Practica 06

CRECIMIENTO BACTERIANO
CRECIMIENTO MICROBIANO

 OBJETIVO
 Entender la cinética de crecimiento microbiano
determinando la tasa específica de crecimiento y
el tiempo de generación de un cultivo de
Escherichia coli usando la Escala de McFarland
Escala de McFarland
 Escala de McFarland
Tubo Solución acuosa Solución acuosa Número
de H2SO4 al 1% de BaCl2 al 1% aproximado de
(ml) (ml) bacterias, x
106/ml
1 9.9 0.1 300
2 9.8 0.2 600
3 9.7 0.3 900
4 9.6 0.4 1,200
5 9.5 0.5 1,500
6 9.4 0.6 1,800
7 9.3 0.7 2,100
8 9.2 0.8 2,400
9 9.1 0.9 2,700
10 9.0 1.0 3,000
 II. MATERIALES

Cultivo líquido de E. coli de 18 h (10 ml,

exactamente en un tubo de tapa de rosca)

2 Erlenmeyer de 250 ml con 50 ml de caldo

nutritivo estéril (conteniendo una barra
magnética, si la agitación se realizará en
placa magnética).

2 Pipetas de 1 ml
2 Pipetas de 10 ml
2 Tubos con tapa de rosca estériles
1 Gradilla con los tubos (tapa de rosca) de la
Escala de McFarland (por bloque).
 IMPORTANTE

 ROTULAR LOS DOS FRASCOS DE 50mL DE CALDO DE CULTIVOCADA UNO

E.coli 0.05 E. coli 0.2mL

(Fecha) (Fecha)
(Hora) (Hora)
Nombre del grupo Nombre del grupo
 PROCEDIMIENTO
1. Agite en el vortex el cultivo proporcionado de
E. coli y estime el número de bacterias por ml
utilizando la Escala de MacFarland (EM). Anote
su resultado.

Ejm:

Se estima que hay

900 x106células/mL
 Escala de McFarland

Tubo Solución acuosa Solución acuosa Número

de H2SO4 al 1% de BaCl2 al 1% aproximado de
(ml) (ml) bacterias, x
106/ml
1 9.9 0.1 300
2 9.8 0.2 600
3 9.7 0.3 900
4 9.6 0.4 1,200
5 9.5 0.5 1,500
6 9.4 0.6 1,800
7 9.3 0.7 2,100
8 9.2 0.8 2,400
9 9.1 0.9 2,700
10 9.0 1.0 3,000
Inocular 0.05mL Inocular 0.2mL
de E.coli
de E. coli

Incubar Incubar
Paso 4.La incubación se realiza en baño
agitado a 37ºC ó en placas de agitación
magnética a temperatura ambiente.
Paso 5. Hallar
Paso 5. Hallar la concentración
la concentración final de células final de
células según la escala (N: células /mL)

TIEMPO DE INCUBACIÓN 20h

exactamente

LUEGO DE LA INCUBACIÓN
MEZCLAR BIEN

TRANSFIERA
10 mL EN UN TUBO CON TAPA
ROSCA

ESTIME LA CONCENTRACIÓN
CON LA ESCALA
«Muy importante que un representante
del grupo vuelva a las 18h para evaluar»
Siembra 4:00 pm
Mañana a las 10 a.m
¿Cómo hallar el tiempo de generación?“g”

¿Cómo hallar el número de generaciones?“n”

¿Cómo hallar la tasa de crecimiento? “µ”

 TIEMPO DE GENERACIÓN ( g)

g=T
n Ecuación 1

En donde:
g=Tiempo de generación (h o min)
T= Tiempo final (incubación)( h o min)
n=número de generaciones
 NÚMERO DE GENERACIONES (n)

n= log N- log No
N=No2 n
0.301
Ecuación 2 Ecuación 3

En donde:
g=Tiempo de generación (h o min)
No=Número de microorganismos inicial(cel/mL)
N= Número de microorganismos final (cel/mL)
T= Tiempo final (incubación)( h o min)
n=número de generaciones en fase exponencial
Ejercicio 1.
Si se un caldo de cultivo con 300 x 106 células/mL (según la escala de Mc
Farland). Se inocula 0.05mL de este caldo de cultivo en un frasco en 200 mL
de caldo nutritivo. Luego un período de incubación e 20 h se obtienen 3000 x
106 células /mL. Hallar el número de generaciones “n”

DATOS:
Número inicial de células: 300 x 106 células/mL
Inóculo inicial ( EM): 300 x 106 células/mL (Hacer una conversión)
Número final de células 3000 x106células/mL
Tiempo de incubación: 20h
Tiempo de generación (g)= No se conoce
Número de generaciones (n) :No se conoce
Valor escala Mc Farland es 300 x 106cel/mL

“Se agrega al frasco 1 un inóculo de 0.05mL, hacer el cálculo de la

concentración inicial del frasco 1”.

El valor obtenido en la escala de Mc Farland, es importante para

hallar la concentración de células en frasco 1 al inicio ( No)
Número de células de la pipeta= Número de células en el frasco

C1V1=C2V2
C1= Concentración de inicial de bacterias (cel/mL) (pipeta)
C2=Concentración final de bacterias (cel/mL) (en el frasco)
V1= Volumen inicial ( volumen del inóculo) (0.05mL)
V2= Volumen final ( en todo el frasco)=200 mL

( 300 X106 cel/mL)(V1)= C2V2

( 300 X106)(0.05mL)= C2 (200mL)
6
C2=0.075 X 10 cel/mL es el valor de No

“Este es el valor de NO” ( En el frasco)

6
No=0.075 X 10 cel/mL
 Determinar el número de generaciones (n)

Del resultado anterior reemplazar los datos

n= log N- log No
N=No2 n Aplicar logaritmo
Y despejar n 0.301

n= log (3000x 106)- log(0.075x106)=

0.301
n=15.2 generaciones
 Determinación del tiempo de generación

g= T n=15.2 generaciones
T= tiempo de incubación (h)=20h
n g=?
 Para hallar el tiempo de generación, reemplazamos los datos
en la ecuación 1

“ Significa que cada 80

g= 20h= 1.33h = 80min min se duplica la
población inicial de
15 bacterias”
 TASA DE CRECIMIENTO (µ)

Es el cambio del número de células o masa por unidad de

tiempo

µ = ln N- ln No
Integrandoi
t
En donde:
Logaritmo No= Número de microorganismos
inicial(cel/mL)
N= Número de microorganismos final(cel/mL)
T= Tiempo final (incubación)
µ= Tasa de crecimiento ( h-1)
Ejercicio 2.
Si se tienen 300 x 106 células/mL (según la escala de
Mc Farland), luego un período de incubación e 20 h se
obtienen 3000 x 106 células /mL. Hallar la tasa de
crecimiento

µ = ln N- ln No
t
 Reemplazar:

µ = ln ( 3000x106)- ln (0.075x 106)= 0.53 h-1

20h