code breaker. Discover 1998/5, 4451.
Spiegelman, S.: Hybrid nucleic acids. Scientific American 1964/5, 4856.
The Human Genome (2001) Nature 409, 811859.
The Human Genome (2001) Science 291, 11771266.
65
11. fejezet - 11. A gnexpresszi
vizsglmdszerei I.: Idegen gnek
expresszija
1. A gnexpresszi vizsglatnak lehetsgei
A gnexpresszi (gnkifejezds, gnmkds) fogalma tgabb rtelemben magban foglalja mindazokat
a folyamatokat, jelensgeket, amelyek egy gnben foglalt rkletes informcinak fenotpusos tulajdonsg
formjban trtn megjelenst eredmnyezik (11.1. bra). Egy gn, illetve termkei fiziolgis szerepnek
vizsglatra elvileg ktfle lehetsg addik: (I) a gn (vagy termkei) bejuttatsa megfelel gazdasejtbe vagy
gazdaszervezetbe s az elidzett fenotpusos vltozsok tanulmnyozsa (ezekkel a mdszerekkel foglalkozik a
jelen fejezet); (II) a sejt vagy szervezet sajt, endogn gnjnek vagy a gn termkeinek megsemmistse vagy
hatstalantsa s a gn normlis funkcijnak megllaptsa az szlelt mkdskiessek alapjn (ez a kvetkez
fejezet tmja).
11.1. bra - 11.1. bra: A molekulris biolgia informci-ramlsnak centrlis

dogmja
2. cDNS-klnozs
Magasabb rend eukariota szervezetek fehrjekdol gnjeire jellemz, hogy kiterjedt nem kdol
szekvencikat (intronokat) tartalmaznak, amelyek RNS-be ugyan trdnak, de az RNS-rs sorn kihasadnak,
gy az rett mRNS-ben mr nincsenek jelen (l. 26. fejezet). Az intronok lte klnleges problmt jelent a
gntviteli ksrletekben. Egyrszt a sokszor risi mret, a teljes gnt hordoz genomilis DNS-
fragmentumok bejuttatsa a gazdasejtbe nehzkes vagy lehetetlen. Msrszt a kiszemelt clsejt (pl. baktrium)
nem mindig rendelkezik azzal az appartussal, ami az intronok eltvoltst vgzi, a bejuttatott gn teht fehrje
szintzist nem fogja irnytani.
Az emltett nehzsgek lekzdsre dolgoztk ki a cDNS-klnozs mdszert, amelynek lnyege, hogy a

vizsglt gn ltal kdolt mRNS bzissorrendjben trolt informcit DNS-be (cDNS, complementer DNS) rjk
t s ezt a DNS-darabot klnozzk. A klnozs menete a kvetkez (11.2. bra): a tiszttott mRNS-en, mint
templton, a reverz transzkriptz enzim segtsgvel ketts lnc cDNS-t szintetizlnak, majd ennek vgeihez
restrikcis endonuklez ragads vgeket ktnek s DNS-ligz enzimmel megfelel vektor molekulba ptik.
Inszercis vektort is lehet hasznlni, azonban ha azt akarjk, hogy a cDNS gnknt mkdjn a gazdasejtben, a
klnozst expresszis vektorban kell elvgezni: az ilyen vektor tartalmazza mindazokat a szignlokat, amelyek
az inszert trshoz (pl. promter) s fehrjeszintzishez (pl. riboszma-kthely) szksgesek. (A promter az
RNS-polimerz enzimet specifikusan megkt DNS-rgi, mely szksges a gntrs megindtshoz. A
prokariota mRNS-ek 5-vghez kzel tallhat egy riboszma-kthely, amely viszont a fehrjeszintzis
elkezdsben jtszik szerepet [l. 29. fejezet].) A rekombinns vektort ezutn bejuttatjk a gazdasejtbe.
66
11. A gnexpresszi
expresszija
11.2. bra - 11.2. bra: A cDNS klnozs menete (A.) s a klnozott gn expresszija E.
coli sejtekben (B.)
E. coli sejtekben vgzett cDNS-klnozs clja ltalban az, hogy a cDNS ltal kdolt fehrjt nagy
mennyisgben termeljk, tudomnyos vagy gyakorlati felhasznlsra (pl. inzulin, interferon, nvekedsi hormon
gyrtsa gygyszati clra). Mint egyszer eukariotk, lesztsejtek is alkalmazhatk gazdasejtknt. Kiterjedten
hasznlt rendszer a rekombinns bakulovrus-vektorral fertztt rovarsejt tenyszet: nagy mennyisgben termeli
a cDNS fehrjetermkt s az eukariota sejtekre jellemz fehrjemdostsokat (pl. oligoszacharidok ktse) is
vgre tudja hajtani. Ms vrusvektorok (pl. SV40 vrus, adenovrus, stb.) gerinces sejtekben teszik lehetv a
cDNS-klnozst.
3. Gntranszfer szvettenyszeti sejtekbe

A magasabb rend eukariota sejtekbe trtn gnbevitelre szmos mdszert dolgoztak ki, ezen a terleten
rthet mdon ma is komoly erfesztsek trtnnek: a gntranszfer eljrsok kpezik ugyanis a humn
gnterpia alapjt (l. 58. fejezet). A fizikai gnbeviteli mdszerek kzl megemltend a mikroinjekci (a DNS
bevitele clsejtbe mikroszkp alatt, finom kapillrissal) s az elektroporci (elektromos impulzus hatsra a
sejthrtyn kpzd prusokon keresztl). A gnbevitel j, hatkony eszkze a gnpuska: a DNS-molekulkat
finom aranyszemcsk felsznhez adszorbeltatjk, majd nagy sebessg gzrammal belelvik a sejtekbe. A
mdszer in vitro (szvettenyszeti sejteken) s in vivo (pl. a br sejtjein) is alkalmazhat. A kmiai gntranszfer
sorn tiszttott, valamilyen hordozanyaghoz kttt (transzfekci) vagy mestersges foszfolipid hrtyval
(liposzma) krlvett DNS jut be a kezelt sejtbe. A biolgiai mdszert vrusvektorok alkalmazsa jelenti.
Ezekkel rszletesebben a gnterpia kapcsn foglalkozunk (l. 59. fejezet).
A rekombinns DNS-t felvett sejtekben a bevitt gn mkdse napokig vizsglhat, majd az ilyen DNS
lebomlik (tmeneti, tranziens expresszi). A sejtek kis rszben az idegen DNS bepl, integrldik a cellulris
67
11. A gnexpresszi
expresszija
genomba, azzal egytt kettzdve az utdsejtekbe is eljut (stabil traszfektns). Az ilyen sejtek sejtvonal
formjban fenntarthatk, bennk az idegen gn mkdse korltlan ideig tanulmnyozhat.
4. Transzgnikus llnyek
A gnmkds vizsglata annl hitelesebb eredmnyeket ad, minl termszetesebb, fiziolgisabb krlmnyek
kztt trtnik. Gnbevitel szvettenyszeti sejtekbe rtkes megfigyelseket eredmnyezhet, de nem
helyettestheti a soksejt szervezetben in vivo vgzett ksrleteket. A gntranszfer in vivo vltozatt 1982-ben
dolgoztk ki: ekkor hoztk ltre az els transzgnikus egereket, melyekben a nvekedsi hormon gnjt
expresszlva risnvst idztek el. Transzgnikus llnyekben az idegen gn jelen van minden testi sejtben
s az ivarsejtek kzvettsvel az utdok is rklhetik.
A transzgn bevitelnek egyik mdja a megtermkenytett petesejt mikroinjekcija. Ha a gn integrldik a

genomba s a sejt tlli a manipulcit, az embri fejldni kezd s valamennyi testi sejtjben jelen lesz az
idegen gn. Az retlen embrit anyallatba viszik be, az jszltt egerek DNS-t pedig molekulris biolgiai
mdszerrel (PCR, Southern blot) tesztelik az idegen gnre.
A msik lehetsg korai embribl szrmaz ssejtek manipullsa (11.3. bra). A mdszer elnye, hogy a
gntranszfer szvettenyszeti krlmnyek kztt vgezhet el s kivlaszthatjk a legmegfelelbb
transzfektnsokat. A manipullt sejteket fiatal embrikba (blasztocisztkba) fecskendezik be, ahol azok
megtapadnak s rszt vesznek az embri fejldsben. A blasztociszta-kimrkat anyallatban nevelik fel. Az
jszlttek kimra-llatok lesznek, hiszen szveteik kialakulshoz az eredeti blasztocisztasejtek s a manipullt
embrionlis ssejtek is hozzjrultak. A kimrkat normlis egyedekkel proztatjk: ha a transzgn jelen van a
kimra csrasejtvonalban, az utdok kztt lesznek valdi transzgnikus llatok. Ha a manipullt embrionlis
ssejtek s a fogad blasztociszta eltr szn llattrzsekbl szrmaztak, a kimrk s a transzgnikus llatok
bundjuk szne alapjn is felismerhetk (11.3. bra).
11.3. bra - 11.3. bra: Transzgnikus egerek ltrehozsa embrionlis ssejtek

manipullsval
68
11. A gnexpresszi
expresszija
Az expresszis vektor megvlasztsval az is szablyozhat, hogy a transzgn mely szvetekben
expresszldjon. Az trs elindtsrt felels promter lehet ltalnos expresszij (pl. aktin-promter), de
lehet szvetspecifikus is. Az inzulin promtere pldul a transzgn trst br minden testi sejtben jelen van
a Langerhans szigetek -sejtjeire fogja korltozni.
Transzgnikus llnyeket nemcsak kutatsi, hanem egyre elterjedtebben gyakorlati clra is ellltanak.
Idegen gnek beptsvel nagyobb termshozam, ellenllbb haszonnvnyeket, elnys tulajdonsg
hzillatokat is ltrehoztak. Ezek a genetikailag manipullt organizmusok (GMO) szmos krnyezetvdelmi,
etikai, gazdasgi, jogi problmt is felvetnek, melyekkel a termszettudomnyon kvli szervezeteknek
(trvnyhozs, kormny, politikai szervezetek) is foglalkozniuk kell. Genetikailag manipullt emlsk j
perspektvkat nyitnak meg a gygyszergyrtsban is: lteznek mr olyan transzgnikus sertsek, kecskk,
szarvasmarhk, melyek tejkben nagy mennyisgben termelnek terpis szerknt felhasznlhat emberi
fehrjket (pl. alvadsi faktorokat).
Ajnlott irodalom
137140.
Gilbert, W., Villa-Komaroff, L.: Useful proteins from recombinant bacteria. Scientific American 1980/4, 68
82.
Shuldiner, A. R. (1996): Transgenic animals. N. Engl. J. Med. 334, 653655.
Velander, W. H., Lubon, H., Drohan, W. N.: Transgenic livestock as drug factories. Scientific American
1997/1, 7074.
69
vizsglmdszerei II.: Az endogn
gnmkds gtlsa
Egy gn mkdst legkzenfekvbb mdon gy vizsglhatjuk, ha a gnt mutcival inaktivljuk vagy
expresszijnak folyamatt megszaktjuk s tanulmnyozzuk a fenotpusban jelentkez kvetkezmnyeket.
Mutns baktriumok s egyszer eukariotk (pl. leszt) rgta kedvelt ksrleti objektumai a molekulris
genetikusoknak. Magasabbrend eukariota sejtek esetben azonban a genom nagy mrete sokig gtat jelentett a
genetikai vizsglatok szmra. A clzott gn- s gnexpresszi-manipulcis technikkat a 80-as vekben
fejlesztettk ki s ez nagy haladst jelentett az eukariota gnmkds megrtsben.
1. Clzott gnroncsols
Az eljrst, amely egy meghatrozott gn inaktivlshoz, kitshez vezet (innen szrmazik a beavatkozs
npszer elnevezse: K.O. mutci), 1989-ben Capecchi dolgozta ki. Alapjul egy rgta ismert genetikai
jelensg, a homolg rekombinci szolgl: ha kt, egymshoz hasonl szekvencij DNS-rgi egymssal
rintkezsbe kerl, kzttk a DNS-lncok kicserldse, rekombinci trtnhet.
A mdszerhez n. K.O. vektort hasznlnak (12.1. bra). Ez tartalmazza annak a gnnek egy rgijt, amelyet
manipullni akarnak, benne egy rezisztenciagnt (pl. a neor gnt), amely ketts funkcit lt el: egyrszt
megszaktja a megclzott gn kdol rgijt, inaktivlva azt, msrszt pedig pozitv szelekcis markerknt fog
funkcionlni, hiszen neomicin-szrmazk jelenltben csak azok a sejtek maradnak letben, amelyek a neor gnt
genomjukba ptettk. Ez azonban nemcsak homolg rekombincival trtnhet, hanem vletlenszer
beplssel, integrcival is (12.1. bra), ami a ksrlet cljnak nem felel meg, hiszen a clgnt pen hagyja.
Ezrt szksg van egy msik szelekcis markerre is, melynek segtsgvel a vletlenszer inszercival szemben
negatv szelekci alkalmazhat. Erre a herpeszvrus timidinkinz gnjt (tkHSV) hasznljk: azok a sejtek,
amelyek ezt a gnt genomjukban hordozzk, egy antivirlis szerrel, ganciklovirrel elpusztthatk. Mint a 12.1.
brn lthat, homolg rekombinci esetn a tkHSV gn a szabad vektorban marad s gy gyorsan eltnik a
sejtekbl; plazmid-integrci utn viszont a genom rszv vlik. Ha teht a plazmidbevitel utn a sejteket
neomicin s ganciklovir jelenltben tenysztik, csak azok a sejtek maradnak letben, melyekben megtrtnt a
megclzott gn inaktivlsa.
12.1. bra - 12.1. bra: A clzott gnroncsols elve. A K.O. vektorral kezelt sejtek sorsa
hromfle lehet: 1. ha a plazmid nem jut be a sejtbe vagy nem pl be a genomba, a sejt
neomicinszrmazkkal elpusztthat; 2. a vletlenszeren integrldott plazmidot
tartalmaz sejteket a ganciklovr li meg; 3. a ketts szelekcit csak azon a sejtek lik
tl, melyekben homolg rekombincival kerl a neor-gn a clgnbe
70
12. A gnexpresszi
gnmkds gtlsa
A gnroncsolst embrionlis ssejteken is el lehet vgezni s a transzgnikus eljrs segtsgvel (l. 11. fejezet)
K.O. egereket lehet ltrehozni. Ezek a megclzott gnre nzve heterozigtk (+/), proztatsukkal homozigta
(/) llatok is nyerhetk, feltve hogy tllik a krdses gn hinyt. A 2000-es vtized vgig az egr
emberhez hasonl mret genomjbl a gnek mintegy felt sikerlt clzottan inaktivlni, tbbszz K.O. egr
szolgl kzlk emberi betegsgek modelljl. A clzott gnkiirts rendkvl fontos mdszere a kutatsnak s a
jvben bizonyos gnterpis eljrsok alapjt is kpezheti majd (l. 60. fejezet).
2. Antisense technika. Ribozimek. RNS interferencia

A funkcionlis RNS-sel vagy annak egy szakaszval komplementer polinukleotidokat antisense
nukleinsavaknak nevezzk; ha ezek bzisprosodssal kapcsoldnak clmolekuljukhoz, gtolhatjk annak
mkdst. Egy meghatrozott mRNS-re specifikus antisense oligonukleotid sejtbe juttatsval gtolhat az
azt kdol gn expresszija: az oligonukleotid akadlyozhatja az mRNS rst, transzportjt, transzlcijt,
esetleg annak gyors degradcijhoz vezethet.
Az antisense megkzelts specilis lehetsgt adjk bizonyos katalitikus aktivitssal rendelkez RNS-
molekulk. Egyes ribozimek kpesek arra, hogy helyspecifikusan hastsanak ms RNS-molekulkat (12.2.
bra). A szubsztrt megktse komplementer bzisprosodssal trtnik, gy a ribozim RNS-kt helynek
megtervezsvel elvileg brmilyen mRNS hasthat, a sejten bell is. A ribozim elnye a kznsges
oligonukleotiddal szemben, hogy mg az utbbi sztchiometrikusan hat, azaz 1 oligonukleotid 1 mRNS
molekult kpes hatstalantani, addig a ribozim a hasts utn j ldozat utn nzhet, gy nagyszm mRNS-
molekult kpes elpuszttani.
12.2. bra - 12.2. bra: mRNS molekula hastsa ribozimmel
71
12. A gnexpresszi
gnmkds gtlsa
Antisense oligonukleotidok s ribozimek is gnspecifikus mdon gtolnak, gy rthet mdon mindkt mdszer
mr a klinikai kiprbls stdiumban van bizonyos betegsgek kezelsben (l. 60. fejezet).
A fentiekhez hasonl elven mkd, de sokkal hatkonyabb, forradalmian j technolgit dolgoztak ki az 1990-
es vek vgn. A mdszer az RNS-interferencia jelensgn alapul (12.3. bra). Valsznleg minden eukariota
sejt magjban kpzdnek hajtszer kettslnc RNS-molekulk. Ezek kijutnak a citoplazmba s specifikus
endonuklez enzim hatsra 21-23 bzispr hosszsg kettslnc RNS-darabokra hasadnak (siRNS, l. 2.
fejezet). Ezek fehrjkkel kapcsoldva n. gncsillapt komplexet hoznak ltre: az siRNS egyik lnca
komplementer mRNS-szakaszhoz kapcsoldik s a komplex nuklezai az mRNS-t lebontjk. Az RNS-
interferencia, ms nven gncsillapts (gene silencing) jelensge arra is hasznlhat, hogy a sejtekbe kvlrl
bevitt, a megclzott mRNS-sel homolg siRNS segtsgvel meghatrozott gn mkdst gtoljk (l. 59.
fejezet). A mdszer jelentsgt sokan a polimerz lncreakcihoz hasonltjk.
12.3. bra - 12.3. bra: Az RNS-interferencia elve; specifikus mRNS degradcija a

sejtmagban termszetes mdon kpzd (A.) s a sejtbe kvlrl bejutott siRNS
felhasznlsval (B.)
72
12. A gnexpresszi
gnmkds gtlsa
3. A fehrjefunkci gtlsa
A gnexpresszi folyamata nemcsak a DNS s az RNS, hanem a fehrjk szintjn is megszakthat. A
kiszemelt fehrjre specifikus antitestmikroinjekcija a sejtbe hatsos, de nehzkes eljrs. Az 1990-es vek
elejn fejlesztettk ki az intracellulris antitestek technikjt. Ennek lnyege, hogy molekulris biolgiai
mdszerekkel olyan cDNS-t hoznak ltre, amely egyetlen polipeptidlnc formjban expresszlja azokat az
antitestdomneket, amelyek egy meghatrozott fehrjhez specifikusan, nagy affinitssal kapcsoldni kpesek.
A cDNS a sejtben expresszlhat s az antitest eljuttathat abba az organellumba, ahol a clfehrje mkdik.
Kros mkds fehrjk gtlsval az intracellulris antitestek a jvben orvosi jelentsgre is szert tehetnek.
A fehrjemkds gtlsnak egyre elterjedtebb mdszere a dominns gtl proteinek expresszija a sejtben.
Ezek a mutns fehrjk nemcsak inaktvak, hanem a megfelel endogn proteinnel vetlkedve megakadlyozzk
annak ktdst valamilyen biolgiailag fontos molekulhoz (szubsztrt, szablyoz fehrje, nukleinsav stb.),
gy jelenltkben a normlis fehrje sem mkdik. Lnyegben hasonl mechanizmussal gtolnak a
peptidomimetikumok: ezek oligopeptid molekulk, melyek aminosavsorrendje megegyezik a clfehrje
biolgiailag fontos rgijval, ezrt a fehrjemkdst kompetitv mdon, nagymrtkben specifikusan gtolni
kpesek.
Ajnlott irodalom
Bernards, R. (2006): Exploring the uses of RNAi Gene knockdown and the Nobel Prize. N. Engl. J. Med. 355,
23912393.
Cooper, G.M., Hausman, R. E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D.C., USA,
140147.
Conzin, J. (2006): Method to silence genes earns loud praise. Science 314, 34.
Evans, M. J., Smithies, O., Capecchi, M.R. (2001): Mouse gene targeting. Nature Medicine 7, 10811090.
Hannon, G. J. (2002): RNA interference. Nature 418, 244251.
James, H. A., Gibson, I.: Ribozymes. Science & Medicine, 1998/2, 2635.
Majzoub, J. A., Muglia, L. J. (1996): Knockout mice. N. Engl. J. Med. 334, 904907.
73
12. A gnexpresszi
gnmkds gtlsa
Rossi, J. J. (1995): Controlled, targeted, intracellular expression of ribozymes: progress and problems.
TIBTECH 13, 301306.
Sarkadi B. (2007): Nobel-dj az ssejtek genetikai mdostsrt. Lage Artis Medicinae 17, 906907.
Wagner, R. W. (1994): Gene inhibition using antisense oligodeoxynucleotides. Nature 372, 333335.
74
vizsglmdszerei III.: Specifikus
gntermkek azonostsa
A gnek expresszija sorn irnytsukkal mRNS-ek, majd fehrjk kpzdnek (11.1. bra); a gnmkds
mrtke az RNS- s fehrjetermk mennyisgnek megmrsvel is meghatrozhat. Egy magasabbrend
eukariota sejtben azonban tbb ezer, tbb tzezer gn is aktv lehet egyidben; egyes gnek expresszijnak
vizsglathoz teht olyan mdszerekre van szksg, amelyek specifikus mRNS-ek, illetve specifikus fehrjk
azonostsra alkalmasak.
1. cDNS-tr ksztse
Bizonyos ksrleteknl szksg lehet arra, hogy egy adott sejtben, szvetben kifejezd sszes mRNS-
szekvencit szmba vegyk. Az RNS-ek molekulris biolgiai manipulcija azonban nehzkes: egyrszt ebben
a formban nem klnozhatk, msrszt sokkal rzkenyebbek degradcis hatsokra mint a DNS. Ezrt ilyenkor
a bennk lev informcit ketts lnc cDNS-be rjk t, majd a cDNS-populci klnozsval cDNS-trat
hoznak ltre. A cDNS-tr teht, szemben a genomtrral (l. 9. fejezet), csak kdol gnszakaszokat tartalmaz s
mivel klnbz sejtekben klnbz gnpopulci aktv, ugyanazon szervezet klnbz szveteibl
ellltott cDNS-trak egymstl eltrnek, szvetspecifikusak.
A cDNS-tr konstrukcijnl a cDNS-klnozsnl lert mdszert kvetik (l. 11.2. bra), azzal a klnbsggel,
hogy a szvetbl oligo(dT)-cellulz affinits kromatogrfival izollt ssz-mRNS prepartumbl indulnak ki
(eukariota sejtek legtbb mRNS-nek 3-vgn poli(A)-szekvencia van, gy knnyen elklnthet a tRNS-ektl
s rRNS-ektl). A poli(A)+ mRNS-eket reverz transzkriptzzal cDNS-be rjk t. A reverz transzkriptz
klnleges DNS-polimerz: RNS templton dezoxiribonukleozid-trifoszftok felhasznlsval komplementer
DNS-lncot szintetizl. Primerknt a poli(A)-hoz ktd oligo(dT)-t hasznlnak. A ketts lnc cDNS-ek
mindkt vghez ragads vgeket eredmnyez restrikcis endonuklez felismer helyeket kapcsolnak,
plazmid, -fg vagy vrusvektorba ptik be ket, majd a genomtraknl mr ismertetett mdon gazdasejtbe
juttatjk a rekombinns vektorokat. A kvnt kln megkeresse trtnhet hibridizcis mdszerrel (l. 9. fejezet),
de expresszis cDNS-tr esetn (azaz, ha a klnozs expresszis vektorban trtnt) a keresett kln azonostsa a
cDNS-inzert fehrjetermke alapjn immunolgiai mdszerrel is trtnhet. (Ilyenkor a bakteriolgiai lemezrl
ksztett filterlenyomat vizsglata a Western blotnl lert mdon folyik; l. ksbb.)
2. Northern blot
Ezt a technikailag a Southern blothoz hasonl kivitelezs mdszert egy specifikus RNS-nek komplex RNS-
keverkben trtn kimutatsra hasznljk. Az RNS-mintt formaldehid-tartalm agarzglben
elektroforetizljk (13.1. bra): a formaldehid mint denaturl gens felbontja az RNS-ek msodlagos
szerkezet rgiit s a kinyjtott RNS-molekulk mretknek megfelelen vndorolnak. Az RNS-eket a glbl
filterre viszik t, a kvnt RNS-re specifikus radioaktv prbval hibridizljk, majd autoradiogrfit vgeznek.
Ha a keresett RNS jelen volt a mintban, a mretnek megfelel helyen fekete cskot ad az autoradiogrammon.
A csk erssgbl az expresszi mrtkre kvetkeztethetnk.
13.1. bra - 13.1 bra: A Northern blot mdszer elve
75
13. A gnexpresszi
gntermkek azonostsa
3. Immunolgiai mdszerek
Specifikus fehrjk kimutatsra immunolgiai mdszerek alkalmasak: a fehrje elleni antitest az antignnel
immunkomplexet alkot, ami kimutathat.
3.1. Immuncitokmia
A fnymikroszkpos immuncitokmia legelterjedtebben alkalmazott vltozata az immunfluoreszcencia
mikroszkpia. A metszetet vagy a detergens kezelssel permeabilizlt sejtet a vizsgland fehrje elleni
antitesttel kezelik, amelyet fluoreszcens festkkel jelltek meg. Ha a ksztmnyt ezutn fluoreszcencia-
mikroszkpban vizsgljk, csak a specifikus fehrjt tartalmaz, antitestet kt rgik fognak fluoreszklni.
Klnbz szn festkek alkalmazsval ugyanazon metszetben, sejtben klnbz fehrjk expresszija,
lokalizcija vizsglhat. A lert mdszer a direkt immunfluoreszcencia. Az indirekt eljrs sorn a vizsglt
anyagot elszr jelletlen, a clfehrjre specifikus els antitesttel kezelik, majd fluorokrmmal jellt, az els
antitest elleni msodik ellenanyaggal. A kt antitest alkalmazsval nvelhet az immuncitokmiai kimutats
fajlagossga s rzkenysge is.
Modern konfoklis mikroszkpok segtsgvel a fluoreszcens antitesttel festett sejtrl rtegfelvtelek

kszthetk s szmtgp segtsgvel megalkothat a fehrjelokalizci hromdimenzis kpe. A mdszer
klnsen npszer a citoszkeleton-kutatsban: aktin, tubulin vagy intermedier filamentum fehrjk elleni
antitestekkel lthatv tehetk a sejtvz klnbz elemei (l. 39. s 40. fejezet).
Az antignantitest reakci az elektronmikroszkpiban is felhasznlhat. Finom nehzfm szemcskhez (pl.

aranyhoz, immunogold technika) kttt antitest segtsgvel a vizsglt fehrje sejten belli lokalizcija
pontosan megllapthat.
3.2. Immunprecipitci
A mdszert ltalban akkor alkalmazzk, ha fehrjekeverkbl egy specifikus proteint akarnak elklnteni,
azonostani (13.2. bra). Az antitestet hozzadjk az elegyhez, majd a ltrejv immunkomplexeket specilis
agarzgyngyk felsznn ktik meg. A gyngyk centrifuglssal knnyen elklnthetk a tbbi fehrjtl, a
hozzjuk ktd fehrjket SDS-poliakrilamid glelektroforzissel frakcionljk. Ha a fehrjekeverk
radioaktvan jellt volt, a clfehrjt autoradiogrfival mutatjk ki. A fehrjk radioaktv jellsnek mdjtl
fggen az immunprecipitci alkalmas specifikus fehrjk szintzisnek, kmiai mdosulsnak (pl.
foszforilci, glikozilci) tanulmnyozsra.
13.2. bra - 13.2. bra: Az immunprecipitci menete (az autoradiogrammon az 1.

minta a teljes fehrjekeverk a 2. pedig az immunprecipittum kpt mutatja)
76
13. A gnexpresszi
gntermkek azonostsa
3.3. Immunoblot (Western blot) mdszer

Az eljrs specifikus fehrje detektlsra s mennyisgnek meghatrozsra alkalmas jelletlen
fehrjekeverkben (13.3. bra). Az elegyet egy- vagy ktdimenzis poliakrilamid glelektroforzissel
frakcionljk, majd a fehrjket a mr ismert blotting technikval nitrocellulz filterre viszik t. A membrnt
ezutn a keresett fehrje elleni antitesttel kezelik, majd az immunkomplexeket egy msodik, az els antitesttel
szemben termelt ellenanyaggal reagltatjk. A msodik antitest specilis enzimmel konjuglt vagy radioaktv.
Elbbi esetben sznreakcival, az utbbiban autoradiogrfival detektlhatk. A reakci intenzitsa alapjn a
mennyisg meghatrozhat.
13.3. bra - 13.3. bra: Az immunoblot (Western blot) mdszer elve
4. Funkcionlis genomika
A Humn Genom Program eredmnyei (l. 10. fejezet) genomunk mkdsnek vizsglatt is felgyorstottk. A
funkcionlis genomika a sejtekben kpzd RNS-ek s fehrjk globlis vizsglatra, egyidej kimutatsra
s minsgi s mennyisgi analzisre ad lehetsget. Ez az j tudomnyg j, mind jobban terjed
szakkifejezseket is szlt: a transzkriptom vagy RNom (egy sejtben kpzd illetve jelen lev RNS-ek
sszessge), a proteom (a sejtben expresszld fehrjk sszessge), az interaktom (a sejt fehrji kztt
kialakul klcsnhatsok trkpe), a foszfoproteom (a sejt fehrjefoszforilcis mintzatnak egsze) fogalma
egyre gyakrabban szerepel a szakirodalomban.
4.1. A gnexpresszi vizsglata cDNS-chipekkel

A Northern blot mdszerrel egy ksrletben egy (esetleg nhny) specifikus mRNS expresszijt vizsglhatjk.
A cDNS-trak ugyan tartalmazzk az adott sejtben kifejezd valamennyi gn informcijt, de az sszes cDNS
azonostshoz szmos ksrletre van szksg. A 10. fejezetben ismertetett DNS-mikrochip technolgia
alkalmazhat a gnmkds vizsglatra is: egyetlen DNS-chip segtsgvel nhny rs munkval
meghatrozhat az adott sejtre adott krlmnyek kztt jellemz gnexpresszis profil.
77
13. A gnexpresszi
gntermkek azonostsa
A vizsglt sejtekbl ssz-mRNS-t izollnak, majd reverz transzkripcival fluorokrmmal jellt cDNS-kollekcit
ksztenek. A fluoreszcens cDNS-ekkel azutn olyan DNS-chipen vgeznek hibridizcit, melyhez nagyszm,
az illet fajra jellemz gnfragmentumot vagy gnspecifikus oligonukleotidot kapcsoltak hozz, ismert
elrendezsben (l. 10.6. s 10.7. bra). A mikrochipet ezutn komputervezrelt fluoreszcencia-mikroszkppal
vizsgljk t s a fluoreszcencia-mintzat alapjn a szmtgp megllaptja az egyes gnek expresszis szintjt.
Szmos biotechnolgiai cg dolgozik gyakorlati clra (pl. gygyszerek hatsnak vizsglatra, betegsgek
diagnosztizlsra) hasznlhat DNS-chipek kifejlesztsn, ezek kzl egyre tbb jelenik meg az egszsgipar
piacn is. A gnexpresszis mintzatok diagnosztikai cl alkalmazsra az 58. fejezet mutat be egy pldt.
4.2. Proteomika
A fenotpusos tualjdonsgok kialaktsrt gy a sejtben lejtszd patolgis biolgiai folyamatokrt is
kzvetlenl a fehrjk felelsek. Ezrt a fehrjk szleskr vizsglata, a proteomkutats (proteomika) orvosi
szempontbl a nukleinsavak analzisnl is fontosabb. A proteom tanulmnyozsa ugyanakkor technikailag
sokkal nehezebb, mint a nukleinsavak: a fehrjk amplifiklsra szolgl PCR-jelleg mdszer nem ltezik;
egyes fehrjk igen alacsony szinten expresszldnak sejtjeinkben; mkdsket nemcsak mennyisgk, hanem
trszerkezetk, kovalens mdosulsaik (foszforilci, glikozilci, acetilci stb.) is befolysoljk. Mindezek a
tnyezk rendkvli mdon megneheztik a proteomkutatsokat. A sejtek fehrjeprofiljnak vizsglata azonban
orvosi szempontbl felbecslhetetlen rtk informcikat szolgltathat: betegsg-specifikus fehrjemarkerek
(pl. tumorfehrjk) kimutatsa, gygyszerek tmadspontjnak azonostsa, molekulris diagnosztikai eljrsok
kidolgozsa.
j, ismeretlen fehrjk azonostsra mr ma is rendelkezsre ll a technolgia. A sejtkivonat fehrjit

ktdimenzis glelektroforzissel frakcionljk, a kvnt fehrjefoltot kinyerik a glbl, kisebb peptidekre
hastjk, majd a peptideket tmegspektrometrival azonostjk. (A mdszer trgyalsa a biofizika trgykrbe
tartozik.)
A fehrjk specifikus ktdsi tulajdonsgait a DNS-chipekhez hasonl protein-chipekkel vizsgljk. A chip-

lemezen tbbszz specifikus fehrjt rgztenek, majd a vizsgland, jellt fehrjekeverkkel vgzett kezels
utn a lemez egyes rgiin meghatrozzk a fehrjektdst. Fehrjekeverkek ktdsi tulajdonsgainak
analzisre antitest-, peptid- s sznhidrt-chipek is rendelkezsre llnak mr. A technolgia a kvetkez
vekben forradalmastani fogja a sejtbiolgiai kutatsokat, a betegsgek patomechanizmusnak elemzst s a
diagnosztikt.
Ajnlott irodalom
Aebersold, R., Cravatt, B. F. (2002): Proteomics - advances, applications and the challenges that remain.
TIBTECH 20, S1S2.
130135.
Ezzel, C.: Beyond the human genome. Scientific American 2000/7, 6469.
Ezzel, C.: Proteins rule. Scientific American 2002/4, 2733.
Falus A. (2002): Genomika az orvostudomnyban. Termszet Vilga 133, 5052.
Friend, S.H., Stoughton, R.: The magic of microarrays. Scientific American 2002/2, 3441.
Kozian, D.H., Kirschbaum, B. J. (1999): Comparative gene expression analysis. TIBTECH 17, 7378.
Lee, Y-S., Mrksich, M. (2002): Protein chips: from concept to practice. TIBTECH 20, S14S18.
Old, R. W., Primrose, S. B.: Principles of Gene Manipulation. Blackwell Scientific Publications, London, 120
167, 1991.
Service, R. F. (1998): Microchip arrays put DNA on the spot. Science 282, 396399.
78
14. fejezet - 14. A sejtmag felptse
1. A sejtmag elektronmikroszkpos szerkezete
A sejtmag (nukleusz, karion) az eukariota sejt lett irnyt organellum: itt trtnik a genetikai informci
trolsa s megkettzdse, trsa RNS-molekulkba, az RNS-ek rse s transzportja a citoplazmba.
Transzmisszis elektronmikroszkpos felvtelen (14.1. bra) jl elklnlt kpletek figyelhetk meg a
sejtmagban: a maghrtya, a kromatinllomny s a nukleolusz; specilis technikval lthatv tehet a
magmtrix. Ebben a fejezetben a felsorolt alkotrszek jellemzit trgyaljuk (kivve a nukleoluszt, melyrl az
rRNS-szintzissel kapcsolatban lesz sz).
14.1. bra - 14.1. bra: A sejtmag elektronmikroszkpos felptse
2. A maghrtya
2.1. A maghrtya felptse
A sejtmagot kt membrnbl ll maghrtya vlasztja el a citoplazmtl. A kls membrn kzvetlenl
kapcsolatban ll a durva felszn endoplazmatikus retikulummal, citoszl felli felsznhez riboszmk is
ktdnek. A bels membrn egy vkony fehrjertegen, a nukleris laminn keresztl a kromatin szli
rteghez kapcsoldik. A lamin fehrjk egyik tpusa (lamin B) a hozz ktd lipidlnc s a bels membrnban
elhelyezked fehrjk (pl. a lamin B receptor) segtsgvel a bels maghrtyba van kihorgonyozva, mg a
lamin A s C molekulk a kromatinnal ltestenek kapcsolatot. Ezek a fibrillris fehrjk a citoszkeleton
intermedier filamentumaival mutatnak rokonsgot (l. 40. fejezet): fonlszeren felcsavarodva rosthlzatot
hoznak ltre, mely hozzjrul a sejtmag alakjnak meghatrozshoz. Az 1990-es vekben tbb ritka rkld
betegsg htterben talltak olyan mutcit, mely lamin-gnt vagy a bels membrn egyes fehrjinek gnjt
rinti. A laminopathik kz tartoznak a myopathik (izomsorvadssal, gyakran szvritmuszavarokkal jr
krkpek), lipodystrophik (zsrsejtdegenercival, diabetesszel jellemezhet betegsgek), neuropathik
(idegrendszeri elvltozsok) bizonyos tpusai. A lamin A gnjben bekvetkez mutcik okozzk a korai
regedssel jr Hutchinson-Gilford progerit. A krkpek pathomechanizmusa mg nem tisztzott; a
gnszablyozs zavara, a laminhl szerkezetnek megbomlsa lehet a tnetek okozja.
79
14. A sejtmag felptse
A kls s bels hrtya kztti reg a perinukleris tr. A membrnokon keresztl foly transzport korltozott:
kismret hidrofb anyagok juthatnak itt be a sejtmagba. A nukleocitoplazmatikus transzport dnt rsze a
maghrtya felsznn elhelyezked tbb ezer magpruson keresztl trtnik.
2.2. Magpruskomplexum
A prusok mintegy 100 klnbz nukleoporin fehrjbl ll, bonyolult szerkezet kpletek (14.2.bra).
Alapstruktrjukat 8 nagymret fehrjekomplex alkotja, melyek a citoszl s a sejtmag fel nz oldalon is
gyrszer kpzdmnyt hoznak ltre (citoplazmatikus s nukleris gyr), a maghrtya kzps skjban pedig
kllket kpeznek. A prus kzepn gyakran figyelhet meg egy kzponti komplex (dug), melynek
szerepe vitatott; valsznleg csatornaknt mkdik, melyen nyugalmi llapotban csak ionok s kis molekulk
juthatnak t, kitgulva azonban nagyobb partikulumok transzportjt is lehetv teszi. A gyrkhz
citoplazmatikus filamentumok, illetve nukleris kosr formjban fehrjefonalak kapcsoldnak.
14.2. bra - 14.2. bra: A magprus komplexum szerkezete (A. fellnzeti kp; B.
keresztmetszet)
2.3. Nukleocitoplazmatikus transzport

A prusok ionok, kismret molekulk, kisebb fehrjk szmra szabadon tjrhatk, ezek transzportja mindkt
irnyban passzv diffzival trtnhet. Nagyobb fehrjk, RNS-ek, RNP-komplexek szlltsa a
maghrtyaprusokon keresztl szelektv, energit ignyl folyamat: a specificitst szlltfehrjk s
nukleoporinok egymsrahatsa biztostja, az energit pedig GTP s ATP szolgltatja.
A nukleocitoplazmatikus transzportra azrt van szksg, mert az RNS-ek a sejtmagban, a fehrjk viszont
csak a citoplazmban szintetizldnak. A szlltfehrjk csaldjt karioferineknek nevezzk. Ezek a citoplazma
s a sejtmag kztt ingznak, feladatuk fehrjk sejtmagba trtn transzportja (importinok), illetve egyes
proteinek visszaszlltsa a citoplazmba (exportinok). A transzportban fontos szerepe van a Ran-fehrjnek is,
amely az n. Ras-fehrje szupercsald (l. 46. fejezet) sokrt funkcit ellt nukleris kpviselje. A csald
tagjai egyetlen polipeptidlncbl ll guaninnukleotid-kt fehrjk (monomer G-proteinek): GDP-kt s
GTP-kt formban lteznek a sejten bell. A Ran ugyancsak ingz fehrje: RanGTP formja a sejtmagban,
RanGDP formja pedig a citoplazmban dominl. Az aktv RanGTP komplex f feladata, hogy a karioferin s
a szlltott fehrje kztti kapcsolatot szablyozza. Valsznleg szerepet jtszik a mitzis egyes folyamataiban
(az osztdsi ors kialakulsban, a maghrtya felplsben) is.
A nukleocitoplazmatikus transzport a sejtbiolgiai kutatsok egyik divatos tmja, gy mechanizmusa elg jl

ismert. A 14.3. bra leegyszerstve mutatja be a magfehrjk importjnak (14.3.A. bra) s exportjnak
lpseit. A legtbb magfehrje tartalmaz egy olyan, bzikus aminosavakban gazdag rgit (nukleris
lokalizcis szignl, NLS), amely jelknt szolgl a sejtmagba trtn szlltsra. Ezt a rgit importin molekula
ismeri fel, hozzktdik (1. lps a 14.3. brn), a komplex dokkol a prus-komplexum citoplazmatikus
filamentumain (2. lps), majd jabb s jabb nukleoporinokkal ltestve kapcsolatot, fokozatosan tjut a
pruson s transzlokldik a sejtmagba (3. lps). Itt RanGTP hatsra az importin/NLS-fehrje komplex
disszocil (4. lps) s az importlt magfehrje megkezdheti sejtmagon belli tevkenysgt.
80
Egyes magfehrjk (riboszomlis fehrjk, bizonyos inaktvv vlt transzkripcis faktorok stb.) szelektven
exportldnak is a sejtmagbl (14.3.B. bra), feltve, hogy nukleris export szignlt (NES) tartalmaznak (NES-
fehrjk). RanGTP hatsra ezek a fehrjk exportin molekulval kpeznek komplexet (5. lps), amely a
prus-komplexumhoz ktdik (6. lps), majd transzlokldik a citoplazmba (7. lps). Itt a RanGTP a fehrje
sajt GTPz aktivitsval a GTP-rl egy foszftcsoportot lehastva RanGDP-v alakul t, a fehrjekomplex
pedig alkotira esik szt (8. lps).
Az RNS-ek exportjnak mechanizmusa sokkal kevsb ismert, de valszn, hogy ugyancsak karioferinek
kzvettsvel zajlik, a fehrje-exportnl mr ismertetett mdon. A riboszma alegysgek
nukleocitoplazmatikus transzportjban bizonyos riboszmafehrjk, az mRNS-ekben pedig hnRNP-fehrjk
ltjk el a szlltfunkcit. Az rett mRNP-partikulum exportjnak valszn mechanizmust mutatja be a 14.4.
bra. A szintzist, majd RNS-rst (l. 25. s 26. fejezet) kveten az mRNS-molekula fehrjhez kttt,
kompakt partikulum formjban felszabadul a kromatinbl s a nukleoplazmn keresztl ri el a
pruskomplexumot (14.4. bra, 1. lps). Mikzben thalad a kosrszer filamentumhln, kezd fellazulni s
kitgtva a kzponti dug csatornjt, megkezdi a transzlokcit a pruson keresztl (2. lps). Az ell halad
5-vg teljesen sztcsavarodik s mikzben folytatdik az mRNP tjutsa a pruson, a hozz kapcsold
riboszmkon megindul a fehrjeszintzis (3. lps).
14.3. bra - 14.3. bra: A magfehrjk importjnak (A.) s exportjnak (B.)

mechanizmusa
14.4. bra - 14.4. bra: mRNP-export a magpruson keresztl
81
A fehrjk s RNS-ek nukleocitoplazmatikus transzportja a sejt ignyeinek megfelelen szablyozhat, a

gnmkds gy ezen folyamatok tjn is regullhat. Egyre tbb bizonytk van arra, hogy a magprusok
mkdsnek orvosi jelentsge is lehet. Az AIDS-krokoz humn immundeficiencia vrus (HIV) egyik
fehrjje pldul szlltszerepet lt el a vrus-RNS transzportjban. A fehrje szelektv gtlsa megszakthatn
a vrus letciklust a fertztt sejtekben.
3. A kromatinllomny
Nem osztd, interfzikus sejtben a sejt DNS-e kromatin formban van jelen. Ebbl alakulnak ki a
kromoszmk a sejtosztds kezdetn. A kromatin dezoxiribonukleoprotein (DNP): hozzvetlegesen egyenl
arnyban tartalmaz DNS-t, hiszton s nem hiszton fehrjket (l. 16. fejezet). Funkcionlis morfolgiai
szempontbl a kromatinllomnyt kt tpusra lehet elklnteni. A heterokromatin ersen kondenzlt, gnekben
viszonylag szegny, elektronszr kplet a sejtmagban, amely a maghrtya kzelben (marginlis kromatin), a
sejtmagvacska krl (nukleoluszhoz asszocilt kromatin) s a nukleoplazmban elszrtan helyezkedik el. Ez a
kromatinfajta funkcionlisan inaktv: RNS-szintzisre vagy teljesen kptelen (konstitutv heterokromatin) vagy
csak bizonyos krlmnyek kztt, bizonyos szvetekben folyik benne transzkripci (fakultatv
heterokromatin). Az eukromatin laza szerkezet, kevss elektronszr, a sejtmagban elszrtan elhelyezked
kromatinfajta, amely tartalmaz aktvan trt gneket. A kromoszmk interfzikus elhelyezkedse a sejtmagon
bell nem vletlenszer. Teljes kromoszmkra specifikus prbval vgzett in situ hibridizcis ksrletek
tansga szerint az egyes kromoszmk az interfzisban is jl krlhatrolhat magterleteket, kromoszma-
territriumokat foglalnak el, amelyeket interkromoszomlis rgik vlasztanak el egymstl. A kromoszma-
territriumok belseje ltalban heterokromatin, szli rszeik azonban transzkripcionlisan aktvak, az itt
kpzd transzkriptumok RNS komplexei az interkromoszomlis trbe jutnak, ott rsi folyamatokon esnek t,
s a magprusok fel transzportldnak..
A kromatin kis mennyisgben ribonukleoproteint (RNP-t) is tartalmaz. Az elektronmikroszkposan a

heterokromatin szli terletein megjelen perikromatikus granulumok s fibrillumok, illetve a kromatinmentes
terletekre lokalizld, gyngyfzrszer interkromatikus granulumok RNP-tartalm kpletek. Pontos
jelentsgk nem ismert, de valsznleg az mRNS-szintzis, -rs s -transzport morfolgiai megjelensi
forminak tekinthetk.
4. Magmtrix
Ha izollt sejtmagokat nem ionos detergenssel, DNz enzimmel s soldattal kezelnek, a magbl a kromatin s
a nukleoplazma nagy rsze eltvolthat. A megmarad, fehrjefonalakbl ll hlzatot nevezik
magmtrixnak. Fiziolgis jelentsge ma mg bizonytalan: lehet, hogy a citoszkeletonhoz hasonl strukturlis
vzat biztost a magban lezajl biokmiai folyamatokhoz (DNS-replikci, RNS-szintzis, rs, -transzport);
nem zrhat ki azonban, hogy a magmtrix preparlsi mtermk.
Ajnlott irodalom
82
Clarke, P. R., Zhong, C. (2001): Ran GTPase: a master regulator of nuclear structure and function during the
eukaryotic cell division cycle. Trends Cell Biol. 11, 366371.
355374.
Csermely, P. (1996): Jeltviteli folyamatok a sejtmagban. Termszet Vilga 127, 69.
Daneholt, B. (1997): A look at messenger RNP moving through the nuclear pore. Cell 88, 585588.
Lamond, A. I., Earnshaw, W. C. (1998): Structure and function in the nucleus. Science 280, 547553.
Nigg, E. A. (1997): Nucleocytoplasmic transport: signals, mechanisms and regulation. Nature 386, 779789.
Worman, H. J., Courvalin, J-C. (2002): The nuclear lamina and inherited disease. Trends Cell Biol. 12, 591
598.
83
15. fejezet - 15. Az eukariota genom
organizcija
Az emls sejtek genomjnak mrete mintegy ezerszeresen mlja fell a baktriumokt (tbb millird bzispr a
nhny millival szemben), ugyanakkor a genomban jelenlev gnek szmban csak tszrs a klnbsg (a
humn gnek szma: kb. 2025 000, az E. coli gnek szma: kb. 4300). Mr ezek a
szmszer adatok is arra utalnak, hogy a pro- s eukariota genom organizcija jelentsen eltr egymstl. A
DNS-vizsgl mdszerek fejldse a rszletekre is fnyt dertett.
1. A genomorganizci vizsglata DNS-renaturcis

ksrletekkel
A genom szerkezetnek feltrsa mr jval a DNS-szekvenciz mdszerek kifejlesztse eltt, az 1960-as
vekben megkezddtt. Britten s Kohne klnbz fajok DNS-nek renaturcis tulajdonsgait vizsglta. A
DNS-mintkat vizes oldatban ultrahanggal kisebb darabokra trdeltk, hdenaturltk, majd lass htssel
renaturcit vgeztek s ennek klnbz idpontjaiban meghatroztk a mintkban az egyes s ketts lnc
DNS arnyt (15.1. bra). Az E. coli DNS renaturcis kinetikja olyan genomnak felelt meg, amelyben a
legtbb szekvencia egy pldnyban fordul el. Ezzel szemben a borj tmuszbl izollt DNS egy rsze (kb.
40%-a) igen gyorsan renaturldott, mg a fragmentumok nagyobb hnyadnak bzisprosodshoz hetekre,
hnapokra volt szksg. Az alkalmazott vizsglati krlmnyek kztt a renaturci sebessgt elssorban az
hatrozza meg, hogy az egyes szekvencik hny pldnyban vannak jelen a genomban. A ksrletbl levonhat
kvetkeztets teht, hogy a borj genom kb. 60%-t olyan szekvencik alkotjk, melyek csak egy vagy nhny
pldnyban vannak jelen (egyedi szekvencik), mg 40%-a klnbz mrtkben ismtld szekvencikbl
ll. A molekulris biolgiai mdszerek fejldsvel ezen szekvencik klnbz tpusait rtk le.
15.1. bra - 15.1. bra: E. coli s borj DNS renaturcis grbje
84
15. Az eukariota genom
organizcija
2. Szatellit-DNS
A leggyorsabban renaturld genomrgikra jellemz, hogy rvid DNS-szakaszok egyms mellett, tandem
mdon tbb ezer, tbb tzezer pldnyban ismtldve alkotjk. Ezeknek a szekvenciknak a bzissszettele
eltrhet a DNS tbbi rsznek bzisarnytl, gy eltr srsgk alapjn izopiknikus grdiens centrifuglssal
izollhatk (15.2. bra). A szedimentogrammon ezek a nagy fokban ismtld szekvencik kis cscsokat
(szatellitcscsokat) alkotnak, innen szrmazik elnevezsk. In situ hibridizcis ksrletek tansga szerint a
szatellit-DNS nagy rsze a kromoszmk centromr rgijban lokalizldik, valsznleg a mikrotubulusok
ktdsben s a kromatidk sszetartsban jtszik szerepet. Mkd gnt nem tartalmaz, t sem rdik.
15.2. bra - 15.2. bra: Szatellit-DNS izollsa cziumklorid grdiens centrifuglssal
85
organizcija
Az utbbi vekben gyakorlati jelentsgre tettek szert a szatellit-DNS specilis tpusai. A miniszatellitk
viszonylag kismret tandem ismtldsek, melyekben az ismtldsek szmban nagyfok egyedi varicik,
genetikai polimorfizmus tapasztalhat. Ez a sokflesg (VNTR, variable number of tandem repeats) Southern
blot vagy PCR-mdszerrel kimutathat s felhasznlhat az igazsggyi orvostanban szemlyazonossg vagy
csaldi kapcsolatok megllaptsra (a mdszer neve: DNS fingerprint vizsglat; 15.3. bra). Orvosi
jelentsggel brnak a mikroszatellitk is: ezekben igen rvid, 24 bzisprnyi szakaszok nhny pldnyban
ismtldnek. Az ilyen rgik genetikailag instabilak: bennk az ismtldsek szma egyik genercirl a
msikra hirtelen megnhet. Funkcionlis gnekben vagy krnyezetkben jelenlev trinukleotid-ismtldsek
expanzija olyan rkld betegsgekhez vezethet, melyek genercirl genercira slyosabb vlhatnak. A
trinukleotid-ismtldsek amplifikcijt mint dinamikus mutcit nhny ve, 1991-ben fedeztk fel. Az
emberi rkld betegsgek kzl tbbek kztt a szellemi visszamaradottsgot okoz fragilis X szindrma s a
hallos Huntington-kr alapja mikroszatellit-amplifikci. Az utbbi betegsg egy nagyobb rkld
neurodegeneratv krkpcsoport, az n. poliglutamin-betegsgek egyik kpviselje. Ezeknl a betegsgeknl a
tripletismtlds expanzija neuronokban expresszld gnek kdol rgijban CAG-ismtldseket rint. A
kdolt fehrjk poliglutamin rgija (a CAG glutamint kdol) elszeretettel hoz ltre kapcsolatot ms
fehrjkkel. Toxikus fehrje-aggregtumok kpzdse, ltfontos proteinek megktse egyarnt vezethet az
rintett idegsejtek pusztulshoz. A kros fehrje-fehrjekapcsolatok gygyszeres gtlsa jtkony hatsa
lehetne ezekben a betegsgekben.
15.3. bra - 15.3. bra: Southern blot alap DNS-fingerprint vizsglat miniszatellit
prbval rokonsgi kapcsolatok tisztzsra
86
organizcija
3. Sztszrtan ismtld szekvencik

Szemben a szatellit-DNS-sel, ms repetitv DNS-szakaszok nem tandem elhelyezkedsek, hanem sztszrtan
ismtldnek a genomban. Ezek lehetnek hosszabb (tbb ezer bzisprnyi) s rvidebb (nhny szz
bzisprnyi) rgik. Legjobban ismert kpviseljk az Alu csald: tagjai 150300 bp hosszak, tartalmaznak
egy AluI hastsi helyet s a genomban kb. 5000 bzispronknt fordulnak el a gnek kztt, st gnek
belsejben, az intronokban is. Funkcijuk valsznleg nincs a sejtben.
4. Tandem ismtlds gnek

Az ismtld szekvencik kz tartoznak azok a gnek is, melyek termkre a sejtnek nagy mennyisgben van
szksge: a 45S pre-rRNS, 5S rRNS (l. ksbb), tRNS-ek, hiszton fehrjk gnjei. Ezek tandem mdon
ismtldnek: az azonos szekvencij gnszakaszokat inaktv, t nem rt DNS-rgik, spacerek vlasztjk el
egymstl (15.4. bra). Bizonyos esetekben elfordul az, hogy az ignyeknek megfelelen a gnek kpiaszma
tovbb n. Gnamplifikcival szaporodnak meg pldul a riboszomlis gnek a bkapetesejtekben. Mskor
kros jelensg a gnsokszorozds: gygyszerrezisztencihoz, daganatkpzdshez vezethet (l. 42. s 54.
fejezet).
15.4. bra - 15.4. bra: Tandem ismtlds gnek
5. Gncsaldok
Szemben a tandem ismtlds gnsorozatokkal, a gncsaldok tagjai hasonl, de nem azonos elsdleges
szerkezetek, gy termkeik fiziolgiai jellemziben is finom klnbsgek szlelhetk. Ezek a gnek egy kzs
gnsbl fejldtek megkettzdssel majd mutcikkal, egyms kzelben is maradhattak, de thelyezdhettek
ms kromoszmra is. Rszletesen tanulmnyozott pldja a gncsaldoknak a globin gncsald: az emberi -
globin gnsorozat a 16., a -globin gnsorozat pedig a 11. kromoszmra lokalizldik. Egyes gnjeik
embrionlis, magzati, felntt globinokat kdolnak, melyek lettani tulajdonsgai megfelelnek az eltr
87
organizcija
oxigenltsgi viszonyoknak. A gnsorozatok olyan gneket is tartalmaznak, melyek mutci kvetkeztben

mkdskptelenn vltak (pszeudognek). (A humn genom program egyik nem vrt felfedezse: az emberi
genom kb. ugyanannyi pszeudognt tartalmaz, mint mkdkpes valdi gnt. Ezek egy rsze t is rdik s
szablyoz funkcija lehet.) Szmos egyb gncsaldot ismernk: citoszkeleton fehrjket, sejtfelszni
receptorokat, proteinkinzokat, transzkripcis faktorokat stb. kdolnak. A gncsaldok megjelense az eukariota
evolci sorn minsgi ugrst jelentett: hasonl, de nem azonos funkcij fehrjk nagyfok
alkalmazkodkpessget, kifinomult regulcit biztostanak az eukariota szervezetekben. A fehrjecsaldok
komplexitst tovbb nveli, hogy ugyanarrl a gnrl tbbfle fehrje is expresszldhat (l. 26. s 31. fejezet).
6. Egyedi szekvencik
A genom jelents rszt kpez, lassan renaturld egyedi szekvencik a haploid genomban egyetlen
pldnyban fordulnak el. Ezek nagy rsze az ismtld szekvencikhoz hasonlan ugyancsak nem kdol
DNS: gnek kztti spacereket, intronok egyedi rgiit alkotja. Szmos fehrjekdol gn (pl. a
poliszacharidbont lizozim enzim gnje) ugyancsak egyedi szekvencia. A gerincesek evolcijnak egyik
fontos jellemzje az intronok mretnek nvekedse. A legtbb emberi gnben az intronok mrete jval
meghaladja az exonokt. Mg a humn genomnak alig tbb mint 1 szzalka fehrjekdol szekvencia, az
intronok a genom 20 szzalkt teszik ki.
7. Mobilis genetikai elemek

A genomszerkezettel kapcsolatban sokig tartotta magt az a tvhit, hogy a gnek, egyes szekvencik helye
vgleges a genomban. Ma mr tudjuk, hogy gntrendezds a sejtek normlis differencildsa, mkdse
sorn is trtnhet. (Legjobban ismert pldja az immunglobulin-gnek trendezdse a B limfocitk
differencildsa sorn, ami elfelttele a szervezet idegen antignekkel szembeni hatkony immunvlasznak.)
A gntrendezds specilis esett fedezte fel McClintock: kukoricval vgzett genetikai vizsglatai sorn
megfigyelte, hogy bizonyos DNS-szakaszok a genom egyik helyrl egy msikra vndorolhatnak. Ksbb
kiderlt, hogy ilyen mobilis genetikai elemek prokariotkban s eukariotkban egyarnt lteznek, a
transzpozci teht az lvilg ltalnos jelensge. Furcsa mdon igen gyakran a transzpozonok egyetlen
cellulris funkcija az, hogy vndorolnak a genomban, ezrt nz DNS-nek is nevezik ket. A mozgkony DNS-
elemek klnbz tpusai ismertek.
7.1. Transzpozonok
A transzpozonoknak nevezett mobilis genetikai elemek vndorlsa DNS formjban zajlik. Ez trtnhet gy,
hogy a DNS-szakasz kihasad a genombl s egy msik helyen integrldik (nonreplikatv transzpozci, 15.5.A.
bra). Ekkor a mobilis elem az eredeti helyrl termszetesen eltnik. Replikatv transzpozci (15.5.B. bra)
sorn a DNS-rgi megkettzdik, az egyik kpia marad a helyn, a msik mshol integrldik. Egyes
transzpozonok annak az enzimnek (transzpozz) a gnjt is tartalmazzk, amely thelyezdskhz szksges.
15.5. bra - 15.5. bra: A transzpozci mechanizmusai (A: nonreplikatv transzpozci;

B: replikatv transzpozci; C: retrotranszpozci)
88
organizcija
7.2. Retrotranszpozonok
A transzpozci msik f tpusa RNS-intermedier kzvettsvel trtnik (15.5.C. bra): a donor DNS-rgi
RNS-be rdik t, majd azon mint templton reverz transzkriptz segtsgvel ketts lnc DNS szintetizldik
s az bepl a cl-DNS-be. A retrotranszpozonok egyik csoportja hasonlt a retrovrus genom DNS-
msolatra, provrusra, ezek a virlis retrotranszpozonok. (A retrovrusok reverz transzkriptzzal rendelkez
RNS-vrusok; szmos fajtjuk onkogn kpessggel rendelkezik, ezrt rszletes lersukkal ksbb, a
daganatbiolgiai fejezetekben foglalkozunk.) A nonvirlis retrotranszpozonok inkbb cellulris mRNS-ekre
hasonltanak, 3-vgkn pldul poli(A)-szekvencit tartalmazhatnak. Egyik kpviseljk az Alu-csald (l.
elbb), amely retrotranszpozcival szrdott szt a genomban. Az Alu-szekvencik tulajdonkppen az
endoplazmatikus retikulumba trtn fehrjetranszlokcihoz szksges 7SL RNS (l. 33. fejezet)
pszeudognjeinek tekinthetk.
A mobilis genetikai elemek a sejt szmra hasznos funkcit nem ltnak el, fontos szerepet jtszhatnak azonban
az eukariota genom evolcijban. (Ezt tmasztja al az a tny, hogy becslsek szerint az emberi genom 40
szzalka retrotranszpozci eredmnye!) A 15.6. brn bemutatott mechanizmus az Alu-szekvencik
jelentsgt illusztrlja a gncsaldok kialakulshoz vezet gnduplikcis esemnyekben. A homolg
kromoszmk hasonl DNS-szekvencii kztt vgbemen gnkicserlds (crossing over) a meizis fontos
esemnye. Ha azonban a folyamat a kromoszmapr tagjainak nem egymsnak pontosan megfelel rgii
kztt, hanem oldalirny elcsszssal megy vgbe, az egyik kromoszmban DNS-tbbletet, a msikban
DNS-hinyt eredmnyezhet. A genomban sztszrt Alu-szekvencik elsegthetik az ilyen egyenltlen crossing
overt.
15.6. bra - 15.6. bra: Alu-szekvencik szerepe a gnduplikci folyamatban
89
organizcija
A transzpozci sorn a mobilis elem integrcija ltalban vletlenszeren trtnik, szerencstlen esetben teht
gninaktivcit eredmnyezhet. A transzpozonok mutagn hatsa rkld betegsget (haemophilia, muscularis
dystrophia stb.) okozhat.
Ajnlott irodalom
Britten, R. J., Kohne, D. E.: Repeated segments of DNA. Scientific American 1970/4, 2431.
Cooper, G.M., Hausman, R. E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D. C.,
USA, 155165, 176195.
Debenham, P. G. (1992): Probing identity: the changing face of DNA fingerprinting. TIBTECH 10, 96102.
Gerstein, M., Zheng, D.: The real life of pseudogenes. Scientific American 2006/8, 3037.
Housman, D. (1995): Human DNA polymorphism. N. Engl. J. Med. 332, 318320.
Hughes, R. E., Olson, J. M. (2001): Theraputic opportunities in polyglutamine disease. Nat. Med. 7, 419423.
Krieg, A. M.: Human endogenous retroviruses. Science & Medicine 1997/2, 3443.
Neufeld, P. J., Colman, N.: When science takes the witness stand. Scientific American 1990/5, 1825.
Richards, R. I., Sutherland, G. R. (1992): Dynamic mutations: A new class of mutations causing human disease.
Cell. 70, 709712.
Schwartz, R. S. (1995): Jumping genes. N. Engl. J. Med. 332, 941944.
90
16. fejezet - 16. A kromatin
szervezdse
Mg a prokariota sejtek genomja szuperspiralizlt DNS, melyhez struktrlis s szablyoz fehrjk, enzimek
csak korltozott mennyisgben kapcsoldnak, az eukariota genom bonyolult szerkezet s sszettel
nukleoprotein, amely az ugyancsak ersen felcsavarodott kromatin formjban szervezdik a sejtmagban.
1. A kromatin morfolgiai szervezdse

1.1. A szervezds szintjei
Egy humn testi sejtben jelenlev DNS hossza kitertett llapotban 2 m lenne, ennek a DNS-nek azonban a
sejtben nhny mikromter tmrj sejtmagban kell elfrnie. Ez az arnytalansg a sejttl kt, egymssal
nagyon nehezen sszeegyeztethet feladat megoldst kveteli meg: a DNS-t egyrszt rendkvli mrtkben
tmrteni kell, hogy elfrjen a sejtmagban, msrszt viszont ebben a szorosan csomagolt llomnyban vgre
kell hajtani azokat a biokmiai folyamatokat (replikci, transzkripci stb), amelyek a sejt letben maradshoz
s szaporodshoz szksgesek. A problma megoldst a kromatinllomny tbbszint organizcija jelenti
(16.1. bra): a funkcionlisan eltr rgikra (eukromatin, illetve heterokromatin) a szervezds eltr tpusai
jellemzek.
16.1. bra - 16.1. bra: A kromatin morfolgiai szervezdsnek szintjei
Kiterjedt csupasz DNS-szakaszok az eukariota sejtmagban csak kivtelesen fordulnak el, olyan
gnszakaszokon, amelyek rendkvl aktvan rdnak t. A genom dnt rsze fehrjkhez kapcsolt llapotban
ltezik.
A DNP szervezds legegyszerbb formja a gyngyfzr szerkezet. Ezt a DNS-hez kapcsold 10 nm

tmrj partikulumok, nukleoszmk hozzk ltre, amelyek 8 hiszton molekulbl (oktamer) s a krlttk 2
csavarulatot alkot, 145 bzispr hossz DNS-szakaszbl llnak. A nukleoszmk egymstl egyenl
91
16. A kromatin szervezdse
tvolsgban helyezkednek el, kb. 60 bzispr hossz linker-DNS kti ssze ket. Az oktamerben 4 hisztontpus
(H2A, H2B, H3, H4) 22 molekulja korongszer kpletet alkot, a nukleoszmbl kilp linker-DNS-ekhez
pedig a H1 hiszton ktdik; a nukleoszma s a H1 molekula egytt hozza ltre a kromatoszmt (16.2. bra).
16.2. bra - 16.2. bra: A kromatoszma szerkezete
A H1 hiszton kapcsoldsa a gyngyfzr felcsavarodshoz vezet, tekercsszer szolenoid fonal jn ltre.

Ennek tmrje mintegy 30 nm, egy csavarulatt 6 nukleoszma alkotja. A gyngyfzr-szolenoid talakuls a
kromatinfonal transzkripcis aktivitsnak cskkensvel jr.
A szolenoid fonal tovbbi felcsavarodsa nagymret hurokdomneket eredmnyez. A transzkripcis egysgek

ezekben a hurkokban lokalizldnak, az alapjuknl elhelyezked spacer rgik pedig strukturlis nem hiszton
fehrjkbl ll kteghez, a kromoszmavzhoz kapcsoldnak.
A metafzikus kromoszmban a kromatinfonal felcsavarodsa, kondenzldsa tovbb folyik, ezzel

prhuzamosan a transzkripcis aktivits megsznik.
1.2. A kromatin specilis funkcij rgii

Centromrek. A metafzikus kromoszmk (16.3. bra) kt testvrkromatidbl plnek fel: ezek 1-1 hossz,
lineris, kettslnc DNS-molekult tartalmaznak, melyek a DNS-replikci sorn kpzdnek, gy
bzisszekvencijuk azonos. A centromr rgi a metafzikus kromoszmn tallhatbefzds, a kromatidk
DNS-nek egy szakaszt tartalmazza. Ketts funkcit lt el: egyrszt a kromatidok egymshoz kapcsoldsnak
helye, msrszt specifikus fehrjk ktdsvel rajta alakul ki a kinetochor, melyhez a sejtosztds sorn a
kinetochor mikrotubulusok kapcsoldnak (l. 19. fejezet). Br a centromr funkcija minden eukariotban
ugyanaz, a klnbz fajok centromr-DNS-nek elsdleges szerkezete nagyon eltr. Magasabbrend
eukariotk centromrjtszatellit-DNS alkotja. Az emberi kromoszmk centromrje n. -szatellit DNS-t
tartalmaz, ez 171 bzispr hossz ismtldsekbl ll, AT-gazdag, tbb milli bzisprnyi rgi. Minden
eukariota centromrjnek kzs jellemzje viszont, hogy a H3 hiszton helyett annak egy varinst (CenH3)
tartalmazza, mely felttlenl szksges a kinetochor kialakulshoz.
16.3. bra - 16.3. bra: Egy emberi metafzikus kromoszma szerkezete
92
Telomrek. A kromatidok lineris DNS-nek kt vgespecilis szatellit-DNS-bl ll, mely klnbz

eukariotkban hasonl szerkezet. Emberben a telomr rgikat tbb ezer TTAGGG hexanukleotid ismtlds
alkotja. A DNS-molekula 3-vge valamivel hosszabb, bzisprosodssal hurkot alkot, melyhez
fehrjekomplexek kapcsoldnak (16.4. bra) s vdik a DNS-vget a degradcitl.
16.4. bra - 16.4. bra: A telomr-hurok szerkezete
A telomr-DNS replikcija klnleges problmt jelent a sejt szmra, mellyel a DNS-szintzis trgyalsnl
foglalkozunk (l. 21. fejezet).
2. A kromatin kmiai sszettele

A kromatinllomny nagyjbl egyenl arnyban tartalmaz DNS-t, hiszton s nem hiszton fehrjket. A kisebb
mennyisgben jelenlev RNS-ek rszben jonnan szintetizldott transzkriptumok (pre-mRNS, pre-rRNS stb.),
msrszt rett, a citoplazma fel tart RNS-ek (mRNS, rRNS, tRNS stb.), illetve a sejtmag sajt RNS-ei
(snRNS, snoRNS). A kromatin anorganikus ionokat is tartalmaz (Mg++, Ca++, Zn++ stb.), amelyek a kromatin
szerkezetnek kialaktshoz, egyes fehrjinek mkdshez szksgesek.
Hisztonok s nem hiszton fehrjk
Szerkezeti jellemzk . A hisztonok kismret, lizinben s argininben gazdag, bzikus jelleg fehrjk. A
nukleoszomlis hisztonok (H2A, H2B, H3, H4) a klnbz llnyekben nagyon hasonl elsdleges
szerkezettel rendelkez, ersen konzervlt fehrjk. Globulris szerkezet rgijukkal alkotjk az oktamert,
lizinben gazdag N-vgk pedig farok formban lp ki a nukleoszmbl, a DNS-sel, szomszdos
nukleoszmkkal, nem hiszton fehrjkkel kpes ionos ktseket ltesteni. A nukleoszomlis hisztonok stabilan
kapcsoldnak a DNS-hez, minden ms fehrje viszont rvid let, tmeneti ktseket ltest a kromatin egyb
93
alkotrszeivel. A kpzd s felboml ktsek dinamikus kromatinszerkezetet eredmnyeznek, ami elsegti a

sejtmagban lejtszd biokmiai folyamatokat. A H1 linker-hiszton a nukleoszma alapjhoz kapcsoldik,
befolysolva a kromatin kondenzltsgt (l. elbb s a 16.2. brt). A nem hiszton fehrjk tbb szz tagbl
ll, mret s izoelektromos pont szempontjbl is rendkvl heterogn fehrjepopulci. Sztvlasztsuk,
vizsglatuk ennek megfelelen ktdimenzis glelektroforzissel trtnik. Mg egy szervezet klnbz
sejtjeinek hisztonjai azonosak, a nem hiszton proteinek expresszijban jelents szveti specificits
tapasztalhat.
Kmiai mdosuls. A fehrjk modifikcija fontos eszkze mkdsk szablyozsnak. A hisztonok a

legnagyobb mrtkben mdostott fehrjk kz tartoznak: foszforilldnak, acetilldnak, metilldnak,
glikozilldnak, ms modifikcik is trtnhetnek rajtuk.
A H1 hiszton foszforilcija kromatinkondenzcihoz vezet, a sejtosztds profzisban a kromoszmk

kialakulst eredmnyezve (l. 19. fejezet). A nukleoszomlis hisztonok esetben az N-terminlis lizin
oldallncok acetilcija jelents: az aminocsoportokhoz ktd acetilcsoportok cskkentik a hisztonfarkak
pozitv tltst, ktdsket a DNS-hez, gy a nukleoszmaszerkezet fellazul (16.5. bra). Az acetillt
hisztonokat tartalmaz kromatinrgik transzkripcionlisan aktvak.
16.5. bra - 16.5. bra: A nukleoszomlis hisztonok acetilcijnak kvetkezmnye: a

nukleoszma fellazulsa
A nem hisztonfehrjk kmiai mdosulsnak legfontosabb mdja a foszforilci. A nagyszm fehrjt

sokfle fehrjekinz foszforillhatja. A kifinomult s bonyolult szablyozsi folyamatokkal tbb fejezetben is
tallkozni fogunk (l. ksbb).
Funkci. A kromatoszmk alkotelemeiknt a hisztonok a kromatin alapvet strukturlis elemei. Ezen

tlmenen szablyoz szerepet is jtszanak: a DNS-hez ersen ktd nukleoszmk akadlyt jelentenek az
RNS-szintetikus appartus szmra: a hisztonok a transzkripci nem specifikus gtli. Hasonlan a
szerkezetbeli heterogenitshoz, a nem hiszton fehrjk funkcionlis szempontbl is sokflk. Vannak kzttk
struktraalkot fehrjk (pl. laminok, magmtrix fehrjk stb.), enzimek (pl. DNS-, RNS-polimerzok stb.), a
gnek mkdst szablyoz transzkripcis faktorok, kismret anyagok hatst kzvett receptor fehrjk (pl.
szteroid receptorok), a magfehrjk s RNS-ek szlltst irnyt transzport fehrjk (pl. importin, Ran),
fehrje chaperonok (pl. az j nukleoszmk sszeszerelst segt nukleoplazmin), DNS chaperonok, amelyek
az optimlis kromatinszerkezet kialaktshoz szksges DNS-hajltsokat vgzik.
Ajnlott irodalom
166176.
Grunstein, M.: Histones as regulators of genes. Scientific American 1992/10, 4047.
Horn, P. J., Peterson, C. L. (2002): Chromatin higher order folding: Wrapping up transcription. Science 297,
18241827.
Kornberg, R. D., Lorch, Y. (1999): Twenty-five years of the nucleosome, fundamental particle of the eukaryote
chromosome. Cell 98, 285294.
Roth, S. Y., Allis, C. D. (1996): Histone acetylation and chromatin assembly: a single escort, multiple dances?
Cell 87, 58.
Wolfe, A. P.: Genetic effects of DNA packaging. Scientific American, Science & Medicine 1995/6, 6877.
94
17. fejezet - 17. A sejtciklus I.:
Interfzis s sejtosztds
Az nreprodukci kpessge a sejtek alapvet jellemzje; ennek sorn a sejt nvekszik, anyagait s genetikai
informciit megkettzi s a sejtosztds eredmnyekppen ezeket kt utdsejt kztt osztja el. Mivel az
utdsejtek is kpesek nreprodukcira, a folyamat ciklusosan ismtldhet, nagyszm sejtet hozva ltre. A
sejtosztds vgtl a kvetkez osztds befejezdsig tart szakaszt sejtciklusnak nevezzk.
1. A sejtciklus fzisai
Eukariotk esetben a sejtciklus kt f szakaszra oszthat: a sejtosztds (M-fzis; mitzis illetve meizis) s
az interfzis szakaszra (17.1. bra). Az interfzis sorn a sejt nvekszik s megkettzi DNS-llomnyt. A
DNS-replikci (S-fzis) a nyugalmi szakaszt tovbbi fzisokra osztja. A G1-fzis (gap, a mitzis s a replikci
kzti rs) jellemzje, hogy a sejtosztdsbl ppen csak kilpett sejt valamennyi kromoszmnak csak egyik
kromatidjt tartalmazza (emberi sejteknl 46 kromatidot); a sejt diploid, 2n DNS-tartalom jellemzi. A sejt
metabolikusan aktv, tmegben folyamatosan nvekszik. A G1-fzis idtartama sejttpustl s a sejt
letkrlmnyeitl fggen igen vltoz. Gyorsan osztd sejtek G1-fzisa rvid (korai embrionlis sejteknl
hinyozhat is). A felntt szervezet legtbb szvetre a hossz G1-fzis jellemz: a sejtek tartsan kilpnek a
sejtciklusbl, G0-fzisba kerlnek. Bizonyos sejttpusoknl ez vgleges llapot (pl. idegsejtek), ms szvetek
sejtjei pedig akkor kezdenek jra osztdni, ha sejtvesztesget kell ptolniuk (pl. a mj regenercija sorn).
17.1. bra - 17.1. bra: A sejtciklus fzisai
Az S-fzis sorn a sejtmag valamennyi DNS-e egyszer, s csakis egyszer replikldik. Ezzel egyidben egyb
folyamatok is zajlanak a sejtben, melyek hozzjrulnak a replikci zkkenmentessghez: a DNS-polimerz
molekulk az S-fzis elejn transzlokldnak a magba; a hisztonok szintzise s transzportja a sejtmagba a
DNS-megkettzdssel prhuzamosan folyik. A centrilumok megkettzdse is az S-fzisban trtnik. A G2-
fzis a DNS-replikci s az osztds kezdete kztti szakasz: a sejt metabolikusan aktv s kszl a
sejtosztdsra. DNS-tartalma: 4n (tetraploid), minden kromoszmja 2 kromatidbl ll.
A normlisan vgbemen sejtciklus teht biztostja a sejt nreprodukcijt. Tbbsejt szervezetekben azonban a
szervezet egsznek ignyei elbbrevalak mint az egyes sejteki: a sejteknek ott s akkor kell osztdniuk,
ahogyan ez a szervezet szmra a legelnysebb. Orvosi szempontbl a sejtciklus szablyozsnak megrtse
azrt fontos, mert ennek a regulcinak a zavara okozza legrettegettebb betegsgeinket, a
rosszindulatdaganatokat. A sejtciklus vizsglatnak modern mdszerei jelents haladst eredmnyeztek az
elmlt 20 vben ezen a terleten.
95
17. A sejtciklus I.: Interfzis s
sejtosztds
2. Sejttenyszetek szinkronizlsa
A sejtciklust tanulmnyoz ksrletekben gyakori kvetelmny, hogy a vizsglt sejtpopulci sejtjei ugyanabban
a fzisban legyenek, a tenyszet szinkronizlt legyen. Ennek elrsre szmos mdszer ismert.
A szinkronizls legegyszerbb mdja a szrumheztets. A szrum nvekedsi faktorokat tartalmaz, melyek

sejtfelszni receptorok tjn serkentik a sejtek progresszijt a sejtcikluson keresztl (l. 46. fejezet). A szrum
megvonsa utn elbb-utbb G0-fzisba kerlnek, a szrum visszaadsakor pedig egyszerre lpnek vissza a G 1-
fzisba.
Az interfzikus sejtek ltalban laposak, letapadnak a tenysztedny aljra, az osztd sejtek viszont
gmblyek, gyengn tapadnak. Ha a lemosott sejteket j ednyben tenysztik, azok a G1-fzisban folytatjk a
sejtciklust. Ez a mitotikus szelekci mdszere.
Kolhicinnel az osztdsi ors mkdse, 5-fluorodezoxiuridinnal (timidinanalg nukleozidszrmazk) a

replikci gtolhat reverzibilisen. Eltvoltsuk utn a tenyszet a megfelel fzisban szinkronizltan folytatja
lett.
A szinkronizci legelegnsabb mdszere a FACS (fluorescence-activated cell sorter) alkalmazsa. Ennek alapja
az ramlsi citometria: ha egy sejtpopulcit valamilyen fluoreszcens festkkel festenek s a sejtek a festket
eltr mrtkben ktik, ramlsi citomterrel megllapthat a festdseloszls a populciban. A klnbzen
festd sejtek egymstl el is vlaszthatk. A FACS mkdsi elve a kvetkez (17.2. bra). A festett sejteket
lzersugrral vilgtjk meg s a mszer minden sejt fluoreszcencijt regisztrlja. A sejtszuszpenzi porlasztn
halad t, a kpzd cseppek egy-egy sejtet tartalmaznak s a gp a cseppeknek a bennk lv sejt
fluoreszcencijtl fgg tltst ad, az eltr tlts cseppeket pedig elektromos trben vlasztjk szt. Ha az
ramlsi citometrihoz DNS-hez ktd fluoreszcens festket hasznlnak, jellegzetes grbt kapnak (17.3.
bra). A cscsok magassgbl kvetkeztetni lehet az egyes fzisokban lev sejtek arnyra.
17.2. bra - 17.2. bra: A FACS mkdsi elve
96
sejtosztds
17.3. bra - 17.3. bra: Szinkronizlatlan tenyszet ramlsi citometris kpe DNS-
festst kveten
3. A fzisok hossznak meghatrozsa

A sejtciklus vizsglatnl szksg lehet arra is, hogy a sejttenyszetben meghatrozzk az egyes fzisok
idtartamt.
Genercis id. A sejtciklus teljes idtartamnak meghatrozshoz a tenyszetbl idkznknt mintt

vesznek s sejtszmolst vgeznek. A genercis id a sejtszm megduplzdshoz szksges idtartam.
S-fzis. Szinkronizlatlan sejttenyszetben meghatrozzk az adott pillanatban az S-fzisban tartzkod sejtek

arnyt. Ennek egyszer mdja, hogy a sejteket rvid ideig [3H]timidinnel jellik: a radioaktv nukleozid bejut a
sejtbe s bepl az jonnan szintetizlt DNS-be. Fnymikroszkpos autoradiogrfit kveten az interfzikus
sejtek egy rsznek magja felett nagyszm ezstszemcse (grain) jelenik meg, ezek a jells idejn S-fzisban
voltak (l. 7.1.B. bra). Belthat, hogy a jellt sejtek arnya azonos az S-fzis s a genercis id hnyadosval.
(Plda: ha a tenyszet genercis ideje 30 ra s a timidinnel jellhet sejtek arnya 30%, az S-fzis idtartama
9 ra.)
M-fzis. A meghatrozs elve hasonl: a tenyszetben lv osztd sejtek arnybl (mitotikus index) az M-
fzis idtartama kiszmthat. (A fenti pldban: 5%-os mitotikus index 1,5 rs M-fzisnak felel meg.)
G1-fzis. Mitotikus szelekcival szinkronizlt tenyszetet [3H]timidin jelenltben inkublnak, idnknt mintt
vesznek s autoradiogrfit vgeznek. Az az id, ami az els jellt interfzikus sejt megjelensig eltelik,
megfelel a G1 idtartamnak.
G2-fzis. Szinkronizlatlan tenyszetben rvid [3H]timidin jellst vgeznek, idkznknt mintt vesznek s
autoradiogrammon jellt kromoszmaszerelvnyeket keresnek. Az els graineket mutat osztd sejt a jells
pillanatban az S-fzis legvgn volt, az eltelt id teht a G2-fzisnak felel meg.
Ajnlott irodalom
653655.
Galgano, P. J., Schildkant, C. L.: Cell synchronization. (Cells. A Laboratory Manual [Spector, D. L., Goldman,
R. D., Leinwand, L. A., eds.]) Cold Spring Harbor Laboratory Press, 14.114.13., 1998.
97
sejtosztds
Rodgers, L.: Flow cytometry. (Cells. A Laboratory Manual [Spector, D. L., Goldman, R. D., Leinwand, L. A.,
eds.]) Cold Spring Harbor Laboratory Press, 16.116.12., 1998.
98
18. fejezet - 18. A sejtciklus II.:
Szablyozs
A sejtciklus szablyozsnak vgs clja annak meghatrozsa, hogy az rintett sejt milyen gyakorisggal
osztdjon. A folyamat rendkvl bonyolult, amelyben szmos intracellulris s extracellulris tnyez jtszik
szerepet. Ebben a fejezetben a sejtciklus regulcijnak sejten belli mechanizmusaira koncentrlunk, a kls
krnyezeti tnyezk s jeltviteli folyamatok jelentsgre, a sejtosztds szablyozsnak kros
vonatkozsaira ksbb trnk vissza.
1. Vizsglmdszerek
1.1. Genetikai vizsglatok lesztsejtekben
Ezek a primitv eukariota egysejtek viszonylag kis genommal rendelkeznek, gyorsan szaporodnak, genetikai
kutatsokra igen alkalmasak. Szmos hrzkeny sejtciklus-mutns trzset (cdc [cell division cycle]
mutnsok) izolltak, melyekben az rintett fehrje normlis krlmnyek kztt (a permisszv hmrskleten)
mkdkpes, nonpermisszv hmrskleteken azonban inaktivldik. A cdc-mutnsok a nonpermisszv
hmrskleten a sejtciklus azon fzisban ragadnak meg, amelyben a tovbbhaladshoz a fehrje mkdsre
lenne szksg. Mivel a sejtciklus szablyozsa ersen konzervlt mechanizmus, az lesztmutnsok
tanulmnyozsbl a magasabb rend sejtekben zajl folyamatokra is kvetkeztetni lehet.
1.2. Sejtfzi
Magasabb rend eukariota sejteket szvettenyszeti krlmnyek kztt r lehet brni arra (pl. specilis
vrusokkal, kmiai gensekkel), hogy sejtmembrnjaikat sszeolvasztva egymssal egyesljenek, fuzionljanak.
Ha a hibrid sejt a sejtciklus klnbz fzisaiban lev sejtekbl jtt ltre, annak vizsglatbl kvetkeztetni
lehet arra, hogy milyen diffzibilis citoplazmatikus faktorok vesznek rszt a sejtmag viselkedsnek
szablyozsban.
1.3. Bka oocitk mikroinjekcija

