Doses of strychnine at 2mg/kg were lethal in 85% of all mice tested (Figure 1).

As
tonic extensor convulsions were always followed by death, only time until death (𝑡𝑑)
was used for analysis. In the control group A, 𝑡𝑑 was always less than 6min (one of 10
mice had 𝑡𝑑 = 8min), so 6 minutes was taken as a cut-off to determine whether IVM
has a protective effect against strychnine. Prolongation of survival to >6min was
considered protective, as it clearly opposed the effects of strychnine. Mice that lived
for more than 30 minutes were considered as surviving, as no strychnine toxicity was
observed after this time. Notably, strychnine toxicity was rapid, with effects
occurring within 10 minutes after application (mostly at <6min). Protective effects of
ivermectin on the other hand were only observed after waiting times of several (>10)
hours. (Dosis strychnine pada 2mg / kg mematikan di 85% dari semua tikus diuji
(Gambar 1). Seperti kejang ekstensor tonik selalu diikuti oleh kematian, hanya
waktu sampai kematian (𝑡𝑑) tadinya digunakan untuk analisis. Pada kelompok
kontrol A, 𝑡𝑑 selalu kurang dari 6 menit (satu dari 10 tikus memiliki 𝑡𝑑 = 8
menit), jadi 6 menit diambil sebagai cut-off untuk menentukan apakah IVM
memiliki efek perlindungan terhadap strychnine. Perpanjangan kelangsungan
hidup ke> 6 menit dianggap protektif, karena jelas-jelas ditentang efek dari
strychnine. Tikus yang hidup lebih dari 30 menit dianggap bertahan, karena
tidak ada strychnine toksisitas diamati setelah waktu ini. Khususnya, strychnine
toksisitasnya cepat, dengan efek yang terjadi dalam 10 menit setelah aplikasi
(kebanyakan pada <6 menit). Efek perlindungan dari ivermectin di sisi lain
hanya diamati setelahnya waktu tunggu beberapa (> 10) jam.)

Systemic IVM. Intraperitoneal ivermectin increased survival rate and survival time
above the cut-off only after several hours of waiting (Figure 1, subgroups C and D).
Intraperitoneal ivermectin given 30min prior to strychnine challenge had no protective
effect (Figure 1(b)). Increase in survival rates was maximal after 14 hours (80%) and
still pronounced after 24 hours (50%). Notably, the protective effect of ip ivermectin
was in an all-or-none fashion, 𝑡𝑑 was not affected, and animals surviving for >6min
were completely protected. The time course of protection is also evident from survival
analysis (Figures 1(c) and 4(a)). Protection against strychnine toxicity by ip
ivermectin was significant according to the Mantle-Cox test (𝑃 = 0.004). The decline
of protection after 24 hours is likely due to clearance of ivermectin from the
cerebrospinal fluid. (IVM sistemik. Ivermectin intraperitoneal meningkatkan
kelangsungan hidup tingkat dan waktu bertahan hidup di atas cut-off hanya
setelah beberapa jam menunggu (Gambar 1, subkelompok C dan D).
Intraperitoneal ivermectin diberikan 30 menit sebelum tantangan strychnine
tidak memiliki efek perlindungan (Gambar 1 (b)). Meningkatkan kelangsungan
hidup tarif maksimal setelah 14 jam (80%) dan masih terasa setelah 24 jam
(50%). Khususnya, efek perlindungan dari ip ivermectin dalam mode semua
atau tidak sama sekali, 𝑡𝑑 tidak terpengaruh, dan hewan yang bertahan hidup> 6
menit dilindungi sepenuhnya. Waktu perlindungan juga terbukti dari bertahan
hidup analisis (Gambar 1 (c) dan 4 (a)). Perlindungan terhadap strychnine
toksisitas oleh ip ivermectin signifikan menurut Tes mantel-Cox (𝑃 = 0,004).
Penurunan perlindungan setelahnya 24 jam kemungkinan karena pembersihan
ivermectin dari cairan serebrospinal.)

