‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫السيتوكينينات (‪:)Cytokinins‬‬
‫تمثل السيتوكينينات إحدى مجموعات منظمات النمو وتلعب دوراً أساسيا ً في إنقسام وت َك ُّ‬
‫شف الخاليا في مزارع‬
‫األنسجة كما أن لها العديد من التأثيرات الفسيولوجية األخرى‪ .‬فهي تلعب دورا ً في ت َ َح ُّمل النبات لإلجهاد البيئي‬
‫كالملوحة والجفاف حيث أن لها دورا ً في نسخ الـ (‪ )RNA‬وتنشيط إنتاج البروتين‪ .‬أول من إكتشف السيتوكينينات‬
‫(‪ )Cytokinins‬هو العالم (‪ )Miller‬سنة ‪.1956‬‬

‫طريقة تأثير السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬في زراعة األنسجة‪:‬‬

‫يُعتقد أن السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬لها دورا ً في إنقسام الحلية وهناك أدلّة على وجود إرتباط بين‬
‫السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬وتصنيع األحماض النووية والبروتينات‪ ،‬وقد ثبت دخول السيتوكينينات في‬
‫تصنيع الحامض النووي (‪ )RNA‬ألنها تحتوي على مجموعة األدنين والتي تُعتَبَر إحدى القواعد النيتروجينية‬
‫األساسية في تخليقه‪ ،‬كذلك ُوجد أن لها دورا ً في تنشيط تخليق بعض اإلنزيمات‪.‬‬

‫تأثير السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬في زراعة األنسجة‬

‫تؤثر السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬في زراعة األنسجة كما يلي‪:‬‬
‫‪ .1‬إنقسام الخاليا‬
‫تُعتَبَر السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬ضرورية إلنقسام الخاليا كما يُ ْعتَقَد أن لها دورا ً في تصنيع البروتينات‬
‫المسؤولة عن تكوين خيوط المغزل‪ ،‬وفي حالة نقص السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬يتوقف اإلنقسام الخلوي في‬
‫إحدى مراحل اإلنقسام ولكن عند إعادة نقل األنسجة إلى وسط محت ٍو على السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬فإن‬
‫الخلية تعاود نشاط اإلنقسام مرة أخرى‪.‬‬

‫)‪(21‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫‪ .2‬تكوين الكالُس‪:‬‬
‫يحتاج تكوين الكالُس في معظم أنسجة النباتات ثنائية الفلقة إلى وجود األوكسين والسيتوكينين (‪)Cytokinin‬‬
‫معا ً‪.‬‬
‫العرضية‪:‬‬
‫األفرع َ‬
‫ُ‬ ‫‪ .3‬ت َكشُّف‬
‫من المعروف أن السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬فعَّالة جدا ً في تكوين األفرع سواء المتكونة مباشرة على النسيج‬
‫المنزرع أو المتكونة بطريقة غير مباشرة من الكالُس في وجود األوكسينات‪ ،‬وباإلضافة لتشجيع تكوين البراعم‬
‫العرضية فإن السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬تعمل على خفض تأثير السيادة القمية مما يؤدي إلى تنشيط البراعم‬
‫الجانبية لكن التركيزات المرتفعة من السيتوكينينات (‪ )Cytokinins‬تُسبب تَ َك ُّ‬
‫شف عدد أكبر من األفرع‬
‫المتقزمة وبها خلل مورفولوجي وغالبا ً تنخفض نسبة التجذير في النباتات ال ُمت َ َك ّ‬
‫شفة في بيئة تحتوي على‬ ‫ّ‬
‫تركيزعالي من السيتوكاينين ‪.‬‬

‫)‪(22‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫‪ .4‬تكوين األجنة الجسدية (‪:)Somatic Embryogenesis‬‬