A bka oocitk, mieltt belpnnek a meizisba, tartsan a sejtciklus G2-fzisban vannak. Fiziolgisan ez
progeszteron hatsra trtnik: a sejtmagban a kromatin kondenzldik s vgbemegy az 1. meiotikus osztds.
A nagymret oocitba mikroinjekcival klnbz gensek (fehrjk, mRNS-ek, antisense oligonukleotidok)
juttathatk be, lehetv tve a G2/M tmenet szablyozsnak vizsglatt.
1.4. Bka oocita extraktumok in vitro alkalmazsa

A meizis megkezdsre ksz bka oocitkbl izollt citoplazma-kivonat tartalmaz minden olyan faktort, ami
ahhoz szksges, hogy a hozzadott sejtmagokban tbb sejtciklus is vgbemenjen. Az is elrhet, hogy az
extraktumban jelenlev vagy ahhoz hozzadott mRNS-eken j fehrjk szintetizldjanak. Az extraktumokban
sokfle manipulci vgezhet (enzimek gtlsa, mRNS-ek lebontsa, mutns fehrjk expresszlsa), gy ez az
in vitro rendszer kitn modell a sejtciklus szablyozsnak tanulmnyozsra.
2. Klnbz fzis sejtek fzija

Az 1960-as vek vgn vgzett sejthibridizcis ksrletek fontos mrfldkvei voltak a sejtcikluskutatsnak.
Ezekben a ksrletekben lnyegben azt vizsgltk, hogy milyen hatssal vannak a fzis partnerek citoplazmi
egyms sejtmagjaira: trtnik-e DNS-replikci (ezt timidinjellst kvet autoradiogrfival mutattk ki),
illetve belp-e a sejtmag az M-fzisba (azaz megfigyelhet-e kromatinkondenzci).
Ha S-fzis sejtet G1-fzisban levvel fuzionltak, az utbbi magjban hamarosan DNS-szintzis kezddtt;
elmaradt viszont a replikci megindulsa, ha a fzis partnerek G1- s G2-fzis sejtek voltak. S-fzis
sejtekben teht van egy diffzira kpes anyag, amely a G1-fzis sejtben DNS-replikcit indukl; ez az S-fzis
promcis faktor (SPF) a G1- s G2-fzisban nincs jelen a sejtben.
99
18. A sejtciklus II.: Szablyozs
S-fzis sejt citoplazmja a G2-fzis magban viszont nem kpes DNS-szintzist elidzni: ez a re-replikcis
blokknak nevezett jelensg megakadlyozza, hogy a genom vagy egy rsze ugyanabban az interfzisban
ismtelten megkettzdjn.
M-fzis sejt fzija brmilyen interfzikus sejttel kromatinkondenzcit idz el az utbbi magjban. Az M-
fzis promcis faktor (MPF), amelyet egybknt bka petesejtekben fedeztek fel eredetileg, a mitotikus s
meiotikus folyamatok f irnytja.
3. Ciklin/Cdk komplexek: a sejtciklus endogn

regultorai
A sejtfzis, mikroinjekcis s genetikai vizsglatok alapjn bebizonyosodott, hogy a sejtciklus meghatrozott
pontjain intracellulris, endogn szablyoz faktorok segtik t a sejtet. Ezek biokmiai azonostsa s
jellemzse az 1980-as vek vgn kezddtt meg. Kiderlt, hogy a sejtciklus f szablyozi heterodimer
fehrjekomplexek, amelyek egy katalitikus s egy regultor alegysgbl plnek fel. A katalitikus alegysgek
fehrjekinzok, amelyek clfehrjiken meghatrozott szerin s treonin aminosavakhoz kapcsolnak
foszftcsoportot, megvltoztatva azok aktivitst. Monomer formban ezek a proteinkinzok alig mkdnek, a
regultor alegysg ktdse tbb tzezerszeresre nveli enzimaktivitsukat. A regultor alegysgek mennyisge
a sejtciklus sorn jellegzetes vltozsokon megy keresztl, elnevezsk (ciklinek), illetve a katalitikus
alegysgek (ciklin-dependens kinzok, Cdk-k) is innen szrmazik.
Magasabb rend eukariota sejtekben a ciklinek (ciklin A-H) s a Cdk-enzimek (Cdk 1-7) is tbbtag
fehrjecsaldot alkotnak. Ezek sokfle kombinciban kapcsoldhatnak egymssal, s br a komplexek
felptse hasonl, az egyes ciklin/Cdk heterodimerek eltr funkcival rendelkeznek, a sejtciklus klnbz
pontjain fejtik ki hatsukat (18.1. bra).
3.1. A G1 [S tmenet szablyozsa

Magasabb rend sejtekben a sejtosztds regulcijnak legfontosabb eleme a G1-fzis hossznak
szablyozsa. Ennek kritikus szakasza a restrikcis pont: ha a sejtek elrik ezt a pontot, elktelezik magukat a
sejtosztdsra. A restrikcis ponton a sejtek mitogn gensek (pl. a szrumban lev nvekedsi faktorok)
hatsra jutnak tl s a ciklust akkor is folytatjk, ha a stimull anyagot megvonjk tlk. Nvekedsi faktorok
hatsra ugyanis a sejtben n. G1-ciklinek jelennek meg (18.1. bra), amelyek specifikus Cdk izoenzimeket
aktivlva az S-fzis megindulshoz szksges biokmiai folyamatokat indtanak el (pl. nukleotidszintetizl
enzimek, DNS-polimerzok, hisztonok kpzse s transzlokcija a sejtmagba). A restrikcis pont elrse utn
nhny rval a sejtben megindul a DNS-replikci. Az S-fzis promcis faktor elnevezs teht
vgeredmnyben olyan ciklin/Cdk-komplexeket takar, amelyek az S-fzis elindtst s zavartalan
lebonyoltst felgyelik.
18.1. bra - 18.1. bra: Ciklin/Cdk komplexek expresszija emls sejtciklus sorn (R=
restrikcis pont)
100
3.2. Re-replikcis blokk

Az eukariota genom replikcija nagyszm ponton kezddik: ezek az origk meghatrozott DNS-rgik
megkettzdst biztostjk (l. 21. fejezet). Nagyon lnyeges, hogy egy sejtciklusban a teljes genom
replikldjon, de csak egyszer. Ha ez nem gy trtnne, az utdsejtekben gnhiny vagy gntbblet alakulna ki,
mindkett genetikai katasztrfhoz vezet. A replikcis origk egyszeri s csak egyszeri hasznlatt specilis
engedlyez fehrjk (angol szakkifejezssel licensing faktorok) biztostjk: ezek hozzktdnek az orign
felpl komplexekhez, megindtjk a replikcit, majd egy Cdk ltal foszforillva levlnak (18.2. bra). A
licensing faktorok teht azrt tudjk elltni funkcijukat, mert szksgesek a DNS-replikcihoz, a folyamat
sorn azonban inaktivldnak.
18.2. bra - 18.2. bra: A re-replikcis blokk megvalstsa a licensing faktor teria
szerint
101
3.3. A G2 [M tmenet s az M-fzis szablyozsa

Az M-fzis promcis faktor mitotikus ciklinbl s specifikus Cdk-enzimbl ll komplex (18.1. bra). Az
interfzis sorn kpzd mitotikus ciklin felhalmozdva a G2-fzisban kritikus mennyisget r el s Cdk-
aktivcit okoz. A bekvetkez fehrjefoszforilci mitzist elindt biokmiai s morfolgiai vltozsokat
(kromatinkondenzci, a maghrtya sztesse, citoszkeleton-talakuls) eredmnyez. Ezutn a ciklinmolekulk
hirtelen degradldnak; ez szksges ahhoz, hogy a sejt be tudja fejezni a mitzist. Egyben az MPF-aktivits is
megsznik s a sejt interfzist kezd meg (18.3. bra). jabb vizsglatok szerint az osztdsnak ehhez a vgs
szakaszhoz egy bonyolult proteoltikus gpezet, az anafzis promcis komplex (msnven cikloszma)
mkdse szksges. Az anafzis promcis komplex ubikvitinl enzim: a clfehrjhez kismret ubikvitin-
fehrjket kapcsol, melyet azutn proteaszmk bontanak le. (A folyamat rszleteivel a 31. fejezetben
foglalkozunk.) A sejtosztds sorn a proteaszma nemcsak a mitotikus ciklint bontja le, hanem protez
aktivitsval a testvrkromatidok sztvlst, majd az osztdsi ors eltnst is elsegti.
18.3. bra - 18.3. bra: Az MPF-aktivits s a ciklinszint vltozsa a sejtciklus sorn
3.4. A Cdk-aktivits szablyozsa

Br a Cdk-csald egyes tagjai eltr funkcit ltnak el az emls sejtciklus szablyozsban, az ket regull
mechanizmusok hasonlak. A legfontosabb serkent (+) s gtl (-) tnyezket a 18.4. bra foglalja ssze. A
Cdk-aktivits elfelttele a megfelel ciklin jelenlte s ktdse. A ciklin-expresszi szablyozsa kt szinten
trtnhet: (I) egyes G1-ciklinek gnjnek trst mitogn anyagok serkentik; (II) a mitotikus ciklinek szintjnek
drmai zuhansa az osztds sorn gyors lebomlsuk eredmnye. A Cdk-enzimek szablyoz rgijban
bekvetkez serkent foszforilci, illetve az aktv centrumban vgrehajtott gtl foszforilci ugyancsak fontos
regulcis esemnyek. Az utbbi idben kerltek az rdeklds kzppontjba a Cdk-inhibitor fehrjk, melyek
102
mkdszavara szerepet jtszhat az emberi daganatkpzdsben (l. 55. fejezet). A Cdk-szablyozs rszletesen
tanulmnyozott pldja az MPF regulcija (18.5. bra). A mitotikus ciklin B az S- s G2-fzisban halmozdik
fel, komplexet kpezve a Cdk1 enzimmel (1. lps). A Cdk1-en bekvetkezik a gtl s serkent foszforilci
is, az enzim ekkor mg inaktv (2. lps). Aktivcijt egy foszfatz enzim hajtja vgre, amely a gtl
foszftcsoportokat eltvoltja (3. lps). Az aktv MPF megindtja az M-fzist, majd a ciklin B degradldik (4.
lps), a Cdk defoszforilldik s a G1-fzisnak megfelel alapllapotba kerl (5. lps).
18.4. bra - 18.4. bra: A Cdk-szablyozs mechanizmusai
18.5. bra - 18.5. bra: Az MPF-aktivits szablyozsa a sejtciklus sorn
103
4. Ellenrzpontok a sejtciklus szablyozsban

A sejtciklus fontos jellemzje, hogy esemnyeinek szigoran meghatrozott sorrendben kell bekvetkeznie: egy
fzis csak akkor kezddhet meg, ha az elz folyamatai mr befejezdtek. Ha ez a koordinci felborul, az
utdsejteket slyos genetikai krosods rheti. Eukariota sejtekben minsgi kontrollmechanizmusok fejldtek
ki, amelyek meghatrozott pontokon lelltjk a sejtciklust mindaddig, amg az elz fzis esemnyei
normlisan vgbe nem mentek (18.6. bra).
18.6. bra - 18.6. bra: Ellenrzsi pontok a sejtciklusban
104
DNS-krosodst ellenrz pontok. A mutagn hatsokra (sugrzs, kmiai gensek) vagy esetleg spontn
(hibk a DNS-replikci sorn) fellp DNS-krosods a sejtciklus lellshoz vezet. Ez idt ad a sejt szmra a
krosodott DNS kijavtsra s megakadlyozza, hogy a sejtosztds sorn olyan utdsejtek jjjenek ltre,
melyekben mutcik halmozdnak fel. A DNS-krosods (lnctrsek, repliklatlan rgik stb.) G1-, S- s G2-
ellenrzsi pontokon is lellthatja a ciklust. A krosodst felismer fehrjekomplex fehrjefoszforilcis
lncolatot indt el, mely inaktivlja azt a foszfatz enzimet, mely a Cdk-aktivcihoz szksges defoszforilcit
katalizlja (l. 18.5. bra 3. lpse). A Cdk2 enzim gtlsa gy a G 1- vagy S-fzisban, a Cdk1 inaktivlsa pedig a
G2-fzisban lltja le a sejtciklust (l. 18.1 bra). A G1-blokkhoz ezenkvl egy Cdk-inhibitor indukcija is
hozzjrul. Ennek mechanizmusra mg visszatrnk.
Osztdsi orst ellenrz pont. Ha az osztdsi ors kialakulsba vagy a kromoszmk mikrotubulusokhoz
ktdsbe hiba csszik, a sejtosztds lell, ezltal megakadlyozva abnormlis kromoszmaszerelvny
utdsejtek kpzdst. Ezekben a sejtekben a mitotikus ciklin nem degradldik, az MPF-szint magas marad s
a sejt nem tudja befejezni az osztdst.
Ajnlott irodalom
Botchan, M. (1996): Coordinating DNA replication with cell division: Current status of the licensing concept.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 999710000.
Cooper, G. M., Hausman, R. E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D.C.,
USA, 650672.
Csaba, Gy. (1995): A sejtosztds s daganatkpzds gnszint szablyozsa. Termszet Vilga 126, 103106.
Hoyt, M. A. (1997): Eliminating all obstacles: Regulated proteolysis in the eukaryotic cell cycle. Cell 91, 149
151.
Lees, E. (1995): Cyclin dependent kinase regulation. Curr. Op. Cell Biol. 7, 773780.
Lszl V. (2002): Orvosi Nobel-dj, 2001. A sejtciklust szablyoz kulcsfontossg molekulk. Lege Artis
Medicinae 12, 2729.
Nasmyth, K. (2001): A prize for proliferation. Cell 107, 689701.
105
19. fejezet - 19. A sejtosztds
Mg a prokariotk genomjuk megkettzdst kveten egyszeren kt sejtre hasadnak, eukariota sejtekben a
sejtosztdst mlyrehat morfolgiai vltozsok ksrik: a replikldott rkt anyag kromoszmkba
rendezdik, majd bonyolult folyamatok eredmnyekppen eloszlik az utdsejtek kztt. A mitzis sorn
genetikailag azonos szomatikus utdsejtek kpzdnek, a meizis pedig haploid ivarsejteket eredmnyez. A
sejtosztds sorn a mikroszkpban jl megfigyelhet, drmai vltozsok zajlanak a sejtben (kromoszmk
kialakulsa, egyes sejtalkotrszek eltnse stb.).A sejtosztds szempontjbl lnyeges folyamatok azonban
mr az interfzisban is lejtszdnak.
1. Interfzis: felkszls a sejtosztdsra

A sejtciklus nyugalmi szakaszban a sejtek sajt letket lik: letben tartsukhoz s jellegzetes tulajdonsgaik
kialaktshoz szksges anyagcsere-folyamatok zajlanak bennk. Az interfzikus sejtekben azonban hacsak
nincsenek G0-fzisban mindazoknak a jelensgeknek is le kell jtszdniuk, amelyek elksztik a sejtet az
osztdsra. Az interfzis folyamn a sejt tmege nvekszik, az S-fzisban pedig vgbemegy a DNS
megkettzdse. Az interfzis esemnye a kromoszmk ksbbi vndorlst lebonyolt mitotikus appartus
rszt kpez centriolumok duplikcija is.
A mitotikus appartus az interfzikus sejt mikrotubulris rendszernek (l. 40. fejezet) trendezdsvel jn
ltre. Ennek kzpontja a sejtmag kzelben elhelyezked mikrotubulus organizl centrum (MTOC) vagy
centroszma, amely a legtbb llati sejtben egy pr centriolumbl s az azt krlvev pericentriolris
llomnybl ll. A centriolumok henger alak kpzdmnyek, falukat 9 mikrotubulushrmas alkotja. A
centroszma kt centrioluma egymsra merlegesen helyezkedik el. A sejtciklus sorn a centriolumok jellemz
vltozssorozaton mennek keresztl (centriolumciklus, 19.1. bra), melyek eredmnyekppen kialakul s
mkdik a mitotikus appartus. A centriolum-replikci az interfzisban trtnik: a szl centriolumokbl az
utdok bimbzssal kpzdnek. A megkettzdtt centroszma 4 centriolumot tartalmaz egszen a
sejtosztds megindulsig.
2. A mitzis szakaszai
2.1. Profzis
Mint ahogy errl az elz fejezetekben mr sz volt, a mitzis esemnyei az M-fzis promcis faktor (MPF)
hatsra indulnak meg. Az MPF aktivlt Cdk-komponense szmos fehrjt foszforill. A H1 hiszton s ms
magfehrjk (elssorban a nem-hiszton fehrjk kz tartoz kondenzinek) foszforilcijnak kvetkeztben a
kromatin kondenzldik (l. 16.1. bra), megsznik a transzkripci s kialakulnak belle a kromoszmk; ezzel
egyidben eltnik a nukleolusz. A lamin fehrjk foszforilcija a hlzatos szerkezet nukleris lamina
megbomlshoz vezet, a kpzd lamindimerek egy rsze felszabadul, a lamin B viszont a vezikulkk tredez
maghrtyhoz ktve marad. A pruskomplexumok alegysgeikre disszocilnak. A mikrotubulusokhoz
kapcsold fehrjk foszforilcija a citoszkeleton trendezdshez vezet: a centroszmk sztvlnak s a sejt
kt plushoz vndorolnak, megkezddik kzttk az osztdsi ors kialakulsa. A maghrtyval egyidben az
endoplazmatikus retikulum s a Golgi-appartus is fragmentldik.
19.1. bra - 19.1. bra: A mitzis szakaszai
106
19. A sejtosztds
2.2. Metafzis
Az interfzikus mikrotubulris rendszer osztdsi orsv rendezdse a metafzisban fejezdik be (19.2. bra).
A mikrotubulusok polaritssal rendelkez citoszkeleton elemek (l. 40. fejezet): mnusz vgk a centroszma fel
nz, gyorsan nv plusz vgk pedig a mikrotubulus msik vgt alkotja. A mikrotubulusok nem lland
kpzdmnyek, vgeiken polimerizci s depolimerizci trtnhet: fontos jellemzjk ez a dinamikus
instabilits. Az osztdsi ors ngy mikrotubulus-tpust tartalmaz. A kinetochor mikrotubulusok a
kromoszmk centromr rgijban a kromatidokon felpl, lemezes szerkezet fehrjekorongokhoz, a
kinetochorokhoz kapcsoldnak. Magasabb rend eukariota sejtekben a kinetochorokon nagyszm mikrotubulus
plusz vge tapad. A kt plus fell kapcsold mikrotubulusok hzereje a kromoszmkat a sejt ekvatorilis
skjba tereli, kialakul a metafzikus lemez. A kromoszomlis mikrotubulusok plusz vgeikkel a kromoszmk
vgeihez kapcsoldnak. Kromokinezin motorfehrjk segtsgvel a kromoszmkat a sejt kzepe fel
tuszkoljk, ugyancsak hozzjrulva a metafzikus lemez kialakulshoz. (Ezt a mechanizmust szemlletes
hasonlattal sarki szlnek is szoktk nevezni.) A polris mikrotubulusok ellenttes plusokbl rkezve plusz
vgeikkel az egyenlti skban tfedsbe kerlnek s egymssal ltestenek kapcsolatot. Az asztrlis
mikrotubulusok a centroszmk krl sugrszer szerkezetet alkotnak, plusz vgkkel a sejtmembrn alatti
rtegekben vgzdnek.
107
19. A sejtosztds
19.2. bra - 19.2. bra: Az interfzikus s mitotikus mikrotubulus-rendszer felptse
2.3. Anafzis
A kromoszmk testvrkromatidjai a DNS-replikci sorn kpzdtt utd DNS-molekulkat tartalmazzk
fehrjkhez kttt formban. Mivel a mitzis eredmnyekppen minden kromoszma egyik kromatidjnak az
egyik, a msiknak pedig a msik utdsejtbe kell kerlnie, nagyon fontos, hogy a testvrkromatidok a sztvlsig
egytt maradjanak. A testvrkromatid kohzit egy multiprotein komplex, a kohezin-komplex biztostja, mely
mr a replikci sorn sszeragasztja az utd DNS-molekulkat (19.4. bra), egszen az anafzis kezdetig.
Ebben a szakaszban trtnik a kromatidok sztvlsa s vndorlsa a plusok fel. Az anafzisnak kt szakaszt
klnbztetjk meg.
Anafzis A. A metafzis s az anafzis hatrn egy proteoltikus enzim, a szeparz aktivldik, mely elhastja a
kromatidok kztti kohezin-komplexeket (19.3. bra). A kromatidok a centromr rgiban elvlnak egymstl
s a kinetochor mikrotubulusok rvidlse eredmnyekppen a plusok fel vndorolnak. A folyamat f,
hajtereje a mikrotubulusok dinamikus instabilitsa: a kromatidvndorlst a kinetochor s kromoszomlis
mikrotubulusok plusz vgnek depolimerizcija okozza.
19.3. bra - 19.3. bra: Testvrkromatid kohzi s sztvls
108
19. A sejtosztds
Anafzis B. A kromatidvndorlssal egyidben a plusok tvolodnak egymstl, a sejt megnylik. Ezt

elssorban a polris mikrotubulusok elongcija s egyms mellett trtn elcsszsa eredmnyezi. Az asztrlis
mikrotubulusok ugyanakkor a sejthrtya fel hzzk a centroszmkat. A lert folyamatok ATP-ignyesek:
kinezin- s dineinszer motorproteinek (l. 40. fejezet) jtszanak szerepet bennk (19.4. bra).
19.4. bra - 19.4. bra: Az osztdsi ors megnylsa az anafzis B. szakaszban
2.4. Telofzis
A sejtosztds az MPF gyors degradcija utn fejezdhet be (l. elz fejezet). A profzis elejn az MPF-
hatsra foszforilldott fehrjk a mitzis vgn elvesztik foszftcsoportjaikat. A kromatinfehrjk
defoszforilcija a kromoszmk dekondenzcijt eredmnyezi, jra megjelenik a kromatinllomny s a
sejtmagvacska. A maghrtya-vezikulk laminrtegk segtsgvel megktdnek a kromoszmk felsznn s
109
19. A sejtosztds
fuzionlva kialaktjk a maghrtyt a kromatinllomny krl. jra kpzdik az endoplazmatikus retikulum s

a Golgi-komplex is. A sejtben kt sejtmag jelenik meg, lezrva a kariokinzis folyamatt.
2.5. Citokinzis
A citoplazma kettosztdsa, a citokinzis is az MPF lebomlsnak a kvetkezmnye. Az osztds vghez
kzeled sejtben az ekvatorilis sknak megfelelen a sejthrtya alatt mikrofilamentumokbl ll kontraktilis
gyr kpzdik, amely sszehzdva mly befzdst hoz ltre a kt utdsejt hatrn (19.5. bra). A kt sejt
vgl is elvlik egymstl, ezzel a sejtosztds befejezdik.
19.5. bra - 19.5. bra: Citokinzis osztd llati sejtben
3. A meizis
A meizisredukcis sejtosztds, melynek sorn diploid (a DNS-megkettzdst kveten tmenetileg
tetraploid) sejtekbl haploid hm s ni ivarsejtek jnnek ltre. Ember esetben a 23 kromoszmaprt tartalmaz
sivarsejtekbl 23 kromatiddal rendelkez gamtk kpzdnek.
A meizis kt egymst kvet osztdsi szakaszra oszlik (19.6. bra). Az I. meiotikus osztdst megelz
interfzisban a DNS megkettzdik: minden kromatid magval azonos testvrkromatidot hoz ltre. Az I.
osztds tbb alszakaszbl ll profzisban a kromatin kondenzcijval kialakulnak a kromoszmk, majd az
egy prba tartoz, anyai s apai eredet homolg kromoszmk egymshoz tapadnak. A kapcsolat a hasonl
DNS-szekvencik kztti bzisprosodssal trtnik. A homolg kromoszmk kztti intim kontaktus
lnctrsek, majd homolg rekombinci eredmnyekppen kromoszmarszletek (DNS-szakaszok)
kicserldshez vezet (crossing over). Ennek mechanizmust a 19.7. bra mutatja be, ersen leegyszerstve. A
kt DNS-rgiban az egymshoz hasonl lncokban lnctrs kvetkezik be, az eltrtt lncvgek helyet
cserlnek s bzisprosodnak a msik DNS-molekula komplementer lncval. DNS-ligz egyesti a lncvgeket.
Keresztezett lnc intermedier keletkezik, melybl jabb lnctrssel s liglssal jnnek ltre a
rekombinldott DNS-szakaszok.
19.6. bra - 19.6. bra: A meizis folyamata. (Az egyszersg kedvrt az bra csak
egyetlen kromoszmapr sorst mutatja.)
110
19. A sejtosztds
19.7. bra - 19.7. bra: Homolg rekombinci. A kiindulsi, hasonl szekvencij

DNS-rgikban egyeslnc lnctrsek trtnnek (A.; nylhegyek). A lncvgek helyet
cserlnek s a msik lncvggel egyeslnek. A lnckeresztezsben ismt trsek
trtnnek (B.; nylhegyek), az jabb lncvgeket is DNS-ligz egyesti (C).
A crossing overt kvet I. metafzisban a kromoszmaprok a sejt ekvatorilis skjban rendezdnek, majd az I.
anafzisban a kzben kialakult osztdsi ors mikrotubulusainak irnytsval a homolg kromoszmk
sztvlnak s a sejt kt plusba vndorolnak. A kromoszma-szegregci vletlenszer, az egyes
kromoszmaprok anyai s apai eredet tagjainak sztvlsa sszesen 223 utdsejtkombincit eredmnyezhet.
(A megelz crossing over ezt a szmot tovbb nveli.) Az I. telofzisban kt utdsejt alakul ki, mindkett 23
ktkromatidos kromoszmt tartalmaz.
Az ezt kvet rvid interfzisban nincs DNS-replikci, st a kromoszmk nem is dekondenzldnak teljesen.
A II. meiotikus osztds metafzisban a 23 kromoszma az egyenlti skban rendezdik, az anafzisban a
kromatidok szeparldnak, az osztds teht mitzisra emlkezteten fejezdik be. A vgeredmny: 4 haploid,
23 kromatidos sejt.
19.8. bra - 19.8. bra: A gerinces oocitk meizisa
111
19. A sejtosztds
Gerincesek petefszkben az oocitk meizisa az I. profzisban megakad, a sejtek hossz ideig (akr
vtizedekig) ebben a fzisban vannak. Kromoszmik dekondenzltak, az aktv gnexpresszi az oocita
nvekedst idzi el illetve lehetv teszi olyan RNS-ek s fehrjk felhalmozdst, melyek majd a korai
egyedfejldshez szksgesek. Hormonhatsra az oocita befejezi az I. meiotikus osztdst (19.8. bra), melyet
aszimmetrikus citokinzis jellemez, gy egy kismret, n. sarki testet is eredmnyez. Az osztds ezutn a II.
metafzisban ismt lell s csak a megtermkenyts utn fejezdik be (l. 50. fejezet).
Ajnlott irodalom
519522, 672688.
Marshall, I. C. B., Wilson, K. L. (1997): Nuclear envelope assembly after mitosis. Trends Cell Biol. 7, 6974.
McIntosh, J. R., McDonald, K. L.: The mitotic spindle. Scientific American 1989/10, 2634.
Ross, K. E., Cohen-Fix, O. (2002): Separase: a conserved protease separating more than just sisters. Trends
Cell Biol. 12, 13.
112
20. fejezet - 20. DNS-replikci I.: A
DNS-megkettzds ltalnos
jellemzi
A sejtben trolt genetikai informci utdsejtekbe trtn tvitelnek elfelttele a DNS megkettzdse,
replikcija. A replikcinak a teljes genomra ki kell terjednie, ellenkez esetben a sejtosztds az
utdsejtekben gnvesztesget okozna; hatkonynak kell lennie, hogy nagymret genomok is viszonylag rvid
id alatt megkettzdhessenek; megbzhatnak kell lennie, hogy az utdsejtekben az elviselhet mrtken fell
ne jjjenek ltre mutcik. Ezeknek a kvetelmnyeknek tbb tucat fehrjbl ll, bonyolult replikcis
gpezet tesz eleget, amely az evolci sorn nagymrtkben konzervldott: a prokariota s eukariota
replikcira a rszletekben tapasztalhat klnbsgek mellett kzs alapelvek, mechanizmusok jellemzk.
1. A replikci vizsglmdszerei
1.1. In vitro mdszerek
A DNS-szintzis sejtmentes rendszerben trtn vizsglatt 1956-ban Kornberg dolgozta ki. A Kornberg-
rendszer az albbi alkotrszeket tartalmazta:
templt DNS-t (mintul szolglt a szintzis sorn);
DNS-polimerzt (amelyet E. coli sejtekbl izollt Kornberg);
a 4 dezoxiribonukleozid-trifoszftot (dATP, dGTP, dTTP, dCTP, ezek szubsztrtknt szolgltak a szintzishez

s az energit is biztostottk; az egyik nukleotid radioaktv izotppal jellt volt [[a-32P]dCTP], hogy a
szintzis termke knnyen kimutathat legyen);
Mg++ (a DNS-polimerz aktivtora), optimlis pH.
A reakcielegyet megfelel hmrskleten inkublta, majd az jonnan kpzdtt DNS-t filterprecipitcival

mutatta ki. Ennek lnyege, hogy a makromolekulkk felplt nukleotidok triklrecetsavval kicsaphatk s
filterkorongon sszegyjthetk, mg a be nem plt nukleotidok (savoldkony frakci) oldatban maradnak s a
szrpaprrl lemoshatk. A filter radioaktivitsa folyadkszcintillcis szmllval meghatrozhat s arnyos
a rendszer replikcis aktivitsval. A Kornberg-rendszerben kpzdtt DNS bzisarnya megegyezik a
rendszerhez adott DNS-vel, ami arra utal, hogy a DNS komplementer bzisprosodssal, valban templtknt
irnytotta a replikcit. Ebben a ksrletben ugyanakkor valjban nem replikci, hanem repair-szintzis
(DNS-reparci, l. 22. fejezet) folyt. A DNS-polimerz a templt lnctrseihez kapcsoldott, az eltrt lncot 5
3 irnyban lebontotta, mikzben a
keletkez rsbe a templttal komplementer j DNS-t szintetizlt (20.1. bra).
20.1. bra - 20.1. bra: A DNS-szintzis mechanizmusa a Kornberg-rendszerben
A Kornberg-rendszer tovbbfejlesztsvel, a replikcihoz szksges egyb fehrjk hozzadsval olyan in

vitro elegyeket hoztak ltre, melyekkel nemcsak a prokariota, hanem az eukariota DNS-szintzis is kitnen
modellezhet sejtmentes krlmnyek kztt. Ezekben a bonyolult reakcielegyekben valdi, az in vivo DNS-
szintzishez hasonl replikci trtnik.
113
20. DNS-replikci I.: A DNS-
megkettzds ltalnos jellemzi
1.2. A DNS-szintzis in vivo vizsglata

Az in vivo mdszerek lnyege, hogy a sejtbe olyan prekurzort juttatnak, amely bepl az jonnan kpzdtt
DNS-be s knnyen megklnbztethet a termszetes DNS-alkotktl. A srsgjells esetn a nehz
izotppal (l. a MeselsonStahl-ksrletet ksbb ebben a fejezetben) vagy a timidin-analg brmdezoxiuridinnel
(BrdU) jellt DNS srsge nagyobb mint a termszetes DNS-, gy izopiknikus grdiens centrifuglssal
egymstl elvlaszthatk. Radioaktv jellsre ltalban [3H]timidint hasznlnak. BrdU jells, majd anti-BrdU
antitest alkalmazsval az jonnan kpzdtt DNS immunhisztokmival, ramlsi citometrival is kimutathat.
2. A DNS-replikci szemikonzervatv
A ketts hlix modell fellltsakor Watson s Crick akkor mg ksrleti bizonytk nlkl felttelezte, hogy
a DNS megkettzdse gy trtnik, hogy a kt lnc sztcsavarodik s mindkett komplementer
bzisprosodssal irnytja j lncprjnak a szintzist. A kt utdmolekulban teht az egyik lnc az eredeti
templtbl szrmazik, a msik pedig jonnan kpzdik. A replikcinak ezt a szemikonzervatv
mechanizmust Meselson s Stahl igazolta ksrletesen 1958-ban (20.2. bra).
E. coli sejteket hossz ideig olyan tptalajon tenysztettek, melyben a nitrognforrs 15N-izotpot tartalmaz
ammoniumklorid volt. A sejtek DNS-e gy csak nehz N-izotpot tartalmazott, amely nagyobb srsge miatt a
14
N-tartalm DNS-tl cziumklorid grdiens centrifuglssal elklnthet (20.2. bra). A sejteket ezutn
14
NH4Cl-tartalm mdiumba vittk t, majd genercis idnknt mintt vettek s meghatroztk a DNS
srsgt. Az 1. osztds utn tmeneti srsg, a 2. utn pedig tmeneti s knny DNS kpzdtt. Ha az
tmeneti srsg DNS-t denaturci utn centrifugltk, belle knny s nehz DNS-lncok vltak szt. Mint
ahogy ezt a 20.2. bra bemutatja, a ksrlet egyrtelmen bizonytotta, hogy az E. coli DNS-replikcija
szemikonzervatv. Elvileg hasonl ksrlettel igazoltk a szemikonzervatv mechanizmust eukariota sejtekben is.
Gyorsan osztd sejteket rvid ideig [3H]timidinnel jelltek, majd az 1. s 2. osztds metafzikus sejtjeit
autoradiografltk: az 1. osztds kromoszminak mindkt kromatidja jellt volt, mg a 2. osztds utn a
grainek az egyik kromatid felett halmozdtak.
20.2. bra - 20.2. bra: A Meselson-Stahl ksrlet
114
3. A DNS-replikci templt- s primerfgg

Valamennyi ismert DNS-polimerz fontos jellemzje, hogy katalitikus aktivitshoz templt s primer is
szksges (20.3. bra). A templt komplementer bzisprosodssal irnytja az j nukleotidok beptst. A
primer a templtlnchoz kapcsold, azzal komplementer nukleinsavszakasz, amelynek 3-vgn szabad OH-
csoport van. Azrt van r szksg, mert a DNS-polimerzok csupasz templtlncon nem kpesek szintzist
kezdeni: az els nukleotidot a primer 3-OH csoportjhoz kapcsoljk, miutn a nukleozidtrifoszft kt szls
foszftcsoportja pirofoszft alakjban lehasad. A vzolt mechanizmusbl az is kvetkezik, hogy a
lncnvekeds mindig 5 3 irnyban folyik (20.3. bra). A
DNS-szintzis abszolt primerfggse adott lehetsget nagyjelentsg molekulris biolgiai mdszerek (DNS
szekvenciameghatrozs, polimerz lncreakci) kidolgozsra (l. 9. s 10. fejezet).
20.3. bra - 20.3. bra: A templt-primer komplex szerepe a DNS-szintzisben
115
4. A DNS replikcija ktirny

In vivo a DNS-szintzis meghatrozott helyeken, origkon kezddik, majd a templt mentn mindkt irnyban
azonos sebessggel halad. Ezt gy igazoltk, hogy S-fzis sejteket rvid ideig elbb nagy, majd kis aktivits
[3H]timidinnel jelltek, DNS-t izolltak, majd a DNS-rostokat fnymikroszkpos autoradiogrfival vizsgltk
(20.4. bra). Az ilyen rost-autoradiogrammon a vkony DNS-molekula nem ltszik, de a beplt [3H]timidinbl
szrmaz grainek igen. A grainmentes origo mindkt oldaln ersen, majd azokon kvl gyengn jellt rgik
figyelhetk meg; ez a kp megfelel a szintzis ktirny jellegnek: az orignak megfelelen a templtlncok
sztvlnak s a szintzis sorn mindkt irnyban nvekv replikcis bubork kpzdik.
20.4. bra - 20.4. bra: A replikci ktirny jellegnek bizonytsa rost-

autoradiogrfival (Or = origo)
116
5. A DNS-replikci szemidiszkontinuus
A DNS-szerkezet s -replikci eddig ismertetett jellemzibl (antiparallelits; mindkt lncnak meg kell
kettzdnie; a replikci egy pontbl mindkt irnyban halad; a lncnvekeds csak 5 3 irny lehet)
nehezen megvlaszolhat krds merl fel: hogyan replikldhat az origo mgtti terlet, hogy a felsorolt
kvnalmaknak maradktalanul megfeleljen (ezt a rgit a 20.5.A brn krdjelek jellik). A vlaszt
[3H]timidin jellses ksrletek adtk meg. Ha E. coli sejteket rvid ideig jelltek, a sejtekbl izollt DNS-ben a
radioaktivits egy rsze kismret DNS-fragmentumokban volt kimutathat, amelyek azutn idvel nagy
molekulasly DNS-s kapcsoldtak ssze. Az n. Okazaki-fragmentumok lte arra utalt, hogy a DNS egy rsze
nem folyamatosan, hanem szakaszokban, diszkontinuusan replikldik. A replikcis buborkok kt replikcis
villt tartalmaznak; a replikcis villkban az egyik templtlncon 5 3 irnyban
folyamatosan szintetizldik a vezet lnc; a msikon Okazaki-fragmentumok kpzdnek, amelyek azutn
ksleked lncc kapcsoldnak ssze (a folyamat rszleteit a kvetkez fejezetben mutatjuk be). A DNS-
szintzisnek ezt a pro- s eukariotkban is ltalnos mechanizmust szemidiszkontinuus replikcinak
nevezzk.
20.5. bra - 20.5. bra: A replikcis szemidiszkontinuus jellege. A. a szimmetrikus

replikci problmja; B. a vezet s ksleked lncok szintzise
Ajnlott irodalom
109111.
Davis, T. H. (2004): Meselson and Stahl: The art of DNA replication. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 101, 17895
17896.
117
Hanawalt, P. C. (2004): Density matters: The semiconservative replication of DNA. Proc. Nat. Acad. Sci. USA
101, 1788917894.
Kornberg, A.: The synthesis of DNA. Scientific American 1968/10, 6478.
118
21. fejezet - 21. DNS-replikci II.: A
DNS-szintzis mechanizmusa
A DNS-megkettzds folyamata az evolci sorn ersen konzervldott, prokariotkban s eukariotkban az
alapvet mechanizmusok azonosak. Ez a fejezet rszletesen a prokariota replikci esemnyeit ismerteti, majd
azokkal a jellemzkkel foglalkozik, amelyek az eukariota genom bonyolultabb szervezdsbl addnak.
1. A replikci mechanizmusa E. coli sejtekben

A DNS-megkettzds bonyolult folyamat, amely egy tbb tucat fehrjt tartalmaz multienzim komplexben, a
repliszmban megy vgbe. Az albbiakban a replikcis gpezet legfontosabb alkotrszeinek jellemzivel s
szerepvel foglalkozunk.
1.1. Origo-felismer komplex

A prokariota kromoszma replikcija egyetlen ponton, az orign kezddik. Erre a DNS-szakaszra jellemz,
hogy rvid ismtld szekvencik alkotjk. AT-gazdag rgi lvn, knnyen denaturldik s specifikus
fehrjk megktsre kpes. (Az eukariotk origi szekvenciarokonsgot nem mutatnak az E. coli origval, a
fenti tulajdonsgok azonban minden ismert replikcis kezdrgira jellemzek.) Az origt inicitor fehrjk
ismerik fel s elsegtik egy multimer prereplikcis fehrjekomplex felplst.
1.2. Topoizomerz I
A szintzis megindulshoz a DNS kt lncnak el kell vlnia egymstl ahhoz, hogy templtfunkcijukat el
tudjk ltni. Ez ellen hat a DNS szuperheliklis szerkezete, az abbl add feszlst oldani kell. Ez a
topoizomerzok funkcija, amelyek reverzibilisen elmetszik a DNS-lnco(ka)t (az 5-vgen lev
foszftcsoporttal egy tirozin oldallncon keresztl kovalens ktst ltestenek), a szuperhelix fellazul, majd a
lncvgek kztt jrakpzdik a foszfodiszter-kts. A topoizomerz I. csak az egyik lncot vgja el,
fszerepet jtszva a szuperhelix relaxcijban: a replikcis villk eltt haladva folyamatosan megsznteti a
replikcis bubork nvekedse ltal okozott feszlst. A topoizomerz II. kettslnc-specifikus endonuklez s
f funkcija az sszegabalyodott utdmolekulk sztvlasztsa a replikcit kveten (l. ksbb).
1.3. Replikatv DNS-helikz

Az inicicis komplex kialakulsa utn az orignak megfelelen a kt lnc elvlik egymstl. Ezt egy
sztcsavar fehrje, a helikz katalizlja: a gyr alak enzimkomplex ATP felhasznlsval feltpi a H-hidakat
s a replikcis villkban mozogva egy-egy helikz komplex mindkt irnyban tgtja a replikcis buborkot
(21.1. bra). A helikzok pro- s eukariota sejtekben is ltfontos enzimek: nem csak a replikciban, hanem a
DNS-reparciban s a transzkripciban is rszt vesznek.
21.1. bra - 21.1. bra: A prokariota replikci mechanizmusa. A: A replikcis

bubork kialakulsa az ori-rgiban. B: Egy replikcis villa mkdse s alkotrszei
119
21. DNS-replikci II.: A DNS-
szintzis mechanizmusa
1.4. Ssb-fehrjk
A helikz tovbbhaladsa sorn a sztvlasztott lncok az enzim mgtt komplementer bzisprosodssal ismt
sszekapcsoldnnak, ez termszetesen megakadlyozn replikcijukat. A replikcis villban a
templtlncokhoz ssb (single-strand binding) proteinek ktdnek: kimerevtik a lncokat s megakadlyozzk
renaturcijukat, egyben kialaktjk a DNS-szintzishez optimlis templt konformcit.
1.5. Primz
A lert folyamatok a templtot alkalmass teszik a tnyleges szintzis elkezdsre. A DNS-polimerzok kzs
tulajdonsga azonban, hogy nem kpesek csupasz lncon megindtani a szintzist. Primerknt elszr rvid
(nhny nukleotidbl ll) RNS-lncok szintetizldnak; a folyamatot specilis RNS-polimerz, a primz
katalizlja. Az els primert a vezet lncon szintetizlja, majd a ksleked lncon meghatrozott szakaszonknt
kpezi a primereket (21.1. bra). Az utbbi funkcijt megknnyti, hogy a helikzzal (s ms fehrjkkel)
primoszma komplexet hoz ltre, gy a replikcis villa mozgsa s a primerszintzis sszehangoltan folyik.
1.6. DNS-polimerz III

E. coliban a replikci f elongcis enzime a DNS-polimerz III: ez szintetizlja a vezet s a ksleked
lncot is. Szubsztrtjai dezoxiribonukleozid-trifoszftok, az enzim pirofoszft lehastsval hozza ltre a
nveked lnc foszfodiszter-ktseit (l. 20. fejezet). A DNS-polimerz III nagymret komplex: a holoenzim
mintegy 20 polipeptidlncbl ll. A katalitikus helyeket hordoz core enzim dimer szerkezet: a replikcis
villban mozogva egyik fele a vezet, msik rsze a ksleked lncot pti fel. (Az utbbi templtlnca ltal
alkotott hurok teszi lehetv, hogy az antiparallelits ellenre az enzim kpes legyen mindkt lnc egyidej
replikcijra; 21.2. bra.) A DNS-polimerz III fontos jellemzje a processzivts: tbbezer nukleotidnyi DNS-
lnc szintzisre kpes anlkl, hogy az enzim kzben levlna a templtlncrl. A processzivitst jrulkos
alegysgek biztostjk: a -alegysg a templt-primer rgihoz ktdik a vezet lncon, elsegtve a -alegysg
kapcsoldst. Ez a gyr alak fehrje krlfogja a replikld vezet lncot s tartsan a templthoz rgzti a
120
core polimerzt. Az 5 3 elongcis aktivits mellett a DNS-polimerz III 3

5 exonuklez aktivitssal is rendelkezik. Ennek jelentsgt az adja, hogy az elongci sorn
viszonylag nagy gyakorisggal plnek be nem komplementer nukleotidok a nveked DNS-lncba. Ilyenkor a
szintzis lell, az enzim 3 5 exonuklezknt lehastja a hibs nukleotidot s folytatja a
polimerizcit. Ezt a jelensget proofreadinnek nevezzk (angol kifejezs, a kefelenyomat kijavtst jelenti),
nagymrtkben cskkenti a mutcis rtt. Proofreading exonuklezok nlkl nagymret genommal
rendelkez llnyek ki sem alakulhattak volna.
21.2. bra - 21.2. bra: A DNS-polimerz III mkdsi modellje
1.7. DNS-polimerz I
A ksleked lncon a DNS-polimerz III feladata addig tart, amg el nem ri az eltte kpzdtt Okazaki-
fragmentum 5-vgi primerszakaszt. Funkcijt ekkor a Kornberg ltal felfedezett DNS-polimerz I veszi t.
(A DNS-polimerz II a replikciban nem vesz rszt, repair-enzim.) A DNS-polimerz I 5 3
exonuklez aktivitsval lebontja a primert, 5 3 elongcis
aktivitsval pedig kitlti a kpzdtt rst.
1.8. DNS-ligz
Az Okazaki-fragmentumok kztti 3 5 foszfodiszter-ktst a DNS-
ligz hozza ltre, folyamatoss tve a ksleked lncot is.
1.9. Topoizomerz II
A replikci termincija eredmnyekppen, lncszemekknt egymsba kapcsold DNS-gyrk keletkeznek.
A replikldott cirkulris DNS-ek sztvlasztst (dekatenci) a topoizomerz II vgzi (21.3. bra). Ennek az
enzimnek szerepe van a baktrium-kromoszma replikcit kvet szuperspiralizcijban is.
121
21.3. bra - 21.3. bra: Cirkulris DNS-ek sztvlasztsa
2. Az eukariota replikci specilis jellemzi

Az alapveten a prokariotkhoz hasonl mechanizmus mellett az eukariota genom mrete, lineris DNS-
molekuli s fehrjhez kttt llapota klnleges problmkat jelentenek a replikcis gpezet szmra.
2.1. Nagymret DNS-molekulk replikcija

Ha minden kromatid DNS-molekulja egyetlen origrl kettzdne meg, egy emberi sejt DNS-nek replikcija
hnapokig tartana. Mivel az S-fzis idtartama 68 ra, ez csak gy lehetsges, hogy a replikci szmos
origrl indul, emberi sejtekben ezek szma tbb tzezer. Az egy origrl megkettzd DNS-rgit
replikonnak nevezzk. Az eukariota genom nagy mrete tovbbi problmkat okoz: a replikldott DNS-
lncok melyek majd a testvr kromatidokat fogjk alkotni hatatlanul egymsba gabalyodnak.
Sztvlasztsukat mr a replikci, illetve kromatinkondenzci kzben, vgl kzvetlenl az anafzist
megelzen topoizomerz II enzimek vgzik (21.4. bra). Ha ezek mkdse nem tkletes, kromoszmatrs,
vagy szt nem vls (nondiszjunkci) kvetkezik be, melyek kvetkezmnyei az utdsejtekre nzve
katasztroflisak lehetnek.
21.4. bra - 21.4. bra: A testvrkromatidok sztvlasztsa az anafzisban
2.2. Eukariota DNS-polimerzok

A prokariotkhoz hasonlan eukariota sejtekben is tbbfle DNS-polimerz mutathat ki. A nukleris genomot
az n. replikatv DNS-polimerzok (, s ) kettzik meg: a DNS-polimerz szintetizlja a vezet lncot s
az Okazaki-fragmentumok nagy rszt; a DNS-polimerz primzzal komplexet kpezve megkezdi a ksleked
lnc darabjainak felptst; az enzim az Okazaki-fragmentumok szintzist fejezi be. Az eukariota DNS-
polimerzokhoz szmos egyb jrulkos fehrje is kapcsoldik. Ezek kzl felttlenl megemltend a PCNA
fehrje (proliferating cell nuclear antigen). Ugyanolyan szerepe van a DNS-polimerz mkdsben, mint a
bakterilis DNS polimerz III -alegysgnek: rgzti az enzimet a vezet templtlncon. Anti-PCNA
autoantitestek is okozhatjk a systems lupus erythematosus nev autoimmun betegsget, mellyel ksbb mg
foglalkozunk (l. 26. fejezet). A replikatv DNS-polimerzok a krosodott DNS-t nem kpesek megkettzni: a
122
srls helyn megllnak. Lteznek specializlt DNS-polimerzok, melyek kpesek a krosodott DNS-szakasz
megkettzsre (transzlzis DNS-szintzis). Segtsgkkel a sejt letben marad s osztdhat is, de mutcik
halmozdhatnak fel benne. A DNS-polimerz reparcis enzim, a DNS-polimerz pedig a mitokondrilis
genomot repliklja. Az eukariota DNS-polimerzok 5 3 exonuklez aktivitssal nem
rendelkeznek, gy a primerek lebontst jrulkos enzimek vgzik.
2.3. Replikci a kromatinllomnyban

Az eukariota replikcit bonyoltja (s lasstja), hogy nem csupasz, hanem fehrjket kt DNS-en, a
kromatinban trtnik. A frissen replikldott DNS-hez azonnal hisztonok kapcsoldnak (ezek az S-fzisban
szintetizldnak), kialaktva a nukleoszomlis szerkezetet. A kromatin llapota befolysolja a replikci idejt:
az eukromatin az S-fzisban korn, a heterokromatin pedig ksbb kettzdik meg. Az eukariota replikci a
kromatinban nem diffz mdon folyik, hanem meghatrozott rgikban, n. replikcis zemekben. Ezek egy
replikcis buborkot s a benne dolgoz kt repliszmt tartalmaznak. A fehrjekomplexek a magszkeletonhoz
rgzlnek: valjban a templt-DNS mozog, nem a repliszmk.
2.4. Telomrreplikci
A DNS-megkettzds szemidiszkontinuus jellegbl kvetkezik, hogy a lineris DNS-molekulk vgein a
ksleked lncok utols primere mgtti szakasz a hagyomnyos mdon nem repliklhat (21.5. bra). A
kromoszmk telomrjeit tandem ismtlds, nhny nukleotidbl ll szakaszok alkotjk (l. 16. fejezet). A
telomrrvidlst egy specilis enzim, a telomerz gtolhatja meg: ez telomrismtldseket ad a
kromoszmavgekhez. A telomerz ribonukleoprotein: fehrje rsze cellulris reverz transzkriptz, amely az
enzim RNS-komponenst hasznlva templtknt ismtldseket szintetizl a ksleked templtlnc vgre, majd
a msik lncot hagyomnyos mdon primz/ DNS-polimerz a komplexek hozzk ltre (21.6. bra). Az
ivarsejteket produkl csrasejtvonalakban magas a telomerzaktivits; ez biztostja a kromoszmk psgt s
azt, hogy az utdokba intakt genom kerlhessen. Az egyedfejlds sorn a legtbb szomatikus sejt azonban
elveszti telomerzaktivitst: kromoszmik telomrje osztdsrl osztdsra rvidl, majd gnek is elvesznek.
Ez a jelensg fontos szerepet jtszik a sejtek fiziolgis regedsben s pusztulsban. A telomerz gnek
mutcija ll a korairegedssel jr krkpek bizonyos tpusainak htterben. A dyskeratosis congenita
rkld betegsg, melynek egyes formit a telomerz-RNS cskkent expresszija okozza. A krkp f tnetei:
brelvltozsok (pigmentci, korai szls), a csontvel mkdszavarai (anaemia, thrombocytopenia), korai
regeds s hall. Kimutattk, hogy a rosszindulat daganatok legtbbjben a telomerz reaktivldik: ezek a
sejtek, br gyorsabban osztdnak, nem vesztik el, hanem stabilizljk telomrjeiket, halhatatlann vlnak
(immortalizci). rthet mdon komoly erfesztsek folynak telomerzgtl anyagok mint daganatellenes
gygyszerek kifejlesztsre.
21.5. bra - 21.5. bra: A vg-replikci problmja
123
21.6. bra - 21.6. bra: A telomerz-reakci mechanizmusa
124
Ajnlott irodalom
Baker, T. A., Bell, S. P.: Polymerases and the replisome: machines within machines. Cell 92, 295305, 1998.
201216.
Falaschi, A. (2000): Eukaryotic DNA replication: A model for a fixed double replisome. Trends in Genetics 16,
8892.
Friedberg, E. C., Wagner, R., Radman, M. (2002): Specialized DNA polymerases, cellular survival, and the
genesis of mutations. Science 296, 16271630.
Greider, C. W., Blackburn, E. H.: Telomeres, telomerase, and cancer. Scientific American 1996/2, 8085.
Kim, S., Kaminker, P., Campisi, J. (2002): Telomeres, aging and cancer: In search of a happy ending.
Oncogene 21, 503511.
Szebernyi J.: Telomerz A halhatatlansg kulcsa? Tudomnyos Dialg 1998/3, 610.
The Nobel Assembly at Karolinska Institute (2009): Press release. The Nobel prize in physiology or medicine
2009.
http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laurates/2009/press.html.
125
22. fejezet - 22. A DNS lnchibinak
kijavtsa
Az rkt anyaggal szemben tmasztott fontos kvetelmny az llandsg; a DNS nukleotidszekvencijnak
hiteles megkettzse s megrzse kt replikci kztt biztostja az utdsejtek genetikai azonossgt, illetve az
rkld tulajdonsgok tadst az utdszervezeteknek. A DNS-reparci zavarai kvetkeztben az
rktanyagban ltrejv vltozsok, mutcik rkld betegsgek, rosszindulat daganatok kialakulshoz
vezethetnek, problmkat okozhatnak az embrionlis fejldsben s a szvetek mkdsben, illetve
hozzjrulnak az regeds folyamathoz.
1. DNS-krosods
Mutcit sokfle hats okozhat. A replikci hibja esetn a szintetizld DNS-lncba nem komplementer
bzisok plnek be. Ezek egy rsze a proofreading mechanizmust (l. 21. fejezet) is kikerli. Spontn kmiai
folyamatok is okozhatnak DNS-krosodst. Bzisok dezamincival aminocsoportot veszthetnek, abnormlis
bziss alakulva t (pl. citozin talakulsa uracill). Hhatsra depurinci trtnhet: a purinbzisok
leszakadnak a dezoxiribzrl s n. AP (apurin)-helyet hoznak ltre a DNS-ben. (A depurinci nagyon
ltalnos jelensg: egy emberi sejt genomja kb. 10 000 purinbzist veszti el naponta!) A kmiai
mutagnek kzl egyesek bzismetilcit okoznak (alkill gensek), msok kovalens ktssel a DNS-hez
kapcsoldnak (pl. benzpirnszrmazkok) vagy kmiai keresztktst hoznak ltre a komplementer lncok
kztt. Reakcikpes oxign szabad gykk (l. 36. fejezet) a bzisok oxidlt szrmazkait hozhatjk ltre. Ers
mutagn hatsa van az ultraibolya sugrzsnak: a DNS-lncok szomszdos pirimidin bzisai kztt kovalens
ktssel dimereket hoz ltre, ezek a replikcit s a transzkripcit is gtoljk. Az ionizl sugrzsok
lnctrseket s ezltal kromoszma-rendellenessgeket idzhetnek el.
Kijavtatlanul ezeknek a DNS-krosodsoknak a felhalmozdsa nem csak az trkts folyamatt

befolysolja, de a sejt lett is veszlyeztetheti, hiszen az abnormlis kmiai mdosulsok gtolhatjk a DNS
templtfunkcijt. A DNS-krosods kikszblsre a sejtekben DNS-reparcis rendszerek alakultak ki,
amelyek hatkonysgra jellemz: egy emberi sejt tbb millird bzisprnyi genomjban sejtciklusonknt
tlagosan csak 3 pontmutci marad meg. A DNS-repair jelensgt fl vszzada ismerjk, molekulris
mechanizmusainak tisztzsban azonban csak az 1990-es vek hoztak jelents haladst.
2. DNS-krosodsok direkt kikszblse

Elvileg ez a repair legegyszerbb lehetsge: megfordtani a krosodshoz vezet reakcit s helyrelltani a
DNS eredeti llapott. A DNS-reparci kzvetlen formja azonban ritkn fordul el. Baktriumokban
pldul fotoliz enzimek hastjk el az UV-hatsra kpzdtt timin-dimereket. Emberi sejtekbl ezek az
enzimek hinyoznak, a krosods kijavtsra bonyolultabb mechanizmus alakult ki.
3. Exczis repair
A DNS-krosodsok kikszblsnek legltalnosabb mechanizmusa sorn bonyolult fehrjekomplexek
felismerik s kimetszik a srlt rgit s j DNS-szakaszt szintetizlnak helyette. Az exczis repairnek hrom
f tpust klnbztetjk meg.
3.1. Bzisexczis repair

A folyamat clja a dezaminlssal, alkillssal, oxidatv ton krostott bzisok eltvoltsa s ptlsa. Az
abnormlis bzist DNS-glikozilz enzim ismeri fel s hastja le a dezoxiribzrl (22.1. bra). Az AP-hely
(apurin, ill. apirimidin hely) mellett AP-endonuklez bemetszst vgez, majd a dezoxiribz is lehasad. A
hinyz nukleotidot a DNS-polimerz b ptolja, majd DNS-ligz egyesti a lncvgeket. Jellemz ennek a
reparcis mechanizmusnak a fontossgra, hogy a bzisexccis repairre defektv K.O. egerek mg a mhen
bell elpusztulnak.
22.1. bra - 22.1. bra: A bzis-exczis repair mechanizmusa
126
22. A DNS lnchibinak kijavtsa
3.2. Nukleotid-exczis repair

Ha a krosods tbb nukleotidot rint (pl. pirimidin-dimer kpzds) vagy a DNS-rgi trszerkezett komolyan
deformlja (pl. nagymret nukleotid-adduktumok kpzdse), a repair folyamat is kiterjedtebb szakaszon
trtnik. A nukleotid-exczis repair ltalnosan alkalmazott, evolcisan konzervlt mechanizmus az
lvilgban. A folyamatban tbb, klnbz biokmiai aktivitssal rendelkez fehrje vesz rszt (22.2. bra),
ezek egy multiprotein komplexet (repairszma) alkotva hajtjk vgre a hiba kijavtst. Els lpsknt
specifikus DNS-kt fehrjk felismerik a krosods ltal okozott DNS-konformcivltozst. Ezt kveti a
lzit tartalmaz DNS-lnc bemetszse (inczi): endonuklezok (melyeket excinuklezoknak neveznk) a
krosods kt oldaln, attl meghatrozott tvolsgban elhastjk a kijavtand lncot, majd a kimetszett
oligonukleotidot helikz enzimek levlasztjk (exczi). Az gy kialakul rst DNS-polimerz tlti ki a 3-vgi
csonkot hasznlva primerknt, majd a lncvgeket ligz egyesti (repair-szintzis).
22.2. bra - 22.2. bra: A nukleotid-exczis repair mechanizmusa
127
Az emberi sejtek nukleotid-exczis repair mechanizmusra vonatkoz ismereteink dnt rszben rkld
repair-defektusokban szenved betegek sejtjeinek vizsglatbl szrmaznak. Ezek kzl a legismertebb a
xeroderma pigmentosum. Ezt a ritka, autoszomlis recesszv rklds betegsget a br szrazsga,
fnyrzkenysge jellemzi, valamint a brrk kialakulsa kockzatnak risi mrtk (tbbezerszeres!)
megnvekedse. A betegsgre az UV-besugrzs ltal okozott timin-dimerek kijavtsnak rkletes zavara
jellemz. Ez egyszer ksrlettel kimutathat: ha xeroderma pigmentosumban szenved betegek sejtjeit UV-
besugrzsnak teszik ki, majd [3H]timidin jellst vgeznek, a radioaktivits nem pl be a genomba, jelezve,
hogy az exczis repair nem mkdik. Klnbz betegekbl szrmaz sejtek fzija gyakran eredmnyez
normlis repair aktivits hibrid sejteket: ez arra utal, hogy a xeroderma pigmentosum fenotpust klnbz
gnek mutcija idzheti el. Eddig 7 gnt azonostottak (XPA-XPG), egyesek timin-dimer kt fehrjket,
msok helikzokat vagy excinuklezokat kdolnak.
Az UV-fny okozta DNS-krosods vizsglata rdekes s nem vrt megfigyelsekhez vezetett: az aktvan
trd gnekben okozott krosods kijavtsa gyorsabban trtnik, mint a transzkripcionlisan inaktv DNS-
rgik. A transzkripci s repair sszekapcsoldsnak elssorban az embrionlis fejlds s differencici
sorn van jelentsge. Ismertek olyan rkld betegsgek, amelyekben az exczis repair zavara fejldsi
zavarokat, szomatikus s mentlis retardcit idznek el. A jelensg molekulris alapja, hogy egyes XP-
fehrjk egyben egy, az RNS-polimerz II (l. 23. fejezet) mkdshez szksges transzkripcis faktor
komponensei is. Mivel a fejld szveteket fokozott gnaktivits jellemzi, a transzkripcihoz kapcsolt repair
elgtelensge rthet mdon fejldsi rendellenessgekhez vezet.
3.3. Hibs bzisprok korrekcija (mismatch repair)

A DNS-polimerzok proofreading aktivitsa nem tudja megakadlyozni, hogy a replikldott DNS-be bizonyos
gyakorisggal hibs, nem komplementer nukleotidok pljenek be. A mikroszatellita rgikban (l. 15. fejezet)
pedig elfordul, hogy nhny nukleotidbl ll, a msik DNS-lnccal nem kapcsold kis hurkok kpzdnek.
Ha ezeknek a ltszlag kis hibknak a kijavtsa nem trtnik meg, a kvetkez replikcis ciklusban
elkerlhetetlen, hogy pontmutci, illetve mikroszatellit expanzi jjjn ltre. A mismatch (angol sz, hibs
bzisprosodst jelent) jelleg DNS-hibk korrekcijra evolcisan ersen konzervlt repair mechanizmus
alakult ki (22.3. bra). A hibs nukleotid(ok) felismershez a repair appartusnak elszr azt kell eldntenie,
hogy a kt lnc kzl melyik szekvencija helyes. E. coliban (22.3.A. bra) erre az ad lehetsget, hogy a
128
replikcit kveten a DNS tmenetileg flig metillt: a templtlnchoz metilcsoportok kapcsoldnak, az

jonnan kpzdtt, gy a hibs bzist tartalmaz szlhoz viszont nem. A hibs bzisprt specifikus fehrjk
ismerik fel, majd a metillatlan lncban egy endonuklez bemetszst hajt vgre. Helikz s exonuklez eltvoltja
a hibs nukleotidot is tartalmaz szakaszt, majd DNS-polimerz s ligz befoltozza a rst.
22.3. bra - 22.3. bra: A mismatch repair mechanizmusa (A. E. coliban; B. eukariota
sejtekben)
Eukariota sejtekbl hinyzik az a fehrje, mely a metillatlan DNS-lncot felismeri. A mismatch repair az
jonnan szintetizld DNS-lncokon megy vgbe, melyeket a templtlncoktl az klnbztet meg, hogy
szabad lncvgeket tartalmaznak (22.3.B. bra; a vezet lncon ez a 3-vg, a ksleked lncon pedig az
Okazaki-fragmentumok vgei). A bemetszs a nem komplementer mdon beplt nukleotidnl trtnik, a kzte
s a lnc-vg kztti szakasz eltvoltsa s ptlsa pedig mr ugyangy zajlik, mint baktriumokban.
A mismatch repair kutats terletn jelents ttrs kvetkezett be 1994-ben: emberi sejtekben tbb olyan
fehrjt fedeztek fel, amelyek szerepet jtszanak a folyamatban. A vastagbldaganatok egyik gyakori, rkletes
formjban, a herediter nonpolyposis colon carcinomban (HNPCC) igen gyakori ezen gnek
valamelyiknek inaktivl, funkcivesztmutcija. A mkdkpes gntermk elvesztse n. muttor
fenotpust alakt ki: az rintett sejtekben felszaporodnak a pontmutcik, mikroszatellit instabilits jelenik meg,
megn annak a veszlye, hogy daganatkpzdst indukl onkognek aktivldnak (l. 54. fejezet) vagy a
sejtszaporodst kordban tart tumor szuppresszor gnek (l. 55. fejezet) inaktivldnak. Mivel a
vastagbldaganatra hajlamost defektusok rkldnek, nagyon fontos a mutcit hordoz egynek feldertse a
129
molekulris diagnosztika mdszereivel s rendszeres kontrollvizsglatuk a daganat korai stdiumban trtn

kimutatsra s gygytsra.
4. Ketts lnc DNS-trsek kijavtsa

Endogn szabadgykk, a sejtet rt ionizl sugrzs a DNS mindkt lncnak eltrst okozhatja. A ketts
lnc DNS-trsek slyos kveztkezmnnyel jrhatnak: a kromoszmk kisebb darabokra
fragmentldhatnak, a trvgek nuklezemsztse delcit, ms kromoszmkhoz kapcsoldsa transzlokcit
eredmnyezhet. A szomatikus sejteket ezek a mutcik daganatsejtekk alakthatjk t, a csrasejtek mutcija
viszont az utdokban kromoszma-rendellenessget vlthat ki (l. ksbb).
A ketts lnc DNS-trsek reparcijhoz szmos fehrje kzremkdse szksges, a lncvgek egyestst
multiprotein komplexek vgzik. Az egyik lehetsges mechanizmus a lncvgek direkt egyestse (nem-homolg
lncvgegyests; 22.4.A. bra). Mivel a liglsig a szabad lncvgek exonuklez hatsnak lehetnek kitve, ez a
repair mechanizmus ltalban kisebb-nagyobb delcit eredmnyez a DNS-trs helyn. Sokkal bonyolultabb a
kettslnc DNS-trsek homolg rekombincival trtn kijavtsa (22.4.B. bra), eredmnyekppen azonban
az eredeti helyzet ll helyre. A lncvgekrl 5 3 exonuklez nhny
nukleotidot eltvolt, majd a srlt lncok a testvrkromatid p komplementer lncaival bzisprosodnak. A
rseket DNS-polimerz tlti ki, a lncvgeket DNS-ligz egyesti. A javts a lnckeresztezs feloldsval r
vget.
22.4. bra - 22.4. bra: Kettslnc DNS-trsek kijavtsa. A. Nem-homolg

lncvgegyests. B. Repair homolg rekombinci ltal
Ajnlott irodalom
Cleaner, J. E. (1994): It was a very good year for DNA repair. Cell 76, 14.
130
216227.
Friedberg, E. C. (2003): DNA damage and repair. Nature 421, 436440.
Kanaar, R., Hoeijmakers, J. H. J., van Gent, D. C. (1998): Molecular mechanisms of DNA double-strand break
repair. Trends Cell Biol. 8, 483489.
Lindahl, T., Wood, R.D. (1999). Quality control by DNA repair. Science 286, 18971905.
Radman, M., Wagner, R.: The high fidelity of DNA duplication. Scientific American 1988/8, 2430.
Tanaka, K., Wood, R. D. (1994): Xeroderma pigmentosum and nucleotide excision repair of DNA. Trends
Biochem. Sci. 19, 8386.
Wilson, D. M., Thompson, L. H. (1997): Life without DNA repair. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 12754
12757.
131
23. fejezet - 23. Transzkripci I.: Az
RNS-szintzis s -rs ltalnos
jellemzi
A molekulris biolgia centrlis dogmja szerint a DNS-ben trolt genetikai informci kifejezse RNS-ek,
majd fehrjk szintzise tjn trtnik (l. 11.1. bra). Az informci tvitele DNS-rl RNS-re kt lpsben
zajlik: a DNS-templton vgrehajtott RNS-szintzis sorn a DNS bzissorrendjben rgztett informci
specifikus RNS-szekvencikba rdik t (transzkripci), majd ezekbl a primer transzkriptumokbl kmiai
talakulsokbl ll rsi folyamatok (gyakran hasznlt angol kifejezssel: processing) sorn jnnek ltre a
mkdkpes, rett RNS-ek.
1. A transzkripci vizsglmdszerei
1.1. Az RNS-szintzis in vitro vizsglata
A transzkripci tanulmnyozsra az els egyszer sejtmentes mdszert az 50-es vekben dolgoztk ki. Elve
megegyezik a Kornberg-rendszervel (l. 20. fejezet). Kmcsben templt DNS-t, a 4 ribonukleozid-trifoszftot
(ATP, CTP, UTP, GTP; egyikk radioaktvan jellt) s RNS-polimerz enzimet tartalmaz kivonatot kevertek
ssze, megfelel krlmnyek kztt (pH, ionok, hmrsklet) inkubltk, majd a reakci vgn
filterprecipitcival hatroztk meg az RNS-be plt radioaktivitst. Ebben az egyszer rendszerben ugyan nem
folyt az in vivohoz hasonl, hiteles transzkripci (a szintzis a templton nem specifikus kezdhelyeken, hanem
vletlenszeren kezddtt), m az in vitro rendszerek lehetv tettk az RNS-polimerzok tiszttst s
jellemzst. A ma hasznlatos transzkripcis rendszerekben, jrulkos fehrje faktorok hozzadsval,
nagymrtkben specifikus RNS-szintzis rhet el.
1.2. Az RNS-szintzis in vivo vizsglata

Radioaktv prekurzorokkal (pl. [3H]uridin) vgzett jells, majd a radioaktivits nyomon kvetse
autoradiogrfival, vagy izollt RNS-ek analzisvel, elterjedt mdszere a transzkripci s RNS-metabolizmus
vizsglatnak. Nem izotpos jells is alkalmazhat: bromouridinnal (BrU) jellt RNS-molekulk anti-BrU
antitesttel, immuncitokmiai mdszerekkel detektlhatk. Ltvnyos mdszerek a gnmkds vizualizlsra
kidolgozott eljrsok: sejtbl izollt transzkripcis komplexeket vizsglnak elektronmikroszkpban (l. 24.
fejezet).
2. Transzkripci s RNS-rs prokariotkban

2.1. A prokariota RNS-szintzis ltalnos jellemzi
Az RNS-szintzis (mint eukariotkban is) transzkripcis egysgekrl trtnik: ezeket egyik vgkn promter
(a szintzis kezdhelye), a msikon termintor (a befejezs helye) hatrolja, a kztk lev DNS-szakasz teljes
egszben trdva adja a primer transzkriptumot. (Prokariotkban a transzkripcis egysgeket operonoknak
nevezzk, ezek felptsvel, szablyozsval ksbb foglalkozunk [l. 30. fejezet].) A transzkripci
aszimmetrikus jellegt az biztostja, hogy lnckezds csak a promteren van, a szintzis pedig csak 5
3 irnyban folyhat, gy az egysgen bell csak az egyik lnc szolglhat templtknt. A
prokariota RNS-szintzis fontos, az eukariottl megklnbztet jellemzje, hogy a fehrjeszintzissel
kapcsoltan folyik: a nveked mRNS-hez riboszmk kapcsoldnak s a transzlci mr az mRNS-lnc
termincija eltt megkezddik. A kromoszma-poliszma komplex (23.1. bra) kialakulst tbb tnyez
teszi lehetv: a transzkripci s transzlci irnya az mRNS szempontjbl nzve azonos (5 3);
prokariotkban nincs mRNS-rs, a primer transzkriptum mr funkcikpes RNS; nincs maghrtya, amely
trben s idben elvlasztan a transzkripcit s a transzlcit.
23.1. bra - 23.1. bra: Kapcsolt transzkripci-transzlci prokariotkban: a

kromoszma-poliszma komplex
132
23. Transzkripci I.: Az RNS-
szintzis s -rs ltalnos jellemzi
2.2. A prokariota RNS-szintzis mechanizmusa

Prokariotkban valamennyi gn trst ugyanaz az RNS-polimerz vgzi. Az RNS-polimerz holoenzimek kt,
funkcionlisan eltr alkotrszbl plnek fel: a -faktor biztostja az enzim specifikus ktdst az trand
gn promterhez, a core polimerz pedig (alegysgszerkezete: 2) a foszfodiszter-ktsek kialakulst
katalizlja a szintzis sorn. Az enzim aktv centruma a -alegysgeken helyezkedik el.
A gn transzkripcija hrom f lpsben trtnik (23.2. bra). Az inicici sorn az RNS-polimerz holoenzim
specifikus szekvencikat ismer fel a promter-rgiban (23.3. bra): a ktds elszr a szintzis kezdpontjtl
(+1-gyel jelljk) kb. 35 bzisprnyira felfel elhelyezked hexanukleotid-rgiban trtnik (n. -35
szekvencia), itt zrt inicicis komplex jn ltre. A holoenzim ezutn kzelebb csszik a kezdponthoz s jabb
stabil ktst hoz ltre egy AT-gazdag rgiban (-10 szekvencia vagy Pribnow-box). A DNS kt lnca itt
knnyen sztvlik, nyitott inicicis komplex jn ltre s megtrtnhet az els nukleotidok beptse. A -35 s a
-10 rgi felismerse a -faktor feladata. A szintzis megkezdse utn a faktor levlik a holoenzimrl, az
elongcit mr a core polimerz vgzi. E.coli sejtek egyfle core enzimet tartalmaznak, a -faktornak azonban
klnbz varinsai lteznek, amelyek eltr promter-tpusokat ismernek fel.
23.2. bra - 23.2. bra: A prokariota transzkripci f lpsei
23.3. bra - 23.3. bra: A prokariota promter s a hozz kapcsold RNS-polimerz

szerkezete
133
A lncnvekeds (elongci) sorn komplementer ribonukleozid-trifoszftok ktdnek a templtlnchoz, rluk

pirofoszft hasad le s foszfodiszter-ktssel kapcsoldnak a nveked RNS-lnc 3-vghez. A lert
mechanizmusbl kvetkezik, hogy a legels nukleotid nem veszti el a foszftjait, az RNS-lnc 5-vgt ezrt
trifoszftvgnek nevezik. Az elongci sorn a DNS 10-12 nukleotidnyi szakasza denaturlt llapotban van, ez a
kis bubork fut vgig a transzkripcis egysgen. A nveked lnc 3-vgn kb. 10 nukleotidnyi szakasz
bzisprosodssal ktdik a templt szlhoz.
A szintzis akkor fejezdik be, amikor az RNS-polimerz elri a termintort. E. coli sejtek ktfle
mechanizmussal rendelkeznek a termincira. -fgg terminci sorn egy fehrjefaktor (-faktor) ktdik az
RNS-polimerzhoz, felismeri a termintor rgi bzossorrendjt s DNS-RNS helikzknt hatva levlasztja a
transzkriptumot a templtrl.. A -fggetlen termintorokban egy GC-gazdag hajtszer hurok kialakulsa az
RNS-lnc 3-vgn szinte letpi a transzkriptumot a templtlncrl. A termincit elsegti, hogy a
transzkriptum U-nukleotidok sorozatval vgzdik, gy az RNS-lnc vge viszonylag gyenge ktst ltest a
templttal. A terminci sorn felszabadul core enzim ismt -faktort ktve j transzkripcis ciklust kezdhet.
2.3. RNS-rs prokariotkban

Prokariotkban a stabil RNS-ekre (rRNS-ek, tRNS-ek) jellemz az rs, mRNS-eknl ritkn fordul el. A
primer transzkriptumok rsk sorn tbbfle kmiai mdosulson esnek t: hastsukban endonuklez s
exonuklez enzimek egyarnt rszt vesznek, a nagymret prekurzor-RNS-ekbl alaktjk ki a kisebb
termkeket; a nukleotid-addci az RNS-molekula vgn trtnik, templttl fggetlenl (pl. a 3-vgi CCA-
szekvencia szintzise tRNS-eknl); a nukleozid-modifikci legltalnosabb tpusa a metilci.
3. Az eukariota transzkripci ltalnos jellemzi

Eukariota sejtekben a transzkripci templtja nem csupasz DNS, hanem kromatinfonal: a nukleoszomlis
szerkezet ltalban az trt gneknl is megfigyelhet. A nukleoszmkon keresztl vgrehajtott transzkripci
pontos mechanizmusa ismeretlen, nyilvnval azonban, hogy a hiszton-DNS kapcsolatnak legalbb az RNS-
polimerz tovbbhaladsnak idejre fel kell lazulnia.
Szemben a baktriumokkal, melyekben valamennyi RNS-fajta szintzist ugyanaz az RNS-polimerz tpus

vgzi, eukariota sejtmagokban hrom f RNS-polimerzt klnbztetnk meg: ezek klnbz gneket rnak
t, ennek megfelel sejtmagon belli lokalizcijuk, biokmiai megklnbztetskre pedig a gyilkos galca
mrgvel, az -amanitinnal szemben eltr rzkenysgk szolgl (23.1. tblzat). Mindhrom RNS-
polimerzra jellemz, hogy nagymret, 1015 alegysgbl ll fehrjekomplexek. Eltren a prokariota RNS-
polimerztl, promterkhz nem kapcsoldnak kzvetlenl: a promter-rgihoz ktd specifikus
transzkripcis faktorokat ismernek fel, ezek segtsgvel trtnik meg az inicici.
Az RNS-polimerz I s II mkdsvel a kvetkez fejezetekben rszletesen foglalkozunk. Az RNS-polimerz

III a kismret RNS-ek nagy rszt szintetizlja. Az 5S rRNS s a tRNS gnek szokatlan tulajdonsga, hogy az
RNS-polimerz promterhez kapcsoldshoz szksges transzkripcis faktorok a +1 helytl disztlisan, a
gnen bell ktdnek a templthoz. Ezek a gnek teht intragn promterrel rendelkeznek.
23.1. tblzat - 23.1. tblzat: Az eukariota RNS-polimerzok jellemzi

RNS-polimerz
134
RNS-polimerz
I II III
termkek pre-rRNS pre-mRNS-ek egyes 5S rRNS tRNS-ek egyes
snRNS-ek snRNS-ek
lokalizci nukleolusz extranukleolris kromatin
-amanitin rzkenysg nincs nagyfok gyenge
Sejtmaggal rendelkez sejtekben az RNS-ek a kromatinban szintetizldnak, mkdsket, a fehrjk

szintzist viszont a citoplazmban ltjk el: a transzkripci s transzlci teht idben s trben elklntve
zajlik. Ez a mechanizmus a fehrjeszintzis RNS- s RNP-komponenseinek hatkony nukleocitoplazmatikus
transzportjt felttelezi. Szemben a prokariota mRNS-ekkel, az eukariota pre-mRNS-ek rendkvl bonyolult
rsi folyamatok eredmnyekppen vlnak mkdkpess. Az eukariota RNS-szintzis s -rs rszleteivel a
kvetkez fejezetek foglalkoznak.
Ajnlott irodalom
Chambon, P. (1975): Eukaryotic nuclear RNA polymerases. Annu. Rev. Biochem. 44, 613638.
USA, 251256, 263265.
McClure, W. (1985): Mechanism and control of transcription initiation in prokaryotes. Annu. Rev. Biochem.
54, 171204.
135
24. fejezet - 24. Transzkripci II.:
Riboszma-biogenezis eukariotkban
A sejt fehrjinek szintzise a citoplazma riboszminak felsznn trtnik. Aktv anyagcsert folytat eukariota
sejtek tbb milli riboszmt is tartalmazhatnak, s szmuk az interfzis alatt meg kell, hogy ktszerezdjn,
hogy az osztds sorn kpzd utdsejtek is rendelkezzenek a normlis mkdsket biztost transzlcis
kapacitssal. A riboszmk folyamatos termelsnek ezt a hatalmas feladatt a sejt legnagyobb RNS-tartalm
alkotrsze, a sejtmagvacska (nukleolusz) ltja el.
1. A nukleolusz
A sejtmagvacska az rRNS-szintzis, -rs s a riboszmk sszeszerelsnek organelluma, a sejtmag ersen
elektronszr, jellegzetes szerkezet, membrnnal nem hatrolt alkotrsze. A legtbb sejt egy nukleoluszt
tartalmaz, de szmuk nagyobb is lehet. (Extrm pldaknt a ktltek oocitja emlthet. Bennk az rRNS-
gnek nagyfok amplifikcija kvetkezik be: ezek a sejtek tbb szzezer rRNS-gnt tartalmazhatnak, melyek
tbb ezer nukleolusz formjban jelennek meg.)
A nukleoluszt eltr megjelens rgik alkotjk (24.1. bra). A hagyomnyos transzmisszis

elektronmikroszkpos felvtelen a legvilgosabb rgik felelnek meg a fibrillris centrumoknak. Ezeket a
sejtmagvacskt krlvev perinukleolris kromatinbl benyl, az rRNS-gneket tartalmaz kromatinhurkok
alkotjk. A nukleolris organiztor rgiknak is nevezett kpzdmnyek szli rszein szintetizlt pre-rRNS
molekulk fehrjkkel kapcsoldva alkotjk az ersen elektronszr fibrillris llomnyt. A nukleoluszban
lejtszd rsi folyamatok sorn preriboszmlis partikulumok kpzdnek, ezek alkotjk a granulris
llomnyt.
24.1. bra - 24.1. bra: A nukleolusz elektron mikroszkpos szerkezete
Emberi sejtekben a nukleolusz mintegy 200 rRNS-gnt tartalmaz, ezek a tz akrocentrikus kromoszma rvid
karjhoz kapcsold kromoszma-fggelkeken alkotnak tandem elhelyezkeds gnsorozatokat. A
sejtosztdst kveten a nukleolusz ebbl a tz nukleolris organiztor kzpontbl alakul jj.
2. Riboszma-biogenezis a nukleoluszban
2.1. Az rRNS-szintzis vizualizlsa
Az eukariota gnmkds elektronmikroszkpos megjelentsre a kromatinszleszts technikjt dolgoztk
ki. A vizsgland sejtszuszpenzit detergenst is tartalmaz, megfelel sszettel pufferrel kezelik. Ennek
hatsra a membrnok felolddnak, a kromatin fellazul, szacharzprnn keresztl elektronmikroszkpos gridre
centrifuglhat, majd fmrnykols utn vizsglhat. Az gy kszlt felvtelen a nukleolusz felsznn nagy
szmban figyelhetk meg karcsonyfaszer kpzdmnyek, melyek a mkd rRNS-gnek
elektronmikroszkpos megjelensi formi (24.2. bra).
24.2. bra - 24.2. bra: Aktvan trd rRNS transzkripcis egysg
136
24. Transzkripci II.: Riboszma-
biogenezis eukariotkban
A karcsonyfk rszletes vizsglatbl szmos kvetkeztetst vontak le az rRNS-szintzisre vonatkozan.

