Sac Ky Ion PDF

ĐẠI CƯƠNG SẮC KÝ ION
GIỚI THIỆU HỆ THỐNG IC DIONEX

ỨNG DỤNG TRÊN MÁY IC
Người trình bày :

ThS. Phan Bích Hà
Cn. Nguyễn Thị Hà Linh
KHOA XÉT NGHIỆM

ĐẠI CƯƠNG SẮC KÝ ION
GIỚI THIỆU HỆ THỐNG IC DIONEX
ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 2

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ
1903 Tswett (1872–1919) công bố tách

được các chất màu trong cây cỏ.
CHROMATOGRAPHY

Phân tích sắc ký
Nguyên lý cơ bản
- Sắc ký là kỹ thuật tách các cấu tử ra khỏi
hỗn hợp dựa trên ái lực khác nhau của
mỗi cấu tử đối pha tĩnh và pha động
+ pha tĩnh: có tác dụng giữ cấu tử cần tách
(lớp chất cố định)
+ pha động: có tác dụng kéo cấu tử cần
tách ra khỏi cột (chất lỏng, khí)

PPPT sắc ký
+ khả năng phân tách cao, có thể tách

những chất rất giống nhau về mặt hóa học
lẫn vật lý
+ là 1 trong những PPPT mạnh nhất

Phân loại sắc ký theo bản chất của 2 pha sử
dụng
Pha Pha tĩnh Tên gọi của kỹ Ứng dụng
động thuật sắc ký
Chất rắn Sắc ký lỏng - rắn Sắc ký cột, sắc ký

lớp mỏng, sắc ký
Chất
lỏng cao áp
lỏng
Chất lỏng Sắc ký lỏng - lỏng Sắc ký lỏng cao áp
Chất rắn Sắc ký khí - rắn

Chất khí Sắc ký khí
Chất lỏng Sắc ký khí - lỏng

Phân loại sắc ký theo cấu hình
Hình học Cấu hình sắc ký Chiều di chuyển của pha động
Giấy Đi lên, đi xuống, từ tâm lan toả tròn
Phẳng Lớp mỏng Đi lên, đi xuống, từ tâm lan toả tròn
Cột hở Đi xuống
Cột Sắc ký khí Nhờ vào ngoại lực

Sắc ký lỏng cao áp Nhờ vào ngoại lực

Cột sắc ký

Thứ tự ra khỏi cột
• Hợp chất có ái lực nhiều với pha động thì có xu
hướng ra khỏi cột trước
• Hợp chất có ái lực nhiều với pha tĩnh thì bị giữ
lại lâu hơn trong cột và ra sau

Sắc ký đồ

SẮC KÝ ION
A special application of HPLC
1975

So sánh với HPLC
HPLC IC - CD
Đối tượng Phân tử Ion (chủ yếu
trung hòa anion)
Pha động Hỗn hợp Dung dịch
dung môi Ion
Thể tích chết ngoài cột Nhỏ hơn Lớn hơn
Đường kính, chiều dài, Nhỏ hơn Lớn hơn
cỡ hạt của cột
Chiều rộng mũi sắc ký Nhỏ hơn Lớn hơn
ĐỊNH NGHĨA
• Sắc ký ion là kỹ thuật tách các cấu tử
anion hay cation từ hỗn hợp qua cột sắc
ký dựa trên ái lực khác nhau của mỗi ion
đối với pha tĩnh và pha động.
– Ion càng bị giữ mạnh bởi pha tĩnh thì càng ra

trễ.
– Gradient : tăng nồng đô/điện tích của eluent.

Nguyên lý
• Sắc ký ion tách các ion và phân tử phân
cực dựa trên điện tích của chúng.
– IC-CD : Phát hiện ion chủ yếu dựa trên độ

dẫn điện
– Dung dịch ion có tính dẫn điện nên khi sử
dụng CD cần khử nền.

