KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Penghayatan sel-sel
mikrobiologi
dan
konsep aseptic
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Kandungan

Muka
Tajuk surat

1. Pengenalan ringkas
2. Bahagian 1: Kepentingan teknik aseptic
i. Objektif
ii. Bahan dan alat radas
iii. Kaedah
iv. Keputusan
v. Perbincangan
vi. Kesimpulan

Bahagian 2: Pengamatan mikrob, pengkulturan dan pewarnaan bakteria

i. Objektif:

a) Pemindahan kultur bakteria daripada piring agar-agar ke medium

agar-agar yang baru
i. Bahan dan alat radas
ii. Kaedah
iii. Keputusan
iv. Perbincangan

b) Pemindahan kultur bakteria daripada piring agar-agar ke botol kaldu

nutrien
i. Bahan dan alat radas
ii. Kaedah
iii. Keputusan
iv. Perbincangan

c) Pewarnaan bakteria

i. Bahan dan alat radas

ii. Kaedah
iii. Keputusan
iv. Perbincangan

d) Asas pengiraan kepekatan (koloni) bakteria

i. Bahan dan alat radas
ii. Kaedah
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

iii. Keputusan
iv. Perbincangan
Kesimpulan

Pengenalan

Pelbagai jenis mikroorganisma terdapat di persekitaran kita. Hal ini boleh

ditunjukkan dengan mendedahkan piring Petri yang berisi agar-agar nutrient (NA) dalam
persekitaran makmal. Kumpulan utama mikroorganisma termasuklah bakteria, algae,
protozoa, fungi, parasit dan virus. Di antara semua organisma yang wujud di bumi ini,
mikroorganismalah merupakan kumpulan organisma yang tertua.
Semasa menjalankan amali, mikrob boleh menjadi berguna ataupun penghalang
ke arah mencapai keputusan yang betul. Ada di antaranya mempunyai sifat yang tahan
kepada suhu tinggi dan akan menjadi dorman dalam alat autoklaf, tetapi akan terus
bermandiri apabila ia berada di persekitaran yang sesuai untuk pertumbuhannya.
Kehadiran mikroorganisma ini akan menyebabkan kontaminasi dan akan
menjejaskan keputusan eksperimen yang dijalankan. Oleh sebab itu, teknik aseptic adalah
amat penting dalam memastikan persekitaran yang bebas atau hampir bebas daripada
gangguan kehadiran mikroorganisma di sekeliling kita. Kita mesti mengambil langkah
yang teliti untuk memastikan kebersihan makmal supaya kadar kontaminasi dapat
dikurangkan.Untuk mendapat keputusan kajian biokimia ini yang memuaskan, satu
persekitaran yang steril amat diperlukan. Ini adalah antara kepentingan teknik aseptic
dalam memastikan persekitaran steril semasa amali. Pengautoklafan semua bahan dan
alat tidak akan menghindarkan kontaminasi tetapi akan mengurangkan kadarnya ke tahap
minimum.
Amali ini memperkenalkan kaedah-kaedah piawai yang digunakan di dalam
makmal yang melibatkan penggunaan dan pengendalian sel-sel mikroorganisma.
Penggunaan inokulum kultur secara aseptik dengan menggunakan bulatan dawai steril
diperkenalkan. Kami mempelajari kaedah memindahkan mikroorganisma tertentu dari
satu medium nutrien ke satu lagi medium nutrien yang lain.
Teknik pewarnaan Gram yang digunakan secara universal untuk pengenalpastian
bakteria turut diperbincangkan. Pewarnaan bacteria dilakukan untuk membantu dalam
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