Egy karcsonyft egy rRNS transzkripcis egysg s a rla kpzd transzkriptumok alkotnak. A fa
cscsa az inicicis helynek, alapja a termincis pontnak, gai pedig a nvekv RNS-termkeknek felelnek
meg (24.2. bra). Minden g tvben szemcse lthat; a mkd RNS-polimerz I. Minden enzim egy
transzkriptumlncot szintetizl. Az RNS-polimerz molekulk a lehetsges legnagyobb srsggel zsfoldnak
egyms mellett, ami azt jelenti, hogy az rRNS-gn maximlis intenzitssal rdik t. A karcsonyfk a DNS-
molekula mentn bizonyos tvolsgban tandem mdon kvetik egymst: a kztk lv szakaszok az t nem rt
spacerek. (A spacer angol kifejezs, sszekt, sztvlaszt szakaszt jelent.) Valamennyi fa cscsa ugyanabba
az irnyba mutat, teht az egyes transzkripcis egysgeken bell ugyanaz a lnc szolgl templtknt, a szintzis
irnya azonos, azaz a gnek polaritsa megegyezik. Megfigyelhet az is, hogy a nvekv RNS-lncokon mr
msodlagosharmadlagos struktrk kezdenek kialakulni, fehrjk is ktdnek hozzjuk. A transzkripcival
prhuzamosan teht megkezddik a riboszmk rse s sszeszerelse is.
2.2. A riboszomlis gnek szerkezete

Az rRNS transzkripcis egysgek (24.3. bra) promtere a fehrjekdol gnektl eltr szekvencij, igen
ers promter. A transzkripcis egysg hrom rett rRNS-t, a 18S, 5.8S s 28S rRNS-t kdolja, elttk, kztk
s utnuk trt spacerek helyezkednek el. A gnsorozat trsa a nagymret 45S pre-rRNS-t eredmnyezi.
24.3. bra - 24.3. bra: Tandem rRNS-gnek
Az emls sejtek riboszminak negyedik RNS-komponense az 5S rRNS. Ennek gnjei a nukleoluszon kvl
helyezkednek el, nagyszm tandem ismtlds formjban. Az 5S rRNS-gneket az RNS-polimerz III rja t,
az 5S rRNS-molekulk rs nlkl, funkcikpes llapotban szintetizldnak s transzportldnak a
nukleoluszba.
2.3. SnoRNS-ek
137
Hasonlan a pre-mRNS-ek rshez (l. 26. fejezet), eukariota sejtekben a pre-rRNS rett rRNS-ekk
alaktsban alapvet szerepet jtszanak kismret RNS-molekulk, az snoRNSek (az angol small nucleolar
RNA kifejezsbl), fehrjkhez kttt, snoRNP-k formjban. A naszcens pre-rRNS-t nagyszm, klnbz
rgiihoz komplementer bzisprosodssal ktd snoRNP lepi el. Ezek egy rsze rsi hastsokat hajt vgre a
pre-rRNS-en, ms snoRNS-ek RNS-chaperonokknt mkdnek: elsegtik az rRNS-ek trszerkezetnek
kialakulst, fehrjk ktdst, nukleozidok mdosulst. Az emls rRNS-ekben nagy szmban trtnik ribz-
illetve bzis-metilci, sok uridin nukleozid pedig pszeudouridinn alakul t. (Az uridinban a bzis 1. N-atomja,
a pszeudouridinban viszont az 5. C-atom kapcsoldik a ribzhoz [l. 2.1. bra].) Ezek a mdosulsok
szksgesek az rRNS-ek normlis trszerkezetnek kialakulshoz, mkdshez. Az snoRNS-ek ltfontosak a
sejt szmra. Mivel nukleozidmodifikcik ms RNS-tpusokban is elfordulnak (pl. tRNS-ek, 7SL RNS),
lehetsges, hogy a nukleolusznak ezek rsi folyamataiban is van szerepe.
2.4. A riboszma kpzdsnek mechanizmusa

A nukleolris organiztor rgiba benyl DNS-hurkokon 45S pre-rRNS molekulk szintetizldnak (24.4.
bra). A transzkriptumokhoz mr szintzisk kzben snoRNS-ek, riboszomlis fehrjk s az RNS rsben
rszt vev enzimek (metilzok, nuklezok) kapcsoldnak. Nagymret, 80S szedimentcis llandj RNP-
komplex jn ltre, melyben vgbemennek az rett rRNS-eket kialakt rsi hastsok. A nukleoplazmbl a
sejtmagvacskba kerl 5S rRNS-ek beplsvel retlen 60S riboszma-alegysgek jnnek ltre, ezzel
prhuzamosan retlen 40S alegysgek is kpzdnek. Ezek a preriboszomlis partikulumok mg
mkdskptelenek, vgs rsk csak a citoplazmba rve trtnik meg, miutn aktv nukleocitoplazmatikus
transzporttal tprseldnek a maghrtyaprusokon. Ekkor alkalmass vlnak arra, hogy mRNS-hez kapcsoldva
fehrjeszintzist kezdjenek.
24.4. bra - 24.4. bra: A riboszma-biogenezis folyamata
Ajnlott irodalom
138
Brown, D. D.: The isolation of genes. Scientific American 1973/8, 2029.
288284, 374379.
Dundr, M., Misteli, T. (2001): Functional architecture in the nucleus. Biochem. J. 356, 297310.
Hidvgi E., Sfrny, G. (2003): A genom mkdse. A riboszma-RNS. (In A genom, szerk. Hidvgi E.,
Szphalom Knyvmhely, Budapest) 5970. o.
Kiss, T. (2002). Small nucleolar RNAs: An abundant group of noncoding RNAs with diverse cellular functions.
Cell 109, 145148.
Miller, O. L.: The visualization of genes in action. Scientific American 1973/3, 3442.
139
25. fejezet - 25. Transzkripci III.: Pre-
mRNS-szintzis, cap-kpzds s
poliadenilci
Mg prokariotkban a fehrjket kdol gnek transzkripcijnak termke mkdkpes mRNS, melyen mr
elongcija kzben megkezddik a polipeptidlnc szintzise (l. 23. fejezet), eukariota sejtekben az mRNS
prekurzorok (pre-mRNS-ek) szintzise, rse s nukleocitoplazmatikus transzportja is rendkvl bonyolult
folyamat. A primer transzkriptumok kpzdst, kt vgk poszttranszkripcis mdosulst (capkpzds,
illetve poliadenilci), bellk a gyakran nagymret nem kdol intronok eltvoltst (splicing) s
transzportjukat a magprusokon keresztl szmos fehrjealegysgbl felpl multiprotein komplexek vgzik.
A folyamatok komplexitst nveli, hogy jrszt a bonyolult szervezds kromatinllomnyban kell
vgbemennik. Az eukariota transzkripci is inicicis, elongcis s termincis lpsekbl (25.1. bra) ll.
Az rs mr a szintzis kzben megkezddik s poszttranszkripcionlisan fejezdik be.
25.1. bra - 25.1. bra: Eukariota fehrjekdol gnek transzkripcijnak lpsei
1. A pre-mRNS-szintzis inicicija
Eukariotkban az RNS-polimerz II (rviden pol II) ltal trt gnek promternek ltalnos szerkezetre
jellemz, hogy az inicicis komplex felplshez szksges mintegy 50 bzisprnyi rgin (n. core promter
elemeken) kvl nagyobb kiterjeds, a transzkripci kezdpontjtl tvolabb elhelyezked szablyoz rgit
140
25. Transzkripci III.: Pre-mRNS-
szintzis, cap-kpzds s
poliadenilci
(n. enhancer elemeket) is tartalmaznak (25.2. bra). A core promter feladata, hogy ltalnos transzkripcis
faktorokat s az RNS-polimerz II enzimet megktve biztostsa a gn alaptranszkripcijt. Szemben az ltalnos
transzkripcis faktorokkal, melyek valamennyi Pol II promteren foly iniciciban rszt vesznek, az enhancer
rgi elemeit gn-specifikus szablyoz transzkripcis faktorok ismerik fel s ktdskkel befolysoljk az
RNS-polimerz II inicicis aktivitst (ezekkel ksbb foglalkozunk).
25.2. bra - 25.2. bra: Az RNS-polimerz II promterek szerkezete
A core promterek fehrjekt helyei, elssorban a TATA-box s az inicitor (Inr) rgi szabjk meg a
promter erssgt s szvetspecifitst. A TATA-box a prokariota Pribnow-boxhoz hasonl, knnyen
denaturlhat rgi. A hozz kapcsold TATA-kt fehrje s egyb transzkripcis faktorok stabil RNS-
polimerz ktdst biztostanak. Az inicitor rgi a transzkripci kezdpontja krnykre lokalizld elem. A
mindkt szekvencit tartalmaz promterek (TATA+ Inr+) klnsen ersek, egyes vrusgnek (pl. HIV,
adenovrus) aktv trst biztostjk. A TATA+ Inr promterek is aktvak (pl. hiszton-, globin-gnek), a TATA-
boxot nem tartalmaz promterek (TATA Inr+, TATA Inr) viszont gyengbbek. TATA-boxon s az
inicitoron kvl a Pol II promterek egyb, az inicicis komplex kialakulsban szerepet jtsz fehrjekt
helyeket is tartalmazhatnak (25.2. bra).
Br az inicici folyamatban fajtl, st sejttpustl fggen is finom klnbsgek figyelhetk meg, egy tipikus
eukariota fehrjekdol gnen a folyamat a kvetkezkppen zajlik le (25.3. bra). A core promterhez
meghatrozott sorrendben ltalnos transzkripcis faktorok (pl. a TATA-kt fehrje) kapcsoldnak, ez
elfelttele az RNS-polimerz II ktdsnek. Az gy kialakult inicicis komplexhez egy tovbbi multiprotein
komplex, a meditor kapcsoldik. Nevt onnan kapta, hogy klnbz jeltviteli utak (l. ksbb)
vgllomsaknt kzvetti azok hatsait a transzkripcis appartusnak. A lert mdon felpl, mintegy 60
polipetidlncbl ll hatalmas transzkriptoszma (25.3. bra) RNS-szintetizl gpezetknt mkdik. Az RNS-
szintzis megindulsban klnleges szerepet jtszik az RNS-polimerz egyik alegysgnek C-terminlis
domnje (CTD). Ez a klnleges fehrjergi heptapeptidek tandem ismtldsbl ll, az inicicis
komplexben ersen rgzl a meditor komplexhez. Az egyik transzkripcis faktor fehrjekinz s helikz
aktivitssal is rendelkezik: foszforillja az RNS-polimerz II CTD-farkt, mely ezltal levlik a meditor
komplexrl s elindul a gn belseje fel. Ezzel egyidben a helikz sztcsavarja a templt kt lnct, kismret
transzkripcis buborkot hoz ltre, melyen megindulhat az RNS-szintzis.
25.3. bra - 25.3. bra: A pre-mRNS-szintzis inicicija
141
poliadenilci
2. Elongci
Az RNS-polimerz II foszforillt CTD-rgijhoz elongcis faktorok kapcsoldnak, az enzim elmozdul az
inicici helyrl (promter kirts) s foszfodiszter-ktsek szintzisvel megindul a lncnvekeds. A pol
IIelongcis komplex helikz aktivitsa biztostja a denaturlt rgi mozgst a gn termintornak irnyban. A
nveked RNS-lnc 3-vge bzisprosodssal kapcsoldik a templtlnchoz, mikzben az 5-vgen megindul
az RNS-rs folyamata.
3. Az 5-cap kpzdse
A pre-mRNS-rs idben els lpse az 5-vg mdosulsa, a capstruktra kpzdse. A prokariota RNS-
szintzishez hasonlan a transzkriptum kpzdse trifoszftvg kialakulsval indul, majd tbblpses reakci
eredmnyekppen egy szokatlan nukleotidszerkezet jn ltre a pre-mRNS 5-vgn (25.4. bra). Egy
foszfohidrolz enzim lehastja a trifoszftvg -helyzet foszftjt, majd guanililtranszferz hatsra GTP-bl
142
poliadenilci
szrmaz guanilmonofoszft kapcsoldik egy 5-5 trifoszfthdon keresztl a transzkriptum vghez. Vgl
metiltranszferzok metilljk az 5-cap nukleotidjait (25.5. bra). Az 5-cap szintzist vgz enzimek
ugyancsak az RNS-polimerz II CTD-farkhoz kapcsoldnak, gy a cap mr az elongci kezdeti szakaszban
elkszlhet a primer transzkriptum 5-vgn. Az 5-vgi szerkezet nevhez hven sapkaszeren vdi a
transzkriptumokat nuklezok hatstl s fontos szerepet jtszik a transzlci sorn a riboszma ktdsben is.
25.4. bra - 25.4. bra: Az 5-cap kpzdsnek reakcii
25.5. bra - 25.5. bra: A cap szerkezete
143
poliadenilci
4. Terminci s poliadenilci
A gn termintorhoz kzeledve az RNS-polimerz II tr egy poliadenilcis elemnek nevezett, specifikus
szekvencival (AAUAAA) rendelkez rgit. A transzkriptum ezen szakasza fontos fehrjekt hely: tbb
polipeptidlncbl ll komplex pl fel rajta, ennek egyik tagja endonuklez, mely a poliadenilcis elemtl
disztlisan elhastja a nveked RNS-lncot (25.6. bra). A pre-mRNS felszabadul, az RNS-polimerz pedig a
termintorig folytatja a transzkripcit, termke azonban 5-cap hinyban nuklezok ldozatul esik.
25.6. bra - 25.6. bra: Az eukariota pre-mRNS-ek 3-vgi rse
A 3-vg rst lebonyolt komplex egyik alkotrsze a poli(A)-polimerz: templttl fggetlenl mkd
nukleotid-transzferz, mely ATP-szubsztrt felhasznlsval 100250 nukleotidbl ll poli(A)-farkot
szintetizl a pre-mRNS 3-vgre. (Ez all csak a hiszton-mRNS-ek kivtelek: poli(A)-szekvencit nem
tartalmaznak.) A citoplazmban a poli(A)-farok rvidl, de teljes lebontsig stabilizja az mRNS-t, vdelmet
jelent nuklezok degradl hatsval szemben. A poli(A)-faroknak gyakorlati, metodikai jelentsge is van:
lehetsget ad poli(A)+ mRNS-ek egy lpsben trtn izollsra oligo(dT)-cellulz affinits kromatogrfival.
A mRNS-ek degradcijt egy 3 5 exonuklezokbl felpl

fehrjekomplex, a citoplazmatikus exoszma vgzi. Hasonl nuklezkomplex a sejtmagban is megtallhat: a
nukleris exoszma pre-rRNS-ek, snRNS-ek, snoRNS-ek rsben, illetve selejtes, hibsan mdostott mRNS-
darabok lebontsban jtszik szerepet.
Ajnlott irodalom
Butler, J. S. (2002): The yin and yang of the exosome. Trends Cell Biol. 12, 9096.
258263, 290292.
Halle, J. P., Meisterernst, M. (1996): Gene expression: increasing evidence for a transcriptosome. Trends
Genet. 12, 161163.
Keller, W. (1995): No end yet to messenger RNA 3 processing! Cell 81, 829832.
Kornberg, R.D. (2007): The molecular basis of eukaryotic transcription. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 104,
1295512961.
144
poliadenilci
Novina, C. D., Roy, A. L. (1996): Core promoters and transcriptional control. Trends Genet. 12, 351355.
145
26. fejezet - 26. Transzkripci IV.: Pre-
mRNS splicing eukariotkban
A molekulris biolgiai mdszereknek az 1970-es vekben lezajlott forradalma utat nyitott a gnszerkezet s
gnexpresszi rszletes tanulmnyozsa fel. Ezek a kutatsok 1977-ben nem vrt felfedezssel leptk meg a
tudomnyos vilgot: eukariota sejtekben a legtbb fehrjekdol gnben az rkletes informci nem
folytonosan troldik, hanem a kdol, mRNS-ben megjelen szakaszokat (exonokat), az mRNS-ekbl mr
hinyz, fehrjt gy nem kdol rgik (intronok) szaktjk meg. Az exonok s intronok egyetlen
transzkripcis egysget kpeznek: nagymret pre-mRNS molekulba rdnak t, majd abbl a splicing
folyamata tvoltja el az intron-szakaszokat s hozza ltre az rett mRNS-t (26.1. bra). (Az angol kifejezs az
exonok sszecsomzsra utal.)
26.1. bra - 26.1. bra: A fehrjekdol gnek diszkontinuus szerkezete s a pre-mRNS

splicing
1. A splicing jelentsge adenovrus mRNS-ek

kpzdsben
Az intronokat az adenovrusok fertzsi mechanizmusnak vizsglata sorn fedeztk fel. Ezek a vrusok
melyek termszetes gazdikban lgti hurutos megbetegedseket okoznak megfelel szvettenyszeti
sejtekben szaporodva nagy mennyisg vrusspecifikus mRNS s fehrje szintzist idzik el, ezrt kedvelt
modelljei a gnexpresszi vizsglatnak. Az adenovrusok genomja lineris, ketts lnc DNS. Korai rgija a
fertzs kezdetn rdik t s az ltala kdolt korai fehrjk szksgesek ms vrusgnek trshoz, a vrus-
DNS replikcijhoz. A ksi gnek expresszija a vruspartikulumok kapszid fehrjinek szintzist
eredmnyezi, az rett virionok kpzdst, vgs soron a fertztt sejt pusztulst okozza.
Hibridizcis vizsglatok kidertettk, hogy a mintegy 20 klnbz ksi mRNS mind ugyanarrl a
promterrl rdik t. Az rett, ksi mRNS-ek s a vrus-genom ltal alkotott hibrideket elektronmikroszkpos
mdszerekkel is megvizsgltk: a krrnykolssal nyert kpeken furcsa, hurokszer kpleteket figyeltek meg
(26.2. bra). Ezeket a hurkokat olyan DNS-szakaszok alkotjk, amelyek a transzkripcis egysgen bell
helyezkednek el, de az ltala kdolt rgik az mRNS-bl mr hinyoznak, azzal hibridizlni nem kpesek. A
hurkok kztti RNS-DNS hibridek az exonoknak felelnek meg. Az mRNS-ek rszletes analzise kidertette,
hogy valamennyi ksi adenovrus-mRNS ngy exon sszekapcsolsval jn ltre. Az mRNS-ek 5-vge hrom
rvid leader-szekvencia sszeillesztsbl keletkezik. Ezek az sszes ksi adenovrus mRNS-ben azonos 5-
vgi nem kdol rgit hoznak ltre, amely rendkvl hatkony transzlci-inicicit biztost, elsegtve a vrus-
partikulumok fehrjinek kpzst (a sejt sajt fehrji szintzisnek rovsra). A negyedik, nagyobb mret
146
26. Transzkripci IV.: Pre-mRNS
splicing eukariotkban
exon alkotja az mRNS 3-vgi rszt; ez eltr az egyes mRNS-ekben s a fehrjekdol rgit tartalmazza. (Az
adenovrus ksi mRNS-ek esetben ezt az exont body-szekvencinak nevezik.)
26.2. bra - 26.2. bra: Intronok azonostsa RNS-DNS hibridek elektronmikroszkpos

vizsglatval. A. A hibridek elektronmikroszkpos vizsglata alapjn kszlt sms
rajz. B. A vrus-DNS trkpe az exon- s intron-rgikkal
Az adenovrus ksi transzkripcis egysgrl egyetlen hossz primer transzkriptum kpzdik, ennek rse hoz
ltre klnbz mRNS-eket. A hszfle mRNS kpzst ugyanarrl a transzkripcis egysgrl kt, egymstl
fggetlen mechanizmus biztostja (26.3. bra). (I) A ksi gnrgi t helyen tartalmaz poliadenilcis elemet
(L1L5 helyek a 26.3. brn); a nveked RNS-lnc ezek brmelyiknl elhasadhat, ugyanazon a transzkripcis
egysgen teht t klnbz mret pre-mRNS kpzdhet. (II) A splicing-mechanizmus az intron/body-hatron
tbb 3-splicing-helyet is hasznlhat. Ezen alternatv splicing eredmnyekppen az egyes pre-mRNS-ekbl 24,
eltr mter body-szekvencikat tartalmaz rett mRNS kpzdhet. A lert mechanizmusok lehetv teszik azt,
hogy viszonylag rvid DNS-szakaszok tbb polipeptidlncot is kdolhassanak (komplex transzkripcis
egysgek), ami nyilvnvalan elnys a kismret genommal rendelkez vrusok szmra. (Az egyszer
transzkripcis egysgek egyetlen fehrjt kdolnak. Az alternatv splicing egybknt emberi sejtekben is nagy
jelentsg. A jelensggel rszletesebben a 31. fejezet foglalkozik.)
147
26.3. bra - 26.3. bra: Az adenovrus ksi gn-rgijn kpzd pre-mRNS-ek s az

alternatv splicing termkei. (Az bra csak a legrvidebb pre-mRNS-bl kpzd rett
mRNS-eket mutatja.)
2. A splicing mechanizmusa
Az intronok eltvoltsa kt lpsben zajlik (26.4. bra). Elszr az 5-splicing-helyen hasts trtnik s az
intron 5-vge az intron belsejben lev A-nukleotid 2-OH csoportjhoz foszftszterktssel kapcsoldva
elgazst, lasszszer szerkezetet hoz ltre. Ezt kveti a 3-splicing-hely elhastsa s az exonok
sszekapcsolsa.
26.4. bra - 26.4. bra: A pre-mRNS splicing lpsei
148
Ezek a ltszlag egyszer reakcik valjban igen bonyolult folyamat formjban zajlanak le. A splicing-
mechanizmusnak ugyanis kt rendkvl nehz problmval kell megbirkznia. A hastsokat hajszlpontosan
kell vgrehajtani, mert egyetlen nukleotid kiesse vagy felesleges nukleotid becsempszse az mRNS-be
teljesen abnormlis aminosavsorrend fehrje kpzdst eredmnyezn. Msrszt viszont az exonokat fizikai
kzelsgbe kell hozni egymssal, hogy a ligls vgbemehessen. Figyelembe vve, hogy egyes intronok tbb
tzezer nukleotidbl is llhatnak, ez egyltaln nem knny feladat.
A megoldst hatalmas mret komplexek, spliceoszmk biztostjk. A spliceoszmk a pre-mRNS-en plnek

fel, uracilban gazdag, kismret snRNS-ekbl s fehrjkbl llnak. Az snRNP-komplexekben a katalitikus
funkcikat a ribozimekknt mkd kis RNS-molekulk ltjk el. (A splicing specilis eseteiben [pl. egyes
mitokondrilis, kloroplasztisz RNS-ek, egysejtek pre-rRNS-einek rse sorn] az intronok eltvoltst maguk
az RNS-ek vgzik, fehrjk kzremkdse nlkl. Az auto-splicing felfedezsvel azonostottk az els
ribozimet.) Az snRNS-ek clszekvenciikhoz komplementer bzisprosodssal kapcsoldnak. A pre-mRNS-ek
intronjaiban hrom kitntetett felismerhelyet rtak le. Az 5-splicing-hely konszenzus-szekvencijban az
intron mindig GU-val kezddik, ezt a rgit ismeri fel az U1-snRNS (26.5. bra, 1. lps). A lassz elgazsi
rgijhoz az U2-snRNS ktdik bzisprosodssal (2. lps). Az intron 3-vgi konszenzus szekvencija AG-
nukleotid prossal vgzdik. A pre-mRNS-U1-U2 snRNP-komplexhez ktdnek ezutn az U4/U6- s U5-
snRNP partikulumok, kialaktva a spliceoszmt (3. lps), melyben a hastsi-liglsi helyek egymshoz
viszonytva optimlis pozciban rendezdnek el. Megtrtnik az intron kihastsa, az exonok sszekapcsolsa
(4. s 5. lps) s a felszabadul snRNP-rszecskk j spliceoszmk felptsbe kezdhetnek. Az intronlassz
gyorsan degradldik (6. lps).
26.5. bra - 26.5. bra: A spliceoszma felplse s a splicing mechanizmusa
149
Mint a fentiekbl kiderlt, a splicing hastsi s liglsi lpseit ribozimek hajtjk vgre, fehrjefaktorok is
fontos szerepet jtszanak azonban benne. Ezek a splicing faktorok szksgesek a splicing-helyek pontos
kivlasztshoz, a spliceoszma sszeszerelshez, illetve a transzkripci s a splicing folyamatnak
sszehangolshoz. Az RNS-polimerz II CTD-rgijhoz ktd splicing faktorok lehetv teszik, hogy az
intronok eltvoltsa mr a pre-mRNS szintzise sorn, a kvnt sorrendben megtrtnjen.
3. A splicing rendellenessgei
A lert bonyolult folyamatba cssz hibknak slyos kvetkezmnyei vannak: az abnormlis splicing-termk
kptelen mkdkpes fehrje szintzist irnytani, esetleg ki sem jut a sejtmagbl. A systems lupus
erythematosus (SLE) autoimmun betegsg: egyes eseteiben antitestek kpzdnek az snRNP-partikulumok
bizonyos fehrjivel szemben, gy klnbz szvetek sejtjeiben gtolt a pre-mRNS-ek splicingja, slyos,
esetenknt hallos generalizlt krkphez vezetve. (SLE-ben szenved betegek anti-snRNP-t tartalmaz
szrumt egybknt metodikai eszkzknt hasznltk a splicing pontos mechanizmusnak tisztzsra.)
Az intronok konszenzus-szekvenciiban bekvetkez pontmutcik olyan rkld betegsgeket okozhatnak,

melyekben egy meghatrozott gn expresszija gtolt. (Becslsek szerint az emberi rkld betegsgek
mintegy 15-20%-t aberrns splicingot elidz mutcik okozzk!) Ennek a mechanizmusnak jl ismert pldi
a thalassaemia bizonyos tpusai: a globingnek intronjaiban bekvetkez mutci abnormlis splicingot, s az
rintett globinlnc szintzisnek cskkenst eredmnyezi.
150
4. RNS-editing
Br nem tartozik a pre-mRNS splicing tmjhoz, emltsre mlt az RNS-szerkeszts (angolul editing)
jelensge is: ennek sorn az RNS-rsben rszt vev enzimek egy-egy nukleotidot megvltoztatnak,
hozzadnak, vagy elvesznek az RNS-molekulkbl. (Ez a tevkenysg a sajttermkek olvasszerkesztinek
munkjhoz hasonlt, innen szrmazik az elnevezs.)
Emls sejtekben az RNS-szerkeszts leggyakrabban CU talaktst jelent dezamincival (l. 2.1. bra). Ennek
egy rdekes, szvetspecifikus pldja az apolipoprotein-B fehrje mRNS-nek szerkesztse (26.6. bra).
26.6. bra - 26.6. bra: RNS-szerkeszts. A. Apo-B100 fehrje szintzise

szerkesztetlen mRNS-rl. B. Apo-B48 fehrje szintzise szerkesztett mRNS-rl
Mjsejtekben a szerkesztetlen mRNS-en nagymret fehrje (Apo-B100) kpzdik, ez szekretldik a

vrplazmba s ott a lipidek szlltsban jtszik szerepet (l. 35. fejezet). A vkonybl-nylkahrtya sejtjeiben
viszont a kdol rgi egy citozinja uracill alakul t s egy transzlcis termincis kodont hoz ltre (l. 28.
fejezet). A szerkesztett mRNS-en kpzd csonka fehrje (Apo-B48) a lipidfelszvst segti el a
vkonyblbl.
Ajnlott irodalom
de Ahmeida, A., Carmo-Fonseca, M. (2008): The CTD role in cotranscriptional RNA processing and
surveillance. FEBS Letters 582, 19711976.
Chambon, P.: Split genes. Scientific American 1981/5, 4859.
292301.
Molnr J. (2003): A genom mkdse. A messenger-RNS. (In A genom, szerk. Hidvgi E., Szphalom
Knyvmhely, Budapest) 7183. o.
Sharp, P. A. (1994): Split genes and RNA splicing. Cell 77, 805815.
151
Steitz, J. A.: Snurps. Scientific American 1988/6, 3641.
152
27. fejezet - 27. Transzlci I.: mRNS-
ek, tRNS-ek, riboszmk szerepe a
fehrjeszintzisben
A molekulris biolgia centrlis dogmjnak rtelmben a gnexpresszi els lpsben (transzkripci, l. 11.1.
bra), a DNS bzissorrendjben rgztett genetikai informci RNS-be rdik t, majd a msodik lpsben
annak irnytsval specifikus aminosavsorrend fehrje szintetizldik (transzlci). A kt folyamat latin neve
pontosan rzkelteti a kzttk lev klnbsget: mg a transzkripci sorn az informci szvegt ngybets
ABC (a DNS bzisai) szvegbl hasonlan ngy bett hasznl szvegbe (az RNS bzisai) kell trni, a
transzlci a nukleinsavak ngybets kdrendszert fordtja le a fehrjk hszbets (azaz hsz aminosavbl
ll) nyelvre. rthet teht, hogy a transzlci bonyolult folyamat, specilis mechanizmusokat kvn a
fehrjeszintetizl appartustl.
1. A fehrjeszintzis templtja az mRNS

Az 1950-es vekben mr ismert volt az a tny, hogy a fehrjeszintzis a riboszmk felsznn trtnik. Ennek
alapjn kzenfekvnek ltszott a felttelezs, hogy a fehrjk aminosavsorrendjt valamilyen mdon a
riboszmkban jelenlev rRNS-ek hatrozzk meg. A hipotzis cfolatt T2-bakteriofgokkal vgzett ksrletek
szolgltattk. Ha E. coli sejtekben a fgfertzssel egyidben az jonnan kpzdtt RNS-eket radioaktvan
jelltk, azt tapasztaltk, hogy a fertzs azon szakaszban, amelyben a fgfehrjk mr nagy mennyisgben
szintetizldtak, a riboszmk mg nem voltak radioaktvak. A riboszmk teht mr a fgfertzst megelzen
jelen voltak a baktriumokban, rRNS-k fgspecifikus informcit nem hordozhat. Nem sokkal ksbb azutn
kiderlt, hogy a riboszmkhoz jonnan szintetizlt RNS-ek ktdnek, ezeket a transzlci templtjaiknt
azonostottk s messenger-RNS-eknek (mRNS-eknek) neveztk el.
2. A tRNS-ek adapterszerepe
A fehrjeszintzis mechanizmusval kapcsolatos msik korai tveszme szerint az RNS a templtfunkcit gy
ltn el, hogy az aminosavak kzvetlenl ktdnnek a szintzist irnyt RNS-hez, majd kztk peptidktsek
lteslnnek. Kiderlt azonban, hogy az aminosavak nem mutatnak specifikus affinitst nukleinsavbzisok irnt,
az apolros aminosavak pedig egyltaln nem tudnak nukleinsavhoz kapcsoldni. Kzvettkre, adapterekre
van teht szksg, amelyek az aminosavakkal s az mRNS megfelel rgijval is kpesek specifikus ktst
kialaktani. Ezt az adapterfunkcit a transzfer-RNS-ek (tRNS-ek) ltjk el.
2.1. A tRNS-ek szintzise s rse

A tRNS-eket az RNS-polimerz III pre-tRNS-ek formjban szintetizlja; ezek 5- s 3-vgkn is rvid,
eltvoltand rgikat tartalmaznak. Az rett tRNS 5-vgt ltrehoz ribonukleoprotein, az RNz P f
nevezetessge, hogy RNS-komponense egyike az elszr felfedezett ribozimeknek. A tRNS 3-vgt
fehrjetermszet endonuklez alaktja ki, melyhez CCA trinukleotid szintetizldik. A tRNS nukleotidjainak
kb. 10 szzalka kmiai mdosulson esik t.
2.2. A tRNS szerkezete

A tRNS-ek kismret (kb. 80 nukleotid, 4S szedimentcis lland), a citoszlban oldott llapotban jelenlev
RNS-molekulk. Adapterszerepre azrt kpesek, mert kovalens ktssel specifikus aminosavat tudnak
megktni, bzisprosodssal pedig az mRNS megfelel szakaszhoz kapcsoldni. A tRNS-ek szokatlanul magas
arnyban tartalmaznak mdosult nukleotidokat, melyek hozzjrulnak a trszerkezet kialaktshoz. A tRNS-ek
msodlagos szerkezett a lherelevl-modell rja le (27.1.A bra). A lhere szrt a molekula 5- s 3vge
kztti bzisprosods hozza ltre. Az aminosavkt hely a 3-vgi CCA-szekvencia: az aminosav a terminlis
A-nukleotid ribzval alkot kovalens ktst (l. ksbb). A TYCG-hurok nevt a benne lev konzervlt, mdosult
nukleozidokat (T = ribotimidin, Y = pszeudouridin)
tartalmaz rgirl kapta; ez a tRNS riboszma-kthelye. Az antikodonhurok az mRNS-kthely:
komplementer bzisprosodst alakt ki az mRNS megfelel kodonjval. A D-hurok dihidrouridint tartalmaz;
153
27. Transzlci I.: mRNS-ek, tRNS-
ek, riboszmk szerepe a
fehrjeszintzisben
ezzel ktdik a tRNS az aminoacil-tRNS szintetz enzimhez (l. ksbb). A tRNS-ek harmadlagos szerkezete
kompakt, L-alakot vesz fel; a szrak kt vgt az aminosavkt kar s az antikodonhurok alkotja (27.1.B bra).
27.1. bra - 27.1. bra: A tRNS-ek msodlagos (A.) s harmadlagos (B.) szerkezete
2.3. Aminoacil-tRNS-ek szintzise

Az aminosavak tRNS-hez kapcsolst az aminoacil-tRNS szintetzok vgzik. Minden aminosavnak sajt
enzime van, amely az aminosavnak megfelel tRNS-t (vagy tRNS-eket) is felismeri. Az enzimreakci kt
lpsben zajlik le (27.2. bra). Az aminosav-aktivls sorn az aminosav az enzim felsznn ATP-vel reagl,
aminoacil-adenilt kpzdik pirofoszft felszabadulsa kzben. Ezt kveti az aminoacil-tRNS komplex
szintzise: az aminosav a neki megfelel tRNS 3-vghez kapcsoldik a karboxilcsoport ltal ltrehozott
szterktssel. A transzlci pontossga szempontjbl az aminoacil-tRNS szintetzok mkdse dnt
fontossg. Ha ugyanis egy aminoacil-tRNS komplexben utlag kmiai ton talaktjk az aminosavat, az nem
a sajt, hanem az eredeti aminosav helyn pl be a fehrjbe. Az aminoacil-tRNS szintetz enzimek hibs
mkdse esetn teht cskken a fehrjeszintzis hitelessge: abnormlis aminosavsorrend polipeptidek
kpzdnek.
27.2. bra - 27.2. bra: Az aminoacil-tRNS szintetz reakci lpsei. A. aminosav-

aktivls; B. aminoacil-tRNS szintzis
154
fehrjeszintzisben
3. A riboszma szerepe a transzlciban

A fehrjeszintzis a riboszmk felsznn folyik. A riboszmk rRNS-molekulkbl s nagyszm fehrjbl
felpl RNP-partikulumok. Prokariotkban s eukariotkban is kis s nagy alegysg alkotja ket. Valamennyi
rRNS-bl s a legtbb fehrjbl egyetlen molekult tartalmaznak. (A 27.3. bra foglalja ssze az E. coli s
emls riboszmk mretre s sszettelre vonatkoz legfontosabb adatokat.) A riboszma-alegysgek pro- s
eukariotkban is kln-kln kpzdnek, egymssal csak a transzlci idejre kapcsoldnak ssze.
27.3. bra - 27.3. bra: A riboszmk felptse
A riboszmkrl sokig azt hittk, hogy rRNS-komponenseik csak az alegysgek vzt alkotjk, a riboszma
specilis transzlcis funkciit a fehrjk vgzik. A mai llspont ennek a fordtottja: az rRNS-ek a fszereplk,
a fehrjknek kisegt szerepk van. A tRNS-ek megktse, a riboszomlis alegysgek kapcsoldsa,
baktriumokban az mRNS ktse is RNS-ek komplementer bzisprosodsval trtnik. A nagy alegysg
rRNS-e ribozimknt mkdve mg a peptidkts kialaktst is katalizlja. Mai feltevsek szerint az let
keletkezse sorn a primitv riboszmk csak RNS-t tartalmaztak, fehrjket nem. A fentiek altmasztjk ezt az
elmletet.
155
fehrjeszintzisben
4. A transzlci vizsglmdszerei
4.1. In vitro mdszerek
Az els sejtmentes fehrjeszintetizl rendszer kidolgozsa Marshall Nirenberg nevhez fzdik. A
Nirenberg-rendszerE. coli sejtkivonatot (benne riboszmkat, mRNS-eket, tRNS-eket, enzimeket,
fehrjefaktorokat), a hsz aminosavat, ATP-t, GTP-t, a szksges ionokat tartalmazza. Ha az egyik aminosav
radioaktv izotppal jellt, a korbban mr ismertetett filterprecipitcis mdszerrel mrhet a rendszer
transzlcis aktivitsa (l. 20. fejezet). A kpzdtt fehrjetermkek poliakrilamid glelektroforzist kvet
autoradiogrfival rszletesen tanulmnyozhatk.
4.2. In vivo mdszerek

A transzlci poliszmk felsznn folyik. Izollt poliszmk elektronmikroszkpos vagy hipopiknikus
grdiens centrifuglssal (27.4. bra) vgzett vizsglatbl kvetkeztetsek vonhatk le a sejt fehrjeszintetikus
sttusra: poliszmk csak transzlcisan aktv sejtekben detektlhatk (l. 29. fejezet). Radioaktv aminosavval
vgzett jellst kveten fny- vagy elektronmikroszkpos autoradiogrfival detektlhatk az jonnan
szintetizlt fehrjk. A jellt fehrjket izollva poliakrilamid glelektroforzissel vgezhetnk ttekint jelleg
vizsglatot, specifikus fehrje szintzist pedig immunprecipitcival (l. 13. fejezet) tanulmnyozhatjuk.
27.4. bra - 27.4. bra: Poliszmk szacharz grdiens szedimentogrammja. Az a nyllal

jellt cscs riboszma monomreknek, a b s c cscsok pedig hrom, illetve t
riboszmt tartalmaz poliszmknak felelnek meg
Ajnlott irodalom
309317.
Holley, R. W.: The nucleotide sequence of a nucleic acid. Scientific American 1966/2, 3039
Hurwitz, J., Furth, J. J.: Messenger RNA. Scientific American 1962/2, 4149.
Nomura, M.: Ribosomes. Scientific American 1969/10, 2835.
Rich, A., Kim, S. H.: The theree-dimensional structure of transfer RNA. Scientific American 1978/1, 5262.
Saks, M. E., Sampson, J. R., Abelson, J. N. (1994): The transfer RNA identity problem: A search for rules.
Science 263, 191197.
The Nobel Assembly at Karolinska Institute (2009): Press release. The Nobel prize in chemistry 2009.
http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laurates/2009/press.html.
156
28. fejezet - 28. Transzlci II.: A
genetikai kd
Az rkletes informci nukleinsavakrl fehrjkre trtn tvitelnek f krdse: hogyan hatroz meg ngyfle
nukleotid hszfle aminosavat? A kombinatorika szablyai szerint egyes bzisok (ngyfle lehetsg) vagy
bziskettsk (42 = 16-fle varici) nem elgsgesek a hsz aminosav kdolshoz. Annak igazolsa, hogy a
genetikai kd bzishrmasokbl ll (43 = 64-fle triplet), illetve annak kidertse, hogy az egyes trinukleotidok
melyik aminosavat kdoljk, elssorban Nirenberg laboratriumnak ttr munkssgbl szrmazik.
1. A kdsztr fellltsa
1.1. Triplet kd
Annak igazolsa, hogy az aminosavakat bzishrmasok hatrozzk meg, T4 bakteriofggal vgzett klasszikus
genetikai ksrletekkel trtnt (28.1. bra).
28.1. bra - 28.1.: bra: A triplet kdot igazol genetikai ksrlet elve. T4 bakteriofg
DNS-nek egyik gnjbe egy (B.), kt (C.) vagy hrom (D.) extra nukleotidot vittek be.
Az brk a kdolt mRNS egy szakaszt, illetve az azoknak megfelel aminosav
sorrendet mutatjk. (A. vad-tpus gn). A mutci eredmnyeknt megjelen
nukleotidokat kvr betk, a megvltozott aminosavakat satrozs jellik
157
28. Transzlci II.: A genetikai kd
Ha a fg egyik gnjbe 1 vagy 2 extra nukleotidot vittek be, a kdolt fehrje inaktvv vlt, ha azonban 3
nukleotidot, a fehrje ltalban aktv maradt. A ksrlet azt valsznsti, hogy a genetikai informci leolvassa
egy meghatrozott ponton kezddik s nukleotidok hrmas csoportjaiban folyik. Egy vagy kt nukleotid bevitele
(vagy delcija) megzavarja ezt a leolvassi temet (angolul reading frame), a mutcitl disztlis
aminosavsorrend teljesen megvltozik. Hrom nukleotid bevitele (vagy eltvoltsa) viszont csak egy aminosav
megjelenst (vagy kiesst) okozza, attl disztlisan az aminosavsorrend normlis maradna, a vltozs a kdolt
fehrje aktivitst nem felttlenl befolysolja. A ksrlet a genetikai kd triplet-jellegt s folyamatossgt (l.
ksbb) is valsznsti. A nukleotid-addci vagy -delci, ha a kdleolvass temt megbolygatja, frame-shift
mutcit eredmnyez.
1.2. Szintetikus polinukleotidok in vitro transzlcija

A kdsztr els szavait szolgltat ksrletekben olyan sejtmentes fehrjeszintetizl rendszert (l. 27.
fejezet) alkalmaztak, melyben a poliszmk mRNS-eit lebontottk, majd polinukleotid-foszforilz enzimmel
ksztett szintetikus RNS-sel helyettestettk. (A polinukleotid-foszforilz ribonukleozid-difoszftokbl
templttl fggetlenl szintetizl polinukleotidlncot, melynek nukleotidsszettele csak a reakcielegy
nukleozid-difoszft tartalmtl fgg.) Radioaktv aminosavak alkalmazsval, a filterprecipitci mdszervel
158
meghatrozhat, hogy az egyes templtok milyen aminosavak polipeptidlncokba plst irnythatjk.

Monoton polinukleotid templtok egyetlen aminosavfajta beplst idzik el (pl. a poli(U) templton poli-
fenilalanin szintetizldik). Ismtld egysgekbl ll kopolimerek (pl. ACACAC, ACUACUACU...) tbbfle
aminosav fehrjbe plst kdolhatjk. Vletlenszer szekvencij kevert kopolimerekben a polinukleotid
szintzise sorn alkalmazott nukleotidarnyokbl megllapthat az egyes tripletkombincik relatv
gyakorisga. (Pldul, ha a poli(AC) templt ellltsakor az ADP-koncentrci nagyobb volt mint a CDP-
koncentrci, a polinukleotid-lncban a tripletek relatv gyakorisga a kvetkez lesz: AAA > ACA = AAC =
CAA > ACC = CAC = CCA > CCC.) A bepl aminosavak arnybl kvetkeztetni lehet a kdszavak
rtelmre. A szintetikus polinukleotidokkal szmos triplet jelentst tisztztk, a kdsztr teljess ttelhez
azonban hatkonyabb mdszer kidolgozsra volt szksg.
1.3. Aminoacil-tRNS-ek ktdsnek vizsglata

Nirenbergk megfigyeltk, hogy ha az in vitro fehrjeszintetizl rendszerbl kihagyjk a GTP-t, az aminoacil-
tRNS-ek mRNS-hez ktdse megtrtnik, a peptidktsek szintzise azonban elmarad. A ktds a
riboszmk felsznn zajlik. Ha a reakci-elegyet nitrocellulz-filterre viszik fel, a riboszmk rtapadnak a
membrnra, minden ms anyag azonban lemoshat. A filteren teht csak az az aminoacil-tRNS marad fenn,
amelynek megfelel mRNS-szakaszt a reakcielegy tartalmazta (28.2. bra). Ha az aminosav jellt, filterhez
ktdse egyszer radioaktivits-mrssel kimutathat. Ha a vizsglatok sorn UUU trinukleotidot hasznltak
templtknt, fenilalanin ktdtt. UU dinukleotid ktdst nem idzett el, hromnl tbb U-nukleotid pedig
nem fokozta a filterhez kttt radioaktivitst. Az UUU trinukleotid teht szksges s elgsges a fenilalanin
meghatrozshoz, a genetikai kdot valban tripletek alkotjk. A ktdsi ksrletekkel mind a 64 lehetsges
tripletkombincit teszteltk s fellltottk a teljes kdsztrat (28.1. tblzat).
28.2. bra - 28.2. bra: A Nirenberg-fle ktdsi analzis elve
28.3. bra - 28.1. tblzat: A genetikai kdsztr
159
2. A genetikai kd jellemzi
Az rkletes informci fehrjkben trtn expresszijrt felels genetikai kdot teht tripletek,
bzishrmasok alkotjk: az aminosavakat az mRNS nukleotidhrmasai, kodonjai hatrozzk meg. Ngy bzis
kombincii 64 tripletet eredmnyeznek (28.1. tblzat), kzlk 61 rtelmes kodon, azaz valban aminosavat
kdol; 3 bzishrmas (UAA, UAG, UGA) tRNS-t vagyis aminosavat nem kpes megktni, a fehrjeszintzis
folyamatban termincis szignlknt, stopkodonknt mkdik (l. 29. fejezet).
A 61 rtelmes triplet/20 aminosav arnybl az is nyilvnval, hogy egy aminosavat tbb bzishrmas is
kdolhat; a genetikai kd teht redundns, degenerlt. Az ugyanazon aminosavakat meghatroz tripleteket
szinonim kodonoknak nevezzk. A degenerci nem vletlenszer: az azonos aminosavat kdol tripletek els
kt nukleotidja ltalban azonos, a klnbsg a harmadik bzisnl jelentkezik. A jelensg molekulris alapjt az
kpezi, hogy a kodon-antikodon kapcsolds sorn a kodon 3. s az antikodon 1. nukleotidja kztt -
trszerkezeti okok miatt - nem komplementer bzisprosods is ltrejhet (28.3. bra). Az els kt bzispr teht
stabil, a harmadik azonban ltyg: innen szrmazik a jelensg angol elnevezse: wobble. Ha pldul a kodon
wobble-pozcijban G van, az antikodon megfelel helyn C vagy U is lehet, s fordtva: az antikodon G
nukleotidja a kodonban C-vel s U-val is bzisprt alkothat. A wobble kvetkezmnye, hogy a sejt 61-nl
kevesebb tRNS-sel is hatkony s hiteles transzlcit kpes vgezni (E. coli baktriumokban kb. 40 klnbz
tRNS szlltja a 20 aminosavat).
28.4. bra - 28.3. bra: A kodon-antikodon kapcsolat wobble-pozcija
160
A degenerlt jelleg nem befolysolja a fehrjbe ptend aminosavak kivlasztsnak pontossgt. Egy
bizonyos kodon ugyanis mindig ugyanazt az aminosavat hatrozza meg. A genetikai kd teht egyrtelm.
Az mRNS-ben a kodonok folyamatosan kvetik egymst: minden nukleotid csak egy kodon alkotrsze, a
szomszdos tripletek kztt pedig nem maradhat ki egyetlen bzis sem. A kd teht tfeds- s vesszmentes.
Az mRNS-ek fehrjekdol rgija inicicis kodonnal kezddik, aminosavakat kdol tripletekkel folytatdik,
majd stopkodonnal vgzdik. A kdol rgi angol elnevezse: open reading frame (ORF). A prokariota
mRNS-ek gyakran tbb ORF-et is tartalmaznak, policisztronosak; az eukariota mRNS-ek viszont ltalban
egyetlen kdol szakaszt hordoznak, monocisztronosak (28.4. bra).
28.5. bra - 28.4. bra: Policisztronos prokariota mRNS (A.) s monocisztronos

eukariota mRNS (B.) szerkezete (I = inicicis kodon, S = stopkodon, ORF = open
reading frame)
A genetikai kd az evolci sorn ersen konzervldott: egy adott kodon ugyanazt az aminosavat hatrozza
meg minden l szervezetben. Ez all vannak kivtelek: a mitokondriumok genetikai appartusa ezek kz
tartozik. Ugyanazon sejtben nhny triplet a mitokondriumban ms aminosavat kdol mint a citoplazmban. A
jelensg alapjt a mitokondrilis DNS magas mutcis rtja, szokatlanul gyors evolcija okozza (l. 38.
fejezet). Ettl eltekintve a genetikai kd ltalnos rvny.
Ajnlott irodalom
113115.
Crick, F. H. C.: The genetic code. Scientific American 1962/10, 6674.
Crick, F. H. C.: The genetic code: III. Scientific American 1966/10, 5562.
Freeland, S. J., Hurst, L.D.: Evolution encoded. Scientific American 2004/4, 5663.
161
Nirenberg, M. W.: The genetic code: II. Scientific American 1963/3, 8094.
162
29. fejezet - 29. TRANSZLCI III.: A
fehrjeszintzis mechanizmusa
A fehrjeszintzis egy mRNS-molekulbl s a hozz kapcsold riboszmkbl ll poliszmn trtnik. A
transzlci prokariotkban s eukariotkban is hrom f lpsbl ll: inicicibl, elongcibl, s
termincibl.
1. Transzlci prokariotkban
1.1. Inicici
A fehrjeszintzis els lpse sorn az mRNS 5-vgi rgijn a riboszma-alegysgek s az els aminoacil-
tRNS ktdse eredmnyekppen inicicis komplex jn ltre. A folyamat a citoszlban jelenlev inicicis
faktorok kzremkdst ignyli. Ezek a fehrjk szabad 30S riboszma-alegysghez ktdve elsegtik annak
kapcsoldst a formilmetionil-tRNS-hez s az mRNS-hez (29.1. bra). A tRNS az inicicis kodonokhoz (AUG
vagy GUG) ktdik, az mRNS-30S alegysgkapcsolatot pedig a 16S rRNS s az mRNS 5- nem kdol
rgijban tallhat n. Shine-Dalgarno szekvencia kztti komplementer bzisprosods biztostja. A lert
mdon kialakul kpzdmnyt 30S inicicis komplexnek a kis alegysg azon rgijt pedig, amelyen a kodon-
antikodon kapcsolatok ltrejnnek, dekdol kzpontnak nevezzk. Ezt kveten megktdik az 50S
riboszma-alegysg is, az inicicis faktorok pedig felszabadulnak. Az inicici vgeredmnye a 70S inicicis
komplex, amelyben a riboszma-monomer kt f kthelye, a P-hely (peptidil-tRNS-kthely) s az A-hely
(aminoacil-tRNS-kthely) kzl a formilmetionil-tRNS az elbbit foglalja el, az A-hely pedig e pillanatban
res. A formilmetionin klnleges aminosav: aminocsoportjhoz aldehidcsoport kapcsoldik, gy az
peptidktst nem tud ltesteni ms aminosavakkal, csak a fehrjelnc N-terminlist alkothatja. A
lncnvekeds sorn a formilcsoport, de gyakran az egsz aminosav is lehasad a peptidlncrl.
29.1. bra - 29.1. bra: A prokariota transzlci inicicija. A: inicicis faktorok

ktdse a kis riboszma alegysghez; B: a 30S inicicis komplex ltrejtte; C: a 70S
inicicis komplex kialakulsa
163
29. TRANSZLCI III.: A
1.2. Elongci
164
A lncnvekeds a msodik aminoacil-tRNS komplexnek a riboszma A-helyhez ktdsvel kezddik

(29.2.bra). Ehhez specilis elongcis faktorra, az EF-Tu-ra van szksg. Az EF-Tu guaninnukleotid-kt
fehrje: GTP-t ktve aktivldik, mg GDP-kt llapotban inaktv. Az aminoacil-tRNS/EF-Tu/GTP komplex
riboszmhoz ktdse utn a GTP GDP-re hidrolizldik s az EF-Tu/GDP komplex felszabadul. A msodik
(s a tbbi) aminosav kivlasztsa termszetesen kodon-antikodon felismerssel trtnik (l. elbb), a dekdol
kzpont rRNS-rgijnak azonban minsgbiztost szerepe van: korrekt kodon-antikodon bzisprosods
esetn kivltja az EF-Tu-hoz kttt GTP hidrolzist. Ha ez nem kvetkezik be, az EF-Tu nem tud levlni a
riboszmrl s a szintzis nem folytatdhat mindaddig, amg a helyes aminoacil-tRNS meg nem ktdik. (Az
EF-Tu jratltst egy msik elongcis faktor, az EF-Ts vgzi, a GDP GTP-re cserlsvel.) A riboszmn
egyms mell kerlt kt aminosav kztt kialakul a peptidkts: a formilmetionin karboxilcsoportja - mely
addig tRNS-nek 3-vghez ktdtt - s a msodik aminosav aminocsoportja kapcsoldik vzkilpssel. A
feleslegess vlt inicicis tRNS levlsval felszabadul a P-kthely. A peptidktsi reakcit a
peptidiltranszferz centrum katalizlja, amely a 28S rRNS specilis trszerkezet rgija, ribozimknt mkdik.
Az elongci kvetkez mozzanataknt a riboszma egy tripletnyit elmozdul az mRNS 3-vge fel, a
dipeptidil-tRNS komplex gy tkerl a P-kthelyre s az A-kthely hozzfrhetv vlik a kvetkez
aminoacil-tRNS szmra. (A P-kthelyrl leszortott csupasz, deacillt tRNS tmenetileg a riboszma E-
kthelyn idzik [E = exit, kilps], majd vgleg levlik annak felsznrl.) Ehhez a transzlokcis lpshez
jabb elongcis faktor, az EF-G szksges, GTP-hez kttt, aktv formban. A lncnvekeds folyamn a lert
hrom lps (aminoacil-tRNS-ktds/peptidiltranszferz reakci/transzlokci) ismtldik.
29.2. bra - 29.2. bra: A prokariota transzlci elongcija. A: aminoacil-tRNS

ktds; B: peptidkts-szintzis; C: transzlokci
165
1.3. Terminci
A lncnvekeds befejezst az mRNS kdol rgijnak utols tripletje, egy stopkodon idzi el (29.3. bra).
Mivel a stopkodon nem kt meg aminoacil-tRNS-t, az A-kthely resen marad. Fehrjefaktorok (releasing
faktorok) kapcsoldnak a riboszmhoz s aktivljk a peptidiltranszferzt, amely lehastja a ksz
polipeptidlncot az utols tRNS-rl. A fehrjemolekula s a tRNS is felszabadul a poliszmrl, a feleslegess
vlt riboszma alegysgekre disszocil s legrdl az mRNS-rl.
29.3. bra - 29.3. bra: A prokariota transzlci termincija
166
2. Az eukariota transzlci sajtossgai

Br a fehrjeszintzis alapvet mechanizmusa minden l sejtben hasonl, nhny lnyeges klnbsg
felttlenl megemltend. Ez azrt is fontos, mert magasabb rend szervezetek bakterilis fertzsnek
lekzdsre a baktriumok fehrjeszintzisnek szelektv gtlsa szolgltatja az egyik kzenfekv lehetsget,
ehhez pedig ismerni kell a pro- s eukariota transzlci kztti finom klnbsgeket.
Eukariota riboszmk mRNS-hez ktdst nem komplementer bzisprosods biztostja (az mRNS-ekbl
hinyzik a Shine-Dalgarno szekvencia), hanem az 5-cap-struktra s a hozz kapcsold inicicis faktorok.
Ezt kveten a transzlci az mRNS els, az 5-vghez legkzelebbi inicicis tripletjn kezddik el. Ez a
mechanizmus egyben magyarzatot ad az eukariota transzlci monocisztronos jellegre is: inicicis kdonknt
csak az 5-vghez kzeli AUG mkdhet. (Vrus mRNS-ek policisztronosak is lehetnek: rajtuk a riboszma-
ktds nemcsak a cap-struktrn, hanem az mRNS belsejben lev kthelyeken keresztl is trtnhet.)
Az eukariota fehrjeszintzis-appartus komplexebb mint a prokariotk: a riboszmk nagyobbak, tbb rRNS-

s fehrjemolekult tartalmaznak. A transzlciban szmos oldhat fehrjefaktor vesz rszt: csupn a
lnckezdshez tucatnyi inicicis faktor mkdse szksges. A folyamat gy bonyolultabb s finomabb
szablyozst is lehetv tesz.
Lokalizci szempontjbl eukariota sejtekben a citoszlban lev szabad s az endoplazmatikus retikulum

membrnjhoz kttt poliszmkat klnbztetnk meg. A szabad poliszmk szintetizljk a citoszl, a
sejtmag, a mitokondriumok fehrjit, mg a kttt poliszmkon szekrcis fehrjk, a sejthrtya, az
endoplazmatikus retikulum, a Golgi-appartus s a lizoszmk fehrji kpzdnek. Utbbiak transzportjt s
sejten belli forgalmt bonyolult mechanizmusok biztostjk (l. 33. fejezet).
3. A transzlci ltalnos jellemzi

Az elbbiekben lertakbl nhny fontos kvetkeztets vonhat le a fehrjeszintzis mechanizmusra
vonatkozan.
1. Az mRNS templton a szintzis 5 3 irnyban folyik.
2. A nvekv polipeptidlnc szempontjbl tekintve a transzlci irnya: N-terminlis ? C-terminlis.
3. A fehrjeszintzis folyamatban poliszmk kpzdnek (29.4. bra): a riboszma-alegysgek az inicici

sorn kapcsoldnak az mRNS-hez, vgigfutnak rajta, majd a termincit kveten azonnal levlnak rla.
4. A poliszma minden riboszmjn egy polipeptidlnc szintetizldik. A naszcens fehrjelnc C-terminlis

aminosava mindenkor az utols tRNS-hez kapcsoldik kovalens ktssel.
5. A fehrjelnc trszerkezete mr a transzlci kzben kezd kialakulni.
6. A transzlci rendkvl energiaignyes folyamat: minden peptidkts kialaktshoz ngy nagyenergij

ktst hasznl fel (kettt az aminoacil-tRNS szintzis ATP AMP talakulsakor, egyet az
aminoacil-tRNS riboszmhoz ktdsekor [GTP GDP], egyet a riboszma
167
transzlokcijakor [GTP GDP]). Az energiabefektets garantlja a transzlci

pontossgt.
29.4. bra - 29.4. bra: Poliszma kpzdse a fehrjeszintzis sorn
4. A fehrjeszintzis gtlszerei
Szmos antibiotikum s eukariota gtlszer tmadspontja a transzlci. Az embergygyszatban is
hasznlatos antibiotikumok kzl a kloramfenikol a peptidiltranszferzt, az eritromicin a transzlokcit, a
tetraciklin az aminoacil-tRNS ktdst, a streptomicin a 30S alegysg mkdst gtolja. A puromicin
aminoacil-tRNS analg, amely a nveked polipeptidlnc C-terminlishoz ktdve pro- s eukariota sejtekben
is id eltti termincit okoz.
Ajnlott irodalom
Clark, F. C., Marcker, K. A.: How proteins start. Scientific American 1968/1, 3642.
318323.
Dintzis, H. M. (2006): The wandering pathway to determining N to C synthesis of proteins. Biochem. Mol. Biol.
Educ. 34, 241246.
Lane, C.: Rabbit hemoglobin from frog eggs. Scientific American 1976/8, 6071.
Moore, P. B., Steitz, T.A. (2002): The involvement of RNA in ribosome function. Nature 418, 229235.
Rich, A.: Polyribosomes. Scientific American 1963/12, 4453.
168
30. fejezet - 30. A gnmkds
szablyozsa I.: A prokariota operon
modell
Az E. coli genom tbb ezer gnt tartalmaz. Ezek egy rsze a sejt letkrlmnyeitl fggetlenl nagyjbl
azonos szinten, konstitutvan expresszldik. Ms gnek mkdse azonban tg hatrok kztt vltozhat a sejtet
r krnyezeti hatsoktl fggen: expresszijuk szablyozott. A gnregulci vezethet a gnmkds
fokozdshoz (indukci) vagy cskkenshez (represszi). Prokariotkban a gnexpresszi szablyozsnak f
clja, hogy a sejt minl sikeresebben alkalmazkodjon ahhoz a tpanyagelltshoz, melyet a krnyezet nyjt
szmra.
1. A gnregulci rsztvevi
1.1. DNS-szekvenciaelemek
A gnexpresszi szablyozsa dnt rszben az RNS-szintzis szintjn trtnik. Hogy egy gn milyen
intenzitssal rdik t, azt a benne vagy kzelben, elssorban a promter rgiban jelenlev
szekvenciaelemek hatrozzk meg. Magnak a promternek a szekvencija befolysolja az RNS-polimerz
ktdsnek erssgt, az inicicis aktivitst. Ms DNS-rgik az RNS-polimerz elongcis mozgsra,
esetleg a termincira vannak hatssal. Ezek a DNS-elemek funkcijukat csak akkor tudjk elltni, ha
termszetes helykn, a szablyozott gn kzelben hagyjuk ket: cisz-hats elemekknt mkdnek. Ugyanaz
a szekvenciaelem a genomban tbb (egyes esetekben sok) helyen is elfordulhat (a Pribnow-box pldul minden
prokariota promter fontos rgija). Ezeknek a rgiknak a bzissorrendje azonban ltalban nem tkletesen
azonos. Azt a bzissorrendet, mely a legjobban hasonlt mindegyikkhz konszenzus szekvencinak nevezzk. A
kis egyedi klnbsgek finoman befolysoljk a szekvenciaelem mkdst, aktivitst. Ennek alapjn
beszlhetnk ers s gyenge promterekrl.
1.2. Regultor-fehrjk
Szablyoz fehrjk specifikus DNS-szekvencikhoz ktdve befolysoljk az RNS-polimerz aktivitst: a
represszorok negatv, az aktivtorok pozitv szablyozst vgeznek. Mivel az ket kdol gneknek nem kell
felttlenl a szablyozott transzkripcis egysg kzelben elhelyezkednik, transz-hats elemeknek nevezzk
ket.
1.3. Effektor-molekulk
A regultor-fehrjk DNS-kt kpessgt kismret, ltalban metabolit jelleg effektor-molekulk
befolysoljk azltal, hogy ktdsk a fehrje konformci-vltozst idzi el. Az induktorok gnaktivcit, a
korepresszorok a gnmkds gtlst vltjk ki a lert mechanizmussal.
2. Lebont anyagcsereutak operonjai

E. coliban a gnindukci klasszikus pldjt a sejteknek a laktzt tartalmaz tptalajhoz val alkalmazkodsa
szolgltatja. A baktriumok termszetes cukorforrsa a glukz: a glukz-metabolizmus enzimeit konstitutvan
termelik, szlcukor jelenltben egyb sznhidrtok lebontst vgz enzimeket nem szintetizlnak. Ha
azonban tptalajuk glukz helyett laktzt tartalmaz, a tejcukor lebontshoz szksges enzimek nagy
mennyisgben kpzdnek bennk, enzimindukci megy vgbe.
Genetikai ksrletek eredmnyekppen Jacob s Monod a 60-as vek elejn elmletet lltott fel a laktz-
metabolizl enzimek termelsnek szablyozsra. Az operonmodell szerint (30.1. bra) a laktzlebontsban
szerepet jtsz enzimek gnjei az n. struktrlis gnek a baktrium genomban gnsorozatot alkotva
egyetlen promterrl rdnak t egy policisztronos mRNS-be. (A gntermkek kzl a -galaktozidz a laktzt
galaktzra s glukzra bontja, a laktz permez pedig a tejcukor felvtelt vgzi. A harmadik gn egy
transzacetilz enzimet kdol, melynek feladata, hogy hatstalantsaa permez fehrje ltal felvett egyb, toxikus
169
30. A gnmkds szablyozsa I.:
A prokariota operon modell
tejcukorszrmazkokat.) A promter s a strukturlis gnek kztt rvid szablyoz rgi, az opertor foglal
helyet.
30.1. bra - 30.1. bra: Negatv regulci a laktzoperonon: a lac represszor mkdse.
(R = regultor gn; P = promter; O = opertor; S1, S2, S3 = struktrlis gnek)
A regultor gn ltal kdolt lac represszor az opertorhoz ktdve gtolja az RNS-polimerz promterhez
kapcsoldst, lelltva a transzkripcit az operonon (negatv regulci). Ha azonban a tptalaj tejcukrot
tartalmaz, egy belle kpzd metabolit induktorknt mkdve a represszorhoz ktdik s konformcivltozst
elidzve levlasztja az opertor rgirl, lehetv tve az operon transzkripcijt. A laktzoperon az
induklhat operon prototpusa: termszetes krlmnyek kztt nem mkdik, az effektor jelenlte azonban
aktivlja. Ez a szablyozs jellemz szmos lebont anyagcseret enzimeinek expresszijra.
Ha azonban a tptalaj glukzt tartalmaz, a laktzoperon vagy ms cukrok lebontsrt felels enzimeket kdol
gnsorozatok nem induklhatk hatkonyan. Ennek azrt van biolgiai rtelme, mert a glukz-metabolizmust
vgz enzimek konstitutvan expresszldnak E. coliban: a sejtnek a glukz felhasznlshoz nem kell jabb
enzimmolekulkat szintetizlnia, felesleges a sejtnek ms cukrok lebontsval foglalkoznia. Korbban
feltteleztk, hogy a tbbi cukoroperon lelltsrt a glukz valamely lebontsi termke a felels, ezrt a
jelensget katabolit represszinak neveztk el. A folyamat htterben valjban gnaktivcis mechanizmus ll.
Glukz hinyban a baktrium adenilciklz enzime aktivldik s ATP-bl ciklikus AMP-t (l. 2.3. bra) kpez.
A cAMP komplexet alkot egy transzkripcis faktorral, a katabolit aktivtor fehrjvel (az angol nv alapjn
hasznlt rvidts: CAP), amely a cukor-metabolizmust irnyt operonok promter rgijhoz ktdik. A
cAMP-CAP komplex stabilizlja az RNS-polimerz DNS-hez kapcsoldst, nagy-mrtkben stimullva az
inicicit (30.2. bra). Glukztartalm tptalajon a sejtek cAMP-szintje alacsony, a CAP ezrt nem kpes a
promterhez ktdni.
A laktzoperon teht sszetett szablyozs alatt ll. A laktz jelenlte a lac represszor negatv hatsnak
felfggesztsvel, a glukz hinya pedig a CAP-fehrje pozitv hatsnak serkentsvel vezet az operon hatsos
expresszijhoz. Laktzbont enzimek csak akkor szintetizldnak nagy mennyisgben, ha a tptalaj glukz
helyett laktzt tartalmaz (30.2. bra).
30.2. bra - 30.2. bra: A laktzoperon transzkripcijnak sszetett szablyozsa. (G =

glukz; L= laktz)
170
3. Bioszintetikus anyagcsereutak operonjai

Ha E. coli sejteket olyan tptalajon tenysztenek, amely aminosavakat nem tartalmaz, a sejtekben minden olyan
enzim jelen van, amely az aminosavak szintzishez szksges. Ha a tptalajhoz aminosavat adnak, az illet
aminosavat szintetizl enzimek eltnnek, azaz gnrepresszi kvetkezik be.
Az egyes aminosavak bioszintetikus enzimeit kdol gnsorozatok szerkezete hasonlt a laktzoperonhoz,

szablyozsuk azonban eltr. A represszor fehrje ebben az esetben inaktv formban szintetizldik, azaz nem
ismeri fel az operon opertor rgijt (30.3. bra). A megfelel aminosav azonban korepresszorknt mkdve
konformcivltozst indukl a represszorfehrjben, gy mr megtrtnhet a represszoropertor kapcsolds,
s az operon trsnak gtlsa. Aminosav-szintetizl enzimek teht csak aminosav-heztets sorn
termeldnek a sejtben, az aminosav jelenlte az operon transzkripcijt lelltja (represszlhat operon). A
30.3. bra pldaknt a triptofnoperon szerkezett s szablyozst mutatja be. A triptofn a fehrjk legritkbb
aminosava, ellltsa a sejtek ltal gy rendkvl kltsges. A baktriumok vilgban ezrt sokfle, kifinomult
mechanizmus alakult ki a triptofn-szintetizl enzimek expresszijnak szablyozsra. Kzlk a
leghatkonyabb a triptofnaktivlt trp represszor mkdse.
30.3. bra - 30.3. bra: A triptofnszintzis enzimeit kdol triptofnoperon

szablyozsa
Ajnlott irodalom
171
USA, 256258.
Maniatis, T., Ptashne, M.: A DNA operator-repressor system. Scientific American 1976/1, 6476.
Ptashne, M., Gilbert, W.: Genetic repressors. Scientific American 1970/1, 2531.
172
szablyozsa II.: A gnregulci
mechanizmusai eukariotkban
Prokariotkban s egysejt eukariota llnyekben a gnexpresszi szablyozsnak f feladata, hogy
biztostsa a sejt alkalmazkodst a vltoz tpllkozsi s fizikai krlmnyekhez. Ezt specifikus gnek
reverzibilis indukcijval vagy represszijval ri el: a krnyezeti hats elmltval helyrell az eredeti
gnmkds. Magasabb rend, soksejt szervezetekben a bels krnyezet llandsga tbb-kevsb megvdi a
sejteket attl, hogy extrm krnyezeti hatsokra kelljen reaglniuk. Reverzibilis gnexpresszis vltozsokat
extracellulris szignlok (pl. idegi, hormonlis hatsok, mitognek) vlthatnak ki. A gnregulci msik fontos
feladata, hogy vgrehajtsa az egyedfejlds sorn a szveti differencicival kapcsolatos dntseket. Ezek a
gnexpresszis vltozsok ltalban irreverzibilisek s az rett, differencilt szveti sejtek kialakulst
eredmnyezik.
1. A gnregulci szerepe az egyedfejldsben

1.1. A Gurdon-ksrlet
Az egyedfejlds szablyozsnak f krdse a kvetkez: hogyan lehetsges, hogy egyetlen diploid sejtbl, a
megtermkenytett petesejtbl sokfle, fenotpusosan nagymrtkben eltr differencilt szvet kpzdik?
Elmletileg ktfle vlasz lehetsges: (I) jelents genomvltozssal (gnek elvesztsvel, talakulsval,
szvetspecifikus gnllomny kialakulsval); (II) vltozatlan genom mellett kialakul szvetspecifikus,
differencilt gnexpresszival. Az ugyanazon szervezet klnbz szveti sejtjeiben mrt azonos DNS-
mennyisg (a DNS-llandsg jelensge) a msodik lehetsget valsznstette.
A (II) lehetsghez a vgs bizonytkot John Gurdon laboratriumnak klasszikus ksrletei szolgltattk
(1962). Ksrleti objektumknt karmosbkt (Xenopus laevis) hasznltak (31.1. bra). Bka oocitk sejtmagjait
erteljes ultraibolya besugrzssal roncsoltk, majd az enuklelt petesejtekbe mikroinjekcival ebihalak
vkonyblhmjbl nyert sejtmagokat juttattak. A mestersgesen ltrehozott zigtk nagy rsze a durva
beavatkozst nem lte tl, msok osztdni kezdtek, de normlis fejlds helyett torz kpzdmnyeket
eredmnyeztek. Egyes manipullt petesejtek normlis egyedfejldsen keresztl ebihalakat, majd bkt hoztak
ltre. A differencilt szvet sejtmagja teht petesejt citoplazmjba ltetve normlis egyedfejldst volt kpes
irnytani. A ksrletbl tbb fontos kvetkeztets vonhat le: (I) a differencilt sejtek tartalmazzk a zigta
teljes gnllomnyt; (II) a gnek jelents rsze represszlt llapotban van jelen az rett szveti sejtekben, a
differencici teht a sejt gnexpresszis kapacitsnak beszklsvel jr; (III) a represszlt gnek bizonyos
krlmnyek kztt jra aktivldnak; (IV) ilyen reaktivcihoz a petesejtben jelenlev citoplazmatikus
faktorok vezethetnek. Mindazokat a folyamatokat, melyek a sejtmag gnmkdst befolysoljk, anlkl, hogy
DNS-szekvencia vltozst idznnek el, epigenetikai mechanizmusoknak nevezzk (l. ksbb).
31.1. bra - 31.1. bra: A Gurdon-ksrlet lnyege
173
31. A gnmkds szablyozsa II.:
A gnregulci mechanizmusai
eukariotkban
A differencici folyamata teht dnten gnregulcis jelensg. (A teljessghez hozztartozik, hogy a

differencici specilis eseteiben genomvltozsok is elengedhetetlenek. Az antitesttermel B limfocitk rse
sorn pl. az immunglobulin-gnek trendezdse hozza ltre a sokfle ellenanyag kpzshez szksges kdol
kapacitst. Genomvltozst jelent a riboszomlis gnek amplifikcija is bka petesejtekben [l. 15. fejezet].) Az
lethez nlklzhetetlen gntermkek (pl. hisztonok, egyes citoszkeleton fehrjk, nukleinsav-szintetizl
enzimek stb.) minden szvetben kpzdnek. Az ezeket kdol gneket hztartst fenntart (angol
kifejezssel housekeeping) gneknek nevezzk. A szvetspecifikus gnek (pl. globingnek) csak a megfelel
differencilt szvetben expresszldnak. (A differencilis gnexpresszi az RNS-ek s a fehrjk szintjn is
tanulmnyozhat: hibridizcis, illetve fehrjebiokmiai [immunolgiai technikk, ktdimenzis elektroforzis]
mdszerekkel.)
1.2. Magtranszplantci emlskben

A Gurdon-ksrlethez hasonl prblkozsok emlsk esetben sokig csak korltozott eredmnyekhez
vezettek: sikerrel ltalban akkor kecsegtettek, ha a sejtmag korai embrionlis szvetbl szrmazott. 1997
tavaszn risi mdiapublicitst s vitt kivlt ksrletrl szmoltak be skt tudsok: enuklelt petesejtbl s
egy anyallat emlsejtjnek magjbl normlis brnyt lltottak el. A tudomny trtnetben ez volt az els
eset, hogy emlsben sikeres magtranszplantcit hajtottak vgre rett szveti sejt magjval. A felzdulst s
tiltakozsokat az vltotta ki, hogy a ksrlet sikere megteremtette annak elvi lehetsgt, hogy felnttek
sejtjeibl nyert magokkal azonos genom egyedeket lltsanak el szinte korltlan szmban: az ember
klnozsval bekszntsn Aldous Huxley szp j vilga. Dolly, a brny utn ms emls fajok
(szarvasmarha, egr, macska, st, embrionlis sejtmag transzplantcijval majom) esetben is trtntek sikeres
klnozsi ksrletek.
A sejtmagklnozs cljt tekintve ktfle eljrst klnbztetnk meg: a reproduktv s terpis klnozst
(31.2. bra). Az emlsfejlds (31.2.A. bra) sorn a megtermkenytett petesejtbl (zigta) blasztociszta alakul
ki, majd a mhnylkahrtyba gyazdva vglis normlis egyedd fejldik. A reproduktv klnozs sorn
(31.2.B. bra) egy rett testi sejt diploid (2n) magjt ltetik enuklelt petesejtbe, melybl szerencss esetben
normlis egyedfejldssel klnozott egyed alakul ki. Terpis klnozs (31.2.C. bra) sorn a beteg testi
174
eukariotkban
sejtjnek magjt transzplantljk petesejtbe, a klnozott blasztocisztbl embrionlis ssejteket tenysztenek,
melyek szvettenyszetben mestersgesen brmilyen sejttpuss differenciltathatk, szksg szerint
gnterpis eljrssal manipullhatk s olyan betegsgek sejtterpijra hasznlhatk, melyekben
meghatrozott funkcij sejtek ptlsa szksges (pl. diabetes mellitus, Parkinson-kr, szvinfarktus stb.). Ez az
eljrs a regeneratv medicina tudomnygnak nagy grete lehet: mivel a klnozott sejtek a beteg
gnllomnyt tartalmazzk, bevitelk valsznleg nem vlt ki immunolgiai reakcit, a kilkds elkerlhet.
(A knyv rsnak idpontjig [2011] emberben terpis klnozssal nem hajtottak vgre sejtterpit.)
31.2. bra - 31.2. bra: A normlis egyedfejlds s a reproduktv, illetve terpis

klnozs sszehasonltsa
A reproduktv klnozs rendkvl gyenge hatsfok eljrs: a klnozott llatok nagy rsze mhen bell
elpusztul. A tll klnok gyakran slyos td, szv, agy, vese, mj rendellenessgekkel szletnek, az
jszlttek a normlisnl nagyobb mretek, ksbb elhznak, korn regszenek. (Dolly is id eltt pusztult el.)
A nehzsgeket az okozza, hogy a klnozott sejtmagnak nhny ra alatt kell(ene) a zigta stdiumnak
megfelel llapotba visszaprogramozdnia, ez a gyors kromatintalakts pedig kevs sikerrel kecsegtet. Az
ember reproduktv klnozsa jelen pillanatban nemcsak etikai, hanem szakmai szempontbl is
elfogadhatatlannak ltszik. A terpis klnozs megtlse is vitatott, de ennek elfogadsa valsznleg
kevesebb akadlyba tkzik majd.
2. A gnexpresszi szablyozsnak szintjei

eukariotkban
A gnexpresszi fogalma alatt az rkletes informci fenotpusban trtn megjelentst rtjk; tbb lpsbl
ll, ezek mindegyikt befolysolhatjk szablyoz faktorok (31.3. bra).
31.3. bra - 31.3. bra: Az eukariota gnexpresszi szablyozsnak szintjei
175
eukariotkban
2.1. A transzkripci szablyozsa

A gnmkds regulcijnak leghatkonyabb s legfontosabb mdja annak eldntse, hogy egy gn
trdjon-e RNS-be s ha igen, milyen aktivitssal. Az RNS-szintzis kromatinba rendezett DNS-templton
folyik, gy a gnt tartalmaz kromatinllomny llapota eldntheti a krdst. Transzkripci csak laza,
dekondenzlt kromatinban trtnhet. Specifikus nem hiszton fehrjk a H1 hiszton levlasztsval fellazthatjk
a szolenoid szerkezetet, ms faktorok pedig az trand gn promter-rgijban tallhat nukleoszmkat
destabilizlhatjk, lehetv tve az aktv inicicis komplex kialakulst. Klnsen fontosnak tartjk a
nukleoszomlis hisztonok acetilcis-deacetilcis vltozsait: egyes lizinek aminocsoportjainak acetilcija a
tltsek kzmbstsvel fellaztja a nukleoszomlis szerkezetet, lehetv tve transzkripcis faktorok
ktdst. Az els ksrleti megfigyelseket, melyek a hisztonacetilci klinikai jelentsgre utalnak, egy
izomspecifikus hisztondeacetilz enzimre deficiens egerekben tettk: ezekben a K.O. egerekben slyos
szvizom-hipertrfia alakult ki. Az acetilcin kvl a hisztonok ms kmiai mdosulsoknak is clpontjai.
Metilcijuk s foszforilcijuk, attl fggen, hogy melyik hiszton molekula melyik claminosavn trtnik, a
promter-kromatin fellazulshoz vagy kondenzcijhoz is vezethet, a transzkripcit serkenti, illetve gtolhatja
is. Mivel a hisztonfehrjken tbb acetillhat, metillhat, foszforillhat hely is tallhat, a kmiai
mdosulsok sokfle kombincija a kromatinszerkezet finom szablyozst teszi lehetv. Szemben a korbbi
szemllettel, mely a hisztonokat strukturlis fehrjknek s a gnmkds nem-specifikus gtlinak tekintette, a
fentiekben lert, hiszton-kdnak nevezett modifikcis mintzat jelents szerepet szn ezeknek a fehrjknek a
gnspecifikus szablyozsban is.
A gnek trst befolysolja a DNS metilcija is: a gnekben elfordul CpG dinukleotidokban a citozin
metilcija a gn inaktivcijhoz vezet. Egyes gnprok esetben elfordul az, hogy a maternlis s paternlis
eredet alllok metilltsga eltr: az egyik szltl rklt metillatlan gn aktv, mg a msiktl kapott
metillt gn inaktv. Ilyen esetekben a krdses tulajdonsgra vonatkoz fenotpust nem csak a genotpus
hatrozza meg, hanem az is, hogy az eltr gnek melyik szltl szrmaznak. A jelensg neve: genomilis
bevsds (angol kifejezssel imprinting). Gnpromterek abnormlis (tlzott vagy cskkent) metilcija az
rintett gnek mkdsi zavara kvetkeztben betegsget is okozhat, jelentsgre elssorban a daganatos
betegsgek esetben figyeltek fel (l. 56. s 57. fejezet). Sejtek genomszint DNS-metilcis profiljnak
vizsglata a genomika j gnak (epigenomika) kialakulshoz vezetett.
A DNS-replikci utn a hiszton-modifikcis s DNS-metilcis mintzatok az jonnan kpzdtt

nukleoszmkban, illetve DNS-lncon is kialakulnak. A sejt gnexpresszis profilja teht az utdsejtekre is
rkldik (epigenetikai rklds).
Az utbbi vekben kerltek az rdeklds kzppontjba a nem-kdol RNS-ek. Br a fehrjket s stabil RNS-
eket (rRNS, tRNS, snRNS stb.) kdol szekvencik a genom 1-2 szzalkt teszik csak ki, kiderlt, hogy a
176
eukariotkban
genom nagy rsze trdik. A nem-kdol RNS-ek kztt elfordulnak specifikus kromatinrgikhoz ktd,
heterokromatinizcit elidz molekulk.
A gnmkds szablyozsnak legfontosabb tnyezi a transzkripcis faktorok, melyek DNS-hez ktdve

szablyozzk az RNS-szintzis inicicijnak folyamatt. (Rszletesen a kvetkez fejezet foglalkozik velk.)
Szablyozsra ad lehetsget a transzkriptumok 3-vgnek kialaktsa is: ha a transzkripcis egysg tbb
poliadenilcis elemet tartalmaz, klnbz mRNS-ek kpzdhetnek ugyanarrl a gnszakaszrl (pl. az
adenovrus ksi gnrgi esetben, l. 26. fejezet).
2.2. A pre-mRNS-rs szablyozsa

A pre-mRNS splicing ktfle mdon mehet vgbe. Konstitutv splicing esetn a pre-mRNS-bl minden esetben
ugyanazok az intronok hasadnak ki, belle csak egyfle rett mRNS kpzdhet. Az alternatv splicing sorn
ugyanabbl a pre-mRNS-bl eltr splicing-helyek felhasznlsval klnbz rett mRNS-ek
kpzdhetnek; ez termszetesen egymstl eltr fehrjetermkeket eredmnyez (31.4. bra; l. a 26. fejezetet
is). A szablyozs szvetspecifikus is lehet: ugyanarrl a gnrl klnbz sejtekben eltr domnszerkezet,
mkds fehrjk kpzdhetnek. A splicinghelyek kivlasztst extracellulris gensek (hormonok,
nvekedsi faktorok) szablyozhatjk, a folyamat az egyedfejlds sorn is vltozhat. Az alternatv splicing
nagy mrtkben nveli a proteom komplexitst: egyes gnek akr tbbszz fehrjt is kdolhatnak. Becslsek
szerint az emberi genom mintegy 2025 000 gnjhez tbbszzezer fehrjbl ll proteom
csatlakozik.
Az alternatv splicing lnyegt s jelentsgt a kalcitonin s a CGRP (calcitonin gene-related peptide)

polipeptid pldjn mutatjuk be (31.4. bra). A kalcitonin a pajzsmirigy hormonja. Hatsra a vrplazma
klcium s foszft ionjai a csontokba rakdnak le. A CGRP-t bizonyos idegsejtek termelik, rtgulatot,
vrnyomscskkenst okoz. A kt polipeptidet ugyanaz a gn kdolja. Pajzsmirigyben a primer
transzkriptumbl az els ngy exon sszekapcsoldsval kpzdik mRNS, idegsejtekben viszont az els hrom
exonhoz az 5. s 6. exon kapcsoldik. A ktfle sejtben teht ugyanaz a gn eltr szerkezet s hats
fehrjket kdol.
31.4. bra - 31.4. bra: Kalcitonin s CGRP mRNS kpzdse alternatv splicing tjn
(E1-E6, exonok)
Az alternatv RNS-rs egy msik, a splicingtl fggetlen formja az RNS-szerkeszts (editing) jelensge: a
mechanizmus a transzkriptum fehrjekdol rgijban egy nukleotidot kiiktat, hozzad vagy megvltoztat,
mdostva a fehrjetermket is. Ez a folyamat is lehet szvetspecifikus (l. 26. fejezet).
2.3. Az RNS-transzport szablyozsa

A transzkripci sorn kpzdtt RNS-ek fehrjkhez kttt formban jutnak ki a citoplazmba a maghrtya
prusain keresztl. Az RNS-export szablyozsa annak eldntst jelenti, mely RNS-molekulk kerljenek ki a
citoplazmba s melyek degradldjanak a sejtmagon bell. Az RNS-transzport mechanizmusairl keveset
tudunk, de az bizonyos, hogy RNS-kt fehrjk (ingz hnRNP fehrjk, az 5-cap-hez ktd fehrjk stb.)
fontos szerepet jtszanak benne.
177
eukariotkban
2.4. Az mRNS-degradci szablyozsa
Az mRNS-ek szintjt nemcsak szintzisk, hanem lebontsuk teme is szablyozza. Nuklezokkal szemben
vdelmet jelent az 5-cap, illetve a poli(A)-farok. mRNS-ek 3-vgi nem kdol rgijban az mRNS gyors
lebontst, illetve viszonylagos vdettsget biztost specifikus szekvencij rgik is lehetnek. Ezek a rgik
viszonylag tg hatrok kztt, szelektven szablyozhatjk az egyes mRNS-ek letidejt. Az mRNS-ek letidejt
a hozzjuk kapcsold fehrjk is szablyozzk. Egyes sejtek (pl. petesejtek) citoplazmjban specifikus
mRNS-ek mRNP partikulumok formjban troldhatnak, inaktv formban. Kls hatsokra az mRNS-ek
felszabadulnak s rajtuk fehrjk szintetizldnak.
2.5. A transzlci szablyozsa

A fehrjeszintzis elssorban az inicici folyamatn keresztl szablyozhat. Specifikus inicicis faktorok
foszforilcija befolysolhatja az 5-cap riboszmhoz kapcsoldst, a metionil-tRNS ktdst. Egyes
mRNS-ek 5-nem-kdol rgija specifikus szekvencit tartalmaz. Az ezt felismer transzlcis represszor
fehrjk szelektven gtolhatjk ezen mRNS-ek transzlcijt anlkl, hogy befolysolnk a sejt ltalnos
fehrjeszintetikus aktivitst.
Nem-kdol RNS-ek a transzlci szablyozsban is fontos szerepet jtszanak. Az siRNS-ek s miRNS-ek (l. 12.
fejezet), br kpzdsk s rsk klnbzik, hasonl szerkezet s hatsmechanizmus molekulk. Mintegy
22 nukleotidprbl ll kettslnc RNS-ek, melyek egyik lnca egy fehrjekomplex-szel egytt komplementer
bzisprosodssal kapcsoldik cl-mRNS-khz. Ha a bzisprosods tkletes, az mRNS enzimatikusan
lebomlik, ha tkletlen, degradci helyett a transzlci gtldik. Emberi sejtekben kb. 1500 miRNS-t
azonostottak eddig, ezek clszekvencija tbb klnbz mRNS-en is jelen lehet. Becslsek szerint a humn
gnek egyharmadnak expresszijt szablyozhatjk miRNS-ek. A mechanizmus orvosi jelentsgnek
feldertse folyamatban van (l. 57. fejezet).
2.6. A fehrje-degradci szablyozsa

