The Requirements for Growth (Persyaratan Lingkungan hipertonik, atau peningkatan

untuk Pertumbuhan) garam atau gula, menyebabkan plasmolisis

tujuan pembelajaran Halophiles yang ekstrim atau berkewajiban

membutuhkan tekanan osmotik yang tinggi
Golongkan mikroba ke dalam lima kelompok
berdasarkan rentang suhu yang diinginkan. Halophiles fakultatif mentolerir tekanan
osmotik tinggi
Identifikasi bagaimana dan mengapa pH
media kultur dikendalikan.

Jelaskan pentingnya tekanan osmotik

terhadap pertumbuhan mikroba.
Persyaratan kimia

Karbon
Pertumbuhan Mikroba
Sulfur
Peningkatan jumlah sel, bukan ukuran sel
Dalam asam amino, tiamin, dan biotin
Populasi
Sebagian besar bakteri membusuk protein
Koloni
Beberapa bakteri menggunakan SO42– atau
H2S

Persyaratan untuk Pertumbuhan

Persyaratan fisik Fosfor

Suhu Dalam DNA, RNA, ATP, dan membran

Suhu pertumbuhan minimum PO43– adalah sumber fosfor

Suhu pertumbuhan optimal

Suhu pertumbuhan maksimum Nitrogen

Dalam asam amino dan protein

Psikrotrof Sebagian besar bakteri membusuk protein

Tumbuh antara 0 ° C dan 20–30 ° C Beberapa bakteri menggunakan NH4 + atau

NO3–
Penyebab pembusukan makanan
Beberapa bakteri menggunakan N2 dalam
fiksasi nitrogen
pH

Kebanyakan bakteri tumbuh antara pH 6.5

Trace elements
dan 7.5
Unsur anorganik dibutuhkan dalam jumlah
Jamur dan ragi tumbuh antara pH 5 dan 6
sedikit
Acidophiles tumbuh di lingkungan asam
Biasanya sebagai kofaktor enzim

Tekanan osmotik
Oksigen Inokulum: Pengantar mikroba menjadi
medium
Gas beracun
Kultur: Mikroba tumbuh di / di media kultur
Oksigen singlet: O2 didorong ke keadaan
energi yang lebih tinggi

Radikal bebas superoksida: O2– 1. Agar

Anion peroksida: O22– Polisakarida kompleks

Digunakan sebagai agen pemadatan untuk

media kultur di piring Petri, miring, dan dalam
Hidroksil radikal (OH •)
Umumnya tidak dimetabolisme oleh mikroba

Liquefies pada 100 ° C

Faktor pertumbuhan organik
Memadatkan pada ~ 40 ° C
Senyawa organik diperoleh dari lingkungan

Vitamin, asam amino, purin, dan pirimidin

2. Media yang ditentukan secara kimia:

komposisi kimia yang tepat diketahui

Biofilm

Komunitas mikroba
3. Media kompleks:
Bentuk lendir atau hidrogel
Ekstrak dan mencerna ragi, daging, atau
Bakteri tertarik oleh bahan kimia melalui
tanaman
quorum sensing
Nutrient broth dan Nutrien Agar
Bagikan nutrisi
Metode Kultur Anaerobik
Dilindung dari faktor-faktor berbahaya

1. Reducing media
Pasien dengan kateter yang tinggal di
dalam menerima heparin yang terkontaminasi Mengurangi media

Jumlah bakteri di heparin yang Berisi bahan kimia (tioglikolat atau oxyrase)
terkontaminasi terlalu rendah untuk yang menggabungkan O2
menyebabkan infeksi
Dipanaskan untuk mengusir O2
84-421 hari setelah terpapar, pasien
mengembangkan infeksi
Capnophiles

Mikroba yang membutuhkan kondisi CO2

Media Kultur
tinggi
Media kultur: Nutrisi disiapkan untuk
Paket CO2
pertumbuhan mikroba
Candle jar
Steril: Tidak ada mikroba hidup
Biosafety Levels
Tidak ada tindakan pencegahan khusus
Jas lab, sarung tangan, pelindung mata
Biosafety cabinets untuk mencegah transmisi
udara
Disegel, tekanan negatif
Koloni adalah populasi sel yang timbul dari sel
tunggal atau spora atau dari sekelompok sel
yang menempel
Koloni sering disebut unit pembentuk koloni
(CFU)
Metode streak plate digunakan untuk
mengisolasi kultur murni