kajian bentuk, saiz, organel dalaman dan luaran sesuatu mikroorganisma kerana
memudahkan penelitian sel di bawah mikroskop. Dalam pewarnaan Gram, terdapat dua
jenis bakteria boleh dikenalpasti iaitu bakteria berGram positif dan bakteria berGram
negatif. Dua jenis bakteria ini adalah berbeza dari segi struktur sel.
Selain itu, teknik pengiraaan koloni yang ringkas berdasarkan Miles dan Misra
turut diperkenalkan. Melalui teknk ini, sampel bakteria yang dicairkan dititiskan ke atas
permukaan medium agar-agar secara konsisten dari segi isipadu dan jarak penitisan.
Pengiraan koloni yang terbentuk pada permukaan agar-agar dapat ditentukan selepas
pengeraman medium pada suatu jangka masa tertentu. Bilangan setiap koloni dianggap
sebagai individu sel bakteria tersebut.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Bahagian 1: Kepentingan teknik aseptic

Objektif:
Supaya pelajar menghayati kepentingan teknik aseptik dalam pengendalian
mikroorganisma.

Bahan dan Alat Radas :

1. Inkubator pada suhu 30˚C
2. Piring agar-agar nutrien (NA)
3. Segelas susu segar

Kaedah:
1. 10 piring agar-agar disediakan dan didedahkan kepada keadaan berikut:
a) Didedahkan kepada udara selama 30 minit
b) Disentuh dengan jari yang belum dibasuh
c) Disentuh dengan jari yang telah dibasuh dengan sabun dan air
d) Disentuh dengan jari yang telah dicelupkan ke dalam larutan etanol
e) Disentuh kepada tombol pintu makmal
f) Disentuhkan pada tombol pintu tandas
g) Dicoretkan dengan 1ml susu
h) Ditekankan pada permukaan duit syiling
i) Dibatuk beberapa kali dalam jarak 4-6inci daripada piring petri
j) Ditekankan pada bahagian bawah kelalang atau bikar

2. Kesemua piring ini hendaklah dilabelkan dengan lengkap, diterbalikkan dan

dieramkan di dalam incubator pada suhu 30 C selama 48jam.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Keputusan:
Piring Warna Tekstur Saiz Bentuk Elevasi Bil. koloni
a. - Putih - batasan -besar -berbulu -cembung 8
secara radial
- putih - licin -besar -bulat -cembung 6
kekuningan

b. - putih - licin -besar - bulat -cembung

berkerut 37

c. - kuning - licin -kecil - bulat -cembung 6

- putih - berkerut -besar - lobate -cembung 360

dan berkerut
kecil
d.

__ __ __ __ __ __

e. - putih - berkontur -besar - serabut -umbonat 15

- jingga - licin -kecil - bulat -cembung 7
- kuning - licin -kecil - bulat -cembung 3
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

f.

__ __ __ __ __ __

Piring Warna Tekstur Saiz Bentuk Elevasi Bil. koloni

g.
__ __ __ __ __ __

h. - kuning - licin -kecil -bulat -cembung 11

- putih - berkerut -kecil -berserabut -umbonat 98

i.

__ __ __ __ __ __

j. -putih - licin -besar -pelbagai -datar 51

Perbincangan

Teknik aseptic amat penting dalam pengkulturan bakteria. Beberapa sampel piring
agar-agar telah disediakan melalui kaedah yang tertentu. Selepas dieramkan selama
48jam, hamper semua piring agar-agar menunjukkan kehadiran bakteria.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Dalam sampel (a), agar-agar kelihatan mempunyai tompokan berbulu. Ini

