Suha kemija

izr. prof. dr. Barbara Ostanek

Doc. dr. Tanja Gmeiner

Uvod

 “suha kemija” je prevod “DRY CHEMISTRY”

 Izraz ni pravilen, ker je za kemijsko reakcijo potrebna
voda
 Definicija: tehnologija določanja analitov, kjer so
reagenti v predpisani koncentraciji vezani v suhi
obliki na posebnih nosilcih
 Reakcija poteče, ko se reagenti raztopijo s pomočjo
vode iz vzorca
 Že leta 1946 testni trakovi za urinsko analizo

1
Izvedbe suhe kemije

 Ročne izvedbe
 Avtomatizirane izvedbe
 Sistemi VITROS (Ortho Clinical Diagnostics)
 Sistemi REFLOTRON (Roche)

Rezultati lahko:
 kvalitativni (DA/NE)
 semikvantitativni (območja glede na skalo)
 kvantitativni (mmol/L...)

Sistemi VITROS

 Za kvantitativno analizo številnih analitov

 Leta 1978 podjetje Kodak prvič predstavilo večplastno reagenčno
ploščico za določanje glukoze in sečnine
 Različne ploščice za različne analite

 Glede na princip merjenja:

1. Reagenčna ploščica za kolorimetrično merjenje
2. Reagenčna ploščica za potenciometrično merjenje

 Za analizo 10-11 L vzorca (serum, plazma, urin, likvor)

2
 Porazdelitvena plast

Reagenčna plast

Polprepustna membrana
Indikatorska plast

Nosilna plast

Reagenčna ploščica za določanje sečnine

Reagenčna ploščica za kolorimetrično

merjenje (1)
Sestavljena iz najmanj 3-eh plasti:
 Porazdelitvena plast
 Celulozni acetat z vgrajenim TiO2 ali BaSO4
 Deluje kot optični odbojnik
 Zadrži visokomolekularne snovi (proteine, kromogene), da ne
interferirajo- ultrafiltracija
 Lahko vsebuje tudi reagente za cepitev visokomolekularnih snovi in tako
omogoči njihovo penetracijo (BLRtot)

 Reagenčna plast
 Reagenti v matriksu iz želatine ali agaroze
 Lahko več reagenčnih plasti ena nad drugo
 Nastali obarvan produkt izmerimo reflektometrično

3
Reagenčna ploščica za kolorimetrično
merjenje (2)
 Nosilna plast
 Prozorni poliesterski material
 Reflektometrična meritev poteka s te strani reagenčne ploščice
 Dodatno lahko indikatorska plast in polprepustna membrana
 Vse plasti naložene druga na drugo so ovite v okvir iz plastike

 Za merjenje lahko: metoda končne točke, metoda 2, kinetična

metoda z 2 ali več točkami, imunokinetična metoda

 v ploščico lahko vključimo Pt

Primer reagenčne ploščice z vgrajenimi Pt

4
Vir: https://www.orthoclinical.com/en-in/solutions-products/technologies/advancing-dry-technologies

Reagenčna ploščica za
potenciometrično merjenje (1)
 Za določanje Na, K, Cl, CO2
 Povsem drugačna sestava reagenčne ploščice
 Merimo razliko potenciala med referenčno in
indikatorsko ionsko selektivno elektrodo
 Gre za direktno potenciometrijo (aktivnost ionov)

5
Reagenčna ploščica za elektrolite

Refleksijska fotometrija- reflektometrija (1)

 Za kvantifikacijo analitov, kjer nastane obarvan produkt

 Uporabljamo reflektometer

kot 45 

 Podobna sestava kot enožarkovni spektrofotometer

6
Refleksijska fotometrija- reflektometrija (2)

 Pri obsevanju ploščice pride do zrcalnega odboja, razpršenega

odboja, absorpcije svetlobe.
 Osnovni princip: merjenje razpršeno odbite svetlobe (difuzna
refleksija)
 Razpršeni odboj je značilen za hrapave površine (d>)
 Razpršeni odboj od porazdelitvene plasti (TiO2 ali BaSO4)
 Absorpcija svetlobe zaradi obarvanega produkta zmanjša
intenziteto razpršeno odbite svetlobe
 Analogija z absorpcijsko fotometrijo v raztopini – del svetlobe se
absorbira, del svetlobe se transmitira)