‫يحتاج إنتاج الكالُس إلى إضافة السيتوكينينات ولكن زيادتها في البيئة قد يؤدي إلى تثبيط تكوين األجنة الجسدية‪.‬‬

‫‪ .5‬تثبيط تكوين الجذور (‪)Root formation inhibition‬‬

‫يعمل التركيز العالي نسبيا ً من السيتوكينينات على تثبيط أو إعاقة تكوين ونمو الجذور وبالتالي ال بد من نقل‬
‫المجموع الخضريالمتكون في بيئة محتوية على السيتوكينينات إلى أخرى خالية منها للحث على تكوين ونمو‬
‫الجذور قبل نقل النباتات من المعمل‪.‬‬

‫‪ .6‬التكشُّف (‪:)Regeneration‬‬
‫تحول خاليا الكالُس من خاليا غير متخصصة إلى خاليا متخصصة وتكوين نبات كامل‬

‫‪ .7‬تكوين األعضاء (‪:)Organogenesis‬‬

‫هي نشأة األعضاء على سطح الجزء النباتي أو من الكالُس الناتج من زراعته وهي عادة تكون إما نموات‬
‫خضرية أو جذور‪.‬‬

‫)‪(23‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫تقنيات زراعة األنسجة النباتية‬

‫‪ .1‬اإلكثار الدقيق‬
‫‪ .2‬إنتاج نباتات خالية من األمراض‬
‫‪ .3‬إنتاج مركبات طبيعية و صيدالنية من خالل زراعة األنسجة‬
‫‪ .4‬طرق حفظ األصول الوراثية باستخدام تقنية زراعة األنسجة‬
‫‪ .5‬إستخدام طرق زراعة األنسجة في تربية النبات‬
‫أ) زراعة المتوك‬
‫ب) زراعة وإنقاذ الجنين‬
‫ج) اإلندماج الخلوي (دمج البروتوبالست)‬
‫د) التربية باستخدام المطفّرات‬
‫ه) إستخدام تقنية زراعة األنسجة في إنماء وإكثار بعض الكائنات إجبارية التطفُّل‬
‫و) البذور الصناعة واألجنة الجسدية‬
‫‪ .6‬زراعة األنسجة النباتية ونقل الجينات‬

‫‪ .1‬مراحل اإلكثار بواسطة زراعة األنسجة‬

‫اإلكثار (‪ : )Micropropagation‬هو إكثار النباتات باستخدام تقنيات زراعة األنسجة وهنا سوف نستعرض‬
‫معا ً في إطار مبسط المراحل التي يمر بها النسيج المنزرع بداية من فصل هذا النسيج من النبات األم وزراعته‬
‫على بيئة ُمغذية حتى الحصول على نباتات كاملة لها القدرة على النمو في الحقل تحت الظروف الطبيعية‪.‬‬
‫وفي البداية حجج العالم (‪ )Murashige 1974‬ثالثة مراحل يمر بها النسيج المنزرع وهي‪:‬‬
‫‪ .1‬مرحلة إنشاء المزرعة النسيجية‬
‫‪ .2‬مرحلة التضاعف على البيئة المغذية‬
‫‪ .3‬مرحلة تكوين الجذور‬
‫وبالرغم من أن هذه المراحل الثالث تغطي المراحل التطورية التي يمر بها النسيج المنزرع في البيئة المغذية إال‬
‫أنه حديثا ً تم إضافة مرحلتين هامتين‪:‬‬
‫األولى تهتم بإعداد النبات األم الذي يؤخذ منه النسيج لزراعته على البيئة المغذية‪ ،‬أما الثانية فإنها تهتم بتهيئة‬
‫النباتات الناتجة من زراعة األنسجة لتتواءم مع الظروف الطبيعية المحيطة واإلحتياجات الطرورية إلستيفاء‬
‫متطلبات كل مرحلة تختلف باختالف نوع المزرعة ونوع النبات وعدد آخر من العوامل تتعلق بالنبات األم‬
‫والجزء المستعمل‪.‬‬
‫وبالتالي تصبح المراحل التطورية التي تميز التكاثر بواسطة زراعة األنسجة النباتية هي‪:‬‬
‫‪ .1‬مرحلة إعداد النباتات األم‬
‫‪ .2‬مرحلة إنشاء المزارع النسيجية‬
‫‪ .3‬مرحلة التضاعف على البيئة المغذية‬
‫‪ .4‬مرحلة تكوين الجذور‬
‫‪ .5‬مرحلة األقلمة‪.‬‬