menunjukkan bahawa wujud mikroorganisma dalam udara walaupun pada keadaan
persekitaran makmal bioteknologi yang disterilkan. Hal ini membuktikan bahawa mikrob
wujud dalam udara sungguhpun tidak dapat dilihat dengan mata kasar. Sampel (b), tangan
yang tidak dicuci mempunyai mikroorganisma yang banyak akibat menyentuh bahan-
bahan yang kotor. Sampel (c) pula adalah hasil daripada tangan yang telah dicuci dengan
sabun dan air. Jadi, kepadatan koloninya adalah kurang. Dalam sample (d), tiada bakteria
pada agar-agar. Hal ini demikian kerana larutan etanol merupakan reagen pembunuh
mikrob. Piring agar-agar sampel (e) menunjukkan kepadatan koloni yang rendah.
Keputusan pada sampel (g) adalah sama dengan sampel (d),dengan keadaannnya sama
seperti asalnya. Sampel (h) pula menunjukkan kepadatan koloni yang tinggi kerana duit
syiling pernah dipegang oleh orang yang berlainan, maka ia mempunyai bakteria yang
banyak.Dalam sampel (i), didapati terdapat koloni yang kurang padat bertaburan pada
permukaan agar-agar. Sampel (j) menghasilkan kepadatan koloni tinggi yang bersaiz
besar kerana bikar ini pernah diletakkan di banyak tempat yang berlainan.

Selepas menjalani eksperimen ini, saya akan mencuci tangan saya sebelum makan
dan mengelakkan daripada memakan makanan yang terdedah, untuk menjauhkan diri
daripada bakteria-bakteria yang wujud di persekitaran kita.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Bahagian 2: Pengamatan mikrob, pengkulturan dan pewarnaan

bakteria

Objektif
1. mendedahkan pelajar kepada kepelbagaian dunia mikroorganisma
2. memperkenalkan teknik asas pengkulturan mikrob dengan menggunakan
teknik aseptic
3. mempelajari kaedah asas pengenalpastian bakteria melalui pewarnaan Gram.

a) Pemindahan kultur bakteria daripada piring agar-agar ke medium agar-agar

yang baru

Bahan dan alat radas:

1. Kultur bakteria : Escherichia coli, Basilus subtilis dan Streptococcus aureus.
2. Dawai inokulum : jenis gelung
3. Piring agar-agar nutrien (Nutrient agar)- untuk pengkulturan bakteria
4. Penunu Bunsen

Kaedah:
1. Piring petri yang mengandungi medium yang steril dilabelkan pada bahagian
dasar atau bawahnya dan bukan di atas penutupnya. Piring petri itu diletakkan
dengan bahagian dasarnya di sebelah atas.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

2. Gelung dawai inokulum disterilkan melalui kaedah pembakaran dan

dibiarkan sehingga sejuk. Tudung piring petri yang mengandungi kultur
bakteria dibuka dan satu koloni yang terasing diambil dengan menggunakan
gelung dawai inokulum.
3. Bahagian dasar satu piring petri agar-agar yang baru dipegang dan diangkat
sehingga permukaan medium yang terdedah menghadap kita.
4. Gelung dawai yang mengandungi spesimen koloni di atas permukaan media
agar-agar diletakkan pada kira-kira 1cm daripada dinding piring petri
tersebut.
5. Inokulum disebarkan seluas 1cm garis pusat.
6. Bermula dari sebaran di atas, inokulum dicoretkan seperti dalam rajah di
bawah.

coretan
pertama

coretan terakhir

7. Gelung dawai dibakar semula dan dibiarkan sejuk.

8. Coretan seterusnya bermula dari kawasan sekitar penghujung garisan-garisan
pertama.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

9. Piring diputarkan pada 90˚ dan beberapa garisan dicoretkan mengulangi

kaedah di atas sehingga garisan meliputi keseluruhan permukaan medium
agar-agar.
10. Garisan yang terakhir dipastikan tidak menyentuh sebaran inokulum yang
pertama.
11. Piring Petri yang telah diinokulasi dieramkan pada suhu 30˚C selama
24-48jam dalam keadaan berbalik.
Keputusan:

