Fraccionamiento de tejidos e identificacin de sus principales

constituyentes
Mishelle Alejandra Dueas Zambrano
Departamento de Qumica, Laboratorio de Bioqumica, Universidad de los Andes, Carrera 1 N 18 A 12, Bogot, 111711, Colombia

Abstract

Living organisms are organic biomolecules, and to know what percentage of each biomolecule is in the tissue, it is convenient to use the
method of cell or tissue fractionation. Tissue fractionation consists in the rupture of cells, preventing the destruction of cellular organelles,
and in this way, will help to separate the major components such as carbohydrates, proteins, lipids and nucleic acids. The chicken liver
facilitates the identification of organic biomolecules because it has a large number of these. At the beginning the chicken liver tissue was
prepared and by centrifugation it was possible to obtain different residues and supernatants, which allowed the analysis of the main
biomolecules. Secondly, it was desired to check the percentage or presence of organic biomolecules, for which reagents such as Lugol,
reagent of Molisch, Benedict, were used. Therefore, the fractionation of tissues, with the help of reagents will allow to identify if there is
presence of biomolecules in the tissue.

Keywords: Residues, biomolecules, fractionation, tissue, reagent

1) Introduccin

Los seres vivos estn constituidos por biomolculas. Por lo (Roca, 2003). De esta manera, se tendr un control ms fino
tanto, son consideradas como las bases qumicas, que le de las condiciones experimentales. As, se pude, utilizar de
permiten subsistir al ser vivo. los animales rganos especficos que se quieran estudiar, ya
Las biomolculas, se clasifican en dos grupos: inorgnicas y sea hgado, rin, corazn, ojos.
orgnicas.
El primer factor limitante en el metabolismo lo constituye
Biomolculas inorgnicas: la funcin digestiva. El metabolismo inicia en el aparato
Agua digestivo, en donde ocurre la trasformacin de las
Aniones: fosfatos, cloruros, carbonatos, sulfatos biomolculas complejas, que se ingieren en el alimento, a
Cationes: potasio, calcio, sodio molculas sencillas. Estas pasan al hgado convirtindose en
Gases: nitrgeno, oxigeno, helio la central metablica del organismo. (Roca, 2003)

Biomolculas orgnicas: El hgado interviene en la regulacin del metabolismo de

Protenas: insulina, hemoglobina, colgeno
Azcares: glucosa, fructosa, manosa
Lpidos: triglicridos, esteroides, cridos
cidos nucleicos: DNA o RNA
Para identificar las biomolculas en los organismos, se
puede ejecutar la tcnica de fraccionamiento de tejidos. El
fraccionamiento de tejido requiere la ruptura de las clulas,
previniendo que no se destruya los orgnulos celulares, los
que supone una homogeneizacin del tejido y una posterior
separacin del orgnulo utilizando una tcnica de separacin
adecuada.
carbohidratos, lpidos, aminocidos, protenas. Por lo tanto,
el hgado es un rgano con demasiadas actividades
metablicas y cualquier evaluacin de su estado funcional
depende se du habilidad en ejecutar una funcin metablica
especifica (Roca, 2003). As mismo, el hgado tiene una alta
cantidad de protenas, azcares, lpidos, cidos nucleicos y
para identificarlos independiente, se puede utilizar la
tcnica de fraccionamiento de tejidos.

En el proceso de homogenizacin se puede utilizar diferentes

tcnicas mecnicas, adems de diferentes compuestos con el
fin de facilitar la disgregacin del tejido para identificar los
principales constituyentes. (Roca, 2003).

Una estrategia alternativa a los estudios in vivo, que permite

controlar fcilmente las variables que puedan influir sobre
los resultados, es realizar un estudio de un rgano aislado