A sejt fehrjinek mennyisgt szintzisk s lebontsuk mrtke szabja meg. Eukariota sejtekben a fehrje-
degradcinak kt f tja lehetsges. A lizoszomlis fehrjebonts sorn membrnnal hatrolt, lebontsra tlt
sejtalkotrszeket s makromolekulkat tartalmaz vezikulk (autofagoszmk) kpzdnek a citoplazmban.
Lizoszmkkal fuzionlva fagolizoszmkat alkotnak s vgbemennek bennk a lebont folyamatok. A
proteolzisnek ez a fajtja kevss szelektv.
Specifikus fehrjebontst biztost az ubikvitin-proteaszma t. Az ubikvitin nevbl sejtheten minden

szvetben jelenlev, kismret polipeptid. Meghatrozott peptidrgit (n. destrukcis boxot) tartalmaz
fehrjkhez enzimatikus ton kovalens ktssel tbb ubikvitin molekulbl ll lnc kapcsoldik. A
poliubikvitinlt fehrjt nagymret proteolitikus komplex (proteaszma) ismeri fel s gyorsan degradlja. A
folyamat specificitst a clfehrje elsdleges szerkezete s az ubikvitinl enzimek biztostjk. Az ubikvitin-
proteaszma rendszer egyik jl ismert ldozata a ciklin B (l. 18. fejezet): anafzisban bekvetkez
villmgyors degradcija szksges ahhoz, hogy a sejt be tudja fejezni a sejtosztdst. Az ubikvitin-
proteaszma rendszer a sejt fehrje-homeosztzisnak biztostsban is rszt vesz: lebontja a srlt vagy
selejtes, abnormlis konformcij fehrjket. Elfordul az is, hogy a clfehrjhez egyetlen ubikvitin molekula
kapcsoldik. Szemben a poliubikvitincival, a monoubikvitinci nem okozza a fehrje degradcijt, hanem
szablyoz hats: a protein aktivitst vagy sejten belli lokalizcijt befolysolja.
Fontos szablyozfehrjk tlzott lebontsa emberi betegsgek (daganatok, gyulladsos krkpek, psoriasis
[pikkelysmr]) patogenezisben is szerepet jtszik. Proteaszma-gtlk hatsos gygyszerek lehetnek ilyen
krkpek kezelsben. Ebben az irnyban mr folynak klinikai ksrletek.
2.7. A fehrjefunkci szablyozsa

A legtgabb rtelemben vve a gnexpresszi mrtkt nemcsak a gn ltal kdolt fehrje mennyisgvel,
hanem aktivitsval is jellemezhetjk. A fehrjk aktivitsa, mkdse nagymrtkben fgg a trszerkezettl.
A fehrjk konformcijnak szablyozsra tbb lehetsg addik.
Kis molekulk ktdse alloszterikus regulcit biztost: a szablyoz molekula nem a fehrje aktv
centrumhoz kapcsoldik (alloszterikus = ms helyen hat), ktdse viszont megvltoztatja az aktv hely
178
eukariotkban
konformcijt, gy a fehrje mkdst. Az alloszterikus szablyozs szmos pldjval foglalkozik ez a knyv
(pl. a guaninnukleotid-kt fehrjk aktivlsa GTP-vel; szteroid hormonok hatsa receptorukra, stb).
A fehrjk kovalens mdosulsai kzl a foszforilci a legltalnosabb regulcis mechanizmus (rszletesen l.

ksbb). A fehrjkhez szterktssel kapcsold foszftcsoportok konformcivltozst s ms
makromolekulkhoz val ktdst is eredmnyezhetnek. Egy protein foszforilltsgnak mrtkt
proteinkinzok (foszforilci) s proteinfoszfatzok (defoszforilci) ellenttes hatsa szablyozza. Egy
eukariota sejtben tbb szz klnbz specifits fehrjekinz s hasonl szm foszfatz lehet jelen, rendkvl
finom s bonyolult regulcit biztostva. A foszforilcin kvl szmos egyb kovalens mdosuls (acetilci,
metilci, glikozilci, nitrozilci, monoubikvitinci stb.) befolysolja a fehrjk mkdst.
A fehrjemkds szablyozsnak tovbbi lehetsgt a polipeptidlncok kztti egymsrahatsok

szolgltatjk. Egyes enzimekben regultor alegysg ktdse szabja meg a katalitikus alegysg aktivitst (pl.
ciklin/Cdk komplexek, l. 18. fejezet), mskor extracellulris hats idzi el jeltviteli fehrjk kapcsoldst (pl.
hormonreceptorok s clfehrjik egymsrahatst, l. ksbb).
Ajnlott irodalom
Cooper, G. M., Hausman, R.E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D. C.,
USA, 278287, 298302, 323329, 340349.
Csaba, Gy. (1995): Az apai s anyai gnek eltr kifejezdse. Termszet Vilga 126, 2324.
Gurdon, J. B.: Transplanted nuclei and cell differentiation. Scientific American 1968/12, 2435.
Felsenfeld, G., Groudine, M. (2003): Controlling the double helix. Nature 421, 448453.
Goldberg, A. L., Rock, K. (2002): Not just research tools proteasome inhibitors offer therapeutic promise.
Nature Medicine 8, 338340.
Hochedlinger, K., Jaenisch, R. (2003): Nuclear transplantation, embryonic stem cells, and the potential for cell
therapy. N. Engl. J. Med. 349, 275286.
Kornberg, R. D. (1999): Eukaryotic transcriptional control. Trends Cell Biol. 9, M46M49.
Lw, P. (2000): A sejt fehrjebont gpezete: a proteaszma. Termszet Vilga 131, 506508.
Maniatis, T., Tasic, B. (2002): Alternative pre-mRNA splicing and proteome expansion in metazoans. Nature
418, 236243.
Mattick, J. S. Makunin, I.V. (2006): Non-coding RNA. Hum. Mol. Gen. 15, R17-R29.
Molnr V., Bakos B., Hegyesi H., Falus A. (2008): Lege Artis Medicinae 18, 591597.
Ross, J.: The turnover of messenger RNA. Scientific American 1989/4, 2835.
179
szablyozsa III.: Transzkripcis
faktorok
A transzkripcis faktorokolyan DNS-kt fehrjk, amelyek a gntrst szablyozzk. Transz-hats
faktorokknt specifikus bzisszekvencij cisz-hats DNS-elemekhez kapcsoldnak (l. 30. fejezet).
Kthelyk s hatsuk alapjn kt nagy funkcionlis kategriba soroljuk ket: a gnek alaptrst biztost
ltalnos transzkripcis faktorok, valamint a gnregulcit vgz szablyoz transzkripcis faktorok
kategrijba. Az elbbiek a szorosabb rtelemben vett promter-rgihoz, az utbbiak pedig enhancer-
elemekhez kapcsoldva fejtik ki hatsukat.
Az enhancerek mint cisz-hats elemek, a szablyozott gnnel fizikai klcsnhatsban mkdnek. A gnhez
viszonytott pozcijukban azonban nagyfok variabilits tapasztalhat: egyes enhancerek a promter
kzelben, msok egszen tvol, st a gn msik oldaln, a termintor mgtt helyezkednek el. Fontos az,
hogy a kromatin trbeli organizcija lehetv tegye, hogy az enhancerhez ktd fehrjekomplex kontaktust
teremthessen a transzkriptoszmval s gy hatst gyakorolhasson a gntrs folyamatra. Ugyanazon gn
szablyozsban tbbfle enhancer-rgi, azaz klnbz transzkripcis faktorok is rszt vehetnek s fordtva:
egy adott szablyoz fehrje klnbz gnek enhancer-szekvenciit ismerheti fel. A gnregulci teht
rendkvl komplex folyamat: egyrszt, egy gn maximlis aktivlshoz klnbz krnyezeti hatsoknak
egyidben kell rvnyeslnik; msrszt, egy bizonyos transzkripcis faktor stimulcija egsz gncsoportok
expresszijt befolysolhatja.
1. Aktivtorok s represszorok
A transzkripcis faktorok clgnjk expresszijt serkenthetik (aktivtorok) vagy gtolhatjk (represszorok).
Az aktivtorok enhancer-rgijukhoz ktdve szmos fehrjvel (ltalnos transzkripcis faktorok, meditor

komplex, koaktivtorok [pl. hiszton acetiltranszferz], transzkripcis elongcis faktorok, splicing faktorok)
ltestenek kapcsolatot, ezltal serkentve az RNS-polimerz promterhez ktdst s mkdst.
Szablyozsuk sokfle lehet (32.1. bra). A hztartsi gnek expresszijt konstitutv transzkripcis faktorok
biztostjk. A legtbb aktivtort fejldsi vagy jeltviteli folyamatok szablyozzk. Az utbbiak esetben a
serkent jelet kvlrl a sejtbe kerl, vagy a sejtben kpzdlipidek (leggyakrabban szteroidok), vagy a
sejtfelszn receptorain keresztl hat gensek biztostjk. Az rintett transzkripcis faktorok, vagy llandan a
sejtmagban tartzkodnak, vagy a jel hatsra transzlokldnak a sejtmagba. Ezekkel a folyamatokkal
rszletesen a jeltvitel trgyalsa (4451. fejezet) sorn foglalkozunk.
32.1. bra - 32.1. bra: Eukariota aktivtor transzkripcis faktorok funkcionlis

osztlyozsa
180
32. A gnmkds szablyozsa III.:
Transzkripcis faktorok
A represszor fehrjk gtoljk a clgnek transzkripcijt. Egyesek aktivtor fehrjket szortanak le

enhancerkrl, msok direkt mdon gtoljk ltalnos transzkripcis faktorok, vagy a meditor komplex
mkdst, vagy korepresszorokat (pl. hiszton dezacetilz) ktnek meg.
2. Transzkripcis faktorcsaldok
A transzkripcis faktorok alapvet domnstruktrja hasonl: tartalmaznak egy DNS-kt domnt, amely
felismeri a megfelel szekvenciaelemet, s egy aktivcis domnt, amely serkenti az aktv RNS-polimerz
holoenzim kialakulst s katalitikus mkdst. A transzkripcis faktor s enhancer elemnek bzisai kztt
gyenge, nem-kovalens ktsek alakulnak ki, ezek mintzata hatrozza meg a kapcsolat specifikus jellegt. A
fehrjk elsdleges szerkezete alapjn tbb, egymstl eltr csaldot klnbztetnk meg. A ma ismert
(emberi sejtekben kb. 2000) transzkripcis faktor legtbbje az albbi tpusok valamelyikbe tartozik (32.2.
bra).
32.2. bra - 32.2. bra: Transzkripcis faktor csaldok
181
2.1. Hlix-turn-hlix fehrjk

Ezekben a transzkripcis faktorokban hrom kiterjedt -heliklis rgi alkotja a DNS-kt domnt, melyeket
rvid, flexibilis peptidszakaszok (ezekre utal az angol turn sz) vlasztanak el egymstl (32.2.A. bra).
Jellegzetes kpviselik a homeotikus gnek ltal kdolt homeotikus fehrjk. Ezek olyan transzkripcis faktorok,
amelyek az egyedfejlds kritikus pontjain hoznak nagy jelentsg dntseket, szervek, egsz testrszek
kialakulst induklva (l. 49. fejezet). A homeotikus gneket eredetileg ecetmuslicban fedeztk fel, de
megfelelik gerincesekben, gy emberben is lteznek. A homeotikus gnek homeobox-rgikat tartalmaznak,
ezek kdoljk a fehrjk DNS-kt egysgt, a homeodomnt (l. 50. fejezet).
2.2. Cinkujjfehrjk
Nevket DNS-kt domnjk jellegzetes szerkezetrl kaptk (32.2.B. bra): a polipeptidlnc ezen rgija
kesztyujjszer kitremkedseket alkot. Az ujjak alapjnak kritikus helyeit ciszteinek s hisztidinek foglaljk el,
amelyek cinkionnal komplexldva stabilizljk a DNS-hlixet megmarkol ujjakat. A cinkujjfehrjk
hasonlan a legtbb transzkripcis faktorhoz dimerknt ktdnek felismerhelykhz. Ebbe a fehrjecsaldba
tartoznak a szteroid-receptorok, illetve az RNS-polimerz III inicicis faktoraknt mkd TFIIIA.
182
2.3. Amfipatikus hlixfehrjk

A transzkripcis faktorok ezen csaldjba tartoz fehrjk nevket klnleges szerkezet dimerizcis
domnjkrl kaptk (32.2.C. bra). Tartalmaznak ugyanis egy olyan rgit, mely -heliklis szerkezet s a
hlixet alkot aminosavak aszimmetrikus eloszlsak: egyik oldalra apolros oldallncok lokalizldnak, mg a
hlix msik fele polros jelleg. Ez az amfipatikus hlix gy alakulhat ki, hogy a polipeptidlnc ezen
szakasznak minden hetedik aminosava apolros (tbbnyire leucin); az -hlix-ben gy minden msodik fordulat
ugyanazon oldalra leucin esik (az -hlix egy csavarulatt 3.5 aminosav alkotja). A transzkripcis faktor dimer
szerkezete gy alakul ki, hogy az amfipatikus hlixek leucinjai egymsba illeszkedve hidrofb klcsnhatsokat
ltestenek. Az amfipatikus hlixfehrjk egyik alfaja ppen innen kapta nevt: leucin-cipzr fehrjk.
Legismertebb kpviseljk az AP1-faktor, mely n. Fos- s Jun-fehrjk dimerje (ezekkel rszletesen az
onkoproteinekkel kapcsolatosan ksbb foglalkozunk). Leucin cipzrral dimerizldnak a hlix-loop-hlix
(HLH) fehrjk is, ezekben azonban a dimerizcis domnt hajlkony hurok (loop) szaktja meg. Ennek az
alcsaldnak ismert kpviselje az izomszvet differencicijban kulcsszerepet betlt Myo-D fehrje. Az
amfipatikus hlixfehrjk dimerjei bzikus jelleg DNS-kt domnjkkel kapcsoldnak enhancer-elemkhz.
3. A szteroid-receptor szupercsald: ligand-aktivlt

transzkripcis faktorok
A szteroidok kismret, apolros molekulk (l. 4. fejezet). Lipidoldkonysguknl fogva knnyen tjutnak a
sejthrtya foszfolipid ketts rtegn, minden sejtbe bejutnak. Clsejtjeikben intracellulris receptorokhoz
kapcsoldnak s felhalmozdnak, fiziolgis hatsaikat receptorhoz kttt formban vltjk ki. Ez a
hatsmechanizmus nemcsak a szteroid-hormonokra (glukokortikoidok, sztrognek, progeszteron, andrognek
stb.), hanem az ugyancsak szteroid termszet D3-vitaminra, a karotinoid retinsavra (l. 4. fejezet), st az
apolros aminosavszrmazk tiroxinra is jellemz. Ezen gensek receptorai is rokonsgot mutatnak:szteroid-
receptor szupercsaldrl beszlnk.
A szteroidok kzl a glukokortikoidok transzkripcis hatsnak mechanizmusa a legjobban ismert (32.3. bra).
A hormonok clsejtjeikben citoszlreceptorokhoz kapcsoldnak. Kezeletlen sejtekben a receptor gtl
chaperone fehrjvel komplexldva, inaktv formban van jelen. A hormonmolekula felszabadtja az inhibitor-
fehrjt s a szteroid-receptor komplex transzlokldik a sejtmagba. A cinkujjfehrjk csaldjba tartoz
receptor transzkripcis faktorknt felismeri a glukokortikoid ltal szablyozott gnekhez csatlakoz enhancer-
elemt (glukokortikoid-reszponzv elemnek nevezzk) s hozzkapcsoldva megvltoztatja a gn expresszijt.
A folyamat rendkvl bonyolult, hiszen a hormon-receptor komplex, transzkripcis faktorhoz illen, az RNS-
polimerz II gpezet szmos elemvel kerl klcsnhatsba.
32.3. bra - 32.3. bra: A glukokortikoidok sejtszint hatsmechanizmusa
183
4. Transzkripcis faktor betegsgek

Az RNS-szintzist szablyoz fehrjk sokrt, nagy jelentsg funkcit ltnak el a soksejt szervezetekben.
Szksgesek az egyed normlis fejldshez s a differencilt szvetek normlis mkdshez, a
szvetspecifikus gnexpresszi szablyozshoz, a sejtszaporods kontrolljhoz. A ma ismert, tbbezer
transzkripcis faktor szvetspecifitsa szles hatrok kztt vltozik: a mr emltett AP1-faktor ubikviter
fehrje, a szteroid-receptorok csak a megfelel hormon clsejtjeiben expresszldnak, ms faktorok szigoran
szervspecifikusak (a Pit-1 transzkripcis faktor pldul kizrlag a hipofizis ells lebenyben mutathat ki). A
gnjeiket rint mutciknak teht vltozatos kvetkezmnyei lehetnek: tbbnyire letlisak, az lettel
sszeegyeztethet mutcik pedig sokfle krkpet okozhatnak. A transzkripcis faktor betegsgek
molekulris patolgijnak tisztzsa csak az utbbi vekben kezddtt meg.
4.1. Fejldsi rendellenessgek

A morfogenezis veleszletett zavarainak htterben gyakran llnak transzkripcis faktor rendellenessgek.
Jellegzetes plda a kombinlt adenohipofzis hormon-deficiencia: a homeodomn fehrjk kz tartoz Pit-1
transzkripcis faktor mkdszavara kvetkeztben nem fejldnek ki a hipofzis ells lebenyben a nvekedsi
hormont, pajzsmirigyserkent hormont s prolaktint termel sejtek. Az eredmny: hipofizer trpesg s szellemi
visszamaradottsg.
4.2. Endokrin krkpek

A szteroid-receptor szupercsald tagjainak genetikai krosodsa a clsejtek hormonrzkenysgnek zavart
okozza. Testicularis feminisatioban a beteg kromoszmlisan hmnem (XY), clsejtjeinek androgn-receptorai
azonban hinyoznak. gy a herk s androgn hormonok meglte ellenre a frfi nemi jellegek helyett ltszlag
normlis ni fenotpus alakul ki, petefszek s normlis ni nemiszervek nlkl. A tiroxin-rezisztencia s a D-
vitamin-rezisztens angolkr ugyancsak a megfelel receptor hinyra vezethet vissza.
4.3. Daganatos betegsgek

A gnexpresszi szablyozsban onkogn s antionkogn transzkripcis faktorok is szerepet jtszanak. Az
onkogn hats faktorok ltal okozott gnaktivci fokozza a sejtek prolifercijt, az antionkogn (tumor
szuppresszor) faktorok gnregulcis hatsa pedig gtolja a sejtosztdst. A ktfle szablyozs egyenslya
normlis sejtszaporodst, annak felborulsa pedig tumoros sejtburjnzst okoz. Az onkogn s tumor
184
szuppresszor transzkripcis faktorok daganatkpzsben jtszott szerepvel rszletesen ksbbi fejezetekben (l.
54. s 55. fejezet) foglalkozunk.
Ajnlott irodalom
Ayoagi, S., Archer, T. K. (2008): Dynamics of coactivator recruitment and chromatin modifications during
nuclear receptor mediated transcription. Mol. Cell. Endocrin. 280, 15.
Brivanlou, A. H., Darnell, J.E. (2002): Signal transduction and the control of gene expression. Science 295,
813818.
265278.
Gronemeyer, H. (1992): Control of transcription activation by steroid hormone receptors. FASEB J. 6, 2524
2529.
OMalley, B. W., Schrader, W. T.: The receptors of steroid hormones. Scientific American 1976/2, 3243.
Osborne, C. K., Elledge, R. M., Fuqua, S. A.: Estrogen receptors in breast cancer therapy. Scientific American
(Science & Medicine) 1996/1, 3241.
Papavassiliou, A. G. (1995): Transcription factors. N. Engl. J. Med. 332, 4547.
Tjian, R.: Molecular machines that control genes. Scientific American 1995/2, 3845.
185
33. fejezet - 33. Vezikulris transzport
I.: Fehrjk s lipidek szintzise az
endoplazmatikus retikulumban
Eukariota sejtekben a citoplazma llomnynak jelents rszt sszefgg csveket s lapos zskokat alkot
bonyolult membrnrendszer, az endoplazmatikus retikulum foglalja el, amely a sejt legnagyobb organelluma
(a sejt sszes membrnjnak mintegy fele tartozik az endoplazmatikus retikulumhoz). A membrnok egy
rsznek citoszl felli felsznt riboszmk bortjk (durva felszn endoplazmatikus retikulum), msik rsze
sima felszn. A durva s sima felszn endoplazmatikus retikulum tiszta formban izollhat: a sejtfrakcionls
sorn nyert mikroszma-frakcibl szacharz grdiens centrifuglssal klnthetk el a kismret vezikulkk
tredezett granullt s sima felszn membrnok. Az endoplazmatikus retikulum kzvetlen kapcsolatban ll a
maghrtyval, a Golgi-appartussal s rajta keresztl a sejthrtyval kzvetve, transzport vezikulk tjn ltest
sszekttetst. Az emltett membrnok egyik felszne a citoszllal rintkezik (citoplazmatikus felszn), a msik
pedig az organellum lumene, a sejthrtya esetn pedig az extracellulris tr fel nz (exoplazmatikus felszn).
Az endoplazmatikus retikulum fontos bioszintetikus folyamatok sznhelye: a sejt szmos fehrjjnek szintzise
s rse a durva felszn endoplazmatikus retikulumban zajlik, mg a sima felszn membrnok egyik fontos
funkcija a lipidek szintzise. A kpzdtt fehrjk s lipidek apr transzport vezikulk formjban jutnak el a
vgs llomshelyket jelent organellumokba. Az endoplazmatikus retikulum teht a vezikulris
transzportfolyamatok fontos rsztvevje.
1. Fehrjeszintzis a durva felszn endoplazmatikus

retikulumon
1.1. Szabad s kttt riboszmk
Az eukariota sejt szabad s membrnhoz kttt riboszmi egyenrtkek: hasonl kmiai sszettellel s
fehrjeszintetikus aktivitssal rendelkeznek. Funkcijuk azonban klnbzik: a szekrcis fehrjk, az
endoplazmatikus retikulum, a Golgi-appartus, a lizoszmk s a sejthrtya fehrji kttt riboszmkon
kpzdnek, az llati sejt tbbi proteinjnek szintzist viszont (nhny mitokondrilis fehrjt leszmtva)
szabad poliszmk vgzik. Mr a 60-as vekben felmerlt a krds: milyen mechanizmus dnti el, hogy egy
mRNS-molekula transzlcija hol trtnik?
1.2. Fehrjk kotranszlcis transzportja az endoplazmatikus

retikulumba
Minden mRNS transzlcija szabad riboszmn kezddik. Az endoplazmatikus retikulumba sznt
polipeptidlncok N-terminlis rgijban van egy hidrofb aminosavakban gazdag szignlszekvencia, amely a
kpzd lncot s a szintzist vgz riboszmt is a membrnhoz irnytja (33.1. bra). A szignlszekvencival
egy citoplazmatikus RNP-szemcse, a szignlfelismer partikulum (angolul signal recognition particle, SRP)
ltest kapcsolatot s ideiglenesen felfggeszti az elongcit a riboszma felsznn. Az SRP specifikus
ktfehrjt, SRP-receptort ismer fel az endoplazmatikus retikulum felsznn. A membrnhoz ktd riboszma
naszcens polipeptidlnca tbb fehrjbl felpl transzmembrn csatornba illeszkedik, kinyitja annak regt
s becsszik az endoplazmatikus retikulum lumenbe, mikzben a feleslegess vlt SRP felszabadul a
citoszlba. A riboszma kvlrl szorosan lezrja a csatornt, a nveked fehrjelnc pedig egyre beljebb kerl
az endoplazmatikus retikulum lumenbe. A folyamatot fehrjetranszlokcinak nevezzk, s mivel idben
egybeesik a polipeptidlnc elongcijval, kotranszlcis fehrjetranszportrl beszlnk.
33.1. bra - 33.1. bra: Szekrcis fehrje szintzise s transzlokcija az

endoplazmatikus retikulumba (ER)
186
33. Vezikulris transzport I.:
Fehrjk s lipidek szintzise az
Az jonnan szintetizlt polipeptidlnc N-terminlis rgijt egy szignl-peptidz ltalban mr a transzlokci

kzben lehastja. A fehrje tovbbi sorsa attl fgg, tartalmaz-e egyb szignlszekvencikat is. Ha nem,
termincija utn szolubilis fehrjeknt szabadul fel az endoplazmatikus retikulum lumenbe. A szintetizld
membrnfehrjket hidrofb jelleg -heliklis rgik horgonyozzk ki a membrn lipidrtegbe (33.2. bra).
Ezek a topogn szekvencik a fehrje membrnon belli orientcijt is meghatrozzk: egyes fehrjk (pl. az
inzulin receptora) N-terminlisukkal, msok (pl. a vasionokat szllt transzferrin fehrje receptora) C-
terminlisukkal rintkeznek az exoplazmatikus felsznnel. Ismt ms fehrjk multiplex topogn szekvencikkal
rendelkeznek: akr 7 (pl. az adrenalin -adrenerg receptora) vagy 12 (pl. a glukztranszporter) transzmembrn
-hlixk is lehet.
33.2. bra - 33.2. bra: Az endoplazmatikus retikulumon szintetizld

membrnfehrjk topolgija (a. az inzulinreceptor -alegysge; b.
transzferrinreceptor; c. glukztranszporter; d. -adrenerg receptor)
1.3. Fehrjk poszttranszlcis mdosulsa az endoplazmatikus

retikulumban
A membrnhoz kttt riboszmkon szintetizlt polipeptidlncok klnbz modifikcis reakcikon
mehetnek keresztl, mg vgs, funkcikpes formjukat elrik. Ezek egy rsze mr az endoplazmatikus
retikulumban megtrtnik, msok viszont a vezikulris transzport ksbbi llomshelyein (a Golgi-
appartusban, szekrcis granulumokban) mennek vgbe.
187
A poszttranszlcis mdosulsok egyik legltalnosabb formja a fehrjeglikozilci: oligoszacharid egysgek
kapcsoldsa a fehrjelnchoz. A folyamat rszleteivel a kvetkez fejezet foglalkozik.
Kovalens mdosulst jelent a diszulfidhidak kialaktsa is. Ez az endoplazmatikus retikulum oxidatv jelleg
kzegben mehet vgbe: egymshoz kzel kerl ciszteinek szulfhidrilcsoportjai hidrognt vesztve
diszulfidktseket hoznak ltre. (A citoszl redukl lgkre nem kedvez a diszulfidhidak kialakulsnak.) A
normlis, natv fehrjeszerkezet ltrejtthez a diszulfidktseknek a polipeptidlnc(ok) meghatrozott pontjai
kztt kell kialakulniuk. A protein diszulfidizomerz enzim feladata a naszcens fehrjelncban megjelen
diszulfidhidak trendezse, a normlis fehrjekonformci kialaktsa (33.3. bra).
33.3. bra - 33.3. bra: A natv polipeptidlncra jellemz diszulfidktsek kialaktsa a

protein diszulfidizomerz segtsgvel
A fehrjekonformcit nem kovalens ktsek is stabilizljk. Ezek kialakulst, a polipeptidlnc korrekt

felcsavarodst chaperone fehrjk katalizljk. A nveked fehrjelnchoz ktdnek, megakadlyozva annak
denaturcijt, aggregtumok kpzdst. A BiP-fehrje (= binding protein, azaz ktfehrje) az
endoplazmatikus retikulum lumennek szolubilis chaperone-ja, a kalnexin pedig transzmembrn fehrje. A
kalretikulin, a BiP-hez hasonlan, a lumenben lokalizld chaperone; feladata a glikozillt fehrjk (l. 34.
fejezet) oligoszacharidjnak ellenrzse, hiba esetn a kijavts biztostsa. A natv fehrjefelcsavarods
elsegtse mellett a chaperonok szerepet jtszanak oligomer protein-komplexek sszeszerelsben is. Az
emltett chaperone-ok minsgellenrz funkcit is elltnak: preferencilisan ktdnek abnormlis
konformcij fehrjkhez, visszatartjk ket az endoplazmatikus retikulumban, meggtolva srlt proteinek
eljutst vgs llomshelykre. A kijavthatatlan konformcis hibval rendelkez fehrjk visszajutnak a
citoszlba (retrotranszlokci), ahol az ubikvitin/proteaszma rendszer takartja el ket (l. 31. fejezet). Ez a
minsgkontroll a sejtre nzve htrnyos kvetkezmnyekkel is jrhat: a cysts fibrosis vagy a familiaris
hypercholesterinemia egyes eseteit az okozza, hogy az rintett gnekben bekvetkezett mutci
megakadlyozza a gntermk eljutst a sejthrtyba (l. 35. s 42. fejezet). Extrm krlmnyek kztt az
endoplazmatikus retikulumnak ez a minsgbiztostsi rendszere tlterheldhet. Ha az endoplazmatikus
retikulumban tlsgosan sok abnormlis konformcij fehrje kpzdik (pl. magas hmrskleten, oxidatv
stressz esetn, vrusfertzs sorn), a sejt fokozott chaperone-termelssel, a proteaszmlis fehrjelebonts
aktivldsval, vgs esetben programozott sejthalllal reagl. A folyamat neve endoplazmatikus retikulum
stressz.
2. Membrnlipidek szintzise a sima felszn

A membrnnvekedshez membrnfehrjk szintzisn kvl lipid molekulk kpzsre is szksg van. A
foszfolipidek, glikolipidek s koleszterin bioszintzise a sima felszn endoplazmatikus retikulumban folyik.
A foszfolipid-szintzis az endoplazmatikus retikulum membrnjnak citoplazmatikus rtegben, a citoszlban

fellelhet komponensekbl trtnik. Az jonnan szintetizlt foszfolipidek elszr ebben a rtegben
halmozdnak fel, majd a foszfolipid-flippz enzim segtsgvel egyes molekulk transzlokldnak az
exoplazmatikus rtegbe (33.4. bra). A sejt tbbi membrnnal hatrolt organelluma ktfle mechanizmussal
tehet szert j foszfolipid molekulkra. Vezikulris transzport tjn a szekrcis tvonal alkotrszei (Golgi-
appartus, szekrcis granulumok, lizoszmk stb.) kapnak j membrnrgikat. A foszfolipid-kicserl
fehrjk viszont az endoplazmatikus retikulum citoplazmatikus lipidrtegbl emelnek ki foszfolipid
molekulkat s a citoszlon keresztl tovbbtjk ket ms organellumok (pl. a mitokondriumok) membrnjba.
188
Klnsen fejlett sima felszn endoplazmatikus retikulumot tartalmaznak azok a sejtek, amelyekben aktv
szteroidszintzis folyik: a herben, a petefszekben, a mellkvesekregben szteroidhormonok, a mjban
epesavak kpzdnek koleszterinbl. A foszfolipidek s szteroidok szintzise bonyolult enzimatikus folyamatok
sorozatbl ll, ezek rszleteivel a biokmia tudomnya foglalkozik.
33.4. bra - 33.4. bra: Foszfolipidek transzlokcija az endoplazmatikus retikulum

membrnban
Ajnlott irodalom
329335, 383405.
Kuznetsov, G., Nigam, S. K. (1998): Folding of secretory and membrane proteins N. Engl. J. Med. 339, 1688
1695.
Matlach, K. E. S., Mothes, W., Rapoport, T. A. (1998): Protein translocation: Tunnel vision. Cell 92, 381390.
Schatz, G., Dobberstein, B. (1996): Common principles of protein translocation across membranes. Science
271, 15191526.
Udvardy A. (2000): Sejten belli transzportfolyamatok. Termszet Vilga 131, 5053.
189
II.: A szekrcis t. Fehrje-
glikozilci s -szortrozs
A mlt szzad vgn idegsejtekben nehzfm-impregncs technikval tett lthatv Golgi egy, a sejtmagot
kosrszeren krlvev hlzatos llomnyt. Sokig preparcis mtermknek tekintettk, majd ltnek
elektronmikroszkpos igazolsa utn funkcijval kapcsolatban alakult ki tancstalansg. Ma mr tudjuk, hogy
a Golgi-komplex az eukariota sejtekben zajl makromolekulris transzport folyamatok egyik irnyt
kzpontja.
1. A szekrcis t
A durva felszn endoplazmatikus retikulumban kpzd szekrcis, lizoszomlis s membrnfehrjk
kismret membrnhlyagok kzvettsvel, vezikulris transzport tjn rik el vgs llomshelyket. A
hromfle fehrje sejten belli szlltst lnyegben ugyanaz a kzs nven szekrcis tnak nevezett
mechanizmus biztostja. Ez az t a durva felszn endoplazmatikus retikulumbl a Golgi-komplexbe vezet, majd
itt vlik szt a lizoszmba, illetve a sejtfelsznre vezet utakra (34.1. bra). A lizoszmk kpzdsvel a 36.
fejezet foglalkozik, itt a szekrci mechanizmust ismertetjk.
Fehrjket minden sejt szekretl (ha mst nem, a krnyez sejt kztti llomny struktrfehrjit), a
mirigysejtek azonban klnsen alkalmasak a szekrci mechanizmusnak vizsglatra. Rvid ideig
[3H]aminosavval jellt hasnylmirigy acinus sejttenyszetet jelletlen aminosav jelenltben tovbb inkublva
(pulse-chase jells) a szekrcis fehrjk sejten belli tja elektronmikroszkpos autoradiogrfival (l. 7.2.
bra) vagy fehrjeszeparcis mdszerekkel figyelemmel ksrhet.
A szekrcira sznt fehrjk az endoplazmatikus retikulum lumenbe kerlnek (l. 33. fejezet), majd az arrl
lefzd, specilis fehrjeburokkal rendelkez transzport vezikulk (n. COPII vezikulk) kzvettsvel a
Golgi-komplexbe jutnak. A Golgi-appartus lapos membrnzskokbl felpl, polaritssal rendelkez
sejtorganellum: cisz oldala az endoplazmatikus retikulum fell fogadja, transz oldala pedig a sejtmembrn fel
tovbbtja a szekretland anyagokat; a transzport teht vektorilis jelleg. A COPII vezikulk a cisz-Golgi
retikulum membrnjval fzionlva tovbbtjk tartalmukat, mely a ciszternk rsvel cisz-, kzps-, majd
transz-Golgi rekeszekk, vgl transz-Golgi retikulumm alakul t. A Golgi-appartuson keresztl halad
fehrjk rsi folyamatokon mehetnek t (pl. glikozilci, l. ksbb). Az egyes ciszternk specifikus
enzimrendszerekkel rendelkeznek ezen rsi mdostsok vgrehajtshoz. Az endoplazmatikus retikulumhoz
tartoz fehrjk visszajuttatsa a Golgi-komplexbl, illetve az egyes Golgi-rekeszek enzimkszletnek
fenntartsa COPI burkolat vezikulkkal trtnik: ezek a ciszterna-maturci sorn a transz-oldalra kerl
Golgi-enzimeket visszajuttatjk eredeti ciszternjukba, vagy az endoplazmatikus retikulumba. A Golgi-
appartus jelenleg leginkbb elfogadott mkdsi modellje szerint teht benne az anterogrd transzport
ciszterna-maturci, a retrogrd mozgsok viszont vezikulris traszport tjn valsulnak meg (34.1. bra).
34.1. bra - 34.1. bra: A szekrcis t: lizoszmk kpzdse, szablyozott s

folyamatos szekrci
190
34. Vezikulris transzport II.: A
szekrcis t. Fehrje-glikozilci s
-szortrozs
A Golgi-komplexbe kerl fehrjk szortrozsa a transz-Golgi retikulumban trtnik. Tovbbi sorsukat a

bennk lev szignlszerkezetek dntik el: ezek lehetnek specifikus aminosavsorrend szignlszekvencik,
meghatrozott konformcij rgik (n. szignlfoltok) vagy oligoszacharidok (pl. a lizoszomlis enzimekre
jellemz mannz-6-foszftot tartalmaz oligoszacharid, l. 36. fejezet). Az egyes fehrjk a transz-Golgi hlzat
meghatrozott rgiiban elhelyezked receptorfehrjkhez ktdnek, gy az ezekbl lefzd vezikulk
ugyanazon helyre sznt fehrjepopulcikat tartalmaznak.
A szekrci ktfle mechanizmussal mehet vgbe (34.1. bra). A szablyozott szekrcival kivlasztott fehrjk
a sejtfelszn alatt szekrcis granulumokban troldnak. Ezek a szemcsk rsk sorn vizet vesztenek, gy
tartalmuk egyre srbb, elektronszrbb lesz. A leadsra sznt fehrjk rse is a szekrcis granulumokban
fejezdik be: proteolitikus hastsok hatsra a proproteinekbl rett fehrjk kpzdnek. Az A, B s C rgibl
ll proinzulinbl pl. endoproteinz hastja ki a kzps C-peptidet, a diszulfidhidakkal sszekapcsolt A s B
peptidlncbl gy kialakul az rett inzulin hormon. Exocitotikus kirlsk a sejtet r stimull hatsra
kvetkezik be: a pancreas acinus sejtjeibl paraszimpatikus ingerlet hatsra rlnek ki az emsztenzimek, az
inzulinszekrcit a vrcukorszint emelkedse idzi el a Langerhans-szigetek sejtjeiben. A transz-Golgi
191
-szortrozs
retikulum s a sejtfelszn kztt krnyezeti hatsoktl fggetlen, transzportvezikulk ltal kzvettett, folytonos,
konstitutv szekrci is vgbemegy. Ez a mechanizmus is juttathat fehrjket az extracellulris trbe: gy
szekretldnak a mtrixfehrjk, a plazmasejtekbl az antitestek, a mjsejtekbl az albumin. A folytonos
exocitzis msik jelentsge a sejtmembrn alkotrszeinek, fehrjknek, lipideknek a ptlsa. Vannak sejtek,
melyekben a sejthrtya egyes rgii eltr sszettelek, ptlsuk a transzportvezikulk clzott exocitzist
ignyli. Ilyen polarizlt sejtek a vkonybl hmsejtjei (34.2. bra): apiklis s bazolaterlis
membrndomnjkbe eltr transzportvezikulk olvadnak bele. Ez a finoman regullt vezikula-szortrozs az
egyik elfelttele a vkonybl normlis mkdshez elengedhetetlen transzepitelilis transzportnak (l. 42.
fejezet).
34.2. bra - 34.2. bra: Vezikulris transzport vkonybl polarizlt epitelilis sejtjeiben
2. Fehrje-glikozilci
Az endoplazmatikus retikulumban s a Golgi-komplexben szmos fehrje glikozilldik: kovalensen kttt
sznhidrtkomponensre tesz szert. A fehrjkhez (s lipidekhez) kttt oligoszacharidok szintzise rendkvl
bonyolult folyamat: tbb szz enzim vesz rszt benne. A glikozilci szekrcis, membrn- s lizoszomlis
fehrjkre jellemz elssorban, de bizonyos citoszl- s magfehrjkhez (pl. transzkripcis faktorokhoz) is
ktdnek cukor molekulk. Az utbbiak esetben egyetlen N-acetil-glukzamin kapcsoldik a fehrjhez,
megvltoztatva, szablyozva annak aktivitst. Az endoplazmatikus retikulumon szintetizld fehrjkhez
kapcsold oligoszacharidok szortroz szignlknt mkdhetnek (pl. a lizoszomlis enzimekben), elsegthetik
a funkcikpes konformci kialakulst, fehrjekomplexek sszeszerelst, a polipeptidlnc stabilizlst,
sejtsejt s sejtextracellulris mtrix kapcsolatok ltestst.
A cukoregysgek kapcsoldst glikoziltranszferzok, az endoplazmatikus retikulum s a Golgi-appartus

integrns membrnfehrji vgzik. Szubsztrtjaik nukleotid-cukor komplexek (pl. CMP-szilsav, UDP-galaktz,
GDP-mannz, stb.): a glikozilcihoz szksges energit a nukleotid s cukor kztti nagy energij kts
hidrolzise biztostja.
A glikoproteineknek kt f tpusa klnbztethet meg (34.3. bra): az N-kts glikoproteinekben a

sznhidrtrsz az aszparagin savamid csoportjhoz, az O-kts glikoproteinekben pedig a szerin, treonin vagy
hidroxilizin hidroxilcsoportjhoz kapcsoldik. A glikoproteinek kt tpusa szmos vonatkozsban eltr
egymstl.
34.3. bra - 34.3. bra: N-kts s O-kts fehrjeglikozilci
192
-szortrozs
2.1. N-kts glikozilci

A folyamat a durva felszn endoplazmatikus retikulumban kezddik. Az oligoszacharid egy poliizoprenoid
tpus membrnlipiden, a dolicholon szintetizldik, majd egszben helyezdik t a kpzd fehrjelncra
(34.4. bra). A dolichol-oligoszacharid prekurzor szintzise a membrn citoszl felli felsznn kezddik, majd
a komplex egy flippz segtsgvel thelyezdik a lumen felli oldalra s a sznhidrtrsz felptse itt fejezdik
be. A ksz, 14 egysgbl ll oligoszacharid prekurzor szigoran meghatrozott szerkezet: 2 N-
acetilglukzamin, 9 mannz s 3 glukz molekula alkotja, pirofoszft hdon keresztl kapcsoldik a
dolicholhoz. Az oligoszacharid prekurzort az oligoszacharid-protein transzferz enzim viszi t a naszcens
fehrjelnc egyik aszparagin oldallncra (34.4. bra). Az N-kts glikoprotein ezutn rsi folyamaton megy
keresztl, melynek sorn egyes cukoregysgek lehasadnak, ugyanakkor tovbbi monoszacharidok is
kapcsoldnak a sznhidrt rszhez. Az rs az endoplazmatikus retikulumban kezddik, a Golgi-ciszternkban
folytatdik s szmos enzimatikus lpsen keresztl vgl is hrom rett oligoszacharid-tpust eredmnyez:
mannzgazdag, hibrid s komplexoligoszacharidokat (34.5. bra).
34.4. bra - 34.4. bra: Az oligoszacharid-protein transzferz reakci
193
-szortrozs
34.5. bra - 34.5. bra: Az oligoszacharid prekurzorbl kpzd rett sznhidrttpusok

az N-kts glikoproteinekben
194
-szortrozs
2.2. O-kts glikozilci

Az O-kts oligoszacharidok kisebb mretek, ltalban csak nhny cukoregysgbl llnak. Ezekre a
sznhidrtrszekre nem jellemz a kzs szerkezet: magn a polipeptidlncon szintetizldnak, cukoregysgek
egyenknt trtn, specifikus glikoziltranszferzok ltal katalizlt hozzadsval. Az O-kts glikozilci a
Golgi-appartusban zajlik.
A glikozilci folyamatai radioaktv cukorprekurzorokkal vgzett jellssel tanulmnyozhatk, mind

elektronmikroszkpos autoradiogrfis, mind fehrjeszeparcis mdszerek alkalmazsval. [ 3H]mannz jells
esetn az endoplazmatikus retikulumban, [3H]galaktz adsa utn pedig a Golgi-komplexben mutathatk ki
elszr radioaktv fehrjk, bizonytva, hogy az N-tpus glikozilci az endoplazmatikus retikulumban, az
oligoszacharid rs s az O-tpus glikozilci viszont dnten a Golgi-appartusban trtnik.
2.3. A glikozilci orvosi jelentsge

A sejtfelsznen elhelyezked glikoproteinek s glikolipidek fontos szerepet jtszanak fiziolgis (sejt-sejt, sejt-
matrix kapcsolatok, immunvlasz) s kros folyamatokban (vrus-fertzs, daganatkpzds) is. A glikozilci
sorn keletkez oligoszaccharidokat alkot mintegy 10 cukormolekula risi szm strukturlis kombincit
hozhat ltre. A glikozillt makromolekulk strukturlis s funkcionlis vizsglata, illetve az ezen kutatsok
alapjn trtn gygyszerfejleszts mr folyik. A funkcionlis glikomika (a glikoproteinek, glikolipidek s
oligoszaccharidok tudomnya) egyike a modern alkalmazott biolgiai kutatsok legperspektivikusabb
terleteinek.
Ajnlott irodalom
Barr, F. A. (2002): The Golgi apparatus: going round in circles? Trends Cell Biol. 12, 101104.
195
-szortrozs
USA, 335339, 405416.
Csaba, Gy. (1995): A sejt mint zskok rendszere. Termszet Vilga 126, 392396.
Farquhar, M. G., Palade, G. (1998): The Golgi apparatus: 100 years of progress and controversy. Trends Cell.
Biol. 8, 210.
Featherstone, C. (1998): Coming to grips with the Golgi. Science 282, 21722174.
Lw P. (2002): Szlltszalag vagy szerelcsarnok? Termszet Vilga 133, 438440.
Maeder T. (2002): Sweet medicines. Scientific American, 2002/7, 2531.
196
III.: Az endocitotikus t
Eukariota sejtekben a vezikulris transzport kt nagy rendszert klnbztetjk meg: a szekrcis s az
endocitotikus utat. A szekrcis t (mellyel az elz fejezet foglalkozott) az endoplazmatikus retikulumbl
indulva a sejtfelszn fel irnyul. Az endocitotikus t ezzel ellenttes folyamat: a sejtmembrnrl lefzd
vezikulknak a sejt belsejbe juttatst, makromolekulk internalizcijt jelenti.
1. Az endocitotikus t
1.1. A felvett molekulk sorsa
Az endocitzis sorn a sejthrtya rintett rgija bespped, majd a folyadkkal telt reg addig mlyl, amg a
kpzd vezikula lefzdik a sejtfelsznrl s a citoplazma belsejbe kerl. Intracellulris mozgst
mikrofilamentumok s mikrotubulusok biztostjk. A vezikulnak s tartalmnak tbbfle sorsa lehet (35.1.
bra).
35.1. bra - 35.1. bra: Az endocitotikus vezikulumok sorsa a sejtben: 1. degradci; 2.

trols; 3. transzcitzis
Degradci. Az endocitotikus vezikula leggyakrabban emsztenzimekkel tlttt primer lizoszmkkal

fuzionl; a kpzd szekunder lizoszmban a felvett makromolekulk ptkveikre hidrolizlnak.
Trols. Az endocitotikus vezikulk nagymret raktroz vezikulv olvadhatnak ssze. gy troldnak

pldul a tyktojsba transzportlt tojssrgja-fehrjk.
Transzcitzis. A sejt egyik oldaln endocitzissal felvett anyagok thaladnak a citoplazmn, majd a msik
oldalon exocitzissal tvoznak. Transzcitzis minden epitelilis sejtben zajlik. gy szvdnak fel pldul intakt
llapotban az anyai ellenanyagok az jszlttek vkonyblhmjn keresztl, vagy kerlnek antitestek az
anyatejbe az emlkapillrisok endoteljn keresztl..
1.2. Az endocitzis tpusai

Fagocitzis. A folyamat sorn a sejt nagymret rszecskket, baktriumokat, vrusokat, elpusztult sejtek
trmelkt internalizlja (rszletek a kvetkez fejezetben).
197
35. Vezikulris transzport III.: Az
endocitotikus t
Pinocitzis. A sejtek felsznrl folyamatosan fzdnek le a citoplazmba kismret vezikulk. A pinocitzis

clja egyrszt a sejtfelszn kzelben elhelyezked, vzben oldott anyagok nem specifikus mdon trtn
felvtele, msrszt viszont az ugyancsak folytonos, nem szablyozott exocitzis ltal megnvelt sejtmembrn
feleslegess vlt komponenseinek visszajuttatsa a sejt belsejbe.
Receptor ltal kzvettett endocitzis. Bizonyos anyagok internalizcija csak akkor trtnhet meg, ha
sejtfelszni specifikus receptorfehrjhez kapcsoldva beindtjk az endocitotikus folyamatot. A ligand-receptor
kapcsolat rendkvl specifikus. A receptor ltal kzvettett endocitzisra szmos pldt ismernk: membrnnal
burkolt vrusok (pl. influenzavrus) gy jutnak be a fertztt sejtbe; a vasszllt transzferrin fehrje felvtele is
gy trtnik a clsejtek ltal. A legalaposabban vizsglt folyamat azonban a koleszterin bejutsa a sejtekbe.
1.3. Az LDL-partikulumok endocitzisa

A szmos biolgiailag fontos szteroidvegylet elanyagul szolgl s mellesleg membrnalkotknt is
eszencilis koleszterin hossz sznlnc zsrsavval szterifiklt formban szlltdik a vrramban. Az LDL-
partikulum (az angol low density lipoprotein, azaz alacsony srsg lipoprotein rvidtse) az ersen hidrofb
koleszterinszter vzoldkony formja: a rszecske belsejt alkot koleszterinsztert egyrteg foszfolipidburok
veszi krl, melybe egyetlen polipeptidlnc, az apolipoprotein B (rviden apoB) fehrje gyazdik be. Az LDL
a koleszterin transzportformja: a sejtek felveszik s felhasznljk. Ha ez nem trtnik meg, felhalmozdik a
vrben, lerakdik az erek falban s atherosclerosis kialakulshoz vezet. Az atheroscleroticus plakkok elbb-
utbb thrombuskpzdshez vezetnek s slyos kvetkezmnnyel jr relzrdst (pl. szvinfarktus, agyi erek
thrombosisa) okozhatnak.
Az LDL-partikulumok a sejthrtya citoplazmatikus felsznt bort klatrinrtegbe gyazott receptorokhoz

kapcsoldnak (35.2. bra). Az LDL-receptor transzmembrn glikoprotein, amely a legtbb sejtben
expresszldik, klnsen nagy szmban a szteroidogn szvetek sejtjeiben. (A mjsejtek epesavakat, a
mellkvesekreg s a gondok sejtjei szteroid hormonokat szintetizlnak.) A ligandkts ltal induklt
endocitzis klatrinnal bevont vezikult eredmnyez, amely a klatrinrteg levlsa utn korai endoszmba olvad
bele. Az ebben uralkod savas pH disszocilja a ligand-receptor ktst, az endoszmrl lefzd
reciklizlvezikulk pedig visszajuttatjk az LDL-receptorokat a sejtmembrnba. Az LDL-partikulumokat
transzportvezikulk tovbbtjk a ksi endoszmba. Ez a Golgi-appartusbl rkez primer lizoszmkkal
fuzionl. Az LDL-partikulumok alkotrszeinek lebontsa a szekunder lizoszmkban megy vgbe. A
lizoszomlis membrnrgikat transzportvezikulk reciklizljk a Golgi-komplexbe. A szabad koleszterint a sejt
membrnkpzsre, szteroid vegyletek szintzisre hasznlhatja fel, vagy ismt szterifiklva raktroz
vezikulkban trolhatja. A koleszterin feedback regultorknt hat: gtolja az endogn koleszterinszintzist,
serkenti a koleszterinsztert szintetizl enzimet s gtolja az LDL-receptor gnjnek transzkripcijt.
Mindezek a hatsok a sejt koleszterin-homeosztzist biztostjk: megakadlyozzk az intracellulris
koleszterinszint kros rtk fl emelkedst.
35.2. bra - 35.2. bra: Az LDL-partikulumok receptor-kzvettett endocitzisa
198
endocitotikus t
1.4. A sejtek koleszterin-felvtelnek veleszletett s szerzett

zavarai
A familiris hypercholesterinaemia autoszomlis dominns rklds krkp. A betegsget okoz mutcik
az LDL-receptor gnjt rintik: megszntethetik a receptor expresszijt, ligandktst, transzportjt az
endoplazmatikus retikulumbl a sejtfelsznre, begyazdst a klatrinrtegbe. A defektus molekulris
mechanizmusai teht vltozatosak, a kvetkezmny azonban minden esetben ugyanaz: az LDL-partikulumok
internalizcija normlis mkds receptorok hinyban cskken vagy megsznik. A vr koleszterinszintje
emelkedik: heterozigtkban az LDL-szint a normlis rtk ktszerese, beteg homozigtkban akr hatszorosa is
lehet. A kvetkezmny az erek korai, slyos atheroscleroticus krosodsa: homozigta betegekben az els
szvinfarktus msflktves korban bekvetkezhet! (Hasonl betegsg alakul ki akkor is, ha a mutci az LDL-
partikulumban ligandknt mkd apoB-fehrje gnjben kvetkezik be.)
A familiris hypercholesterinaemia nem gyakori betegsg, br a heterozigta forma amely ugyancsak fokozott
atherosclerosissal jr incidencija 1/500. Fejlett orszgokban viszont minden msodik ember az
atherosclerosis szvdmnyeiben hal meg. A koleszterin-anyagcsere zavaraiban ugyanis a genetikai okok
mellett egyb, krnyezeti tnyezknek is szerepe van. A vr LDL-szintje jszlttekben igen alacsony, az vek
sorn normlis esetben is tbbszrsre emelkedik. Ennek a szerzett hypercholesterinaeminak egyik oka a
zsrgazdag trend: nemcsak a szervezet koleszterinfelvtelt nveli, hanem a sejtekben cskkenti az LDL-
receptor expresszit, azaz az LDL-partikulumok internalizcijt s a koleszterinfelhasznlst. A receptor-
medilt endocitzis mechanizmusnak s szablyozsnak megismerse j, hatkony gygyszerek
kifejlesztsre ad remnyt. Biztat terpis ksrletek folynak koleszterinszintzist gtl szerekkel (n.
199
endocitotikus t
sztatinokkal), amelyek cskkentik a sejtek szabad koleszterinszintjt. A feedbackszablyozs tjn n az LDL-

receptor-expresszi, ami tarts LDL-cskkenst eredmnyez a vrplazmban s megelzi az atheroscleroticus
plakkok lerakdst.
2. A vezikulris transzport mechanizmusa

Mint az elz fejezetekbl kiderlt, eukariota sejtekben a membrnnal hatrolt kompartmentek lland
sszettelt, mkdkpessgt, az intracellulris fehrjeforgalom jelents rszt a kztk zajl vezikulris
transzportfolyamatok tartjk fenn. A vezikulris transzport ktirny: egyrszt biztostja a fehrjk eljuttatst
clllomsukra (anterogrd transzport), msrszt egyes membrn- s lumenfehrjk visszaszlltst az eredeti,
kiindulsi organellumba (retrogrd transzport). A vezikulris transzport specifikus folyamat: a megfelel
szlltmny kivlogatst a transzportland fehrjk szortroz szignljai s membrnreceptorok kztti
egymsrahats biztostja, a vezikulumok rendeltetsi helykre juttatst pedig clzfehrjk irnytjk.
2.1. A transzportgpezet alkotrszei

A vezikulris transzport rendkvl bonyolult folyamat, melynek biokmiai rszleteit a szekrcis folyamatok
zavarait mutat leszt mutnsok, illetve a vezikulris transzport rekonstrulsra alkalmas sejtmentes
rendszerek vizsglatval csak az elmlt vtizedekben kezdtk megismerni (35.3. bra). A kiinduls helyl
szolgl donor kompartment membrnjnak citoszl felli oldaln fehrjerteg, burok kpzdik (1. lps a 35.3.
brn). Ehhez tbbfle fehrje, energiaforrsknt pedig ATP s GTP szksges. Az ARF (= ADP-ribozilcis
faktor) GTP-kt fehrje, amely sajt membrnreceptorhoz ktdve, adaptinfehrjket kapcsol a donor
membrnhoz. Az adaptinek szerepe a burok strukturlis fehrjinek rgztse a membrnon. A burokrteg
kialakulsa indtja el a membrnkitremkedst, a vezikula sarjadzst (2. lps), melynek eredmnyekppen a
hlyagocska vgl is levlik a donor membrnrl s a citoszlon keresztl megkzelti clpontjt, az akceptor
organellumot (3. lps). A folyamat kritikus lpse a fogad membrn felismerse: ebben a vezikula
membrnjban s az akceptor hrtyban jelenlev, egymst specifikusan felismer transzmembrn clzfehrjk
jtszanak dnt szerepet (35.4. bra). A vezikula megktdst kismret, a membrnba horgonyzott GTP-kt
fehrjk, a Rab-csald tagjai katalizljk; a klnbz membrnok kztt vgbemen vezikulaforgalomban ms
s ms Rab-fehrjk vesznek rszt (eddig a csald mintegy 60 tagjt azonostottk emberben). A vezikula
dokkolsa utn valsznleg chaperone fehrjk kzremkdsvel a burok levlik (4. lps), a vezikula
pedig a citoszlbl rkez ltalnos, nem specifikus fzis fehrjk hatsra beleolvad a fogadmembrnba s
tartalmt az organellum lumenbe rti (5. lps).
35.3. bra - 35.3. bra: A vezikulris transzport lpsei: 1. burkolt membrn-

kitremkeds kpzdse a donor membrnon; 2. burkolt vezikula kpzdse; 3.
dokkols a clorganellumon; 4. buroklevls; 5. a vezikula fzija az akceptor
membrnnal
200
endocitotikus t
A vezikulris transzport molekulris mechanizmusainak tisztzsa termszetesen gyakorlati haszonnal is jrhat.

A lizoszomlis trolsi betegsgek (l. 36. fejezet) kz tartoz Niemann-Pick krrl kiderlt, hogy a mutcik
olyan fehrjk funkcijt rintik, melyek az LDL-partikulumok s membrn-szfingolipidek internalizcijhoz
szksgesek. Az rkletes zavar kvetkeztben a mj, lp, agy sejtjeinek endoszmiban, lizoszmiban
koleszterin s szfingolipidek halmozdnak fel. Ez hallos betegsget okoz. A jvbeni sikeres gnterpia
remnyt adja, hogy szvettenyszeti sejtekben a zavar specifikus Rab fehrjk expresszijval megszntethet.
35.4. bra - 35.4. bra: A membrnfziban rszt vev fehrjk
2.2. A burkolt vezikulk tpusai

201
endocitotikus t
A membrn citoplazmatikus felsznhez tapad fehrjerteg alapjn a transzportvezikulkat kt f tpusba

sorolhatjuk.
Klatrin-bortott vezikulk. Ilyen tpus transzportvezikulk fzdnek le a sejtfelsznrl a receptor-medilt

endocitzis sorn, illetve a transz-Golgi retikulumrl a lizoszmk kpzdsekor (l. 36. fejezet). A
klatrinegysgek polimerizcija szablyos szerkezet, poligonlis hlzatot hoz ltre. A klatrinrteget ARF- s
adaptin molekulk rgztik a membrnhoz. Utbbiak a specifikus receptorfehrjk (pl. LDL-receptor, mannz-
6-foszft-receptor) kivlasztsban s klatrinba gyazsban is rszt vesznek.
Ms borts vezikulk. A klatrinon kvl egyb strukturlis fehrjk is ltrehozhatnak transzportvezikulkat.

gy tnik, sokfle borts ltezik, ezek funkcionlis vltozatossgot is jelentenek; a klnbz tpus vezikulk
jellemzse mg csak kezdeti stdiumban van. A COP-bortott vezikulk az endoplazmatikus retikulum s a
Golgi-ciszternk kztti fehrjeforgalmat bonyoltjk. (Az elnevezs a coat protein, burokfehrje kifejezsbl
szrmazik.) Klnbz fehrjesszettel fedrtegk eltr szerkezetet s funkcit eredmnyez. A burok
trszerkezete kevsb szablyos mint a klatrinborts.
Ajnlott irodalom
Brown, M. S., Goldstein, J. C.: How LDL receptors influence cholesterol and atherosclerosis. Scientific
American 1984/11, 5261.
416423, 557566.
Csaba, Gy. (1996): Egy klnleges transzportfolyamat: az endocitzis. Termszet Vilga 127, 152156.
Libby, P.: Atherosclerosis: the new view. Scientific American, 2002/5, 2937.
Lw, P. (2001): Kelepcbe csalt hlyagocskk. Termszet Vilga 132, 489493.
Rothman, J. E., Orci, L.: Budding vesicles in living cells. Scientific American 1996/3, 5055.
Rothman, J. E. (2002): The machinery and principles of vesicle transport in the cell. Nature Medicine 8, 1059
1062.
Scheckman, R. (2002): SEC mutants and the secretory apparatus. Nature Medicine 8, 10551058.
Schimmller, F., Simon, I., Pfeffer, S. R. (1998): Rab GTPases, directors of vesicle docking. J. Biol. Chem. 273,
2216122164.
202
36. fejezet - 36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
A sejtet klnbz fizikai, kmiai, biolgiai krost hatsok rik, melyekkel szemben bizonyos hatrok
kztt vdekezni kpes. Ebben a fejezetben a sejtvdekezs nhny, citoplazmatikus organellumokhoz kttt
fajtjval foglalkozunk.
1. Xenobiotikumok talaktsa
Az l szervezetek s azok sejtjei sokfle testidegen, nem biolgiai eredet kmiai anyag, xenobiotikum (pl.
gygyszerek, rovarirtk, lelmiszeradalkok) hatsainak vannak kitve. Klnsen veszlyesek az apolros,
lipidtermszet anyagok, hiszen ezek a sejthrtyn keresztl knnyen bejutnak a sejt belsejbe s a lipoprotein
membrnokba beplve toxikus mennyisgben halmozdhatnak fel. Ezeket az anyagokat a sejt csak akkor tudja
hatkonyan kivlasztani, ha elzleg vzoldkonny tette ket. A sima felszn endoplazmatikus retikulum
membrnjnak citokrm P450 enzimrendszere ltja el ezt a funkcit. Ezek az enzimek ubikviterek:
baktriumoktl az emberig minden llnyben jelen vannak. Emlskben egy tbb mint 50 gnbl ll
heterogn gncsald tagjai (CYP-gnek) kdoljk ket. A csald izoenzimei funkci, szubsztrt-specificits,
szveti expresszi s szablyozhatsg szempontjbl is rendkvl sokflk. Egyesek szteroid vegyletek
szintzisben, zsrsavak s egyb termszetes lipidek metabolizmusban vesznek rszt, xenobiotikum-
transzformlst nem vgeznek. Msok f funkcija viszont az idegen anyagok talaktsa, biotranszformcija.
A citokrm P450 enzimek molekulris oxign s NADPH felhasznlsval C-H ktsekbe oxignt ptenek be;
a hidroxilci nveli a molekula vzoldkonysgt:
A biotranszformci msodik lpsben a molekula enzimatikus ton glukuronsavval, knsavval konjugldik,

kijut a sejtbl, majd a vesn t tvozik a szervezetbl.
A citokrm P450 oxigenzok azonban ersen reaktv, toxikus termkeket is eredmnyezhetnek. Ha pldul a
reakci ketts ktst alkot sznatomokat rint, reakcikpes epoxidok kpzdnek:
Az epoxidok makromolekulkkal reaglhatnak; DNS-krost, mutagn hatsuk a sejt malignus

transzformcijhoz, daganatkpzdshez vezethet. A szervezetet r karcinognek dnt rsze eredeti
formjban hatstalan, a biotranszformci sorn alakul t a vgs karcinognn. A citokrm P450 rendszer
aktivlja tbbek kztt a policiklusos aroms sznhidrogneket (36.1. bra), nitrzaminokat hatsos
karcinognekk. A citokrm P450 rendszer teht egyrszt mrgez anyagokat eliminl a sejtekbl, msrszt
viszont rtalmatlan vegyleteket daganatkpz gensekk alakt t.
36.1. bra - 36.1. bra: A policiklusos aroms sznhidrogn benzpirn karcinognn

alaktsa
203
36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
A CYP-gnek kzl egyesek konstitutvan expresszldnak, msokat viszont klnbz anyagokkal induklni
lehet (pl. policiklusos aroms sznhidrognekkel, fenobarbitllal, egyes szteroidokkal stb.). A hats ltalban
tmeneti, esetenknt tbbszzszoros is lehet s a sima felszn endoplazmatikus retikulum hipertrfija ksri.
Mivel a gygyszerek metabolizmust elssorban a mj citokrm P450 rendszere vgzi, ezt az indukcis
jelensget gygyszerrendelsnl figyelembe kell venni. A policiklusos aroms sznhidrognek ltal kivltott
gnindukci mechanizmusa jl ismert: a szteroid hormonok gnregulcis hatshoz hasonlt. A sejtbe jut
xenobiotikum a citoszlban lev Ah (= aril-hidrokarbon) receptorhoz kapcsoldik. A komplex a sejtmagba
transzlokldik s a clgnek specifikus enhancer-rgiihoz ktdve azok expresszijt szablyozza. A
gntermkek kz tartozik az a citokrm P450 izoenzim (az aril-hidrokarbon hidroxilz), amely a policiklusos
aroms sznhidrognek karcinognn aktivlst vgzi.
A szervezet gygyszerekkel szembeni reakcijra a gnexpresszi vltozsai mellett a gygyszer-metabolizmust

vgz enzimek genetikai polimorfizmusa is hatssal van: a gnjeikben jelenlev genetikai varicik
nagymrtkben befolysolhatjk a gygyszerhats erssgt s idtartamt. A farmakogenetika s
farmakogenomika fontos clkitzsei kz tartozik az egyni gygyszerrzkenysg genetikai htternek
tisztzsa, s ezltal a szemlyre szabott gygyszerels lehetsgnek megteremtse.
2. A lizoszmk szerepe
2.1. A lizoszmk tpusai s funkcija
A lizoszmkat az 1950-es vekben de Duve fedezte fel s izollta a mitokondrium frakcibl. A lizoszmk a
sejten belli emszts organellumai. A primer lizoszmk kerek, egyetlen membrnnal hatrolt, ersen
elektronszr vezikulk. Mintegy 50-fle szolubilis savas hidrolz enzimet (foszfatzokat, nuklezokat,
protezokat, lipzokat stb.) tartalmaznak. A hidroltikus enzimek pH-optimumnak (kb. pH 5) megfelel H+-
koncentrcit a membrnban lokalizld aktv protonpumpa fehrjk tartjk fenn: folyamatosan
transzportlnak H+-kat a citoszlbl a lizoszmkba. A primer lizoszmk a lebontand anyagokat tartalmaz
vezikulkkal fuzionlva nagyobb mret, szablytalan alak szekunder lizoszmkat hoznak ltre; a
makromolekulk emsztse ezekben zajlik le.
Szekunder lizoszmk ktfle folyamat eredmnyekppen jhetnek ltre. A heterofgia a sejtbe kvlrl
endocitzissal vagy fagocitzissal bejutott anyagok, krokozk lebontst jelenti. A fagocitzissal kpzdtt
fagoszma primer lizoszmval egyeslve fagolizoszmt alkot. A sejt elregedett, feleslegess vlt
organellumaitl autofgival szabadul meg. A membrnnal hatrolt autofagoszmk primer lizoszmkkal
szekunder lizoszmv olvadnak ssze. Az autoltikus folyamatok fiziolgis s kros krlmnyek kztt (pl.
szvinfarktus sorn) is aktivldhatnak.
204
36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
2.2. A lizoszmk kpzdse

A lizoszomlis hidrolzok az endoplazmatikus retikulumon szintetizldnak, N-kttt oligoszacharidra tesznek
szert, majd a Golgi-komplexben specifikus clzszignlt kapnak (36.2. bra). A mannzgazdag oligoszacharid
egyik mannzhoz enzimatikus ton N-acetilglukzamin-foszft kapcsoldik, majd az N-acetilglukzamin
lehasad s egy mannz-6-foszft (M6P) csoport marad vissza. Az M6P-jellt fehrjk a transz-Golgi
retikulumban membrnreceptorokhoz ktdnek s ilyen mdon elkerlve a szekrcis utakat a Golgi-
komplexrl lefzd klatrin-bortott vezikulkkal szortroz vezikulkba kerlnek. A savas pH disszocilja a
lizoszomlis enzimeket az M6P-receptorokrl; az enzimek primer lizoszmkba kerlnek, a receptorok pedig
vezikulris transzporttal visszajutnak a transz-Golgi retikulumba.
36.2. bra - 36.2. bra: Lizoszomlis enzimek mannz-6-foszft szignljnak kpzdse
2.3. Lizoszomlis trolsi betegsgek

Ha a lizoszomlis emszts zavart szenved, a megfelel makromolekulk szekunder lizoszmkban
halmozdnak fel s slyos zavarokat okozhatnak: trolsi betegsgek alakulnak ki.
A betegsgek egyik fajtjnl egyes enzimek mkdskptelenek. Az rintett gntl s a mutci tpustl
fggen klnbz krkpek eltr slyossg (gyakran letlis) formi alakulhatnak ki. A leggyakoribb trolsi
betegsgben, a Gaucher-krban cerebrozidok, a Tay-Sachs-krban gangliozidok, a Niemann-Pick-krban
szfingomielinek halmozdnak fel.
Elfordul azonban az is, hogy a lizoszmkbl valamennyi hidrolz hinyzik. Ilyenkor vagy az M6P-szintzis
szenved zavart (I-sejt betegsg), vagy az M6P-receptorok mkdskptelenek. Mindkt mutcinak az a
kvetkezmnye, hogy a lizoszomlis hidrolzok, mivel nem kpesek a lizoszmkba transzportldni,
szekretldnak. Az rintett sejtekben emsztetlen anyagokat tartalmaz szekunder lizoszmk halmozdnak fel.
A lizoszmk kpzdsi mechanizmusnak megismerse remnyt ad a trolsi betegsgek hatsos kezelsre.

Ha az M6P-receptorok gnje p, a receptor jelen van a sejtfelsznen. Ilyenkor a szervezetbe juttatott lizoszomlis
enzimek receptor-medilt endocitzissal bejutnak a beteg sejtek lizoszmiba. Klinikai ksrletek szerint ez az
enzimptl terpia hatsos, egyelre azonban rendkvl drga.
3. Peroxiszmk
Minden eukariota sejt tartalmaz a lizoszmkhoz hasonl, kismret, egyetlen membrn ltal hatrolt,
hidrognperoxidot termel s lebont citoplazmatikus organellumokat, peroxiszmkat. A hasonlsg
felletes: a peroxiszmk endoszimbionta eredetek, biogenezisk is a mitokokondriumokra hasonlt (l. 38.
205
36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
fejezet): fehrjik szabad poliszmkon szintetizldnak, majd chaperone fehrjk segtsgvel

transzportldnak a vezikulkba.
A peroxiszmk mintegy 50-fle enzimet tartalmaznak, metabolikus mkdsk sokrt: zsrsavakat oxidlnak,
lipideket (koleszterint, epesavakat, dolicholt, foszfolipideket) szintetizlnak, hidrognperoxidot bontanak. Ebben
a fejezetben trtn trgyalsukat az indokolja, hogy a hidrognperoxid felhasznlsval katalz enzimk
szmos toxikus anyagot kpes oxidlni s ezltal hatstalantani. A peroxiszomlis mkds rkletes zavarai
slyos, gyakran mr gyermekkorban hallt okoz betegsgek.
4. Szabad gykk kpzdse s semlegestse

A szabad gykkpratlan elektronnal rendelkez, instabil atomok, atomcsoportok. Kmiai reaktivitsuknak
ksznheten gyorsan reaglnak ms molekulkkal, puszttst vgezve biolgiai rendszerekben.
Az l sejtben a pratlan elektronok a leggyakrabban O-atomokhoz ktdnek, reaktv oxignszrmazkokat

hoznak ltre. Ennek f oka, hogy a mitokondrium mkdse sorn a molekulris oxign vzz reduklsa
egymst kvet egyelektronos redukcis lpsekben trtnik. Ha a folyamat megakad, reaktv
oxignszrmazkok (szuperoxid, hidrognperoxid, hidroxil szabad gyk) keletkeznek:
Nagy mennyisg reaktv oxignszrmazk kpzdik az endoplazmatikus retikulumban is. A diszulfidktsek

kialakulsa (l. 33. fejezet) sorn molekulris oxign jtssza az elektronakceptor szerept. Jelents szekrcis
aktivitssal rendelkez sejtekben az endoplazmatikus retikulum szabad gyk kpzse az ssztermels 25
szzalkt is kiteheti.
Az oxign szabad gykket a sejt hasznos clra is felhasznlhatja, de hallos veszlyt is jelenthetnek a szmra.
A tlzott szabad gyk termels ltal kivltott cellulris stressz llapotot oxidatv stressznek nevezzk. Jellemzje
a sejt klnbz molekulinak (nukleinsavak, membrnlipidek, fehrjk stb.) oxidatv krosodsa, mely vgs
soron a sejt pusztulshoz vezethet.
4.1. Fagocitzis
Ha egy krokoz (baktrium, vrus) megktdik a fehrvrsejt felsznn, az llbakat nvesztve fagocitlja a
tmadt (36.3. bra). A fagoszma kpzdsvel egyidben membrnjnak citoplazmatikus felsznn tbb
fehrjbl ll komplex, a NADPH-oxidz pl fel. A komplex kialakulsban s aktivlsban fontos szerepet
jtszik egy GTP-kt fehrje (Rac). A NADPH-oxidz enzim transzmembrn alegysgei citokrmok, amelyek a
NADPH koenzimrl elektront transzportlnak a molekulris oxignre: szuperoxid szabad gykk szekretldnak
a fagoszmba. A szuperoxid s a belle msodlagosan kpzd egyb reaktv oxignszrmazkok
(hidrognperoxid, hidroxil szabad gyk, hipoklorit ion) meglik a fagocitlt mikrbt.
36.3. bra - 36.3. bra: A NADPH-oxidz aktivlsnak eredmnyekppen kpzdtt

reaktv oxignszrmazkok elpuszttjk a fehrvrsejt ltal bekebelezett krokozt
206
36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
A lert mechanizmus alapjn rthetv vlik az a rgi megfigyels, hogy fagocitl leukocitk
oxignfogyasztsa nagymrtkben megn (lgzsi robbans). A meglehetsen ritka krnikus granuloms
betegsgben szenved egynekben rkletesen defektv a NADPH-oxidz. Leukocitik hatkony fagocitzisra
kptelenek, slyos, gyakran hallos fertzseknek vannak kitve.
4.2. A szabad gykk makromolekula-krost hatsai

A szabad gykk a sejtben minden makromolekult megtmadnak. A DNS krosodsa mutcikhoz, ezltal
pedig rosszindulat daganatok kialakulshoz vezethet. A fehrjk lnctrst szenvedhetnek, kzttk kovalens
keresztktsek jhetnek ltre. Krosodhatnak a poliszacharidok, glikoproteinek is. A szabad gykk
legfontosabb clmolekuli kz tartoznak a teltetlen zsrsavlncok. A lipidperoxidci sorn a
sznhidrognlncok bonyolult, tbblpses reakcisorozat eredmnyekppen daraboldnak, a
membrnkrosods az endoplazmatikus retikulum, mitokondriumok, lizoszmk degenercijt okozza. A
szabad gykk ltal kivltott citotoxikus hatst fontos kroki tnyeznek tekintik szmos betegsg
(gyomorfekly, atherosclerosis, alkoholos s toxikus mjkrosods stb.) kifejldsben.
4.3. Az oxign szabad gykk semlegestse

A fentiek alapjn rthet, hogy a szmukra egybknt ltfontos oxignnel szemben az aerob szervezetek
hatkony vdekezsi mechanizmusokat voltak knytelenek kifejleszteni. Az antioxidns enzimek kzl a
legfontosabbak a szuperoxid-dizmutzok (SOD-ok), melyek a szuperoxid anionok talaktst vgzik:
2O2 + 2H+ H2O2 + O2
A kpzd, mg mindig veszlyes hidrognperoxidot katalz s peroxidz enzimek bontjk el. A nhny v
alatt megllthatatlanul lass hallhoz vezet kzponti idegrendszeri krkp, az amyotrophis lateralsclerosis
rkletes formjnak htterben az egyik SOD-gn mutcijt azonostottk. A mozgat neuronokban fokozott
lipidperoxidci lp fel, ami idegsejtpusztulshoz, bnulsokhoz vezet. A betegsg lefolysa antioxidns
kezelssel valamelyest ksleltethet. Antioxidnsok (pl. C-vitamin, E-vitamin, karotin, szeln stb.) a
rosszindulat daganatok megelzsben is jelentsggel brhatnak, hiszen cskkentik az oxign szabad gykk
ltal elidzett mutcik szmt.
Ajnlott irodalom
Borek, C: Antioxidants and cancer. Science & Medicine 1997/6, 5261.
Bowers, W. E. (1998): Christian de Duve and the discovery of lysosomes and peroxisomes. Trends Cell Biol. 8,
330333.
207
36. A sejt vdekezsi
mechanizmusai
USA, 423428.
de Duve, C.: The lysosome. Scientific American 1963/5, 6472.
Estabrook, R. W. (1996): The remarkable P450s: a historical onerview of these versatile hemeprotein catalysts.
FASEB J. 10, 202204.
Hansten, P. D.: Understanding drug-drug interactions. Science & Medicine 1998/1, 1625.
Koska, P. (1996): A citokrm P450 enzim szerepe az lvilgban. Termszet Vilga 127, 457461.
Rosen, G. M., Pou, S., Ramos, C. L., Cohen, M. S., Britigan, B. E. (1995): Free radicals and phagocytic cells.
FASEB J. 9, 200209.
Segal, A. W., Abo, A. (1993): The biochemical basis of the NADPH oxidase of phagocytes. Trends Biochem.
4347.
Weinshilboum, R. (2003): Inheritance and drug response. N. Engl. Med. 348, 529537.
208
37. fejezet - 37. Mitokondrium I.:
Felpts s mkds
A lebont folyamatok f clja a sejtben a kmiai ktsekben rejl energia felszabadtsa s ATP formjban
trtn trolsa. Aerob eukariota sejtekben ez a glikolzis folyamatval a citoszlban kezddik (az 1. lps a
37.1. sszefoglal brn): a glukzmolekula tbb enzimatikus lpsen keresztl kt molekula piruvtra bomlik
le. A glikolzis tiszta nyeresge glukzmolekulnknt kt ATP- s kt NADH-molekula. A kpzd piruvt a
mitokondriumba transzportldik s a lebonts s energiametabolizmus tovbbi lpsei, a citromsavciklus (2.
lps, 37.1. bra) s az oxidatv foszforills (3. lps) itt jtszdik le. A glukz aerob lebontsnak
sszegyenlege:
C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O
tiszta nyeresge pedig glukzmolekulnknt 38 ATP-molekula.
1. A mitokondriumok ltalnos jellemzi

A mitokondriumok ketts membrn ltal hatrolt, ltalban megnylt plcika alak, mikromteres tmrj
citoplazmatikus organellumok. A kls membrn sima, a bels viszont lemezek (mitokondrilis krisztk),
ritkbban tubulusok ltal ersen megnvelt felszn membrn. A mitokondriumok szmt s sejten belli
lokalizcijt a sejt energiaignye hatrozza meg. A metabolikusan rendkvl aktv mjsejtekben tbb ezer
mitokondrium is lehet. A sejten bell a nagy energiafelhasznls rgikban halmozdnak fel: az aktv
transzportot folytat vesetubulus sejtekben pldul a bazlis membrn kzelben, osztd sejtben a
mikrotubulusok kztt stb.
A mitokondriumok sejten belli mozgsait a citoszkeleton biztostja: motorfehrjk (miozin, kinezin, dinein)
kzvettsvel mikrofilamentumokhoz, mikrotubulusokhoz kapcsoldnak s ezek mentn vndorolnak a
citoplazmban (l. 39. s 40. fejezet).
2. A mitokondriumok szerkezeti elemei

A mitokondrium kt membrnbl s az ltaluk hatrolt kt kompartmentbl pl fel. Ezek szerkezeti jellemzit
s a bennk zajl anyagcsere-folyamatokat a 37.1. bra foglalja ssze, ersen leegyszerstett formban.
37.1. bra - 37.1. bra: A mitokondrium felptse s metabolikus folyamatai
209
37. Mitokondrium I.: Felpts s
mkds
2.1. Kls membrn

A mitokondrium mindkt membrnja a maga nemben klnleges, ms lipoprotein hrtyktl eltr
tulajdonsgokkal rendelkezik. A kls membrn gazdag a csatornakpz porin fehrjben, mely a hrtyt
szokatlanul teresztv teszi: kb. 10 000 daltonos molekulaslyhatrig a membrn minden
molekula, ion szmra tjrhat.
2.2. Intermembrn tr
210
mkds
A kls s bels hrtya kztti kzeg sszettele a fentiek rtelmben nagymrtkben megegyezik a
citoszlval. A porincsatornkon thatolni kptelen nagy molekulkra elssorban a fehrjkre ez a
megllapts termszetesen nem rvnyes. Az intermembrn tr tartalmaz fehrjket, ezek azonban nem a
porincsatornkon keresztl, hanem aktv transzlokcival kerlnek rendeltetsi helykre (l. 38. fejezet).
2.3. Bels membrn

A mitokondrium bels hrtyja les ellenttben a klsvel nagyfok impermeabilitsval tnik ki, amit
jrszt egy klnleges foszfolipidnek, a kardiolipinnek ksznhet. A bels membrnon keresztl
anyagtranszport csak fehrjk kzvettsvel trtnhet; a foszfolipidrteg ion-impermeabilitsa alapvet
fontossg az ATP-termels szempontjbl (l. ksbb). Ugyancsak fontos a nagy fellet, amit a krisztk
kialakulsa biztost. A bels membrn fehrji hrom f funkcionlis kategriba sorolhatk. A transzport
fehrjk kzl a H+/piruvt szimporter s a H+/foszft szimporter a membrn kt oldala kztti pH-klnbsget
(l. ksbb) hasznlja fel a mitokondrium mkdshez szksges piruvt s foszft felvtelhez. Az ADP/ATP
antiporter ADP-t juttat a mtrixba s a termelt ATP-t transzportlja a citoszlba. A bels membrn nagymret
fehrjekomplexei az elektrontranszportot vgz lgzsi lnc tagjai (I., II., III. s IV. komplex). Az V. komplex
az ATP-t termel ATP-szintz.
2.4. Mitokondrium mtrix

A bels membrn ltal hatrolt teret kitlt rendkvl magas (kb. 50 szzalkos) fehrjetartalm, kocsonys
llomny a mitokondrium mtrix. Tbb szz fle enzimet tartalmaz, amelyek a piruvt- s zsrsavoxidciban,
valamint a citrtciklusban vesznek rszt. A mtrix alkotrszei kz tartoznak a mitokondrium genetikai
appartusnak elemei (DNS, riboszmk, mRNS-ek, tRNS-ek), illetve az azt mkdtet enzimek is (l. 38.
fejezet).
3. Energia-metabolizmus a mitokondriumban
A mtrixba transzportlt piruvt (3 sznatomos sav) koenzim A-hoz kttt, aktivlt ecetsavv (kt sznatomos
sav) oxidldik. Acetil-koenzim A a vgtermke a zsrsavoxidcinak is.
3.1. Citrtciklus
Az acetil-koenzim A oxlecetsavval (4 sznatomos sav) citromsavv (6 sznatom) egyesl, amely tbb
enzimatikus talakulson s kzti termken keresztl a rla elnevezett krfolyamat vgn oxlecetsavv alakul.
Az acetil-koenzim A kpzds s a citrtciklus sorn a lncrvidt lpsek szndioxid-felszabadulssal jrnak.
Trtnik direkt makroergkts szintzis is (GDP GTP), energetikai szempontbl a
legfontosabb jelensg azonban koenzimek reduklsa. A reduklt koenzimek (NADH, FADH2) visszaoxidlsa
biztostja az ATP-kpzs f energiaforrst.
3.2. Oxidatv foszforills: a kemiozmzis mechanizmus

A NADH s FADH2 oxidcijbl szrmaz elektronok a lgzsi lnc komplexein futnak vgig, ekzben
energiaszintjk cskken. Az elektrontranszportlnc utols eleme, a vgs elektronfelvev a molekulris oxign,
amely ilyen mdon redukldva vzz alakul. A lgzsi lnc komplexei az elektronok felszabadul energijt
nem pontosan ismert mdon arra hasznljk fel, hogy protonokat pumpljanak a mtrixbl az intermembrn
trbe. Mivel a membrn ionokra impermeabilis, aktvan metabolizl mitokondriumban a bels membrn kt
oldala kztt meredek protongrdiens alakul ki (37.2. bra). Ez egyrszt pH-grdienst (pH ~ 1 pH egysg),
msrszt potencilgrdienst (V ~ 200 mV) jelent, ezrt elektrokmiai protongrdiensrl beszlnk (37.2.
bra).
37.2. bra - 37.2. bra: A mitokondrium bels membrnjnak kt oldala kztt fellp
elektrokmiai protongrdiens, melynek elektromos eleme a potencil-grdiens, kmiai
komponense pedig a pH-grdiens
211
mkds
A protongrdiens a hajtereje a bels membrnon keresztl foly, a mitokondrium mkdse szempontjbl

vitlis transzportfolyamatoknak (piruvt-, foszftfelvtel, ATP/ADP-csere). F szerepe azonban az, hogy a bels
membrnban lev hatalmas fehrjekomplex, az ATP-szintz mkdshez biztostja a muncit. Az ATP-szintz
kt multiprotein egysgbl ll (37.3. bra): az F0-komplex transzmembrn protoncsatorna: az intermembrn
trbl a mtrixba transzportl H+-ionokat; az F1-komplex katalitikus funkcij: a protonramls hatsra
forgmozgst vgez s a mechanikai energia felhasznlsval ADP-bl s anorganikus foszftbl ATP-t
szintetizl. Ezt a protonram ltal hajtott ATP-szintetizl folyamatot kemiozmzis mechanizmusnak
nevezzk. Hasonl jelleg ATP-termelst biztostanak a kloroplasztisz-membrnon, illetve aerob baktriumok
sejthrtyjn keresztl hat protongrdiensek is.
37.3. bra - 37.3. bra: Az ATP-szintz szerkezete
Ajnlott irodalom
dm, V., Farag, A., Machovich, R., Mandl, J.: Orvosi biokmia. Semmelweis Kiad, Budapest, 4575, 1996.
Cooper, G. M., Hausman, R. E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D. C.,
USA, 433435, 445452.
Grdos Gy., Sarkadi B. (1998): Az ATP az let tzelanyaga. Termszet Vilga 129, 5053.
Goodsell, D. S. (2010): Mitochondrion. Biochem. Mol. Biol. Educ. 38, 134140.
Lehninger, A. L., Nelson, D. L., Cox, M. M.: Principles of Biochemistry. Worth Publishers. New York, 400
478, 542571, 1993.
Scheffler, I. E. (2001): A century of mitochondrial research: achievements and perspectives. Mitochondrion 1,