Thành phần cơ bản của sắc kí ion

SƠ ĐỒ THIẾT BỊ SẮC KÝ ION

Ion Chromatography
HCO3-/CO32- Eluent
Eluant
0.0028M NaHCO 3
0.0022M Na CO 2 3
~2 ml/min flow
Sample Loop 500 - 5,000 psi

Pump 1,000 nominal
50 ul Check for air bubbles
Sample
Inject Valve
Sample in Syringe
or from Autosampler
Waste
Guard Column
PO 43-
SO 4= Separator Column
-
NO 3- RNR +
3 HCO 3 + Cl - RNR +
3 Cl - + HCO 3-
2RNR +
3 CO =3 + SO 4= 2RNR +
3 SO 4= + CO =3
Cl -
"R" = latex resin particle
Chromatogram
Cation Exchange
Membrane
O2
HCO -3 Na +
H2 Self Regenerating - Cl
- NO -3 SO 4= PO 43-
-- Anion Suppressor F
+ Na +
+ --
Cation Exchange
H+ OH - +
Membrane
- -
Conductivity (uS)
-
Cathode
+ water dip
Anode
H 2O H 2CO 3 H 2O time
Computer/Integrator
Conductivity Detector

Ion Chromatography
OH - Eluent
Degas Degas
Eluant Eluant
40 mM
DI Water NaOH
Sample Loop 500 - 5,000 psi

Quaternary
100 ml Pump 1,650 psi nominal
Sample
Inject Valve
Sample in Syringe
or from Autosampler
Waste
Guard Column
PO43-
SO42- Separator Column
NO3- RNR +
3 OH- + Cl - RNR +
3 Cl - + OH-
2RNR + 2(OH-) + SO42- 2RNR + SO42- + 2OH-

3 3
Cl-
"R" = latex resin particle
Conductivity (mS)
Chromatogram
Cation Exchange
Membrane
OH- Na+ Self Regenerating Cl- NO3- SO42-

O2 H2 PO43-
Anion Suppressor F-
+ Na+ --
+ --
Cation Exchange
H+ OH- +
CO32-
Membrane
- -
-
Cathode
+
Anode
H2 O H2 O H2 O time
Computer/Integrator

Pump Mode Degas Mode
He Gas He Gas
To Pump To Pump
Eluent
Eluent

Non-Suppressed IC
Conductivity (mS)
time
Suppressed IC
Conductivity (mS)
time

Hệ thống sắc ký ion Metrohm IC850

Hệ thống sắc ký ion Shimadzu

Hệ thống sắc ký ion Dionex 3000

Sắc ký ion Dionex 3000 tại Viện

CÁC BỘ PHẬN

CÁC BỘ PHẬN
• Bơm SP : Single pump
• EGC : Eluent genarator cartridges RFIC Reagent
Free Ion Chromatography
– CT-RC : Continously Regenerated Trap Column
• Injector : AS-AP
• DC : Detector/Chromatography: Separation (Guard
column, column); detection(CD và ED); automation
– ASRS : Anion Self-Regenerating Suppressor
• Hệ xử lý dữ liệu
PHÂN LOẠI SẮC KÝ ION
• Sắc ký trao đổi ion. (Ion exchange)
• Sắc ký ghép cặp ion. (Ion pair)
–Không sử dụng đầu dò độ dẫn
• Sắc ký đuổi ion. (Ion exclusion)
–Ứng dụng cho acid hữu cơ

Sắc ký ghép cặp ion
• Sử dụng cột sắc ký lỏng pha đảo với đầu dò
thường

Sắc ký loại ion
• Phân tích acid và baz yếu
R-COOH  RCOO- + H+
• Sự lưu giữ phụ thuộc
– Kích cỡ của R.
– Tương tác của R với chất nền pha tĩnh.
– pKa
• R tương tác với eluent và chất nền pha tĩnh

Size exclusion chromatography
Phân
biệt

Ion exclusion chromatography
• Pha tĩnh trao đổi cation có các nhóm SO3H. Pha động có
nước làm pha tĩnh bị hidrat hóa. Lớp nước hidrat hóa tạo
màng đặc biệt gọi là màng Donnan, mang điện tích âm chỉ
cho qua các phân tử trung hòa về mặt điện tích.
• Các acid hữu cơ không phân ly, có thể được lưu giữ trên pha
tĩnh, khi phân ly sẽ bị loại ra và sẽ rửa giải theo pha động
Sắc ký trao đổi ion

Cơ chế trao đổi ion
The cation
exchange
mechanism
The anion
exchange
mechanism
CÁC ĐẠI LƯỢNG TRONG SẮC KÝ ION
• Tương tự như trong HPLC
• Ba đại lượng liên quan đến độ phân giải R :
– Hệ số lưu giữ : không nên lớn quá.
– Số đĩa lý thuyết N : tương đối lớn.
– Độ chọn lọc : không bị ảnh hưởng nhiều bởi các
thông số pha động mà chịu ảnh hưởng do pha
tĩnh.

