Autoimmunity, immune functions and n-3 fatty acids

Animal and human studies

The effects of dietary n-3 fatty acids on ex vivo lymphocyte functions, as judged by
mitogen stimulation, have been consistent in both human and animal studies showing suppressed
responses (Calder, 1996). Kelley et al. (1988) found that an n-3 fatty acid-rich diet (76 g fish
oilkg) decreased rabbit peripheral-blood lymphocyte mitogenic responses to Con A,
phytohaemagglutinin (PHA) and pokeweed (Phytolacca americana) mitogen ex vivo. Similarly,
in rats fed on a high-fish-oil diet Yaqoob et al. (1994) reported decreased proliferative responses
to Con A for spleen and lymph node lymphocytes. In mice fed on a high-fish-oil diet spleen
lymphocytes showed decreased responses to Con A (Yaqoob & Calder, 1995).
In both fish oil-fed and fish oil plus highor low-dose oral ovalbumin (ova) tolerance
induction, ova immunized mice exhibited markedly reduced spleen lymphocyte responses to ova
ex vivo and, in ova-fed animals only, reduced ova-specific levels of serum IgG1, IgG2, and
IgG2b (LS Harbige and BAC Fisher, unpublished results). In contrast, Morrissey et al. (1990)
observed increased Con A -induced proliferation with a low-fish-oil diet (50 gkg) plus additional
vitamin E (150 mgkg). This suggests that low-dose-fish-oil feeding may have different effects on
proliferative responses, or that vitamin E may have an effect on mitogen-induced
lymphoproliferation independent of fish oil n-3 fatty acids.

Efek dari diet n-3 asam lemak pada fungsi limfosit ex vivo, sebagaimana dinilai oleh stimulasi
mitogen, telah konsisten dalam penelitian manusia dan hewan yang menunjukkan respons tertekan
(Calder, 1996). Kelley dkk. (1988) menemukan bahwa diet kaya asam n-3 (76 g minyak ikan)
menurunkan respons mitogenik kelenjar limfosit kelinci ke mitokondria Con A, phytohaemagglutinin
(PHA) dan pokeweed (Phytolacca americana) mitogen ex vivo. Demikian pula, pada tikus yang diberi diet
ikan tinggi ikan Yaqoob dkk. (1994) melaporkan penurunan respons proliferatif terhadap Con A untuk
limfosit limpa dan kelenjar getah bening. Pada tikus yang diberi makanan tinggi minyak ikan limfosit
limpa menunjukkan penurunan respons terhadap Con A (Yaqoob & Calder, 1995).
Pada kedua minyak ikan dan minyak ikan ditambah induksi toleransi oral ovalbumin dosis
rendah (low ovalbumin ova), tikus yang diimunisasi ova menunjukkan respon limfosit limpa yang sangat
nyata terhadap ova ex vivo dan, pada hewan yang diberi pakan ova, mengurangi tingkat spesifik ova
Serum IgG1, IgG2, dan IgG2b (LS Harbige dan BAC Fisher, hasil yang tidak dipublikasikan). Sebaliknya,
Morrissey dkk. (1990) mengamati peningkatan proliferasi Con A -induced dengan diet minyak ikan
rendah (50 gkg) ditambah tambahan vitamin E (150 mgkg). Ini menunjukkan bahwa pemberian minyak
ikan dosis rendah mungkin memiliki efek yang berbeda pada respons proliferatif, atau bahwa vitamin E
mungkin berpengaruh pada limfoproliferasi yang disebabkan oleh mitogen yang terlepas dari asam
lemak n-3 minyak ikan
 Interestingly, Kelley et al. (1988) observed enhanced lymphocyte responses in rabbits fed
on a-linolenic acid-rich linseed oil. However, this response may reflect evolutionary adaptation
of rabbits to an a-linolenic acid-rich herbivorous diet, and highlights the importance of species
differences. All the previously described ex vivo findings may not reflect fully those in vivo. For
example, there appear to be site-specific differences in lymphocyte responses to dietary fatty
acids (Yaqoob et al. 1994), which appear to be dependent on the local adipose-tissue lipid
composition (Pond, 1996). It is interesting to note that adipose tissue around lymph nodes
preferentially incorporates or selectively retains polyunsaturated fatty acids (Pond, 1996). This
suggests that lymphoid cells inside lymph nodes can be locally supplied with the appropriate
fatty acids for membrane and eicosanoid synthesis.
Several investigators have found reduced major histocompatibility complex class I1
molecule expression in rodents fed on fish oil (Huang et al. 1992; Sherrington et al. 1995),
indicating a decreased ability of antigen-presenting cells to present antigen to T lymphocytes.
Consistent with the previous findings, Fujikawa et al. (1992) found splenocytes acting as
antigen-presenting cells from mice fed on the n-3 fatty acid eicosapentaenoic acid had a reduced
ability to present antigen to T-cell clones. Experimental data on the effects of feeding n-3 fatty
acids on macrophage phagocytic functions and the production of H202, superoxide and NO have
been inconsistent (Calder, 1996). There are also inconsistent reports of the effects of feeding fish
oil to rodents on tumour necrosis factor and IL-1 production by peritoneal macrophages (Calder,
1996). In rats fed on fish oil (Leitch et al. 1984) or pure ethyl ester of eicosapentaenoic acid
(Terano et al. 1984), ex vivo peritoneal leucocytes produced less pro-inflammatory leukotriene
(LT) B4 and more of the less-potent LTB5.