331.
212
mkds
Stryer, L.: Biochemistry. W. H. Freeman and Company, New York, 349426, 1988.
213
38. fejezet - 38. Mitokondrium II.: A
mitokondrilis DNS s betegsgei
Az eukariota sejtek nukleris genomjuk mellett extrakromoszomlis DNS-t is tartalmaznak: mitokondrilis DNS-
t (mtDNS-t), nvnyi sejtekben pedig a plasztiszok DNS-t is. Az mtDNS mrett s gntartalmt tekintve is
jelents eltrseket mutat a klnbz eukariota llnycsoportokban: evolcija a nukleris genomnl
nagysgrenddel gyorsabban ment vgbe.
1. Az endoszimbizis teria
Ma mr ltalnosan elfogadott az az elmlet, mely szerint a mitokondriumok gy jttek ltre, hogy primitv
anaerob eukariota sejtek aerob prokariotkat kebeleztek be s velk tarts egyttlst, endoszimbizist
ltestettek (l. 1. fejezet). Az eukariota szervezetek evolcija sorn azutn a mitokondrilis gnek nagy rsze
tkerlt a sejtmagba. A mitokondrium genetikai appartusnak azonban maradt nhny olyan jellemzje, amely
altmasztja a prokariota eredetet: a fehrjekdol gnekben nincsenek intronok; a nukleinsav- s
fehrjeszintzis antibakterilis szerekkel gtolhat; egyes fajokban a mitokondrilis mRNS-ek riboszmaktse
Shine-Dalgarno bzisprosodssal trtnik stb.
2. A humn mitokondrilis genetikai appartus

jellemzi
Az emlsk, gy az ember mtDNS-e is a kismret mitokondrilis genomok kz tartozik: 16.5 kilobzis
mret, cirkulris DNS, melynek teljes szekvencija ismert. Egy mitokondriumban 210 azonos DNS-kpia van
jelen a mtrixban, a bels membrnhoz kttten, mitokondrilis nukleoidot alkotva. Mivel egy sejtnek tbb szz
mitokondriuma van, az mtDNS tlagosan 103104 pldnyban fordul el sejtenknt. A petesejt mg ennl is
tbb, mintegy 100 000 mtDNS-molekult tartalmaz, ami a sejt sszes DNS-nek harmadt teszi ki! (Az mtDNS
teht a legnagyobb pldnyszm kromoszmnk.)
A mitokondrilis genomnak s expresszijnak sajtos tulajdonsgai vannak. Az emberi mtDNS kt lncnak

bzissszettele olyan mrtkben eltr egymstl, hogy a kt lnc cziumklorid egyenslyi srsggrdiens
centrifuglssal sztvlaszthat: H (heavy, azaz nehz) s L (light, azaz knny) lncot klnbztetnk meg. Az
mtDNS rendkvl kompakt genomot alkot: nagyon kevs benne a nem kdol rgi, kdol szakaszok pedig
mindkt lncban elfordulnak (38.1. bra). A humn mtDNS kt szokatlanul kismret rRNS-t (12S s 16S
rRNS-t), 22 tRNS-t s 13 mRNS-t kdol gnt tartalmaz. Az utbbiak a bels membrn nhny fehrjjt: a
lgzsi lnc s az ATP-szintz egyes alegysgeit kdoljk. A mitokondrilis genom transzkripcija
szimmetrikus: mindkt DNS-lnc templtknt szolglva teljes hosszsg transzkriptumokba rdik t,
amelyekbl endonukleoltikus hastsok vgjk ki az rett rRNS-eket, tRNS-eket s monocisztronos mRNS-
eket. A mitokondriumban mRNS-splicing nincs, az rett mRNS-ek 5- capet nem tartalmaznak, viszont
poliadenilltak. Az mtDNS replikcija s expresszija a nukleris genomban kdolt, citoszl-riboszmkon
szintetizlt importfehrjk (DNS-, RNS-polimerzok, aminoacil-tRNS szintetzok, riboszomlis fehrjk, stb.)
segtsgvel trtnik. A transzkripci s transzlci termkei a mitokondriumban maradnak: RNS- s
fehrjeexport nincs. Emls mitokondriumokba citoplazmatikus RNS-ek nem importldnak.
38.1. bra - 38.1. bra: A humn mtDNS gntrkpe. (Az rRNS-gneket fekete, a
fekrjekdol szakaszokat szrke rgik, a tRNS-gneket a megfelel aminosav neve
jelzi.)
214
38. Mitokondrium II.: A
A mitokondriumok genetikai kdja eltr az univerzlis kdtl: egyes tripletek ms aminosavat kdolnak a
mitokondriumban s a citoplazmban. Ennek oka az mtDNS rendkvl magas mutcis rtja, ami szmos
tnyezre vezethet vissza. Az oxign redukcja sorn szabad gykk is kpzdnek; az mtDNS-t nem
vdikhisztonok a krost hatsoktl; a gyenge reparcis rendszer nem tud lpst tartani a fokozott DNS-
krosodssal; a mitokondrilis DNS polimerz rossz hatsfok proofreading aktivitssal rendelkezik, nagy
hibaszzalkkal dolgozik. A nukleris DNS-nl mintegy hszszor nagyobb mutcis gyakorisgnak
termszetesen patolgis kvetkezmnyei is lehetnek (l. ksbb), felhasznlhat azonban egyedek, illetve
etnikai csoportok kapcsolatnak tanulmnyozsra. Az emberi faj evolcijnak a vizsglata vezetett az n.
mitokondrilis va-hipotzis fellltshoz. Klnbz npcsoportok mtDNS-szekvenciinak
sszehasonltsbl arra a kvetkeztetsre jutottak, hogy a ma l emberek egyetlen sanytl szrmaznak, aki
kb. 200 000 vvel ezeltt lt Afrikban. (Az elmlet
klnsen pedig a humn mtDNS-fa eredetnek idpontja antropolgus krkben ersen vitatott.)
3. Mitokondrilis fehrjeimport
Nhny bels membrn fehrje kivtelvel (l. elbb) a mitokondrilis fehrjk a citoszlban szintetizldnak
s transzportldnak a mitokondrium megfelel kompartmentjbe. Ez a fehrjeimport szemben az
endoplazmatikus retikulum kotranszlcis transzportjval poszttranszlcis: a teljesen elkszlt
polipeptidlncok jutnak t a mitokondrilis membrnokon. A mitokondrium ATP-termelse ltfontos a sejt
szmra, gy rthet, hogy mindazok a faktorok, amelyek rszt vesznek az organellum biogenezishez
nlklzhetetlen fehrjk importjban, abszolt vitlisak. A fehrjk mitokondriumon belli szortrozst
specifikus szignlszekvencik biztostjk; a 38.2. bra egy mtrixfehrje pldjn keresztl mutatja be a
fehrjeimport-gpezet szereplit.
38.2. bra - 38.2. bra: Mtrixfehrje importja a mitokondriumba
215
A mitokondrilis fehrje szintzise szabad poliszmn trtnik (1. lps). A szignlszekvencia az N-terminlis
vgen helyezkedik el, szignlspecifikus chaperone fehrje ismeri fel s ktdik hozz. A naszcens
polipeptidlnc egyb rgiihoz citoszl chaperone-ok kapcsoldnak s megakadlyozzk kompakt trszerkezet
kialakulst. A fehrjechaperone komplex ezutn a kls mitokondrium membrnban lev receptorfehrjkhez
kapcsoldik (2. lps). A receptor a membrn skjban oldalirnyban mozogva olyan transzmembrn fehrjket
keres, amelyek a bels membrn hasonl fehrjivel egytt transzlokcis csatornt alkotnak (3. lps). ATP-
hidrolzis ksretben a chaperone fehrjk levlnak a komplexrl, a polipeptidlnc pedig transzlokldik a kt
membrnon keresztl (4. lps). A szignlszekvencia pozitv tlts, a protongradiens gy sz szerint
elektroforzissel segti t a csatornn. A transzlokci msik hajterejt mitokondrilis chaperone fehrjk
kpezik: a mtrixban ktdve a transzlokld fehrjelnchoz szinte behzzk azt a mitokondrium belsejbe. A
szignlszekvencit mtrix protez hastja le (5. lps), majd chaperone-ok asszisztlsval kialakul a
funkcikpes fehrje trszerkezete (6. lps).
4. Mitokondrilis betegsgek
Az mtDNS nagy rsze kdol szekvencia. Mutcija ami brmelyik gntpusban bekvetkezhet csaknem
mindig negatv kvetkezmnnyel jr: az mRNS-kdol gnek a lgzsi lnc nhny peptidlncnak szintzist
irnytjk, az rRNS- s tRNS-gnek pedig az ezek szintzist vgz transzlcis appartust. Brhol trtnt a
mutci, az eredmny ugyanaz: az ATP-kpzs cskkense. Az mtDNS mutcii elssorban azokat a szerveket
krostjk, amelyek mkdse klnsen energiaignyes (38.1. tblzat).
38.1. tblzat - 38.1. tblzat: Az mtDNS-mutcik kvetkezmnyei az egyes szervekben

Szerv Rendellenessg
216
Szerv Rendellenessg
Agy grcsrohamok, ataxia, dementia
Vzizom gyengesg, fradkonysg, myopathia
Szvizom cardiomyopathia, vezetsi zavar
Szem retinopathia, ltideg neuropathia, vaksg
Mj hepatopathia
Vese glomerulopathia
Pancreas diabetes mellitus
Bels fl hallszavar
Az els humn mtDNS-mutcit 1988-ban rtk le. Azta tbb mint 100 emberi betegsg patogenezisben trtk
fel mtDNS-krosods szerept. A mitokondrilis betegsgek nem ritkk (tlagosan 1 eset jut 10 000 emberre). A
krkpek nagy szma, viszonylagos gyakorisguk s a tudomnyterleten az elmlt vekben tapasztalt gyors
fejlds alapjn nem meglep, hogy ma a klinikai genetiknak ezt az gt mr csak mitokondrilis medicinaknt
emlegetik. Az mtDNS-betegsgek kt nagy osztlyba sorolhatk, a harmadik mitokondrilis betegsgcsoportot
a sejtmag DNS mutcii okozzk.
4.1. rkld mitokondrilis betegsgek

Az mtDNS csrasejt-mutcii rkld krkpeket hozhatnak ltre. Ezekre a betegsgekre a maternlis
rklds jellemz: a petesejt tbb szzezer mtDNS-molekulja hinytalanul jelen van a zigtban is, a hm
ivarsejt mitokondriumai azonban nagyrszt elvesznek a megtermkenyts sorn, csak a sejtmag egyesl a
petesejttel. A mitokondrilis betegsgeket ezrt csak az anya rkti tovbb. Az rintett egyedekre ltalban az
jellemz, hogy sejtjeikben normlis vad tpus s mutns mtDNS-molekulk egytt vannak jelen; a jelensg
neve heteroplazmia. A mitotikus osztdsok sorn a sejtek tbb ezer normlis s kros mtDNS-molekulja
vletlenszeren oszlik el az utdsejtek kztt: a tnetek megjelense a heteroplazmia mrtktl fgg (n.
kszb hats), jellegk s slyossguk nehezen jsolhat meg, rendkvl vltozatosak. Az mtDNS-mutci
gyakran tbb szerv mkdst is krostja; a mitokondrilis betegsgek ltalban multiszisztms krkpek.
A tnetek a korral egyre slyosabb vlnak. Ennek oka, hogy a sejtekben szomatikus mutcik is
felhalmozdnak az mtDNS-ben, ami az oxidatv foszforilcit tovbb cskkenti. Az rkld mitokondrilis
betegsgekre pldaknt a Leber-fle hereditaer opticus neuropathit emltjk. Ez volt az els krkp, melyet az
mtDNS pontmutciira vezettek vissza. Ktoldali ltideg-sorvads, lttrkiess alakul ki, mely vgl teljes
vaksghoz vezethet.
4.2. Szerzett mitokondrilis betegsgek

A testi sejtekben felhalmozd szomatikus mtDNS-mutcikszomatikus heteroplazmit hoznak ltre. Az
rintett szvetekben cskken az oxidatv foszforilci s ez degeneratv betegsgekhez vezethet. Szomatikus
mtDNS-mutcikat talltak a diabetes mellitus egyes tpusaiban, a mozgszavarokkal jr Parkinson-krban, az
id eltti dementia kpben megjelen Alzheimer-kr egyes fajtiban. Mitokondrilis DNS-krosodst okoz az
AIDS kezelsben hatsosnak tallt AZT (azidotimidin) is.
ltalnosan elfogadott nzet, hogy az mtDNS szomatikus mutciinak felhalmozdsa hozzjrul a fiziolgis
regeds folyamathoz is. Mivel az mtDNS-mutcik f okozi az oxign szabad gykk, felhalmozdsuk
redox terpival ksleltethet. Hidrofb (pl. E vitamin, karotinoidok) s vzoldkony (pl. C vitamin)
antioxidns szerek rendszeres szedse bizonyos vdelmet nyjthat az mtDNS-mutcik felhalmozdsval
szemben. Elvi terpis lehetsg az rintett sejtek heteroplazmijnak eltolsa a normlis homoplazmia
irnyba. Ismert pontmutci esetben pldul a kros mtDNS-hez hibridizl oligonukleotid segtsgvel
szelektven gtolhat lehet a mutns mtDNS replikcija. Ezek a gnterpis beavatkozsok mg csak korai
ksrleti stdiumban vannak.
4.3. A nukleris DNS mutcii ltal okozott mitokondrilis

betegsgek
217
A mintegy 1000 mitokondrilis fehrje 99 szzalkt a sejtmag kdolja, citoszl riboszmk szintetizljk s
fehrjeimporttal jutnak a mitokondriumokba. Az mtDNS a nukleris DNS rabszolgja: a mitokondrilis
genetikai appartus valamennyi fehrjje az organellumon kvlrl szrmazik. Egyre tbb olyan mitokondrilis
betegsget rnak le, melyet a lgzsi lnc, az mtDNS replikci vagy a fehrjeimport enzimeinek,
fehrjefaktorainak nukleris gnjeiben bekvetkezett mutcik okoznak. Ezekre a betegsgekre is az ATP-
szintzis cskkense ltal kivltott tnetek jellemzk, az rklds azonban nem maternlis, hanem a mendeli
trvnyszersgek rvnyeslnek.
Ajnlott irodalom
Butler, J. M., Levin, B. C. (1998): Forensic applications of mitochondrial DNA. TIBTECH 16, 158162.
435444.
DiMauro, S., Schon, E. A. (2003): Mitochondrial respiratory-chain diseases. N. Engl. J. Med. 348, 26562668.
Johns, D. R. (1995): Mitochondrial DNA and disease. N. Engl. J. Med. 333, 638644.
Lightowlers, E. N., Chinnery, P. F., Turnbull, D. M., Howell, N. (1997): Mammalian mitochondrial genetics:
heredity, heteroplasmy and disease. Trends Genet. 13, 450455.
Luft, R. (1994): The development of mitochondrial medicine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 87318738.
Martinus, R., Ryan, M. T., Naylor, D. J., Herd, S. M., Hoogenraad, N. J., Hoj, P. B. (1995): Role of chaperones
in the biogenesis and maintenance of the mitochondrion. FASEB J. 9, 371378.
Sfrny E., Csngei V., Jromi L., Masz A., Magyari L., Sipeky Cs., Melegh B. (2007): A mitokondrilis DNS
s mutcii: jabb ismeretek egy j terleten. Orvosi Hetilap 148, 971978.
Venetianer P. (1998): Az emberi mitokondriumok genetikja. Termszet Vilga 129, 486488.
Wallace, D. C.: Mitochondrial DNA in aging and disease. Scientific American 1997/8, 2229.
218
39. fejezet - 39. Citoszkeleton I.:
Mikrofilamentumok
Az eukariota sejtek citoplazmja bonyolult, fehrjefonalakbl ll hlzatot tartalmaz, melyet citoszkeletonnak
neveznk. Nevbl sejtheten ennek a rendszernek egyik f feladata, hogy strukturlis vzat alkotva
meghatrozza a sejt alakjt. Egyes elemei biztostjk a sejt aktv mozgst, illetve az intracellulris
organellumok transzportjt, valamint a sejtosztdssal kapcsolatos mozgsokat s alakvltozsokat.
A citoszkeletont hrom nagy fonalrendszer alkotja: a mikrofilamentumok 7 nm tmrj aktinfonalakbl llnak,

a mikrotubulris rendszert 25 nm tmrj tubulincsvecskk alkotjk, mg az intermedier filamentum
rendszerre (rosttmr: 10 nm) vltozatos fehrjesszettel jellemz. A hrom fonalrendszer kzs jellemzje,
hogy kisebb fehrjeegysgekbl ll, melyeket nem kovalens ktsek tartanak ssze. A citoszkeleton ezen
rendszerei, br egymssal szoros kapcsolatban vannak, morfolgiai, biokmiai s funkcionlis szempontbl jl
elklnthet entitsokat alkotnak.
1. A mikrofilamentum-rendszer
1.1. Az aktinfilamentumok szerkezete s polimerizcija
A mikrofilamentum-rendszer f komponense az aktin, mely az eukariota sejtekben a legnagyobb
mennyisgben jelenlev fehrje. Emls sejtekben tbbfle aktin izoforma klnbztethet meg: a hattag
gncsald egyes gnjei az izomszvetek aktinjt kdoljk, msok termkei pedig ubikviter fehrjk, klnbz
szvetek mikrofilamentum struktrit alkotjk. A globulris monomrekknt szintetizld G-aktin egysgek F-
aktin filamentumokk polimerizldnak (39.1. bra). Elszr nhny monomr kpez komplexet (nukleci),
majd ehhez a maghoz kapcsoldnak tovbbi G-aktin molekulk (elongci). A nveked
mikrofilamentumban az egymshoz nem kovalens ktssel kapcsold monomerek kt sorban helyezkednek el;
ezek egymsba csavarodva kettshlix-szer szerkezetet alkotnak. A filamentum polaritssal rendelkezik: egyik
vge (a plusz vg) gyorsabban nvekedik, mint a msik (mnusz vg). Az aktin-polimerizci valjban
reverzibilis folyamat: a szabad G-aktin koncentrcijtl fggen elbb-utbb egyenslyi llapot alakul ki,
amelyben a lncvgekrl ugyanannyi monomer vlik le mint amennyi kapcsoldik (39.1. bra). A
mikrofilamentumok teht dinamikus struktrk: a kzeg monomerkoncentrci-vltozsaitl fggen llandan
nvekednek vagy zsugorodnak.
39.1. bra - 39.1. bra: Az aktin-polimerizci mechanizmusa
A mikrofilamentum-kpzds az n. taposmalom (angol kifejezssel treadmilling) mechanizmussal

jellemezhet (39.2. bra). Ennek lnyege, hogy ltezik olyan szabad G-aktin koncentrci, mely a plusz vgen
nvekedst, a mnusz vgen pedig depolimerizcit okoz. A G-aktin monomerek ATP-t ktve kapcsoldnak a
filamentum plusz vghez, majd az ATP hidrolizl s ez kedvez a mnusz vgen aktin/ADP-komplexek
levlsnak. Az aktin-monomerek teht lassan vgighaladnak a mikrofilamentumon, a plusztl a mnusz vg
irnyban.
39.2. bra - 39.2. bra: A mikrofilamentum-kpzds taposmalom mechanizmusa

(treadmilling)
219
39. Citoszkeleton I.:
Mikrofilamentumok
A mikrofilamentum polimerizcidepolimerizci szablyozhat folyamat. Az aktinkt fehrjk kzl a

formin a nuklecit, az Arp2/3 elnevezs fehrje a filamentumok elgazst, a kofilin pedig depolimerizcijt
serkenti. A glszolin ksz mikrofilamentumokat hast el s a csonkok plusz vghez kapcsoldva gtolja
polimerizcijukat.
A mikrofilamentumok mkdsnek vizsglatra gtlszereket hasznlnak: a citohalazin a filamentumok

polimerizcijt, mg a falloidin a depolimerizcit blokkolja.
39.1. tblzat - 39.1. tblzat: Nhny aktinkt fehrje

Fehrje Funkci
formin filamentum-polimerizci serkentse
tropomiozin filamentum-stabilizls
glszolin filamentum-hasts
kofilin filamentum-depolimerizci serkentse
profilin G-aktin kts
fimbrin, villin, -aktinin filamentum-kteg keresztktse
filamin filamentum-hlzat keresztktse
Arp 2/3 (actin-related filamentum-elgazs
protein)
miozin motorfehrje
disztrofin, spektrin filamentum membrnhoz ktse
vinkulin, talin filamentum integrinhez ktse (l. 43. fejezet)
kateninek filamentum vdezmoszmhoz ktse (l. 41.
fejezet)
1.2. Miozinok szerepe a mikrofilamentumok mkdsben

A miozin-fehrjk aktin-aktivlt ATPzok, melyek molekulris motorknt jrulnak hozz a mikrofilamentum-
rendszer mozgat funkcijhoz. Emls sejtekben gncsald termkei: tbb mint tzfle izoformt azonostottak
eddig. Legtipikusabb kpviseljk a II. tpusmiozin (39.3. bra), mely izomszvetekben s ms sejttpusokban
is expresszldik. A II. tpus miozin kt azonos nehz lncbl s ngy knny lncbl felpl komplex. A
nehz lncok globulris feji domnje aktinkt s ATP-kt rgit tartalmaz, -heliklis farkuk pedig egymsba
csavarodik.
39.3. bra - 39.3. bra: A II. tpus miozin szerkezete
220
Mikrofilamentumok
A miozin-fehrjk funkcijukat gy ltjk el, hogy ATP hidrolzise kzben elmozdulnak a mikrofilamentum
mentn, annak plusz vge irnyba (39.4. bra). A miozin feji rgijval aktinfilamentumhoz ktdik. ATP-
kts hatsra ez a kapcsolat meglazul (1. lps). A miozin ATPza hidrolizlja az ATP-t, az ezltal okozott
konformcivltozs a miozinfejet az aktinrost plusz vge fel mozdtja, majd j aktinmiozin kontaktus jn
ltre (2. lps). Az aktinfilamentum s a miozinkomplex elcsszik egyms mellett (3. lps), majd az ADP
levlsval helyrell az eredeti llapot, de ekkor a kt fehrjestruktra egymshoz viszonytott helyzete mr
megvltozott (4. lps). Az aktinmiozin komplex ltal ltrehozott mozgs hajtereje teht lnyegben a
miozin-fejdomn ATP ltal kivltott ciklikus konformcivltozsa.
39.4. bra - 39.4. bra: A miozinmkds modellje
221
Mikrofilamentumok
Az aktinrostok s miozinkomplexek kztt lejtszd, a fentiekben ismertetett cssz filamentum modellt az

izomkontrakci mechanizmusra lltottk fel, de rvnyes ms mikrofilamentum-mozgsokra is (pl. a
citokinzis [l. 19. fejezet] kontraktilis gyrjnek a mkdsre). A sejtorganellumok transzportja sorn az I.
tpus miozin fehrje farki rgijval a vezikula membrnjhoz, feji domnjvel pedig mikrofilamentumhoz
kapcsoldik (39.5. bra). A rost plusz vgnek irnyban mozogva hzza maga utn a transzportland
organellumot.
39.5. bra - 39.5. bra: Vezikulris transzport mikrofilamentum mentn
222
Mikrofilamentumok
1.3. A mikrofilamentumok szervezdse

Az F-aktin a citoplazmban ktfle struktrt kpes ltrehozni: ktegeket s hlzatot; hogy melyik alakul ki,
azt a mikrofilamentumokat sszetart keresztkt fehrje tulajdonsgai dntik el (39.6. bra).
Az aktinktegben prhuzamosan fut mikrofilamentumokat fznek ssze aktinkt fehrjk (pl. fimbrin, -
aktinin; 39.6.A. bra). Ilyen ktegek figyelhetk meg pldul szvettenyszeti sejtek citoplazmjban
(stresszrostok) vagy a vkonybl-hmsejtek felsznt nvel mikrobolyhokban (l. ksbb).
Az aktinhlzatokban egymst keresztez mikrofilamentumok szvevnyt nagymret, flexibilis keresztkt

fehrjk (pl. filamin, 39.6.B. bra) stabilizljk. Ilyen struktrk alakulnak ki pldul a sejtmembrn alatt
kifeszl kortiklis hlzatban, mely a sejthrtya bels felsznvel is intim kapcsolatba kerl.
39.6. bra - 39.6. bra: Aktinktegek (A.) s aktinhlzat (B.) szerkezete
1.4. A mikrofilamentum-rendszer s a sejtmembrn kapcsolata

Az aktinfilamentumok kiterjedt kapcsolatokat tartanak fenn a sejtmembrnnal. A sejtet a krnyez sejtekhez
vagy az extracellulris mtrixhoz kt sejtmembrnkpletek (pl. vdezmoszma, foklis adhzi) s a
citoszkeleton viszonyval ksbb foglalkozunk.
A Duchenne-fle muscularis dystrophia fontos orvosi pldjt kpviseli a membrn s az aktin-citoszkeleton

kztti kapcsolat jelentsgnek. A Duchenne-kr X-kromoszmhoz kttt, recesszven rkld betegsg. Az
223
Mikrofilamentumok
rintett fikban progresszv izomdegenerci lp fel, ami megllthatatlanul vezet mozgskptelensghez, majd
a lgzizmok elgtelensge kvetkeztben korai hallhoz. A gnt, melynek mutcija a betegsget okozza (a
jelenleg ismert legnagyobb, mintegy 2.5 milli bzisprbl ll gn) 1986-ban klnoztk. A normlis gn ltal
kdolt disztrofin fehrje az izomsejt aktinfilamentumait horgonyozza ki a sejthrtya nagymret multiprotein
komplexeihez, rajtuk keresztl pedig az extracellulris mtrixhoz (39.7. bra). Felttelezik, hogy ez a kapcsolat
vdi meg az izomsejt membrnjt a kontrakci sorn fellp vonglstl. Duchenne-krban az izomsejtekbl
hinyzik a disztrofin, ennek eredmnye az izomsorvads. A gn klnozsa termszetesen lehetv tette
molekulris diagnosztikai tesztek kidolgozst a hordoz nk felkutatsra, illetve intrauterin diagnzisra.
39.7. bra - 39.7. bra: A disztrofin fehrje funkcija
A sejthrtya s a citoszkeleton-rendszer specilis kapcsolatait jelentik a membrn aktintartalm kitremkedsei.

Ezek kz tartoznak a mikrobolyhok (mikrovillusok, 39.8. bra). Ezek tengelyben keresztkt fehrjkkel
(fimbrin, villin) sszetartott, a sejtmembrnhoz s a mikrovillus cscshoz s alapjhoz is rgztett aktinktegek
futnak. Szerepk a mikroboholy mechanikai stabilitsnak biztostsa. Aktinalap kpzdmnyek a fagocitzist
lebonyolt llbak (pszeudopodiumok), illetve az egyes sejtek araszol mozgst biztost
citoplazmalemezek (lamellipodiumok) s citoplazmanylvnyok (filopodiumok) is.
39.8. bra - 39.8. bra: A mikrovillusok szerkezete
224
Mikrofilamentumok
Ajnlott irodalom
Bretscher, A. (1991): Microfilament structure and function in the cortical cytoskeleton. Ann. Rev. Cell Biol. 7,
337374.
Campbell, K. P. (1995): Three muscular dystrophies: Loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage. Cell 80,
675679.
473496.
Csaba, Gy. (1997): Mozgs a sejtben, a sejt mozgsa. Termszet Vilga 128, 6872.
Ehmsen, J., Poon, E., Davies, K. (2002): The dystrophin-associated protein complex. J. Cell Sci. 115, 2801
2803.
Mitchison, T. J., Cramer, L. P. (1996): Actin-based cell motility and cell locomotion. Cell 84, 371379.
225
40. fejezet - 40. Citoszkeleton II.:
Intermedier filamentumok s
mikrotubulusok
1. Intermedier filamentumok
A citoszkeletonnak ez a rsze kzepes vastagsg fehjefonalakbl pl fel. Ellenttben a
mikrofilamentumokkal s a mikrotubulusokkal, az intermedier filamentumok nem vesznek rszt a sejt
mozgsainak, szaporodsnak folyamataiban, hanem ers mechanikai vzat biztostanak a sejt szmra.
1.1. Az intermedier filamentumok organizcija

A mikrofilamentumok (l. 39. fejezet) s mikrotubulusok (l. ksbb) egymshoz nem-kovalens ktssel
kapcsold, globulris alegysgekbl plnek fel. Az intermedier filamentumok monomer fehrji viszont
plcikaszer -heliklis molekulk, melyek kt vgn kismret, globulris feji s farokrgi helyezkedik el
(40.1. bra). Kt parallel orientcij, egymsba csavarodott fehrje dimert, antiparallel dimerek pedig
tetramert, azok protofilamentumokat alkotnak, melyek azutn ers, ktlszer filamentumokk sodrdnak ssze.
Ezek a filamentumok, eltren a mikrofilamentumoktl s mikrotubulusoktl, polaritssal nem rendelkeznek:
nincs plusz s mnusz vgk. Az intermedier filamentumok kpzdsnek, felplsnek a mechanizmusa
kevss ismert, az azonban valszn, hogy szemben a citoszkeleton ms elemeivel sem ATP-t, sem GTP-t
nem ignyel. Meglehetsen stabil kpzdmnyek. Nem jellemz rjuk a dinamikus instabilits, bizonyos
krlmnyek pldul foszforilci hatsra azonban szteshetnek, majd jra felplhetnek. Ez trtnik
pldul a lamin s vimentin hlzattal a sejtosztds sorn.
40.1. bra - 40.1. bra: Az intermedier filamentumok szerkezete
226
40. Citoszkeleton II.: Intermedier
filamentumok s mikrotubulusok
Az intermedier filamentumok sr hlzatot alkotnak a sejten bell, mely a maghrtyval, a mikrofilamentum

s a mikrotubulus rendszerrel, a sejtmembrn dezmoszmival (l. 41. fejezet) specilis ktfehrjken keresztl
kapcsoldik.
1.2. Intermedier filamentum fehrjk

Ebbe a fehrjecsaldba tbb mint 60-fle, hasonl alapszerkezet protein tartozik. Az egyes fehrjk a
laminok kivtelvel, melyek minden sejtben jelen vannak szvetspecifikus mdon expresszldnak.
A keratinok nagy csaldja mintegy 30 klnbz izoformt tartalmaz. Ezek egy rsze szarukpzdmnyeket
(szr, krm) alkot (gynevezett kemny keratinok), a citokeratinok pedig az epitelilis sejtek
citoszkeletonjnak komponensei (lgy keratinok). A vimentin ktszveti s sima izomsejtek, fehrvrsejtek, a
dezmin az izom intermedier filamentuma. Specifikus fehrji vannak a gliasejteknek, a krnyki idegrendszer
neuronjainak (periferin) s a kzponti idegrendszer idegsejtjeinek (neurofilamentumok). Korai fejldsk sorn
az idegsejtek -internexint, az ssejtek pedig nesztineket expresszlnak. Az intermedier filamentumok
csaldjba tartoznak a laminok is, melyek a marginlis kromatint rgztik a maghrtya bels felsznhez.
1.3. Intermedier filamentum betegsgek

Intermedier filamentumokat kdol gnek mutcijt azonostottk nhny rkld betegsg htterben. Az
epidermolysis bullosa simplex degeneratv brbetegsg, melyet citokeratin-gn mutcija okoz. Az rintett
hmsejtek citoszkeletonja meggyengl s enyhe mechanikai stressz (pl. drzsls) hatsra is brhlyagosods
lp fel. A familiris cardiomyopathia egyes eseteiben dezminmutcit talltak. Az amyotrophis lateralsclerosis
htterben multiplex genetikai s krnyezeti tnyezk hzdhatnak meg. Az esetek egy rszben
neurofilamentum-gnt rint a mutci, aminek kvetkeztben neurofilamentum-aggregtumok kpzdnek, fleg
a gerincvel motoneuronjaiban. Az idegsejtek progresszv pusztulsa izomatrophit, bnulsokat, vgl hallt
okoz. Hasonl kvetkezmnyekkel jrhat az egyik szuperoxid-dizmutz izozim gnjnek mutcija is (l. 36.
fejezet): a felszaporod szabad gykk oxidatv keresztktseket hozhatnak ltre a neurofilamentumok kztt, a
fentihez hasonl eredmnnyel.
2. Mikrotubulusok
A citoszkeleton harmadik nagy rendszert 25 nm tmrj reges plcikk, a mikrotubulusok alkotjk. Ez a
rendszer a sejt alakjnak meghatrozsban s mozgsainak irnytsban is rszt vesz. Egyes kpletei (pl. a
csillk, flagellumok gerince) stabil struktrk, msok azonban (pl. az osztdsi ors, az organellumok
transzportjt vgz mikrotubulusok) llandan vltoz, dinamikus kpletek.
2.1. A mikrotubulusok szerkezete

A mikrotubulusok falt kt globulris fehrjemolekula, az - s -tubulin heterodimerjei alkotjk (40.2. bra). A
felplt csvecske falt 13, prhuzamosan fut, alternl - s -tubulin molekulkbl ll protofilamentum
kpezi. Hasonlan a mikrofilamentumokhoz, a mikrotubulusok is polaritssal rendelkeznek: gyorsan nv plusz
vget s lassan nv mnusz vget klnbztetnk meg rajtuk. A csvecskkhez kapcsold mikrotubulusokhoz
asszocilt fehrjk kpzdsket segtik, illetve stabilizljk ket. Ezek egyike az idegsejtek axonjaiban a tau
fehrje, melynek jelentsgt az adja, hogy Alzheimer-krban felhalmozdik az rintett agyterleteken.
40.2. bra - 40.2. bra: A mikrotubulus szerkezete
227
2.2. Dinamikus instabilits

Az aktinfilamentumokhoz hasonlan a mikrotubulusok is dinamikus struktrk: a krlmnyektl fggen
nvekednek vagy zsugorodnak. Kpzdsk a nuklecival kezddik, ami a citoplazma meghatrozott
rgijban, a mikrotubulus organiztor centrumban (MTOC) megy vgbe. llati sejtekben ez ltalban a
centroszma (40.3. bra), amely kt egymsra merleges hengerbl, a centrilumokbl s az azt krlvev
amorf pericentriolris anyagbl ll (l. 19. fejezet). Az utbbiban lokalizld harmadik tubulinfehrje, a -
tubulin -heterodimereket megktve nuklecis rgiknt szolgl. A kpzd mikrotubulusok mnusz vge a
pericentriolris anyagba gyazdik, a plusz vg pedig a sejt perifrija fel nvekszik azltal, hogy -
dimer/GTP komplexeket kt meg. Ha a GTP GDP-v hidrolizl, a tubulinmolekulk hajlamoss vlnak a
disszocicira, a mikrotubulus rvidl.
40.3. bra - 40.3. bra: A centroszma szerkezete
228
A mikrotubulusok dinamikus vltozsait gtl szerek az osztdsi orsra kifejtett hatsukkal blokkoljk a
sejtszaporodst. A mikrotubulus-polimerizcit gtl kolhicin, vinkrisztin, vinblasztin daganatok
kemoterpijban hasznlatos szerek. Antitumor szerknt alkalmazzk a taxolt is; ez a mikrotubulusok
stabilizlsval gtolja a sejtosztdst. Ms mikrotubulusra hat szerek gombal (pl. grizeofulvin) vagy
fregirt hatsak.
2.3. Mikrotubulus motorfehrjk

A mikrotubulusok abban is hasonltanak az aktinfilamentumokhoz (l. 39. fejezet), hogy hozzjuk ATP-hidrolzis
ltal hajtott fehrjk kapcsoldhatnak s rajtuk elmozdulva organellum-transzportot vgezhetnek. Ilyen
motorfehrjk a kinezin- s dineincsald tagjai. A kinezin-fehrjk nagymret komplexek (40.4. bra), melyek
globulris feji domnjeikkel mikrotubulushoz, farokrgijukkal pedig membrnvezikulkhoz ktdnek s
ltalban a mikrotubulus plusz vge irnyba, teht a sejt szli rsze fel transzportljk ket. Az ugyancsak
tbb alegysgbl ll dineinek hasonl mdon mkdnek, de szlltmnyukat a mikrotubulus mnusz vge fel,
a sejt belsejbe tovbbtjk. A kt fehrjecsald tagjai szelektven kpesek klnbz vezikulkat megktni s
transzportlni. Szerepet jtszanak egyes sejtalkotrszek sejten belli elhelyezkedsnek meghatrozsban is:
az endoplazmatikus retikulumot s a lizoszmkat kinezinek szortjk a sejt perifrija fel, mg a Golgi-
appartus dineineknek ksznheti sejtmagkzeli lokalizcijt. Hogy az organellumok felismerse milyen
molekulris mechanizmussal trtnik, mg nem tisztzott; minden bizonnyal specifikus membrnreceptorok
jtszanak szerepet benne.
40.4. bra - 40.4. bra: Mikrotubulus motorfehrjk
229
Ajnlott irodalom
Cooper, G.M., Hausman, R.E. (2009): The Cell A Molecular Approach. ASM Press, Washington, D. C., USA,
496522.
Fuchs, E. Cleveland, D (1998): A structural scaffolding of intermediate filaments in health and disease. Science
279, 514519.
Herrmann, H., Aebi, U. (2000): Intermediate filaments and their associates: multi-talented structural elements
specifying cytoarchitecture and cytodynamics. Curr. Op. Cell Biol. 12, 7990.
Hirokawa, N. (1998): Kinesin and dynein superfamily proteins and the mechanism of organelle transport.
Science 279, 519526.
Julien, J. P. (1997): Neurofilaments and motor neuron disease. Trends Cell Biol. 7, 243249.
Oakley, B. R., Oakley, C. E.: Tubulin and microtubules. Scientific American (Science & Medicine) 1995/1, 58
67.
Vallee, R. B., Sheetz, M. P. (1996): Targeting of motor proteins. Science 271, 15391544.
230
41. fejezet - 41. sejtmembrn I.: A
lipoprotein membrn szerkezete.
Sejtsejt kapcsolatok
A sejtet krnyezettl elhatrol lipoprotein membrn, a sejthrtyaminden sejt alapvet s ltfontos
alkotrsze. Meghatrozza azt, milyen ionok s molekulk cserldhetnek ki a sejt s kzvetlen krnyezete
kztt, azaz szelektv filterknt mkdik. Transzportfolyamatainak (l. 42. fejezet) egyik fontos eredmnye, hogy
iongrdienseket hoz ltre az intra- s extracellulris tr kztt, melyek szksgesek a normlis sejtmkds
fenntartshoz, szablyozshoz. Vgl, receptorfehrji kzvettsvel szignlfelfogknt mkdik a sejtet
kvlrl r jelek rzkelsben.
1. A sejthrtya szerkezete
1.1. A lipoprotein membrnok folykony mozaik modellje
A sejthrtya, az intracellulris membrnrendszer s a sejtorganellumokat hatrol specilis membrnok hasonl
alapszerkezettel rendelkeznek: lipid ketts rtegbe gyazott fehrjk alkotta lipoprotein hrtyk. Az elmlt
vtizedek sorn a membrn szerkezetnek lersra szmos modellt dolgoztak ki, kzlk a Singer s Nicolson
ltal megfogalmazott folykony mozaik modell (41.1. bra) vlt szles krben elfogadott. Eszerint a biolgiai
hrtykat folytonos, folykony, ktdimenzis lipid ketts rteg alkotja, melybe mozaikszeren membrnfehrjk
gyazdnak.
41.1. bra - 41.1. bra: A lipoprotein membrnok szerkezete
1.2. A lipid ketts rteg

A lipidkomponens teht a membrnok szerkezeti integritst, folytonossgt biztostja. A membrnlipidek
kzs jellemzje, hogy amfipatikus jellegek (l. 4. fejezet): a molekulk apolros rsze a membrn belseje,
centrlis skja fel nz, ahol a kt rteg kztt hidrofb kapcsolatokat hoz ltre; a polros csoportok a membrn
kt felsznn, a vizes kzeg hatrn helyezkednek el. A fizikokmia trvnyszersgei szerint a hidrofb
csoportok a vizes fzissal tartsan nem rintkezhetnek: ha a membrn folytonossga megszakad, a srls
azonnal beforr vagy a membrntredkek kisebb vezikulkk zrdnak, helyrelltva a lipid ketts rteg
folytonossgt.
A membrnokat hrom f lipidtpus alkotja (ezek rszletes ismertetst l. a 4. fejezetben):
231
41. sejtmembrn I.: A lipoprotein
membrn szerkezete. Sejtsejt
kapcsolatok
Foszfolipidek. A membrnalkot glicerinfoszfolipidek kzl a legjelentsebbek a foszfatidsav, foszfatidilkolin,
foszfatidiletanolamin, foszfatidilszerin. A szfingomielinek szfingozinszrmazkok. Strukturlis szerepkn kvl
egyes foszfolipidek a jeltviteli folyamatokat kzvett msodlagos messengerek forrsai is (pl.
foszfatidilinozitol-szrmazkok, foszfatidilkolin, szfingomielin; l. 45., 46. fejezet).
Glikolipidek. Hidrofil rgijukhoz mono- vagy oligoszacharid ktdik, mely nveli ezeknek a lipideknek a
polros jellegt. A lipid ketts rteg exoplazmatikus lemezben lokalizldnak.
Koleszterin. Ez a szteroid tpus lipid minden eukariota membrn alkotrsze. A koleszterin nmagban nem
kpes membrnt ltrehozni, de merev, lemezszer szternvza bekeldik a foszfolipidek zsrsavlncai kz s
nveli a membrn mechanikai stabilitst.
A lipidrteg bimolekulris szerkezete s kmiai sszettele nagymrtkben meghatrozza a membrn fizikai

tulajdonsgait. A folykony jelleg egyik kvetkezmnye, hogy a lipidmolekulk sajt rtegkben csaknem
szabadon mozoghatnak oldalirnyban, illetve foroghatnak hossztengelyk krl. A laterlis s rotcis
mozgsok knnyedsgvel lesen szembellthat a flip-flop: lipidmolekulk az egyik rtegbl a msikba csak
energiabefektetssel juthatnak t, flippz enzimek katalitikus kzremkdsvel.
A membrn folykonysgt elssorban lipidsszettele hatrozza meg. A hmrsklet cskkentsvel a

lipidrteg hirtelen megdermed, gl llapotv vlik. A fzistmenetnek megfelel fagyspontot cskkenti az,
ha a lipidrteg gazdag rvid, teltetlen zsrsavakban. Vltoz testhmrsklet (poikiloterm) llatok a hideghez
val alkalmazkodskppen nvelik sejthrtyik teltetlen zsrsavtartalmt.
A membrnok lipid kettsrtege aszimmetrikus: a kt lemez sszettele klnbzik. A negatv tltst hordoz
foszfolipidek pldul inkbb a citoplazmatikus rtegre jellemzk, a glikolipidek viszont az exoplazmatikus
felszn fel nznek.
1.3. Liposzmk
Szrtott foszfolipideket vizes kzegben felszuszpendlva az amfipatikus molekulk spontn mdon lipid ketts
rtegeket hoznak ltre, melyek vezikulkk, liposzmkk zrdnak. Ezeknek a mestersges membrnoknak az
sszettele tetszlegesen hatrozhat meg, tiszttott membrnfehrjket is pthetnek beljk. A liposzmknak
risi elmleti s gyakorlati jelentsgk van. A kutatsban elssorban a transzportfolyamatok
trvnyszersgeinek a tanulmnyozsra hasznljk ket. Terpis alkalmazsuk lehetsgei egyre
szlesednek: gygyszervehikulumknt kisebb toxicitssal, tartsabb hatssal hasznlhatk bizonyos betegsgek
kezelsre. Egyrteg (unilamellris) s tbbrteg (mutilamellris) liposzmkat egyarnt hasznlnak (41.2.
bra). Polros s apolros jelleg gygyszerek szlltsra egyarnt alkalmasak: a hidrofil anyagok a vezikula
belsejnek vizes kzegben, mg a lipofilek a liposzma membrnjban olddnak fel (41.2. bra). A clsejt
felsznn megktdve tbbfle mechanizmussal juttathatjk be tartalmukat a sejtbe (41.3. bra): egyszer
diffzival, lipidkicserldssel, membrnfzival vagy endocitzissal. A liposzmkat leggyakrabban
makrofgok fagocitljk, gy a jelenleg klinikai kiprbls alatt lev kezelsi eljrsok clpontjai fagocitzisra
kpes sejtek. Biztat tapasztalatokat nyertek nhny fertz betegsg (brucellosis, salmonellosis) antibiotikum-
kezelsben, parazits (pl. leishmaniasis) s szisztms gombs fertzsek kezelsben, bizonyos daganatok
kemoterpijban. Ksrletek folynak liposzma-vakcinkkal is: liposzma-membrnba ptve az antignek
ugyanis sokkal ersebb antitestkpzst induklnak mint oldott llapotban.
41.2. bra - 41.2. bra: Unilamellris (A.) s multilamellris (B.) liposzmk szerkezete
232
kapcsolatok
41.3. bra - 41.3. bra: Liposzma ltal szlltott gygyszerek bejutsa a clsejtbe:
diffzi (A.), lipidkicserlds (B.), endocitzis (C.), membrnfzi (D.)
1.4. Membrnfehrjk
Hasonlan a lipidekhez, a membrnok fehrjekomponensei is amfipatikus jellegek: hidrofb rgijuk
belemerl a lipid ketts rteg belsejbe, mg a hidrofil oldallncok a membrn felsznre lokalizldnak. A
233
kapcsolatok
membrnfehrjk vzben ltalban rosszul olddnak, szolubilizlsuk s izollsuk detergensek segtsgvel
trtnik. A lipidrteghez val viszonyuk alapjn ktfle membrnfehrjt klnbztetnk meg. Az integrns
membrnproteinek belesppednek a lipid ketts rtegbe, esetleg teljesen t is rik azt. Ez utbbi, transzmembrn
fehrjk hidrofb rgijt egy vagy tbb -heliklis szakasz alkotja: az epidermlis nvekedsi faktor (EGF)
receptora pldul egyetlen transzmembrn domnt tartalmaz, mg az adrenalin-receptor 7, a multidrog
transzporter pedig 12 transzmembrn -hlixszel rendelkezik. (Ezekkel a fehrjkkel ksbbi fejezetekben
foglalkozunk.) A perifris fehrjk csak lazn ktdnek a membrn felsznhez. Ez trtnhet gyenge, nem
kovalens ktsek kzvettsvel (pl. jeltviteli fehrjk ktdse aktivlt membrnreceptorokhoz, l. 46. fejezet)
vagy a fehrjhez kovalensen kttt zsrsavak, sznhidrognlncok tjn (pl. Ras-fehrjk, l. 46. fejezet). A
fehrjk orientcija, elhelyezkedse aszimmetrikus: a perifris fehrjk a membrn meghatrozott oldalhoz
kapcsoldnak s a transzmembrn fehrjk is lland citoplazmatikus s exoplazmatikus domnnel
rendelkeznek.
A membrnfehrjk laterlis mozgsa hasonlan a lipidekhez lehetsges, de gyakran korltozza ezt

citoszkeleton fehrjk, vagy extracellulris mtrix komponensek kapcsoldsa.
1.5. Specializlt, stabil membrn domnek

Sok sejt hrtyjn elektronmikroszkpos felvteleken kismret, klatrinbortstl mentes betremkedsek
figyelhetk meg. A kaveolknak nevezett kpletek rgta ismertek, pontos funkcijuk azonban ma sem
vilgos. Jellemz rjuk, hogy gazdagok koleszterinben s szfingolipidekben s nagy mennyisgben tartalmaznak
kaveolinfehrjket, melyek a membrnlipidek bels rtegbe merlnek s aktinfilamentumokkal hoznak ltre
kapcsolatot.
41.4. bra - 41.4. bra: A kaveola szerkezete
Br a kaveolk nem ltfontos kpzdmnyek, rszvtelket sokfle folyamatban felttelezik: szerepet jtszanak
az endocitzis specilis eseteiben, a kapillrisok endotljn keresztl foly transzcitzisban (transzendotelilis
transzport), a koleszterin transzportban, jeltviteli folyamatok szablyozsban. A kzeljvben gyors
elrehalads vrhat a kaveolk lettannak s patolgijnak kutatsban.
2. A sejtek kapcsoldsai
Tbbsejt szervezetekben a sejtek fizikai kapcsolatba kerlnek egymssal s a sejtkztti llomny szilrd
komponenseivel. Ezek a kapcsolatok mind a szveti differencici s morfogenezis, mind pedig az egyes sejtek
s a szervezet mkdse szempontjbl is nagy jelentsgek. Ebben a fejezetben a sejtek kztti
kapcsolatokkal foglalkozunk, a 43. fejezetben pedig rviden rintjk a sejt-extracellulris mtrix
kontaktusokat.
A sejtek kztti kapcsolatok egy rsze idleges. Fertztt szvetekben pldul a fehrvrsejtek felszni fehrji
s a kapillris falt alkot endotel sejtek kztt tmeneti, specifikus ktds jn ltre, ami elsegti a leukocitk
tjutst az rfalon (extravazci) s a fertzs lekzdst. A folyamatban rszt vev sejtfelszni fehrjk
(szelektinek) rkletes rendellenessge slyos, visszatr fertzseket eredmnyezhet.
A stabil intercellulris kapcsolatokat funkcionlis szempontbl osztlyozhatjuk: lezr, lehorgonyz s

kommunikl sejtsejt kapcsolatokat ismernk (41.5. bra).
234
kapcsolatok
41.5. bra - 41.5. bra: Vkonybl-hmsejtek stabil kapcsoldsai
2.1. Lezr kapcsoldsok

Bizonyos szvetekben szksg van arra, hogy a sejtek kztt thatolhatatlan, ers kapcsolat jjjn ltre.
Vkonyblsejtek kztt, kzvetlenl a bllumen kzelben, gyrszer, transzmembrn fehrjk ltal
ltrehozott hlzat kapcsolja ssze az epitelilis sejteket, teljesen elzrva a lument az intercellulris trtl (41.6.
bra). A zonula occludens (angolul: tight junction) transzmembrn okkludin fehrjinek msik szerepe, hogy
megakadlyozzk a membrnkomponensek laterlis diffzijt. Az epitelilis sejt ezltal polriss vlik:
apiklis s bazolaterlis membrndomnje szerkezetileg s funkcionlisan is eltr egymstl (ennek
jelentsgvel ksbb foglalkozunk). A tight junction tkletesen elvlaszt folyadktereket, illetve
membrndomneket egymstl, sszetart ervel azonban alig rendelkezik. A vkonybl hmsejtjeit az alatta
elhelyezked vdezmoszma s foltdezmoszmk kapcsoljk ssze ersen (l. albb).
41.6. bra - 41.6. bra: A zonula occludens szerkezete
235
kapcsolatok
2.2. Lehorgonyz kapcsolatok

A sejtkapcsolatok msik tpusban a sejtmembrn specilis rgii a citoszkeleton fonalainak letapadsi helyl
szolglnak.
Aktinfilamentumokhoz ktd sejtkapcsoldsok. A vkonyblsejtekben a tight junction alatt helyezkedik el

egy msik sejtkapcsolat, a zonula adherens (vdezmoszma; 41.5. bra). A kt sejt kontaktust
transzmembrn kadherin fehrjk biztostjk, ezek citoplazmatikus domnjhez katenin proteinek kzvettsvel
mikrofilamentumok tapadnak (41.7.A. bra). (Az aktin citoszkeleton az extracellulris mtrixszal is kapcsolatot
teremt, foklis adhzik kzvettsvel [l. 43. fejezet].)
Intermedier filamentumokhoz ktd sejtkapcsoldsok . A sejtsejt kapcsolatok leggyakoribb fajtja a

foltdezmoszma (macula adherens; 41.5. s 41.7.B. bra). Transzmembrn kapcsolfehrji ugyancsak a
kadherin-csald tagjai, a citoplazmatikus oldalon hozzjuk ktd katenin fehrjk pedig a membrnhoz simul
korongot, plakkot alkotnak. A citoplazmatikusplakkon tapadnak a citoszkeleton intermedier filamentumai.
Dezmoszmk olyan szvetekben fordulnak el nagy szmban, melyekben a sejtsejt kapcsolatok erteljes
mechanikai hatsoknak vannak kitve (pl. a szvizomban, a brhm stratum spinosumban). (A
hemidezmoszmk hasonl szerkezet kpzdmnyek, melyek a sejtet a hmrteg alatt elhelyezked
bazlmembrnhoz rgztik [l. 43. fejezet]).
41.7. bra - 41.7. bra: Az vdezmoszma (A.) s a foltdezmoszma (B.) szerkezete
A br foltdezmoszminak mkdszavara okozza a pemphigus nev betegsgcsoportot. A brhm

dezmoszmk kadherin fehrjivel szemben autoantitestek kpzdnek s roncsoljk a sejtek kztti adhzis
kapcsolatokat. Vzzel telt hlyagok jelennek meg testszerte, amelyek a fertzs s a dehidrci veszlye miatt
akr vgzetes llapotot is ltrehozhatnak. Hasonl krkpet (bullosus pemphigoid) hoz ltre a
hemidezmoszmk autoantitestek ltal okozott krosodsa is. Ilyenkor a hmrteg elvlik a bazlmembrntl s
a hm s irha kztt gylik ssze folyadk.
2.3. Kommunikl kapcsolatok
236
kapcsolatok
A rskapcsolat (gap junction) kt sejt membrnja kztt vzzel telt csatornkon keresztl valsul meg. Nevt
onnan kapta, hogy a kt hrtya nem tapad szorosan egymshoz, hanem kztk keskeny rs marad. A csatorna
falt 66 konnexin fehrjemolekula alkotja, mindkt membrnon thaladva sszekti a kt sejt citoplazmjt
(41.8. bra). Ionok, kis molekulk tjuthatnak rajta, gy biztostja a kt sejt mkdsnek sszehangolst. A
szvizom sejtjeit sszekt rskapcsolatok pldul szinkronizljk a kontrakcit. gy nem meglep, hogy mind
tbb adat gylik ssze arra vonatkozan, hogy konnexin fehrjk mutcis lzija szerepet jtszhat bizonyos
veleszletett szvrendellenessgek patogenezisben. A konnexin-csald ms tagjai az idegsejtek, a bels fl, a
br sejtjeinek differencildshoz, normlis mkdshez szksgesek. A konnexin-gnek mutcijt rkld
idegrendszeri krkpek, brbetegsgek, sketsg,, szrkehlyog htterben is megtalltk mr.
41.8. bra - 41.8. bra: A rskapcsolat szerkezete
Ajnlott irodalom
Christiano, A. M. (1997): Frontiers in keratodermas: pushing the envelope. Trends Genet. 13, 227233.
529540, 587595.
Deurs, B. V., Roepstorff, K., Hommelguard, A.M., Sandvig., K. (2003): Caveolae: anchored, multifunctional
platforms in the lipid ocean. Trends Cell Biol. 13, 92100.
Frenette, P. S., Wagner, D. D. (1996): Adhesion molecules part I. N. Engl. J. Med. 334, 15261529.
Frenette, P. S., Wagner, D. D. (1996): Adhesion molecules part II. N. Engl. J. Med. 335, 4345.
Hansen, G. G., Nichols, B.J. (2010): Exploring the caves: cavins, caveolins and caveolae. Trends Cell Biol. 20,
177186.
Kelsell, D. P., Dunlop, LJ., Hodgins, M.B. (2001): Human diseases: clues to cracking the connexin code?
Trends Cell Biol. 11, 26.
Mayhew, E. G. (1993): Liposomes and delivery of chemotherapeutic agents. Adv. Oncol. 9, 36.
Ostro, M. J.: Liposomes. Scientific American 1990/1, 9099.
Robertson, J. D.: The membrane of the living cell. Scientific American 1962/4, 6472.
237
42. fejezet - 42. Sejtmembrn II.:
Transzport a sejthrtyn keresztl
A sejtmembrn vltozatos eszkzkkel rendelkezik arra, hogy anyagokat juttasson a sejtbe vagy a sejtbl
krnyezetbe. Kis molekulk transzportjt hajthatja a membrn kt oldala kztt fennll
koncentrciklnbsgk (passzv transzport), de a sejt metabolikus energit is ldozhat erre a clra (aktv
transzport). Makromolekulk transzportja a sejthrtyn keresztl membrnvezikulkba csomagoltan trtnik: az
endocitzis (l. 35. fejezet) s exocitzis (l. 34. fejezet) jelensgeivel mr korbban rszletesen foglalkoztunk.
Ennek a fejezetnek a tmja a kis molekulk transzportja.
1. Passzv transzport folyamatok

A passzv transzportot a membrn kt oldala kztti koncentrci-grdiens hajtja s vgeredmnye a
koncentrciklnbsg megsznse. A transzporthoz ATP vagy ms metabolikus energiaforrs nem szksges.
A rszt vev molekulris mechanizmusok alapjn a passzv transzportnak klnbz tpusait klnbztetjk
meg (42.1. bra).
42.1. bra - 42.1. bra: A membrntranszport folyamatok tpusai
1.1. Egyszer diffzi

Kismret molekulk membrnfehrjk kzremkdse nlkl is thatolhatnak a sejthrtyn, a foszfolipid
ketts rtegen keresztl. Ez az egyszer diffzi kevss specifikus, sebessge arnyos a
koncentrciklnbsggel. A foszfolipidrteg permebilis gzokkal (oxign, szndioxid), kismret hidrofb
molekulkkal (kloroform, szntetraklorid), bizonyos mrtkig tlts nlkli polris molekulkkal (vz, urea)
szemben is. Ionok, tltssel rendelkez molekulk (nukleotidok, aminosavak), nagyobb molekulk (glukz) nem
jutnak t a membrnlipideken.
A diffzi specilis esete az ozmzis: a membrn impermebilis az oldott rszecskk szmra, az oldszer (vz)
molekuli viszont tjutnak rajta. Az oldszer a nagyobb koncentrcij oldal fel vndorol mindaddig, amg a
klnbsg ki nem egyenltdik. Nhny plda az ozmzis jelentsgre: vrsvrtestek sztrepedse hipotnis
oldatban (ozmotikus hemolzis); a kzponti idegrendszer sejtjeinek krosodsa extrmen magas vrcukorszint
esetn (diabeteses coma); a vizelet mennyisgnek nvekedse cukorvizels esetn (ozmotikus diuresis).
1.2. Facilitlt diffzi

A legtbb kis molekula kptelen felolddni a membrnlipidekben, transzportja membrnfehrjk
kzremkdsvel, facilitlt diffzival trtnik. Ez a folyamat sokkal gyorsabb mint az egyszer diffzi,
ersen szelektv, s mivel a rendelkezsre ll transzportfehrje molekulk szma korltozott telthet. Attl
fggen, hogy a transzportlt rszecske s a membrnfehrje kztt ltrejn-e specifikus kapcsolat, a facilitlt
diffzinak kt f tpust klnbztetjk meg.
238
42. Sejtmembrn II.: Transzport a
sejthrtyn keresztl
Fehrjecsatornk ltal kzvettett diffzi. A transzportnak ezt a fajtjt transzmembrn fehrjk ltal
kialaktott csatornk vgzik. Ha a csatorna nyitott llapotban van, a transzport rendkvl gyors s ltalban
szelektv. Vannak csatornk, melyek llandan mkdnek (pl. a mitokondrium kls membrnjban lev
porin), a legtbb csatorna tjrhatsga azonban szablyozhat. Ilyenek az ioncsatornk, melyek rendkvl
fontos szerepet jtszanak a sejtek ingerlkenysgnek s egyb folyamatainak szablyozsban. Klnsen
fontosak a Na+-, K+- s Ca++-csatornk. Ezek nyitottsgt befolysolhatja a membrnpotencil (feszltsg ltal
regullt csatornk) vagy hormonok, ingerlettviv anyagok (ligand ltal szablyozott csatornk). Az
ioncsatornk mkdsnek jellegzetes pldja az akcis potencil (42.2. bra) kialakulsa.
42.2. bra - 42.2. bra: Az akcis potencil
A nyugalmi sejt membrnpotenciljt elssorban a Na+ -ionok kifel s a K+ -ionok befel irnyul meredek
koncentrci-grdiense alaktja ki. Ingerls hatsra elszr Na+-csatornkon keresztl Na+ -ionok ramlanak a
sejtbe (depolarizci), majd K+-csatornkon t K+ -ionok diffundlnak az extracellulris trbe (repolarizci).
Nyilvnval, hogy a Na+- s K+-csatornk mkdsnek zavarai slyos kvetkezmnyekkel jrhatnak.
Szvmegllssal s hirtelen halllal jr szvritmuszavarok htterben gyakran mutathat ki a szvizomban
expresszld ioncsatornk gnjnek mutcija.
Specilis fehrjecsatorna mkdszavara okozza a cysts fibrosist. Ebben a gyakori, autoszomlis recesszv
mdon rkld betegsgben a kls elvlaszts mirigyek vladka abnormlisan sr, hasnylmirigy-
elgtelensget, blelzrdst, ismtld lgti fertzseket okozva. A CFTR-fehrje (az angol cystic fibrosis
transmembrane conductance regulator kifejezs rvidtse) Cl-csatorna: a mutcik kvetkezmnye ltalban
olyan konformcivltozs, mely megakadlyozza a fehrje transzportjt a Golgi-appartusba. Az retlen
fehrje az endoplazmatikus retikulumban marad s gyorsan degralldik.
A csatornafehrjk kz tartoznak az akvaporin-csald tagjai is. Ezek szelektv vzcsatornk, ionokat nem
transzportlnak. Minden sejt hrtyjban jelen vannak, nagymrtkben nvelve a foszfolipidrteg ltal
biztostott korltozott vz-permeabilitst. A vztranszport hajtereje a membrn kt oldala kztt fennll
ozmotikus grdiens. Akvaporin csatorna transzportlja a vizet a szemlencsbe, fenntartva annak
transzparencijt. Ennek mutci ltal okozott mkdszavara rkld cataractt okoz. A vese
gyjtcsatorninak sejtmembrnjaiban vazopresszin ltal aktivlt akvaporin expresszldik. A hipofzis hts
lebenynek ez a hormonja felels szomjazs esetn a vese vzvisszaszv kapacitsnak fokozdsrt. A
vesben expresszld akvaporin gnjben bekvetkez mutci vazopresszin kezelssel nem javthat
polyurit (nephrogen diabetes insipidust) okozhat.
Carrier-fehrjk ltal kzvettett diffzi. A carrier-fehrjk (42.1. bra) nem kpeznek csatornt, hanem a
transzportland anyagot megktik, konformcivltozst szenvednek s a membrn msik oldaln leadjk.
Ilyen fehrjk vgzik fontos tpanyagok (cukrok, aminosavak, nukleozidok) membrntranszportjt. A carrier-
fehrjk egy rsze uniporter: egyetlen anyagot transzportl (pl. a glukz transzporter). Ms fehrjk
kotranszporterek, azaz egy ion vagy molekula aktv transzportja egy msik anyag passzv transzportjval van
sszektve. A kt rszecske szlltsa trtnhet egyirnyban (szimporter, pl.: Na+/glukz szimporter) vagy
ellenttes irnyban (antiporter, pl.: Na+/Ca++ antiporter). Ez utbbi transzportfehrje tpus fontos pldja a Na+-
239
sejthrtyn keresztl
H+kicserl fehrje is: a Na+ ionok passzv sejtbe ramlsa az anyagcserefolyamatok sorn felgyleml H+
ionokat pumpl ki a sejtekbl, meggtolva gy a citoplazma elsavasodst.
2. Aktv transzport folyamatok

Szemben a diffzis jelensgekkel, az aktv transzport folyamatok koncentrci-grdienst hoznak ltre s
tartanak fenn. Fiziolgis jelentsgket jelzi, hogy egy sejt energiatermelsnek mintegy 50 szzalkt
iongrdiensek fenntartsra hasznlja fel. Az aktv transzportot az ignybe vett energiaforrs alapjn szoks
osztlyozni.
2.1. ATP-fgg transzporterek

Ezek a transzmembrn fehrjk a transzporthoz szksges energit kzvetlenl ATP hidrolzisbl nyerik.
P-tpus ATPzok . Mkdsk sorn foszforilldnak, nevk innen szrmazik. A fehrjecsald legismertebb
tagja a Na+-K+ ATPz, amely a sejthrtya kt oldala kztti ionaszimmetria (ezltal a membrnpotencil)
fenntartsrt felels: extracellulrisan a Na+, intracellulrisan pedig a K+ dominl. Az ionaszimmetria biztostja
a sejt ingerlkenysgt s a fiziolgis ozmotikus nyomst, a Na +-grdiens pedig a sejt szmra ltfontos
anyagok felvtelt hajtja (l. ksbb). A Na+-K+ -pumpa tetramer szerkezet (42.3. bra): a kt -alegysg az
iontranszportot vgzi, a -alegysgek a pumpa sszeszerelst s sejten belli transzportjt irnytjk.
Mkdse sorn a pumpa bels felsznn hrom Na+-t kt meg, foszforilldik, majd a Na+-okat a sejtfelsznen
leadja. Ezutn az extracellulris felsznen kt K+ ktdik meg, az -alegysgek defoszforilldnak s a K+-ok a
citoszlba disszocilnak.
42.3. bra - 42.3. bra: A Na+-K+ pumpa mkdse
A szvizom-sszehzdst erst, krnikus szvelgtelensgben gygyszerknt alkalmazott szvglikozidk

hatsukat a szvizom Na+-K+-pumpjnak gtlsval fejtik ki. Hatsukra ugyanis cskken a Na +-grdiens, gy a
Na+/Ca++ antiporter mkdse is. A szvizomban kiss emelkedik a Ca++-koncentrci, az izomrostok
sszehzdsa erteljesebb vlik.
P-tpus ATPz a Ca++ ATPz is. Ca++-okat pumpl az endoplazmatikus retikulumba s a sejt kztti
llomnyba. A Ca++ -pumpa mkdsnek eredmnyekppen a nyugalmi sejt citoszljban a Ca++-koncentrci
mintegy tzezerszer (!) alacsonyabb mint extracellulrisan. Ez azrt fontos, mert bizonyos hatsokra a sejt azzal
reagl, hogy citoszljban hirtelen megnveli a Ca++-szintet, ami klnbz biokmiai folyamatokat indt be (l.
45. fejezet). A meredek nyugalmi Ca++-grdiens elfelttele ennek a gyors vlasznak.
V-tpus ATPzok. A sejt egyes vezikulumaiban (lizoszmk, endoszmk) ersen savas pH uralkodik.
Membrnjukban bonyolult alegysgszerkezet protonpumpk mkdnek, melyek ATP-fgg mdon H+-okat
transzportlnak a vezikula belsejbe.
F-tpus ATPzok. A mitokondriumok (s kloroplasztiszok) F0F1 partikulumai (l. 37. fejezet) valjban ATP
ltal hajtott protonpumpk: ATP-t hidrolizlva H+-okat exportlnnak a mitokondrium mtrixbl. A mkd
mitokondriumban azonban a reakci megfordul: az elektrontranszport lnc ltal ltrehozott protongrdiens ATP-
szintzknt mkdteti az F0F1 komplexet.
ABC-transzporter csald. E glikoprotein csald tagjai multiplex transzmembrn -heliklis rgikkal s a

citoszlba nyl hurkaikban ATP-kt domnnel (angolul: ATP-binding cassette) rendelkeznek. Br kzjk
tartozik a CFTR csatornafehrje (l. elbb), a csald legtbb tagja aktv transzporter. Legismertebb kpviselik a
multidrog transzporter fehrjk (42.4. bra), melyek fiziolgis funkcija, hogy toxikus hats hidrofb
240
sejthrtyn keresztl
anyagokat (xenobiotikumokat) pumplnak ki a sejtekbl. A multidrog transzporter csald tagjaira jellemz a

csekly mrtk specificits: kmiailag kevss hasonl vegyletek szles krt kpesek kipumplni a sejtbl.
Orvosi jelentsgt az adja, hogy gyakran felels a daganatterpiban hasznlatos kemoterpis szerekkel
szemben fellp rezisztencia kialakulsrt. Ilyenkor a kezelsre addig jl reagl tumorban olyan mutns sejtek
jelennek meg, melyekben egy multidrog transzporter gnje amplifikldott, a fehrje nagy mennyisgben
termeldik s a daganat tbbfle szerrel (pl. kolhicin, vinblasztin, adriamicin) trtn kezels ellenre is tovbb
n. A multidrog rezisztencia kialakulst kslelteti, ha a beteget kezdettl klnbz citosztatikumok
kombincijval kezelik. Jelents erfesztsek trtnnek a multidrog transzportereket gtl gygyszerek
kifejlesztsre is.
42.4. bra - 42.4. bra: A multidrog transzporter szerkezete
2.2. Ionfgg transzporterek

Az aktv transzport msik f tpusban ATP-hidrolzisnek nincs kzvetlen szerepe: az aktv transzportot olyan
kotranszporter fehrjk vgzik, melyek a krdses anyagot ionok passzv transzportjhoz kapcsolva halmozzk
fel a membrn egyik oldaln. A transzportot teht a transzmembrn iongrdiensekben trolt energia hajtja.
Mivel az iongrdienseket ATP-fgg pumpk tartjk fenn, vgs soron az ionfgg transzporterek (n.
msodlagos aktv transzporterek) mkdse is ATP-hidrolzist ignyel. Az ionfgg transzporterek jellegzetes
pldja a Na+/glukz szimporter: segtsgvel a sejtek krnyezetkbl koncentrci-grdienssel szemben is
kpesek felhalmozni a szlcukrot.
Gyakori eset, hogy egy anyag transzmembrn transzportjhoz klnbz carrier-fehrjk sszehangolt
mkdse szksges. Ennek jl ismert pldja a szlcukor felszvdsa a keringsbe, ami a vkonyblsejteken
keresztl transzepitelilis transzporttal trtnik (42.5. bra). A vkonybl hmrtegt polarizlt sejtek
alkotjk: apiklis s bazolaterlis membrnjuk fehrjesszettele eltr, a proteinek laterlis diffzival trtn
sszekeveredst a tight junction ltal kpzett barrier akadlyozza meg. A glukzfelvtelben hrom
transzportfehrje jtszik f szerepet. A Na+/glukz szimporter a mikrovillusokon keresztl felveszi a bl
lumenbl a cukrot. Az emelked intracellulris glukzkoncentrci a bazolaterlis membrn glukz
transzportern keresztl facilitlt diffzival a hm alatti ktszvet kapillrisaiba juttatja a cukrot. A
bazolaterlis membrn Na+-K+ -pumpja pedig biztostja azt az alacsony intracellulris Na+-szintet, ami
elfelttele a Na+/glukz szimporter hatkony mkdsnek.
42.5. bra - 42.5. bra: A glukz transzepitelilis transzportja a vkonybl hmsejtjn

keresztl
241
sejthrtyn keresztl
Ajnlott irodalom
Ackerman, M., Clapham, D. E. (1996): Ion channels Basic science and clinical disease. N. Engl. J. Med. 336,
15751586.
Agre P., Kozono, D. (2003): Aquaporin water channels: molecular mechanisms for human diseases. FEBS
Letters 555, 7278.
540557.
Kartner, N., Ling, V.: Multidrug resistance in cancer. Scientific American 1989/3, 2633.
Sarkadi B., Szakcs G., Vradi A. (2002): Multi-drug resistance in cancer role of ABC transzporter proteins.
sigma-aldrich.com/MDR.
242
43. fejezet - 43. Sejtmembrn III.: A
sejthrtya s az extracellulris mtrix
kapcsolata
Soksejt llatokban a sejtek nemcsak egymssal ltestenek kapcsolatot membrnjaikon keresztl, hanem az
ltaluk kivlasztott, a krdses szvetre jellemz sszettel sejt kztti llomny (extracellulris mtrix)
alkotrszeivel is. A mtrix szekretlt fehrjkbl s poliszacharidokbl ll, vizes kzegben egyes szvetekben
szervetlen sk is lerakdhatnak (pl. a csontokban klciumfoszft). Szmos funkcija van: sejt kztti vzat alkot
a szveti sejtek szmra; a szvetek, szervek embrionlis formldsa, morfogenezise sorn felsznt biztost a
sejtmozgsok, trendezdsek szmra; a membrnon keresztl kapcsolatot ltestve a citoszkeletonnal rszt
vesz a sejtek alakjnak meghatrozsban; a komponensei ltal megkttt hormonok, nvekedsi faktorok
szignl transzdukcis hatsait segti, modullja. A sejtmembrn specifikus fehrjivel kapcsoldva, azok
kzvettsvel maga az extracellulris mtrix is hatssal van a sejtek gnexpresszijra.
Az extracellulris mtrix s a sejtek kapcsolatban ngy makromolekulris struktra jtssza a f szerepet (43.1.
bra): kollagn rostok, glikzaminogliknok s proteogliknok, multiadhezv fehrjk s a sejthrtya integrin
fehrji.
43.1. bra - 43.1. bra: Az extracellulris mtrix s a sejtmembrn kapcsolata
1. Kollagnek
A kollagnfehrjk vzben oldhatatlan, fibrillris proteinek, az llatvilg legelterjedtebb fehrji. Emberben egy
nagy gncsald tagjai kdoljk ket. A kollagnlncok hrmasval felcsavarodva tripla-hlix struktrt alkotnak
(43.2. bra), a polipeptidlncokat hidroxillt aminosavak (hidroxilizin, hidroxiprolin) kztt kialakul
hidrognktsek tartjk ssze. A szokatlan tripla-heliklis fehrjeszerkezet kialakulst az teszi lehetv, hogy a
kollagnlnc minden harmadik aminosava glicin, a legkisebb mret aminosav (oldallnca csak egy
hidrognatom). A glicinmolekulk klnleges hajlkonysgot klcsnznek a polipeptidlncnak.
43.2. bra - 43.2. bra: A kollagn tripla-heliklis szerkezete
243
43. Sejtmembrn III.: A sejthrtya s
az extracellulris mtrix kapcsolata
A kollagnlncok szintzise a durva felszn endoplazmatikus retikulum felsznn trtnik (43.3. bra, 1. lps).
A lumenbe kerl szolubilis prokollagn (2. lps) lizin s prolin oldallncai hidroxilldnak, a polipeptidlnc
glikozilldik (3. lps). A hidroxilcihoz C-vitaminra van szksg; skorbutban a C-vitaminhiny
kvetkeztben a hidroxillatlan prokollagn nem kpes tripla-hlixet alkotni, a sejten bell gyorsan
degradldik. A kollagn rostok hinya vezet az erek, inak, br srlkenysghez. A hidroxillt prokollagn
rostok viszont tripla-heliklis szerkezetet vesznek fel, kztk diszulfidhidak is lteslnek (4. lps). A
transzportvezikulkkal a Golgi-komplexbe jut prokollagn (5. lps) glikozilcija befejezdik, majd
exocitzissal a sejtfelsznre kerl (6. lps). Itt az N- s C-terminlis propeptidek lehastsval tropokollagn
egysgek kpzdnek (7. lps), melyek kztt kovalens keresztktsek alakulnak ki s a tripla-heliklis
egysgek gy kollagn rostt llnak ssze (8. lps).
43.3. bra - 43.3. bra: A kollagnkpzds mechanizmusa
244
A kpzd kollagnstruktrk szerkezetk s funkcijuk alapjn klnbz tpusokba sorolhatk. A rostkpz

kollagnekben a lncok rendkvli szaktszilrdsg ktegekbe rendezdnek. Ez a kollagntpus alkotja a
csontok, inak, szalagok teherbr rostllomnyt. A rostkpz kollagnek gnjnek mutcii instabil tripla-
hlixek kpzdshez vezethetnek, ezek nem transzportldnak az endoplazmatikus retikulumbl a Golgi-
komplexbe. A rostszegny csontok trkenyek, az ismtld trsek nyomorkk tehetik a beteget. Az
autoszomlis dominns rklds krkp neve: osteogenesis imperfecta. A mutci ltalban egy glicint rint
a kollagnlncban, gtolva a tripla-heliklis szerkezet kialakulst. A br, izletek, erek kollagnjt rint
rkld betegsg az Ehlers-Danlos-szindrma. Jellemzi a nylkony, ltyg br, laza izletek,
aneurysmk kialakulsra hajlamos artrik.
A rostasszocilt kollagnek az extracellulris mtrix klnbz elemeihez rgztik a kollagn rostokat. Az

epitelilis sejtrtegek alapjhoz rgztett lamina basalist hlkpz kollagnek alkotjk.
A kollagn rostok mellett a szvetek gyakran rugalmas rostokat is tartalmaznak (pl. td, nagy artrik),
melyek keresztktsekkel sszekapcsolt elasztin fehrjk hlzatbl llnak.
2. Glikzaminogliknok s proteogliknok
Az extracellulris mtrix jelents mennyisgben tartalmaz sszetett sznhidrtokat. A glikzaminogliknok (l.
4. fejezet) monoton mdon ismtld diszacharid egysgekbl plnek fel. A diszacharid egyik alkotrsze N-
acetilglukzamin vagy N-acetilgalaktzamin, a msik pedig egy savas cukor. A glukzaminogliknok gyakori
oldallncai a szulftcsoportok is. Kmiai sszettelk ersen hidrofil jelleget ad nekik: hidratlt glt alkotnak,
meghatrozzk a sejtkztti llomny konzisztencijt. Kzlk a hialuronn szabad llapotban ltezik, elnys
fizikai tulajdonsgai felelsek a porcszvet rugalmas teherbrsrt.
Ms poliszacharidok fehrjhez kttten proteogliknokat alkotnak; ilyenek pldul a dermatn-szulft,

kondroitin-szulft, heparn-szulft. A mtrix proteogliknok a sejtkztti llomny alkotrszei (43.1. bra).
Egyik kpviseljk a porcszvet aggreknja, melyben egy kzponti fehrjelnchoz (core protein) kondroitin-
szulft s keratn-szulft molekulk ktdnek. Az aggrekn egysgek kapcsolfehrjk kzvettsvel
hialuronn rismolekulkhoz rgzlnek, hatalmas mret komplexeket alkotva (43.4. bra).
43.4. bra - 43.4. bra: Aggrekn komplexek felptse
245
A proteogliknok msik tpusa transzmembrn core protein kzvettsvel a sejthrtya kls felsznhez van
lehorgonyozva. Ilyen sejtfelszni proteogliknok pldul a szindekn s a fibroglikn (43.5. bra).
Glikzaminoglikn lncaikkal a sejtet a sejtkztti llomny rostjaihoz rgztik.
43.5. bra - 43.5. bra: Sejtfelszni proteogliknok
3. Multiadhezv fehrjk
Az extracellulris mtrix fontos komponensei azok a fehrjk, melyek sejtfelszni receptorokkal, kollagn
rostokkal, proteogliknokkal egyarnt kapcsolatot ltestenek. A multiadhezv fehrjk egyik fontos
kpviselje a laminin, mely a blhm, a kapillrisfal, a veseglomerulusok lamina basalisnak ragasztanyaga.
A ktszveti sejteket fibronektin kti a kollagn rostokhoz.
4. Integrinek
A szvetek organizcijnak, integritsnak kialaktsban fontos szerepet jtszanak ezek a transzmembrn
fehrjk, melyek az extracellulris mtrix komponenseit felismer receptorknt mkdnek (az integrinek
jeltviteli szerepvel a 48. fejezetben foglalkozunk). Az integrinek heterodimerek; mindkt alegysgcsald
tbb, szvetspecifikus tagbl ll, kombinciik tbb mint hsz integrin dimert eredmnyeznek. Az integrinek a
sejthrtya kls felsznn mtrixfehrjkkel (kollagnnel, lamininnal, fibronektinnel) kapcsoldnak, a citoszl
fell pedig vagy aktinfilamentumok vgzdnek rajtuk foklis adhzit alkotva, vagy pedig intermedier
filamentumokkal hemidezmoszmkat kpeznek (43.6. bra). Az integrinek fontossgt mutatja, hogy a K.O.
mutns egerekben slyos fejldsi rendellenessgek alakulnak ki s ltalban mr in utero elpusztulnak.
43.6. bra - 43.6. bra: A foklis adhzi (A.) s a hemidezmoszma (B.) szerkezete
246
A foklis adhzik (43.6.A. bra) klnbz sejttpusokat (fibroblasztok, leukocitk, stb.) ktnek ssze az
extracellulris mtrix elemeivel. Nagymret, dinamikus fehrjekomplexek, melyek a sejtek vndorlsa sorn
kialakulnak, majd eltnnek. Integrin dimerjeik a kls oldalon multiadhezv fehrjkkel (pl. fibronektin)
ktdnek az extracellulris mtrix molekulihoz, intracellulrisan pedig aktinkt fehrjk (pl. vinkulin, -
aktinin) tjn kapcsoldnak a mikrofilamentum rendszerhez. Szmos jeltviteli fehrjvel kapcsoldva a szignl
transzdukci folyamataiban is rszt vesznek (l. 48. fejezet).
A hemidezmoszmk (43.6. B. bra) sokkal statikusabb struktrk. A hmsejteket rgztik a

bazlmembrnhoz, a kapcsolatot laminin hozza ltre. Az integrin dimerek sejten belli domnjhez
citoplazmatikus plakk, hozz pedig intermedier filamentumok kapcsoldnak.
Daganatsejtekben az integrinek eltnse baljs jel: a sejtek elvesztik kontaktusukat a mtrixszal, a daganat
invazvv vlik s tttkpz, metasztatizl kpessge is megn. Bizonyos integrinek rkletes defektusa
leukocita-adhzis deficiencit okoz: a fehrvrsejtek kptelenek a srls, gyullads helysznre vndorolni s
letveszlyes fertzsek lphetnek fel.
Ajnlott irodalom
Burridge, K., ChrzanowskaWodnicka, M., Zhong, C. (1997): Focal adhesion assembly. Trends Cell Biol. 7,
342347.
577587.
Davis, P.: Universal body builder. New Scientist 1998/5/23, 14.
Horwitz, A. F.: Integrins and health. Scientific American 1997/5, 4653.
Rauch, F. Glorieux, F. H. (2004): Osteogenesis imperfecta. Lancet 363, 13771385.
247
44. fejezet - 44. Szignltranszdukci
I.: Jeltviteli molekulk s receptoraik
Az l sejt egyik alapvet jellemzje, hogy anyagcsere-folyamatait csak a krnyezetvel folytonos
klcsnhatsban kpes vgrehajtani. lete sorn gy krnyezetbl szmos behats ri: hhatsok, sugrzs,
mechanikai, elektromos ingerek, kmiai jelek (44.1. bra). Klnsen fontosak ezek az extracellulris szignlok
a tbbsejt szervezetek esetben, hiszen biztostjk a sejtek kztti kommunikcit, a szervezet egsznek
sszehangolt mkdst. Mivel a sejtek kztti kapcsolatfelvtel dnt rszben kmiai gensek kzvettsvel
trtnik, kmiai jeltvitelrl, szignltranszdukcirlbeszlnk.
44.1. bra - 44.1. bra: A sejtet r krnyezeti hatsok
1. A jeltvitel fzisai
A kmiai jeltvitel kt szakaszban zajlik (44.2. bra). A sejtek kztti szignalizci sorn a jeltermel sejt
jeltviteli anyagot (ligandot) kpez, mely elri s felismeri a megfelel, a ligandra specifikus receptorral
rendelkez clsejtet. A ligand receptorhoz ktdsvel megkezddik a szignltranszdukci msodik fzisa: az
intracellulris jeltvitel, melynek eredmnyekppen a sejt anyagcsere-, strukturlis s gnexpresszis
vltozsokkal biolgiai vlaszt ad az t rt hatsra.
44.2. bra - 44.2. bra: A kmiai jeltvitel szakaszai
248
44. Szignltranszdukci I.: Jeltviteli
molekulk s receptoraik
2. A kmiai jeltvitel fajti

