12/15/2015

Biosintetski procesi na ER-u

i GA-u i mehanizmi
vezikularnog transporta

Intracelularne membrane

1
 12/15/2015

Endoplazmatični retikulum
• ER je mreža cevčica i cisterni okruženih membranom
• ER formira membrana koja od okolnog citozola
odvaja unutrašnji prostor-cisternu
• Najveća organela eukariotske ćelije
• Hrapavi (granularni) ER- grER
• Glatki (agranularni) ER-glER

2
 12/15/2015

Funkcije grER

• Sineteza proteina npr. sekretornih i integralnih

• Transport proteina do GA- sekretorni proteini
• Glikolizacija
• Formiranje disulfidnih veza i rearanžiranje

Funkcije glER
• Sinteza svih lipida
• Metabolizam ugljenih hidrata. Transformacija
glikogena u glukozu.
• detoksikacija
• Akumulacija Ca+2 - sarkoplaznmatični
retikulum

3
 12/15/2015

• Sekretorni proteini se usmeravaju pomoću

signalne sekvence na rastućem amino (N) kraju.
Signalna sekvenaca se proteolitički uklanja po
ulasku u mikrozom.
• Signalnu sekvencu čine obično kratki nizovi
hidrofobnih a.k. Mesto delovanja
signalne peptidaze

Čestica za prepoznavanje signala

(engl. signal recognition particle- SRP)
• Šest polipeptida
• SRP RNK- mala citoplazamatska RNK

 Vezuje se za ribozom i signalnu sekvencu

 SRP RNK se vezuje za rRNK u velikoj ribozomalnoj subjedinici

SRP proteini
SRP RNK

4
 12/15/2015

Kotranslacijski prenos
sekretornih proteina u ER

Postranslacioni prenos proteina

5
 12/15/2015

Ugrađivanje proteina u membranu

ER-a
• Proteini plazmine membrane ili membrana odeljaka
• ER GA plazmina membrana ili endozom
• Uvek se transportuju kao deo membrane

• Integralni membranski proteini

su u obliku α heliksa izgrađeni
od 20-25 hidrofobnih a.k.
• Neki proteini prolaz ekroz
membranu samo jednom a neki
više puta.
• Kod nekih proteina amino kraj je
prema citozolu a kod drugih
karboksilni kraj-orjentacija se
uspostvlja tokom translokacije
rastićeg p.p. lanca u ER.

Direktno ugrađivanje transmembranskog

proteina čiji C-terminus se nalazi u citozolu

• Privremena signalna sekvenca

• Jedna „STOP“ a.k. sekvenca

Ugrađivanje u membranu omogućava „stop“ a.k. Sekvenca u obliku α heliksa koja

podstiče konformacijsku promenu translokona što omogućava njen lateralni
izlazak i ugrađivanje u membranu ER-a.

6
 12/15/2015

Ugrađivanje membranskog proteina sa

unutrašnjom signalnom sekvencom koja se
ne uklanja
Signalna sekvenca koju signal peptidaza ne
uklanja
• A) Signalna sekvenca usmerava
ugradnju proteina tako da je amino kraj u
citozolu
• B) Signalna sekvenca usmerava
ugradnju proteina tako da je karboksilni
kraj u citozolu

Ugrađivanje proteina koji više puta

• Ugrađivanje prolaze kroz membranu
naizmeničnim
unutrašnjim signalnim
i „stop“ sekvencama
• Unutrašnja signalan
sekvenca dovodi do
ugrađivanja p.p. lanca
čiji je N terminus ka
citozolu.
• Zaustavni signal
signalizira zatvaranje
translokona zbog
čega nastaje petlja u
lumenu ER-a a
translacija se
nastavlja u citozolu.
• Druga signalna
sekvenca otvara
translokon što
podstiče ponovo
ugrađivanje u
membranu ER-a

7
 12/15/2015

Sklapanje i dorada proteina u ER-u

U ER-u:
• Dorada proteina (npr. uklanjanje Formiranje disulfidnih veza (S-S) između
signalne sekvence) cisteinskih ostataka je karakteristično za
• Sklapanje proteina lumen ER-a zbog svoje oksidativnog
• Udruživanje subjedinica okruženja za razliku od citozola gde je
• Formiranje dislufidnih veza sredina redukciona i cistein se nalazi u
• Početna glikolizacija obliku (-SH) – protein-disulfid-izomeraza.
• Dodavanje glikolipidnih sidara itd. Glikozilacija se odvija na bočnim lancima
asparagina (N-glikolizacija). Oligosaharad
Molekulski šaperoni npr. Hsp70 (BiP)- se sintetiše na lipidnom nosaču (dolikolu) u
olakšava ulazak p.p. lanca u cisternu ER-a membrani. Zatim se ceo oligo saharid
a zatim pomaže sklapanje i udruživanje u prenosi na asparaginske ostake (Asn-X-
konačni protein. Ser/Thr)