Menariknya, Kelley dkk. (1988) mengamati peningkatan respons limfosit pada kelinci yang diberi
minyak biji rami yang kaya asam linolenat. Namun, respons ini mungkin mencerminkan adaptasi
evolusioner kelinci terhadap diet herbivora kaya asam linolenat, dan menyoroti pentingnya perbedaan
spesies. Semua temuan ex vivo yang sebelumnya dijelaskan mungkin tidak mencerminkan sepenuhnya
in vivo. Sebagai contoh, tampaknya ada perbedaan spesifik spesifik dalam respon limfosit terhadap
asam lemak makanan (Yaqoob et al 1994), yang tampaknya bergantung pada komposisi lipid jaringan
adiposa lokal (Pond, 1996). Menarik untuk dicatat bahwa jaringan adiposa di sekitar kelenjar getah
bening secara istimewa menggabungkan atau secara selektif mempertahankan asam lemak tak jenuh
ganda (Pond, 1996). Ini menunjukkan bahwa sel limfoid di dalam kelenjar getah bening dapat dipasok
secara lokal dengan asam lemak yang sesuai untuk sintesis membran dan eicosanoid.
Beberapa peneliti telah menemukan penurunan ekspresi molekul kelas I1 kompleksitas
histokompatibilitas utama pada hewan pengerat yang diberi minyak ikan (Huang et al 1992: Sherrington
et al 1995)., Menunjukkan kemampuan antigen yang menurun untuk menghadirkan antigen pada
limfosit T. Sesuai dengan temuan sebelumnya, Fujikawa dkk. (1992) menemukan bahwa splenosit
berperan sebagai antigen-presenting cells dari tikus yang diberi asam nicos asam eicosapentaenoic n-3
memiliki kemampuan mengurangi antigen terhadap klon sel T. Data eksperimental mengenai efek
pemberian asam lemak n-3 pada fungsi fagosit macrophage dan produksi H202, superoksida dan NO
tidak konsisten (Calder, 1996). Ada juga laporan yang tidak konsisten mengenai efek pemberian minyak
ikan kepada hewan pengerat terhadap faktor nekrosis tumor dan produksi IL-1 oleh makrofag peritoneal
(Calder, 1996). Pada tikus yang diberi minyak ikan (Leitch et al 1984) atau etil ester murni asam
eicosapentaenoic (Terano et al 1984), leukosit peritoneal ex vivo menghasilkan leukotrien pro-inflamasi
(LT) B4 lebih sedikit dan lebih banyak LTB5 yang kurang poten.