A jeltermel s a clsejt egymshoz val viszonya alapjn a szignltranszdukci tbb tpust klnbztethetjk
meg (44.3. bra).
44.3. bra - 44.3. bra: A kmiai jeltvitel tpusai. A: endokrin; B: parakrin; C:

juxtakrin; D: autokrin; E: intrakrin szignalizci (, ligand; , receptor)
249
2.1. Endokrin jeltvitel

A bels elvlaszts (endokrin) mirigyek ltal termelt hormonok a vrram tjn rik el tvoli clsejtjeiket
(44.3.A. bra). Mivel a jeltvitelimolekulnak a szervezet klnbz vztereiben (vrplazmban, szvetnedvben,
esetleg az intracellulris folyadkban is) kell eloszlania, a folyamat lass s a hormonnak igen kis
koncentrciban is hatsosnak kell lennie: a clsejtek nagy affinits receptorokkal rendelkeznek.
2.2. Parakrin jeltvitel

A parakrin szignalizci esetben a jeltermel s a clsejt egyms kzelben helyezkedik el (44.3.B. bra). A
ligand (itt loklis kmiai meditornak nevezzk) diffzival ri el a clsejtet, nem kerl a vrramba. A hats
gyors, tmeneti, a meditor viszonylag nagy helyi koncentrcit r el. Parakrin jeltvitellel fejti ki pldul
hatst a loklis rtgulatot, duzzanatot okoz hisztamin. A nitrognoxid (NO) ugyancsak fontos loklis kmiai
meditor. A jeltermel sejtekben nitrognoxid szintz enzimek argininbl hozzk ltre, gzknt knnyedn tjut
a sejtmembrnokon s a krnyez szvetekben rtgulatot okoz. Hatst a sejtek ciklikus-GMP szintjnek
250
emelsn, illetve fehrjk nitrozilcijn keresztl fejti ki. A parakrin jeltvitel specilis esett jelenti a
szinapszis mkdse: a preszinaptikus sejt neurotranszmitterrel viszi t a jelet a posztszinaptikus clsejtre.
2.3. Juxtakrin jeltvitel

A juxtakrin jeltviteli mechanizmus kzvetlen sejtsejt szignalizcit biztost (44.3.C. bra): a ligand
sejtfelszni fehrjeknt (pl. nvekedsi faktorknt) expresszldik s kapcsoldik a clsejt sejtfelszni
receptorhoz. Ez a szignalizcis forma teht a jeltermel s clsejt fizikai kontaktust ignyli.
2.4. Autokrin jeltvitel

A jeltermel s a clsejt egy s ugyanaz (44.3.D. bra): a sejt ltal szekretlt ligand (pl. nvekedsi faktor) a sejt
sajt sejtfelszni receptorhoz ktdik. Autokrin stimulci rvnyesl az egyedfejlds egyes folyamataiban
s bizonyos daganatok nvekedsben (l. ksbb).
2.5. Intrakrin jeltvitel

Sejten bell kpzd anyagok (pl. metabolitok) intracellulris receptorokhoz ktdve fejthetnek ki hatst,
anlkl, hogy elhagynk a jeltermel sejtet (44.3.E. bra). Hogy ilyen intrakrin szignalizcis mechanizmus is
ltezhet, valsznstette olyan n. rva receptorok lte, melyek ligandja sokig ismeretlen volt. Ezek a szteroid-
receptorcsaldba tartoznak, kzlk soknak a ligandjt is azonostottk mr s egyre tbbet tudnak fiziolgis
szerepkrl is. rva receptorok ligandjukat ktve transzkripcis faktorokknt szablyozzk trigliceridek,
epesavak, zsrsavak, xenobiotikumok metabolizmust vgz enzimek expresszijt.
3. A receptorfehrjk lokalizcija
A jeltviteli molekulk fizikai-kmiai tulajdonsgaiktl fggen ktfle receptorfehrje kzvettsvel fejthetik
ki hatsukat a clsejtekben (44.4. bra).
44.4. bra - 44.4. bra: Intracellulris (A.) s sejtfelszni (B.) receptorok
Kis hidrofb molekulk (szteroidok, tiroxin, retinsav stb.) szmra a sejthrtya szabadon tjrhat:
intracellulris receptoruka citoszlban vagy a sejtmagban helyezkedik el (44.4.A. bra), a ligand-receptor
komplex hatsait kzvetlenl fejti ki a sejtben (l. 32. fejezet).
A hidrofil termszet jeltviteli anyagok vagy nagymret polipeptidek (pl. inzulin, hipofzishormonok,
nvekedsi faktorok) vagy kismret tltssel rendelkez molekulk (pl. adrenalin, acetilkolin, hisztamin). Ezek
szmra a membrn foszfolipidrtege impermebilis: hatsukat sejtfelszni receptorfehrjk kzvettsvel
fejtik ki (44.4.B. bra). (Megjegyzend, hogy bizonyos lipidtermszet jeltviteli gensek [pl. a trombocita-
aggregcit, sima izom sszehzdst okoz, loklis meditorknt hat prosztaglandinok] receptorai is
sejtfelszni fehrjk.)
251
Ajnlott irodalom
Brdos Gy. (1999): Sejtbeszd kmiai nyelven. Termszet Vilga 130, 278280.
604612.
Kliever, S. A., Lehmann, J. M., Willson, T.M. (1999): Orphan nuclear receptors: shifting endocrinology into
reverse. Science 284, 757760.
Szebernyi J.: A jeltl a gnig a gntl a funkciig. (Molekulris medicina. Szerk.: Kopper L., Kovalszky I.,
Marcsek Z.) Medicina Knyvkiad, Budapest, 1997.
Watling, K. (1998): The RBI Handbook of Receptor Classification and Signal Transduction. RBI, Natick.
252
II.: Heterotrimer G-proteinek ltal
kzvettett jeltvitel
A sejtbe bejutni kptelen ligandok sejten belli hatsait a sejtfelszni receptorok kzvettik: a receptor
stimullsa a sejten bell biokmiai folyamatok lncreakcijt indtja el, melyek vgl a sejtmagba is eljuttatjk
a szignlt. Transzkripcis faktorok kzvettsvel specifikus gnexpresszis jelensgek kvetkeznek be, melyek
strukturlis s metabolikus vltozsokhoz vezetnek s vgeredmnyben a sejt biolgiai vlaszt eredmnyezik
(45.1. bra). Az intracellulris jeltviteli folyamatok ltalnos elvei kzsek s egyszerek; az elmlt vek
rendkvli intenzits kutatsai azonban nyilvnvalv tettk, hogy a receptor s a sejtmag szmos klnbz
szignalizcis plyval kthet ssze, melyekben nagyszm jeltviteli molekula jtszik szerepet. A kvetkez
fejezetek a legfontosabb jeltviteli utak jellemzivel foglalkoznak.
45.1. bra - 45.1. bra: A sejtfelszni receptorokrl indul intracellulris jeltviteli

plyk felptsnek elve
A jeltovbbtsra hasznlt mechanizmus alapjn a sejtfelszni receptorokat ngy kategriba szoks sorolni: (I)
az ioncsatorna receptorok valjban ligand ltal szablyozott csatornafehrjk (pl. az idegsejtek, harncskolt
izom acetilkolin-szablyozott Na+/K+-csatorni, l. 42. fejezet); (II) a G-protein-kttt receptorok transzmembrn
jeltovbbtst guaninnukleotid-kt fehrjk vgzik; (III) a katalitikus receptorok enzimaktivitsuk
segtsgvel tovbbtjk a szignlt; (IV) ms receptorok enzimaktivitssal nem rendelkeznek, citoplazmatikus
tirozin-proteinkinz enzimeket hasznlnak a szignalizcira. Ebben a fejezetben a G-proteinek ltal kzvettett
mechanizmussal foglalkozunk.
1. Heterotrimer G-proteinek
A G-proteinek npes csaldjnak tagjai guaninnukleotidok megktsre kpesek: GDP-kt llapotban
inaktvak, GTP-t ktve azonban kpess vlnak biokmiai funkcijuk elltsra. Lehetnek kismret, monomer
fehrjk (l. 46. fejezet), illetve -, - s -alegysgbl felpl heterotrimer G-proteinek. A jeltovbbts
szempontjbl az -alegysg jelentsgt ismertk fel legkorbban. Emberben ennek a polipeptidcsaldnak tbb
mint hsz tagja ismert. GDP-, GTP-ktsre kpesek, sajt GTPz-aktivitssal rendelkeznek. A - s -
alegysgeknek ugyancsak tbbfle izoformja ltezik. Ezek a fehrjk ersen egymshoz tapadnak, fiziolgis
253
45. Szignltranszdukci II.:
Heterotrimer G-proteinek ltal
kzvettett jeltvitel
krlmnyek kztt nem vlnak el egymstl. A -subunithoz izoprenillnc kapcsoldik, az egsz G-protein
komplexet ez horgonyozza le a sejthrtya bels felsznhez.
A heterotrimer G-proteinek specifikus receptor- s effektorfehrjk kztt kzvettenek (45.2. bra). A ligand
receptorhoz ktdsnek hatsra a5 Gp-komplex a receptorhoz kapcsoldik, konformcivltozst szenved
s az -alegysgen a GDP GTP-re cserldik. Az gy aktivlt -alegysg disszocil a -komplexekrl s hatst
gyakorol effektorra (E1 a 45.2. brn), mely a jelet a sejt belsejbe tovbbtja. Bizonyos rendszerekben a -
komplex is kpes az -alegysgtl fggetlen szignalizcira (E2 effektor az brn). Az -subunit GTPz
aktivitsa kzben a GTP-t GDP-re hidrolizlja, az inaktivlt -lnc gy ismt -dimerhez ktdik, a receptor-G-
protein-effektorok rendszer visszakerl a nyugalmi alapllapotba.
45.2. bra - 45. 2. bra: Heterotrimer G-fehrje ltal kzvettett jeltovbbts. (A:
alapllapot; B: receptor-aktivls; C: alegysg-disszocici; D: effektor-aktivls; E:
GTP-hidrolzis)
A heterotrimer G-proteinek tjn hat receptorok hatalmas fehrjecsaldot alkotnak. Jellemz rjuk, hogy ht
transzmembrn -hlix rgzti ket a sejthrtyba (heptaheliklis receptorok, l. 33.2. bra). A csald egyes
tagjai rzkszervi ingereket (szag, z, fny), msok kmiai jeltviv genseket (hormonok, neurotranszmitterek)
rzkelnek. Szmuk ezernl is nagyobb. A G-proteinek effektorai is tbbflk lehetnek; az albbiakban
rszletesen az adenilciklz s a foszfolipz C enzimek ltal kzvettett mechanizmusokkal foglalkozunk.
2. A cAMP-t
254
kzvettett jeltvitel
A G-proteinek ltal kzvettett jeltviteli utak kzl a legrszletesebben vizsglt mechanizmus az adrenalin -
adrenerg receptorokon keresztl kifejtett hatsa: mjsejtekben ez a glikogn lebontshoz vezet. A -adrenerg
receptorral klcsnhatsba kerl G-protein effektora az adeniltciklz enzim (45.3. bra). Az adrenalin
receptorhoz ktdse stimullja az adeniltciklzt: a kzvett G-proteint ezrt Gs-nek (-alegysgt pedig s-
nek) nevezzk. Az adeniltciklz transzmembrn fehrje, a citoszl fel nz aktv centruma ATP-bl 5, 3-
ciklikus-AMP-t (cAMP-t) hoz ltre. (45.4. bra) A cAMP msodlagos messenger molekula: pldnkban
adrenalin (az elsdleges messenger) hatsra kpzdik a sejtben s clmolekulihoz diffundlva az adrenalin
intracellulris hatst kzvetti mindaddig, amg koncentrcija a nyugalmi szintre nem cskken. (Elbontst a
ciklikus nukleotid foszfodiszterz enzim vgzi: 5-AMP-v alaktja.) A cAMP f clmolekuli a cAMP-fgg
fehrjekinz (protein-kinz A, PKA) enzimek. A PKA izoformi kt regultor (R) s kt katalitikus (C)
alegysgbl llnak. A tetramer szerkezet enzim inaktv, cAMP molekulk az R-alegysghez ktdve a
komplex disszocicijt idzik el: a felszabadul aktv C-alegysgek klnbz clfehrjket foszforillnak.
45.3. bra - 45.3. bra: A cAMP-t
45.4. bra - 45.4. bra: A ciklikus-AMP kpzdse s elbontsa
A PKA szerin/treonin proteinkinz: ATP-molekulk szls foszftjt hastja le s kapcsolja szterktssel a

clfehrjk specifikus szerin vagy treonin oldallncainak hidroxilcsoportjaihoz. A foszforilci
255
kzvettett jeltvitel
konformcivltozst, kvetkezskppen a fehrje funkcijnak, aktivitsnak mdosulst eredmnyezi. A
ligandumtl s a clsejttl fggen a cAMP klnbz fehrjk foszforilcijt serkenti: enzimek (pl. a
glikogn-metabolizmus kulcsenzimei), membrnfehrjk, strukturlis fehrjk, transzlcis faktorok stb.
mdosulhatnak.
A felszabadul C-subunitok egy rsze transzlokldik a sejtmagba s ott transzkripcis faktorokat foszforill.
Ezek kzl a legfontosabb egy olyan fehrje, amely a cAMP-reszponzv elem (CRE) nev enhancerhez ktdik.
A CREB (CRE-binding protein) leucin-cipzr fehrje (l. 32. fejezet), szmos izoformja ltezik. Enhancer-eleme
mely sok gn promterrgijban jelen van dimer formban kti meg a CREB-komplexeket, majd
foszforilcijukat kveten megn az rintett gn expresszija. A gnaktivciban fontos szerepet jtszik egy
koaktivtor fehrje, a CBP (CREB-binding protein). Ez a fehrje nukleoszomlis hisztonokat acetill az rintett
gn promter-rgijban, fellaztja a kromatint s elsegti az RNS-polimerz II ktdst. A CREB-
fehrjknek s a CBP-nek fontos szerepk van a cAMP sokszn cellulris hatsainak kialaktsban (a sejtek
szaporodsnak, differencildsnak, tllsnek serkentsben, a kzponti idegrendszerben pedig a tanuls s
a memria bonyolult folyamataiban).
A cAMP-rendszert az adrenalinon kvl szmos egyb hormon hasznlja jeltvitelben: a hipofzis ells lebeny
hormonok kzl az ACTH, FSH, LH, TSH, a hts lebeny vazopresszin hormonja, a parathormon, a glukagon
ugyancsak Gs-kzvettett szignalizcival mkdik. Ms gensek gtl, inhibtor hats Gi-fehrjken keresztl
hatnak: az aktivlt receptor az i-alegysget GTP-kt llapotba hozza, az azonban nem serkenti, hanem gtolja
az adeniltciklzt, cskkenti a cAMP-szintet. gy fejti ki pldul hatst az acetilkolin a szvizomban.
3. Az inozitol-foszfolipid t
Az 1970-es vekben figyeltk meg, hogy az acetilkolin egyes clszveteiben (pl. az exokrin pankreszban)
fokozza a foszfolipidek metabolizmust. Az elmlt vekben bebizonyosodott, hogy a hats jeltviteli jelensg s
hogy foszfolipid eredet msodlagos messengerek nemcsak az acetilkolin szekrcit kivlt hatsban, hanem
ms szignltranszdukcis folyamatokban is rszt vesznek.
A lert hatst inozitol-foszfolipidek hidrolzise kzvetti. A sejtmembrn bels foszfolipidrtegnek egyik

komponenst, a foszfatidilinozitol-biszfoszftot (PIP2) egy foszfolipz C (PLC) enzim diacilglicerinre (DAG) s
inozitol-triszfoszftra (IP3) hidrolizlja (45.5. bra). Mindkt termk msodlagos messenger, melyek kt kln
jeltviteli utat aktivlnak (45.6. bra).
45.5. bra - 45.5. bra: A foszfolipz C reakci (a rvidtseket l. a szvegben)
45.6. bra - 45.6. bra: Az inozitol-foszfolipid t
256
kzvettett jeltvitel
A ligand-stimullt receptor hatst specilis heterotrimer G-protein, a Gq-fehrje kzvetti. Hatsra a

foszfolipz C enzimcsald PLC- izoenzimei a membrn bels felsznn PIP 2 molekulkat hastanak. Az egyik
termk, az IP3vzoldkony msodlagos messenger, mely dffzival gyorsan elri clfehrjit, az
endoplazmatikus retikulum membrnjnak Ca++-csatornit. A csatornk megnyilsa Ca++-ionoknak a citoszlba
znlst eredmnyezi, ahol a Ca++ ugyancsak msodlagos messengerknt szmos clfehrje aktivitst
befolysolja. Ezek egyike a kalmodulin, mely Ca++-t megktve egy szerin/treonin-specifikus fehrjekinzt, a
Ca++/kalmodulin-fgg proteinkinzt (CaM-kinz) aktivlja. A CaM-kinz egyik szubsztrtja az a CREB
transzkripcis faktor, melyet a PKA is foszforill (l. elbb): mindkt jeltviteli t serkentse a megfelel
clgnek expresszijhoz vezet.
A PLC- reakci msik termke a DAG; apolros molekula lvn ez a msodlagos messenger a membrnban
diffundl s a citoszlbl maghoz vonzza clfehrjit, a proteinkinz C (PKC) enzimeket. Ezek a szerin/treonin
proteinkinzok ugyancsak tbb fehrjeszubsztrtot kzttk transzkripcis faktorokat is foszforillnak. A
PKC-jeltvitel gnexpresszis hatsnak egyik fontos sejtmagon belli meditora az AP-1 transzkripcis faktor
(l. 32. fejezet), mely szmos clgn indukcijt idzi el.
257
kzvettett jeltvitel
Ajnlott irodalom
Buck, L. B. (2004): The search for odorant receptors. Cell S116, S117S119.
USA, 613617, 622627.
Gutkind, S. (1998): The pathways connecting G protein-coupled receptors to the nucleus through divergent
mitogen-activated protein kinase cascades. J. Biol. Chem. 273, 18391842.
Hamm, H. E., Gilchrist, A. (1996): Heterotrimeric G proteins. Curr. Op. Cell Biol. 8, 189196.
Karin, M., Hunter, T. (1995): Transcriptional control by protein phosphorylation: signal transmission from the
cell surface to the nucleus. Curr. Biol. 5, 747757.
Neves, S. R., Ram, P. T., Iyengar, R. (2002): G protein pathways. Science 296, 16361639.
Pastan, I.: Cyclic AMP. Scientific American 1972/8, 97105.
Spiegel, S., Foster, D., Kolesnick, R. (1996): Signal transduction through lipid second messengers. Curr. Op.
Cell Biol. 8, 159167.
258
III.: Jeltvitel tirozin-proteinkinz
receptorokrl
A sejtfelszni receptorok egy csoportja transzmembrn jeltviteli funkcijt enzimaktivitsa segtsgvel ltja el.
A katalitikus receptorok legfontosabb s legnpesebb csaldjt olyan membrnfehrjk alkotjk, melyek
tirozinspecifikus fehrjekinz aktivitssal rendelkeznek. Az els tirozin-proteinkinz enzimet 1980-ban
azonostottk a daganatkelt Rous sarcoma vrus Src onkoproteinje szemlyben (az onkognekkel s
termkeikkel az 55. fejezetben rszletesen foglalkozunk): ez az enzim szubsztrtfehrjinek aroms
hidroxilcsoportokat tartalmaz tirozin-oldallncait foszforillja ATP felhasznlsval. Nem sokkal ksbb
kiderlt, hogy szmos sejtfelszni receptorfehrje is rendelkezik tirozinspecifikus fehrjefoszforilcis
aktivitssal. Ezek a receptorok polipeptid termszet nvekedsi faktorok sejten belli hatsait kzvettik.
1. Nvekedsi faktorok s receptoraik

A szervezetnkben termeld tbb tucat nvekedsi faktor sokrt s ltfontos szablyozsi funkcikat lt el
sejtjeinkben: a sejtszaporods, -tlls, -anyagcsere, a szvetek differencicija egyarnt polipeptid nvekedsi
faktorok ellenrzse alatt ll. (Nhny fontos kpviseljket a 46.1. tblzat sorolja fel.)
46.1. tblzat - 46.1. tblzat: Polipeptid nvekedsi faktorok

Nvekedsi faktor Hats
PDGF trombocita-eredet nvekedsi faktor klnbz sejtek (pl. fibroblasztok)
(platelet-derived growth factor) prolifercija
EGF epidermlis nvekedsi faktor (epidermal klnbz sejtek (pl. hmsejtek)
growth factor) prolifercija
FGF fibroblaszt nvekedsi faktor (fibroblast klnbz sejtek prolifercija neuronok
growth factor) differencicija embrionlis fejlds
NGF idegsejt nvekedsi faktor (nerve growth neuronok tllse s differencicija
factor)
inzulin metabolikus hatsok (pl. glukzfelvtel)
sejtproliferci
IGF inzulinszer nvekedsi faktor (insulin-like sejtproliferci metabolikus hatsok
growth factor) sejtdifferencici
VEGF angiogenetikus nvekedsi faktor (vascular endotel sejtek prolifercija
endothelial growth factor)
1.1. A receptoraktivci mechanizmusa

Br a receptorok kztt finom szerkezeti s jelents funkcionlis klnbsgek vannak (46.1. bra s tblzat), a
megfelel nvekedsi faktor ktdse lnyegben hasonl molekulris mechanizmussal idzi el a
transzmembrn jeltvitelt (46.2. bra).
46.1. bra - 46.1. bra: Nhny nvekedsi faktor receptor szerkezete
259
46. Szignltranszdukci III.:
Jeltvitel tirozin-proteinkinz
receptorokrl
46.2. bra - 46.2. bra: A nvekedsi faktor receptorok aktivlsnak mechanizmusa (1.
ligandkts; 2. receptor-dimerizci; 3. autofoszforilci; 4. jeltviteli fehrjk ktdse
s foszforilcija [a rvidtsek jelentst lsd ksbb a szvegben])
260
receptorokrl
261
receptorokrl
A specifikus ligand ktdse a receptor sejtfelszni ektodomnjhez receptor-dimerizcit idz el (a tetramer
szerkezet inzulinreceptor esetben erre nincs szksg, l. 46.1. bra). A receptor-alegysgek egyms citoszl-
domnjt tbb tirozin-oldallncon foszforilljk (receptor-autofoszforilci). A receptoron ltesl foszfotirozin
oldallncok specifikus szignalizcis fehrjk kthelyl szolglnak. A kapcsold jeltviteli fehrjket a
receptor foszforillja s ezltal aktivlja, a jel tovbbhalad a sejt belsejbe.
A receptorfunkci kritikus lpse a receptor-clfehrje komplexek kialakulsa. Ennek molekulris rszleteit az

1990-es vek kutatsai tisztztk. A nvekedsi faktor receptorokkal klcsnhatsba kerl fehrjk elsdleges
szerkezetnek vizsglata kidertette, hogy hasonl stukturlis elemeket tartalmaznak. Mivel ezeket elszr az
Src-fehrjben rtk le, Src-homolgia (SH) domneknek neveztk el ket (46.3. bra). Az SH2-domnek
kompakt, globulris polipeptid-rgik, melyek a partnerfehrjn foszforillt tirozint ismernek fel s ktdnek
hozz. Mivel a receptoron ltalban tbb tirozin-oldallnc is foszforilldik s ezek aminosav krnyezete
klnbz, az aktivlt receptor egyszerre tbbfle jeltviteli fehrjvel ltesthet kapcsolatot, egyidben tbb
jeltviteli t is aktivldhat. Az autofoszforillt receptor teht specifikus SH2-domn tartalm fehrjket halsz
ki a citoszlbl s hasznl jeltovbbtsra. (Ezek kiltvel s funkcijval a fejezet msodik felben
foglalkozunk.) A receptorhoz ktd fehrjk SH3-domnt is tartalmazhatnak: ez a jeltvitelben disztlisan
elhelyezked clfehrje prolinban gazdag rgijt kti meg s vonja be ezzel a szignltranszdukcis folyamatba.
(A teljessg kedvrt: az Src-fehrje SH1 domnje a tirozin-proteinkinz centrum.)
46.3. bra - 46.3. bra: SH2- s SH3-domneket tartalmaz jeltviteli fehrjk (a

rvidtsek jelentst lsd a szvegben)
2. A nvekedsi faktor receptorokrl kiindul

jelplyk
Az aktivlt nvekedsi faktor receptorokrl tbb szignltranszdukcis t indul ki (46.4. bra). Ezek kztt
vannak, amelyek kzvetlenl a receptorrl erednek, tbb jeltviteli utat azonban egy monomer G-protein csald
(Ras-fehrjk) kzvettenek.
2.1. A foszfolipz C t
A ras-fggetlen jeltvitel egyik pldja a foszfolipz C t. A foszfolipz C enzimek bizonyos tpusai (PLC-
izoenzimek) heterotrimer G-proteinek effektorfehrji (l. 45. fejezet). A foszfolipz C- (PLC-) enzimcsald
tagjai SH2-domnnel rendelkeznek, teht kpesek aktivlt nvekedsi faktor receptorok hatst kzvetteni a
sejtbe. A PLC- enzimek szubsztrtja is a PIP2, termkei pedig a DAG s az IP3, a jeltviteli utak teht
megfelelnek a PLC--val kapcsolatban lertaknak (l. 45. fejezet).
2.2. A Ras-fehrjk
A Ras-fehrjket a korbban emltett Src-proteinhez hasonlan eredetileg mint daganatkelt RNS-vrusok
onkoproteinjeit azonostottk, majd normlis sejtekben is megtalltk ket (l. 54. fejezet). Kismret, egyetlen
polipeptidlncbl ll monomer G-proteinek, izoprenillnccal rgzlnek a sejthrtya bels felsznn. Egyb
guaninnukleotid-kt fehrjkhez hasonlan inaktv, GDP-kt s aktv, GTP-kt alakban lteznek. A Ras-
fehrjk aktivcijt a nvekedsi faktor receptorhoz ktdse idzi el (46.5. s 46.6. bra). Az
262
receptorokrl
autofoszforillt receptor specilis adapterfehrje molekult kt meg: ez SH2-domnjvel a receptorhoz, SH3-
domnjvel pedig egy olyan enzimhez kapcsoldik, mely a Ras-fehrjn a GDP-t GTP-re cserli (az enzimfajta
jellse az angol nv [guanine-nucleotide exchange factor] alapjn GEF). Az aktivlt RasGTP-komplex
effektorfehrjkre tovbbtja a jelet (l. ksbb), majd sajt GTPz-aktivitsa segtsgvel visszatr a nyugalmi
RasGDP-formba. Mivel a Ras-fehrjknek szemben a heterotrimer G-proteinek -alegysgvel gyenge
GTPz-aktivitsuk van, a hatkony inaktivcihoz egy, ugyancsak a receptor ltal szablyozott faktorra, a
GTPz aktivl proteinre (GAP) is szksg van. Mint ksbb ltni fogjuk, a Ras-ciklus zavarai gyakran
vezetnek fokozott sejtprolifercihoz, daganatkpzdshez.
46.4. bra - 46.4. bra: A nvekedsi faktorok jeltviteli tjai
46.5. bra - 46.5. bra: A Ras/MAPK jeltviteli t (a rvidtsek jelentst l. a

szvegben)
263
receptorokrl
A RasGTP komplexekhez a citoplazmbl effektor fehrjk ktdnek s viszik tovbb a jelet a sejt belsejbe.
Ezek szma megkzelti az egy tucatot, rendkvl bonyolultt, biolgiai hatsait tekintve pedig soksznv tve
264
receptorokrl
a nvekedsi faktorok jeltvitelt. Kzlk az albbiakban a hrom legfontosabb jelplyval foglalkozunk (l.
46.4. bra).
46.6. bra - 46.6. bra: A Ras-ciklus
2.3. Az ERK-t
Az 1990-es vek egyik legjelentsebb sejtbiolgiai felfedezse olyan fehrje-foszforilcis lncolatok
felfedezse volt, melyekben mitogn (vagy msfajta) stimulci hatsra hierarchikus rendszerben egymsra
pl proteinkinzok egymst foszforillva-aktivlva tovbbtjk a jelet a sejtmembrntl a sejtmag fel. Az
elsknt azonostott, szerin/treonin-specifikus mitogn-aktivlt proteinkinzokrl (MAPK) ezeket a rendszereket
sszefoglal nven MAPK-kaszkdoknak nevezzk. A nvekedsi faktor jeltvitel MAPK-ai az
extracellulris szignl ltal regullt kinzok (ERK-ek; 46.5. bra). Ezeket MAPK-kinzok (MAPKK-ok)
aktivljk tirozinon s treoninon vgrehajtott foszforilcival; a nvekedsi faktor jeltvitelben rszt vev
MAPKK-ok neve: MEK (MAPK/ERK-kinz). A kaszkd legproximlisabb elemei a MAPKK-kinzok
(MAPKKK-ok): ebben a jeltviteli tban az eredetileg onkoproteinknt felfedezett Raf-fehrjk. Az aktivlt
RasGTP-komplex a membrnhoz vonzza a Raf szerin/treonin-specifikus kinz fehrjket s rajtuk keresztl
stimullja az egsz proteinkinz-kaszkdot. Az ERK-enzimek szmos clfehrjt foszforillnak. Egyes
molekulik a sejtmagba is transzlokldnak s ott transzkripcis faktorokat is aktivlnak. A nvekedsi faktor
jeltvitel egyik fontos clpontja a szrum-reszponzv elem nev enhancer. Ehhez trimer szerkezet
transzkripcis faktor kapcsoldik, melynek egyik alegysgt foszforillja az ERK. gy az SRE-tartalm
clgnek transzkripcija fokozdik. A gnindukci gyorsan, nhny perccel a nvekedsi faktor receptorhoz
ktdse utn bekvetkezik. Az induklt gnek (n. korai vlasz gnek) kzl sokan transzkripcis faktorokat
kdolnak (pl. a Fos, Jun, Myc fehrjt), melyek szintzisket kveten a sejtmagba transzlokldnak s egy
msodik gnindukcis hullmot idznek el. Az n. ksi vlasz gnek termkei (pl. ciklin fehrjk) hozzk
ltre a sejt biolgiai vltozsait (pl. proliferci, differencici). Emls sejtekben tbb, hasonl szerkezet, de
eltr funkcij MAPK-kaszkdot azonostottak az elmlt vekben (l. 48. fejezet). Megklnbztetsl, a
fentiekben vzolt foszforilcis kaszkdot ERK-tnak nevezzk. Az ERK-jelplya jelentsgt alhzza, hogy
az emberi daganatok 85 szzalkban a normlisnl aktvabban mkdik.
2.4. A foszfatidilinozitol 3-kinz t

A sejthrtya inozitol-foszfolipidjei nemcsak foszfolipzok, hanem lipidkinzok szubsztrtjai is lehetnek. Az
utbbiak kz tartozik a foszfatidilinozitol 3-kinz (PI3K)enzim: ennek a heterodimer szerkezet enzimnek az
265
receptorokrl
egyik alegysge adapterfehrjeknt kapcsoldik az aktivlt nvekedsi faktor receptorhoz (46.3. bra), a
katalitikus alegysg pedig ATP felhasznlsval inozitol-foszfolipid molekulkat foszforill (46.7. bra). (A
teljessg kedvrt jegyezzk meg, hogy a PI3K-nak van olyan formja is, melynek aktivcija Ras-fehrjn
keresztl trtnik.) A foszforillt lipidmolekulk (pl. a foszfatidilinozitol-triszfoszft [PIP3]) msodlagos
messengerknt mkdnek. (A PIP3 molekula inaktivlst egy lipidfoszfatz enzim, a PTEN [az angol
phosphatase and tensin homolg rvidtse] vgzi.)
46.7. bra - 46.7. bra: A foszfatidilinozitol 3-kinz reakci (a rvidtseket lsd a

szvegben)
A PI3K-t elemeinek s funkciinak feltrsa napjainkban is folyik. A sejthrtya bels oldaln a nvekedsi
faktor stimulci hatsra PIP3 molekulk szaporodnak fel, melyek a citoszlbl specifikus jeltviteli fehrjket
vonzanak magukhoz s az gy kialakul szignalizcis komplexek tovbbtjk a jeleket a sejt belsejbe (46.4.
bra). Az t legfontosabb enzime egy szerin/treonin-specifikus kinz, a proteinkinz B (PKB). (A PKB
homolgja daganatkelt RNS-vrusok onkoproteinje [l. 54. fejezet], melyet Akt-fehrjnek neveznk. A PKB s
Akt kifejezs szinonmaknt hasznlatos.) Aktivldva, ez az enzim szmos clfehrjt foszforill, rajtuk
keresztl gnek expresszijt, a sejt tllst, transzlcis folyamatait szablyozza. A PI3K/Akt-t egyik fontos
rsztvevje egy szerin-treonin specifikus fehrjekinz, az mTOR (mammalian target of rapamycin; l. 46.4. bra).
Nevt a rapamicin nev antibiotikumrl kapta, melyet szervtltetsen tesett betegek kezelsben
immunszuppressznsknt alkalmaznak. Az mTOR a fehrjeszintzis inicicijt, ezltal a sejtek nvekedst
serkenti. Gtlszert, a rapamicint klnbz daganatok kezelsben tesztelik. Ms PIP 3-aktivlt komplexek a
citoszkeletont kpesek tformlni. A PIP3-t orvosi jelentsgt hangslyozza az a tny, hogy fokozott
mkdse az emberi daganatok mintegy felben kimutathat.
2.5. A Ral t
A nvekedsi faktorok egyes sejtek alakjt, mozgkonysgt is megvltoztatjk, a citoszkeleton tszervezsn
keresztl. A hats f kzvettje a Ras-fehrjk nagycsaldjba tartoz monomer G-protein, a Ral (neve a Ras-
like angol kifejezsbl szrmazik). A Ral guaninnukleotid kicserl faktora hozzktdik a nvekedsi faktor
stimulci kvetkeztben aktivlt Ras-hoz, az ltala ltrehozott RalGTP komplex pedig a Rho-fehrjk
csaldjba tartoz G-proteinek kzvettsvel formlja t a mikrofilamentum rendszert (46.4. bra). Ennek az
tnak a fokozott aktivitsa valsznleg szerepet jtszik a tumorsejt-invziban s az tttkpzdsben (l. 57.
fejezet).
Ajnlott irodalom
Cantley, L. C. (2002): The phosphoinositide 3-kinase pathway. Science 296, 16551657.
USA, 615620, 628636.
Lowe, L. L.: Insulin-like growth factors. Scientific American 1996/2, 6271.
Marshall, C. J. (1996): Ras effectors. Curr. Op. Cell Biol. 8, 197204.
266
receptorokrl
Rajalingam, K., Schreck, R., Rapp, U. R., Albert S. (2007): Ras oncogenes and their downstream targets.
Biochim. Biophys. Acta 1773, 11771195.
Treisman, R. (1996): Regulation of transcription by MAP kinase cascades. Curr. Op. Cell Biol. 8, 205215.
Weinberg, R. A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 126140, 150153,
161184, 782787.
Weis, A., Schlessinger, J. (1998): Switching signals on or off by receptor dimerization. Cell 94, 277280.
267
IV.: citokinek s egyb mitognek
jeltvitele
A sejtszaporods legfontosabb extracellulris szablyozi a tirozin-proteinkinz receptorokon keresztl hat
nvekedsi faktorok (l. 46. fejezet). Szmos egyb fehrjetermszet gens tallhat azonban szervezetnkben,
melyek egyb hatsaik mellett a sejtek prolifercijt is szablyozzk. Az ltaluk aktivlt jelplyk
mkdsi zavarai hasonlan a nvekedsi faktorok jeltvitelnek fokozdshoz daganatos megbetegedsek
kialakulshoz vezethetnek, gy rvid ttekintsk felttlenl indokolt.
1. Citokin-jeltvitel
A citokin-csald tagjai polipeptid termszet ligandok, melyek sokfle clsejtben sokfle biolgiai hatst
fejtenek ki. Kzjk tartoznak az interferonok, melyek clsejtjket rezisztenss teszik vrusfertzsekkel
szemben; a limfocitk prolifercijt s differencicijt serkent interleukinek; a vrsvrsejt-rshez
szksges eritropoietin; a vrlemezkk kpzst serkent trombopoietin; az adenohipofizis hormonjai kzl a
nvekedsi hormon s a prolaktin.
A citokinreceptorok olyan transzmembrn fehrjk, melyek katalitikus aktivitssal nem rendelkeznek.

Hasonlan a tirozin-proteinkinz-receptorokhoz, a ligandktst kveten dimerizldnak s aktv konformcit
vesznek fel. Az aktivlt receptor citoplazmatikus domnjeihez nonreceptor tirozin-proteinkinz enzimek
ktdnek nem-kovalens ktssel (47.1. bra). A citokin-receptorokhoz kapcsold fehrjekinzok neve: JAK (a
Janus-kinz elnevezs a bennk lev kt kinzdomnre utal). A JAK-enzimek egymst foszforilljk, ezltal
kthelyeket teremtenek SH2-domnt tartalmaz citoplazmatikus fehrjk szmra (l. 46. fejezet). A citokin-
jeltvitel f kzvetti a STAT-fehrjk (az angol elnevezs rvidtse: signal transducer and activator of
transcription): SH2-domnjeikkel a JAK-enzimek foszfotirozin oldallncaihoz kapcsoldnak, majd tirozin-
foszforilcijukat kveten egymssal hoznak ltre dimereket. A STAT-dimerek a sejtmagba transzlokldnak
s a megfelel clgnek enhancer-elemhez ktdve aktivljk a transzkripcis folyamat inicicijt, ezltal a
gnek expresszijt. A clgnek a sejtproliferciban s -tllsben kulcsszerepet jtsz fehrjket kdolnak.
Egyb jeltviteli mechanizmusokhoz kpest a citokinek szignltranszdukcija viszonylag egyszer: a sejthrtya
s a sejtmag kztt egyetlen jeltviteli fehrje (a STAT) kzvett.
47.1. bra - 47.1. bra: A citokin jeltvitel (a rvidtsek jelentst l. a szvegben)
268
47. Szignltranszdukci IV.:
citokinek s egyb mitognek
jeltvitele
269
jeltvitele
A citokinhats specilis esett jelenti az interferon fehrjk szerepe a vrusfertzs elleni kzdelemben (47.2.
bra). A vrus ltal megtmadott sejtben specifikus fehrjekinzok aktivldnak, melyek interferon-regull
transzkripcis faktorokat (IRF-fehrjk) foszforillnak a citoplazmban. Az IRF-fehrjk sejtmagba trtn
transzlokcijukat kveten interferonokat kdol gneket induklnak. A szekretlt interferon autokrins
parakrin mechanizmussal, a JAK/STAT-t aktivlsval antivirlis fehrjk szintzist idzi el s ezzel a
fertztt sejtben korltozza a vrusszaporodst s gtolja a szomszdos sejtek fertzst is.
47.2. bra - 47.2. bra: Az interferon fehrjk kpzdsnek szablyozsa s szerepe a

vrusfertzs gtlsban
270
jeltvitele
271
jeltvitele
2. A TGF--t
A transzforml nvekedsi faktor (TGF-) npes ligandcsald tagja. Ezek a fehrjk klnbz sejttpusok
prolifercijt, differencicijt szablyozzk. A TGF- orvosi jelentsgt elssorban az adja, hogy jeltviteli
tjnak tlzott aktivcija szerepet jtszik a tumorinvzi (l. 57. fejezet) folyamatban.
A TGF- receptora szerin/treoninkinz aktivitssal rendelkez heterodimer. Ligandkts hatsra a receptor egy
citoplazmatikus lokalizcij transzkripcis faktor csald tagjait foszforillja. A dimerizlt Smad-fehrjk
transzlokldnak a sejtmagba s clgnjeiket indukljk (47.3. bra).
47.3. bra - 47.3. bra: A transzforml nvekedsi faktor (TGF-) jeltvitele
3. Hedgehog-jeltvitel
Az ecetmuslicban azonostott Hedgehog fehrje (nevt a mutns lgy sndisznszer fenotpusrl kapta)
szekretlt ligand. Receptorhoz ktdst kveten egy transzmembrn effektor fehrje aktivldik, mely a
citoplazmban egy transzkripcis faktort stabilizl, az pedig a sejtmagba bejutva gnexpresszis vltozst idz
el (47.4. bra).
47.4. bra - 47.4. bra: A Hedgehog jeltviteli t
272
jeltvitele
A Hedgehog-t elssorban az egyedfejlds determincis, differencicis folymataiban jtszik szerepet (l. 50.
fejezet). Kros aktivcija daganatkpzdshez vezethet.
4. Wnt-jeltvitel
A Wnt-gneket muslicban, majd emlskben is azonostottk. A Hedgehog-ligandhoz hasonlan a Wnt-
fehrjk is szekretlt nvekedsi faktorok, fiziolgis szerepk az egyedfejlds folyamatainak szablyozsa. A
Wnt-receptorok aktivcija a mikrofilamentumokat az vdezmoszmkhoz kt -katenin-fehrje (l. 41.
fejezet) szolubilis formjnak stabilizlsa: a jelplya serkentsekor a -katenin felszabadul egy multiprotein
komplexbl, bejut a sejtmagba s clgnek indukcijban vesz rszt (47.5. bra). A jeltviteli t tbb
fehrjjnek (Wnt, -katenin s a fehrjekomplex egyik komponense, az APC-fehrje) abnormlis expresszija
daganatkpzdshez vezethet (l. 56. fejezet).
47.5. bra - 47.5. bra: A Wnt jeltviteli t
273
jeltvitele
5. Notch-jeltvitel
Ennek az tnak ugyancsak az egyedfejlds folyamataiban van jelentsge. (Nevt egy muslicamutnsrl kapta,
melynek szrnyn rovtkk jelennek meg.) A jelplya tipikus pldja a juxtakrin szignalizcinak (47.6. bra).
A Notch-fehrje transzmembrn receptor, mely a szomszdos sejt membrnjban elhelyezked Notch-liganddal
kapcsoldva aktivldik. Az aktivlt receptor citoplazmatikus domnjt egy protez lehastja, az a sejtmagba
transzlokldik s egy transzkripcis faktor komplex rszeknt clgnek expresszijt induklja.
Hasonlan a fejezet tbbi jeltviteli tjaihoz, a Notch-jelplynak is vannak onkolgiai vonatkozsai.
47.6. bra - 47.6. bra: Notch jeltviteli t
274
jeltvitele
Ajnlott irodalom
Aaronson, D. S., Horvath, C.M. (2002): A road map for those who dontt know JAK-STAT. Science 296, 1653
1655.
620621, 636640.
Taniguchi, T. (1995): Cytokine signaling through nonreceptor protein tyrosine kinases. Science 268, 251255.
Weinberg, R. A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 141147, 185197.
275
V.: Stressz- s integrin-jeltvitel
Az elz fejezetekben azokkal a jeltviteli mechanizmusokkal foglalkoztunk, melyekre a sejt szaporodsnak
fokozsval vlaszol. Vannak azonban olyan krnyezeti hatsok is, melyek cellulris stresszt okozva veszlybe
sodorjk a sejteket, vagy ppen mechanikai rhatssal alak- vagy mozgkonysgi vltozsokat idznek el.
Ebben a fejezetben a cellulris stressz s az integrin-aktivci jeltviteli kvetkezmnyeit ismertetjk rviden.
1. Stresszhatsok jeltvitele
1.1. Stresszaktivlt fehrjefoszforilcis kaszkdok
Az ERK-enzimeknek (l. 46. fejezet) a sejtek prolifercis s differencicis jeltvitelben jtszott szerept az
1990-es vek elejn ismertk fel. Genetikai s molekulris biolgiai mdszerek segtsgvel ezt kveten
tovbbi mitogn-aktivlt proteinkinzizoenzimeket fedeztek fel. Ezek egymssal szekvencia-rokonsgot
mutatnak s szablyozsuk is az ERK-enzimekhez hasonl elvek alapjn, MAPKK s MAPKKK enzimek ltal
kzvettett fehrje-foszforilcis kaszkd tjn trtnik. Magasabb rend llnyek sejtjeiben teht tbb,
hasonl felpts, egymssal prhuzamos MAPK-t ltezik (jelenleg mr tbb mint egy tucat emls MAPK-
izoenzim ismert): ezek feltrkpezse, biokmiai s funkcionlis jellemzse jelenleg is folyik.
Az j MAPK-utak (48.1. bra) kztt vannak olyanok, melyek a sejt stresszvlaszt kzvettik. A sejtet lete
sorn szmos stresszhats rheti: sugrzsok, hsokk, DNS-krosods, oxidatv stressz, bizonyos extracellulris
ligandok, ozmotikus sokk, mrgez anyagok. A sejtnek ilyenkor kt lehetsge van, hogy helyrelltsa a
megbomlott egyenslyt: tllsi, regenercis kpessgnek fokozsa vagy sejthall induklsa. A tllsben az
ERK-t, a sejtpusztuls elidzsben ms MAPK-kaszkdok: a JNK- s a p38-t jtszanak szerepet. (A
sejthall ezen fajtja, az apoptzis jellemzivel az 51. fejezetben foglalkozunk rszletesen.)
A JNK-enzimek nevket f szubsztrtjukrl az AP-1 transzkripcis faktor Jun-komponensrl kaptk: a Jun-

fehrje N-terminlis rgijban lev szerin-oldallncokat foszforillva aktivljk az AP-1 komplexet (JNK =
Jun N-terminlis kinz). A JNK-ok azonban ms transzkripcis faktorokat is kpesek foszforillni: az AP-1-
helyen kvl a CRE s SRE elemen keresztl is kpesek gnaktivcit elidzni. A p38-proteinkinz a JNK-
thoz hasonl mdon szablyozott, de attl elklnlt jeltviteli t kulcsenzime, ugyancsak tbb
fehrjeszubsztrt foszforillsra kpes. A stresszhatsok teht a JNK-t s a p38-t kzvettsvel sokrt,
rszben mg feltrsra szorul gnexpresszis s biokmiai vltozsokat indtanak el az rintett sejtekben.
1.2. Az NFB-t
A fentiekbl mr kiderlt, hogy a stresszvlasz ltalban gnexpresszis vltozsokkal jr. Ezeket a hatsokat
szmos transzkripcis faktor kzvetti, kzlk is taln legjelentsebb az NFB faktor-csald. Az NFB
fehrjt B limfocitkban, mint az immunglobulin kappa-lnc gnjnek regultort fedeztk fel (innen szrmazik
az elnevezs: nuclear factor B), a faktorcsald egyes tagjai azonban minden szvetnkben expresszldnak, a
stresszvlaszon kvl a sejttlls s a sejthall szablyozsban is szerepet jtszanak. Nyugalmi sejtben az
NFB-heterodimer egy gtl fehrjvel (IB, inhibitor B) alkot komplexet s a citoplazmban, teht inaktv
formban mutathat ki (48.2. bra). Stresszhatsra (pl. sejtfelszni receptorokon keresztl hat, gyulladst
kivlt fehrjk [n. gyulladsi citokinek], oxidatv stressz, bizonyos vrusok hatsra) az IB-t specifikus
fehrjekinz (IB-kinz) foszforillja, aminek kvetkeztben a gtlfehrje proteaszomlis degradci
ldozatul esik. A felszabadul NFB transzlokldik a sejtmagba s szmos clgn transzkripcijt serkenti:
gyulladsi citokinek, immunreceptorok, sejtadhzis fehrjk, a sejthallt szablyoz proteinek kpzdnek, ezek
egyttes hatsa adja meg a sejt vlaszt a krnyezeti behatsra.
48.1. bra - 48.1. bra: MAPK jeltviteli utak emls sejtekben. (A rvidtsek
magyarzatt l. a szvegben. Az resen hagyott tglalapok olyan, mr azonostott
jeltviteli fehrjket reprezentlnak, melyek nevnek ismertetse meghaladja a knyv
kereteit.)
276
48. Szignltranszdukci V.: Stressz-
s integrin-jeltvitel
48.2. bra - 48.2. bra: A stresszvlasz NFB-tja
277
2. Integrin-jeltvitel
Az integrinek az extracellulris mtrix fehrjekomponenseit (kollagn, fibronektin, laminin stb.) a
citoszkeletonnal, elssorban a mikrofilamentum rendszerrel sszekt transzmembrn fehrjk (l. 43. fejezet).
Mint strukturlis fehrjk, fontos szerepet jtszanak a sejtadhziban, a sejt alakjnak meghatrozsban s a
sejtmozgsok szablyozsban. Ezeken a ltfontos funkcikon tlmenen azonban egyre tbb adat gylik ssze
szignltranszdukcis mkdskre vonatkozan. Az -heterodimer felpts integrineket gy foghatjuk fel,
mint sejtfelszni receptorokat, melyeket az extracellulris mtrix komponenseinek ktdse, illetve a sejtet r
mechanikai ingerek aktivljk. Az integrin-molekulk citoplazmatikus domnjein hatalmas mret multiprotein
komplexek (foklis adhzik) kpzdnek, melyek bonyolult s rszben mg fel nem trt jeltviteli plykon
sokrt biolgiai vlasz kialakulst kzvettik (48.3. bra).
278
48.3. bra - 48.3. bra: A foklis adhzi ltal kzvettett integrin-jeltviteli utak (a
rvidtsek jelentst l. a szvegben)
Az adhzis komplexek dinamikuskpzdmnyek: gyorsan felplnek, de le is bomlanak. A mtrix

fehrjekomponenseinek ktdse a membrn integrindimerjeinek aggregcijt idzi el. Hasonl hatsa van a
sejtet r mechanikai ingereknek is: az izomsszehzds feszt hatsa az izomsejtek membrnjban, a
vrram ltal kifejtett er az erek falt blel endotelsejtek hrtyjban vlt ki integrin-oligomerizcit. Az gy
aktivlt, sajt enzimaktivitssal nem rendelkez integrinek a citoszlbl nonreceptor tirozin-proteinkinzokat
ktnek meg. Ezek kzl a legfontosabb a foklis adhzi kinza (FAK): az aggreglt receptorokhoz kapcsold
FAK-molekulk egymst foszforillva kthelyeket hoznak ltre SH2-domnt tartalmaz fehrjk szmra.
Elszr a Src-csaldba tartoz tirozin-proteinkinzok komplexldnak a FAK-lncokkal, kiterjesztve a
megindult tirozin-foszforilcit. Aktinkt fehrjk (pl. vinkulin, talin, -aktinin) kapcsoldsa lehetsget
teremt stresszrostok kifejldsre a foklis adhzibl, a citoszkeleton trendezdse pedig a sejtek alakjnak,
migrcis aktivitsnak megvltozshoz vezet.
A foszforillt FAK adapterfehrjken keresztl a Ras-t is aktivlja: az ERK jeltviteli t stimulcija a

sejttpustl s egyb krlmnyektl fggen specifikus gnek expresszijhoz s prolifercis,
differencicis, sejtmotilitsi vlaszokhoz vezet. Elfordulhat a JNK-plya aktivlsa is, ami a sejt
stresszvlaszt idzi el. A PI3K-t serkentse a mtrixhoz tapadt sejt letben maradst biztostja. Ha a sejt
levlik a mtrixrl, a PI3K-jeltvitel megszakadsa, illetve stresszkinz utak aktivldsa a sejt pusztulst
eredmnyezi. A programozott sejthallnak ez a specilis, anoikisznek (magyarul hajlktalansgnak) nevezett
tpusa akadlyozza meg, hogy a szabadd vlt sejt ms, nem kvnt helyen tapadjon le s hozzon ltre
sejtburjnzst. Tumorsejtekben az anoikisz gyakran nem mkdik, ez okozza a tvoli tttek, metasztzisok
kpzdst (l. az 57. fejezetet).
A fentiekben ismertetett, ersen leegyszerstett s rszleteiben ma mg nem is ismert kp is bizonytja, hogy az

integrin-jeltvitel a sejtek lett komolyan befolysol, patolgiai vonatkozsokkal is rendelkez mechanizmus.
279
Ajnlott irodalom
Aaronson, D. S., Horvath, C. M. (2002): A road map for those who dontt know JAK-STAT. Science 296, 1653
1655.
Barnes, P. J., Karin, M. (1997): Nuclear factor kB a pivotal transcription factor in chronic inflammatory
diseases. N. Engl. J. Med. 336, 10661071.
Chang, L., Karin, M. (2001): Mammalian MAP kinase signalling cascades. Nature 410, 3740.
635638, 641644.
Johnson, G. L., Lapadat, R. (2002): Mitogen-activated protein kinase pathways mediated by ERK, JNK, and p38
protein kinases. Science 298, 19111912.
Martin, K. H., Slack, J. K., Boerner, S. A., Martin, C. C., Parsons, J. T. (2002): Integrin connections map: to
infinity and beyond. Science 296, 16521653.
Sclaepfer, D.D., Hunter, T. (1998): Integrin signaling and tyrosine phosphorylation: just the FAKs? Trends Cell
Biol. 8, 151157.
Taniguchi, T. (1995): Cytokine signaling through nonreceptor protein tyrosine kinases. Science 268, 251255.
Turjanski, A .G., Vagn, J. P., Gutkind, J.S. (2007): MAP kinases and the control of nuclear events. Oncogene
26, 32403253.
193195, 451.
280
VI.: ltalnos kvetkeztetsek s
gyakorlati vonatkozsok
Ebben a fejezetben a szignalizcis folyamatokban fellelhet ltalnos trvnyszersgeket foglaljuk ssze,
illetve rviden foglalkozunk a tmban rejl gyakorlati, klinikai felhasznlsi lehetsgekkel.
1. A jeltviteli folyamatok ltalnos jellemzi

Mint az elz fejezetekbl kiderlt, az intracellulris szignltranszdukci rendkvl szvevnyes folyamat:
nagyszm jeltviteli fehrje s msodlagos messenger vesz rszt benne, ezek tbb jeltviteli plyba
rendezdnek. A kp rendkvl kaotikusnak tnik, nhny ltalnos mkdsi elv, a klnbz plykban kzs
molekulris mechanizmus azonban fellelhet a bonyolult rendszerben.
1.1. A jeltvitel specificitsa

A szignltranszdukci kzponti s jrszt megoldatlan problmja a jeltvitel redundancijnak s
pleiotrpijnak molekulris mechanizmusa. A redundancia lnyege: klnbz ligandok ugyanabban a
sejtben azonos vagy hasonl fenotpusos hatst vltanak ki. Idegsejt-prekurzorokban pldul mind az NGF,
mind az FGF neuritnvekedst indukl. A jelensg magyarzatt a jeltviteli plyk tfedse magyarzza: br az
NGF s az FGF eltr receptorokat stimull, a jeltovbbts legalbbis rszben ugyanazokon az utakon
trtnik. Mindkt nvekedsi faktor differencicis hatst dnt rszben az ERK-t kzvetti.
Ugyanakkor egy bizonyos ligand klnbz sejttpusokban eltr, pleiotrp biolgiai vlaszt idzhet el.
Fibroblasztokon pldul az FGF mitogn, idegsejteken differencicis hats, bkaembriban pedig a
mezoderma indukcijt vltja ki. A szveti specificitst nyilvnvalan az eltr gnexpresszi magyarzza: a
klnbz sejttpusokban a jeltviteli utak klnbz clfehrji vannak jelen, az ltaluk kivltott fenotpusos
hatsok teht eltrek lesznek. A szveti specificitst szolglja az is, hogy a jeltviteli fehrjk ltalban
fehrjecsaldokat alkotnak: az egy csaldba tartoz proteinek elsdleges szerkezete hasonl, de nem azonos.
Biokmiai, funkcionlis jellemzik is klnbznek s szveti expresszijuk is eltr: egyesek ubikviter
fehrjk, mg msok kifejezdse szigoran szvetspecifikus. A jeltviteli fehrjecsaldok ltal knlt
nagyszm kombincis lehetsg olyan funkcionlis s szablyozsi soksznsget eredmnyez, melynek
rszleteit mg csak most kezdi tisztzni a sejtbiolgia.
1.2. Molekulris mechanizmusok a jeltvitelben

Br a jelek intracellulris tovbbtsban tbb ezer molekula vehet rszt, az alapvet szignltranszdukcis
mechanizmusok nhny kategriba besorolhatk.
Msodlagos messengerek. Ezek a nem fehrje termszet, diffuzibilis molekulk a megfelel jeltviteli t
stimulcija sorn kpzdnek, clfehrjiket diffzival rik el s hozzjuk kapcsoldva alloszterikus hatssal
befolysoljk aktivitsukat. A vzoldkony msodlagos messengerek (ciklikus nukleotidok, IP3, Ca++ stb.) a sejt
vztereiben talljk meg clmolekulikat. A lipidtermszet msodlagos messengerek (DAG, PIP3, a
szfingomielinekbl kpzd ceramid stb.) a membrnban mozognak s gy jutnak el hatshelykre vagy
vonzzk magukhoz a citoszlbl a clfehrjt.
Fehrjk mennyisgnek vltozsai. Krnyezeti hatsok gyakran okoznak vltozsokat a jeltviteli fehrjk
koncentrcijban. A fehrjeszint nvekedst leggyakrabban gnindukci okozza, mely ltalban kt
hullmban zajlik: elbb a korai, majd a ksi vlasz gnek transzkripcija fokozdik (l. 46. fejezet). Fehrjeszint
nvekedshez vezet mRNS-ek, illetve fehrjk szelektv stabilizlsa is. Egy fehrje
koncentrcijnakcskkenst gnrepresszi, a mRNS, illetve fehrje gyors degradcija okozhatja. Az mRNS-
ek templtfunkcijnak, illetve letidejnek szablyozsban fontos szerepet jtszanak az miRNS-ek, a fehrjk
gyors s specifikus lebontsa pedig az ubikvitin/proteaszma rendszer feladata (l. 31. fejezet).
281
49. Szignltranszdukci VI.:
ltalnos kvetkeztetsek s
Fehrje-mdosulsok. A jeltovbbts kzvetlen formja a clfehrje foszforilcija proteinkinzokkal. Kt f
tpusa, a szerin/treonin- s a tirozin-foszforilci eltr biokmiai kvetkezmnyekkel jr. A szerins treonin
kismret oldallncainak foszforillsa egyszeren tltsvltozst, az pedig konformcimdosulst s gy a
fehrje aktivitsnak vltozst eredmnyezi. A tirozin megnylt, kiterjedt oldallncnak foszforilcija viszont
felismerhelyet is teremt a polipeptidlncon ms fehrjk szmra. rthet mdon a szerin/treonin- s a
tirozinspecifikus fehrjekinzok kt, egymstl jl megklnbztethet enzimcsaldot alkotnak. (Az egyetlen
ismert kivtel a MAPKK-ok csaldja, melyek ketts specificits fehrjekinzokknt a MAPK-okat treonin- s
tirozin-oldallncokon is foszforilljk.) A proteinkinzok gyakran jeltviteli kaszkdokat alkotnak: a lnc tagjai
egymst foszforillva tovbbtjk a jelet (pl. a MAPK-kaszkdok). A humn genom program tbb mint 500
proteinkinz gnt azonostott az emberi genomban: a fehrjekinzok a legnagyobb fehrjecsaldot alkotjk
sejtjeinkben. Rszt vesznek a sejtciklus, differencici, sejtmozgsok, sejthall, transzkripci, transzlci,
gnexpresszi szablyozsban, kros mkdsk betegsgeket okozhat.
A fehrje-foszforilci ktsgtelenl az egyik legfontosabb szablyozsi mechanizmus sejtjeinkben, szmos

egyb fehrje-mdosulsnak (acetilci, metilci, hidroxilci, stb.) is szerepe van azonban a jeltviteli
folyamatokban. Ezeknek a poszttranszlcis mdosulsoknak a jellemzivel korbbi fejezetekben
foglalkoztunk.
Makromolekulris egymsrahatsok. A kzvetlen jeltvitel fontos formi a jeltviteli fehrjk kztt

kialakul proteinprotein egymsrahatsok: fehrjedomnek felismerik egymst s komplexet kpeznek.
Legismertebbek az SH2- (foszfotirozin-kt) s SH3-domnek (poliprolin-kt rgi). Ezeknek a
kapcsolatoknak a jelentsge, hogy a multiprotein komplexekben fizikai kzelsgbe kerlnek egymssal
szablyoz s szablyozott, enzim s szubsztrt. A kapcsolat lehet induklt (pl. a nvekedsi faktor receptorok
esetben) s lland is. Az utbbi esetben a jeltviteli fehrje a sejt olyan rgijban helyezkedik el, ahol
stimulci esetn egybknt is mkdnie kell. A PKA-t pldul lehorgonyz fehrjk tbb sejtben a
citoszkeletonhoz rgztik, mert egyes clfehrji is itt lokalizldnak. A jeltviteli fehrjknek ez a
kompartmentalizcija nagymrtkben hozzjrul a szignalizci hatkonysghoz, gyorsasghoz s
fajlagossghoz.
A jeltvitel lipid-fehrje kapcsolatok lteslst is elidzheti. A PI3K-t serkentse sorn kpzd PIP3
msodlagos messenger pldul olyan fehrjekinzt vonz maghoz, mely specilis lipidfelismer domnt
tartalmaz.
A transzkripcis faktorok szekvenciaspecifikus DNS-fehrje kapcsolat kialaktsval ltjk el gnregulcis

funkcijukat. Az enhancer-kts szablyozsa dnten a transzkripcis faktor foszforilcijn keresztl
trtnik, de ms mechanizmusok is ismertek. Az emberi sejtekben expresszld mintegy 3000 transzkripcis
faktor szignl-transzdukcis mechanizmus ltali szablyozst egy korbbi fejezetben trgyaltuk (l. 32.1. bra).
1.3. Jelamplifikci
A szignltranszdukci nem egyszeren a jel sejten belli tovbbtst, hanem annak felerstst is jelenti. Az
amplifikcit az okozza, hogy egy enzim molekula tbb msodlagos messengert termel vagy tbb szubsztrtot
kpes talaktani. A 49.1. bra a cAMP-ton mutatja be a jeltviteli t amplifiklt lpseit, de hasonl jelersts
ms szignltranszdukcis plykon is trtnik. A jelamplifikci mrtke tbb ezerszeres is lehet.
49.1. bra - 49.1. bra: Jelamplifikci a cAMP-ton
282
1.4. Jelterminls
Egy jeltviteli mechanizmus gyors s hatkony mkdtetsnek elfelttele az, hogy az aktivlt llapot csak
addig maradjon fenn, amg szksges: a receptorstimulci megsznse utn az egsz rendszer minl elbb
kerljn vissza a nyugalmi llapotba. A jelet teht nemcsak generlni kell, hanem a megfelel pillanatban
terminlni is (pldk a 49.1. tblzatban). Ha a jeltviteli rendszer aktivlt llapota tartss vlik, ez nemcsak a
szablyozottsgot veszlyezteti, de slyos patolgis kvetkezmnyekkel is jrhat (pl. daganatkpzds, l.
ksbb).
49.1. tblzat - 49.1. tblzat: Jeltviteli gensek aktivlsnak s inaktivlsnak

nhny pldja
Jeltviteli gens Jeltermel fehrje Jelterminl fehrje
cAMP adeniltciklz ciklikus nukleotid foszfodiszterz
Ca ++
IP3-rzkeny Ca -csatorna
++
Ca++-ATPz
G-protein GEF GTPz
foszfoprotein fehrjekinz fehrjefoszfatz
acetillt fehrje hiszton acetiltranszferz (HAT) hiszton deacetilz (HDAC)
PIP3 PI3K PTEN
1.5. Jeltviteli hlzatok

Az elz fejezetekben a legfontosabb jeltviteli plykat a knnyebb rthetsg kedvrt mint nll,
egymstl elklnlt egysgeket ismertettk. A valsgban a szignltranszdukcis utak egymssal szmos
ponton rintkeznek, prhuzamos plyk helyett szvevnyes jeltviteli hlzatok formjban jrjk be a sejtet.
A 49.2. bra az egy pontbl kiindul s elgaz, divergl, illetve a klnbz rnyokbl rkez, konvergl
utak egy-egy pldjt mutatja be.
283
49.2. bra - 49.2. bra: A nvekedsi faktor receptorokrl divergl (A.) s a fos-
promteren konvergl(B.) jelplyk
A sejtet krnyezeti hatsok szzainak millinyi kombincii rhetik. A ligand-kombinciktl fggen a sejt
prolifercival, differencicival, anyagcsere-vltozsokkal vagy akr pusztulssal is vlaszolhat. Ennek a
kombinatorilis szignalizcinak a biokmiai httert biztostja a jeltviteli plyk kztti prbeszd
lehetsge, a berkezett szignlok integrlsa.
2. Klinikai vonatkozsok
Intracellulris jeltvitel szksges a szveti differencicihoz, a hormonhatshoz, neurotranszmitterek,
nvekedsi faktorok hatsnak kzvettshez. Vrhatan nagyon sok olyan emberi betegsget fognak tallni,
melynek httert jeltviteli zavar adja. j tudomnyterletrl lvn sz, a jeltviteli betegsgek molekulris
patomechanizmusnak tisztzsa mg ppen csak megkezddtt. Ebben a fejezetben csak nhny plda
megemltsre van lehetsg.
2.1. Nem inzulindependens (II. tpus) diabetes mellitus

A cukorbetegsg (diabetes mellitus) vilgszerte a leggyakoribb anyagcserebetegsg, a vaksg,
veseelgtelensg, rszklet, szvinfarktus s agyvrzs vezet kroki tnyezje. Az esetek tbbsgben (II.
tpus diabetes) az okozza, hogy a clszvetek inzulinrzkenysge cskken. (Az I. tpus, inzulindependens
diabetesben a Langerhans-szigetek inzulintermelse elgtelen.) Az inzulinrezisztens diabetes polignes
rklds betegsg; az esetek egy rszben az intracellulris jeltvitel fehrjit s az anyagcsereutak enzimeit
kdol gnekben bekvetkez mutcik eredmnyezik. Az inzulin-jeltvitel tirozin-proteinkinz receptoron
kezddik (49.3. bra). Az aktivlt receptorhoz nagymret dokkol fehrjk (IRS = inzulinreceptor szubsztrt
proteinek) kapcsoldnak, melyek adapterfunkcit ltnak el: tbb jelplya indul rluk. A Ras/ERK-ton keresztl
mitogn jeltvitel rvnyesl. Az inzulin metabolikus hatsainak f kzvettje a PI3K-t: serkenti a
glikognszintzist, a fehrjeszintzist s a sejtek glukzfelvtelt. A PI3K-t stimulcija kvetkeztben a
citoplazmban vezikulk membrnjban raktrozott glukztranszporter fehrjk exocitzissal a sejtmembrnba
kerlnek s ezltal megn a glukz transzportja a sejtbe. Az inzulinrezisztens diabeteses betegekben eddig
vgzett molekulris biolgiai vizsglatok tbb jeltviteli fehrje mutcis inaktivldst talltk (a receptor,
IRS-fehrjk stb.). Ksbbi kutatsoknak kell tisztzniuk, hogy ezek s ms mutcik milyen mrtkben
felelsek a klinikai kp kialakulsrt.
49.3. bra - 49.3. bra: Az inzulin jeltviteli plyi. (A rvidtsek jelentst l. a

szvegben.)
284
2.2. Nephrogen diabetes insipidus

A hipofzis antidiuretikus hormonja (ADH, vazopresszin) a vesetubulusok sejtjeinek membrnjban lev
akvaporin fehrjket aktivlva serkenti a vz visszaszvst (l. 42. fejezet). A jeltvitel a cAMP-ton keresztl
trtnik. Ennek megszakadsa (pl. az ADH-receptor hinya vagy mkdskptelensge kvetkeztben) ADH-
rezisztens diabetes insipidus kialakulshoz vezet.
2.3. Cholera
A cholerafertzs patomechanizmusa j pldt szolgltat arra, milyen slyos kvetkezmnyei lehetnek egy
jeltviteli t konstitutv aktivlsnak. A baktrium ltal termelt choleratoxin a vkonybl hmsejtjeiben
tartsan aktivlja a Gs-fehrjt, az emelkedett cAMP-szint pedig az epitelilis sejtek membrnjn keresztl
nagymrtk vz- s svesztshez vezet. A hasmens letveszlyes llapotot idz el, anlkl, hogy a vkonybl
nylkahrtyjban jelents morfolgiai krosods jelenne meg.
2.4. Krnikus gyulladsos betegsgek

Szmos gyakori, slyos tnetekkel jr betegsgre az rintett szvetek krnikus gyulladsa jellemz (pl.
rheumatoid arthritis [izleti gyullads], colitis ulcerosa [vastagblgyullads]). Ezen betegsgek
patogenezisben fontos tnyez az NFB-t tarts aktivldsa (l. 48. fejezet), mely a gyulladsos folyamat
fenntartst biztost fehrjk expresszijt induklja. A betegsgek kezelsre hasznlt gygyszerek
(glukokortikoidok, antioxidnsok) ppen az NFB transzkripcis faktor gtlsval fejtik ki jtkony hatsukat.
2.5. Daganatok
A rosszindulat sejtburjnzst a sejtek prolifercijt szablyoz jeltviteli utak mutci(k) kvetkeztben
fellp konstitutv aktivcija okozza. A daganatkpzds molekulris mechanizmusaival a ksbbi
fejezetekben rszletesen foglalkozunk.
Ajnlott irodalom
285
644646.
Levitzki, A. (1996): Targeting signal transduction for disease therapy. Curr. Op. Cell Biol. 8, 239244.
Manning, G., Whyte, D. B., Martinez, R., Hunter, T., Sudarsanam, S. (2002): The protein kinase complement of
the human genome. Science 298, 19121934.
Mochly-Rosen, D. (1995): Localization of protein kinases by anchoring proteins: A theme in signal

transduction. Science 268, 247251.
Pendaries, C., Tronchre, H., Plantavid, M., Payrastre, B. (2003): Phosphoinositide signaling disorders in
human diseases. FEBS Letters 596, 2531.
Saltiel, A. R. (2001): New perspectives into the molecular pathogenesis and treatment of type 2 diabetes. Cell
104, 517529.
Scott, J. D., Pawson, T. (2000): Cell communication: the inside story Scientific American 2000/6, 5461.
286
50. fejezet - 50. Az egyedfejlds
cellulris s molekulris alapjai
Magasabb rend, soksejt szervezetek egyedfejldse sorn a megtermkenytett petesejtbl (zigtbl) jn
ltre a kifejlett szervezet hatalmas sejttmege. A fejlds eredmnye nagyfok diverzits: emls szervezetekben
mintegy 300 klnbz sejttpus alakul ki. Ugyanakkor viszont a genom rintetlen marad, a szervezet
szomatikus sejtjei azonos DNS-llomnnyal rendelkeznek (ez a genom-ekvivalencia trvnye). (A ltez
nhny kivtel pl. az immunglobulin-gnek trendezdse a szablyt ersti.) Az azonos genom eltr
fenotpus paradoxon molekulris alapjainak megfejtse a modern embriolgia egyik fontos feladata. Ebben a
fejezetben az egyedfejlds nhny ltalnos cellulris s molekulris vonatkozsval foglalkozunk,
hangslyozva, hogy a fejldstan egyb krdsei messze meghaladjk egy molekulris sejtbiolgia-knyv
tematikjt. Rviden sszefoglalva: az egyedfejlds sorn azrt alakul ki a sejtek sokflesge, mert (I) a sejtek
klnbz jeleket generlnak s klnbz jelekre adnak biolgiai vlaszokat; s mert (II) gnjeik expresszijt
szablyozni kpesek.
1. Az emlsk korai egyedfejldse

Az egyedfejlds a megtermkenytssel kezddik (50.1. bra): a spermium s az oocita membrnja sszeolvad
s ltrehozza a zigtt. A megtermkenytssel kivltott jeltviteli folyamatok eredmnyekppen aktivldik az
anafzis promcis komplex (l. 18. fejezet), gy az oocita be tudja fejezni a II. meiotikus osztdst, mely egy 2.
sarki testet is ltrehoz. (A sarki testek ksbb elsorvadnak. A meizis folyamatval egybknt a 19. fejezetben
foglalkoztunk.) A zigta hm s nstny pronukleusza S-fzisba lp, majd a maghrtyk felbomlsa utn az apai
s anyai eredet kromoszmk sszekeverednek s vgbemegy az embri els mitotikus osztdsa.
Az emls embri fejldse (50.2. bra) a mh vdett krnyezetben folyik. A zigta barzdldsi osztdsok
sorozatn megy keresztl. Az ezek kztti rvid interfzisok alatt a sejtek alig nvekednek, gy a barzdlds
sorn az embri mrete alig vltozik, szaporod sejtjei pedig egyre kisebbek lesznek. Egszen a 8-sejtes
stdiumig a sejtek totipotensek: azonos fejldsi potencillal rendelkeznek, azaz mindegyikkbl kln-kln
normlis egyed fejldhet. A morula (szedercsra) sejtjei mr differencildni kezdenek: a kpzd
blasztocisztaembricsomjbl az embri, kls trofoblaszt sejtjeibl pedig a mhlepny fog kialakulni. Az
embricsom nvekedsvel s sejtjeinek differencildsval elszr csralemezek, majd magzati
szervkezdemnyek jelennek meg (organogenezis), vgl kifejldnek a vgleges szervek.
50.1. bra - 50.1. bra: A megtermkenyts s a zigta els mitotikus osztdsa
287
50. Az egyedfejlds cellulris s
molekulris alapjai
288
molekulris alapjai
50.2. bra - 50.2. bra: Az emls egyedfejlds korai szakasza
2. Az egyedfejlds alapvet cellulris folyamatai

2.1. Sejtproliferci
Az embri nvekedst mitotikus sejtosztdsok sorozata biztostja. A barzdld embri sejtjeinek ciklusa
rvid, gyakorlatilag csak S- s M-fzisbl ll. Az embrionlis sejtpoliferci rendkvl szigor kontroll alatt ll.
2.2. Determinci
Az embri korai fejldse sorn a pluripotens sejtekbl klnbz szveteket, szerveket ltrehoz sejtek
alakulnak ki. A sejtek teht dntsi helyzet el kerlnek, melyben egy meghatrozott fejldsi t mellett
ktelezik el magukat (determinci), lemondva arrl, hogy ms fejldsi irnyt vegyenek. Az elktelezett
sejtek rjuk a -blaszt kifejezst hasznljuk (pl. fibroblaszt, mioblaszt, neuroblaszt) megtartjk osztdsi
kpessgket s gy azonos fejldsi potencillal rendelkez sejtek csoportjt, klnjt hozzk ltre.
A determinci llapota rkldik az utdsejtekre. Ennek httert a sejtmemria biztostja: az elktelezett

sejtre jellemz specializlt gnexpresszis program vltozatlan formban tkerl az osztdsok sorn kpzd
j sejtekbe is. A stabil gnexpresszis mintzat fenntartsban tbbfle mechanizmus vehet rszt. (I) A
citoplazmatikus memrit a determinlt sejt szabad poliszmin kpzd transzkripcis faktorok biztostjk.
Ezek n. szelektor gnek termkei, melyek szmos egyb, a differencild sejtre jellemz fenotpusos jelleg
kialaktsrt kzvetlenl felels gn mkdst szablyozzk. A szelektor gnek termke gyakran az ket
kdol gn transzkripcijt is serkenti. Ez a pozitv feedback biztostja a megfelel transzkripcis faktor szintet
az utdsejtekben is. (II) Az autokrin memria szekretlt gens tjn tartja fenn az elktelezett llapotot: a
sejtfelszni receptorok kzvettsvel a sejt sajt nvekedsi faktorra reagl. (III) A nukleris memrit
rkld kromatin-modifikcik tartjk fenn. Ennek egy pldja az egyik X-kromoszma inaktivcija az
egyedfejlds korai szakaszban. DNS-metilcival elidzett permanens, rkld gninaktivci a genomilis
bevsds (imprinting).
2.3. Differencici
Az embrionlis sejtek specializldsnak kvetkez lpse a differencilds: a sejtek mr nemcsak
elktelezettek egy meghatrozott fejlds irnyban, hanem fenotpusos vltozsokat is mutatnak s fenn is
tartjk azokat. A terminlisan differencilt sejtek melyeket -citknak neveznk (pl. leukocita, eritrocita stb.)
felveszik az illet sejttpusra jellemz morfolgiai s funkcionlis jellegeket, ezeket az let vgig megtartjk,
osztdsi kpessgket pedig ltalban elvesztik. A differencilt sejtekre jellemz fenotpusos tulajdonsgok
htterben specifikus gnexpresszis mintzat hzdik meg.
2.4. Sejtmozgsok
A fejld embri formldsnak, morfogenezisnek szempontjbl nagy jelentsg a sejtek vndorlsa. A
sejtmozgsok irnytsban fontos szerepet jtszanak kapcsolataik egymssal, illetve az extracellulris mtrix
elemeivel. Ezek az egymsrahatsok a sejtek pozcijnak meghatrozsn kvl a differencicis folyamatokat
szablyoz intracellulris jeltviteli esemnyeket is befolysolnak (l. ksbb).
2.5. Programozott sejthall (apoptzis)
289
molekulris alapjai
Az embrionlis fejlds nemcsak bizonyos sejtcsoportok elszaporodst, hanem ms, feleslegess vlt sejtek
eliminlst is ignyli. A normlis organogenezis teht a prolifercis s apoptotikus folyamatok finoman
szablyozott egyenslyn alapul. (Az apoptzis mechanizmusval a kvetkez fejezetben foglalkozunk.)
2.6. Alakzatformlds
Az embriogenezis sorn a sejtek s a sejt kztti llomny a szvetek s szervek szigoran rendezett trbeli
struktrit, konfigurciit hozzk ltre, mely folyamat a mintzatkialakuls (angol szakkifejezssel pattern
formation) elnevezst viseli. A jelensg alapja a sejtek pozcifgg determincija. Parakrin tpus
szignalizcival egyes sejtek morfogn hats anyagokat (nvekedsi faktorokat, retinsavat stb.) bocstanak ki
krnyezetkbe, melynek koncentrcija a sejttl tvolodva fokozatosan cskken. A krnyez sejtek, rzkelve a
ligandkoncentrcit, a morfogngrdiensbl egyrszt pozcis informcit nyernek, msrszt pedig a bennk
vgbemen szignalizcis s gnexpresszis folyamatok eredmnyekppen meghatrozott fejldsi tvonal
irnt ktelezik el magukat, determinltt vlnak.
3. Szignltranszdukci s embrionlis fejlds

Mint a fentiekbl kiderlt, a sejtek kztti s sejten belli jeltviteli folyamatoknak fontos szerepe van az
embrionlis fejlds szablyozsban. A szignalizci minden formja mkdik: direkt sejtsejt kommunikci
rskapcsolatok s sejtadhzis fehrjken keresztl; jeltvitel az extracellulris mtrix fell integrinek
kzvettsvel; szolubilis nvekedsi faktorok sejtfelszni receptorai tjn.
A nvekedsi faktorok vltozatos hatsokkal jrulnak hozz a szvetek, szervek kialakulshoz. Az EGF-csald
tagjai az epitelilis sejtek, a PDGF elssorban a sima izom- s gliasejtek prolifercijt induklja. Az FGF-
csald fontos hatsa a mezoderma indukcija. Ebben a transzforml nvekedsi faktor (TGF-)-csaldba
tartoz aktivin is rszt vesz. Az inzulinszer nvekedsi faktor (IGF, szomatomedin) nvekedsi hormon
hatsra a mjban kpzdik s a vz elemeinek fejldst stimullja.
4. Homeotikus szelektor gnkomplexek szerepe

A homeotikus gneknagy jelentsg korai dntseket hoznak az egyedfejlds sorn: egsz testrszek,
szegmentumok kialakulst irnytjk. Termkeik a helix-turn-helix osztlyba tartoz transzkripcis faktorok (l.
32. fejezet), melyek egy sor vgrehajt fehrjt (strukturlis fehrjket, nvekedsi faktorokat, mtrix s
sejtadhzis proteineket, enzimeket stb.) kdol gn expresszijt szablyozzk. A homeotikus gnek csaknem
minden llat genomjban megtallhatk. Klnsen a DNS-kt homeodomnt kdol rgijuk (az n.
homeobox) konzervldott ersen az evolci sorn.
A homeotikus gnek sorozatos gnduplikci eredmnyekppen gnsorozatokat, komplexeket alkotnak.