Dodavanje GPI sidra

Glikozilfosfatidil-inozitolna (GPI) sidra sadrže dva lanca m.k., oligosaharidni deo sa

inozitolom i dr. u.h. i etanolamin.
Po završetku sinteze proteina on se pomoću C terminalnog hidrofobnog regiona drži za
membranu. C terminalni deo proteina se odstrani i zameni sa GPI sidom pomoću koga
se drži za membranu.

8
 12/15/2015

Sklapanje glikoproteina pomoću kalretikulina

Kada glikoprotein uđe dva glukozna

ostatka se uklanjaju što omogućuje
vezivanje kalretikulina i početak
sklapanja

Ako je ostalo previše Senzor sklapanja proverava

hidrofobnih regiona i kvalitet sklapanja Ako je glikoprotein
glikoprotein se ne može proveravajući izloženost pravilno sklopljen
pravilno sklopiti, hidrofobnih regiona. Ako prelazi dalje ka
manozni ostaci se glikoprotein nije paravilno prelaznom ER-u
odstranjuju a protein se sklopljen senzor sklapanja putem prenosnih
usmerava ka citozolu na (glukoziltransferaza) dodaje vezikula.
ubikvitaciju i degradaciju ponovo glukozu što
u proteazomima. omogućava ulazak ponovo u
kalretikulin

Preteče za sintezu fosfolipida nalaze se u citozolu. Dve masne

Sinteza kiseline veza za CoA prvo se vežu za glicerol-3-fosfat pa nastaje
fosfatidna kiselina koja se odmah ugrađuje u membranu.
Fosfataza potom pretvarafosfatidnu kiselinu u diacilglicerol.
lipida u Vezivanjem različitih polarnih grupa na diacilglicerol nastaju
fosfatidlholin, fosatidiletanolamin, fosfatidilserin i fosfatidilinozitol

glER-u

9
 12/15/2015

Translokacija fosfolipida

Fosfolipidi se sintetišu na citozolnoj

strani membrane Er-a. Prebacivanje
na drugu stranu membrane odvija se
pomoću fosfolipidnih flipaza. Na taj
način rastu oba fosfolipidna sloja
membrane ravnomerno.

Transport iz ER-a u GA
Vezikule koje nastaju pupljenjem
na ER-u prenose sintetisane
proteine i lipide do ER-GA
međuodeljka (ERGIC - engl.
ER-Goldgi intermediate
compartment) pa dalje u GA.
Proteini iz lumena ER-a putuju
vezikulama izlivaju se u lumen
GA. Membranski proteini
zadržavaju istu orjentaciju u GA
kao i u ER-u.

10
 12/15/2015

Signali za izvoz proteina iz ER-a

Transmembranski proteini su prepoznatljivi zbog dvostrukih kiselih (npr. Asp-Asp ili

Glu-Glu) ili dvostrukih hidrofobnih (npr. Met-Met) signalnih sekvenci na citozolnim
delovima. Neki od ovih transmembranskih proteina služe kao receptori za GPI
usidrene proteine i za proteine cisterne ER-a.

Proteini koji treba da ostanu u lumenu

ER-a npr. BiP, signalan peptidaza,
protein-disulfid-izomeraza) sadrže
povratnu signalnu sekvencu na
karboksilnom kraju (Lys-Asp-Glu-Leu tj.
KDEL i kartke završne sekvence sa dva
Lys tj. KKXX).
Proteini koji sadrže KDEL ili KKXX izlaze
ali u povratku prepoznaju specifične
reciklažne sekvence na membrani ER-a

11
 12/15/2015

Funkcije GA
1) Sortiranje proteina i lipida dospelih sa ER;
2) Hemijska modifikacija proteina-glikoproteini; i
3) Sortiranje i pakovanje tih molekula u transportne
vezikule
4) Modifikacija amino kiselina (npr.prolin ->
hidroksiprolin)
5) Adicija masnih kiselina