Udara buangan disaring dua kali

1. selektive media

Menekan mikroba yang tidak

diinginkan dan mendorong mikroba yang
Melestarikan Kultur Bakterial
diinginkan
Memegang dalam: -50 ° hingga -95 ° C

Lyophilization (freeze drying): Frozen (-54 °

2. Differential media
hingga -72 ° C) dan mengalami dehidrasi
mempermudah untuk membedakan dalam ruang hampa
koloni dari mikroba yang berbeda.

Reproduksi dalam Prokariota

3. Kultur pengayaan
Pembelahan biner
Mendorong pertumbuhan mikroba yang
Budding
diinginkan
Koniospora (actinomycetes)
Asumsikan sampel tanah mengandung
beberapa bakteri penghasil fenol dan ribuan Fragmentasi filamen
bakteri lainnya

Inokulasi media kultur yang mengandung

Mengukur Pertumbuhan Mikroba
fenol dengan tanah, dan diinkubasi

Mentransfer 1 ml ke labu lain dari medium

fenol, dan menetaskan Metode Langsung
Mentransfer 1 ml ke labu lain dari medium Jumlah lempeng
fenol, dan menetaskan
Penyaringan
Hanya bakteri fenol-metabolisme yang akan
tumbuh MPN

Hitungan mikroskopis langsung

Memperoleh kultur murni

Kultur murni hanya mengandung satu spesies Metode Tidak Langsung

atau strain Kekeruhan
Aktivitas metabolik

Berat kering

Terminologi Kontrol Mikroba

Sepsis mengacu pada kontaminasi mikroba

Asepsis adalah tidak adanya kontaminasi yang

signifikan

Teknik Asptik surgery mencegah kontaminasi

mikroba dari luka

Sterilisasi: Menghapus semua kehidupan

mikroba

Sterilisasi komersial: Membunuh C. botulinum

endospora

Disinfeksi: Menghapus patogen

Antisepsis: Menghilangkan patogen dari

jaringan hidup

Degerming: Menghilangkan mikroba dari area

terbatas

Sanitasi: Menurunkan jumlah mikroba pada

peralatan makan

Biocide / germicide: Membunuh mikroba

Bakteriostasis: Menghambat, tidak

membunuh, mikroba

Efektivitas Perawatan

Tergantung pada:

Jumlah mikroba

Lingkungan (bahan organik, suhu, biofilm)

Waktu pemaparan

Karakteristik mikroba
 Panas kering

Tindakan Agen Kontrol Mikroba Menyala

Perubahan permeabilitas membran Pembakaran

Kerusakan pada protein Sterilisasi udara panas

Kerusakan asam nukleat Hot air 170’c 2hr

Autoclave 121’c 15min

Metode Fisik Kontrol Mikroba

Pemanasan (thermal) Filtrasi

Titik kematian termal (TDP): Suhu terendah di HEPA menghilangkan mikroba> 0,3 µm
mana semua sel dalam budaya terbunuh
Filtrasi membran menghilangkan mikroba>
dalam 10 menit
0,22 μm
Waktu kematian termal (TDT): Waktu di mana
semua sel dalam suatu budaya dibunuh
Metode Fisik Kontrol Mikroba

Suhu rendah menghambat pertumbuhan

Sterilisasi basah
mikroba
Pemanasan basah mengubah sifat protein
Pendinginan
Autoclave: Uap di bawah tekanan
Sangat beku

Lyophilization
Pasteurisasi
2. Tekanan tinggi mengubah sifat protein
Mengurangi organisme dan patogen
3. Desiccation mencegah metabolisme
pembusuk
4. Tekanan osmotik menyebabkan plasmolisis
Perawatan yang setara

63 ° C selama 30 menit
Radiasi
Suhu tinggi waktu singkat: 72 ° C selama 15
detik Radiasi pengion (sinar X, sinar gamma, berkas
elektron)
Suhu ultra-tinggi: 140 ° C selama <1 detik
Mengionisasi air untuk melepaskan OH
Organisme termoduris bertahan hidup
Merusak DNA