Oral IVM. Application of ivermectin by the oral route had a protective effect after 14
hours (group E) and 24 hours, with survival prolonged to more than 6 minutes and an
increased percentage of survivors (Figure 2). Maximum protectionwas observed after
14 hours (Figure 2(b), groupE), (IVM oral. Penerapan ivermectin dengan rute oral
memiliki efek perlindungan setelah 14 jam (kelompok E) dan 24 jam, dengan
kelangsungan hidup diperpanjang hingga lebih dari 6 menit dan persentase
peningkatan korban (Gambar 2). Maksimum perlindungan diamati setelah 14
jam (Gambar 2 (b), grupE),

and again survival was all-or-none. After 24 hours, protective effects declined, falling
to control levels within ∼72 hours (Figure 2(b), groups F and G). Survival analysis
(Mantle- Cox test) showed that protection by oral ivermectin gave a strong trend (𝑃 =
0.056, P (trend) = 0.006). Likely, the reduced protection after 72 hours is due to
clearance of the drug. Considering only the time points until 24 hours, where drug
clearance was not notable, protection by oral ivermectin was statistically significant
(𝑃 = 0.025). Increasing the oral dose of IVM from 1mg/kg to 5mg/kg (Figures 2(b)
and 2(c), group K) gave a minor increase of protection against strychnine toxicity.
Long-term survival (>30min) increased from 20% to 40%; 80% of animals had
survival time 𝑡𝑑 of >6min (Figure 2(b)). The increase in protection from the higher
dose of ivermectin was not significant (𝑃 = 0.1048, Mantle-Cox-test) but showed a
strong trend (𝑃 = 0.041). The time course of protection by ivermectin was similar for
ip and oral route of administration with protective (dan sekali lagi, bertahan hidup
adalah semua atau tidak sama sekali. Setelah 24 jam, pelindung efek menurun,
jatuh ke level kontrol dalam ∼72 jam (Gambar 2 (b), kelompok F dan G).
Analisis kelangsungan hidup (mantel Tes Cox) menunjukkan bahwa
perlindungan dengan pemberian ivermectin oral memberi tren kuat (𝑃 = 0,056, P
(tren) = 0,006). Kemungkinan, itu perlindungan berkurang setelah 72 jam adalah
karena izin obat. Mempertimbangkan hanya titik waktu sampai 24 jam, di mana
pembersihan obat tidak penting, perlindungan oleh ivermectin oral secara
statistik signifikan (𝑃 = 0,025). Meningkatkan oral dosis IVM dari 1mg / kg
hingga 5mg / kg (Gambar 2 (b) dan 2 (c), kelompok K) memberikan sedikit
peningkatan perlindungan terhadap toksisitas strychnine. Kelangsungan hidup
jangka panjang (> 30 menit) meningkat dari 20% hingga 40%; 80% hewan
memiliki waktu bertahan hidup 𝑡𝑑 dari> 6 menit (Gambar 2 (b)). Peningkatan
perlindungan dari dosis ivermectin yang lebih tinggi tidak signifikan (𝑃 = 0,1048,
Mantle-Cox-test) tetapi menunjukkan tren yang kuat (𝑃 = 0,041). Waktu
perlindungan dengan ivermectin adalah sama untuk ip dan rute oral
administrasi dengan pelindung)

Combined Oral and Systemic IVM. The effect of combining the oral and ip dose was
studied in subgroups H, I, J, L, and M (Figure 3). After initial administration of
ivermectin per os, and a waiting period of 14–72 hours, a second dose of ivermectin
was given intraperitoneally, followed by the strychnine challenge 30min later. In all
groups, protective effects of the combined ivermectin treatment on 𝑡𝑑 and long-term
survival were observed. Survival time (Figures 3(b) and 3(c)) was prolonged
compared to both control groups (group A, no ivermectin pretreatment; group B, only
1mg/kg ivermectin ip 30min before strychnine challenge) with 𝑡𝑑 increasing from
∼6min to >10min in 100% of tested animals (Figure 3(c)). Long-time survival rates
also increased relative to control, reaching up to 60% (Figure 3(b)). Increasing the
dose of oral ivermectin from 1mg/kg to 5mg/kg (IVM oral dan sistemik kombinasi.
Efek menggabungkan dosis oral dan ip dipelajari dalam subkelompok H, I, J, L,
dan M (Gambar 3). Setelah pemberian ivermectin awal per os, dan masa tunggu
14-72 jam, dosis kedua dari ivermectin diberikan secara intraperitoneal, diikuti
oleh tantangan strychnine 30 menit kemudian. Pada semua kelompok, protektif
efek dari kombinasi pengobatan ivermectin pada 𝑡𝑑 dan kelangsungan hidup
jangka panjang diamati. Waktu kelangsungan hidup (angka 3 (b) dan 3 (c))
diperpanjang dibandingkan dengan kedua control kelompok (kelompok A, tanpa
pretreatment ivermectin; kelompok B, hanya 1mg / kg ivermectin ip 30 menit
sebelum tantangan strychnine) dengan 𝑡𝑑 meningkat dari ∼6menit> 10 mnt
dalam 100% diuji hewan (Gambar 3 (c)). Tingkat kelangsungan hidup lama juga
meningkat relatif terhadap kontrol, mencapai hingga 60% (Gambar 3 (b)).
Semakin meningkat dosis ivermectin oral dari 1mg / kg hingga 5mg / kg).

