Professional Documents
Culture Documents
HPLC PDF
HPLC PDF
HPLC PDF
2 CẤU TẠO
Detector
t0 t1 t2 t3 t4
detector
Tín hiệu
t0 t1 t2 t3 t4 Thời gian
Sắc ký đồ
(Chromatogrames)
Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp chia tách trong đó
pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được
phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất
mang rắn, hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá
học với các nhóm chức hữu cơ .
Mobile phase
(Pha động)
Stationary phase
(Pha tĩnh)
- Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các chất.
- Dựa trên 2 quá trình:
Hấp phụ
Giải hấp phụ
- Xảy ra liên tục giữa 2 pha:
Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng, giữ chất phân tích
Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất), hòa tan và di chuyển
chất phân tích
- Sắc ký lỏng chia thành 2 nhóm
Sắc ký lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển)
Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC)
Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC chia thành:
SK
phân
bố SK pha
thường
SK ghép
cặp ion
HPLC
SK
pha
đảo
Sk trao
đổi ion
Khi nối với đầu do (detector), HPLC cho phép:
- Định tính: dựa vào thời gian lưu
- Định lượng: dựa vào chiều cao hoặc diện tích peak
II.CẤU TẠO MÁY HPLC
Trong đó :
1- Bình chứa dung môi pha động
2- Bộ phận khử khí
3- Bơm cao áp
4- Bộ phận tiêm mẫu ( bằng tay hay Autosample)
5- Cột sắc ký ( Pha tĩnh ) ( để ngòai môi trường hay trong bộ
điều nhiệt )
6- Detector ( nhận tín hiệu )
7- Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận,tín hiệu và sử lý dữ
liệu và điều khiển hệ thống HPLC.
8- In dữ liệu .
1 - Bình đựng dung môi
- Hiện tại máy HPLC NGUỒN CUNG CẤP PHA ĐỘNG
thường có 04 đường dung môi (MOBILE PHASE): LÀ BÌNH ĐỰNG
vào đầu bơm cao áp .Cho phép DUNG MÔI HOẶC DUNG MÔI
chúng ta sử dụng 04 bình chứa CHẠY MÁY
dung môi cùng 1 lần để rửa giải
theo tỷ lệ mong muốn và tổng
tỷ lệ dung môi của 4 đường là
100 % .
- Tuy nhiên theo kinh
nghiệm thì chúng ta ít khi sử
dụng 04 đường dung môi cùng
một lúc mà chúng ta chi sử dụng
tối đa là 3 và 2 đường để cho hệ
pha động luôn được pha trộn
đồng nhất hơn,hệ pha độüng
đơn giản hơn để quá trình rửa
giải ổn định .
- Hiện 04 đường dung
môi phục vụ chủ yếu cho việc
rửa giải Gradial dung môi theo
thời gian và công tác xây dựng
2 Bộ khử khí Degasse :
Mục đích của bộ khử khí nhằm loại trừ các
bọt nhỏ còn sót lại trong dung môi pha động .
Nếu như trong quá trình phân tích mà dung
môi pha động còn sót các bọt khí thì một số hiện
tượng sau đây sẽ sảy ra:
- Tỷ lệ pha động của các đường dung môi lấy
không đúng sẽ làm cho thời gian lưu của Peak thay
đổi .
- Trong trường hợp bọt quá nhiều bộ khử khí
không thể loại trừ hết được thì có thể Pump sẽ
không hút được dung môi khi đó áp suất không lên
và máy sắc ký sẽ ngừng hoạt động .
3- Bơm cao áp (hệ thống cung cấp dung môi):
- Bơm pha động vào cột tách
- Điểu khiển tốc độ dòng, áp suất của pha động
- Máy sắc ký lỏng của chúng ta hiện nay thường có áp suất tối
đa 412 Bar (1at = 0.98Bar). Tốc độ dòng 0.1-9.999 ml/phút .
column
mixed sample
Mobile phase
column
Hỗn hợp chất tách khỏi
nhau thế nào ?
Flow
Pha tĩnh
- Sau khi các cấu tử tách ra khỏi nhau sẽ lần lượt đi vào
detector, tại đó chúng được chuyển thành tín hiệu điện. Tín hiệu này
được khuyếch đại rồi chuyển sang bộ ghi. Các tín hiệu được xử lý ở
đó rồi chuyển sang bộ phận in và lưu kết quả.
- Trên sắc đồ nhận được, sẽ có các tín hiệu ứng với các cấu tử
được tách gọi là peak. Thời gian lưu của peak là đại lượng đặc trưng
(định tính) cho chất cần tách. Còn diện tích peak là thước đo định
lượng cho chất cần phân tích.
-Thời gian chất phân tích bị pha tĩnh lưu giữ (thời gian lưu)
quyết định bởi:
Bản chất của pha tĩnh, cấu trúc và tính chất của chất
phân tích.
Bản chất và thành phần của pha động dùng để rửa giải
chất phân tích ra khỏi cột sắc ký (pha tĩnh).
- Ghi lại toàn bộ quá trình tách sắc ký của hỗn hợp chất phân
tích sắc ký đồ gồm nhiều peak.
- Đặc điểm của peak phân tích :
Các peak có thể tách rời nhau hoàn toàn
Chập nhau một phần
Chập nhau hoàn toàn
- Sắc ký đồ phản ánh quá trình tách sắc ký trong cột tốt hay
không tốt.
• Tách tốt: hỗn hợp có bao nhiêu chất có bấy nhiêu peak
riêng biệt không chập nhau
• Chất nào bị lưu giữ mạnh sẽ được rửa giải ra sau cùng,
chất lưu giữ kém sẽ ra trước
• Tuỳ từng chất cần nghiên cứu và các điều kiện phân tích
để chọn các detector khác nhau.
Ứng dụng của HPLC
- Chủ yếu xác định các hợp chất hữu cơ khó bay hơi trong nhiều đối
tượng khác nhau:
+ Amino acid
+ Acid hữu cơ
+ Thuốc trừ sâu
+ ….