‫)‪(24‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫مرحلة إختيار وإعداد النباتات األم (‪:)Selection and Preparation of mother plants‬‬
‫بداية يجب التأكد من النوع والصنف النباتي المراد إكثاره‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أثبتت التجارب أن إستجابة النسيج المنزرع تتوقف على مدى قوة النبات األم والموسم الذي يؤخذ فيه النسيج‬ ‫‪‬‬
‫المراد زراعته‪.‬‬
‫يفضل أن يحافظ على النباتات في الصوبة حيث يمكن التحكم في عوامل النمو المحيطة والحصول على‬ ‫‪‬‬
‫أفضل نمو للنبات األم‬
‫اإلستجابة المرتفعة لألنسجة النباتية المنفصلة من النبات األم في المرحلة النشطة من حياته ولذلك عندما يراد‬ ‫‪‬‬
‫إكثار بعض األنواع التي تتعرض لفترة من السكون فإنه يجب مراعاة أن يؤخذ النسيج النباتي أثناء فترة‬
‫النشاط وليست فترة السكون‪.‬‬

‫مرحلة إنشاء المزارع النسيجية (‪:)Establishment of tissue culture‬‬

‫وفي هذه الخطوة يجب اإلهتمام بنوع البيئة الغذائية المستخدمة‬
‫اإلهتمام بالنسيج النباتي المستخدم وذلك بالتخلص من الكائنات الدقيقة التي تحيط بالسطح الخارجي للنسيج‬
‫المنفصل (وذلك بالغسيل والتعقيم بأحد الطرق المعروفة)‪ .‬ويقاس نجاح هذه المرحلة بمدى الحصول على أنسجة‬
‫غير ملوثة لها القدرة على النمو وإعطاء نبات‪.‬‬

‫)‪(25‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫مرحلة تضاعف النسيج المنزرع (‪:)Multiplication of the cultured tissue‬‬

‫الهدف األساسي في هذه المرحلة هو الحصول على تضاعف سريع للجزء النباتي المنزرع على بيئة مغذية‬
‫هناك طرق عديدة إلتمام هذه المرحلة وتشمل‪:‬‬
‫‪ .1‬األجنة الجسدية‬
‫‪ .2‬تنشيط نمو البراعم العرضية‬
‫‪ .3‬تنشيط نمو األفرع الجانبية‬

‫‪ .1‬األجنة الجسدية (‪:)Somatic embryos‬‬

‫إنتاج األجنة الجسدية هي طريقة ذات كفاءة عالية إلكثار المادة النباتية وهي عبارة عن تحول خلية نباتية إلى‬
‫جنين غالبا ً له نفس التركيب الوراثي للخلية األم التي نشأ منها‬
‫يمكن الحصول على األجنة الجسدية إما من خالل زراعة معلق الخاليا أو من الكالس المنزرع على بيئة مغذية‬