1
2) Parte Experimental

2.1 Preparacin del tejido para la identificacin de los
constituyentes
Se cortaron 4.95 g de hgado de pollo, en pequeos
trozos y se mezclaron con 0.48 g de arena lavada y
7.5 ml de cido tricloroactico, posteriormente se
maceraron y se centrifug la muestra a 4000 rpm, por
10 minutos. As se obtuvo un sobrenadante y un
residuo.
Al sobrenadante se le agreg 16 ml de etanol al 95%,
luego fue colocado a bao de hielo por 5 minutos.
Luego, se centrifug a 4000 rpm por 10 minutos, se
consigui un sobrenadante y un residuo.
- Se conserv el residuo.
- El sobrenadante fue llevado a bao mara, el
cual se reserv, para realizar posteriormente el
anlisis de carbohidratos.
Al residuo, se le adicion 7.5 ml de la mezcla de
etanol-ter-cloroformo (4:4:2), posteriormente se
centrifug a 2500 rpm por 5 minutos. Despus de esta
centrifugacin se obtuvo un residuo y un
sobrenadante.
2.2.2 Anlisis de lpidos
El sobrenadante fue dividido en 2 fracciones en
tubos de ensayo:
- Al primer tubo de ensayo, se le adicion 3
ml de cloroformo y luego se le adicion
anhdrido actico. Se agit, y luego se le
agreg 3 gotas de cido sulfrico.
- Al segundo, se le agreg 3 ml de hidrxido
de sodio al 15%, y luego fue llevado a
bao mara durante 20 minutos,
posteriormente, se le adicion 3 ml de
agua destilada, luego fue agitado
fuertemente.
-
2.2.3 Anlisis de protenas
Se extrajo una pequea proporcin de 0.1g del
residuo, se coloc 1 ml de agua destilada y luego
1ml de reactivo de Millon.

- Al residuo se le agreg 5 ml de cloruro de

sodio al 10%, posteriormente se lo llev a bao
mara durante 40 minutos, y luego se
centrifug a 6000 rpm por 10 minutos. El
producto de esto fue utilizado para el anlisis
de protenas.
- En cambio, el sobrenadante, fue llevado a bao
mara durante 20 minutos, para posteriormente
ser usado para el anlisis de lpidos.

2.2.1 Anlisis de carbohidratos

Fig. 1. Diagrama para la identificacin de los constituyentes
La fraccin del sobrenadante, fue dividida en
4 proporciones en tubos de ensayo. 3) Resultados y discusin

- Al primer tubo, se le agreg 3 gotas de 3.1 Carbohidratos

Lugol.
- Al segundo tubo, se le adicion 1 ml de
cido clorhdrico y fue llevado a bao
mara por 27 minutos, luego se le agreg
nuevamente 3 gotas de Lugol.
- Al tercer tubo de ensayo, se le adicion 1
ml de agua destilada y 2 gotas del reactivo
de Molisch, y luego se coloc 1 ml de
cido sulfrico concentrado.
- El cuarto tubo, fue llevado a bao mara
por 4 minutos, y luego se le adicion 2 ml
del reactivo de Benedict.
Los mtodos qumicos desarrollados para determinar
carbohidratos, tiene como fin hacer reaccionar a las
molculas con determinados reactivos, para as dar
lugar de a productos coloreados. Los carbohidratos se
hidrolizan en presencia de cidos fuertes. Los
monmeros se deshidratan produciendo un furfural y
derivados hidroximetilfurfural que se pueden con
condensar con compuestos fenlicos, para as dar
como resultado productos coloreados. (Caldern,
2007)

2
3.1.1 Con la muestra de hgado, se obtuvo 0.5 g de
glucgeno. En cambio, la cantidad de glucgeno
que se obtuvo utilizando tanto corazn como
estomag de pollo fue de 0.1 g. Esto se debe, a
que el glucgeno, polisacrido, se almacena
principalmente en el hgado. Por ende, va existir
mayor cantidad de este polisacrido en el hgado,
que en otros rganos.

3.1.2 Cuando se agreg Lugol, al primer tubo se

obtuvo un color vino. Este color se debe a que el
lugol se est combinado con el glucgeno.
El color que se obtiene cuando se combina
polisacridos con el lugol (solucin de I2 y de IK),
se da ya que el I2 ocupa espacios vacos en las
hlices de la cadena de glucosa, formando un
compuesto que altera las propiedades fsicas del
polisacrido, en especial en el caso de la
absorcin lumnica. Por ende, el lugol cuando se
combina con el glucgeno da un color vino.
(Marcaurulla, 2005)
Esta unin del I2 a la cadena es reversible, y por
calentamiento desaparece el color
Fig. 2. Reaccin del lugol con un polisacrido
Fig.3. Reaccin de Molisch
3.1.5 Al cuarto tubo, despus de llevarle a bao mara
y adicionarle reactivo de Benedict. Se obtuvo, un
producto de color amarillo-azul.
Los azucares que presentan OH libre son
reductores, por lo que as son capaces de reducir
iones cpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+).
Estos iones cuprosos en solucin salina, producen
hidrxido cuproso, de color amarillo, que de igual
manera, por calentamiento, este hidrxido se
convierte en xido cuproso de color rojo. (Pilar,
2003) La reaccin con Benedict, cumple con este
principio.