Retention time – Thời gian lưu
Dùng để định tính

Retention time – Ion phân tích
• Charge = valency – điện tích ion

• Size - Kích thước
• Polarizability – khả năng phân cực của ion

Điện tích ion

Điện tích ion

Kích thước

Kích thước

Kích thước

Khả năng phân cực của ion



Retention time
• Nồng độ pha động
• Nhiệt độ cột
• pH của pha động

QUÁ TRÌNH PHÂN TÍCH MẪU BẰNG IC

Ion chromatography system configuration

Dionex - Ion Chromatography Product Line

RFIC (Reagent free Ion
chromatography) system - DIONEX

Bơm (Pump)
Bền hơn PEEK (Polyether ether ketone)
P(IC) < P(HPLC)
SP Single Pump DP Dual Pump

BỘ TẠO PHA RỬA GIẢI EGC
Sử dụng
điện
phân để
tạo pha
động
nồng độ
chính
xác
BỘ TẠO PHA RỬA GIẢI
EGC (phân tích Anion)

EGC (phân tích Cation)

EGC (phân tích Anion)

EPM (Electrolytic pH Modifier)

CR-TC
Continously Regenerated Trap Column

CR-ATC

CR-CTC


Injector

Injector

AUTOSAMPLER


DC MODULE

SEPARATION

Column Material
Composition of the stationary phase
Substrate: substrate / resin carrier
• Polystyrene / divinylbenzene spacer group
• Polymethacrylate functional group
• Polyvinylalcohol
• Silica gel
• Hydroxyethylmethacrylate (HEMA)
Spacer
• Alkyl chain Cation exchanger Anion exchanger
• sulfonates • quaternary
• carboxylates ammonium groups
• alkyl amines
• hydroxy-alkylamines

The stationary phase

Column Material
ion exchangers for IC
silica gels polymer resins
polymer coated surface microporous macroporous

functionalized
Metrosep C 4 polymer coated surface functionalized

Metrosep C 2
layer latex MA
PS/DVB PVA
particles
DIONEX A Supp 10 A Supp 4

A Supp 15 &16 A Supp 5

Cấu trúc nhựa latex

OH- OH-
Latex OSO3- +H N
NH3+
SO42-
3
Bead NH3+
Cl-
OH-

DETECTOR

DETECTOR

SRS 300 Self-Regenerating Suppressor

SRS 300 Self-Regenerating Suppressor

Các loại khác

The assembly of key SRS components

The electrolytic suppression processes in the ASRS

Self Regenerating Anion Suppressor
From Separator Column
-
HCO3 Na+
Membrane
Membrane
O2 O2
+ Na+
+ - -
H +
OH- +
Cathode
Anode
Cation Exchange
Cation Exchange
- -
+
-
H2O H2 CO3 H2O

~ pH 10
OH- Na+
NO3- H2
O2
Cation Exchange
Membrane
+ Na+
-
-
+ - +
Cation Exchange
H+ - OH-
Membrane
- -
-
+ H+
Cathode
NO3-
Anode
H2O H2O H2O
~ pH 3

TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp
cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất bản Đại học
Quốc gia TP. Hồ Chí Minh, TP. Hồ Chí Minh
2. Tổng hợp các tài liệu của Dionex