Radiasi nonionisasi (UV, 260 nm)

Merusak DNA

Gelombang mikro membunuh dengan panas;

tidak terutama antimikroba
Sterilisasi Kering

Membunuh karena oksidasi

Metode Kimia Kontrol Mikroba Bleach: Asam hipoklorit (HOCl)

Prinsip Disinfeksi Efektif Chloramine: Chlorine + amonia

Konsentrasi desinfektan Agen pengoksidasi

Zat organik

pH alkohol

Waktu Etanol, isopropanol

Merasa protein, melarutkan lemak

Gunakan Uji Pengenceran Membutuhkan air

Cincin logam yang dicelupkan ke dalam

bakteri uji dikeringkan
Logam Berat
Kultur kering ditempatkan dalam desinfektan
.Ag, Hg, dan Cu
selama 10 menit pada 20 ° C
.Nitrat perak dapat digunakan untuk
Cincin ditransfer ke media kultur untuk
mencegah opropalmum neonatorum gonore
menentukan apakah bakteri selamat dari
pengobatan .Silver sulfadiazine digunakan sebagai krim
topikal pada luka bakar

.Sulfat tembaga adalah algicide

Fenol dan fenolik
Aksi oligodinamik
Mengganggu membran plasma
Protein denatur

Bisphenol
Pengawet Makanan Kimia
Hexacholorphene, triclosan
Asam organik
Mengganggu membran plasma
Menghambat metabolisme
Biguanides
Asam sorbat, asam benzoat, dan kalsium
Chlorhexidine
propionat
Mengganggu membran plasma
Kontrol cetakan dan bakteri dalam makanan
Halogen dan kosmetik

Yodium Nitrit mencegah perkecambahan endospora

Tincture: Dalam alkohol berair Antibiotik

Iodofor: Dalam molekul organik Nisin dan natamycin mencegah pembusukan

keju
Mengubah sintesis dan membran protein

Aldehid
Klorin
Inaktivasi protein dengan hubungan silang
dengan kelompok fungsional (–NH2, –OH, –
COOH, –SH)

