PITANJA IZ MIKRO ZA KOLOKVIJ -SEPTEMBARSKI ROK

1. Koje se difuzijske metode upotrebljavaju u ispitivanju djelotvornosti

pojedinih antibiotika i ukratko opisati osnovne principe određivanja
osjetljivosti m.o. upotrebom ovih metoda.

METODA BUSENJA CVSTE PODLOGE

a. Na čvrstu podlogu se mogu staviti mali cilindri ili se u čvrstoj
podlozi mogu izbušiti udubljenja radi zadržavanja specifične količine
odabranog antibiotika.
b. Petrijeve zdjelice sadrže čvrstu podlogu nacjepljenu s test -
mikroorganizmom. U podlogu su urezane tri udubine i u njih su unesene
odabrane količine istraživanog antimikrobnog agensa.
c. Ako je istraživani agenas djelatvoran prema test - organizmu,
pojavljuju se tri zone inhibicije, a ako nije djelatvoran, izostaju zone
inhibicije oko test – organizma.

DISKOVI OD FILTAR PAPIRA

- vrlo prihvatljivi za istraživanja utjecaja koncentracije hemijskih agenasa

na rast mikroorganizama
- 1947. godine - A. Bondi
Na veličinu zone antibakterijskog djelovanja mogu utjecati ovi faktori:
 dubina upotrebljene podloge,
 izbor podloge,
 količina inokuluma i
 stepen difuzije pojedinog antibiotika.
• JEDNOSTRUKA METODA
- upotrebljava se po jedan disk za visoku i nisku koncentraciju antibitika
• - određivanje relativne osjetljivosti organizma na hemijsku tvar zahtijeva
interpretaciju veličine zone inhibicije.

DVOSTRUKA METODA

- interakcija jednostavnjija
- visoka i niska koncentracija primijenjene su za svaki antibiotik koji se
testira
- ako se pojavi prozirna zona oko oba diska organizam se opisuje kao
osjetljiv
- ako se prozirna zona pojavi samo oko diska na kojemu se nalazi visoka
koncentracija opisuje se organizam kao osjetljiv
 K-B

1960. godine prvi put se primjenjuje s Muller-Hintonovim agarom u

Petrijevim zdjelicama.
Metoda je prikladna za određivanje patogenih bakterija koje izuzetno brzo
rastu, kao što su stafilokoki i Pseudomonas sp.
Ostale jednostruku ili dvostruke disk metode mogu se primjeniti za najveći
broj baketerijskih vrsta.

2. Šta podrazumjevamo pod lančanom reakcijom polimeraze-PCR

reakcijama

Lančana reakcija polimeraze (PCR)

U PCR tehnologiji specijalne DNA sekvencije su otkrivene I umnožene in-
vitro. Mali ali specifični DNA prajmeri su dodati u oslobođenu I
denaturisanu ciljanu DNA uzorka. Ako se ovi prajmeri sastave sa
komplementarnom sekvencijom nukleinskih kiselina I baza, oni će se
križati. Nakon toga, termostabilna DNA polimeraza će produžiti prajmere u
skladu sa komplementarnom sekvencijom baze date od strane ciljane
DNA. Ovaj ciklični proces se obično ponavlja oko 30 puta, povećavajući
ciljanu DNA.

3. Koje informacije treba da sadržavaju mikrobiološki kriteriji za hranu

Spisak značajnih mikroorganizama i/ ili toksina

Plan uzorkovanja
Granične vrijednosti
Broj uzoraka koji moraju da zadovolje postavljene granične vrijednosti
Laboratorijske metode za njihovu detekciju i kvantifikaciju
Fazu u kojoj se kriterijum primjenjuje

4. Šta se podrazumjeva pod dvoklasnim planom uzorkovanja, a šta pod

troklasnim? Objasni principe upotrebe troklasnog plana uzorkovanja

Patogeni mikroorganizmi ne smiju biti prisutni u određenoj količini hrane.