12
 12/15/2015

STRUKTURA G A

1. cis-GA: mreža tubularnih membrana bliža ER

a) funcija = sortiranje proteina
i) vraćanje proteina na ER
2. Goldžijeve cisterne: pljosnate membranske tvorevine
• razlikuju se cis, medijalne, i trans-cisterne
• u medijalnim cisternama se odvijaju glavni
metabolitička aktivnost
• u trans cisternama se obavlja razvrstavanje, pakovanje i
usmeravanje prema edozomima, lizozomima, ćelijskoj
membrani ili van ćelije

Glikozilacija proteina u GA
Uklanjaju se Dodaje se Uklanjaju se
četiri manoze. N-acetilglukozoamin. dve dodatne
manoze.

Dodaju se fruktoza
i dva N-
acetilglukozoamin.

Dodaju se tri Dodaju se tri

Dalja obrada N-vezanih sijalinske galaktoze.
oligosaharida na kiseline
glikoproteinima iz ER-a u
GA Enzimi:
• Glikozil-transferaza- dodaje u.h. ostatke
• Glikozidaza- odstranjuje u.h. ostake

13
 12/15/2015

Metabolizam lipida u GA
Ceramid koji se sintetiše u ER-u u GA
se pretvara u sfingomijelin ili u
glikolipide.
Prva reakcija: fosfoholinska grupa se
prenosi sa fosfatidilholina na ceramid.
Druga reakcija: dodavanje jednog ili
više u.h.(npr.glukoza)

Nastanak transportnih vezikula

• Dve familije proteina koje vezuju GTP:

 Porodica faktora ADP-ribozilacije (ARF1-3 i Sar1)
 Rab protein
• Proteini adapteri
• Oblažući proteini
 Klatrin- vezikule koje učestvuju u transportu u oba smera GA - plazminoj
membrani
 COPI (engl. Coat protein) - vezikule koje učestvuju u intracelularnom
transportu
 COPII- vezikule nastaju na prelaznom ER-u i učestvuju u sekrecijkom
putu

14
 12/15/2015

ARF1 započinje formiranje klatrinom obložene

vezikule na trans strani Goldžijeve memrane.
Po dolasku do membrane ARF/GDP se aktivira u
ARF/GTP posebnim ARF guaniskim nukleotidnim
izmenjivačem (ARF-GEF).
ARF/GTP regrutuje protein GGA adapter do
membrane koji potom veže transmembranski
receptor interakcijom sa njegovim citozolnim
repom.
GGA se spaja sa drugim adapterskim proteinom
AP1 koji služi za vezivanje sa klatrinom

Spajanje vezikula
1. Prepoznavanje transportne vezikule ciljne membrane
2. Samo spajanje transportne i ciljne membrane
SNARE transmembranski proteini:
vSNARE – na vezikuli
tSNARE – na ciljnoj membrani
Rab porodica GTP vezujućih proteina
Korak u transport Rab protein
Egzocitoza

Od prelaznog ER-a do GA Rab1,Rab1b, Rab2

Od GA do ER-a Rab6, Rab6b
U okvuru GA Rab1,Rab6, Rab6b
Od trans strane GA do plazmine membrane Rab11a, Rab11b
Endocitoza

Od ćel.membrane do ranog endozoma Rab5a, Rab5b, Rab5c

Od ranog endozoma do ćel.membrane Rab4,Rab15,Rab18
Od ranog endozoma do kasnog endozoma Rab7
Druge uloge

Egzocitoza –sekreetornih zrnaca Rab8b

Od kasnog endozoma do trans strane GA Rab9, Rab11a, Rab11b
Od trans strane GA do bazolateralne membrane Rab8a
Od trans strane GA do apikalne membrane Rab21

15
 12/15/2015

Proteini koji su usmereni u lizozome obeleženi su sa manoza -6-fosfatima koji se

vežu za manoza -6-fosfatnim receptorima na trans strani GA. Sa citozolne strane
manoza-6-fosfatnih receptora preko adaptivnih proteina se vezuje klatrin.

• Spajanje vezikula započinje kompleksom

Rab/GTP
• Specifični Rab proteini na vezikuli i ciljnoj
membrani vežu efektorske proteine i stapaju
vezikulu sa ciljnom membranom
• Povezivanje omogućava interakciju
vSNARE i tSNARE
• Priljubljivanje lipidni dvosloj postaje
nestabilan i spaja se sa ciljnom
membranom

16