Hughes et al. (1995) found that fish oil supplementation in human subjects reduced
expression of major histocompatibility complex class I1 DR molecules on peripheral-blood
monocytes which suggests antigen presentation may be affected. Fish oil supplementation for 24
weeks reduced the relative percentage of peripheral blood CD4+ and increased the percentage of
CD8+ cells in man (Meydani et al. 1993). In non-human primates fed on diets containing 1.3 and
3.3 % energy as eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid for 14 weeks increased
peripheral-blood lymphocyte responses to Con A and PHA have been reported (Wu et al. 1996).
These investigators also found that the plasma vitamin E level was maintained, and suggested
that in the presence of adequate vitamin E concentrations lymphocyte mitogenic proliferative
responses are enhanced. Again this indicates vitamin E may have independent effects on immune
function and that the balance of n-3 fatty acids and vitamin E is important. The effects of fish oil
supplementation have been extensively studied on human peripheral-blood mononuclear cell
cytokine production ex vivo, particularly IL-la, IL-lp, IL-2, IL-6, and tumour necrosis factor-a,
showing decreased production of these cytokines (Calder, 1996).
Administration of 12-0- tetradecanoylphorbol-13-acetate induces tumour necrosis
factor-a gene expression in human HL-60 cells through arachidonic acid metabolites acting as
regulating messengers (Horiguchi et al. 1989). It is well known that on feeding fish oil the n-3
fatty acid, eicosapentaenoic acid, displaces arachidonic acid in membrane phospholipids. It is
possible, therefore, that the effects of n-3 fatty acids on some proinflammatory cytokines may be
indirect, and may indicate the direct importance of arachidonic acid metabolism in their
regulation. The delayed-type hypersensitivity response, which is an in vivo measure of cell-
mediated immunity, was reported by Meydani et al. (1993) to be reduced in response to several
recall antigens, including tetanus toxoid and Mycobacterium tuberculosis, in subjects
supplemented daily with 1.23 g eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid. Investigators
have shown that feeding fish oil induces a decrease in pro-inflammatory neutrophil LTB4
production and an increase in the less potent pro-inflammatory lipidmediator LTB5 in human
subjects with inflammatory diseases (Schmidt & Dyerberg, 1989).
 Hughes dkk. (1995) menemukan bahwa suplementasi minyak ikan pada subyek manusia
mengurangi ekspresi molekul I1 DR kelas kompleks histokompatibilitas utama pada monosit perifer-
darah yang menunjukkan bahwa presentasi antigen mungkin akan terpengaruh. Suplementasi minyak
ikan selama 24 minggu mengurangi persentase relatif jumlah CD4 perifer dan meningkatkan persentase
sel CD8 + pada manusia (Meydani et al., 1993). Pada primata non-manusia diberi makanan yang
mengandung energi 1,3 dan 3,3% karena asam eicosapentaenoic dan asam docosahexaenoic selama 14
minggu meningkatkan respons limfosit perifer terhadap Con A dan PHA telah dilaporkan (Wu et al.,
1996). Para peneliti ini juga menemukan bahwa tingkat vitamin E plasma dipertahankan, dan
menyarankan bahwa dengan adanya konsentrasi vitamin E yang komplit, tanggapan proliferasi limfosit
meningkat. Sekali lagi ini menunjukkan vitamin E mungkin memiliki efek independen pada fungsi
kekebalan tubuh dan bahwa keseimbangan asam lemak n-3 dan vitamin E penting. Efek dari minyak ikan
Suplementasi telah dipelajari secara ekstensif pada produksi sitokin sel mononuklear manusia perifer,
terutama IL-la, IL-lp, IL-2, IL-6, dan faktor nekrosis tumor-a, yang menunjukkan penurunan produksi
sitokin ini (Calder, 1996).
Administrasi 12-0-tetradecanoylphorbol-13-asetat menginduksi faktor nekrosis tumor - ekspresi
gen pada sel HL-60 manusia melalui metabolit asam arakidonat yang bertindak sebagai pembawa pesan
pengatur (Horiguchi et al 1989). Telah diketahui dengan baik bahwa pada memberi makan minyak ikan
asam lemak n-3, asam eicosapentaenoic, menggantikan asam arakidonat pada membran fosfolipid. Oleh
karena itu, ada kemungkinan bahwa efek asam lemak n-3 pada beberapa sitokin proinflamasi mungkin
tidak langsung, dan dapat mengindikasikan pentingnya asam arakidonat langsung dalam regulasi
mereka. Respons hipersensitivitas tipe tertunda, yang merupakan ukuran in vivo imunitas yang
dimediasi sel, dilaporkan oleh Meydani et al. (1993) dikurangi sebagai respons terhadap beberapa
antigen recall, termasuk toksoid tetanus dan Mycobacterium tuberculosis, pada subjek yang diberi
suplemen 1,23 g eicosapentaenoic acid dan docosahexaenoic acid. Penyelidik telah menunjukkan bahwa
memberi makan minyak ikan menginduksi penurunan produksi LTB4 neutrofil pro-inflamasi dan
peningkatan lipidmediator LTB5 pro-inflamasi yang kurang poten pada subyek manusia dengan penyakit
inflamasi (Schmidt & Dyerberg, 1989).
Autoimmunity, Immune functions and n-6 fatty acids