ỨNG DỤNG TRÊN MÁY IC
Trình bày: Cn. Nguyễn Thị Hà Linh

Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM
Phân tích trên mẫu nước
Phân tích các anion
• Column: ionpac As22 ( 4x250mm),

ionpac AG22 ( 4x250mm);
• Eluent: 4.5mmol/L Na2CO3; 1.4mmol/L
NaHCO3
• Flow rate: 1.2 mL/min
• Injection volume: 2.5µL
• SRS suppressor: ASRS 300(2mm)
• Background: 20-23µL
• Column: ionpac As22 ( 4x250mm),

ionpac AG22 ( 4x250mm);
• Eluent: 4.5mmol/L Na2CO3; 1.4mmol/L
NaHCO3
• Flow rate: 1.2 mL/min
• Injection volume: 10µL
• SRS suppressor: asrs 300(4mm)
• Background: 20-23µL
><
• Column: AS23, AG23 Peak ppb

• Eluent: 4.5mmol/L Na2CO3; 1.0mmol/L NaHCO3 • Fluoride 10
• Flow rate: 1.0 mL/min • Chlorite 10
• Detection: suppressed conductivity with CRD-300 • Bromate 5
• Scrubber: 0.5 mol/L KOH • Chloride 100
• Background: < 1.0µL
• Chlorate 10
• Bromide 500
• Nitrate 500
• Sulfate 100
Phân tích cation
Phân tích cation
Phân tích trên mẫu thực phẩm
Phân tích trên mẫu thực phẩm
Phân tích Phương pháp trên IC
Anion vô cơ HPIC/ Suppressed Conductivitty, DC Amperometry, UV/Vis
Kim loại kiềm thổ HPIC/ Suppressed Conductivity

Acid hữu cơ HPIC/ Suppressed Conductivity; HPICE/ Suppressed
Conductivity
Amine béo HPIC/ Suppressed Conductivity/ Pulsed Amperometry
Carbohydrates HPIC/ Pulsed Amperometry
Alcolhols/ aldehydes HPICE/ Pulsed Amperometry
Amino acids HPIC/ Pulsed Amperometry
Phân tích NO2-, NO3- trong thịt
Phân tích iodide trong sữa bột
Phân tích polyphosphates trong
phomai
Anion trong trà
• Column: ionpac
AS19(0.4x250mm and
AG19(0.4x50mm)
• Eluent: KOH(EG)
• Flow rate: 10µL/min
• Inj.volume: 0.4µL
• Detection: suppressed
conductivity
Phân tích phosphate và citrate trong
nước ngọt
Phân tích chất hữu cơ trong nước
Phân tích đường
Phân tích đường monosaccharides
trong càphê hòa tan
ỨNG DỤNG TRÊN IC

Sac Ky Ion PDF

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Sac Ky Ion PDF

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

ĐẠI CƯƠNG SẮC KÝ ION

GIỚI THIỆU HỆ THỐNG IC DIONEX

Người trình bày :

KHOA XÉT NGHIỆM

GIỚI THIỆU HỆ THỐNG IC DIONEX

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 2

1903 Tswett (1872–1919) công bố tách

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 3

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 4

+ khả năng phân tách cao, có thể tách

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 5

Chất rắn Sắc ký lỏng - rắn Sắc ký cột, sắc ký

Chất rắn Sắc ký khí - rắn

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 7

Giấy Đi lên, đi xuống, từ tâm lan toả tròn

Phẳng Lớp mỏng Đi lên, đi xuống, từ tâm lan toả tròn

Cột Sắc ký khí Nhờ vào ngoại lực

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 8

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 9

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 10

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 11

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 12

– Ion càng bị giữ mạnh bởi pha tĩnh thì càng ra

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 15

– IC-CD : Phát hiện ion chủ yếu dựa trên độ

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 16

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 17

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 18

Sample Loop 500 - 5,000 psi

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 19

Sample Loop 500 - 5,000 psi

2RNR + 2(OH-) + SO42- 2RNR + SO42- + 2OH-

OH- Na+ Self Regenerating Cl- NO3- SO42-

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 20

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 21

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 22

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 23

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 24

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 25

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 26

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 27

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 29

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 30

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 31

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 32

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 34

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 36

Dùng để định tính

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 37

• Charge = valency – điện tích ion

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 39

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 40

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 41

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 42

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 43

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 44

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 45

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 46

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 47

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 48

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 52

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 55

ThS. Phan Bích Hà Khoa Xét Nghiệm - Viện VSYTCC TP.HCM 56