Professional Documents
Culture Documents
3 Eloadas
3 Eloadas
III. Előadás
4. térbeli felbontás
milyen részletességgel látjuk
a molekula szerkezetét
akár 1.0 Å !!
5. időbeli felbontás
mennyire képes az adott
módszer követni és
detektálni a szerkezet
időbeli változásait
-15
akár 10 s !!
Szerkezetvizsgáló módszerek csoportosítása
4. térbeli felbontás
atomi felbontású módszerek:
5. időbeli felbontás
nagyfelbontású módszerek:
1. Natív gélelektroforézis
a klasszikus SDS-PAGE technikával
1. Natív gélelektroforézis
Szimultán jelen lévő, interkonvertáló konformerek detektálásának sikere a
konformációváltozás sebességétől és az elektroforetikus szeparáció
sebességétől egyaránt függ
Hagyományos biokémiai, molekuláris biológiai és egyéb
alacsony felbontású kísérleti módszerek
Az elektroforetikus vándorlás
irányára merőleges gradiens
alkalmazása
- denaturáló ágens (karbamid) –
gombolyodás és letekeredés
kinetikája
- akrilamid – mobilitás és akrilamid
koncentráció összefüggés
- pH – titrációs görbe
Gombolyodás kinetika:
az átalakulás sebességének
hatása az karbamid
gradiens jelenlétében
Hagyományos biokémiai, molekuláris biológiai és egyéb
alacsony felbontású kísérleti módszerek
előnyök:
- kevés mintát igényel
- érzékeny módszer
- kísérleti körülmények optimalizálása után screeningre alkalmas
- funkcionális és fizikai tesztek antitest jelenlétében
hátrányok:
- bonyolult kísérleti körülmények
- gyakran több antitest alkalmazása esetén nyerhető csak egyértelmű válasz
- immobilizált antigén konformációváltozást szenvedhet, denaturálódhat
Hagyományos biokémiai, molekuláris biológiai és egyéb
alacsony felbontású kísérleti módszerek
4. Hidrodinamikai vizsgálatok