did not have any additional effect over the 1mg/kg dose (Figure 3, subgroups L and
M). Comparing the effects of a single oral dose of ivermectin with those of a
combined oral and ip administration, a clear improvement by the second “booster”
dose could be seen. For 1mg/kg oral ivermectin, improvement of survival by a second
dose of ip ivermectin was significant (subgroups F–I, 𝑃 = 0.031, Mantle-Cox test) and
also for an initial dose of 5 mg/kg ivermectin (subgroups K–L, 𝑃 = 0.026). Although
the waiting time after the second, ip, dose of ivermectin was short, 𝑡𝑑 and long-term
survival were increased for animals receiving dual doses of the drug. Improvement
after waiting periods of 10 and 14 hours was smaller in comparison (groups E–H).
The peak level of protection that was reached after 14 hours was not further improved
by additional doses of ivermectin (Figure 4(a)).( tidak memiliki efek tambahan apa
pun selama dosis 1mg / kg (Gambar 3, subkelompok L dan M). Membandingkan
efek a Dosis oral tunggal ivermectin dengan dosis oral kombinasi dan
administrasi ip, peningkatan yang jelas oleh yang kedua Dosis "booster" bisa
dilihat. Untuk 1mg / kg ivermectin oral, peningkatan kelangsungan hidup
dengan dosis kedua ip ivermectin signifikan (subkelompok F – I, 𝑃 = 0,031, tes
Mantle-Cox) dan juga untuk dosis awal 5 mg / kg ivermectin (subkelompok K –
L, 𝑃 = 0,026). Meskipun waktu tunggu setelah yang kedua, ip, dosis ivermectin
pendek, 𝑡𝑑 dan kelangsungan hidup jangka panjang ditingkatkan untuk hewan
yang menerima dosis ganda obat. Perbaikan setelah periode menunggu 10 dan
14 jam adalah lebih kecil dalam perbandingan (grup E – H). Tingkat puncak
perlindungan yang dicapai setelah 14 jam tidak lebih jauh ditingkatkan dengan
dosis tambahan ivermectin (Gambar 4 (a)).
PEMBAHASAN

The inhibitory glycine receptor (GlyR) is one of the major mediators of rapid synaptic
inhibition in mammalian spinal cord [1, 2, 5, 6]. It is the pharmacological target of the
alkaloid strychnine, a potent (KD 1–10 nM) and selective inhibitor [1, 2, 5, 6]. Indeed,
strychnine toxicity is mediated exclusively through GlyRs, death being caused by
arrest of breathing musculature. The widely used anthelminthic and anticonvulsant
ivermectin [15, 16, 27–29] was shown to be an agonist of the GlyR, activating the
receptor through a strychnine-independent pathway [22, 23]. Ivermectin was found to
antagonise convulsions caused by nonlethal doses of lidocaine and strychnine in rats,
suggesting that both GABAergic and glycinergic transmission were protected by
ivermectin [25]. Here, we demonstrated and characterised the ability of ivermectin to
protectmice fromthe toxicity of a lethal dose of strychnine, likely by providing
sufficient basal activity of spinal glycine receptors to alleviate strychnine block.
Ivermectin was administered at doses that were safe for the animals, but gave a clear
biological effect. Doses of 1.3mg/kg of ivermectin by oral administration are
considered safe,while higher doses carry an increased risk of teratogenicity [30].
Intraperitoneal ivermectin had been used formice at doses between 1.25 and 10mg/kg
[31], with a reported LD50 of (Reseptor glisin penghambat (GlyR) adalah salah
satu yang utama mediator penghambatan sinaptik cepat di sumsum tulang
belakang mamalia [1, 2, 5, 6]. Ini adalah target farmakologis dari strychnine
alkaloid, poten (KD 1-10 nM) dan selektif inhibitor [1, 2, 5, 6]. Memang,
toksisitas strychnine dimediasi secara eksklusif melalui GlyRs, kematian
disebabkan oleh penangkapan otot-otot pernapasan. Antelminthic dan banyak
digunakan ivermectin antikonvulsan [15, 16, 27-29] terbukti agonis GlyR,
mengaktifkan reseptor melalui a jalur strychnine-independent [22, 23].
Ivermectin dulu ditemukan untuk memusuhi kejang yang disebabkan oleh dosis
tidak mematikan lidocaine dan strychnine pada tikus, menunjukkan bahwa
keduanya Transmisi GABAergik dan glikinergik dilindungi oleh ivermectin [25].
Di sini, kami menunjukkan dan mengkarakterisasi kemampuan ivermectin
untuk melindungi tikus dari toksisitas a dosis strychnine yang mematikan,
kemungkinan dengan menyediakan basal yang cukup aktivitas reseptor glisin
tulang belakang untuk meringankan strychnine blok. Ivermectin diberikan pada
dosis yang aman untuk hewan, tetapi memberi efek biologis yang jelas. Dosis 1,3
mg / kg ivermectin dengan pemberian oral dipertimbangkan aman, sementara
dosis yang lebih tinggi membawa peningkatan risiko teratogenisitas [30].
Inveraperitoneal ivermectin telah digunakan di dosis antara 1,25 dan 10mg / kg
[31], dengan LD50 yang dilaporkan)