Jenis bakteria Lakaran keputusan

Escherichia coli

Basilus subtilis

Streptococcus aureus

Perbincangan:
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Semasa ujikaji, penunu Bunsen dinyalakan sepanjang masa untuk menyediakan

keadaan yang panas untuk menghindar dan membunuh mikroorganisma yang hadir di
udara. Selain itu, penunu Bunsen juga berfungsi untuk memanaskan gelung dawai
inokulum. Dawai inokulum dipanaskan setiap kali sebelum pengambilan dan selepas
pencoretan spesimen bakteria sebagai langkah berjaga-jaga untuk mengelakkan
kontaminasi. Dawai dipanaskan selengkapnya dan dibiarkan sejuk seketika sebelum
mengambil spesimen, kerana ini akan membunuh bakteria sekiranya dawai terlalu panas.
Coretan-coretan yang dibuat mestilah selari dan tidak bertindih. Selepas beberapa coretan
dibuat, dawai inokulum dibakar semula untuk membunuh bakteria yang tertinggal. Ini
untuk memastikan coretan yang seterusnya mempunyai kepadatan koloni yang
berkurangan. Teknik pemindahan secara coretan ini adalah bertujuan untuk
mengkulturkan koloni kultur tulen. Setiap individu koloni mewakili progeni untuk sel
tunggal. Setiap sel tunggal yang terasing akan melipatganda dan menghasilkan koloni
tersendiri dalam medium yang baru.
Dalam ujikaji ini, didapati keputusan bagi bakteria Escherichia coli dan Basilus
subtilis hampir serupa. Pada agar-agar, kelihatan koloninya padat dan memenuhi garis-
garis coretan yang dibuat. Tetapi untuk bakteria Streptococcus aureus, ia kelihatan kurang
padat dan berbentuk bulat.

b) pemindahan kultur bakteria daripada piring agar-agar ke botol kaldu nutrien

Bahan dan Alat Radas :

1. Kultur bakteria Escherichia coli, Basilus subtilis dan Streptococcus aureus
2. Dawai inokulum jenis gelung
3. Kaldu nutrien (Nutrient broth)
4. Penunu Bunsen
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Kaedah
1. Botol yang berisi kaldu nutrien yang steril dilabelkan.
2. Bulatan dawai disterilkan dan disejukkan sebentar.
3. Dengan jari kecil tangan kiri, tudung botol dibuka kemudian muncung botol
dilalukan ke dalam api Bunsen.
4. Inokulum koloni yang terasing daripada kultur sumber bakteria dipindahkan
dengan menggunakan gelung dawai inokulum ke dalam kaldu dan
dicampurkan dengan teliti dan aseptik.
5. Mulut botol dilalukan ke dalam api Bunsen sekali lagi dan botol ditutup
semula.
6. Botol yang berisi kultur bakteria itu dieramkan pada suhu 30˚C selama
24-48jam.

Keputusan :

Nama bakteria Keadaan sebelum pengeraman Keadaan selepas pengeraman

Escherichia coli Larutan kelihatan jernih Larutan menjadi keruh dengan
enapan di atas larutan.
Basilus subtilis Larutan kelihatan jernih Larutan menjadi keruh dan
warna pudar
Streptococcus aureus Larutan kelihatan jernih Larutan menjadi keruh dengan
enapan di dasar.

Perbincangan

Selepas dieramkan, larutan kaldu nutrien dalam ketiga-tiga botol yang dikulturkan
dengan bakteria tertentu menjadi keruh dan warna menjadi pudar. Kekeruhan yang
berlaku menunjukkan kehadiran bakteria yang dipindahkan daripada piring agar-agar ke
dalam kaldu nutrien. Pemindahan kultur bakteria dari piring petri ke kaldu nutrien telah
berjaya. Proses pemindahan bakteria dari piring petri ke kaldu nutrien mestilah cepat
untuk mengurangkan kadar kontaminasi. Muncung botol dilalukan ke api penunu Bunsen
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

dan botol ditutup dengan cepat dan ketat. Di antara ketiga-tiga botol kaldu nutrien itu,
botol yang mengandungi bakteria Streptococcus aureus mempunyai kekeruhan yang lebih
rendah. Ini mungkin kerana bakteria ini kurang sesuai bertumbuh di persekitaran ini.

c) Pewarnaan bakteria : Pewarnaan Gram

Bahan dan Alat Radas :