Drosophilban egyetlen ilyen gnsorozat (HOM-komplex) van, melyet 8 gn alkot (50.3.A. bra), emlskben
viszont 4 hasonl gnsorozat van jelen (50.3.B. bra; HoxA-D komplexek). A homeotikus komplexek jellegzetes
tulajdonsga, hogy a gnek kromoszomlis sorrendje megfelel annak a mintzatnak, ahogyan ezek a gnek a
fejfarok tengely mentn az egyes szelvnyekben expresszldnak (50.3.C. bra).
50.3. bra - 50.3. bra: A homeotikus gnkomplexek Drosophilban (A.) s egrben (B.).
A komplexek azonos szmmal jellt gnjei egymssal homolgok. A C. bra a Hox-
gnek expresszijnak eloszlst mutatja az egr embri kzponti idegrendszerben s
szelvnyeiben
290
molekulris alapjai
5. Az egyedfejlds veleszletett zavarai

Az ember mintegy 4000 rkld betegsgnek felben rtak le abnormlis morfogenezist. Az embrionlis
fejlds zavarait elidz mutcik sejtadhzis molekulk, nvekedsi faktorok, receptorok, intracellulris
jeltviteli fehrjk, transzkripcis faktorok gnjeiben egyarnt elfordulhatnak. Az albbiakban nhny
viszonylag gyakori, ismert patomechanizmus betegsget emltnk pldaknt.
Az achondroplasia az rkld trpesg leggyakoribb formja, csontosodsi zavar okozza. Az FGF-receptorok

egyik tpusnak pontmutcis betegsge. Ms FGF-receptor mutcik dominns rklds craniosynostosis-
szindrmkat okoznak. Ezekben a krkpekben a varratok fzija koponyadeformitsokat idz el. Tirozinkinz
receptor mutcis funkcivesztse okozhatja a Hirschprung-betegsget is. Ezt a gyakori veleszletett krkpet a
vastagbl idegelltsnak rendellenessge kvetkeztben fellp szklet, elzrds s az obstrukci eltti
vastagblszakasz kitgulsa (megacolon) jellemzi. Az Albright-fleherediter osteodystrophit a Gs fehrje -
alegysg gnjben bekvetkez mutci okozza. Transzkripcis faktorok gnjben bekvetkez mutci
eredmnyezi tbbek kztt a trpenvssel jr kombinlt hipofzis hormon-deficiencit, illetve az abnormlis
frfi nemi fejldssel s a csontrendszer rendellenesgeivel jellemezhet campomelis dysplasit.
291
molekulris alapjai
Ajnlott irodalom
Epstein, C. J. (1995): The new dysmorphology: Application of insights from basic developmental biology to the
understanding of human birth defects. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 85668573.
Grays Anatomy (Williams, P. L., ed.), Churchill Livingstone, London, 91118, 1995.
Mundlos, S., Olsen., B. R. (1997): Heritable diseases of the skeletal development transcription factors and
signaling pathways. FASEB J. 11, 125132.
Mller, W. A.: Developmental Biology. Springer, New York, 202221, 1997.
Robertson, S. C., Tynan, J.A., Donoghue, D. J. (2000): RTK mutations and human syndromes: when good
receptors turn bad. Trends Genet. 16, 265271.
Webster, M. K., Donoghue, D. J. (1997): FGFR activation in skeletal disorders: too much of a good thing.
Trends Genet. 13, 178182.
292
51. fejezet - 51. Programozott
sejthall
A tbbsejt szervezetekben a sejteknek nemcsak kpzdnik, hanem az egyensly fenntartsa rdekben
pusztulniuk is kell. Ezt a fiziolgis, programozott sejthallt mr a 19. szzad kzepn lertk, majd az 1970-
es vektl kerlt az rdeklds kzppontjba. Ebbl az idbl szrmazik a ma mr szles krben hasznlt
elnevezse, az apoptzis is (grg eredet sz, lombhullst jelent). ltalnosan elfogadott nzet napjainkban az,
hogy minden fiziolgis sejthall, de a patolgis sejtpusztulsok szmos fajtja is apoptzissal megy vgbe. A
programozott sejthall a soksejt llatok sejtjeinek az evolci sorn ersen konzervlt, ltalnosan alkalmazott
ngyilkossgi mechanizmusa. Az apoptzisvizsglatok modellszervezete a primitv fonalfreg Caenorhabditis
elegans, melynek egyedfejldse sorn bekvetkez apoptotikus folyamatok genetikai mdszerekkel jl
tanulmnyozhatk. A C. elegans hallgnjeinek vizsglata rtkes informcikat nyjtott az emlsk
programozott sejthallnak megrtshez is.
1. Nekrzis s apoptzis
A programozott sejthall lesen klnbzik a sejtpusztuls msik alapvet tpustl, a nekrzistl. Ha sejtek
egy csoportjt slyos fizikai vagy kmiai krost hats ri, jellegzetes cellulris tnetek mellett pusztulnak el
(51.1. bra). A srlt sejt megduzzad, magjban a kromatin sztszrt csomk formjban kondenzldik. A
membrnstruktrk krosodsa kvetkeztben tartalmuk kiszivrog a krnyez extracellulris trbe s
gyulladst idz el, melynek keretben az rkez makrofgok vgl is fagocitljk a dezintegrlt sejtet. A
nekrzis lejtszdshoz gnexpresszis vltozsok nem szksgesek, a sejt passzv mdon elszenvedi
pusztulst.
51.1. bra - 51.1. bra: A nekrzis s az apoptzis morfolgiai jellemzi
293
51. Programozott sejthall
Az apoptzist olyan gyakran fiziolgis hatsok vltjk ki, melyek nmagukban nem hallosak: a sejt maga
dntheti el, hogy letben marad-e vagy pedig elpuszttja magt. Ez a fajta sejthall teht aktv, szablyozott
folyamat, lebonyoltsban gnexpresszis vltozsok is szerepet jtszanak. Az apoptzis sorn a membrnok
mindvgig pek maradnak: sejttartalom nem kerl a sejtek kztti trbe, gyulladsos reakci sem alakul ki. A
haldokl sejt stuktrjnak lebontsa teht anlkl trtnik, hogy a krnyez szvetek komolyan krosodnnak.
Az apoptotikus sejt zsugorodik, magjban a kromatinllomny a maghrtya alatt kondenzldik, kzben DNS-t
internukleoszomlis hastsok daraboljk. A zsugorod sejtfelsznrl sejtorganellumokat tartalmaz apoptotikus
testek vlnak le, melyeket a szomszdos sejtek fagocitljk. Az apoptotikus sejtek bekebelezse szelektv,
specifikus folyamat. A haldokl sejt membrnjnak egyik alkotrsze, a foszfatidilszerin mely egszsges
sejtekben a foszfolipid kettsrteg bels, citoszl felli lemezben fordul el - externalizldik, a sejtfelsznre
kerl. A fagocitl sejtek receptoraikkal a foszfatidilszerint felismerve kebelezik be az apoptotikus sejteket. A
sejttrmelknek ez a hatkony eltakartsa megakadlyozza, hogy az elpusztul sejtekbl immunogn hats
makromolekulk (fehrjk, DNS-darabok) szabaduljanak fel, melyek autoimmun betegsget idzhetnnek el.
294
A teljessg kedvrt jegyezzk meg, hogy a szablyozott sejthallnak van egy msik fontos tpusa is, az
autofgia. Toxikus hatsokra a sejtben autofg vakuolumok jelennek meg, a lizoszmk aktivldsa pedig
vgs soron a sejt pusztulshoz vezethet.
2. Az apoptzis fiziolgis szerepe

Sejtek, sejtcsoportok tervszer, programozott elhalsa szmos clt szolgl a tbbsejt llnyek letben. Az
egyedfejlds sorn feleslegess vlt szvetek, szervek eltntetse (pl. az ebihal farknak felszvdsa, az
emlsk elvesjnek visszafejldse), j struktrk kialaktsa (pl. az ujjak kifejldse a kztk lev szvetek
felszvdsval) apoptotikus sejtpusztulst ignyel. A kifejlett szervezetben a szvetek, szervek lland
volumennek, homeosztzisnak fenntartsa a sejtproliferci s -pusztuls egyenslyt felttelezi: a felntt
emberi szervezetben mintegy 1011 sejt pusztul el naponta. A hormonmegvons kvetkeztben fellp szveti
involci (pl. az endometrium elhalsa a menstrucit megelzen) ugyancsak apoptzissal valsul meg.
Apoptzissal pusztulnak el a sajt antigneket felismer, nem kvnatos immunsejtek. Minsgellenrz
mechanizmusknt mkdik a programozott sejthall abnormlis, krosodott sejtek eliminlsban. Az
apoptotikus folyamatok tlslyba kerlse az egyik fontos tnyezje a fiziolgis regeds folyamatnak is.
3. Az apoptzis legfontosabb regultorai

A programozott sejthall rendkvl sszetett folyamat, lebonyoltsban tbbezer fehrje vesz rszt. Az
albbiakban a legfontosabb szereplk rvid jellemzse kvetkezik.
3.1. p53-fehrje
A p53-fehrje a sejtek daganatos talakulsnak gtat szab tumor szuppresszor fehrjk legfontosabbika
(rszletes bemutatst l. az 56. fejezetben). Transzkripcis faktor, mely szmos apoptzist kivlt (pro-
apoptotikus) fehrje gnjt induklja. Stresszhelyzetben (DNS-krosods, szrumheztets, stb.) mennyisge
megn a sejtben.
3.2. Bcl-2 csald

Emberben ez a fehrjecsald tbb mint 20 tagot szmll. Nevt els kpviseljrl, a Bcl-2 fehrjrl kapta,
mely a B-sejtes lymphomk egyik tpusban fokozott mrtkben expresszldik (B cell lymphoma protein 2 l.
55. fejezet). Szerkezet s funkci alapjn a csald tagjait hrom csoportba oszthatjuk (51.2. bra).
51.2. bra - 51.2. bra: A Bcl-2 csald: A. anti-apoptotikus Bcl-2 fehrjk; B. pro-
apoptotikus multidomn Bcl-2 fehrjk; C. pro-apoptotikus BH3-domn fehrjk
Az anti-apoptotikus fehrjecsald prototpusa maga a Bcl-2 fehrje. Ngy konzervlt rgit tartalmaz (BH1-
BH4; Bcl-2 homolgia domnek), melyek az alcsald minden tagjban jelen vannak. Ezek a fehrjk a sejt
tllst serkentik.
A pro-apoptotikus multidomn fehrjk (pl. Bax fehrje) nem tartalmaznak BH4-domnt. A mitokondriumok
kls membrnjban prusokat hoznak ltre, ezzel indtjk el a sejtpusztuls folyamatt (l. ksbb).
295
A pro-apoptotikus BH3-domn fehrjk (pl. Bad fehrje) az elbbi kt alcsald aktivitsnak szablyozsval
idznek el sejthallt.
A Bcl-2 csald a sejttlls s sejthall fontos szablyozi (51.3. bra). A regulci kzponti elemei a BH3-
domn fehrjk. Normlis sejtben ezek inaktvak, az anti-apoptotikus Bcl-2 fehrjk pedig gtoljk a pro-
apoptotikus multidomn proteineket; a sejt letben marad. A cellulris stressz klnbz formiban (DNS-
krosods, hipoxia, nvekedsi faktor megvons, stb.) a BH3-domn csald klnbz tagjai aktivldnak,
megktik s inaktivljk az anti-apoptotikus Bcl-2 proteineket, a pro-apoptotikus multidomn fehrjk pedig
permeabilizljk a mitokondriumok kls membrnjt s beindtjk a sejthall gpezett.
3.3. Kaszpz-csald
A kaszpz fehrjk az apoptzis jeltviteli s vgrehajt fzisban is fontos szerepetjtsz enzimek. Olyan
proteoltikus enzimek, melyek aktv centrumban egy cisztein helyezkedik el, a clfehrjt pedig aszparaginsav
mellett hastjk el (caspase: cysteine aspartyl-specific protease). A kaszpz-csaldba emberben 11 enzim
tartozik; ezek inaktv pro-kaszpzok formjban kpzdnek, aktivlsuk pedig proteoltikus hastssal trtnik.
Kaszpzok mind a kivgzs elindtsban, mind a vgrehajt fzisban rszt vesznek: az inicitor kaszpzok
kzl legfontosabb a kaszpz-8 s kaszpz-9, az effektor kaszpzok kzl pedig a kaszpz-3. Az inicitor
kaszpzok effektor kaszpzokat hastanak s aktivlnak, utbbiak pedig tbbszz clfehrjt hastanak el. Ez a
kaszpz-kaszkd amplifiklja a halljelet s vezet a sejt pusztulshoz.
51.3. bra - 51.3. bra: A Bcl-2 csald tagjainak egymsra hatsai a sejttlls s a
sejthall szablyozsban
4. Apoptzis utak
A sejthallt kivlt szignl hatshelytl fggen az apoptzis kt f tpust klnbztetjk meg: az extrinsic
vagy receptor ltal kzvettett s az intrinsic vagy mitokondrilis utat (51.4. bra).
51.4. bra - 51.4. bra: Az apoptzis extrinsic (receptor ltal kzvettett) s intrinsic
(mitokondrilis) tja (rszletek a szvegben)
296
4.1. Extrinsic t
Az apoptzisnak ezt a tpust szekretlt polipeptidek, hallligandok vltjk ki. Egyik fajtjuk a tumor nekrzis
faktor- (TNF-), mely daganatsejteket s egyes normlis sejteket is kpesek elpuszttani. Receptorhoz
(hallreceptor) ktdve annak trimerizcijt, ezltal adapter fehrjk ktdst idzi el (51.4. bra). A
ltrejv komplexhez pro-kaszpz-8 kapcsoldik, aktivldik s proteoltikus hastssal kaszpz-3 enzimet hoz
ltre. A vgrehajt kaszpz szmos fehrjt hast el: a laminok proteolzise kromatin-kondenzcit s a sejtmag
zsugorodst idzi el;citoszkeleton fehrjk hastsa a sejt alakjnak megvltozshoz, apoptotikus testek
lefzdshez vezet; stresszkinzok (pl. JNK) proteoltikus stimullsa hozzjrul a sejthall felgyorsulshoz.
Magfehrjk hastsa gnexpresszis vltozsokat okoz. Kaszpzok aktivljk a jellegzetes DNS-fragmentcit
kivlt DN-z enzimet is. ltalnosan elfogadott vlemny, hogy nem egyes fehrjk, hanem szmos kaszpz-
szubsztrt hastsa egytt felels a sejthallrt. Az apoptzis teht hall ezer vgs ltal.
4.2. Intrinsic t
Vannak stresszhatsok, melyek nem sejtfelszni receptorok, hanem a sejt belsejben okozott krosods ltal
okoznak sejthallt (51.4. bra). DNS-krosods, oxidatv stressz, nvekedsi faktor megvons egyarnt a p53
fehrje aktivcijhoz vezet. A p53 transzkripcis faktorknt egyb gnek mellett BH3-domn fehrjk gnjt
induklja, a BH3-fehrjk hatsra multidomn Bcl-2 proteinek prusokat kpeznek a mitokondriumok kls
membrnjban. Az intermembrn trbl pro-apoptotikus fehrjk szabadulnak ki a citoszlba. Kzlk a
legfontosabb, a citokrm c pro-kaszpz-9 enzimmel s az Apaf-1 elnevezs strukturlis fehrjvel nagymret,
7 kllvel rendelkez kerkhez hasonl komplexet, apoptoszmt hoz ltre. Az aktivlt kaszpz-9 ezutn
csatlakozik az extrinsic thoz s a sejt sorst a fentiekben mr lert kaszpz-3-tevkenysg teljesti be. A
kaszpz-kaszkd mkdsnek eredmnyekppen irreverzibilis vltozsok mennek vgbe a sejtben: a kromatin
297
kondenzldik, majd daraboldik, a citoplazma zsugorodik, a sejtfelsznrl apoptotikus testek vlnak le, melyek
ldozatul esnek a szomszdos, tll sejtek fagocitl aktivitsnak. Az apoptotizlt sejt, anlkl, hogy
megbontan a szvet integritst, nyomtalanul eltnik.
5. Az apoptzis betegsgei
Mivel a programozott sejthall a szervezet homeosztzishoz hozzjrul rendkvl fontos jelensg, a
normlistl eltr mrtke kros kvetkezmnyekkel jr (51.1. tblzat). Tl kevs apoptzis a proliferci
tlslya ltal kros sejtszaporulatot okoz (pl. daganatok, egyes vrusbetegsgek stb.). Tl sok apoptzis ltfontos
sejtek, szvetek elvesztshez (pl. AIDS, szvinfarktus, stroke), degeneratv krkpekhez (pl. Alzheimer-kr,
Huntington-kr stb.) vezethet.
51.1. tblzat - 51.1. tblzat: Az apoptzis rendellenessgei

Cskkent apoptzissal jr betegsgek Fokozott apoptzissal jr betegsgek
AIDS
daganatok neurodegeneratv krkpek
follicularis lymphomk Alzheimer-kr

p53 szolid tumorok Parkinson-kr
autoimmun krkpek amytrophis lateralsclerosis
systems lupus erythematosus ischaemis krkpek
vrusfertzsek myocardilis infarctus
herpesvrus toxin-induklt betegsgek
poxvrus alkoholos mjkrosods
rthet mdon a programozott sejthallkutatsnak egyik legaktvabb terlete apoptzisindukl s

apoptzisgtl anyagok keresse, gygyszerek kifejlesztse. Apoptzist elidz szerknt a TNF,
glukokortikoidok, kemoterapeutikumok hasznlatosak. A daganat-terpiban az apoptzis-jeltvitelt szelektven
serkent eljrsok az llatksrletek, illetve klinikai kiprbls fzisban vannak. Ilyen lehetsgek a
hallreceptorok clzott serkentse, a PI3K/PKB t (l. 46. fejezet) blokkolsa, a Bcl-2 fehrje szintjnek
cskkentse. A programozott sejthall gtlszereiknt nvekedsi faktorok, szelektv kaszpz-inhibitorok,
antioxidnsok jnnek szmtsba. Neurodegeneratv krkpek gygyszereiknt remnyteljes eredmnyekkel
tesztelnek apoptzis-gtlszereket. A programozott sejthall rendkvl bonyolult folyamatainak feltrsa mind
tbb teret nyit a racionlis gygyszerfejlesztsek szmra.
Ajnlott irodalom
693705.
Csaba Gy. (1995): A programozott sejthall. Termszet Vilga 126, 8081.
Duke, R. C., Ojcius, D. M., Young, J. D. E.: Cell suicide in health and disease. Scientific American 1996/12,
4855.
Friedlander, R. M. (2003): Apotosis and caspases in neurodegenerative diseases. N. Engl. J. Med. 348, 1365
1375.
Green, D., Kroemer, G. (1998): The central executioners of apoptosis: Caspases or mitochondria? Trends Cell
Biol. 8, 267271.
Jacobson, M. D., Weil, M., Raff, M. C. (1997): Programmed cell death in animal development. Cell 88, 347
354.
Kerr, J. F. R. (1995): Neglected opportunities in apoptosis research. Trends Cell Biol. 5, 5557.
298
Reed, J. C., Gewirtz, A. M., Sternberg, C. N., Chitambar, C. R. (2003): Direct targeting of apoptosis in cancer
therapy. Clin. Adv. Hematol. Oncol., 312.
Weinberg, R.A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 334350.
299
52. fejezet - 52. Daganatbiolgia I.: A
tumorsejt ltalnos jellemzi
A tumorkpzds abnormlis sejtproliferci eredmnyeknt jn ltre. A normlis sejtnek rosszindulat
daganatsejtt trtn talakulsa (malignus transzformci) sorn mlyrehat vltozsok jtszdnak le a sejt
letnek minden terletn: zavarok tmadnak a jeltviteli folyamatokban, felborul a sejtciklus szablyozsa,
megvltozik a gnek mkdse, a sejtek kztti kommunikci, a sejtmtrix kapcsolatok. A transzformci
bonyolult mechanizmusnak, jelensgeinek rszletes tanulmnyozsa az elmlt hrom vtizedben, a molekulris
sejtbiolgia metodikai arzenljnak fejldsvel vlt igazn lehetv. A kvetkez fejezetekben az emberisg e
flelmetes betegsgnek alapvet cellulris s molekulris jelensgeivel foglalkozunk. (A bonyolult rszletek az
onkolgia trgykrbe tartoznak.)
1. A daganatok osztlyozsa
A daganatokat biolgiai tulajdonsgaik s a betegsg vrhat kimenetele alapjn kt nagy kategriba szoks
sorolni. A jindulat (benignus) tumorok sejtjei morfolgiai s funkcionlis szempontbl is hasonltanak
azokhoz a normlis szveti sejtekhez, melyekbl a daganat szrmazik. A tumor nvekedse lass s lokalizlt:
ktszveti tok veszi krl, mely meggtolja a krnyez szvetek infiltrlst. letveszlyt csak akkor jelent, ha
rossz helyen vagy tl nagyra n, vagy ha kros anyagokat termel. (Mint pldul az agyalapi mirigy nvekedsi
hormont termel jindulat daganatai.) Sebszi ton ltalban meggygythat. A rosszindulat (malignus)
daganatok kevsb differenciltak, a tumor fejldse sorn tlpi a szvet, szerv hatrt, belen a krnyez
szvetekbe (invzi) s tvoli ttteket (metasztzis) kpez. A beteg hallt ltalban nem a kiindulsi helyen
kialakul primer daganat, hanem a tumor terjedsnek kvetkezmnyei okozzk. (Meg kell jegyezni, hogy a
benignus s malignus sejtburjnzs kztt nem mindig knny klnbsget tenni: a rosszindulat daganat
kpzdsnek legkorbbi stdiuma gyakran nehezen azonosthat. A rosszindulat kifejezs prognosztikai
rtke is cskkent az utbbi idben: a malignus daganatban szenved betegek mintegy fele ma mr
meggygythat.)
A malignus tumorok eredetk alapjn osztlyozhatk. A hmszvet eredet carcinomk teszik ki a

rosszindulat tumorok mintegy 90 szzalkt. Mindhrom csralemezbl szrmazhatnak: ektodermlis
eredetek a br carcinomi; az endodermbl alakulnak ki a td s a gyomor-bl rendszer rkjai; a
mezodermbl szrmaznak az ovarium s az urogenitlis rendszer carcinomi. A sarcomk (pl. fibrosarcoma,
osteosarcoma, myosarcoma, angiosarcoma) mezodermlis eredet tumorok. A leukaemik a vrkpz szvetek
klnbz sejtjeibl szrmaz rosszindulat daganatok, a lymphomk pedig a nyirokrendszer szilrd tumorai.
Kln kategriba sorolhatk a velcs eredet neuroektodermlistumorok (neuroblastoma, retinoblastoma,
medulloblastoma, glioblastoma, stb.).
2. A tumorsejt morfolgija
A daganatsejtek nagyon klnbz mrtkben hasonltanak normlis megfelelikhez. A jl differencilt
tumorok sejtjei kevss trnek el a normlis szveti kptl, a dedifferencilt (anaplasztikus) daganatok viszont
inkbb az embrionlis sejtekhez hasonltanak, organellumaik az rett szveti sejteknek szinte csak
karikatri. ltalnos szablyknt azonban leszgezhet, hogy a legbetegebb sejtek sem tartalmaznak olyan
morfolgiai jegyeket, melyek kizrlagosan jellemeznk a daganatsejtet.
2.1. A sejtmag elvltozsai

A daganatsejt magja gyakran a fokozott aktivits jegyeit viseli. A daganatszvet mitotikus indexe (az osztd
sejtek arnya) emelkedett, az interfzikus magok ltalban duzzadtak. Differencilatlan tumorokra jellemz az
eukromatinizci: a kromatinllomny kevss elektronszr, a heterokromatin keskeny marginlis
kromatinsvra korltozdik. Differencilt daganatokban viszont fokozott kromatin-kondenzci is elfordul. A
nukleoluszelvltozsok gyakoriak: hipertrfia, a fibrillris llomny dominancija fokozott riboszmakpzsre
utal. A sejtmag lebenyezettsge, hiperszegmentcija, bizarr magalakok s nukleolusz-hipertrfia egyttes
megjelense poliploid daganatokra jellemz. A maglebenyezettsget okoz citoplazmatikus betremkedsek
pszeudoinkluzik formjban jelenhetnek meg elektronmikroszkpos felvteleken: a sejtmagon bell
megfigyelhet citoplazmatikus organellumokat ketts maghrtya vlasztja el a mag tbbi rsztl. Vrusok,
300
52. Daganatbiolgia I.: A tumorsejt
ltalnos jellemzi
glikognszemcsk, lipidcseppek valdi magzrvnyokat is alkothatnak. A tumor nekrzist kariopiknzis

(magzsugorods), kariolzis (magsztess), apoptotikus jelek ksrhetik.
2.2. A citoplazma s a sejtfelszn elvltozsai

A daganatsejt differenciltsgi llapottl fggen organellumszegnysg vagy ppensggel tlzsfoltsg is
elfordulhat. A mitokondriumok szma megnhet, bizarr, degenerlt alakok jelenhetnek meg. A durva felszn
endoplazmatikus retikulum eltnst ltalban a szabad riboszmk felszabadulsa ksri. Ms daganatokban az
endoplazmatikus retikulum hipertrofizl. Zrvnyok, glikogn-, lipidszemcsk felszaporodsa gyakori.
Epitelilis tumorsejtek kztt a dezmoszmk felszaporodsa kompenzcis mechanizmusnak tekinthet a sejt
sejt kapcsolatok erstsre. A sejtek legmblydst citoszkeletonvltozsok (pl. a mikrofilamentum rendszer
trendezdse) eredmnyezi. Az intermedier filamentumok diagnosztikus markerknt hasznlhatk a
daganatsejtek eredetre vonatkozan: minden carcinoma citokeratint, a sarcomk, lymphomk, melanoma
malignum vimentint, a myosarcomk dezmint, az astrocytomk gliafehrjket, a neuroneredet daganatok
neurofilamentumokat tartalmaznak. A tumor eredete immuncitokmival tisztzhat. Hmeredet daganatok
esetben a szveti invzi megindulsnak biztos jele a hmsejteket a ktszvettl elvlaszt lamina basalis
(bazlmembrn) krosodsa.
3. A tumorsejt funkcionlis jellemzi

3.1. Szvettenyszeti sejtek transzformcija
Ha erre alkalmas szvettenyszeti sejteket kmiai karcinognekkel, sugrzssal vagy daganatkelt vrusokkal
kezelnek, ezek egy rsze a tumorsejtekre jellemz fenotpusos tulajdonsgokat vesz fel (malignus
transzformci). A transzformlt sejtek citoszkeletonjuk trendezdse kvetkeztben lekerekednek, kevsb
tapadnak a szvettenyszt edny aljhoz, elszaporodva egyms tetejre nnek s a normlis sejtek rtegbl
kiemelked kis sejtcsomkat (fkuszokat) alkotnak (52.1. bra). Minden fkusz egyetlen transzformlt sejt
genetikailag azonos utdaibl alakul ki. A fkusz izollhat, tovbb tenyszthet s kitn modellrendszert
szolgltat a tumorsejt fiziolgiai, biokmiai s genetikai tulajdonsgainak tanulmnyozsra.
52.1. bra - 52.1. bra: Szvettenyszeti sejtek malignus transzformcija
3.2. A transzformlt sejtek viselkedse

Az 52.1. tblzat foglalja ssze a transzformlt sejtek legfontosabb sajtossgait s azok klinikai vonatkozsait.
A sejtmozgs s osztds kontakt gtlsnak megsznse. A normlis sejtek addig vndorolnak s

szaporodnak a szvettenyszt edny felsznn, amg a sejtek egymshoz nem rnek. sszefgg sejtrteg
kialakulsa utn a mozgs s osztds lell a sejtek G0 fzisba kerlnek; a jelensget kontakt inhibcinak
nevezzk. A daganatsejtek ezt a kpessgket elvesztik, egymsra nve csomkat, tbb sejtrteget is
301
ltalnos jellemzi
kialaktanak. A sejtek mozgkonysgt nveli a membrn megvltozsa: a membrnfehrjk oldalirny

mozgsa knnyebb vlik, a glikoproteinek s glikolipidek sszettele mdosul.
Cskkent nvekedsi faktor fggsg. Normlis sejtek csak szrumtartalm tpoldatban szaporodnak: a
szrum nvekedsi faktorai stimulljk a prolifercit fenntart mitogn jeltviteli utakat (l. 46. fejezet). A
daganatsejtek szrumignye cskkent. Sok tumorsejt autokrin mechanizmussal elgti ki nvekedsi faktor
ignyt (l. 44. fejezet). Ms daganatokban a mitogn jelplya konstitutvan aktv: nvekedsi faktorok nlkl is
llandan stimullja a sejtosztdst (l. ksbb).
A letapadstl val fggsg megsznse. A legtbb normlis sejt szaporodshoz az kell, hogy a sejt szilrd
felsznhez tapadjon. Ha a kitapads megsznik, a sejt apoptzissal elpusztul (l. 48. fejezet). In vivo ennek a
jelensgnek melynek grg neve anoikisz (hajlktalansg) risi jelentsge van: az extracellulris mtrixrl
esetleg levl sejtek nem tudnak a vrramba kerlni, mshol letapadni s szvetidegen sejtpopulcit
ltrehozni. A daganatsejtek megvltozott sejtfelszni tulajdonsgaik, cskkent fibronektinkpz kpessgk
miatt eleve gyengbben tapadnak a mtrixhoz. A levl sejtek pedig nem pusztulnak el, megrzik szaporod-
kpessgket, ami in vivo tttkpzshez vezethet. A metasztzisok megjelense a tumorprogresszi
legslyosabb jelensge: a daganatos hallozs 90 szzalkt az tttek kvetkezmnyei okozzk.
52.1. tblzat - 52.1. tblzat: A daganatsejtek fbb jellemzi

A daganatsejtre jellemz vltozs Klinikai kvetkezmny
Megvltozott morfolgia Szvettani diagnzis lehetsge
Megvltozott sejtszaporods
Progresszv nvekeds
Fokozott sejtosztds
Immortalits Invzi s metasztzis
Cskkent nvekedsi faktor igny
Kontakt gtls elvesztse
Fokozott motilits
Sejtfelszni vltozsok
Metasztzis
Glikozilci vltozsa
Fibronektin cskkense Invzi
Letapads-fggsg megsznse
Protez szekrci
Anyagcsere vltozsok
Kachexia
Fokozott glukz s aminosav felvtel
Fokozott glikolzis
Genetikai vltozsok Tumor progresszi, gygyszer-rezisztencia
Fokozott genetikai instabilits
Immortalits. A szervezetbl szvettenyszt ednybe kiltetett sejtek egy ideig normlisan szaporodnak, de
egy bizonyos szm osztds utn a proliferci akkor is megll, ha a tenyszts egybknt optimlis
krlmnyek kztt folyik s a kultra sejtjei vgl is elpusztulnak. A sejtek halandsgt a jelenlegi
elkpzelsek szerint elssorban a kromoszmk telomr-rvidlse okozza (l. 21. fejezet). Normlis sejtek is
tllhetik ezt a krzist s halhatatlann vlnak (immortalizci). Az gy nyert, korltlan ideig tenyszthet
klnokat sejtvonalaknak nevezzk. Az immortalits a daganatsejtek ltalnos jellemzje. Alapja valsznleg
az, hogy a sejtek a daganat progresszija sorn visszanyerik telomerz-expresszl kpessgket.
Gnexpresszis s anyagcsere-vltozsok. A daganatsejtekben szmos gn mkdse vltozhat meg, ezek

hozzjrulhatnak a tumor progresszijhoz. Protez enzimek fokozott szekrcija pldul az extracellulris
mtrix fehrjerostjainak lebontshoz, daganatterjedshez vezet. Sejtfelszni transzportfehrjk felszaporodsa
fokozza aminosavak, glukz felvtelt, gy elsegti a daganatsejtre jellemz fokozott metabolizmust. A
pldkat tovbb lehetne sorolni.
Az apoptzis kpessgnek elvesztse. Ha egszsges sejtekben genotoxikus hatsokra DNS-krosodsok

jnnek ltre, azok egy bizonyos szint felett a sejt pusztulst eredmnyezik (l. 51. fejezet). A rosszindulat
302
ltalnos jellemzi
daganatsejtek ezt a kpessgket elvesztettk: a genomban felhalmozd mutcik nem vezetnek apoptzishoz.
Ennek leggyakoribb oka a p53 fehrje funkcijnak elvesztse (l. 51. s 56. fejezet).
A differencicis kpessg elvesztse. A differencilt sejtek ltalban nem osztdnak tovbb. Ha a szveti
differencici valamilyen oknl fogva elakad, a sejtek osztdsi hajlama megmarad, daganat alakulhat ki. Erre a
mechanizmusra a leukaemik szolgltatnak szmos pldt.
Angiogenezis. A daganat nvekedsvel a belsejben lev sejtek oxign- s tpanyagelltsa elgtelenn vlik.
A nvekeds csak akkor folytatdhat, ha a tumor belsejbe j erek nnek s biztostjk annak vrelltst.
Minden szolid (szilrd) tumor sejtjeire jellemz, hogy angiogenetikus faktorokat (vaszkulris endotelilis
nvekedsi faktor [VEGF], FGF) termelnek s parakrin mdon serkentik j kapillrisok kialakulst. Az
angiogenezis a rosszindulat daganatok nvekedsnek elengedhetetlen felttele: nlkle 2 mm-nl nagyobb
tumorok nem kpzdnnek. Az angiogenezis gtlsa a tumorterpia remnyteljes lehetsge.
Ajnlott irodalom
Azar, H. A. (szerk.): Pathology of human neoplasms: An atlas of diagnostic electron microscopy and
immunohistochemistry. Raven Press, New York, 1638, 1988.
Cooper, G. M.: Oncogenes. Jones and Bartlett Publishers, Boston, 3018, 1995.
725735.
Frei, E.: A daganatok patobiolgija (Orvostudomny) Tudomny Kiad, Budapest, 12/III, 117, 1993.
Gibbs, W. W. (2003): Untangling the roots of cancer. Scientific American 2003/7, 4857.
Hahn, W. C., Weinberg, R. A. (2002): Rules for making human tumor cells. N. Engl. J. Med. 347, 15931603.
Weinberg, R. A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 2534.
303
53. fejezet - 53. Daganatbiolgia II.:
Onkogn DNS-vrusok
A rosszindulat daganatok kialakulsrt klnbz krnyezeti hatsok, faktorok tehetk felelss. A kmiai
karcinognek s a sugrzs mellett jelents szerep jut a daganatkelt vrusoknakis.
1. Onkogn vrusok
A tumorvrusok kztt igen hatkony karcinogn gensek vannak. In vitro szvettenyszeti sejtekben malignus
transzformcit, in vivo fertzssel pedig daganatkpzdst idznek el. Orvosi jelentsgk sem hanyagolhat
el, hiszen az emberi daganatok mintegy 15 szzalkban valsznsthet a vrusetiolgia. Ez nem azt jelenti,
hogy ezek a daganatok hagyomnyos rtelemben vett fertz betegsgek. A humn tumorvrusok ugyanis nem
teljes rtk karcinognek: a daganatkpzdshez egyb genetikai vagy krnyezeti tnyezk hatsra is szksg
van (l. 57. fejezet). Tumorvrusokkal sokan fertzdnek, de daganat szerencsre csak kevesekben alakul ki.
Hatsmechanizmusuk alapjn az onkogn vrusok kt tpusba sorolhatk: a direkt hats vrusok genomja
onkognt tartalmaz, melynek termke a fertztt sejt szablyozhatatlan szaporodst idzi el (pl. humn
papillomavrusok, Epstein-Barr vrus, l. ksbb). Az indirekt hats vrusok onkognt nem tartalmaznak,
prolifercis hatsukat kzvetett ton fejtik ki (pl. hepatitis B vrus).
Az onkogn vrusok kz DNS- s RNS-vrusok is tartoznak. Viszonylag kis genommal rendelkeznek. Kzs
tulajdonsguk, hogy ahhoz, hogy a sejtet stabilan transzformljk, a fertzs sorn genetikai informcijukat be
kell ptenik, integrlniuk kell a cellulris genomba. A daganatkpzds mechanizmusnak vizsglata
nyilvnvalv tette, hogy a virlis s nemvirlis karcinogenezis molekulris jelensgei nagyon hasonlak. Az
elmondottak alapjn rthet, hogy a daganatkelt vrusokat elszeretettel hasznljk mint a karcinogenezis
modell rendszereit.
2. Onkogn DNS-vrusok
2.1. SV40- s poliomavrus
A vrus-tumorigenezis legjobb modellobjektumai a majmok SV40-vrusa s az egerek poliomavrusa. Ezek a
vrusok nagy hatsfokkal transzformlnak erre rzkeny szvettenyszeti sejteket, in vivo azonban sem
termszetes gazdikban, sem ms fajokban nem mutatnak tumorigenitst. (A csoport nhny tagjt gy az
SV40 vrust is jabban kapcsolatba hozzk emberi daganatokkal, a rendelkezsre ll bizonytkok azonban
inkbb ellene szlnak ennek a felttelezsnek.)
A vrusgenom s termkei. Az SV40- s a poliomavrus kismret, kb. 5000 bzispr nagysg, cirkulris
DNS-genomja kt rgibl ll (53.1. bra). A korai rgirl kpzd transzkriptum alternatv splicinggal korai
mRNS-eket produkl, melyekrl a nagy T, a kis t (poliomavrus esetben pedig a kzepes T is) elnevezs
fehrjk kpzdnek a fertztt sejtben. A korai fehrjk a vrus szaporodshoz szksgesek. A poliomavrus
nagy T fehrjje a gazdasejt magjban expresszldik, transzkripcis s replikcis folyamatokat befolysol s
immortalizlja a sejtet. A kzepes T a plazmamembrnhoz kttt s a morfolgiai transzformcit idzi el.
(SV40-vrus esetben a nagy T-fehrje hordozza mindkt funkcit.) A kis T citoplazmatikus fehrje s
kzremkdik a teljes malignus transzformci kialaktsban.
53.1. bra - 53.1. bra: Az SV40-polioma vruscsald genomjnak szerkezete (a nyilak a

transzkripci irnyt jellik)
304
53. Daganatbiolgia II.: Onkogn
DNS-vrusok
A genom ksi rgija a fertzs ksbbi szakaszban expresszldik. Az ltala kdolt fehrjk a kapszid
strukturlis komponensei, melyek a vrusreplikci sorn kpzd rett vrionokba plnek be.
Fertzsi ciklus. Az SV40- s a poliomavrus-fertzs kimenetele dnten fgg a fertztt sejttl (53.2. bra).
A termszetes gazdasejtekben a vrus a sejtmagba jut, korai rgija trdik. A T-fehrjk hatsra a sejt
morfolgiailag transzformldik, a vrus-DNS pedig a sejt genomjtl fggetlenl, extrakromoszomlis
llapotban maradva replikldni kezd a sejtmagban. A ksi rgi ltal kdolt fehrjkkel kapcsoldva a
sejtmagban nagy mennyisg vruspartikulum jelenik meg, a sejt hamarosan sztesik, az j vrusok
kiszabadulnak. A fertzsnek ezt a tpust ltikus fertzsnek nevezzk, az azt lehetv tev gazdasejtet pedig
permisszv sejtnek.
53.2. bra - 53.2. bra: Az SV40-vrus fertzsi ciklusa. A: ltikus fertzs permisszv
sejtekben; B: permanens transzformci nonpermisszv sejtekben
305
DNS-vrusok
Ms fajba tartoz sejtekben a fertzs korai szakasza hasonlan zajlik (53.2.B. bra): a vrus a magba hatol,
transzformlja a sejtet. Ezekben a sejtekben azonban a vrus-DNS nem tud replikldni (nonpermisszv sejtek), a
cellulris genom vrus ltal stimullt replikcija viszont folytatdik. A sejt osztdsval egyre tbb utdsejtbl
tnik el a replikldni kptelen vrus-DNS. A vrusgenom hinyban ezek a sejtek ismt normliss vlnak,
transzformlt llapotuk megsznik. Nagyritkn, kb. minden ezredik fertztt sejtben azonban a vrusgenom
vletlenszeren integrldik a sejt DNS-be, azzal egytt replikldik s az utdsejtben is fenntartja a
transzformlt llapotot. A fertzsen tesett nonpermisszv sejtek kis rszben teht permanens transzformci
alakul ki.
Az elmondottakbl kvetkezik, hogy ezeknek a vrusoknak nem az a clja, hogy tumort okozzanak, hanem
hogy szaporodjanak a fertztt sejtben. Malignus transzformci akkor kvetkezik be, ha a vrus szaporodsa, a
ltikus ciklus gtolt.
2.2. Adenovrusok
306
DNS-vrusok
Az adenovrusok nem llnak rokonsgban az SV40-poliomacsoport tagjaival: genomjuk lnyegesen nagyobb

(kb. 35 kb), lineris ketts lnc DNS. Biolgiai viselkedsk azonban nagyon hasonl: permisszv sejtekben
ltikus fertzst okoznak, nonpermisszv sejtekben pedig transzformcit; genomjuk korai s ksi rgira
oszthat, az elbbi termkei (az E1A s E1B korai proteinek) transzforml, az utbbi strukturlis fehrjk. Az
adenovrusok az emberben tumort nem okoznak. Hasonlan az SV40- s poliomavrusokhoz, az adenovrusok is
kitn laboratriumi modellek molekulris biolgiai folymatok tanulmnyozsra.
2.3. Hepatitis B vrus

A mjrk (hepatocellulris carcinoma) egyike a leggyakoribb rosszindulat daganatoknak. Gyakorisga nagy
fldrajzi eltrseket mutat: Afrikban, Kinban sokkal ltalnosabb mint a fejlett nyugati orszgokban. Ennek
oka, hogy etiolgijban fontos szerepet jtszik az elgtelen higinis krlmnyek kztt gyakori vrus-
hepatitis.
A hepatitis B vrus (HBV) a vr s testnedvek tjn, transzfzival, intravns kbitszerlvezettel, szexulis

rintkezssel terjed fertz gens. A vrussal fertztt mjsejteket az immunrendszer elpuszttja: a folyamat
akt hepatitis kpben zajlik, mely az esetek tbbsgben kvetkezmnyek nlkl gygyul. A fertzsek 510
szzalkban azonban a gyullads perzisztl, a krnikus hepatitis talajn mjzsugorods (cirrhosis) alakul ki, ez
pedig mintegy szzszorosra nveli a hepatocellulris carcinoma kifejldsnek valsznsgt. A vrusfertzs
s a mjdaganat megjelense kztt vtizedek telhetnek el.
Br a hepatitis B vrus az llatvilg legkisebb genommal rendelkez vrusa a 3.2 kb mret cirkulris DNS
gntrkpe s szekvencija is ismert, a hepatokarcinogenezis mechanizmusa tulajdonkppen mg nem tisztzott.
A legvalsznbb ok a krnikus fertzs s sejtpusztuls ltal kivltott lland regenerci, fokozott
sejtproliferci malignus folyamatt vltozsa. A hepatokarcinogenezisben szerepet jtszhat egy vrusgenom
ltal kdolt fehrje (HBX protein) is, mely cellulris gnek expresszijt szablyozza. A vrus kroki szerept
mindenesetre altmasztja az a tny, hogy az anti-HBV vakcinci bevezetsvel a hepatocellulris carcinoma
gyakorisga is lassan cskkenni kezdett. (Itt emltjk meg a hepatitis C vrust is. Br RNS-vrusknt nem
tartozna ebbe a fejezetbe, hatst a HBV-hez hasonlan fejti ki: specifikusan a mjsejteket fertzi, majd az
esetek egy rszben a krnikus hepatitis talajn hepatocellulris carcinoma alakul ki.)
2.4. Papillomavrusok
A tbb mint 100 humn papillomavrus (HPV) -tpus komoly orvosi jelentsggel br. Epitelilis sejteket
fertzve egyesek jindulat szemlcsk kialakulshoz vezetnek, ms tpusok azonban anogenitlis rkokat
okoznak; kzlk a leggyakoribb a nk mhnyakrkja (cervix carcinoma).
A cervix carcinoma szexulis ton terjed betegsg: a fertzs a srlt nylkahrtyn keresztl trtnik. A vrus
egy specifikus integrint hasznl receptorknt; megktdik a hm bazlis rtegnek sejtjein, endocitzissal jut be
a sejtbe, majd transzlokldik a sejtmagba s genomja integrldhat a megtmadott sejt DNS-be. Nagyon ers
bizonytk a HPV kroki szerepre, hogy a vrus-DNS a cervix carcinomk tbb mint 99 szzalkban
kimutathat a daganatsejtek genomjban.
A HPV-genom hasonl az SV40- s poliomavrusok DNS-hez, br azoknl komplexebb gnszerkezet (53.3.

bra). A transzforml gntermkek (E6 s E7 fehrje) a korai proteinek kz tartoznak, a ksi gnek (L1L2)
kapszidfehrjket kdolnak. Az onkoproteinek hatsmechanizmusnak tanulmnyozsa kidertette, hogy az
SV40-, polioma-, adeno- s papillomavrusok kzs tmadspontot hasznlnak a sejt malignus
transzformlshoz: a sejtprolifercit fkentart, kulcsfontossg szablyoz fehrjket (a p53 s az Rb tumor
szuppresszor fehrjt) inaktivljk. Ezekkel a fehrjkkel rszletesen ksbb foglalkozunk (l. 56. fejezet). jabb
adatok szerint a HPV onkoproteinjei zavart idznek el a centroszmk duplikcijban is, az gy fellp
kromoszmarendellenessgek ugyancsak hozzjrulnak a malignus daganat kialakulshoz (l. 57. fejezet).
53.3. bra - 53.3. bra: A cervix carcinomt okoz HPV-16 vrus genomjnak
szerkezete. (E1-E7, a korai rgi termkei; L1-L2, a ksi rgi termkei; a nyl a
transzkripci kezdpontjt s rnyt jelzi.)
307
DNS-vrusok
2.5. Herpeszvrusok
Nagymret (100200 kb) genommal rendelkez vrusok, tbb fajtjuk daganatkpzdst indukl gerinces
gazdaszervezetben. Orvosi szempontbl kt herpeszvrus jelents.
Epstein-Barr vrus (EBV). Nagyon elterjedt vrus: az emberek 90 szzalka fertzdik lete folyamn,
tbbnyire tnetmentesen. Egyes esetekben a vrus akt fertzst okoz, a B limfocitk prolifercijval,
nyirokcsom-megnagyobbodssal, magas lzzal (mononucleosis infectiosa). ltalban gyorsan, kvetkezmny
nlkl gygyul. Immunszuppresszlt llapotban (pl. malris, AIDS-es betegben) azonban a folyamat
malignizldhat, nyirokeredet daganat alakulhat ki. Egyik formja az Afrikban gyakori, de mshol is
elfordul Burkitt-lymphoma. A vrus pontos szerepe a tumor kialakulsban mg nem tisztzott. Egyes
vrusgnek termkei transzforml hatsak lehetnek, de az is elkpzelhet, hogy a vrus ltal kivltott, fokozott
B-sejt proliferci vezet a daganatkpzsrt felels genetikai lzik kialakulshoz (l. 55. fejezet).
Kaposi-sarcomhoz trsul herpeszvrus. A Kaposi-sarcoma rendkvl ritka brdaganat, mely azonban az

AIDS-betegek jelents hnyadban megjelenik a kr ksi szakaszban. 1994-ben rtak le egy herpeszvrust
(humn herpeszvrus-8, HHV8), melyet azta minden Kaposi-sarcombl szrmaz biopsziban megtalltak. A
vrus genomjban tbb olyan gnt azonostottak, melynek termke felels lehet a fertztt sejtek malignus
transzformcijrt s a daganat progresszijrt. Az egyik gntermk angiogn nvekedsi faktor szekrcijt
induklja; ez az gens biztostja a daganat vaszkularizcijt, fokozott vrelltst. Egy msik gn ciklinfehrjt
kdol, ami a vrusfertzst kvet fokozott sejtszaporodsrt felels. A vrusgenom a Bcl-2 csaldba tartoz
antiapoptotikus hats fehrjt is kdol. Komoly erfesztsek folynak az emltett vrusgnek pontos szerepnek
tisztzsra, az AIDS ezen vgzetes kimenetel szvdmnynek hatsos kezelsre.
Ajnlott irodalom
Alami, R. M., Minger, K.: Human papillomaviruses. Science & Medicine, 1998/3, 2835.
Antman, K., Chang, Y. (2000): Kaposis sarcoma. N. Engl. J. Med. 342, 10271038.
Butel, J. S. (2000): Viral carcinogenesis: revelation of molecular mechanisms and etiology of human disease.
Carcinogenesis 21, 405426.
Cooper. G. M.: Oncogenes. Jones and Bartlett Publishers, Boston, 2130, 1995.
735738.
Ktyi I. (2003): Az Epstein-Barr vrus. Termszet Vilga 134, 140141.
308
DNS-vrusok
Lee, W. M. (1997): Hepatitis B virus infection. N. Engl. J. Med. 337, 17331745.
Weinberg, R. A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 6573.
309
54. fejezet - 54. Daganatbiolgia III.:
Onkogn RNS-vrusok
Mg a daganatkelt DNS-vrusok kz klnbz, egymssal rokonsgot nem mutat vrusfajtk tartoznak, az
onkogn RNS-vrusok ugyanazon vrusosztly tagjai. Az els RNS tumorvrust Peyton Rous fedezte fel 1911-
ben (a csirkk rla elnevezett Rous sarcoma vrust). Az 1960-as vekben Howard Temin igazolta, hogy a Rous
sarcoma vrus RNS-nek replikcija egy DNS-intermedier kzvettsvel trtnik, majd Temin s David
Baltimore azonostottk a DNS-kpia szintzist vgz reverz transzkriptz enzimet. A fordtott
informcitvitelbl szrmazik az onkogn RNS-vrusok ltalnosan hasznlt neve: retrovrusok.
1. A retrovrusok fertzsi ciklusa

A retrovrusok kls burkt a fertztt sejt membrnjbl szrmaz foszfolipid ketts rteg alkotja, melybe
transzmembrn fehrjk (Env fehrjk) gyazdnak (54.1. bra). A nukleokapszidot kt azonos
nukleotidszekvencij, nagymret genomilis RNS-molekula, strukturlis fehrjk (Gag proteinek) s reverz
transzkriptz molekulk alkotjk.
54.1. bra - 54.1.bra: A retrovirusok vrionjnak szerkezete
A vruspartikulum megtapad a fertztt sejt felsznn, burka fuzionl a sejthrtyval, a nukleokapszid pedig
bejut a citoplazmba (54.2. bra). A felszabadul RNS-genomon, tRNS-primer segtsgvel a reverz
transzkriptz ketts lnc DNS-msolatot kszt. A bonyolult szintetikus folyamat eredmnyekppen a cDNS
kt vgn azonos szekvencij szakaszok, LTR-szekvencik kpzdnek, melyek a vrusfertzs tovbbi
lpseiben dnt szerepet jtszanak. (Nevk az angol long terminal repeat, azaz hossz lncvgi ismtlds
rvidtse.) A vrus-DNS bejut a sejtmagba s bepl, integrldik a cellulris genomba. (Szemben az onkogn
DNS-vrusokkal melyek esetben a vrusgenom beplse a fertztt sejt DNS-be nagyon ritka esemny [l.
53. fejezet] - a provrus-integrci a retrovrusok letciklusnak rsze, minden sikeres fertzs sorn
bekvetkezik.) A vrus-cDNS genomba plst az integrz enzim katalizlja, melyet a vrusgenom kdol (l.
54.4. bra). Az integrci helye vletlenszeren dl el, maga a folyamat alapvet fontossg a vrus
letciklusban. Az integrldott vrus-DNS, melyet provrusnak neveznk, az LTR-ek vgeivel kapcsoldik a
gazdasejt DNS-hez. Mindkt LTR hiszen azonos szekvencijak tartalmaz promter-, enhancer-rgikat s
poliadenilcis elemet. A proximlis (upstream) LTR RNS-polimerz II promterknt, a disztlis (downstream)
LTR pedig termintorknt mkdve a provrus trst irnythatja. Rajta a teljes vrusgenomnak megfelel
RNS-molekulk s rvidebb mRNS-ek is kpzdnek, rs utn kijutnak a citoplazmba s ott vrionfehrjk
szintzist irnytjk. A vrusfehrje prekurzorok proteoltikus hastst, rst a vrus sajt protez enzime
vgzi. Az Env proteinek beplnek a sejtmembrnba s megktik a citoszlban sszeszerelt nukleokapszid
partikulumokat. Az j vrionok sarjadzssal vlnak le a sejtfelsznrl. A vrus szaporodst is biztost fertzs
teht ltalban nem puszttja el a sejtet, a fertzs nem ltikus. Ugyanakkor a sejt malignusan transzformldhat
is s a vrustermelst is folytathatja.
54.2. bra - 54.2. bra: A retrovrusok fertzsi ciklusa
310
54. Daganatbiolgia III.: Onkogn
RNS-vrusok
A fertzs in vitro (szvettenyszeti) s in vivo krlmnyek kztt hasonl mdon megy vgbe. Nagyritkn
elfordul, hogy a provrus-integrci a csrasejtvonal sejtjeiben megy vgbe. Ilyenkor a provrus az utdokra is
rkldhet, s cellulris DNS-szekvenciv vlva endogn retrovrusknt elterjedhet a populciban. A
gerincesek belertve az embert is szmos endogn retrovirlis elemre tettek szert az evolci sorn, melyek
retrotranszpozonknt (l. 15. fejezet) viselkednek a genomban.
2. Ers s gyenge onkogenits retrovrusok

Klnbz gerinces fajok szmos retrovrust ismerjk. Biolgiai viselkedsk alapjn ezeket a vrusokat kt
nagy csoportba lehet besorolni.
Az ersen onkogn retrovrusok prototpusa a Rous sarcoma vrus (RSV). Csirke bre al fecskendezve ez a
vrus 1-2 hetes latencival sarcomakpzdst idz el. A tumor poliklonlis jelleg, azaz tbb, egymstl
fggetlenl transzformldott sejtbl kpzdtt sejtpopulci alkotja. Szvettenyszetben az RSV hatkonyan
transzforml csirkesejteket, melyek vrust is termelnek. Klnbz gerinces fajok (pulyka, egr, patkny,
macska, majom) tbb mint 40 ersen onkogn hats retrovrust ismerjk.
A gyenge onkogenits retrovrusok egyik pldja az avin leukaemiavrus (ALV). Az ALV-vel fertztt
csirkkben hossz, tbb hnapos inkubci utn lymphoma alakulhat ki, mely szinte mindig monoklonlis, azaz
a daganatsejtek egyetlen transzformlt sejt utdai. Csirkesejttenyszetben a vrus replikldik, de nem
transzformlja azokat. Hasonlan az ersen onkogn retrovrusokhoz, a gyenge onkogenits vrusok is szmos
gerinces fajban elfordulnak.
Az ersen s gyengn transzforml retrovrusok eltr biolgiai viselkedse arra utal, hogy onkogn hatsukat
merben klnbz ton rik el, s ez az ersen onkogn vrusok esetben sokkal hatkonyabb mechanizmus.
311
RNS-vrusok
3. Retrovirlis onkognek
A fent lert klnbsgek molekulris okait transzformci-defektv RSV-mutnsok (td-RSV) tanulmnyozsval
tisztztk. A td-RSV-mutnsok viselkedse hasonl az avin leukaemiavrushoz: csirke fibroblasztokban
replikldnak, de nem kpesek transzformlni azokat. Genomjuk pedig kb. 1500 nukleotiddal rvidebb mint a
vad-tpus RSV- (vt-RSV). Logikus volt a felttelezs, hogy ez az RNS-szakasz tartalmazza a
transzformcirt felels informcit, a retrovirlis onkognt.
Az RSV onkognjt 1976-ban Michael Bishop s Harold Varmus azonostotta (54.3. bra). Vad-tpus RSV
RNS-n reverz transzkriptz segtsgvel egyes lnc, trciummal jellt cDNS-fragmentumokat szintetizltak,
majd ezeket td-RSV RNS-vel hibridizltk. Feltteleztk, hogy a kt vrusban kzs szekvenciknak
megfelelen RNSDNS hibridek jnnek ltre, a csak a vt-RSV genomra jellemz a felttelezett onkognnel
komplementer cDNS-darabok viszont egylnc llapotban maradnak. A ketts lnc hibrideket s az egylnc
cDNS-t hidroxiapatit ioncserl kromatogrfival vlasztottk szt egymstl. Ilyen mdon izolltak egy, az
RSV onkognjre specifikus hibridizcis prbt. Meglepetskre, ez a prba RSV-vel nem fertztt
csirkesejtek, st ms gerinces s gerinctelen fajok DNS-vel is hibridizlt. A ksrletsorozatban teht nemcsak
az els retrovirlis onkognt, a v-src-t, hanem normlis sejtekben jelenlev cellulris protoonkognnek
nevezett prjt, a c-src-t is felfedeztk.
54.3. bra - 54.3.bra: Bishop s Varmus ksrlete: a v-src onkogn azonostsa
A vrusgenomok gntrkpnek, majd szekvencijnak megllaptsval kiderlt, hogy a gyenge onkogenits

ALV-genom a kapszidfehrjk gag-, a reverz transzkriptz pol- s a burokfehrje env-gnjt tartalmazza, mg az
RSV-genomban ehhez mg az src is csatlakozik (54.4. bra). Az ersen onkogn retrovrusok genomjnak
312
RNS-vrusok
vizsglata ezutn azt is kideritette, hogy a v-src-gnen kvl kzel harminc tovbbi retrovirlis onkogn is
ltezik. Ezek klnbz biokmiai aktivitssal rendelkeznek (nhny pldt az 54.1. tblzat tartalmaz) s
valamennyinek ltezik protoonkogn megfelelje. Kiderlt az is, hogy az RSV klnleges abban az rtelemben,
hogy tartalmazza a vrusszaporodshoz szksges sszes gnt (gag, pol, env). A legtbb ersen onkogn hats
retrovrus defektv: a retrovirlis onkogn a genom egy rszt helyettesti. Ezek a vrusok csak segt helper-
vrus jelenltben kpesek szaporodni, mely szolgltatja szmukra a vrion felptshez szksges fehrjket.
rthet mdon ezek a defektv retrovrusok termszetes llatpopulcikban nemigen kpesek fennmaradni;
laboratriumi krlmnyek kztt, illetve hzillatokban (pl. macskkban) okoznak inkbb daganatokat.
Termszetes populcikban a retrovrus-induklt tumorokat jobbra gyenge onkogenits vrusok okozzk
(daganatkpz mechanizmusukkal ksbb foglalkozunk).
54.4. bra - 54.4. bra: Az avin leukaemia vrus s a Rous sarcoma vrus provrusnak
gntrkpe
54.1. tblzat - 54.1. tblzat: Nhny retrovirlis onkogn jellemzi

Onkogn Vrusgazda Vrus-induklt tumor Onkoprotein funkci
src csirke sarcoma non-receptor tirozin-proteinkinz
myc csirke myelocytoma, sarcoma, carcinoma transzkripcis faktor
erbA csirke erythroleukaemia, fibrosarcoma transzkripcis faktor
erbB csirke erythroleukaemia, fibrosarcoma receptor tirozin-proteinkinz
jun csirke fibrosarcoma transzkripcis faktor
fos egr osteosarcoma transzkripcis faktor
abl egr leukaemia, sarcoma non-receptor tirozin-proteinkinz
raf egr sarcoma MAPKKK
ras patkny sarcoma, erythroleukaemia Monomer G-protein
sis majom sarcoma PDGF
akt egr lymphoma proteinkinz B
kit macska sarcoma receptor tirozin-proteinkinz
4. A retrovirlis onkognek eredete
313
RNS-vrusok
Miutn kiderlt, hogy minden retrovirlis onkognnek van egy cellulris megfelelje, felmerlt a krds:
honnan szrmazik ez a homolgia, mi a rokonsg alapja? A krdsre egy egr leukaemia vrustrzzsel
kapcsolatos vletlen megfigyels adott vlaszt (54.5. bra).
54.5. bra - 54.5. bra: Transzdukl retrovrus kpzdse (a gag a rszlegesen

deletlt gag gnt jelli)
Ebben a ksrletben egy gyenge onkogenits vrustrzzsel, a Moloney egr leukaemia-vrussal idztek el
daganatkpzdst egerekben; a vrus genomjra a klasszikus gag-pol-env gnszerkezet jellemz. Az egyik
llatban kifejldtt tumorbl meglepetsre olyan vrust izolltak, mely ers onkogn-kpessgre tett szert
(Abelson egr leukaemia-vrusnak neveztk el). A vrus genomja drmaian megvltozott: az eredeti genom nagy
rsze a gag-gn proximlis rsznek kivtelvel elveszett s helyt egy cellulris gn foglalta el, melyet abl-
nek neveztek el. Ezt a jelensget cellulris gn beptst egy vrusgenomba a fggenetikbl mr rgta
ismertk s transzdukcinak neveztk. A virlis onkognnel rendelkez, ersen transzforml hats vrusok
teht transzdukl retrovrusok.
A rszletes molekulris biolgiai vizsglatok azutn a transzdukci mechanizmust is tisztztk (54.6. bra). A
Moloney-vrussal beoltott egr egyik fertztt sejtjben a provrus a c-abl protoonkogn mellett integrldott.
Ezt kveten a gag- gn s a c-abl-gn els exonja kztti DNS-rgi delcit szenvedett. A ltrejtt fzis gn
a provrus megmaradt LTR-promterrl trdott, majd splicinggal olyan rett RNS kpzdtt belle, melynek
5vgi rszt a retrovrus gag-rgija, a 3-vgi szakaszt pedig a maradk c-abl mRNS alkotta. Ezutn egy
retrovirlis RNS-molekula s a fzis RNS kztti rekombincival a gag-abl mRNS 3-vgre is retrovirlis
szekvencia kerlt. Ez azrt fontos, mert az gy kpzdtt vrus ltal fertztt sejtben olyan provrus
szintetizldhat, melynek mindkt vgt LTR alkotja, ami, mint tudjuk, szksges a hatkony integrcihoz, s
gy a daganatkpzdshez is. A fenti lersbl kvetkezik, hogy a transzdukl retrovrusok ltrejtthez hrom
vletlenszer, nagyon ritka esemnynek kell egyszerre bekvetkeznie: provrus-integrci egy protoonkogn
mellett; delci; rekombinci. rthet, hogy ilyen vrusok nagyon ritkn keletkeznek.
54.6. bra - 54.6. bra: Transzdukl retrovrus genomjnak kialakulsa
314
RNS-vrusok
5. Humn retrovrusok
Egyb kroki tnyezkhz viszonytva a retrovrusok szerepe az emberi daganatkpzdsben elhanyagolhat. A
humn T-sejtes leukaemiavrus kt tpusa (HTLV-1 s -2) viszonylag ritka vrkpzszervi daganatok
kialakulsrt tehet felelss. risi epidemiolgiai jelentsge van viszont a hasonl szerkezet humn
immundeficiencia vrusnak (HIV), amely a rettegett AIDS krokozja. Ez a vrus azonban nem daganatkelt,
hanem ltikus fertzst okoz: egy bizonyos T-sejt-populcit pusztt el, ami az immunrendszer sszeomlshoz
vezet. A kialakult immunszuppresszlt llapot kedvez msodlagos daganatok kifejldsnek (l. az 53. fejezetet),
ezeket azonban nem a HIV okozza.
Orvosi jelentsge lehet a humn endogn retrovrusoknak is. Ezek nem fertzek, st, ltalban t sem
rdnak. Abnormlis expresszijuk azonban autoantitestek kpzst induklhatja. Az autoimmun betegsgek
kzl a systems lupus erythematosus (l. a 26. fejezetet is) s a nylmirigyek, valamint a knnymirigy krnikus
gyulladsval jr Sjgren-szindrma kroktanban felttelezik az endogn retrovirlis rszvtelt.
Ajnlott irodalom
738740.
Krieg, A. M.: Human endogenous retroviruses. Science & Medicine 1997/2, 3443.
315
55. fejezet - 55. Daganatbiolgia IV.:
Cellulris onkognek
A daganatok mutcis eredete szles krben elfogadott, tudomnyosan bizonytott tny. Mint az elz
fejezetekbl lttuk, az esetek egy rszben a sejt vltozst az okozza, hogy onkogn vrus transzforml gnje
integrldik genomjba, annak termke pedig daganatos sejtburjnzst idz el. A daganatok nagyobbik
hnyadban azonban a vrusetiolgia nem mutathat ki, virlis onkogn nem kerlhetett a genomba. Mi lehet
ezekben az esetekben a mutci kvetkezmnye? Milyen gneket rinthet? tvihet-e a transzformlt fenotpus
a daganatsejt DNS-vel normlis sejtekre is? Az utols krdsre az Avery baktrium-transzformcis
ksrleteihez (l. 2. fejezet) hasonl DNS-tviteli kutatsok adtk meg a vlaszt.
1. Onkognek keresse transzfekcis ksrletekkel

Tiszttott DNS-t eukariota sejtekbe is be lehet juttatni (l. 11. fejezet). A gnbeviteli mdszerek kzl a
legegyszerbb a transzfekci: megfelel ksrleti krlmnyek kztt DNS-sel kezelt szvettenyszeti sejtek
egy rsze felveszi, genomjba integrlja s expresszlhatja is az idegen gneket.
Az els sikeres transzfekcis ksrleteket az 1970-es vek elejn hajtottk vgre: RSV-transzformlt sejtek
genomilis DNS-vel normlis csirkesejteket transzformltak s a sejtek vrust is termeltek. A ksrlet igazolta,
hogy a fertztt sejt DNS-e provrus formjban tartalmazza az RSV teljes genetikai informcijt. A
transzfekcis ksrleteket Robert Weinberg s Geoffrey Cooper fejlesztettk tovbb. Kmiai karcinognnel
transzformlt sejtek DNS-vel sikerlt tvinnik a transzformlt fenotpust NIH3T3 egr fibroblaszt sejtekre,
igazolva, hogy onkognek nonvirlis eredet daganatokban is jelen vannak. A legfontosabb krds
megvlaszolsa mg htra volt: vannak-e onkognek termszetes krlmnyek kztt kifejld emberi
daganatokban?
1.1. Az els emberi onkogn felfedezse

Az els nonvirlis eredet, humn cellulris onkognt egy emberi hlyagtumor sejtvonal DNS-ben
azonostottk. Az ezt kvet nagyszabs transzfekcis ksrletsorozatokban azt talltk, hogy az sszes humn
neoplasia mintegy 2030 szzalkban mutathat ki gntranszferrel onkogn szekvencia.
A hlyagtumor sejtvonal onkognjnek klnozst 1982-ben hajtottk vgre Weinberg, Mariano Barbacid s
Michael Wigler munkacsoportjai. A klnozsi stratgit az 55.1. bra mutatja. A munka f nehzsgt az
okozta, hogy az akkor mg ismeretlen onkognt tbb millird bzisprnyi DNS-ben kellett megtallni. Ehhez a
keresett gn kt tulajdonsgt hasznltk fel: egy biolgiait (transzforml-kpessg) s egy genetikait
(kzelben lennie kell specifikus humn Alu-szekvenciknak). A hlyagtumor DNS-sel egy a sejtbiolgiai
kutatsokban gyakran hasznlt sejtvonalat, NIH3T3 egr fibroblasztokat transzfektltak. Ilyenkor a DNS
daraboldva jut be a sejtekbe s vletlenszeren nhny helyen integrldik. A mkd onkognt felvev sejtek
transzformldnak, utdaik fkuszokat alkotnak. A transzformlt sejtek DNS-e valsznleg onkognt nem
tartalmaz humn DNS-rgikat is tartalmaz; hogy ezektl megszabaduljanak, egy msodik transzfekcit is
vgrehajtottak. A transzformlt fkuszok DNS-ben ilyenkor nagy valsznsggel mr csak egy humn DNS-
darab van: ez tartalmazza a humn onkognt s szerencss esetben Alu-szekvencit is. Ha a msodik
transzformns DNS-bl genomtrat hoznak ltre s abban olyan rekombinns fgot tallnak, amely humn
Alu-prbval hibridizl, az nagy valsznsggel az emberi onkognt is tartalmazza. A stratgia sikeres volt: a
gn szekvencijnak meghatrozsakor kiderlt, hogy egy ras-gnrl (rasH) van sz, mely a protoonkogn
prjtl egyetlen bzisprban klnbzik. Ksbb tisztztk, hogy a pontmutci kvetkezmnyekppen a
cellulris onkogntermk Ras-fehrje elveszti GTPz-aktivitst, kptelen nmagt inaktivlni: konstitutvan
aktv llapotba kerlve daganatos sejtprolifercit indukl.
55.1. bra - 55.1. bra: Az els humn onkogn klnozsa
316
55. Daganatbiolgia IV.: Cellulris
onkognek
317
onkognek
Az els humn onkogn azonostsa a daganatkutats egyik kiemelked felfedezse volt. Ezt kveten rvid id
alatt szmos emberi onkognt izolltak s jellemeztek; az 54.1. tblzat ezek kzl tartalmaz nhnyat.
Szembetn, hogy a cellulris onkognek egy rsznek van retrovirlis megfelelje, msokat azonban eddig
csak nonvirlis eredet daganatokban talltak meg. A kdolt fehrjk valamilyen mdon a sejtek jeltviteli
folyamatainak, sejtciklusnak, apoptzisnak szablyozsban vesznek rszt (a rszleteket l. ksbb). Kitnik az
is, hogy egyes onkognek klnbz tpus daganatok kialakulsrt lehetnek felelsek, s fordtva: ugyanazt a
tumort klnbz cellulris onkognek okozhatjk.
2. Az onkogn-aktivci mechanizmusai
Az 55.1. tblzat adataibl kiderl, hogy a cellulris onkognek kialakulsnak tbbfle molekulris
mechanizmusa lehetsges: pontmutci, transzlokci, delci, gnamplifikci, inszercis onkogn-aktivci.
2.1. Pontmutci
A gntranszferrel kimutathat humn onkognek dnt tbbsge pontmutcival aktivlt ras-gn: az sszes
daganat mintegy 2025 szzalkban mutattak ki ras-mutcit. A mutci kvetkeztben a Ras-fehrje
konstitutvan GTP-kt llapotba kerl s folyamatosan kld mitogn szignlokat a sejt belsejbe. Az emls
sejtek hromfle ras-gnje kzl kett (a rasH s rasK) retrovirlis megfelelje transzdukl vrusban is jelen
van, a rasN-gnnek azonban csak cellulris fajtja ltezik.
Ms gnek is aktivldhatnak pontmutcival. A neu-gn az EGF-receptor csaldba tartoz tirozinkinzt kdol.

(Ennek a gnnek tbb neve is van. A HER2 nv arra utal, hogy termke a humn EGF-receptor csald tagja.
Mivel ez utbbi nevn emlegetik az emltumorokkal kapcsolatban [l. ksbb], a tovbbiakban a neu/HER2
elnevezst hasznljuk.) A gsp-, illetve a gip-gn aktivcija a cAMP-t zavart idzi el. A gsp (Gs-protein -
subunit gnje) aktivcija olyan szvetek malignus talakulst idzi el, melyekben a cAMP sejtprolifercit
okoz, mg a gip (Gi-protein -alegysg gnje) mutcija olyanokban, melyekben a cAMP gtolja a
sejtszaporodst.
2.2. Inszercis mutagenezis

A gyenge onkogenits retrovrusok virlis onkognnel nem rendelkeznek (l. 54. fejezet). Akkor hogyan
okoznak daganatkpzdst? A krdsre a vlaszt az avin leukaemiavrus ltal okozott lymphomk molekulris
analzise adta meg.
Az ALV-fertzs sorn a csirkben elszaporodik a vrus, nagyon sok vrkpzszervi sejtet megfertz, s a
fertzs sorn provrusa bepl a sejt genomjba. Mint ahogy az ms retrovrusok esetben is trtnik, az ALV-
provrus vletlenszeren integrldik a fertztt sejt genomjba. Az ALV ltal induklt lymphomkban azonban
a provrus-integrci mindig ugyanazon a helyen trtnik. Mskppen fogalmazva: a szmtalan lehetsges
integrcis esemny kzl csak az okoz malignus transzformcit, mely a genom meghatrozott helyn megy
vgbe. A daganatkpzds szempontjbl nyilvnvalan lnyeges, milyen cellulris gnt rint ez a mutcis
esemny.
55.2. bra - 55.2. bra: A c-myc protoonkogn inszercis aktivldsa ALV-fertzst

kveten,(E1, E2, E3: a c-myc gn exonjai)
318
onkognek
55.1. tblzat - 55.1. tblzat: Nhny humn cellulris onkogn jellemzi

Onkogn Jelenlte Jelenlte nonvirlis Onkoprotein Aktivci
retrovrusban daganatban funkci mechanizmusa
neu/HER2 neuroblastoma receptor tirozin- amplifikci
proteinkinz pontmutci
gsp hipofzis s pajzsmirigy Gs-protein - pontmutci
daganatok alegysge
gip mellkvese-kreg s Gi-protein - pontmutci
petefszek daganatok alegysge
ras H Harvey patkny pajzsmirigy, hlyag, br stb. monomer G- pontmutci
sarcoma vrus daganatok protein
ras K Kirsten patkny vastagbl, td, pankresz monomer G- pontmutci
sarcoma vrus stb. daganatok protein
ras N neuroblastoma, leukaemik monomer G- pontmutci
stb. protein
abl Abelson egr krnikus myeloid leukaemia nonreceptor transzlokci
leukaemia vrus tirozin-
proteinkinz
myc avin Burkitt-lymphoma, eml-, transzkripcis transzlokci
myelocytomatosis td- carcinoma faktor amplifikci
vrus
N-myc neuroblastoma transzkripcis amplifikci
faktor
bcl-2 follicularis B-sejtes antiapoptotikus transzlokci
lymphoma fehrje
hox-11 akut T-sejtes leukaemia homeotikus fehrje transzlokci
(transzkripcis
faktor)
PRAD1 mellkpajzs-mirigy ciklin D transzlokci
319
onkognek
Onkogn Jelenlte Jelenlte nonvirlis Onkoprotein Aktivci

retrovrusban daganatban funkci mechanizmusa
adenoma
erbB1 avin glioblastoma receptor tirozin- delci
erythroblastosis proteinkinz
virus
Az ALV esetben ez egy transzkripcis faktort kdol protoonkogn, a c-myc (55.2. bra). Ez a gn nvekedsi
faktorok (s ms mitogn gensek) ltal is hatsosan induklhat, nyilvnvalan fontos szerepe van a normlis
sejtproliferci szablyozsban. Az ALV-fertzs akkor vezet lymphomakpzdshez, ha a provrus
integrcija a c-myc gn 1. s 2. exonja kztt trtnik. Ha ezt kveten a c-myc-gn 1. exonja s a provrus
nagy rsze delcit szenved, olyan gn keletkezik, mely a c-myc eredeti, szablyozhat promtere helyett a
provrus ers, konstitutv promterrl rdik t. Mivel az E1 exon kdol szekvencit nem tartalmaz, a gnen
kpzd mRNS normlis Myc-fehrje szintzist irnytja. A malignus transzformci annak ksznhet, hogy
az rintett gn expresszija a fiziolgis rtk tbb szzszorost is elrheti.
A ksbbi, rszletes kutatsok kidertettk, hogy a lert inszercis mutagenezis a gyenge onkogenits
retrovrusok ltalnos tumorkelt mechanizmusa. Tbb protoonkognt ppen a provrus-integrcis helyek
krnyezetnek analzisvel fedeztek fel (pl. a Wnt-1 nvekedsi faktort kdol gnt [l. 47. fejezet]).
2.3. Transzlokci
A daganatsejtekben megjelen kromoszma-rendellenessgek (aneuploidia, strukturlis aberrcik) rgta
ismertek voltak. Ezek kzl a legismertebb a krnikus myeloid leukaemiban 1960-ban felfedezett
Philadelphia-kromoszma (Ph1): abnormlisan kismret 22. kromoszma. Mivel a rendellenessg
gyakorlatilag minden beteg leukeamis sejtjeiben kimutathat, kezdettl fogva gyantottk, hogy kroki szerepe
van a daganatkpzdsben. A molekulris biolgiai vizsglatok megerstettk a feltevst.
A kromoszma-rendellenessget valjban a 9. s a 22. kromoszma kztt lezajl reciprok transzlokci

okozza (55.3.A. bra): mindkt kromoszma eltrik s a levlt rszek kicserldve a msik kromoszmra
forrnak vissza. A 9. kromoszmn a trs a mr korbban is emltett c-abl protoonkognben trtnik (55.3.B.
bra). A 22. kromoszmn az rintett rgit ppen a trsek halmozdsrl neveztk el bcr-gnnek (=
breakpoint cluster region). A transzlokci kvetkeztben ltrejv Ph1-kromoszmn fzis gn keletkezik,
melynek proximlis rszt a bcr, disztlis rgijt pedig az abl-gn egy rsze alkotja. Az abnormlis gnen
fzis mRNS, azon pedig fzis fehrje (Bcr/Abl) kpzdik, mely fokozott, konstitutv biokmiai aktivitsval
leukaemogn hats.
55.3. bra - 55.3. bra: A Philadelphia-kromoszma (A.) s a bcr/abl fzis gn, (B.)
ltrejtte reciprok transzlokcival
320
onkognek
Hasonl reciprok transzlokcit rtak le a Burkitt-lymphoma esetek tbbsgben. A B-limfocitkban lezajl

transzlokci kvetkeztben a c-myc protoonkogn promtere egy immunglobulin-gn promterre cserldik,
a c-Myc fehrje fokozott mrtkben s szablyozatlanul termeldik. A betegsg kialakulsban az Epstein-Barr
vrus is szerepet jtszik (l. 53. fejezet): fokozott B-sejt-szaporodst vlt ki, ami megnveli a transzlokcis
esemny eslyt.
A transzlokci gyakori onkognaktivcis mechanizmus, klnsen a B- s T-limfocitk malignus

folyamataiban. (A klnbz emberi daganatokban eddig tbb mint 600-fle transzlokcit mutattak ki.) A
normlis immunvlasz alapjt ugyanis az ezekben a sejtekben fiziolgis krlmnyek kztt is vgbemen
DNS-trendezdsek kpezik. A gntrendezds nveli a strukturlis kromoszma-rendellenessgek
321
onkognek
kialakulsnak veszlyt. Szmos onkognt azonostottak transzlokcis trspontok analzisvel. Ezek gyakran
transzkripcis faktorok gnjei: leukaemiban, lymphomkban gyakran aktivldnak homeotikus gnek vagy az
ezeket szablyoz fehrjk gnjei; termkeik ugyanis kulcsszerepet jtszanak a fehrvrsejtek rsben.
Transzlokcis trspont vizsglatval fedeztk fel az antiapoptotikus hats bcl-2 onkognt is (l. 51. fejezet),
melynek fokozott expresszija folliculris B-sejtes lymphomt okoz.
A leukaemik, lymphomk mintegy ktharmadban kimutathat transzlokci. A pontos molekulris

mechanizmus kidertse diagnosztikus, prognosztikus s a terpit is meghatroz jelentsg. (Egy plda:
gyermekkori akt leukaemik egy tpusban a retinsavreceptorokbl leukemogn hats fzis fehrje alakul ki.
Ha ez kimutathat a kros sejtekben, a retinsavkezels vrhatan jtkony hats lesz, egybknt viszont
hatstalan s rtelmetlen.)
2.4. Delci
A delcis protoonkogn-aktivcira egyes glioblastoma daganatok szolgltatnak pldt. Ebben az agytumorban
gyakori egy EGF-receptor extracellulris, ligandkt domnjnek delcis csonkoldsa. A mutns receptor
konformcija gy vltozik meg, hogy tirozinkinz domnje ligand hinyban is aktv.
2.5. Gnamplifikci
A gnek sokszorozdsa abnormlis replikci eredmnye: egy DNS-rgi az S-fzisban tvedsbl
tbbszr megkettzdik, majd trendezdssel a rgi tandem ismtldse jn ltre (55.4.A. bra). A
sokszorozds ltalban nagyobb, tbbmilli bzispr kiterjeds rgit (amplikon) rint, mely tbb gnt is
tartalmazhat. Ilyenkor az amplifikci kariotpus-vizsglattal is kimutathat (55.4.B. bra): svtechnikval
homogn festds rgiknt jelenik meg, illetve extrakromoszomlis formban is ltezhet, ketts szemcsk, n.
ketts parnyok formjban.
55.4. bra - 55.4. bra: A gnamplifikci mechanizmusa (A.) s kromoszomlis

megjelensi formi (B.)
Az amplifikci legismertebb pldja az N-myc gn sokszorozdsa neuroblastomban, de ms gnek (pl. c-

myc, neu) kpiaszma is megnhet klnbz daganatokban. A tumor kialakulst a normlisnl nagyobb
mennyisg gntermk okozza. rthet mdon az amplifikci mrtke (azaz a gnkpik szma) arnyos a
malignits fokval, gy prognosztikus rtk.
322
onkognek
3. Cellulris onkognek, a daganatterpia clpontjai

A hagyomnyos daganatterpia (kemoterpia, radioterpia) a tumorsejtek gyors osztdkpessgt hasznlja ki:
cl a sejtosztds gtlsa vagy DNS-krost hatssal apoptzis induklsa. A terpia hatkony lehet, de a
normlisan is gyorsan szaporod szvetek (blhm, csontvel) krosodsa miatt a kezelst slyos toxikus
mellkhatsok ksrik.
A clzott tumorterpia a daganatkpzshez vezet aktivlt jeltviteli utat tmadja meg, hatsa szelektv,
mellkhatsai enyhbbek. Az onkoproteinek hatsmechanizmusnak tisztzsa mind tgabb teret nyit a
racionlis gygyszertervezs szmra: jelenleg is tbb onkoprotein-specifikus szer van a klinikai kiprbls
stdiumban, az engedlyezett szerek kzl pedig az els kt sikerttnetet a Herceptin s a Glivec szolgltatta.
Az emberi eml tumorok mintegy negyedben a daganatsejtekben fokozottan expresszldik az EGF-receptor

csaldba tartoz Neu/HER2 fehrje (l. elbb). Ezekben a sejtekben konstitutv NFB-aktivci s a normlisnl
magasabb ciklin D1 szint mutathat ki. A HER2-gn amplifikcija rossz klinikai prognzist jelent. A
Herceptin monoklonlis anti-HER2 antitest, melyet sikeresen alkalmaznak ennek a metasztatizl emltumor
tpusnak a kezelsben.
Mg remnyt keltbb szer a Glivec, egy Abl-specifikus tirozinkinz inhibitor. A CML-t (l. elbb) okoz
Bcr/Abl fzis fehrje tbb jeltviteli utat is aktivl a leukaemis sejtekben (Ras/ERK-t, PI3K/PKB-t, STAT-
fehrjk, stb.), prolifercis s anti-apoptotikus hatst eredmnyezve. A betegsg korai szakaszban adva a
Glivec szelektven elpuszttja a leukaemis sejteket, a betegek 95%-ban javulst, remisszit idzve el. Br
egyes betegekben ksbb ezzel a szerrel szemben is kialakul rezisztencia, a Glivec pldja mutatja, hogy az
onkognkutats nagyhats kemoterpis szerek kifejlesztshez vezethet.
Ajnlott irodalom
Croll, C. M. (2008): Oncogenes and cancer. N. Engl. J. Med. 358, 502511.
740752.
Goldman, J. M., Melo, J. V. (2003): Chronic myeloid leukemia Advances in biology and new approaches to
treatment. N. Engl. J. Med. 349, 14511464.
Kim, J. A. (2003): Targeted therapies for the treatment of cancer. Amer. J. Surg. 186, 264268.
Krontiris, T. G. (1995): Oncogenes. N. Engl. J. Med. 333, 303306.
Look, A. T. (1997): Oncogenic transcription factors in the human acute leukemias. Science 278, 10591064.
Rabbits, T. H. (1994): Chromosomal translocations in human cancer. Nature 372, 143149.
Rk K. (2003): A krnikus myeloid leukaemia mai kezelse. Orvosi Hetilap 144, 405412.
323
56. fejezet - 56. Daganatbiolgia V.:
Tumor szuppresszor gnek
Az emberi daganatokbl izollt DNS-mintk transzfekcis vizsglatai (l. 55. fejezet) az esetek 2530
szzalkban adtak pozitv eredmnyt; a tumorok tbbsgben ezzel a mdszerrel onkogneket kimutatni nem
sikerlt. A transzfekcis ksrletekben kimutatott cellulris onkognekre jellemz, hogy a DNS-t felvev
NIH3T3 sejteket a bennk lev normlis protoonkogn allleket elnyomva transzformltk. A cellulris
onkognek teht a protoonkognek dominns hats, hiperaktv formi, melyek prolifercit serkent
fehrjket kdolnak. Ha a daganatok 7075 szzalka ilyen gnt nem tartalmaz, mi okozza ezek malignus
fenotpust?
1. A tumor szuppresszor gnek ltnek kimutatsa

sejtfzis ksrletekkel
Normlis s malignus sejtek hibridjei (l. 18. fejezet) ltalban nem tumorign sejtek: rzkeny egerekbe
fecskendezve daganatkpzdst nem idznek el. Ha a hibrid sejteket tenysztik, a tumorigenits az utdsejtek
egy rszben visszatrhet, ezt pedig a normlis sejtekbl szrmaz egyes kromoszmk elvesztse ksri. A
sejtfzis ksrletek eredmnyeibl arra lehet kvetkeztetni, hogy a normlis sejtekben vannak olyan gnek,
melyek elnyomjk a tumorsejtek transzformcijrt felels gnek hatst; ezek az onkognek teht recesszvek,
hatsuk csak akkor rvnyesl, ha a sejt elveszti a normlis allleket. Kt klnbz tumorsejtvonal fzija
esetn is tapasztaltk a tumorigenits elvesztst: ez azt jelenti, hogy tbbfle recesszv onkogn ltezik.
A recesszv onkognek normlis, vad tpus allljeinek funkcija teht az, hogy meggtolja a sejtek malignus
prolifercijt, nevk ebbl a hatsbl szrmazik: tumor szuppresszor gnek. Ezt tbbfle mechanizmussal
rhetik el: a sejtek G0-fzisba vitelvel, terminlis differencici induklsval, apoptzis kivltsval.
Szemben a protoonkognekkel (melyek funkcinyer mutcival vlnak cellulris onkognekk), akkor
okoznak daganatkpzdst, ha funkciveszt mutcival mindkt kpijuk inaktivldik.
A tumor szuppresszor gnek kutatsa az 1980-as vek kzeptl gyorsult fel. Mint azta kiderlt: az emberi
daganatkpzds szempontjbl fontosabbak mint az onkognek: mg az onkogn-aktivci elssorban a
leukaemik, lymphomk kialakulsrt felels, a tbbi daganatban a tumor szuppresszor gnek mutcii
dominlnak.
2. Az els humn tumor szuppresszor gn klnozsa

A retinoblastoma ritka gyermekkori, a szem ideghrtyjbl fejld daganat, melynek kt tpusa ismert. A
ritkbb rkletes forma egszen korn, csecsemkorban jelentkezik, mindkt szemben, tbb gcban megjelen
tumor formjban. Csaldi halmozdst mutat, monognikus autoszomlis dominns rkldssel. A
heterozigta egyedekben 95 szzalkos valsznsggel fejldnek ki a szemdaganatok. A sporadikus
retinoblastoma csaldi halmozdst nem mutat, ltalban ksbb jelenik meg, az egyik szem egyetlen tumora
formjban.
A ktfle szvettanilag egybknt megklnbztethetetlen alak kialakulsra vonatkozan Alfred Knudson