‫‪ .2‬تنشيط نمو البراعم العرضية (‪:)Stimulation of axillary buds‬‬

‫)‪(26‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫عند زراعة جزء نباتي يحتوي على برعم عرضي فإن هذا األخير ينمو إلى فرع خضري أو عديد من األفرع‬
‫الخضرية ‪ ،‬وهذه بدورها تحتوي على براعم عرضية التي تنمو بدورها إلى أفرع خضرية وبتكرار هذه الدورة‬
‫فإنه يحدث تضاعف للمادة النباتية المنزرعة‪ .‬مع مراعاة أال تزيد عملية إعادة الزراعة للنموات الخضرية عن‬
‫سبعة مرات لتالفي حدوث اإلختالفات الوراثية (‪)Somaclonal variation‬‬
‫بالرغم من أن هذه الطريقة تُعتبر أبطأ الطرق المستخدمة في إكثار المادة النباتية إال أنها شائعة اإلستخدام في‬
‫بعض األنواع النباتية‪.‬‬

‫‪ .3‬تنشيط نمو األفرع الجانبية (‪:)Stimulation of lateral buds‬‬

‫تنشأ األفرع الجانبية في مزارع األنسجة النباتية من مناطق مختلفة من النسيج المنزرع وليست من البراعم‬
‫الطرفية أو العرضية ‪ ،‬فهي تتطور من الجذور ‪ ،‬السوق‪ ،‬األوراق‪ ،‬الكورمات‪ ،‬الريزومات والكالُس‪.‬‬
‫إن إستخدام هذه الطريقة لمضاعفة المادة النباتية المنزرعة غير مفضلة ألنها قد تؤدي إلى حدوث تغيرات في‬
‫المادة الوراثية نظرا ُ لطول الفترة التي يقضيها النسيج على بيئة مغذية فقد يؤدي ذلك إلى تضاعف كروموسومي‬
‫باإلضافة إلى التغيير في التركيب الجيني‪.‬‬

‫)‪(27‬‬
 ‫زراعة األنسجة النباتية‬

‫مرحلة تكوين الجذور في البيئة المغذية (‪:)Root formation in nutrient medium‬‬

‫الهدف األساسي من هذه المرحلة هو تكوين جذور على األفرع المتكونة في المرحلة السابقة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يتم ذلك بنقل األفرع النباتية المتكونة إلى بيئة مغذية ذات‬ ‫‪‬‬
‫تركيب مناسب لتنشيط إنتاج الجذور تختلف عن البيئة‬
‫السابقة في تركيز منظمات النمو‪.‬‬
‫حديثا ً أمكن تنشيط تكوين الجذور بعد النقل إلى تربة‬ ‫‪‬‬
‫الزراعة وتتميز الجذور التي تُنتَج هنا بأنها أقوى وتحتوي‬
‫على شعيرات جذرية أكثر من التي تنمو على البيئة‬
‫الصناعية‪.‬‬

‫مرحلة األقلمة (‪:)Acclimatization stage‬‬

‫‪ .1‬تتميز النباتات الناتجة من زراعة األنسجة ببعض المواصفات التي تميزها عن النباتات العادية مثل (عدم‬
‫تكون طبقة الكيوتيكل التي تحد من فقد المياه من النبات – الثغور في هذه النباتات ال تعمل بكفاءة عالية)‪.‬‬
‫‪ .2‬نتيجة لذلك ال بد من إجراء عملية األقلمة وذلك لتهيئة النباتات للنمو في ظروف الصوبة أو الحقل‪.‬‬
‫‪ .3‬هنا ال بد من األخذ في اإلعتبار بعض النقاط الهامة وهي‪:‬‬
‫أفضل تربة صناعية لتشجيع نمو الجذور يجب أن تكون متعادلة أو حامضية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫غسل النباتات جيداً من البيئة المغذية قبل نقلها للتربة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يراعى عند النقل للتربة المحافظة على الرطوبة المرتفعة المحيطة بالنبات‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫إزالة بعض األوراق المتكونة للحد من فقد الماء ودفع النباتات لتكوين أوراق جديدة للقيام بالبناء‬ ‫‪‬‬
‫الضوئي‪.‬‬
‫تقليل الكثافة الضوئية ثم زيادتها تدريجياً‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تنشيط تكوين الطبقة الشمعية لتقليل فقد الماء‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫)‪(28‬‬