1. Kultur bakteria : Escherichia coli dan Streptococcus aureus
2. Slaid kaca
3. Air suling
4. Pewarna kristal-ungu (crystal violet)
5. Larutan Iodin-Lugol
6. Larutan alkohol
7. Larutan safranin

Kaedah:
1. Sampel sel bakteria disebarkan pada permukaaan slaid mikroskop dengan
menggunakan air suling, dikeringkan di udara dan dilakukan perlekatan haba
terhadap sampel tersebut.
2. Sebaran sel diliputi dengan beberapa titis larutan krystal-ungu dan dibiarkan
selama 1 minit.
3. Slaid dicuci dengan menadahkannya pada air paip yang mengalir perlahan dan
air berlebihan disingkirkan daripada permukaan slaid.
4. Sebaran sel itu diliputi dengan larutan Iodin Lugol selama 1 minit kemudian
langkah 3 diulangi.
5. Slaid dipegang di dalam sinki secara condong dan larutan alkohol dititiskan
dengan cepat ke atas sbaran sel sehingga tiada warna biru (krystal-ungu) yang
terlihat keluar dari sampel.
6. Sampel dicuci dengan segera dengan air paip yang mengalir perlahan.
7. Kemudian sampel diliputi dengan safranin selama 30 saat.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

8. Slaid dicuci dengan air dan dikeringkan dengan menggunkan kertas turas/
penyerap tanpa menggosok permukaan slaid.

Keputusan :

Nama Imej bawah mikroskop Warna Ujian Gram Bentuk

Merah Negatif Oval

Escherichia coli jambu

Streptococcus aureus Biru Positif Bulat

Perbincangan

Hanya 2 bakteria sahaja yang diperhatikan iaitu, iaitu Escherichia coli dan
Streptococcus aureus. Pada permulaannya, sampel bakteria dikumpulkan dengan dawai
inokulum ke atas slaid yang mempunyai air suling. Kemudian slaid dikeringkan perlahan-
lahan dengan api penunu Bunsen supaya bakteria boleh melekat pada permukaan slaid
apabila kering. Proses perlekatan haba perlu dilakukan dengan perlahan-lahan kerana
slaid mudah pecah apabila berlakunya pemanasan yang tidak seragam.
Slaid dititiskan dengan pewarna kristal-violet supaya sel bakteria dapat
diwarnakan. Selepas 1minit, slaid dibilaskan dengan air paip yang mengalir dengan
perlahan. Kemudian iodin dititiskan ke atas sampel bakteria supaya warna biru dapat
menyerap ke dalam lapisan peptidoglikan dalam sel bakteria. Lapisan peptidoglikan
dalam sel bakteria Gram-positif adalah lebih tebal, jadi warna biru kristal-violet lebih
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

mudah terperangkap di dalamnya berbanding bakteria Gram-negatif. Selepas 1minit,

slaid dibilaskan lagi dan etanol dititiskan dengan cepat ke atas slaid dan dicuci segera
dengan air paip yang sedang mengalir. . Kegunaan etanol adalah untuk menghakis warna
biru yang berlebihan daripada sampel. Ia juga menghakis warna biru pada bakteria Gram-
negatif. Tetapi, alkohol tidak boleh dibiarkan terlalu lama kerana alkohol akan menghakis
larutan kristal-ungu yang meliputi sebaran sel Titisan etanol mesti dicuci dengan cepat
supaya warna biru pada sel bakteria Gram-positif tidak turut terhakis. Safarin kemudian
disebarkan ke sampel bakeria. Pewarna ini lebih mudah diserap oleh sel bakteria Gram-
negatif. Ini memberikan warna merah/merah jambu kepada bakteria Gram-negatif.
Di bawah kaca mikroskop, didapati Streptococcus aureus mempunyai sel
berbentuk kokus. Ia berwarna biru, jadi ia adalah bakteria berGram-positif. Bakteria
Escherichia coli pula menunjukkan warna merah dan berbentuk rod apabila di lihat di
bawah mikroskop. Jadi Escherichia coli adalah bakteria Gram-negatif.