3.1.3 Al segundo tubo, luego de adicionarle cido

clorhdrico y llevarle a bao mara, y agregarle
gotas de Lugol, se obtuvo una mezcla
trasparente.
La unin del I2 la cadena del polisacrido es
reversible, por lo tanto cuando se somete a Fig.4. Reaccin de Cu2+ por azcares reductores
calentamiento la muestra, desaparece el color.
(Macatrulla, 2005).Adems, cuando al
polisacrido se lo llevo a bao mara, este se
descompuso en sus monosacridos, y el reactivo
no tiene efecto, ya que solo se combina con
polisacridos.

3.1.4 Al tercer tubo, posteriormente de adicionarle

agua destilada, gotas del reactivo de Molisch, y
cido sulfrico concentrado, se obtuvo un
precipitado de color violeta.
Las pentosas y hexosas en presencia de un cido
fuerte, se deshidratan produciendo un furfural y
derivados de hidrocimetilfurfural, as los grupos
aldehdos pueden condensarse con un compuesto
fenlico, dando como resultado u producto Fig.5. Resultados en el anlisis de carbohidratos
colorido. En este caso, en la reaccin de Molisch
se utiliza cido sulfrico concentrado y -naftol, 3.2 Lpidos
por lo que con los carbohidratos se produce un
color violeta. (Pilar, 2003) Los lpidos sin mezclas muy complejas de un grupo
muy heterogneo de compuestos que tiene como
caracterstica principal su solubilidad en disolventes
orgnicos y su insolubilidad en disolventes polares.
(Marcaurulla, 2005)

3
3.2.1 En el primer tubo, luego de adicionarle
cloroformo, anhdrido actico y gotas de cido
sulfrico. Se observ, que la mezcla adquiri un
color caf, pero la interfaz en cambio tuvo un
color beige.
Este proceso, est basado en la reaccin qumica
de Lieberman Buchar, que sirve para determinar
cualitativamente el colesterol. El colesterol es
oxidado en un medio fuertemente cido, dando
as origen a un producto coloreado. La intensidad
del color es directamente proporcional a la
concentracin a la concentracin del colesterol.
(Marcaurulla ,2005) Fig.7. Resultados en el anlisis de lpidos
3.3 Protenas

Luego de colocar agua destilada y luego reactivo de

Millon., se obtuvo un precipitado de color blanco. Sin
embargo, de acuerdo con el principio de la reaccin de
Millon con protenas, tendra que haber dado un color
rojo. Esto es debido a que existe una presencia
tirosina, lo que ocasiona este calor. El hecho de que
nos d un color blanco en vez de rojo, se puede deber
a que los reactivos estaban contaminados.

Fig.6. Reaccin de Lieberman Buchar

3.2.2 En el segundo, despus de agrgale hidrxido de

sodio al 15%, y llevarle a bao mara y
adicionarle de agua destilada, se observ que se
obtuvo en el parte inferior un lquido de color
caf, mientras que en la superficie se form una
sustancia solida de color amarillento.
Este es un proceso de saponificacin, y su Fig.8. Reaccin de Millon
reaccin se entre un cido graso, una base y
obtiene como producto la sal de dicho cido y de
dicha base. Estos compuestos tienen la
particularidad de una parte polar y otra apolar en
el cual da como resultado jabn y glicerina.
(Marcaurulla, 2005)

Fig.9. Resultados en el anlisis de protenas

4. Conclusiones

Fig.7. Saponificacin - Es preferible, utilizar un tejido blando para la

ejecucin de esta prctica, ya que no sera muy
eficiente si fuese lo contrario, por el factor tiempo.

4
 - Macerar el tejido, sirvi para homogenizar
este, con el fin identificar los principales
constituyentes y estudiarlos por separado.
- La utilizacin de reactivos permiti tener
resultados cualitativos tanto de los
carbohidratos, protenas y lpidos.
- El hgado es un rgano, que posee una
gran cantidad de lpidos, protenas y
carbohidratos.

5. Referencias

Caldern, F. (2007).Fisiologa del deporte.

Organismo. (pp.589-591).Madrid,
Espaa: Tbar.

Marcaurulla, J. (2005).Bioqumica
Humana.Catalisis y Metabolismo. (pp.
171-180). Barcelona, Espaa: Reverte.

Roca, P. (2003).Bioqumica, tcnicas y

mtodos.Madrid, Espaa: Hlice.