Human studies
The effects of n-6 fatty acids on immune functions, particularly the desaturated and
elongated metabolites of linoleic acid, have not been studied as much as the n-3 fatty acids in
human subjects. Supplementation with y-linolenic acid-rich borage oil (Borago oficinalis) did
not affect the lymphoproliferative response to PHA and anti-CD3, but did increase the
production of mitogen-stimulated peripheral-blood mononuclear cell TGWl and decreased the
production of IL-4 and IL- 10 (Harbige & Fisher, 1997).
These findings are consistent with the effects of prostaglandin (PG) El and PGE2 on IL-4
and IL-10 in human T-cell clones (Harbige et al. 1997~)H. owever, the effects of PGE on T-cell
clones reported by Harbige et al. (1997~)a re not consistent with previous findings obtained
using murine and human T-cell clones (Betz & Fox, 1991; Watanabe et al. 1994), possibly due
to differences in clones, mode of activation and eicosanoid concentrations used. Membrane lipid-
oxidation products have been shown to increase TGWl expression and production (Leonarduzzi
et al. 1997). It is possible, therefore, that an increase in membrane unsaturation, leading to an
increased peroxidizability index, by feeding y-linolenic acid-rich borage oil might lead to
increased production of TGW1. However, we found no change in plasma malondialdehyde
concentration, a marker of peroxidation, in a y-linolenic acid-rich borage oil supplementation
study in human subjects (LS Harbige, F Kelley, C Dunster and K Ghebremeskel, unpublished
results).

Efek dari asam lemak n-6 pada fungsi kekebalan tubuh, terutama metabolit asam linoleat yang
desaturasi dan memanjang, belum dipelajari sebanyak asam lemak n-3 pada subyek manusia.
Suplementasi dengan minyak borage yang kaya asam linolenat (Borago oficinalis) tidak mempengaruhi
respons limfoproliferatif terhadap PHA dan anti-CD3, namun meningkatkan produksi sel mononuklear
darah terdefinisi-mitogen dan menurunkan produksi IL-4 Dan IL-10 (Harbige & Fisher, 1997).
Temuan ini konsisten dengan efek prostaglandin (PG) El dan PGE2 pada IL-4 dan IL-10 pada klon
sel T manusia (Harbige et al 1997 ~) H. Bagaimanapun, efek PGE pada klon sel-T dilaporkan oleh Harbige
dkk. (1997 ~) tidak konsisten dengan temuan sebelumnya yang diperoleh dengan menggunakan klon sel-
sel murine dan manusia (Betz & Fox, 1991; Watanabe et al 1994), mungkin karena perbedaan klon, cara
aktivasi dan konsentrasi eikosanoid yang digunakan. Produk oksidasi lipid membran telah terbukti
meningkatkan ekspresi dan produksi TGWl (Leonarduzzi et al 1997). Oleh karena itu, adalah mungkin,
bahwa peningkatan ketidakjenuhan membran, yang mengarah ke indeks peroksidisasi yang meningkat,
dengan memberi makan minyak borage kaya asam linolenat dapat menyebabkan peningkatan produksi
TGW1. Namun, kami tidak menemukan adanya perubahan konsentrasi malondialdehida plasma,
penanda peroksidasi, dalam studi suplementasi minyak borage kaya asam linolenat pada subyek
manusia (LS Harbige, F Kelley, C Dunster dan K Ghebremeskel, hasil yang tidak dipublikasikan).