d) Asas pengiraan kepekatan (koloni) bakteria

Bahan dan Alat Radas :

1. Sampel bakteria : Escherichia coli
2. Piring agar-agar nutrien
3. Air suling steril
4. Pipet mikro
5. Pipet Pasteur (disposable 50 dropper)

Kaedah :
1. Kalibrasi isipadu pipet Pasteur
a. Kalibrasi dilakukan dengan memindahkan 0.2, 0.5, 0.75 dan 1.0 ml air
dengan mikropipet ke atas kertas turas yang telah ditimbang. Kertas turas
ditimbang semula selepas air meresapi kertas. Nilai jisim air dikira. Langkah
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

diulangi dengan 5, 10, 15 dan 20 titisan air dengan menggunakan pipet

Pasteur. Pengukuran dilakukan 3 kali.
b. Graf jisim air yang diserap melawan isipadu air diplotkan. Daripada graf,
nilai isipadu air yang dititiskan menggunakan pipet Pasteur ditentukan.
c. Analisa statistik ujian T (t-test) dilakukan untuk menentukan kesignifikan
perbezaan di antara kedua kaedah yang dijalankan.
2. Pencairan bersiri sampel bakteria disediakan daripada pencairan 10-1 sehingga
pencairan 10-7.
3. Sampel daripada setiap pencairan dipindahkan dengan menitiskan satu titis
sampel ke atas medium pada jarak 2.5 cm. Setiap titis larutan sampel
dipindahkan ke atas piring agar-agar berasingan. Setiap titis sampel dilakukan
sebanyak 3 kali.Titisan dibiarkan meresap ke dalam agar-agar, sebelum piring
diterbalikkan dan dieramkan pada 30 oC selama 18-24 jam.
4. Koloni yang terbentuk bagi setiap pencairan sampel dikira dan bilangan unit
pembentukan koloni ditentukan dalam sampel bakteria asal.
Bilangan sel bakteia / ml = bilangan koloni x faktor pencairan
Isipadu sampel
Keputusan:

Jadual bacaan mikropipet :

Bacaan Isipadu air(ml) Jisim kertas turas (g) Jisim kertas turas + air (g) Jisim air (g)
1 1.3985 1.7354 0.3367
2 0.25 1.5460 1.7050 0.1590
3 1.5770 1.8130 0.2360
Purata 1.5072 1.7511 0.2439
1 1.4133 1.9461 0.5328
2 0.5 1.5670 1.9990 0.4320
3 1.5530 2.0910 0.5380
Purata 1.5111 2.0120 0.5009
1 1.5250 2.2621 0.7371
2 0.75 1.6540 2.1900 0.5630
3 1.6530 2.6480 0.9950
Purata 1.6107 2.3667 0.7650
1 1.5168 2.4702 0.9534
2 1.00 1.7330 2.8570 1.1240
3 1.1623 2.2763 1.1140
Purata 1.4707 2.5345 1.0638
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Isipadu air(ml) 0 0.25 0.5 0.75 1.00

Jisim air(g) 0 0.2439 0.5009 0.7560 1.0638
ketumpatan air(g/ml) 0 0.9756 1.0018 1.0080 1.0638

Jadual bacan pipet Pasteur :

Bacaan Bilangan titisan Jisim kertas turas (g) Jisim kertas turas + air (g) Jisim air (g)
1 1.4117 1.4800 0.0683
2 5 1.3867 1.4535 0.0668
3 1.3846 1.4508 0.0662
Purata 1.3943 1.4614 0.0671
1 1.3836 1.5682 0.1846
2 10 1.4140 1.5851 0.1711
3 1.3914 1.5523 0.1609
Purata 1.3963 1.5685 0.1722
1 1.3916 1.5905 0.1989
2 15 1.4125 1.6671 0.2546
3 1.3798 1.6320 0.2522
Purata 1.3946 1.6299 0.2352
1 1.4063 1.7076 0.3013
2 20 1.3999 1.6606 0.2607
3 1.3869 1.7669 0.3800
Purata 1.3977 1.7117 0.3140
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Bilangan titisan air Jisim air (g) Isipadu air (ml)