1971-ben lltotta fel kt tallat hipotzist. A statisztikai adatok matematikai elemzsvel arra a
kvetkeztetsre jutott, hogy a retinoblastomt kt egymstl fggetlen mutcis esemny okozza. A familiris
forma esetben az egyik csrasejt-mutci (azaz az egyed minden sejtjben jelen van), a msodik mutci pedig
az ideghrtya fejldse sorn szomatikus mutcival tbb retinoblasztban is ltrejn. A sporadikus tpus
esetben mindkt mutci szomatikus: annak valsznsge, hogy ugyanabban a retinoblasztban jnnek ltre,
csekly; ez megmagyarzza a daganat egygc jellegt.
Citogenetikai vizsglatok ksbb bizonytkokat adtak a Knudson-elmlethez s az rintett gnek

kromoszomlis lokalizcijra is informcit szolgltattak. rkld retinoblastomban szenved gyermekek
fehrvrsejtjeiben nha megfigyeltk a 13. kromoszma egy rgijnak delcijt. Ezt a kromoszma-
elvltozst a sporadikus esetekben csak a tumorsejtekben szleltk, ami a mutci szomatikus jellegt igazolta.
A tumor szuppresszor gnek inaktivcijt egybknt nemcsak mutci, hanem epigenetikai tnyezk (l. 31.
324
56. Daganatbiolgia V.: Tumor
szuppresszor gnek
fejezet) is okozhatjk: promter rgijuk CpG szigeteinek hipermetilcija a gnek cskkent mkdshez
vezet, gyakran mutathat ki daganatokban.
A hozzvetleges kromoszma-lokalizci ismeretben 1986-ban Robert Weinberg (aki az els cellulris

onkogn klnozsban is rszt vett) munkacsoportja a pozcis klnozs mdszert alkalmazva azonostotta s
izollta a humn retinoblastoma (Rb) gnt. A hibridizcis prba birtokban vgzett Southern-blot vizsglatok
teljes mrtkben igazoltk a Knudson-terit: herediter retinoblastoms gyermekek fehrvrsejtjeiben az Rb-
gnpr egyik tagja deletlt, a msik rintetlen, a tumorsejtekben azonban, fggetlenl attl, hogy a betegsg
milyen formjbl szrmaznak, nincs mkdkpes Rb-gn. Hogy valban tumor szuppresszor gnrl van sz,
ksbb transzfekcis ksrlettel igazoltk: az Rb-cDNS bejuttatsa retinoblastoma sejtekbe megszntette azok
tumorigenitst (56.1. bra). A ksrletben veleszletett immundeficienciban szenved kopasz egr trzset
hasznltak. Mivel ezek az llatok normlis immunvdekezsre kptelenek, a daganatsejtek gyorsan szaporodnak
bennk.
56.1. bra - 56.1. bra: Az Rb-gn tumor szuppresszor hatsnak bizonytsa kopasz
egerekben
Paradoxnak tnhet, hogy mg a tumor szuppresszor gnek gy az Rb-gn is recesszv onkognek, a

retinoblastoma dominnsan rkldik. Az ellentmonds ltszlagos: sejtszinten a transzformci recesszv
rklds: ltrejtthez a gnpr mindkt tagjnak funkcivesztse szksges. Mivel a msodik, szomatikus
mutci nagy valsznsggel ltrejn nhny retinasejtben, a heterozigtkban majdnem biztosan kifejldnek a
tumorok: a szervezet szintjn az rklds dominns.
3. Tumor szuppresszor gnek s szerepk az emberi

daganatkpzdsben
Az Rb-gn klnozsa (1986) ta mintegy hrom tucat humn tumor szuppresszor gnt azonostottak s ez a
szm minden bizonnyal mg nni fog. Ebben a fejezetben legjelentsebb kpviselikkel foglalkozunk;
fontosabb jellemziket az 56.1. tblzat foglalja ssze.
56.1. tblzat - 56.1. tblzat: A legfontosabb tumor szuppresszor gnek jellemzi

Gn rkld tumor Szomatikus mutci A gntermk funkcija
Rb retinoblastoma, osteosarcoma klnbz tumorok transzkripci szablyozsa
p53 multiplex tumorok (Li- sokfle tumor transzkripcis faktor
Fraumeni szindrma)
p16 familiris melanoma tbbfle tumor Cdk-inhibitor
APC familiris adenomatosus colorectlis tumorok sejtadhzis s jeltviteli
polyposis fehrje
WT1 Wilms-tumor Sporadikus Wilms-tumor transzkripci s splicing
(nephroblastoma) szablyozsa
NF1 von Recklinghausen-kr tbbfle tumor Ras-GAP
325
szuppresszor gnek
Gn rkld tumor Szomatikus mutci A gntermk funkcija

(neurofibromatosis)
BRCA1 familiris emltumor ovrium tumor sejtciklus szablyozsa, DNS-
reparci
BRCA2 familiris emltumor tbbfle tumor sejtciklus szablyozsa, DNS-
reparci
PTEN gyakori eml-, pajzsmirigy tbbfle tumor (glioblastoma, foszfatidilinozitol 3-foszfatz
tumor prosztatark, emlrk, stb.)
VHL Von Hippel-Lindau szindrma vesecarcinoma ubikvitinl fehrje
3.1. Rb
Az Rb-gn termke minden szvetben expresszld, ltfontos magfehrje. (A mindkt Rb-gnjket elvesztett
Rb/ nullizigta egerek letkptelenek.) Szoks a restrikcis pont (l. 18. fejezet) rnek is nevezni: aktivitsval
megakadlyozza, hogy a sejt tjusson ezen a kritikus szablyozsi ponton s vgigmenjen a sejtcikluson.
Nyugalmi, G0-fzis sejtekben az Rb-fehrje gyengn foszforillt; ebben a formjban ersen ktdik az E2F
transzkripcis faktor csald egyes tagjaihoz s inaktivlja azokat (56.2.B. bra). Mitogn hatsra a Ras/ERK
jeltviteli t kzvettsvel ciklin/Cdk-komplexek aktivldnak (l. 18. fejezet) s tbbek kztt az Rb-fehrjt is
foszforilljk. A hiperfoszforillt Rb-proteinrl felszabadul az E2F transzkripcis faktor s tbb olyan gnt (n.
S-fzis gneket) aktivl, melynek termke (pl. bizonyos ciklinek, DNS-polimerz alegysgek, c-Myc fehrje)
szksges a G1 S tmenet indukcijhoz. Az Rb-
funkci kiesse teht rthet mdon tumoros sejtburjnzshoz vezet (pl. a retinoblastoma, osteosarcoma
esetben) vagy ms mutcikkal egytt jrul hozz sok ms daganat kifejldshez. Az Rb-fehrje inaktivlsn
keresztl fejti ki transzforml hatst tbb onkogn DNS-vrus (SV40-, polioma-, adenovrus,
papillomavrusok) egyes onkoproteinjei is (l. 53. fejezet).
56.2. bra - 56.2. bra: A p53/Rb-t. A: A p53-fehrje hatsa a sejtciklusra; B: Az Rb-

fehrje hatsmechanizmusa
3.2. p53
326
szuppresszor gnek
A p53-fehrje nevt molekulatmegrl kapta. 1979 ta ismert, jelentsgt azonban csak az 1990-es vekben
ismertk fel. Ekkor derlt ki ugyanis, hogy az emberi daganatok tbb mint fele mutns p53-gnt tartalmaz! A
Knudson-mechanizmusnak megfelelen autoszomlis dominns rkldst mutat Li-Fraumeni-szindrma
szerencsre nagyon ritka betegsg; a klnbz szervekben kifejld sokfle daganat jellemzi. A p53-fehrje
klasszikus tumor szuppresszor fehrje: p53- daganatsejtekben expresszlva megsznteti azok tumorigenitst.
Az elmlt vekben sok mindent kidertettek a p53-fehrje biokmijrl. Ubikviter expresszij transzkripcis
faktor, melynek szintje nvekedsi faktorral stimullt sejtekben nagyon alacsony. Ezrt egy protoonkogn
hats fehrje, az Mdm2 felels (56.3. bra; nevt a mouse double minute kifejezsbl kapta: egr sejtekben
azonostottk amplifiklt gnjt ketts parnyok formjban [l. 55. fejezet]). A nvekedsi faktor jeltviteli utak
az Mdm2 fehrjt indukljk s foszforilcival aktivljk is. Ez a fehrje egy p53-ubikvitinl enzim, hatsra
a p53-fehrje gyorsan lebomlik. Gnjt ugyanakkor a p53 transzkripcis faktor is induklni kpes, gy a kt
fehrje negatv feedback mechanizmussal szablyozza egymst.
A p53-fehrje mennyisge akkor n meg a sejtben, ha azt a sejtszaporodst gtl stresszhatsok rik. Ezek kzl
a legfontosabbnak a DNS krosodsa ltszik. A DNS-ben sugrzs, kmiai anyagok hatsra ltrejtt
srlseket specilis fehrjk ismerik fel (56.3. bra), majd hatsukra megn a p53-fehrje mennyisge, rszben
foszforilci, rszben fehrje-fehrje klcsnhatsok kzvettsvel. A DNS-krosods mrtktl fggen a
p53 kt klnbz utat nyithat meg a sejt szmra a krzishelyzetbl val meneklsre. Enyhe krosods
esetn lelltja a sejtciklust, elssorban azltal, hogy serkenti egy Cdk-inhibitor gnjnek trst (56.2.A. bra):
cskken az Rb-fehrje foszforilcija s gy az S-fzis gnek mkdse is. A sejt mindaddig G0-fzisban marad,
amg a DNS-krosodst ki nem javtja; ebben segt, hogy a p53 a DNS-reparci nhny gnjt is induklja
(56.3. bra). Ha a DNS-krosods olyan slyos, hogy nincs remny a kijavtsra, a p53 elssorban pro-
apoptotikus gnek indukcijval apoptzist idz el.
56.3. bra - 56.3. bra: A p53-fehrje szablyozsa s effektor mechanizmusai
327
szuppresszor gnek
A p53-fehrje mindkt hatsa a genom integritsnak megrzst szolglja. Ha ez a funkci elvsz, a sejtben
mutcik halmozdnak fel, genetikai instabilits lp fel. A daganatok elleni sugrkezels s kemoterpia
clpontja ltalban a sejt DNS-e: normlis p53-funkci esetn a kezelt sejtek vagy elpusztulnak, vagy
osztdsuk gtldik. A klinikai tapasztalatok szerint a p53 + tumorok ltalban jl reaglnak a kezelsre. Ha
azonban a tumor progresszijval p53-gn mutci jn ltre, a daganatsejtek nemcsak rezisztenss vlnak a
kezelssel szemben, hanem ppen a terpis prblkozsok hatsra tovbbi mutcikat halmoznak fel s a
daganat egyre agresszvebb, malignusabb vlik.
Az Rb-fehrjhez hasonlan a p53-protein szerepet jtszik a virlis onkogenezisben is: DNS tumorvrusok egyes
onkoproteinjei a p53-fehrje inaktivlsn keresztl fejtik ki transzforml hatsukat.
328
szuppresszor gnek
3.3. Cdk-inhibitorok
Tbb fehrjt azonostottak, melyek klnbz ciklin/Cdk-komplexeket gtolva le tudjk lltani a sejtciklust.
Kzlk a p16-fehrje bizonytottan tumor szuppresszor hats: gnjnek rkld mutcija familiris
melanomt okoz; gyakoriak a p16-mutcik sporadikus melanomban, a hasnylmirigy, a vese, a td
daganataiban is.
3.4. APC
Az APC-gn (= adenomatosus polyposis coli) mutcijra heterozigta egyedek vastagbelben tbb szz
kismret, jindulat daganat, polip fejldik; a daganatsejtek DNS-e a msik APC-gnt is elvesztette (Knudson-
mechanizmus). Tovbbi genetikai lzik malignus sejtburjnzshoz vezetnek (l. 57. fejezet); az APC-gn
mutcija teht colorectlis daganatok fontos, korai esemnye. A gn termke citoplazmatikus fehrje, mely az
epitelilis sejtek adhzijt s jeltviteli folyamatait is szablyozza. Az APC-fehrje a Wnt jeltviteli t fontos
alkotrsze (l. 47.5. bra): hinyban a szolubilis -katenin szintje megn a sejtben, mely a sejtmagba
transzlokldva sejtosztdst serkent gnek indukcijban vesz rszt.
3.5. WT1
A Wilms-tumor ritka gyermekkori vesedaganat. rkletes formja ktoldali, a sporadikus tumor egyoldali,
egygc. A tumorsejtekben kimutathat a WT1-gn mindkt kpijnak delcija. A gn termke cinkujj-
domnnel rendelkez transzkripcis s splicing faktor. Kizrlag az urogenitlis rendszer sejtjeiben
expresszldik, nlklzhetetlen a glomerulusok kifejldsben.
3.6. NF1
A von Recklinghausen neurofibromatosis viszonylag gyakori, autoszomlis dominns rklds krkp. F
tnete a br alatti neurofibromk kialakulsa testszerte; malignizldva ezek neurofibrosarcomv alakulhatnak
t. Az NF1-gn fehrjetermke (neurofibromin) GTP-z aktivl protein: hinyban az rintett szvetekben a
Ras-fehrje konstitutvan aktv llapotba kerl s folyamatosan serkenti a mitogn jeltvitelt kzvett ERK-
kaszkdot (l. 46. fejezet).
3.7. BRCA1 s BRCA2

Az emlrk egyike a leggyakoribb rosszindulat daganatoknak, gy rthet, hogy patomechanizmusnak
tisztzsra risi erfesztsek trtnnek. Az 1990-es vek kzepn klnoztak kt gnt (BRCA1 s 2 az angol
breast cancer kifejezsbl), melyek csrasejt mutcija felels az sszes emltumor-esetek mintegy 10
szzalkt kitev familiris emlrk s petefszek daganat kialakulsrt. A gnek nagymret fehrjket
kdolnak, pontos szerepk tisztzsa jelenleg is folyik. A kt fehrje nincs rokonsgban egymssal, de a
legjabb kutatsok szerint mindkett szerepet jtszhat a sejtciklus szablyozsban, illetve bizonyos DNS-
krosodsok, elssorban a kettslnc DNS-trsek kijavtsban. A BRCA1 s BRCA2 fehrjk nagymret,
multiprotein DNS-reparcis komplexek alkotrszei, funkcivesztsk strukturlis kromoszma-
rendellenessgeket eredmnyez, melyek hozzjrulnak a malignus folyamat kialakulshoz. Ezen tulajdonsgaik
alapjn egyesek nem is tumor szuppresszor fehrjknek, hanem muttor gnek (l. albb) termkeinek tekintik
ket.
3.8. PTEN
Ezt a tumor szuppresszor fehrjt mint a PI3K-t negatv szablyozjt fedeztk fel (l. 46. fejezet). A PI3K
enzimmel ellenttes reakcit katalizl: a 3. helyzetben foszforillt inozitolfoszfolipidekrl (pl. PIP 3) hastja le ezt
a foszftcsoportot, lelltva a PKB enzim ltal kzvettett tllsi jeltvitelt. A PTEN rkltt delcija olyan
krkpet eredmnyez, melyben megn az eml- s pajzsmirigyrk gyakorisga. Szomatikus PTEN-mutcikat
illetve a gn promternek hipermetilcijt szmos daganatban mutattk ki (56.1. tblzat).
3.9. VHL
A von Hippel-Lindau szindrma ritka rkld tumorszindrma: rosszindulat vesedaganat, melyhez a kzponti
idegrendszerben s a retinban kialakul reredet daganatok (haemangioblastomk) trsulhatnak. A gnje ltal
kdolt fehrje a sejt rendelkezsre ll oxign szablyoz hatst kzvetti (56.4. bra). Alacsony oxignszint
329
szuppresszor gnek
(hipoxia) esetn a HIF-1 transzkripcis faktor mennyisge megn a sejtben. A HIF-1 clgnjei olyan fehrjket
kdolnak, melyek az oxignhinyhoz val alkalmazkodst segtik: a VEGF nvekedsi faktor szekrcija
angiogenezist, az eritropoietin illetve receptornak expresszija fokozott vrsvrtest-kpzst idz el, a
glikolzis enzimei pedig oxignhinyban is biztostanak bizonyos mrtk ATP-termelst (56.4.A. bra).
Normoxis llapotban ezekre a fehrjkre nincs szksg: a VHL-fehrje egy multiprotein komplex rszeknt
ubikvitinlja a HIF-1 traszkripcis faktor egyik alegysgt, az degradldik s a clgnek nem rdnak t
(56.4.B. bra). A VHL-gn inaktivcija esetn ezek a gnek normlis oxignszintnl is aktvak, elsegtve a
daganat vaszkularizcijt.
56.4. bra - 56.4. bra: A VHL tumor szuppresszor fehrje hatsmechanizmusa A:

hipoxis llapot; B: normoxis llapot
4. Muttor gnek
A daganatkpzdsre prediszponl genetikai faktorok egyik tpusa teht a tumor szuppresszor gnek
mutcija. Ezen gnek termkei tudomnyos zsargonnal lve ajtnllknt, kzvetlenl felgyelik a
sejtciklust, sejtszaporodst. Ha ez a funkcijuk elvsz, semmi sem tudja tjt llni az egyensly felborulsnak,
a kros sejtburjnzs megindulsnak. Ehhez a Knudson-elmlet rtelmben kt mutcira van szksg. Egy
kros alll rklse esetn az egyedben nagy valsznsggel megjelenik a tumor.
A tumorra hajlamost gneknek van egy msik csoportja, melyek hatsukat kzvetve fejtik ki. Ezek a gnek a
genom integritst megrz, n. karbantart fehrjket kdolnak: kzjk tartoznak a DNS-reparci
klnbz faktorai (pl. XP-fehrjk, a mismatch repair enzimei, a BRCA1 s 2 gn termkei). Ha funkcijukat
elvesztik, genetikai instabilits lp fel: nvekszik a sejtekben a mutcis rta, ami viszont nveli a
protoonkogn-aktivlds, illetve a tumor szuppresszor gn inaktivlds veszlyt. A muttor
gnekkrosodsa teht nem okoz felttlenl karcinogenezist, de jelentsen nveli annak veszlyt. Az
elmondottakbl kvetkezik, hogy a muttor gnek krosodsa kvetkeztben kifejld daganatokban legalbb
3-4 egymstl fggetlen mutci halmozdik fel.
A tumorigenezis bonyolult folyamatban teht hrom f gntpus: a muttor gnek, a protoonkognek s a

tumor szuppresszor gnek mutcii jtsszk a f szerepet. Az 56.2. tblzat foglalja ssze ezeknek a gneknek
s termkeiknek legfontosabb tulajdonsgait.
56.2. tblzat - 56.2. tblzat: Protoonkognek, tumor szuppresszor gnek s muttor

gnek jellemzi
Jellemzk Protoonkognek Tumor szuppresszor Muttor gnek
gnek
A normlis gntermk mitogn szignl- a sejtproliferci gtlsa a DNS integritsnak
funkcija transzdukci fenntartsa
330
szuppresszor gnek
Jellemzk Protoonkognek Tumor szuppresszor Muttor gnek

gnek
Pldk nvekedsi faktorok, szablyoz fehrjk (GAP, DNS-repair fehrjk (XP-
receptorok, G-proteinek, Cdk-inhibitorok, faktorok, mismatch repair
fehrjekinzok, transzkripcis faktorok) fehrjk)
transzkripcis faktorok,
ciklinek
A mutns gn igen nem nem
transzfekcival
azonosthat
A mutci jellege dominns recesszv recesszv
A mutci kvetkezmnye funkcinyers funkciveszts funkciveszts
A mutci eredete szomatikus rkltt s szomatikus rkltt s szomatikus
Ajnlott irodalom
Brown, M. A., Solomon, E. (1997): Studies on inherited cancers, outcomes and challenges of 25 years. Trends
Genet. 13, 202206.
752759.
Esteller, M. (2008): Epigenetics in cancer. N. Engl. J. Med. 358, 11481158.
Fearson, E. R. (1997): Human cancer syndromes: Clues to the origin and nature of cancer. Science 278, 1043
1050.
Fridman, J. S., Lowe, S. W. (2003): Control of apoptosis by p53. Oncogene 22, 90309040.
Kinzler, K. W., Vogelstein, B. (1997): Gatekeepers and caretakers. Nature 386, 761763.
Knudson, A. G. (1993): Antioncogenes and human cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 1091410921.
Levine, A. J.: Tumor suppressor genes. Scientific American 1995/1, 2837.
Lw P. (2001): A sejt rz-vd szolglata a rk ellen. Termszet Vilga 132, 124126.
Maehama, T., Dixon, J. E. (1999): PTEN: a tumour suppressor that functions as a phospholipid phosphatase.
Trends Cell. Biol. 9, 125128.
Welcsh, P. L., Owens, K. N., King, M. C. (2000): Insights into the functions of BRCA1 and BRCA2. Trends
Genet. 16, 6974.
White, R. L. (1998): Tumor suppressing pathways. Cell 92, 591592.
331
57. fejezet - 57. Daganatbiolgia VI.: A
karcinogenezis tbblpses
mechanizmusa
ltalnosan elfogadott nzet, hogy a rosszindulat daganatok tbbsge genetikai betegsg: szomatikus s
ritkbban csrasejt mutcik okozzk. A legtbb esetben a tumor nem hirtelen, a semmibl jn ltre: a
karcinogenezis hossz, tbblpses folyamat, melynek sorn a daganatsejtben mind tbb mutci halmozdik
fel, egyre jobban elvsz a sejtszaporods kontrollja. Az epidemiolgiai adatok egyrtelmen a tbblpses
mechanizmust tmasztjk al, a daganatok tbbsge az idsebb kor betegsge. Az els karcinogn hats s az
igazn malignus tumor megjelense kztt hossz, gyakran tbb vtizedes latencia-peridus telik el. A
tudomny ennek a bonyolult folyamatnak egyre tbb molekulris rszlett trja fel.
1. Experimentlis karcinogenezis: a daganatok

klonlis evolcija
Ksrleti krlmnyek kztt a malignus transzformci karcinogn hatsokkal (kmiai gensek, ultraibolya
sugrzs, ionizl sugrzsok, vrusok) idzhet el. A legtbb karcinogn gens DNS-krosodst vlt ki, azaz
mutagn, genotoxikus hats. A rkkelt anyagok lehetnek direkt hats karcinognek, melyek DNS-hez
ktdve mutcit idznek el. A legtbb karcinogn azonban indirekt hats prokarcinogn, mely metabolikus
aktivcival alakul t reakcikpes, mutagn anyagg (l. 36. fejezet).
A daganatkpzds egyetlen, mutcit szenvedett sejtbl indul ki (inicici), mely promcis hatsok
kvetkeztben progredil s vgl malignus sejtpopulcit eredmnyez. A karcinognek egy rsze csak
inicicit kpes elidzni (inkomplett karcinognek vagy inicitorok), ms hatsok (pl. ismtelt kezels
policiklusos aroms sznhidrognnel, UV-besugrzs) azonban a tumorkpzds teljes folyamatt kivltjk
(komplett karcinognek).
1.1. Tumor-inicici
Az inicitorok olyan mutcit vltanak ki a genomban, melynek kvetkeztben a sejt prolifercis kpessge
fokozdik (57.1. bra). A hats irreverzibilis: a sejt utdaiban a mutci vtizedekig fennmarad; ezek a sejtek
mg nem daganatsejtek, de szaporodsuk a normlisnl gyorsabb.
1.2. Tumor-promci
Az inicilt sejtek lassan tlnvik a normlis szveti sejteket. Ez a folyamat mitogn hats anyagokkal, n.
promterekkel gyorsthat. Ezek az anyagok ltalban nem mutagnek; az inicilt, prolifercis elnyt lvez
sejtkln tlburjnzst, expanzijt okozzk. A gyors szaporods viszont nveli az jabb genetikai hibk
kialakulsnak eslyt.
A promter anyagok jelentsgre egy klasszikus ksrlet hvta fel a figyelmet. Ha egerek brt ismtelten
karcinogn hats policiklusos aroms sznhidrognnel kezelik, elszr jindulat szemlcs, papilloma, majd
brrk alakul ki. Egyszeri expozci ltalban nem okoz daganatot. Ha azonban a brterletet ismtelten
forbolszterrel is kenegetik, egyetlen policiklusos aroms sznhidrogn-kezels is daganatkelt hats. A
forbolszter nem genotoxikus anyag, a proteinkinz C serkentsvel azonban mitogn hatst okoz. A ksrletben
a policiklusos aroms sznhidrogn az inicitor; a forbolszter nmagban nem karcinogn hats,
promterknt azonban fokozza a policiklusos aroms sznhidrogn karcinogenitst (kokarcinogn). A
promci szakasza - legtbbszr a folyamat kezdetn - reverzibilis: a promter megvonsval a mitogn hats
megsznik, a daganat progresszija megszntethet vagy lassthat.
Szervezetnk szmos promter hatsnak van kitve. Szerepk a termszetes karcinogenezisben kiemelkeden
fontos. A hormonok kzl pl. az sztrognek promterknt jrulnak hozz az endometrium-tumorok,
emldaganatok kialakulshoz. Promterhats rvnyesl a krnikus gyulladsos megbetegedsek
daganatkpzdsre hajlamost hatsban is. A hepatitis B s C vrusok ltal kivltott krnikus
mjgyulladsban, colitis ulcerosaban s ms gyulladsos llapotban az rintett sejtekben aktivldik az NFB
332
57. Daganatbiolgia VI.: A
mechanizmusa
jeltviteli t (l. 49. fejezet). Ez egyrszt fokozza a sejtprolifercit, msrszt gyulladsi citokinek (pl. TNF-)
termelsre sarkallja a sejteket, nmagt erst pozitv feedback szablyozshoz vezet. Ilyen krlmnyek
kztt megn a gyorsan szaporod sejtek malignus elfajulsnak valsznsge.
1.3. Tumor-progresszi
A daganatkpzds vgs fzisban az inicilt sejt malignus sejtt alakul t. Ebben a progresszs szakaszban
jabb s jabb mutcik mind gyorsabban szaporod sejtpopulcikat eredmnyeznek. A mutcik s a gyors
proliferci kvetkeztben a sejtek kariotpusa instabill vlik, egyre tbb kromoszma-rendellenessg
halmozdik fel. Ezek a drasztikus genomvltozsok termszetesen irreverzibilisek.
A lert mechanizmus alapjn rthet, hogy a daganatok ltalban monoklonlis jellegek. Egyetlen sejtbl indul
ki a folyamat, melybl ismtelt mutcikat s epigenetikai vltozsokat kveten egyre gyorsabban proliferl
sejtpopulcik szelektldnak. Ezen klonlis evolci sorn kialakul malignus daganat valamennyi sejtjben
jelen van a tumorigenezis folyamatban felhalmozdott valamennyi mutci (57.1. bra). A progresszi vgs
fzisban azonban a genom-instabilits kvetkeztben az eredetileg monoklonlis tumor egyes sejtjeiben
klnbz mutcik lphetnek fel, a most mr gyorsan nvekv daganatban genetikai heterogenits alakulhat
ki.
57.1. bra - 57.1. bra: A daganat klonlis evolcija (Az eltr rnyalat, illetve alak
szimblumok genetikailag/epigenetikailag eltr sejteket jellnek.)
333
mechanizmusa
2. A karcinogenezis klinikai stdiumai

Br a rosszindulat daganatok nem alkotnak egysges betegsgcsoportot (emberben kzel 200 klnbz
neoplasia ltezik), a tumorok fejldsnek nagyjbl hasonl s az experimentlis karcinogenezis fzisainak
megfelel lpsei vannak. Az 57.2. bra a brrk pldjn mutatja be a daganatkpzds stdiumait.
57.2. bra - 57.2. bra: A brrk stdiumai
334
mechanizmusa
2.1. Primr tumor kialakulsa

Az inicilt tumorsejt osztdsa elszr hyperplasit eredmnyez: normlis megjelens sejtek nagyobb
csoportja jn ltre. A kvetkez stdium az epitelilis dysplasia, melyet a normlistl kiss eltr morfolgij
sejtek alkotnak. Ez a stdium preneoplasztikus llapotnak tekintend. A sejtek tovbbi szaporodsa a
hmrtegbl kiemelked, de a bazlis membrnt mg pen hagy, loklis daganatot, in situ carcinomt hoz
ltre.
2.2. Tumor-invzi
Slyos fordulatot a bazlmembrn ttrse jelent: a daganatsejtek mtrix protezokat kezdenek szekretlni,
melyek lebontjk a sejtkztti llomny struktrfehrjit s a tumorsejtek infiltrljk a hm alatti ktszveti
rteget. A bazlmembrnt ttr sejtekben tovbbi drmai vltozsok zajlanak le. Nagymrtkben lecskken a
hmsejtekre jellemz E-kadherin expresszija, a sejt-sejt kapcsolatok felszakadnak.A sejtek mozgkonysgt
fokoz n. motogn nvekedsi faktorok (pl. EGF, PDGF, HGF [hepatocita nvekedsi faktor]) hatsra
trendezdik a mikrofilamentum-rendszer. A citoszkeleton vltozsok szablyozsban a Rho-fehrjecsald
tagjai vesznek rszt, lehetv tve a sejtek gyors vndorlst. Az invazv karcinomasejtek citokeratinjt vimentin
vltja fel. A helykhz rgztett, osztdsukban s mozgsukban korltozott hmsejtek teht ktelkeikbl
felszabadul, mozgkony, fibroblasztszer sejtekk alakulnak t. A jelensg neve epitelilis-mezenchimlis
talakuls, mely az invazv daganatok frontvonalt alkot sejtekre jellemz. A tumorsejt invzi utat nyit a
rosszindulat daganatok legslyosabb, ltalban hallhoz vezet szvdmnyhez, az tttkpzdshez.
335
mechanizmusa
2.3. Metasztzis-kpzds
A metasztzisok kialakulsban szerepet jtsz molekulris mechanizmusok mg ma is kevss tisztzottak. Az
tttkpzds nagyon rossz hatsfok folyamat: a primr tumorbl felszabadul minden tzezredik sejt tud csak
mshol megtapadni s msodlagos daganatot ltrehozni. Szmos faktort ismernk, melyek az tttkpzds
ellen dolgoznak. A sejtsejt s a sejtmtrix kapcsolatok igyekeznek a sejteket eredeti helykn rgzteni. Az
extracellulris mtrixrl leszakad sejtek integrin molekulirl normlis krlmnyek kztt olyan jeltviteli
folyamatok indulnak el, melyek a sejt apoptotikus hallt indukljk. A metasztatizl tumorsejtek ezt a
kpessgket, az anoikiszt (l. 47. fejezet) elvesztik s gy tllik tjukat a keringsi rendszeren keresztl.
A metasztzisok kialakulsa tbb lpsben zajlik le. Az invzi sorn a tumorsejtek vr- s nyirokereket rnek
el, rst tnek a kapillrisok bazlmembrnjn, tjutnak az endotlsejtek kztt s bekerlnek a keringsbe
(intravazci). A vrram tjn vgbemen transzport komoly megprbltats a sejtek szmra: a nagymret
daganatsejtek a szk kapillrisokban mechanikailag krosodnak, az immunrendszer tmadsnak is ki vannak
tve. A tllk ltalban kis erekben akadnak el, szaporodva kis daganatokat hoznak ltre, melyek az endotlt,
majd a bazlmembrnt ttrve (extravazci) kikerlnek a krnyez szvetekbe s ott megtelepednek
(kolonizci). Ha a mikrokrnyezet ellensges, a daganatsejtek elpusztulnak. Ritkn alv mikrometasztzisok
jnnek ltre, melyek akr vekig, vtizedekig fennmaradhatnak, mg egyszer osztdsnak indulnak s tneteket
okoz, vgl hallhoz vezet makrometasztzisokk alakulnak t. Az tttek jelents mretre csak akkor
nhetnek, ha megteremtik sajt vrelltsukat. Az angiogenezist tbb, a tumorsejtek ltal is termelt nvekedsi
faktor (VEGF, FGF, PDGF, TGF-) serkenti. Az angiogenezist gtl gygyszerek kifejlesztse a daganatok
elleni kzdelem gretes terlete.
Az tttkpzds mechanizmusnak molekulris szint vizsglata metasztzis szuppresszor gnek

felfedezshez vezetett. Ezek termkei szemben a tumor szuppresszor fehrjkkel nem gtoljk a primr
tumor kialakulst, szelektven gtoljk viszont az tttkpzdst. Vannak kzttk Rho-fehrjt vagy mtrix
metalloprotezokat gtl fehrjk, az anoikiszt kzvett MAPKK. Taln legfontosabb kpviseljk az
epitelilis sejt-sejt kapcsolatokat biztost E-kadherin.
3. Onkogn-kooperci
A tumorkpzds tbblpcss mechanizmusa teht azt jelenti, hogy tbb (tlagosan 56) mutci szksges a
malignus daganat kifejldshez. A mutcik protoonkognek aktivcijt s tumor szuppresszor gnek
inaktivcijt egyarnt okozhatjk.
Klasszikus ksrletekben igazoltk, hogy cellulris onkognek a transzformciban egyms hatst ersthetik.
Az immortlis 3T3 sejtek mind ras, mind pedig myc onkognnel transzformlhatk (l. 55. fejezet). A ksrleti
llatbl kivett s tenysztett primer fibroblasztkultrban azonban mindkt onkogn hatstalannak bizonyult.
Ha viszont ezeket a sejteket a ras s a myc onkogn keverkvel transzfektltk, bekvetkezett a transzformci.
A kt onkogn ltal beindtott mechanizmusok teht szinergizltak egymssal.
Az onkognek koopercijt in vivo ksrletekben is igazoltk. Ha olyan transzgnikus egereket hoztak ltre,
melyek emlsejtjeiben aktivlt ras-gnt expresszltak, nhny llatban, hossz latencival emltumor fejldtt
ki. Ugyanez trtnt a myc-gnt emlsejtjeikben expresszl transzgnikus llatokban. Ha viszont a
transzgnikus egerek emljben mindkt onkoprotein tltermeldst sikerlt elrni, valamennyi llatban
bekvetkezett a daganatkpzds, lnyegesen rvidebb lappangs utn. Klnbz onkognek teht mind
szvettenyszeti, mind pedig in vivo krlmnyek kztt kooperlni kpesek egymssal a tumorigenezis
folyamatban.
4. Colon carcinoma: a tbblpses karcinogenezis

modellje
A vastagbl daganatai elhelyezkedsk miatt viszonylag korn diagnosztizlhatk, endoszkppal vizsglhatk,
mttileg eltvolthatk. A tumorkpzds klnbz stdiumaiban vgzett, nagyszm beteget rint
vizsglatok eredmnyekppen meglehetsen vilgos kp alakult ki a colon tumor progresszija sorn fellp
genetikai lzik termszetrl (57.3. bra).
57.3. bra - 57.3. bra: A colon carcinoma genetikai vltozsai
336
mechanizmusa
A tumor kialakulsban az APC tumor szuppresszor gn (l. 56. fejezet) inaktivldsa ltalban korai esemny.
A mutci gyakran rkltt: a familiris adenomatosus polyposisbanfokozott sejtproliferci lp fel, apr
polipok szzai-ezrei nnek a blnylkahrtyban. (APC-mutcik a nem rkld colon daganatokban is
gyakoriak.) A rasK protoonkogn aktivldsa nagyobb adenomk kialakulst eredmnyezi. A tumor-
progresszi ksbbi szakaszra a 18. kromoszma egy specifikus rgijnak elvesztse jellemz. Sokig azt
hittk, hogy ez egy receptorszer fehrjt kdol tumor szuppresszor gn, a DCC (= deleted in colon cancer)
kiesse miatt fokozza a sejtburjnzst. Ma inkbb gy gondoljk, hogy a DCC-gn termke az idegrendszer
fejldsben nlklzhetetlen, a vastagblrk progresszijhoz viszont a 18. kromoszma ezen rgijban egy
msik tumor szuppresszor gnnek a delcija jrul hozz. Az igazn malignus colon carcinoma megjelenshez
a p53-gn inaktivldsa vezet. A colon carcinoma kifejldshez teht legalbb egy protoonkogn s hrom
tumor szuppresszor gn mutcija szksges. A lzik nem felttlenl a lert sorrendben jnnek ltre, de a
carcinoma stdiumra mindenkppen a genetikai lzik lert felhalmozdsa jellemz; ezek mlyrehat
vltozsokat idznek el a sejt prolifercis, differencicis s apoptotikus viselkedsnek szablyozsban.
Tovbbi fehrjk (Raf, -katenin, TGF- receptor stb.) gnjnek mutcija, promter-metilcija bonyolthatja
a kpet.
5. A daganatkpzds elmletei
Daganatkutatsra vtizedek ta risi sszegeket kltenek a vilg gazdag orszgaiban. tfog, minden tumorra
rvnyes s a tudsok nagy tbbsge ltal elfogadott elmlet azonban mg nem szletett a daganatok
kialakulsval kapcsolatban.
A legelfogadottabb az elbbiekben ismertetett tbbszakaszos karcinogenezis modell, amit gnmutcis

elmletnek nevezhetnk. Lnyege teht mutcik, s epigenetikai vltozsok felhalmozdsa a sejtszaporodst
szablyoz gnekben s a mind malignusabb vl tumorsejtek klonlis expanzija. Eddig tbb mint 100 emberi
protoonkognt s mintegy 35 tumor szuppresszor gnt azonostottak. Tbbezer mutcit rtak le ezekben, de
nem talltak mg egy olyan mutci-kombincit sem, amely egy meghatrozott daganattpus minden esetben
jelen lenne. Valszn teht, hogy nem egyedi mutcik, vagy azok kombincija vezet daganatkpzshez,
hanem egsz jeltviteli utak, szablyoz mechanizmusok meghibsodsa. A Ras-t aktivcija, az Rb-t
abnormlis mkdse felels elssorban a fokozott prolifercirt. A p53-jelplya mkdsi zavara az
apoptzis kpessgnek elvesztst, a telomerz abnormlis expresszijval egytt a daganatsejt
immortalizcijt eredmnyezi. Hasonl, mg kevss ismert regulcis zavarok vezethetnek a fokozott
angiogenezishez, invazv s metasztatizl kpessgek megjelenshez. Az emltett jeltviteli utak zavara szinte
minden malignus daganatra jellemz.
337
mechanizmusa
A muttor fenotpus (l. 56. fejezet) hipotzis hvei azt valljk, hogy a vletlenszer mutcik tl ritkk ahhoz,
hogy ltaluk malignus tumorok kpzdhessenek. Kell teht egy korai mutci, mely DNS-repair gnt rint s a
muttor fenotpus mr megfelel htteret biztost a nagyszm gnmutci ltrejtthez. A herediter
nonpolyposis colon carcinoma, vagy a xeroderma pigmentosum (l. 22. fejezet) esetben jelentkez fokozott
prediszpozci daganatos betegsgekre muncit biztost az elmlet hvei szmra.
Kariotpus-rendellenessgek gyakoriak a daganatok vgs stdiumban (l. elbb). Sokan gy vlik, hogy az
aneuploidia a tumor-progresszi korai esemnye lehet, st, vannak, akik szerint msra nincs is szksg a
malignus sejtburjnzshoz. A minden-az-aneuploidia teria szerint a daganat gy jn ltre, hogy a
szervezetben kpzd aneuploid sejtek kzl egy-egy tlli ezt a genetikai katasztrft s megbolondulva
mrtktelenl osztdni kezd, gnmutcikra egyltaln nincs is szksge ehhez. (Ezt a szlssges elmletet
egybknt a tudsok nagy rsze elveti, a kromoszma-rendellenessgek, mint fontos kroki tnyezk szerept
azonban sokan hangslyozzk.)
Klinikai szempontbl egyltaln nem kzmbs, hogy melyik elmlet bizonyul igaznak. Az els esetben
onkoproteinekre hat szerek, a msodikban a hibs DNS-repair korrekcija biztosthat eredmnyes terpit, mg
a harmadik mechanizmus esetben csak a prevenci, korai szrvizsglatok jhetnek szba.
Ajnlott irodalom
Cavenee, W. K., White, R. L.: The genetic basis of cancer. Scientific American 1995/3, 5057.
727730, 759761.
Genetics of colon cancer. A special report. Science &Medicine 1997/4, 3440.
Gibbs, W. W. (2003): Untangling the roots of cancer. Scientific American 2003/7, 4857.
Jeney A. (2007): A daganatos betegsgek patobiolgiai alapjai. Lege Artis Medicinae 17, 297303.
Ruoslahti, E.: How cancer spreads. Scientific American 1996/9, 7277.
Liotta, L. A. (1992): A daganatsejtek terjedse s az tttkpzds. Tudomny 1992/4, 3239.
Loeb, L. A. Loeb, K. R., Anderson, J. P. (2003): Multiple mutations in cancer. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 100,
776781.
Lynch, H. T., de la Chapelle, A. (2003): Hereditary colorectal cancer. N. Engl. J. Med. 348, 919932.
Steeg, P. S. (2006): Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine 12, 895
904.
556580, 587654.
338
58. fejezet - 58. Molekulris medicina
I.: Molekulris diagnosztika
A molekulris medicina j tudomny: a betegsgek molekulris megkzeltst jelenti. Kt nagy ga van
kialakulban. A molekulris diagnosztika a molekulris biolgia mdszereit veti be a klinikumban betegsgek
krismjnek fellltsra vagy megerstsre, a molekulris lzi pontos mechanizmusnak megllaptsra.
A gnterpia clja az rintett sejtek kros gnmkdsnek helyrelltsa.
A molekulris sejtbiolgia mdszereinek diagnosztikus cl felhasznlsa trtnhet a teljes genom vagy egyes
gnek szintjn. A tovbbiakban a legfontosabb eljrsokat ebben a csoportostsban trgyaljuk.
1. Genomszint diagnosztikai mdszerek

Molekulris sejtbiolgiai mdszerekkel az emberi genom szerkezete s mkdse (expresszija) vizsglhat. Az
elbbivel a citogenetika s strukturlis genomika, az utbbival pedig a funkcionlis genomika foglalkozik.
1.1. Citogenetika s strukturlis genomika

A humn citogenetika mdszereinek clja az emberi kromoszma-szerelvny lthatv ttele, a kromoszmk
szmnak s mikroszkpos szerkezetnek vizsglata.
Kariotpus analzis. A kromoszma-szerelvny elvileg brmilyen osztd szvetben lthatv tehet.

Legegyszerbben a perifris vr leukociti vizsglhatk. A vrbl elklntett fehrvrsejteket mitogn hats
fitohemagglutinin jelenltben tenysztik, majd az osztdst kolhicinnel gtolva metafzikus sejteket nyernek. A
megfestett kromoszma-szerelvnyt lefnykpezik, a kromoszmkat kivgjk s mret szerint rendezik (58.1.
bra). A mdszer egyszer, a hasonl mret s alak kromoszmaprok egyrtelm megklnbztetse
azonban nem mindig lehetsges.
Svtechnikk. Ezeknek a mdszereknek a lnyege, hogy specilis festsi eljrssal a kromoszmk klnbz
rgii eltr intezitssal festhetk. A kapott svmintzat kromoszmaspecifikus, teht alkalmas a kromoszmk
azonostsra. A leggyakrabban alkalmazott eljrs a Giemsa-svozs (58.2. bra): a kromoszma-szerelvnyt
tripszinnel elkezelve eltvoltjk a gyengn ktd kromatin fehrjket, az azt kvet Giemsa-fests mr csak
a heterokromatin rgikat teszi lthatv.
58.1. bra - 58.1. bra: Az emberi kromoszma-szerelvny
339
58. Molekulris medicina I.:
Molekulris diagnosztika
58.2. bra - 58.2. bra: Az emberi kromoszmaszerelvny Giemsa-svozssal nyert

mintzata
340
Fluoreszcens in situ hibridizci (FISH). Fluoreszcens festkkel megjellt prbval vgzett hibridizci (l. 10.
fejezet) alkalmas lehet ltalnos centromr- vagy telomrfestsre, teljes kromoszmk vagy akr egyetlen
gnpr vizualizlsra. Lteznek olyan prbk, melyek a teljes kromoszma-szerelvnyt lefedik, az egyes
kromoszmaproknak megfelel DNS-darabokhoz azonban klnbz szn fluoreszcens festket ktttek. A
FISH-kpen gy minden kromoszmapr ms sznnel fluoreszkl, ami egyszerv teszi az egyes kromoszmk
azonostst (spektrlis kariotpizls).
Komparatv genom-hibridizci. A hagyomnyos FISH-mdszerek diagnosztikus cl alkalmazsnak

elfelttele, hogy a vrhat mutcit tartalmaz kromoszmargi ismert legyen, specifikus fluoreszcens prba
rendelkezsre lljon. 1992-ben kidolgoztak egy j in situ hibridizcis eljrst, mellyel ismeretlen lokalizcij,
a genomban esetleg jelenlev tbbszrs rendellenessgek (delcik s amplifikcik) is egyidejleg, egyetlen
341
vizsglattal kimutathatk. A komparatv genom-hibridizci mdszert elssorban daganatok kromoszma-

rendellenessgeinek vizsglatra hasznljk (58.3. bra). A daganatsejtekbl s kontrollsejtekbl genomilis
DNS-t izollnak, a kt DNS-mintt eltr fluoreszcencij festkkel jellik meg, majd elegykkel normlis
kromoszmaszerelvnyen in situ hibridizcit hajtanak vgre. A hibridizci sorn a ktfle szn DNS-
prbamolekulk vetlkednek egymssal. A kt prba-DNS-ben azonos mrtkben reprezentlt
kromoszmargik homogn fluoreszcencit mutatnak, a daganatsejtben deletlt kromoszmarszeken viszont a
kontroll-DNS-re, az amplifiklt gnszakaszon pedig a tumor-DNS-re jellemz fluoreszcencia dominl. A
fluoreszcencia digitlis kpanalzissel mennyisgileg is jellemezhet: a delci kiterjedse, illetve az
amplifikci mrtke meghatrozhat.
58.3. bra - 58.3. bra: A komparatv genom-hibridizci elve
ramlsi citometria. Fluoreszcens DNS-festkkel megfestett metafzikus kromoszma-szerelvny tagjai eltr

mretknek megfelel, klnbz festkkt kpessgk alapjn FACS-eljrssal (l. 17. fejezet) elklnthetk
egymstl. A mdszer gyors kariotpus-analzisre, egyes kromoszmaprok izollsra egyarnt alkalmas.
Molekulris biolgiai mdszerek. A humn genom program befejezse risi lehetsgeket nyitott meg a
molekulris diagnosztika eltt. Az SNP-chipek (l. 10. fejezet) kifejlesztse lehetv teszi a genomukban
jelenlev tbb milli egyedi nukleotid polimorfizmus egyidej kimutatst. Az els genercis
szekvenciameghatroz eljrsok (Sanger-mdszer, Maxam-Gilbert-mdszer) utn kidolgozott msodik s
harmadik genercis szekvenl technikk (ezek ismertetse meghaladja e tanknyv kereteit) lehetv teszik
azt, hogy ma (2011-ben) nhny nap alatt, nhny ezer dollrrt meghatrozhat egy ember genomjnak teljes
342
szekvencija. Eljtt teht a szemlyre szabott genomika ideje: mr csak azt kell a tudomnynak megfejtenie,
milyen klinikai kvetkeztetsek vonhatk le ebbla hatalmas mennyisg informcibl.
1.2. Funkcionlis genomika

A gnexpresszi sorn mRNS-ek, azokon pedig fehrjk kpzdnek. A funkcionlis genomika az egy sejtben
kpzd valamennyi RNS, illetve fehrje egyidej kimutatst jelenti.
A cDNS-chipek mkdsi elvt az 58.4. bra mutatja be, egy daganat s a neki megfelel normlis szvet
gnexpresszis profiljnak sszehasonltsval. Mindkt szvetbl RNS-t izollnak s a kt minta RNS-
molekulit klnbz szn fluoreszcens festkkel jellik meg, sszekeverik s olyan cDNS-chipen hajtanak
vgre hibridizcit, melynek mezi a klnbz gnekre specifikus cDNS-szakaszokat tartalmaznak. A
fluoreszcencia mikroszkpban az egyes mezk sznrnyalata attl fgg, milyen arnyban ktttek meg
komplementer RNS-eket a normlis s daganatszvetbl szrmaz mintkbl. A cDNS-chipekkel tbbezer gn
kifejezdse monitorozhat egyidben a kros szvetben s hasonlthat ssze az egszsges sejtek
gnexpresszijval. A vizsglatbl onkognek fokozott, illetve tumor szuppresszor gnek cskkent expresszija
mutathat ki.
58.4. bra - 58.4. bra: Tumorsejt gnexpresszis profiljnak vizsglata (piros

fluoreszcencia: cskkent gnexpresszi a tumorban; zld fluoreszcencia: fokozott
gnexpresszi a tumorban; srga fluoreszcencia: nincs klnbsg; nincs fluoreszcencia:
a gn nem expresszldik)
Br DNS-vizsglati mdszer, a DNS-metilci genomszint analzise az egyes gnek expresszijnak mrtkre

enged meg kvetkeztetseket.
A proteomika mdszerei (l. 13. fejezet) br jelenleg mg kevsb rzkenyek s kltsgesebbek a DNS-
chipeknl mg gretesebbek a molekulris diagnosztikban, hiszen nemcsak az rintett fehrjk szintjnek,
hanem funkcionlis llapotuknak (pl. foszforilci) az analzisre is alkalmasak. A funkcionlis genomika risi
tvlatokkal rendelkezik az orvostudomnyban.
2. A gnszint diagnzis mdszerei

Egyes gnek szerkezetnek (l. 9. s 10. fejezet), illetve expresszijnak (l. 13. fejezet) vizsglatra a korbban
mr ismertetett, ma mr klasszikusnak szmt metodikk hasznlatosak.
2.1. Mutci analzis
343
Az rintett gn mutcijnak direkt kimutatsra akkor van lehetsg, ha a gnt mr azonostottk, legalbb egy
rszt klnoztk, gy hibridizcis prba, szekvencia-informci rendelkezsre ll. A humn genom program
befejezsvel (l. 10. fejezet) ezek a felttelek mind tbb mutci ltal okozott betegsg esetben teljeslnek.
Gnmutcik kimutatsra kezdetben a Southern-blot mdszert alkalmaztk, ezt azonban mr teljesen

kiszortottk a molekulris diagnosztikbl a polimerz lncreakcin alapul mdszerek. Bizonyos
mutcitpusok kimutatsra a FISH is alkalmas. A diagnzis megerstse ltalban szekvencia-
meghatrozssal trtnik.
2.2. Pontmutci kimutatsa

Kis kiterjeds lzik (pontmutcik, kismret delcik, inverzik) kimutatsra szmos mdszert dolgoztak
ki, kzlk csak nhnyat emltnk meg ebben a fejezetben.
Restrikcis hely kpzdsnek vagy eltnsnek vizsglata. Mivel a restrikcis endonuklezok abszolt
specifikusak felismerhelyk szekvencijra (l. 9. fejezet), egyetlen bzispr megvltozsa meg is szntethet, de
ltre is hozhat hastsi helyet, ami a DNS-rgibl szrmaz restrikcis fragmentumok mretmeghatrozsval
Southern blot vagy PCR alkalmazsval kimutathat. Pldaknt a sarlsejtes vrszegnysg emlthet. A -
globin gn pontmutcija az Mst II enzim felismerhelyben kvetkezik be, gy a mutns gnre egy nagyobb
mret, el nem hastott DNS-fragmentum lesz jellemz, ami knnyen kimutathat (58.5. bra). A restrikcis
fragmentumok mutcik ltal elidzett mretbeli polimorfizmust RFLP-nek(restriction fragment length
polymorphism) nevezzk.
58.5. bra - 58.5. bra: RFLP-analzis a sarlsejtes anaemit okoz mutci

kimutatsra
(A) MstII hastsi helyek (fggleges nyilak) a normlis s sarlsejtes emberi -globin rgiban. Genomilis
DNS-mintval az brn jellt primerek (vzszintes nyilak) alkalmazsval PCR reakcit vgeznek, majd a
termkeket MstII-vel hastjk. (B) A hastsi termkek analzise glelektroforzissel
Hibridizci alllspecifikus oligonukleotidokkal . A vizsgland DNS-mintt hibridizcis filterre viszik fel,

majd a vizsgland gnszakaszra specifikus vad tpus s a pontmutcit hordoz oligonukleotid-prbval is
hibridizljk. Az eljrs azon alapul, hogy a kpzdtt duplex stabilitst egyetlen hibs bzispr (mismatch) is
cskkenti, a hibridizcis krlmnyek megvlasztsval gy elrhet, hogy csak a tkletes bzisprosodsra
kpes oligonukleotid ktdjn (58.6. bra). Az egyszer eljrs neve: dot-blot hibridizci, tjkozd
vizsglatra alkalmas.
58.6. bra - 58.6. bra: Az alllspecifikus hibridizci elve (A.) s alkalmazsa

sarlsejtes vrszegnysg molekulris diagnzisra (B.)
344
Pontmutci kimutatsa polimerz lncreakcival . Ha a PCR-reakcihoz vlasztott egyik primer 3-vgi

nukleotidja megfelel a pontmutci helynek, vad tpus primer csak a normlis, mutns primer pedig csak a
kros gnszakasz amplifikcijt teszi lehetv. A DNS-polimerz ugyanis csak akkor kpes a primert
rendeltetsszeren hasznlni, ha annak 3-vge komplementer a templttal (l. 21. fejezet). Vad tpus s mutns
primert alkalmazva, a PCR-termkek elektroforetikus analzisvel a genotpus is meghatrozhat (58.7. bra).
58.7. bra - 58.7. bra: A vadtpus s mutns PCR-primerek alkalmazsnak elve (A.)
s a mdszer felhasznlsa a sarlsejtes vrszegnysg diagnosztikjban (B.)
2.3. Nagyobb kiterjeds lzik kimutatsa

Delcik, transzlokcik, inverzik, inszercik detektlsa is lehetsges molekulris biolgiai eszkzkkel.
Az alkalmazand mdszert a mutci jellegtl, kiterjedstl fggen kell megvlasztani. A cysts fibrosist
okoz leggyakoribb mutci pldul egy triplet kiesst jelenti a CFTR-fehrjt kdol gn egyik exonjban (l.
42. fejezet). Kimutatsa a PCR-amplifiklt termk poliakrilamid-glelektoforzisvel, esetleg
szekvenciameghatrozsval lehetsges. Duchenne-fle dystrophia muscularisban (l. 39. fejezet) a delci
gyakran nagy kiterjeds, tbb exont rint. Ilyenkor ugyanabban a PCR-reakciban, tbb primerprt alkalmazva
tbb szomszdos exont amplifiklnak (multiplex PCR) s az elektroforetikus cskokbl kvetkeztetnek arra,
hogy melyik exonok estek ldozatul a delcinak (58.8. bra).
58.8. bra - 58.8. bra: A multiplex PCR elve. A: Exonok (E1-E4) s primerprok
(nyilak) egy gnszakaszon; B: A gnszakasz multiplex PCR-reakcikban amplifiklt s
glelektroforzissel sztvlasztott termkei vadtpus (1. minta) s delcit szenvedett
(2-4. minta) DNS-prepartumok esetben
345
Kiterjedt, esetleg tbb gnt is rint delci kimutatsra a metafzikus kromoszma-szerelvnyen vgzett
fluoreszcens in situ hibridizci a legalkalmasabb mdszer.
Transzlokcik kimutatsa PCR mdszerrel vagy citogenetikai eljrsokkal lehetsges. A trshelyeken

rintett gnekre specifikus, klnbz szn prbk alkalmazsval (tbbszn FISH) metafzikus
kromoszmkon, st interfzikus kromatinban is kimutathat a gnthelyezds. Az utbbi, egyre npszerbb
vl diagnosztikai eljrs az interfzis citogenetika.
Gnek vagy kromoszmargik amplifikcija citogenetikai mdszerekkel egyarnt kimutathat. Az

amplifikci mrtke (gnkpik szma) vals-idej PCR segtsgvel llapthat meg (l. 9. fejezet).
2.4. Gnexpresszi analzis

Egyes gnek expresszija az mRNS-ek s a fehrjk szintjn is vizsglhat. A Northern-blot analzist
kiszortotta a molekulris diagnosztikbl a reverz transzkriptz-PCR mdszere: a specifikus mRNS-t cDNS-be
rjk t, majd azt polimerz lncreakcival sokszorostjk. Valsidej PCR reakcit alkalmazva a mdszer
mennyisgi meghatrozsra is alkalmas (kvantitatv PCR). Egyes gnek promter-metilcijnak analzise a
gnexpresszi intenzitsra enged kvetkeztetni.
Specifikus fehrjk diagnosztikai cl kimutatsra a Western-blot, immuncitokmia s egyb immunolgiai

mdszerek hasznlatosak.
3. Pldk a molekulris diagnosztika alkalmazsra

A fentiek alapjn a molekulris diagnosztika clbetegsgei azok a krkpek lehetnek, melyeket valamilyen
nukleinsav-vltozs okoz. Az rkld betegsgekben ez csrasejt-mutcit, a rosszindulat daganatokban
ltalban szomatikus mutcikat s epigenetikai vltozsokat, a fertz betegsgekben pedig idegen nukleinsav
megjelenst jelenti. Az rintett szvet gnexpresszijnak vltozsa azonban szinte brmilyen betegsgben
elfordulhat.
3.1. Molekulris diagnosztika rkld betegsgekben

A molekulris biolgiai mdszerek sokrten alkalmazhatk az rkld betegsgek diagnzisban. A mr
kialakult betegsg esetben a klinikai tnetek alapjn fellltott diagnzis megerstst szolgljk. Recesszv
krkpek esetben fontos lehet a tnetmentes hordozk kiszrse egy csaldban vagy populciban.
A molekulris diagnosztika egyik legfontosabb felhasznlsi terlete a prenatlis diagnzis. rkld betegsg
gyanja esetn amniocentzis vagy korionbiopszia segtsgvel magzati sejteket nyernek, a bellk izollt DNS-
ben a krdses gnszakaszt PCR-ral amplifikljk, majd elvgzik a diagnosztikai analzist. Pozitv eredmny
esetn a terhessg els harmadban mrlegelhet a mvi abortusz lehetsge.
A legmodernebb eljrs a preimplantcis genetikai diagnzis. Erre a mdszerre az in vitro fertilizcis

(lombikbbi) programok elterjedse nyitott lehetsget. A nagyobb siker rdekben ltalban tbb petesejtet
termkenytenek meg s kezdenek tenyszteni. Az embrik 812 sejtes stdiumban a sejtek mg totipotensek:
346
mikromanipulcival egyikk eltvolthat, hinyt a tbbiek maradktalanul ptoljk. Az embri-biopszival

nyert sejtbl DNS-t izollnak s PCR-alap mdszerrel elvgzik a diagnosztikai analzist, esetleg 2030
klnbz, gyakori rkld betegsgre is. A genetikai szempontbl legegszsgesebb embrikat ltetik be az
anya mhbe.
3.2. Daganatok molekulris diagnzisa

A rosszindulat daganatok kialakulsrt protoonkognek s tumor szuppresszor gnek szomatikus (ritkbban
rklt) mutcii felelsek (l. 5556. fejezet).
A molekulris biolgiai mdszerek pontos diagnzist tesznek lehetv, ami gyakran elengedhetetlen a
leghatsosabb kezels megtervezshez. Figyelemmel ksrhet a tumor progresszija is, megllapthat a
kezels hatkonysga, rezidulis tumorsejtek kimutatsa. Mikroszatellitk szomatikus mutcijnak detektlsa
ltalnos genetikai instabilitsra, muttor gnek inaktivldsra utal (l. 56. fejezet).
3.3. Fertz betegsgek molekulris diagnzisa

Egyes fertz betegsgek krokozi nehezen vagy egyltaln nem tenyszthetk, a betegsg diagnzisa a
klinikai tneteken, esetleg antitestek megjelensn alapul. A krokoz nukleinsavainak kimutatsa gyorsabb s
rzkenyebb mdszer.
A krokozktl fggen in situ hibridizcit, polimerz lncreakcit, reverz transzkriptz-PCR-t lehet

alkalmazni. A diagnzis rk vagy akr percek alatt felllthat. (sszehasonltskppen: a Mycobacterium
tuberculosis kitenysztshez hetekre van szksg!) Szmos krokoz (pl. Neisseria gonorrhoeae, M.
tuberculosis, herpes simplex vrus, hepatitis B vrus, humn papillomavrus) kimutatsra mr diagnosztikus
kitek vannak kereskedelmi forgalomban. A molekulris diagnosztika szmra elrhet fertz betegsgek kre
minden bizonnyal tovbb fog szlesedni, kialakulban van a molekulris mikrobiolgia tudomnya.
Ajnlott irodalom
Handyside, A. H., Delhanty, J. D. A. (1997): Preimplantation genetic diagnosis: strategies and surprises.
Trends Genet. 13, 270275.
Holl Zs. (2002): Molekulris diagnosztika: vrakozsok s relis lehetsgek. Lege Artis Medicine 12, 140
142.
Kopper L., Kovalszky I., Marcsek Z. (szerk.): Molekulris Medicina. Medicina Knyvkiad, Budapest, 1374,
1997.
Korf, B. (1995): Molecular diagnosis III. N. Engl. J. Med. 332, 12181220, 14991502.
Kosztolnyi Gy. (2005): A medicina lehetsgeinek bvlse biotechnolgiai mdszerek alkalmazsval. Lege
Artis Medicinae 15, 745749.
Naber, S. P. (1994): Molecular Pathology Diagnosis of infectious disease. N. Engl. J. Med. 331, 12121215.
Naber, S. P. (1994): Molecular Pathology Detection of neoplasia. N. Engl. J. Med. 331, 15081510.
Pajor L. (1998): Az interfzis citogenetika alkalmazsi lehetsgei az onkopatolgiai diagnosztikban. Orvosi

hetilap 139, 29392946.
Petricoin, E. F., Liotta, L. A. (2002): Proteomic analysis at the bedside: early detection of cancer. Trends
Biotech. 20, S30S34.
Remil, J.: Grading the gene tests. Scientific American 1994/6, 8897.
Ross, D. W.: Introduction to Molecular Medicine. Springer-Verlag, New York, 1174, 1992.
Standt, L. M. (2003): Molecular diagnosis of the hematologic cancers. N. Engl. J. Med. 348, 17771785.
347
Weinberg, R.A. (2007): The Biology of Cancer. Garland Science, Taylor & Francis Group. 727732.
348
59. fejezet - 59. Molekulris medicina
II.: Gnterpia
Napjainkban az orvostudomny ktsgkvl legdivatosabb ga a molekulris medicina msik terlete, a
molekulris terpia vagy elterjedt nevn gnterpia. Ez az elnevezs minden olyan beavatkozst takar, melynek
clja specifikus gnek manipullsa: ptlsuk, kiirtsuk, kijavtsuk, expresszijuk befolysolsa. Ebben a
fejezetben azokkal az eljrsokkal foglalkozunk, melyeket a fenti clok elrsre dolgoztak ki. Br a gnterpia
ppen csak belpett a klinikai kiprbls fzisba, s eddig a vrakozsoknl kevesebb eredmnyt hozott, a
ksrletek jabb s mind kidolgozottabb protokollokkal nagy intenzitssal folynak (2009-ig tbb mint 1300
ksrleti gnterpis protokollt fogadtak el). Br eddig (2011) gnterpis gygyszer forgalmazst mg nem
hagytk jv, szakrtk vlemnye szerint a nem tl tvoli jvben rutinszeren fognak alkalmazni valban
hatkony gnterpis kezelseket. Indokolt teht a jv lehetsgeinek rvid ttekintse.
A kiprbls alatt ll terpis eljrsokat kt nagy csoportba lehet sorolni. Az egyik esetben az rintett
sejtekbe kismret, ismert szekvencij nukleinsavakat juttatnak be, melyekkel specifikus gnek expresszijt
mdostjk (oligonukleotid terpia). A valdi gnterpia funkcikpes gn bejuttatst, vagy specifikus
endogn gn clzott manipulcijt, talaktst jelenti.
1. Oligonukleotid terpia
1.1. Antisense inhibitorok
Az antisense oligonukleotidok specifikus mRNS-ek meghatrozott rgijval komplementer rvid
nukleinsavak, melyek a sejtbe juttatva cl-mRNS-khz ktdnek s annak mkdst gtoljk (l. 12. fejezet).
Elvileg brmely gn expresszija blokkolhat, melynek kdol szekvencija legalbb rszben ismert.
Humn antisense terpis ksrletek 1992 ta folynak, egyelre szerny sikerekkel. Elvileg minden betegsg,
melyet specifikus gnek abnormlis mkdse, vagy expresszija okoz, clpontja lehet oligonukleotid
terpinak. Philadelphia-kromoszma pozitv krnikus myeloid leukaemis sejteket sikerrel tiszttottak meg
szvettenyszeti krlmnyek kztt anti-bcr/abl oligonukleotiddal a fzis mRNS-ektl. Rszsikerekrl
szmoltak be ovarium daganatban szenved nk, AIDS-es betegek antisense terpijrl is (59.1. bra). Szmos
betegsg kezelsnek protokollja a kidolgozs stdiumban van: onkognspecifikus oligonukleotidok klnbz
rkos betegsgek, antivirlis nukleinsavak vrusfertzsek (pl. influenza, hepatitis stb.), a nvekedsi hormon
mRNS-t megclz oligonukleotidok az acromegalia kezelsre jnnek szba. A baktrium mRNS-ek Shine-
Dalgarno szekvencijval vetlked oligonukleotidokkal a fehrjeszintzis szelektv gtlsn keresztl
klnbz bakterilis fertzseket lehetne lekzdeni toxikus hatsoktl mentesen. A trypanosoma (az lomkr
krokozja) mRNS-eiben jelenlev kzs leader-szekvencia hasonl elv alapjn knl clpontot antisense
terpis beavatkozsra.
1.2. Ribozimek
Rekombinns DNS-technolgia segtsgvel olyan kataltikus RNS-ek llthatk el, melyek specifikus
mRNS-eket kpesek megktni s elhastva hatstalantani (l. 12. fejezet). A HIV-RNS-re specifikus ribozimek
klinikai kiprblsa mr megkezddtt s a tapasztalatok biztatak.
59.1. bra - 59.1. bra: A HIV-fertzs gtlsa antisense oligonukleotiddal
349
59. Molekulris medicina II.:
Gnterpia
1.3. siRNS-ek
Az antisense oligonukleotidok s ribozimek mellett jabban nagy terpis lehetsgeket ltnak az RNS-
interferencia jelensgben is (l. 12. fejezet). Kismret kettslnc RNS-ekkel (siRNS-ek) szekvencia-specifikus
poszttranszkripcis gncsillapts rhet el. Az siRNS-ek majdani terpis alkalmazsnak indikcis terlete
megfelel az emltett oligonukleotid inhibitoroknak. Klnsen remnytkeltek a daganat-terpiban tesztelt
clzott gncsillaptst elidz siRNS-kezelsek (a teljessg ignye nlkl: humn papillomavrusok
onkognjei, a bcr/abl fzis gn, pontmutcit szenvedett ras s B-raf gnek, fokozottan expresszld -
katenin s multidrog rezisztencia gnek kifejezdsnek gtlsa).
2. Valdi gnterpia
A sz igazi rtelmben vett gnterpia clja normlis funkcij gn expresszijnak elrse a beteg
clsejtekben. Ez megvalsthat a hinyz vagy elgtelen mkds gn ptlsval, illetve a tlzott aktivits
gn kiirtsval, vagy normlisra cserlsvel.
2.1. A gnterpia tpusai

Ex vivo gnterpia. A jelenleg foly klinikai ksrletek tbbsgben a beteg szervezetbl kivett kros
clsejteket szvettenyszeti krlmnyek kztt manipulljk, majd a gnterpiban rszestett sejteket
visszajuttatjk a pciens szervezetbe.
In situ gnterpia. Szmos humn terpis ksrletben loklisan alkalmazzk a terpis gnt: nylkahrtyk
felsznn, erek falban, tumorba fecskendezve.
In vivo gnterpia. A terpis gnt megfelel vektorhoz ktve, a keringsbe juttatjk, a clsejteket a vrram
tjn ri el. A kezels ezen formjban az eredmnyessg elfelttele, hogy a vektor ismerje fel a clsejteket s
a terpis gnt csak ezekbe juttassa be. Ez elrhet pldul gy, hogy a vektort egy specifikus liganddal jellik
meg, melynek receptora csak a clsejt felsznn expresszldik.
350
Gnterpia
In utero gnterpia. A magzatvzbe fecskendezett gnterpis vektorral a magzat bizonyos szvetei (pl. a
lgutak nylkahryja) megclozhatk. Az eljrs elnye az lenne, hogy retlen ssejteket lehetne korriglni,
ezek utdai mr normlis sejtek lennnek, a beavatkozst gy nem kellene megismtelni. (Differencilt sejtek
gnterpija a sejtek korltozott lettartama miatt csak tmeneti eredmnyt hozhat.) Az in vivo s in utero
gnterpia llatmodellekben biztat eredmnyeket adott; humn alkalmazsokrl mg nem szmoltak be.
2.2. Gnterpis vektorok

A terpis gnt a hatsos dzis ellltsa s hatkony transzfer rdekben clszer valamilyen
vektorhozktni. A humn ksrletek tbbsgben hrom vektorrendszer valamelyikt alkalmaztk: a virlis
vektorok kzl a retrovrusok s az adenovrusok, a nem virlis vektorok kzl pedig a liposzma-komplexek a
legnpszerbbek. Szmos egyb vektorrendszer kidolgozsval s tesztelsvel is foglalkoznak.
A vrus-vektorokkal szemben tmasztott legfontosabb kvetelmny, hogy a terpis gnt anlkl legyenek
kpesek bejuttatni s mkdtetni a clsejtben, hogy ott a vrus maga szaporodna.
Retrovrus vektorok. Manipulcijuk a provrus szintjn trtnik (59.2. bra): a gag, pol s env gneket
cserlik ki a terpis gnre, majd a vrus-DNS-t transzfekcival beviszik egy becsomagol sejtvonalba. Ezek a
sejtek egy helper provrusrl termelik a Gag, Pol s Env fehrjket s a rekombinns vrus-RNS-t becsomagolva
a terpis gnt tartalmaz fertz vrusokat termelnek. A retrovrusokat eddig elssorban ex vivo terpira
hasznltk. A clsejtben provrus kpzdik, integrldik s expresszija a terpis fehrje termelst
eredmnyezi.
59.2. bra - 59.2. bra: Gnterpia retrovirlis vektorral
351
Gnterpia
Adenovrus vektorok . Az adenovrus lineris DNS-ben a korai rgi egy rszt cserlik ki a terpis gnre
(59.3. bra); a vrus gy replikldsra kptelenn vlik. Elszaportsa olyan becsomagol sejtekben trtnik,
melyekbe elzleg bejuttattk a vrusreplikcihoz szksges fehrjk gnjeit. A termeld, terpis gnt
tartalmaz adenovrus partikulumok a clsejtbe egy integrinreceptor ltal kzvettett endocitzissal jutnak be. A
vrusok kitrnek az endoszmkbl s a sejtmagban extrakromoszomlisDNS formjban expresszljk a
terpis gnt. Integrci hinyban az adenovrus vektor ltal kivltott terpis hats csak tmeneti lehet. Az
adenovrus vektorok elssorban in situ s in vivo beavatkozsoknl jhetnek szba. (Az adenovrus-vektorok
ritkn okoznak mellkhatsokat, a gnterpis ksrletek els hallos szvdmnyt mgis egy ilyen vektor
okozta. 1999-ben egy fiatal beteg immunrendszere tlzott mdon reaglt az adenovrussal vgzett gnterpis
beavatkozsra.)
59.3. bra - 59.3. bra: Gnterpia adenovrus vektorral
352
Gnterpia
Liposzma-vektorok. A terpis gnt tartalmaz rekombinns plazmidot pozitv tlts kationos liposzmval
komplexljk s gy juttatjk a clsejtbe. A gntranszfer gyenge hatsfok, de mivel a komplex nagy dzisban
adhat, elrhet terpis hats. Megfelel liganddal elltott liposzmavektoroktl in vivo gnterpis sikereket
remlnek.
A legtbbet igr vektorok nhny jellemz tulajdonsgt az 59.1. tblzat foglalja ssze.
2.3. A gnterpia lehetsgei

Az alkalmazand gnmanipulci fajtjt a gnt krost mutci funkcionlis kvetkezmnye hatrozza meg.
Funkciveszt mutci esetn a gn ptlsa a megolds, ami technikailag viszonylag egyszer eljrs: az
rintett gnnek megfelel cDNS-t promterrel ltjk el s vektorba ptve bejuttatjk a clsejtbe. Szerencss
esetben a gn optimlis szinten expresszldik s meggygytja a sejtet. A jelenleg foly humn gnterpis
prblkozsok ebbe a tpusba tartoznak.
353
Gnterpia
Funkcinyer mutci ltal okozott betegsgekben a kros gn clzott kiirtsa (K.O. mutci, l. 12. fejezet)
vagy korrekcija a jrhat t. Tbbfle mdszert dolgoztak ki az ilyen tpus gnmanipulcira. Ezek kzl a
leggretesebbek gnsebszeti eljrsokkal ltrehozott szekvencia-specifikus nuklezokat alkalmaznak. A
cinkujj-nuklezok mestersgesen ellltott fzis fehrjk. DNS-kt domnjk cinkujj fehrje, mely gnjt
gy manipulltk, hogy a transzkripcis faktor tetszs szerinti DNS-szekvencit ismerjen fel. Kataltikus
domnjk egy restrikcis enzim nuklez rgija, mely a cinkujj domn ltal kivlasztott helyen hastja el a
DNS-t. A kettslnc trs kijavtsa sorn tetszs szerinti vltoztats idzhet el a rgi DNS-
szekvencijban. A cinkujj-nuklez stratgia segtsgvel 2011-ben a IX. alvadsi faktor hinyban szenved
egereket rszestettk sikeres gnterpiban. A technikai felttelek teht mr rendelkezsre llnak, a humn
gnkorrekcira azonban mg vrni kell.
2.4. Klinikai gnterpis tapasztalatok

Az els humn gntranszfer ksrletet 1989-ben, majd az els valdi gnterpit 1990-ben hajtottk vgre.
Azta szmos gnterpira specializldott biotechnolgiai cg alakult, a tbb ezer humn gnterpis
beavatkozs eredmnyei azonban nmileg csaldst keltettek. A kezelsek sorn mellkhatsok csak elvtve
jelentkeztek ugyan, s az esetek egy rszben a vrt pozitv biolgiai hatsokat is szleltk, a gnterpia
gygyulst vagy tarts, jelents javulst azonban csak nhny klinikai ksrletben hozott. Bizakodsra az adhat
okot, hogy az sszegyjttt tapasztalatok alapjn j, hatkonyabb vektorokat s kezelsi protokollokat
fejlesztettek ki.
Az albbiakban nhny fontosabb klinikai ksrlet eredmnyeivel foglalkozunk.
59.1. tblzat - 59.1. tblzat: Gnterpis vektorok jellemzi

Vektor Elnyk Htrnyok
retrovrusok integrci a genomba, tarts hats inszercis mutagenezis, csak
osztd sejteket fertznek
adenovrusok sokfle sejt transzduklhat, nagy tmeneti hats, immunvlasz
hatsfokkal kivltsa
adeno-asszocilt vrusok integrci a genomba, nem kismret inszert
krokozk
liposzmk betegsget nem okoznak, kis hatsfok sejtbe juts
nagymret fragmentum
csupasz DNS betegsget nem okoz, nagymret kis hatsfok sejtbe juts,
inszert bomlkonysg, instabilits
Szomatikus sejtek gnterpija. A jelenleg foly klinikai ksrletek kivtel nlkl ebbe a kategriba
tartoznak: a clsejtek testi sejtek, manipulcijuk nem rinti a csrasejtvonalat, gy a genetikai vltozs az
esetleges utdokra nem rkldhet.
Az els szomatikus gnptlst adenozin-dezaminz (ADA)-hinyban szenved gyermekeknl hajtottk vgre.

Az enzim hinyban toxikus adenin-nukleozidok szaporodnak fel a sejtekben, amelyek a limfocitkat krostva
hallos immunhinyos llapotot okoznak. 1990-ben kt ADA-hinyos kislny T limfocitiba ex vivo ADA-
cDNS-t vittek be. A betegek ma is lnek, mivel azonban prhuzamosan enzimterpiban is rszesltek, a
gnterpia eredmnyessge nem tlhet meg.
Az ADA-hinyhoz hasonlan slyos immunhinyos llapot jellemzi az X-SCID (X-linked severe combined
immundeficiency) krkpben szenved gyermekeket is. Egy interleukin-receptor alegysgnek hinya
kvetkeztben sem a B-, sem a T-limfocitk nem alakulnak ki, ami mr kisgyermekkorban hallos
fertzsekhez vezet. A betegsg kt szempontbl is mrfldknek bizonyult a gnterpia trtnetben. Ez volt
az els igazi siker: 2000-ben 20 gnterpiban rszestett kisfi kzl 18 esetben tarts javulst rtek el.
Msrszt viszont ez volt az els gnterpis ksrlet, melyben bekvetkezett a rettegett szvdmny, az
inszercis mutagenezis. A gyermekek kzl tnek az ex vivo kezelt hematopoietikus ssejtjeiben a vektorknt
alkalmazott retrovrus provrusa egy, a vrsejtek fejldsben fontos szerepet jtsz protoonkogn
transzkripcis faktor gnjbe integrldott, annak tlzott expresszija pedig akt T-sejtes leukaemit idzett el
a betegekben. A gnterpia teht mkdik, de gnbeviteli mdszerei mg finomtsra szorulnak.
354
Gnterpia
Cysts fibrosisban (l. 42. fejezet) az letet a lgutak ismtld fertzsei veszlyeztetik. A jelenleg foly
ksrletekben a CFTR-gnt adenovrus vektorban, aeroszol formjban probljk bejuttatni a lgutak hmjba,
vltakoz, klinikailag nehezen megtlhet sikerrel. Biztat megfigyels, hogy K.O. egrmodellben egyetlen in
utero gnkezelssel jelents javulst rtek el.
A gnterpis prblkozsok nagyobb rsze daganatos betegekben folyik. Tbbfle kezelsi protokollt
dolgoztak ki, ezek kzl a legbztatbb taln az n. ngyilkos gnek alkalmazsa, melyek a clsejtet rzkenny
teszik valamilyen, egybknt hatstalan szerrel szemben. ngyilkos gnknt mkdhet pldul a herpeszvrus
timidinkinz gnje (tkHSV; l. 12. fejezet). A timidinkinz enzim a ganciklovir nev szert ganciklovir-trifoszftt
foszforillja, ami a dGTP helyett bepl a DNS-be s gtolja a replikcit. A daganatba adott tkHSV-injekci utn
glioma-betegben jelents tumorregresszit rtek el ganciklovir-kezelssel.
Klinikai ksrletek folynak familiris hypercholesterinaemiban (l. 35. fejezet) szenved betegeknl is. Parcilis
hepatektomival nyert mjsejtekbe ex vivo gntranszferrel juttatjk be az LDL-receptor gnjt, majd a sejteket
reinfundljk a betegbe. A pciensek egy rsznl a vr LDL-koleszterinszintjnek cskkensrl szmoltak be.
Fertz gensekkel szembeni immunits rhet el DNS-vakcink alkalmazsval. Az antign gnjt tartalmaz
csupasz DNS-vektort sejtek felveszik, az expresszld fehrjvel szemben pedig a szervezetben humorlis s
cellulris immunvlasz is kialakul. Gnterpis protokollok kidolgozsa folyamatban van herpes, malria,
AIDS, tuberculosis, hepatitis s ms fertzsek, st daganatok elleni immunizlsra.
Csrasejt gnterpia. A transzgnikus, illetve K.O. egerek ltrehozshoz hasonl mdszerrel (l. 11. s 12.
fejezet) elvileg emberben is elkpzelhet olyan gnterpis beavatkozs, mellyel betegsgek trktst meg
lehetne akadlyozni. A csravonal genetikai manipulcijnak jelenleg megjsolhatatlan kockzatai s etikai
megfontolsok alapjn a tudomnyos vilg llspontja azonban ma az: a csrasejt gnterpia emberben nem
engedlyezhet. Ilyen jelleg ksrletek ma minden a beavatkozs vgrehajtsra tudomnyosan felkszlt
orszgban tiltottak.
Ajnlott irodalom
Anderson, W. F. (1998): Human gene therapy. Nature 392, 2530.
Askari, F. K., McDonnell, W. M. (1996): Antisense-oligonucleotide therapy. N. Engl. J. Med. 334, 316318.
Blease, R. M.: Gene therapy for cancer. Scientific American 1997/6, 9195.
Cao, S., Cripps, A., Wei, M.Q. (2010): New strategies for cancer gene therapy: Progress and opportunities.
Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 37, 108114.
Castro, M. G, Lowenstein, P.R. (2009): Gene therapy continues to make progress. Clinical and regulatory
perspectives. Current Gene Therapy 9, 327328.
Felguer, P. L.: Nonviral strategies for gene therapy. Scientific American 1997/6, 8690.
Friedmann, T.: Overcoming the obstacles of gene therapy. Scientific American 1997/6, 8085.
Ho, D. Y., Sapolsky, R. M.: Gene therapy for the nervous system. Scientific American 1997/6, 96100.
Kohn, D. B., Candotti, F. (2009): Gene therapy fulfilling its promise. N. Engl. J. Med. 360, 518521.
Moolten, F. L.: Suicide genes for cancer therapy. Science & Medicine 1997/4, 1625.
Ratko, T. A., Cummings, J. P., Blebea, J., Matuszewski, K.A. (2003): Clinical gene therapy for nonmalignant
disease. Am. J. Med. 115, 560569.
Wall, N. R., Shi, Y. (2003): Small RNA: can RNA interference be exploited for therapy? Lancet 362, 1401
1403.
355

Szeberenyi Molekularis Sejtbiologia PDF

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

You might also like

Szeberenyi Molekularis Sejtbiologia PDF

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Szeberenyi Molekularis Sejtbiologia PDF

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Molekulris sejtbiolgia

Created by XMLmind XSL-FO Converter.

Publication date 2014

Created by XMLmind XSL-FO Converter.

1.2. A radioaktvan jellt makromolekulk izollsa s mennyisgi meghatrozsa .... 41

2.2. Eukariota DNS-polimerzok ................................................................................ 122

4. A fehrjeszintzis gtlszerei ............................................................................................ 168

4.1. Fagocitzis ............................................................................................................ 206

1. A jeltvitel fzisai ............................................................................................................. 248

3. Az apoptzis legfontosabb regultorai .............................................................................. 295

2.1. Primr tumor kialakulsa ...................................................................................... 335

18.6. 18.6. bra: Ellenrzsi pontok a sejtciklusban ....................................................................... 104

Kiads ve: 2011

Nordex Kft. Dialg Campus Kiad, 2011

Szebernyi Jzsef, 2011

Kiad: NORDEX KFT. Dialg Campus Kiad

Mszaki szerkeszt: NORDEX KFT. Dialg Campus Kiad

1.1. bra - 1.1. bra: A prokariota sejt szerkezete

1.2. bra - 1.2. bra: Az eukariota sejt szerkezete

5. Az eukariota sejtek kialakulsa: az endoszimbizis-

1.3. bra - 1.3. bra: Az eukariota sejtek kialakulsa

A bakteriofgok rtkes objektumai a molekulris biolgiai kutatsoknak. A fertztt baktriumban gyorsan

1.4. bra - 1.4. bra: Az lvilg evolcija: A sejtmag valsznleg a sejtmembrn

2.1. bra - 2.1.bra: A nukleinsavak bzisai

2.2. bra - 2.2. bra: A ribz s a dezoxiribz szerkezete

2.3. bra - 2.3. bra: Az ATP s a ciklikus-AMP szerkezete

Baktriumtranszformci. Br a DNS-t Miescher mr 1868-ban azonostotta fehrvrsejtek magjban, majd

Gntranszfer eukariota sejtekbe. A baktriumtranszformcival analg gntviteli mdszereket a 70-es vekben

2.2. A DNS szerkezete

A rntgendiffrakcis eredmnyek s a Chargaff-szablyok ismeretben 1953-ban Watson s Crick fellltotta a

2.5. bra - 2.5. bra: Hiperkromicitsi grbe

2.3. A DNS-szerkezet szintjei

2.6. bra - 2.6. bra: B-DNS s Z-DNS

3.2. Az RNS szerepe. RNS-tpusok

Az egyes RNS-fajtk tulajdonsgaival, szerepvel a megfelel fejezetekben foglalkozunk.

3.3. Kataltikus RNS-ek

Egy lehetsges vlasz ez lehet: a legprimitvebb sejtekben RNS-molekulk mkdhettek nreprodukcira

kzremkdskkel lassan megjelentek a genetikai informcit stabilabban s hitelesebben rz DNS-

Joyce, G. F. (2002): The antiquity of RNA-based evolution. Nature 418, 214221.

3.1. bra - 3.1. bra: Az aminosavak ltalnos szerkezete s a peptidkts kialakulsa

1.2. Az aminosavak osztlyozsa

Az elsdleges szerkezet a fehrjt felpt aminosavak sorrendje, azaz a polipeptidlnchoz kapcsold

3.3. bra - 3.3. bra: A ribonuklez harmadlagos szerkezete

3.4. bra - 3.4. bra: Az inzulinreceptor domnszerkezete

Az enzimmkdst szmos tnyez befolysolja. A molekulk hmozgsa s az enzim trszerkezete is fgg a

1.2. A sznhidrtok osztlyozsa

4.1. bra - 4.1. bra: A glukz lineris s gyrs szerkezete: s konfigurci

4.2. bra - 4.2. bra: A maltz szerkezete

Oligoszacharidok. Nhny cukor, cukorszrmazk egysgbl felpl sznhidrtok, melyek fehrjkhez,

Poliszacharidok. Nagyszm hexz egysgbl felpl makromolekulk. A cellulz a nvnyi sejtfal

4.3. bra - 4.3. bra: A cellulz s a kemnyt szerkezete

Specilis poliszacharidok a glikzaminogliknok. Ismtld diszacharid egysgekbl plnek fel, amelyeket

2.2. A lipidek osztlyozsa

4.4. bra - 4.4. bra: Triglicerid (A.) s foszfolipid (B.) szerkezete

Glikolipidek. Sznhidrttartalm membrnlipidek, amelyek a membrnok exoplazmatikus (azaz a citoszllal

vrcsoportanyagok). A cerebrozidokban a cukorkomponens ceramidhoz ktdik, a gangliozidok kzs

4.5. bra - 4.5. bra: A szfingomielin szerkezete

4.6. bra - 4.6. A szternvz szerkezete