Gunakan: Peralatan medis

Glutaraldehid, formaldehid, dan ortho-

phthalaldehyde

Sterilan gas

Protein denatur

Gunakan: Bahan yang peka panas

Etilena oksida

Plasma

Radikal bebas menghancurkan mikroba

Gunakan: Instrumen tubular

Cairan Superkritis

CO2 dengan sifat gas dan cair

Gunakan: Implan medis

Peroxygens

Agen pengoksidasi

Gunakan: Permukaan yang terkontaminasi

O3, H2O2, asam perasetat


Deteksi Patogen oleh Metode Biokimia
Aktivitas enzimatik unik untuk menargetkan
mikroba
Analisis Biolipid Tanda Tangan:
Deteksi biolipida unik dengan kromatografi
gas, spektrometri massa dan metode analisis
organik canggih lainnya
Ekstrak dan bersihkan dari sel
Menganalisa
3. Penanda biokimia lainnya yang unik untuk
patogen spesifik atau kelas patogen.
Deteksi Mikroskopis dan Pencitraan Patogen
Masih banyak digunakan untuk parasit dan
bakteri
Pewarnaan spesifik dan pencitraan canggih
untuk membedakan target dari organisme
non-target
Mikroskopi kontras interferensi diferensial
Mikroskop laser confocal
Membedakan infeksi dari organisme non-
infeksi
Gabungkan dengan infektivitas, viabilitas atau
tes aktivitas
Mengatasi keterbatasan ukuran sampel
karena adanya partikel non-target
Flow cytometry dan teknik pencitraan
lanjutan lainnya
Metode pencitraan lanjutan membutuhkan
perangkat keras yang mahal
Deteksi Mikroskopis Patogen
Masih Banyak Digunakan dalam Mikrobiologi
Diagnostik Klinis
Metode yang disukai untuk parasit
Contoh: ookista Cryptosporidium parvum,
~ 5 um diam.
Asam noda cepat persiapan feses
Analisis Mikroskopik Bakteri Neon In Situ
Hibridisasi – IKAN
Bakteri dari kelompok sasaran berwarna
merah
Bakteri lainnya berwarna biru (warna buatan)
IKAN: Bakteri Berwarna DAPI diinkubasi
dengan INT (Tetrazolium Salt)
Gambar yang ditingkatkan dengan warna
buatan.
Biru: DAPI stain
Merah: INT butir; menunjukkan bakteri aktif
pernapasan.
TEKNIK BIOLOGI MOLEKULER
Memanfaatkan DNA, RNA, dan enzim
yang berinteraksi dengan asam nukleat untuk
mengidentifikasi, memahami,
mengkarakterisasi dan mengkuantifikasi
struktur biologis, proses, fenomena dan
aktivitas pada suatu molekul.
Patologi dan Diagnostik Molekuler
PENYAKIT INHERITED (GENETICS)
Cystic fibrosis
Anemia sel sabit
Predisposisi kanker
PENYAKIT MENULAR
Bakteri
Virus
Jamur
ASAM NUKLEAT
Materi genetik dari semua organisme yang
dikenal
DNA: asam deoksiribonukleat
RNA: asam ribonukleat (misalnya, beberapa
virus)
Terdiri dari urutan nukleotida yang terhubung
secara kimiawi
Basa nitrogen
Pentose- 5-carbon sugar (ribose atau
deoxyribose)
Kelompok fosfat
Urutan basis memberikan informasi genetik
Pasangan basis
Ikatan hidrogen adalah obligasi yang relatif
lemah dibandingkan dengan ikatan kovalen
Ikatan hidrogen dapat terbentuk antara
pirimidin dan purin
Aturan berpasangan dasar Watson-Crick
AT
GC
Komplementaritas
Dalam helix ganda DNA, purin dan pirimidin
saling berhadapan
Dua rantai polinukleotida pada helix ganda
dihubungkan oleh ikatan hidrogen antara basa
Aturan berpasangan dasar Watson-Crick
AT
GC
Pasangan basa GC (bps) memiliki lebih banyak
energi daripada AT bps
Karena satu untai DNA saling melengkapi,
materi genetik dapat direproduksi secara
akurat; setiap helai berfungsi sebagai
template untuk sintesis yang lain
Enzim restriksi

Endonuklease spesifik

Kenali urutan pendek spesifik DNA dan

pisahkan DNA pada atau dekat rangkaian
pengenalan

Pengenalan sekuens: biasanya 4 atau 6 basa

tetapi ada beberapa yang 5, 8, atau lebih
panjang

Pengenalan sekuens adalah palindrom

Palindrom: urutan DNA yang sama ketika satu

untai dibaca dari kiri ke kanan atau untaian
lainnya dibaca dari kanan ke kiri - terdiri dari
pengulangan terbalik yang berdekatan
Pertumbuhan Mikroba

1. Peningkatan jumlah sel, bukan ukuran sel

2. Satu sel menjadi koloni jutaan sel

3. Kontrol pertumbuhan penting untuk

pengendalian infeksi

pertumbuhan organisme industri dan biotek

Faktor Mengatur Pertumbuhan

1. Nutrisi Kelompok kuno yang terkait ... ..

2. Kondisi lingkungan: suhu, pH, tekanan Lithoautotroph

osmotik
Baik sinar matahari maupun organik tidak
3. Waktu generasi digunakan, melainkan bergantung
sepenuhnya pada anorganik

Persyaratan Kimia Kategori Nutrisi

1. # 1 = air!

2. Elemen Saprobe - hidup di materi organik organisme

mati
C (50% dari berat kering sel)
Parasit - hidup di materi organik dari inang
HONPS
hidup = patogen
Trace elements

3. Organik
Faktor Lingkungan Mempengaruhi
Sumber energi (glukosa) Pertumbuhan

Vitamin (koenzim) Suhu, O2, pH, Tekanan Osmotik

Beberapa asam amino, purin dan pirimidin Lainnya: radiasi, tekanan atmosfer

Suhu Optimal
Kategori Nutrisi
Psikrofil: suka dingin
1. Sumber karbon
Mesophiles: suhu-mencintai moderat
CO2 = autotrof
Thermophiles: mencintai panas
organik = heterotrof
Masing-masing memiliki suhu pertumbuhan
minimum 15, optimum 35, dan maksimum 45

