Cố định Enzyme

Mục đích: Làm cho enzyme bền với nhiệt hơn , có thể bất hoạt nhanh và khả năng tái
sử dụng.
1. Cố định Enzyme lên chất mang chitosan
Nguyên liệu:
 Chitosan
 Hexane
 Dung dịch enzyme
Cách tiến hành:
 Cho 0,2g chitosan vào hexane dư, khuấy 100 vòng/phút trong 1 giờ. Sau đó để
khô tự nhiên nhằm loại hexan dư.
 Cho 30 ml dung dịch enzyme vào hỗn hợp trên, khuấy trong 3 giờ ở nhiệt độ
phòng.
 Loại lấy phần rắn, rửa bằng hexan.
 Ngâm trong đệm phosphate để bảo quản enzyme.
2. Cố định enzyme lên chất mang alginate
Nguyên liệu
 Dung dịch Na-alginate (2% w/v).
 Dung dịch CaCl2 (1% w/v)
 Dung dịch enzyme (30 mg/ml)
 Nước cất
Cách tiến hành
 Trộn dung dịch enzyme với dung dịch Na-alginate khuấy trộn đều.
 Nhỏ hỗn hợp trên vào dung dịch CaCl2, khuấy trong 3 giờ ở nhiệt độ phòng.
 Lọc lấy phần rắn, rửa bằng nước cất.
 Ngâm trong đệm phosphate để bảo quản enzyme.
3. Cố định enzyme lên chất mang alginate/glutaraldehyd
Nguyên liệu
 Dung dịch glutaraldehyd (0.2%).
 Gel natri aginate (4%).
  Dung dịch CaCl2 ( 0.1M)
 Natri citrat ( 0.1M, pH 4.8)
Cách tiến hành
 Trộn 0.5ml glutaraldehyd 0.2% + 10ml natri aginate 0.1M + enzyme.
 Khuấy ở tốc độ 120 vòng/phút trong 30 phút. Tiêm hỗn hợp vào canxiclorua
0.1M để tạo hạt gel.
 Rửa bằng nước và natri citrat để loại bỏ enzyme tự do.
 ủ hạt trong dung dịch glutaraldehyd 0.2% trong 2 giờ và chuyển vào dung dịch
canxi clorua 0.1M trước khi sử dụng.
4. Cố định Enzyme trên vật liệu Nano ZnO
Nguyên liệu
 Thanh Nano ZnO
 Enzyme
 Đệm phosphats 0.1mM (PBS)
 Glutaraldehyd (2.5%) (GA)
Cách tiến hành
Tạo thanh Nano ZnO (hình 1).

Hình 1: Quy trình tạo thanh nano

Dung dịch 1: Hòa tan Glutaraldehyd (2.5%) trong dung dịch phosphate 0.1mM để tạo
thàng dung dịch GA/PBS.
Dung dịch 2: Enzyme hòa tan trong dung dịch PBS để tạo dung dịch enzyme/PBS.
Trộn DD1 và DD2 theo tỉ lệ 2:1 tạo hành DD3
Ngâm mẫu ZnO trong DD3 ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ 30 phút.

Hình 2: Sơ đồ tóm tắt quá trình cố định enzyme

Việc hiệu suất cố định lipase trong Na -alginate cao hơn là do enzyme bị nhốt vào
mạng gel. Trong khi đối với chitosan, enzyme lại được hấp phụ lên bề mặt chất mang.
Nhờ được bảo vệ trong mạng gel nên enzymme tự do khó thoát ra khỏi môi trường
trong quá trình khuấy trộn cũng như rửa enzyme cố định.
Cố định enzyme trên vật liệu nano thì không thích hợp cho nghiên cứu ở PTN.
Giữa 2 phương pháp cố định enzyme lên chất mang alginate và Cố định enzyme lên
chất mang alginate/glutaraldehyd thì cần xác định hoạt tính enzyme để chọn phương
pháp phù hợp.