R3.

ClottingPHARMA

INFORME FINAL DE L’ESTUDI

Directiva de Clotting PHARMA,

des de l’equip de responsables del departament de R+D de GENLABS S.A. en col·laboració

amb Jesuïtes-el Clot us agraïm l’eficiència i l’agilitat amb la que ens vau fer arribar els
resultats de l’auditoria. Hem comprovat els errors detectats durant l’auditoria externa i hem
resolt les incògnites al voltant del que podia estar sortint malament durant el procés
d’obtenció de l’Anti-tripsina humana. A continuació, detallem el nostre procés de correcció.

Durant l’auditoria es van detectar disconformitats en un dels controls de qualitat que es

realitzen al nostre departament, donant la màxima prioritat a la revisió de tots els protocols
emprats i informant de tots aquells elements que poden ser els causants d’aquestes
irregularitats.
Es van observar resultats anòmals en el procés de producció i validació de la proteïna
Antitripsina (AT, gen SERPINA1); i els assajos de coagulació duts a terme amb el
coagulòmetre diferien dels duts a terme fins al moment, i indicaven una disminució dramàtica
de l’activitat de la proteïna AT (veure Figura 1).

Figura 1. Assajos de temps de

coagulació amb AT recombinant
mitjançant el coagulòmetre biobas 10
(Spinreact). Les barres d’error
representen l’error relatiu en cada
punt.

Per tant, la seva recomanació va ser dur a terme una revisió de tot el procés de producció i
validació, per tal de determinar les possibles causes d’aquesta disminució dramàtica de
l’activitat.

Per resoldre aquestes irregularitats, es van realitzar una sèrie d’hipòtesis -tenint en compte els
resultats que s'havien previst correctes- plantejant totes les possibles errades que s'hagin
pogut produir en el procés de producció del gen, ja sigui per un mal ús de les màquines o el
manteniment d'aquestes mateixes, com per alguna equivocació en les indicacions dels
protocols o la contaminació de les mostres preses, reactius malfets per no haver tingut en
compte les seves propietats o característiques d’emmagatzematge, soques contaminades o
bacteris incapaços d’acceptar el plàsmid corresponent, etc.; fets que poden produir algun
tipus d'error en les diferents fases del procés i donar uns resultats incorrectes i, per tant,
disminuir l’eficàcia de la nostra producció.

1
Informe auditoria
 R3. ClottingPHARMA

Algunes de les hipòtesis que destaquem en aquest informe són:

 La seqüenciació del fragment d’ADN que conté el gen no s’ha traduït correctament.
 Les cèl·lules hoste on introduïm el vector de clonació no es troben en bones
condicions.
 És possible que en el procés de transformació, els bacteris incorporin el plàsmid pQE
buit i no amb el gen d’interès.
 El procés de creixement bacterià no ha sigut el correcte, hi ha hagut contaminació.
 Error en la inducció del gen SERPINA1 dins de les cèl·lules hoste en afegir una
senyal química.

Els experiments que ens van permetre acceptar i/o rebutjar aquestes i d’altres hipòtesis
plantejades van ser diferents proves d’electroforesis, PCR, seqüenciacions del plàsmid,
control en les plaques de cultiu, mesures amb el coagulòmetre i l’espectrofotòmetre i
comprovació de la seva exactitud (també dels reactius emprats), purificacions i
quantificacions de la proteïna d’interès, etc.

En aquest estudi hem estat aptes per resoldre problemes que han sorgit durant aquest procés i
que originaven uns resultats incorrectes. Gràcies a aquesta auditoria hem revisat els nostres
equips, materials, i protocols del laboratori amb la finalitat de que els resultats dels estudis i
experiments que realitzem estiguin exempts d'errors per una major fiabilitat dels mateixos.
Hem arribat a la conclusió de que aquests processos son laboriosos i complexes. Creiem que
s’haurien d’executar revisions amb una certa freqüència de tots els equips del laboratori, i
estar sempre atents als resultats obtinguts per analitzar-los i comparar-los i per assegurar-nos
que tot està funcionant de manera correcta i no es produeix cap irregularitat que pugui donar
resultats erronis.

Per tant, els canvis que introduïm al nostre laboratori per assegurar la fiabilitat del procés
d’obtenció d’AT funcional són els següents:
Comprovar la puresa de la proteïna AT - comprovar sempre el pH del buffer
- tenir sempre el protocol a mà per comprovar les quantitats de proteïna
necessàries
Mirar errors de calibratge del coagulòmetre tenir un altre del mateix model per comprovar els experiments una
tercera vegada
Bacteris incorporen el plàsmid amb el gen dur a terme una PCR control per veure les colònies que han incorporat el
d’interès plàsmid
Vigilar contaminació cultius treballar en condicions estèrils, ja sigui treballant amb el bec Bunsen, a
la cabina de flux, etc.
Comprovar enzims de restricció web NEBcutter, introduir la seqüència i ens dóna un llistat d’enzims
que tallen tant el plàsmid com el gen

Esperem hagin rebut aquest informe amb la urgència requerida i els canvis duts a terme
siguin conformes al seus criteris.

Salutacions cordials,

Equip GENLABS S.A.

2
Informe auditoria