ANALISIS KUANTITATIF

FRAKSI-FRAKSI PROTEIN
DALAM PLASMA

Praktikum 2 Blok 3
PRODI FARMASI
FKIK UMY
Siti Rahayu, S.Farm., Apt.
Tujuan Praktikum
Mahasiswa mampu melakukan analisis
kuantitatif terhadap fraksi-fraksi protein
dalam plasma (fibrinogen, globulin, albumin)
 Komponen Darah

Protein 7% Albumin
58%

Globulin
Air 91% 38%
Plasma 55%

Fibrinogen
Sel-sel 4%
darah 45%
Lain-lain 2%
 Protein

Protein
Asam amino
Ikatan peptida
 Metode Biuret
>> Menguji adanya ikatan peptida
Prinsip: Senyawa dengan dua atau lebih ikatan peptida
akan membentuk ikatan kompleks berwarna ungu dengan
garam Cu dalam suasana basa

Kompleks ikatan berwarna ungu

 Alat dan Bahan
Alat Bahan
• Spektrofotometer • Plasma
• Centrifuge • Lar. Na2SO3 12%, 15%
• Kuvet dan 20%
• Tabung centrifuge • Lar. NaOH 1 N
• Tabung reaksi • Reagen Biuret
• dll • Lar. Standard albumin
 Cara Kerja
Isilah 3 tabung centrifuge @0,5 mL plasma

Tab I Tab II Tab III

+ 9,5 mL + 9,5 mL + 9,5 mL

lar Na2SO3 12% lar Na2SO3 15% lar Na2SO3 20%

Campur baik-baik, diamkan 15 menit pada suhu kamar

Pusingkan dengan centrifuge kec 3000 rpm selama 10 menit

Buang supernatan Tab I & II,

Simpan supernatan Tab III  analisis kuantitatif albumin

Keringkan endapan ketiga tabung dengan menelungkupkan

pada kertas saring

Masukkan ke dalam tiap tabung @2 mL NaOH utk melarutkan endapan

 Siapkan 3 tabung reaksi (Tab IV, V, & VI)

+ 2 mL + 2 mL + 2 mL
lar NaOH 1 N lar standard albumin Supernatan tab III

Tab IV Tab V
Tab VI
(blanko) (standard)
 + @3 mL reagen Biuret ke dalam keenam tabung

Tab I Tab II Tab III Tab IV Tab V Tab VI

Campur baik-baik. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 37oC

Baca absorbansi tiap larutan pada λ = 540 nm

 Pengamatan & Perhitungan
Tabung Absorbansi Kadar protein Keterangan
I Asp I Fibrinogen

II Asp II Fibrinogen + globulin α

III Asp III Fibrinogen + globulin (αβγ)

IV Abl - Blanko (NaOH 1 N)

V Ast 5% Standar albumin

VI Asp VI Albumin sampel

𝐴𝑠𝑝 −𝐴𝑏𝑙
Kadar protein = x Cst x P
𝐴𝑠𝑡 −𝐴𝑏𝑙
Pengenceran sampel (P):
Kadar fibrinogen = tabung I Tabung I, II dan III = 4x
Kadar albumin = tabung VI Tabung IV = 20x
Kadar globulin alfa = selisih kadar protein tabung II dan I
Kadar globulin beta + gama = selisih kadar protein tabung III dan II
Kadar globulin = selisih kadar protein tabung III dan I atau
kadar globulin alfa + globlin beta + gama
 Pembahasan (Laporan)
• Protein plasma (fungsi, fraksi protein)
• Prinsip analisis kuantitatif fraksi protein
(Metode, Reaksi, dsb)
• Cara kerja dengan penjelasan
• Hasil & Analisis dibandingkan dengan teori
(albumin>globulin>fibrinogen)