18 mg/kg [25]. The doses for ivermectin of 1mg/kg (oral) and 5mg/kg (ip) that we
used were within the safe limits reported in the literature [25, 28–31]. When
ivermectin was administered to mice prior to a lethal strychnine challenge of 2 mg/kg,
protection against strychnine toxicity was observed. Protection was seen as (i)
prolonged survival (>6min) after strychnine administration and (ii) increase in the
percentage of mice who survived the potentially lethal dose of strychnine altogether,
that is, survival longer than 30 min, after which time the toxic effects of strychnine
were no longer observed (Figure 4). The kinetics of distribution within the body are
different for strychnine and ivermectin. Strychnine inhibition of GlyRs was fully
developed after 5-6 minutes. After 30 minutes, the toxic effects of strychnine were no
longer observed (Figure 4(a)). In contrast, ivermectin distributes much more slowly to
the glycine receptor sites. When given (18 mg / kg [25]. Dosis untuk ivermectin
1mg / kg (oral) dan 5mg / kg (ip) yang kami gunakan berada dalam batas aman
yang dilaporkan dalam literatur [25, 28-31]. Ketika ivermectin diberikan kepada
tikus sebelum a strychnine mematikan tantangan 2 mg / kg, perlindungan
terhadap toksisitas strychnine diamati. Perlindungan dilihat sebagai (i)
kelangsungan hidup yang berkepanjangan (> 6 menit) setelah pemberian
strychnine dan (ii) peningkatan persentase tikus yang selamat dosis strychnine
yang berpotensi mematikan sama sekali, yaitu, bertahan hidup lebih lama dari
30 menit, setelah itu efek toksik strychnine tidak lagi diamati (Gambar 4).
Kinetika distribusi di dalam tubuh berbeda untuk strychnine dan ivermectin.
Penghambatan strychnine GlyR sepenuhnya dikembangkan setelah 5-6 menit.
Setelah 30 menit, efek toksik dari strychnine tidak lagi diamati (Gambar 4 (a)).
Sebaliknya, ivermectin mendistribusikan jauh lebih lambat ke situs reseptor
glisin. Saat diberikan)
30 min after ip administration, 1mg/kg ivermectin showed no protective effect (Figure
1(b)), while after 14 hours the same dose caused a survival rate of 80%. After 24
hours the protective effect of a single ip dose was lower than at 14 hours (Figure 1(b)).
The rapid time course of strychnine toxicity would agree with a single compartment
distribution of the substance [32–34]. Ivermectin is known for its slow kinetics of
distribution and excretion [16]; measurable amounts of the drug in humans and
domestic animals are still found up to 17 days after administration of a single dose
[16, 35, 36]. The ivermectin molecule is highly hydrophobic and is considered to
accumulate extensively in fatty tissue which acts as a reservoir (Figure 4(b)), causing
slow clearance from the body [16]. Thus, ivermectin distribution can be described by
a two-compartment model [34], which is compatible with the time course we observed
for ivermectin action. Kinetics of ivermectin administered per os were (30 menit
setelah pemberian ip, 1mg / kg ivermectin menunjukkan tidak ada efek
perlindungan (Gambar 1 (b)), sedangkan setelah 14 jam dosis yang sama
menyebabkan tingkat kelangsungan hidup 80%. Setelah 24 jam efek
perlindungan dari dosis ip tunggal lebih rendah dari pada 14 jam (Gambar 1
(b)). Tentu saja waktu yang cepat toksisitas strychnine setuju dengan distribusi
kompartemen tunggal substansi [32–34]. Ivermectin dikenal karena kinetiknya
yang lambat distribusi dan ekskresi [16]; jumlah yang terukur obat pada
manusia dan hewan peliharaan masih ditemukan hingga 17 hari setelah
pemberian dosis tunggal [16, 35, 36]. Molekul ivermectin sangat hidrofobik dan
dianggap menumpuk secara luas di jaringan lemak yang bertindak sebagai
reservoir (Gambar 4 (b)), menyebabkan clearance lambat dari tubuh [16].
Dengan demikian, distribusi ivermectin dapat dijelaskan oleh model dua
kompartemen [34], yaitu kompatibel dengan kursus waktu yang kami amati
untuk ivermectin tindakan. Kinetika ivermectin diberikan per os)