Refleksijska fotometrija- reflektometrija (3)

I0
IR

R - reflektanca
DR= gostota refleksije
T - transmitanca
DT- gostota transmisije
A - absorbanca

7
Refleksijska fotometrija- reflektometrija (4)

Sistemi Reflotron

 Za manjše laboratorije
 Omogoča analizo iz polne
krvi, tudi serum, plazma, urin
 Steklena vlakna zadržijo Erci
 Drugačna sestava reagenčne
ploščice
 Meritev refleksije poteka od
zgoraj
 Uporablja Ulbrichtovo kroglo

8
Ulbrichotova krogla

Prednosti suhe kemije

 Malo vzdrževanja (ni cevk)

 Ni redčenja reagentov, ne potrebujemo demineralizirane vode
 Ni redčenja vzorca (ne vpliva delež vode)
 Malo odpadkov
 Velika stabilnost reagentov (posamična analiza)
 Možnost uporabe polne krvi
 Majhni volumni vzorca (10-30 μL)- pediatrični vz, likvor
 Manjši vpliv hemolize, hiperbilirubinemije, hiperlipidiemije na
rezultate (zadrževanje v zgornjih plasteh)
 Ponovljivost rezultatov med laboratoriji

9
Uporaba suhe kemije (1)

Glavna področja uporabe

 Biokemija
 Toksikologija
 Mikrobiologija

Uporaba suhe kemije (2)

 Zaradi enostavnega rokovanje in hitrega rezultata še

posebej uporabna:
 Urgentni laboratoriji, 24-urna služba

 uporaba ni omejena na “centralne laboratorije”, ampak

se lahko izvaja tudi:
 ob bolnikovi postelji npr. na oddelkih intenzivne terapije
 v ambulantah (določitev protrombinskega časa)
 doma (samokontrola pri diabetikih)

10
Primer: določanje Mg (Vitros)

 Določamo celotno konc. Mg

Primer: določanje aktivnosti α-amilaze

(Vitros)
 Amilaza je velik protein, ne more difundirati skozi porazdelitveno
plast
 Reakcija poteče v porazdelitveni plasti

 Kinetično merjenje dveh točk

11
 Primer: določanje bilirubina (Vitros)
 Mokra kemija: metoda po Jendrassik-Grof-u
 Reakcija diazotiranja (BLRT in BLRDIR)
 Suha kemija: edina rutinska metoda, ki omogoča ločeno merjenje
BLRC in BLR
 Za določitev BLR potrebujemo dve ploščici:
 BLRu in BLRc BLRT

Reakcija diazotiranja

Merjenje odboja svetlobe pri 540 nm

BLR  = BLRT –(BLRu + BLRc)
Pri konjug. hiperbilirubinemiji
t1/2 = 2-3 tedne
Merjenje odboja svetlobe pri 400 nm
BLRdir ni primeren za spremljanje
(BLRu in BLRc) in 460 nm (BLRu)
zdravljenja konj. hiperBLR

Primer: določanje drog v urinu (Syva-

Siemens)
 Za detekcijo kanabinoidov, opijatov,
metabolitov kokaina in
metamfetaminov v urinu
 Kvalitativni presejalni test
 Hiter rezultat
 Visoka občutljivost, slabša
specifičnost
 Potrditev pozitivnih rezultatov z GC-
MS
 Kompetitivni imunokromatografski
test

Pozitivni opiati in
kanabinoidi

12
Primer: določanje beta hemolitičnega
streptokoka skupine A
 Hitri, kvalitativni, imunokromatografski test
 V brisu žrela
 Odločitev o antibiotičnem zdravljenju

 V mikrobiologiji suha kemija v glavnem za kvalitativne določitve

13