2. Sumber energi Suhu pertumbuhan optimal biasanya dekat

bagian atas kisaran pertumbuhan
sinar matahari = phototroph
Kematian di atas suhu maksimum. berasal dari
organik = chemotroph inaktivasi enzim

Mesophiles kelompok organisme yang paling

umum

A "Chemoheterotroph" akan ... .. 40ºF (5 ° C) memperlambat atau

menghentikan pertumbuhan sebagian besar
Turunkan karbon dan energi dari senyawa mikroba
organik

Menurunkan energi dari senyawa organik dan

sumber karbon dari senyawa anorganik Persyaratan Oksigen
Aerob obligat - membutuhkan O2

Anaerob fakultatif - dapat menggunakan O2

tetapi juga tumbuh tanpa itu

Anaerob obligat - mati di hadapan O2

Fase Pertumbuhan
pH

Kebanyakan bakteri tumbuh antara pH 6.5

dan 7.5
Asam (di bawah pH 4) pengawet yang baik
untuk acar, sauerkraut, keju
Acidophiles dapat hidup pada pH rendah
Banyak bakteri dan virus bertahan hidup
dengan pH rendah perut untuk menginfeksi
usus
Helicobacter pylori hidup di lambung di
bawah lapisan lendir
Fase lag - membuat enzim baru sebagai
respons terhadap medium baru
Fase log - pertumbuhan eksponensial
- Diinginkan untuk produksi produk
- Sebagian besar sensitif terhadap obat-
obatan dan radiasi selama periode ini
Fase diam –
nutrisi menjadi pembatas atau produk limbah
menjadi beracun

tingkat kematian = tingkat pembagian

Mengukur Pertumbuhan Bakteri Fase kematian - kematian melebihi
pembagian
Bakteri membagi dengan pembelahan biner

Sarana alternatif
Mengukur Pertumbuhan
Budding
Metode langsung - hitung sel-sel individual
Koniospora (bakteri filament)
Metode Tidak Langsung - mengukur efek
Fragmentasi
pertumbuhan bakteri

Fig 71.7
Waktu Generasi
Turbidi

Aktivitas metabolisme
Waktu yang diperlukan untuk sel untuk
Berat kering
membagi / untuk populasi menjadi dua kali
lipat

Rata-rata untuk bakteri adalah 1-3 jam

Waktu generasi E. coli = 20 menit

20 generasi (7 jam), 1 sel menjadi 1 juta sel!

 Sterilisasi
Semua mikroba termasuk spora bakteri akan
terbunuh.
Dapat dilakukan dengan menggunakan
pemanasan uap (autoklav) atau dengan panas
kering.
Dapat juga dilakukan dengan penjenuhan
dengan glutaraldehid atau formaldehid
selama 10 jam.

b. Desinfeksi tingkat tinggi

Semua mikroba, sebagian dari spora bakteri
terbunuh.
Dapat dilakukan dengan pendidihan selama
20 menit atau dengan penjenuhan dengan
jumlah besar disinfektan selama 30 menit
misalnya dengan mengunakan glutaraldehid
atau H2O2

c. Desinfeksi tingkat rendah

Akan menghilangkan jumlah mikroba sehingga
peralatan atau permukaan badan aman untuk
dipegang. Desinfeksi ini dapat dilakukan
dengan beberapa macam
disinfektan(Signaterdadie, 2009)
Sterilisasi
Semua mikroba termasuk spora bakteri akan
terbunuh.
Dapat dilakukan dengan menggunakan
pemanasan uap (autoklav) atau dengan panas
kering.
Dapat juga dilakukan dengan penjenuhan
dengan glutaraldehid atau formaldehid
selama 10 jam.

b. Desinfeksi tingkat tinggi

Semua mikroba, sebagian dari spora bakteri
terbunuh.
Dapat dilakukan dengan pendidihan selama
20 menit atau dengan penjenuhan dengan
jumlah besar disinfektan selama 30 menit
misalnya dengan mengunakan glutaraldehid
atau H2O2

c. Desinfeksi tingkat rendah

Akan menghilangkan jumlah mikroba sehingga
peralatan atau permukaan badan aman untuk
dipegang. Desinfeksi ini dapat dilakukan
dengan beberapa macam
disinfektan(Signaterdadie, 2009)