5 0.0671 0.0778
10 0.1722 0.1773
15 0.2352 0.2370
20 0.3140 0.3116

Perbincaangan:

Daripada data-data di atas, graf jisim air yang diserap melawan isipadu air pun dapat
diplotkan. Daripada graf jisim air yang diserap melawan isipadu air yang diplot, isipadu
titisan pipet Pasteur dapat ditentukan.
Dari eksperimen, kami menitis 3 titis larutan pencairan ke atas setiap piring agar-agar.
Daripada graf yang diplotkan, jisim dan isipadu 3 titis air yang dititiskan ditentukan
daripada berikut:
Jisim untuk x titis air = 0.0161x – 0.0038
Isipadu untuk x titis air = (Jisim untuk x titis air + 0.015)/1.0559

Maka, jisim 3 titis air = 0.0161x3 – 0.0038

= 0.0445 g

Isipadu 3 titis air = (0.0445 + 0.015) / 1.0599

 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

=0.0320 ml

Pengiraan koloni:

Diberi bilangan sel bacteria /ml = bilangan koloni x factor pencairan

Isipadu sampel

Bilangan koloni = 22
Bilangan sel bacteria / ml = 22 x 10-6
0.0320
=6.8750 x 10-4 sel / ml

Keputusan :

Pencairan Bilangan Koloni Per Bilangan sel/mL

Titisan
10-1 Terlalu Padat -
10-2 228 71.25
10-3 184 5.75
10-4 102 0.3188
10-5 54 0.0169
10-6 22 6.8750 x 10-4
10-7 13 4.0632 x 10-5

Analisis T-test:

Hipotesis: H0, μ1-μ2=0

H1, μ2 ≠μ2
Ambil kesignifikanan, α =0.05
Ujian statistik :
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

t0 = Z1-Z2
SP(1/N1+1/N2)0.5

H0 akan ditolak jika t0>t0.02513 =3.182 atau t0<-t0.02513 =-3.182

Ambil Zi = purata ketumpatan air bagi kaedah ke-i

Ni = saiz sample bagi kaedah ke-i
Si = sisihan piawai bagi kaedah ke-i

Z1 = (0.9756+1.0018+1.0080+1.0638)/4=1.0123
Z2 = (0.8630+0.9713+0.9926+1.0078)/4=0.9587

S1= {[(0.9756-1.0123)²+(1.0018-1.0123)²+(1.0080-1.0123)²+(1.0638-1.0123)²]/4}0.5
= 0.03212

S2= {[(0.8630-0.9587)²+(0.9713-0.9587)²+(0.9926-0.9587)²+(1.0078-0.9587)²]/4}0.5
= 0.05674

Maka, S p² = [(N1-1)S1²+(N2-1)S2²]/(N1+N2-2)
= [(4-1)(0.03212)2+(4-1)(0.05674)2]/(4+4-2)
= 2.1256 x 10-3

t0 = (Z1-Z2)/(SP[1/N1+1/N2]0.5)
= (1.0123-0.9587)/( 2.1256 x 10-3[1/4+1/4]0.5)
= 35.6614

Boleh dikatakan terdapat perbezaan yang signifikan di antara kedua-duanya. Ini adalah
kerana –3.182 < t0 < 3.182, H0 tidak boleh ditolak.
Tetapi nilai t0 yang didapati adalah di luar lingkungan tersebut. Hal ini berlaku kerana
terdapat ralat yang besar berlaku semasa pencairan dan titisan yang dititiskan di atas
kertas turas adalah tidak konsisten.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Kesimpulan