Za dokazivanje se koristi dvoklasni plan uzorkovanja, gdje se dobijeni
rezultati uzorkovanja iskazuju kao dokazano je prisustvo mikroorganizma
(neprihvatljivost) ili nije dokazano prisustvo ispitivanog mikroorganizma
(prihvatljivost). Dvoklasni plan je jako krut.
(n) =Broj uzoraka (jedinca koje se analiziraju)
(m)=Broj mikroorganizama izražen na gram ili mililitar uzorka, iznad kojeg
se uzorak smatra neispravnim (potencijalno neprihvatljivim)
 (c)=Maksimalno dozvoljeni broj uzoraka u jednoj poizvodnoj liniji sa
brojem miroorganizama iznad “m”

Troklasni plan prihvata proporciju jedinica uzorkovanja čiji su rezultati

ispitivanja između nedvosmislene prihvatljivosti i neprihvatljivosti
(n) =Broj uzoraka (jedinca koje se analiziraju)
(m)=Granična vrijednost za broj bakterija tj. broj bakterija koji odvaja dobar
kvalitet, broj iznad kojeg se uzorci smatraju potencijalno neprihvatljivim
(M) =Maksimalna vrijednost broja bakterija iznad koje se uzorci smatraju
mikrobiološki neispravnim
Broj uzoraka u kojima broj bakterija može biti veći od m , a manji od M tj.
unutar graničnih vrijednosti-označava se sa (c).
Rezultat je zadovoljavajući ako je broj mikroorganizama ispod
granične vrijednosti.

5. Zašto se koriste D i z-vrijednosti, objasni

D vrijednost. To je vrijeme decimalne redukcije, ili vrijeme potrebno da se

uništi 90 % prisutnih organizama. Ova vrijednost je brojčano jednaka broju
minuta koje su potrebne da krivulja preživljavanja pređe jedan
logaritamski krug. Matematički, to je jednako recipročnom opadanju krive
preživljavanja, a mjeri se stepenom uništavanja odnosno ubijanja
organizama. Ukoliko se D određuje na 250°F = 121,1°C , izražava se D r.
Efekat pH na D vrijednost kod sojeva C. botulinum varira.

z vrijednost. Odnosi se na stepene Farenheita koji su potrebni da kriva
termalnog uništavanja pređe logaritamski krug. Matematički, ova
vrijednost je jednaka recipročnom obaranju krivulje vremena termičkog
ubijanja- TDT, gdje D pokazuje rezistentnost određenog organizma pri
specifičnoj temperaturi, a z uključuje informacije o relativnoj rezistentnosti
tog organizma na različitim tmperaturnim vrijednostima: to dopušta
preračunavanje ekvivalentnosti termalnog procesa na različitim
temperaturama. Ako, npr. 3.5 minuta na 60 °C se smatra adekvatnim
procesom, gdje je z =8,0, ili 0,35 minuta na 64,4°C ili 35 minuta na
55,5°C mogli bi se smatrati jednakim procesima s obzirom na ishod.

6. koji antibiotici inhibiraju sitezu stanične stjenke

Penicilin i neki drugi antibiotici sprječavaju sintezu peptidoglikana,
posljedica toga je slabljenje stanične stjenke i liza stanice. Na penicilin su
osjetljive samo stanice u rastu, jer djeluje na proces sinteze stanične
stijenke.
7. antibiotici u probavnom sistemu čovjeka,uloga.

liječenja infekcija uzrokovanih mikroorganizmima (gonoreje, antraksa,

meningitisa, sifilisa...)

8. šta se podrazumjeva pod 12-D konceptom

12-D koncept se odnosi na proces tražene dužine uništavanja, što se

odnosi na industriju konzervi i podrazumijava minimalni proces
zagrijavanja koji bi mogao reducirati vjerovatnost preživljavanja većine
rezistentnih spora sojeva C. botulinum na 1012. Zato što spore C.
botulinum ne prelaze u vegetativni oblik i ne proizvode toksine na pH
ispod 4.6, ovaj koncept se razmatra samo za hranu iznad ove pH
vrijednosti

9. koji se m.o. smatraju najrezistentnijim m.o. u hrani i zbog čega

Sclerotia je najrezistentnija plijesan i ukoliko preživi izlaganje visokim

temperaturama uzrokuje probleme kod konzerviranog voća.

10. uticaj medija na termičku tačku uništavanja soja Escherichia coli

11. uticaj broja spora sojeva Clostridium botulinum na vrijeme termičke smrti
na 100ºC.
12. Biohemijski testovi za identifikaciju bakterija

To je to,jedno pitanje fali.. 