Kami telah mempelajari teknik pengkulturan mikrob dengan memindahkan

mikrob dari satu medium ke medium yang lain. Kami telah mengkultur mikrob samada
pada medium agar-agar nutrien ataupun dalam kaldu nutrien melalui teknik piawai, iaitu
dengan panggunaan gelung dawai inokulum. Antara mikrob yang kami kultur ialah
Escherichia coli, Basilus subtilis dan Streptococcus aureus. Pemindahkan kultur bakteria
dapat membantu pertumbuhan koloni baru dalam medium pertumbuhan yang sesuai .
teknik pengkulturan bakteria penting untuk memahami ciri-ciri bakteria dan analisis
bakteria pada masa datang.
Pewarnaan Gram juga merupakan salah satu kaedah pengenalpastian jenis
bakteria yang meluas dalam pengenalpastian bakteria yang boleh digunakan di dalam
makmal di mana bentuk, saiz dan warna bakteria dapat ditentukan di bawah mikroskop.
Bakteria berGram positif adalah berwarna biru/ungu manakala bakteria berGram negatif
adalah berwarna merah.
Selain itu, kami mempelajari dua kaedah pengiraan koloni bakteria iaitu teknik
pengiraan koloni berdasarkan Miles dan Misra (1938) (teknik yang masih digunakan
pada masa sekarang) dan kalibrasi isipadu pipet Pasteur di mana pencairan mikrob
dilakukan. Setelah ujian T-test dijalankan, didapati bahawa kaedah-kaedah yang berbeza
ini memberikan perbezaan yang bererti dari segi hasil yang diperolehi
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Abstrak

Ujikaji Penghayatan sel-sel mikrobiologi dan konsep aseptic diadakan adalah

supaya pelajar menghayati kepentingan aseptic dalam pengendalian mikroorganisma dan
pengkulturan sel mikrobiologi. Kaedah- kaedah untuk mengenalpasti bakteria melalui
pewarnaan Gram dan kaedah-kaedah untuk mengira koloni-koloni bakteria juga
dipelajari. Dalam ujikaji ini, kami mempelajari teknik-teknik yang betul dalam
menjalankan eksperimen biologi adan biokimia.
Dalam bahagian pertama, kepentingan teknik aseptic dijalankan untuk melihat
hasil pengkulturan bakteria daripada keadaan keadaan yang ditetapkan. Perubahan yang
berlaku ke atas agar-agar dalam piring petri sebelum dan selepas didedahkan kepada
persekitaran yang berlainan telah membuktikan mikrob wujud di persekitaran kita.
Keputusan ujikaji ini menunjukkan betapa pentingnya teknik aseptic dalam kehidupan
kita. Kami juga telah belajar untuk membezakan bakteria mengikut warna, tekstur,saiz,
bentuk, elevasi dan bilangan koloni.
Dalam bahagian kedua, kami perlu memindahkan kultur mikrob dari piring agar-
agar ke dua medium yang berlainan iaitu, kepada agar-agar nutrien yang baru dan ke
kaldu nutrien. Selain itu, kami mempelajari cara-cara untuk mengenalpasti sesuatu
bakteria melalui teknik pewarnaan Gram ke atas mikrob-mikrob. Kemudian, mikrob-
mikrob diletakkan di bawah mikroskop supaya lebih mudah untuk dilihat dan dicamkan
kerana mikrob-mikrob ini telah diwarnakan. Teknik ini digunakan untuk membezakan
bakteria berGram positif dan yang berGram negatif. Bakteria yang berGram positif
adalah bewarna biru dan yang berGram negatif berwarna merah jambu. Bakteria yang
digunakan adalah bakteria Escherichia coli dan Streptococcus aureus.
 KB2333 Asas Kejuruteraan Biokimia

Pada bahagian yang terakhir pula, kami mempelajari cara pengiraan koloni-koloni
mikrob. Ujian T-test akan dijalankan dan akan menunjukkan bahawa kaedah untuk
mengira koloni mikrob adalah berbeza.
Kesimpulannya, eksperimen yang dijalankan adalah berjaya.