similar to those observed with intraperitoneal administration (Figures 2 and 4) with

maximum protection after 14 hours of administration and consecutive loss of activity
after this time. This finding is in agreement with the pharmacokinetics of ivermectin
observed in goats, where administration per os or subcutaneously resulted in moderate
differences in plasma concentration, but similar antiparasitic efficacy(mirip dengan
yang diamati dengan pemberian intraperitoneal (Gambar 2 dan 4) dengan
perlindungan maksimal setelah 14 jam administrasi dan kehilangan aktivitas
berturut-turut setelah ini waktu. Temuan ini sesuai dengan farmakokinetik dari
ivermectin diamati pada kambing, di mana administrasi per os atau secara
subkutan menghasilkan perbedaan moderat dalam konsentrasi plasma, tetapi
kemanjuran antiparasit serupa)
Increasing the dose of ivermectin from 1mg/kg to 5mg/kg produced a moderate
increase in protection. Combining ip and oral routes of administration, a further
increase in survival (improved protection against strychnine toxicity) was observed,
particular at times >24 hours, that is, after the peak of activity, when excreted drug
was replenished by a second dose. Our observation that kinetics of ivermectin
protection were similar for oral and intraperitoneal routes of administration (Figure 4)
agrees with a two-compartment model for the distribution of ivermectin.
(Meningkatkan dosis ivermectin dari 1mg / kg menjadi 5mg / kg menghasilkan
peningkatan perlindungan sedang. Menggabungkan ip dan rute administrasi
oral, lebih lanjut peningkatan kelangsungan hidup (peningkatan perlindungan
terhadap strychnine toksisitas) diamati, khususnya pada waktu> 24 jam, yaitu,
setelah puncak aktivitas, saat mengeluarkan obat diganti dengan dosis kedua.
Pengamatan kami itu kinetika perlindungan ivermectin serupa untuk oral dan
rute administrasi intraperitoneal (Gambar 4) setuju dengan model dua
kompartemen untuk distribusi ivermectin.)

Overall, our data show that ivermectin can protect mice against strychnine toxicity in
vivo. Strychnine selectively and exclusively targets spinal glycine receptors,
disrupting their synaptic signaling. Protection by ivermectin likely results from the
basal, strychnine-independent activation of glycine receptors. This “nonsynaptic”
basal activation appears to produce enough glycinergic signal to prevent the lethal
myoclonic attacks observed in strychnine poisoning. Indeed, restoration of some
inhibitory synaptic activity has been also shown to be effective in the glycine
receptor-associated disorder hyperekplexia (OMIM 149400), which can be treated
with GABAA receptor agonists [7]. The strychnine-resistant basal activity of glycine
receptors mediated by ivermectin did not produce any notable side effects in the
animals and yet was sufficient to protect against strychnine toxicity. The combination
of slow pharmacokinetics and a broad therapeutic window is useful for systemically
acting drugs. In vivo protection of GlyRs may be therapeutically relevant in the
treatment of glycine receptor-associated motor disorders, such as hyperekplexia, stiff
man syndrome, and other convulsant diseases. (Secara keseluruhan, data kami
menunjukkan bahwa ivermectin dapat melindungi tikus terhadap toksisitas
strychnine in vivo. Strychnine secara selektif dan secara khusus menargetkan
reseptor glisin tulang belakang, mengganggu mereka pensinyalan sinaptik.
Kemungkinan hasil perlindungan oleh ivermectin dari aktivasi glisin basal,
independen-strychnine reseptor. Aktivasi dasar "nonsinaptik" ini tampaknya
menghasilkan sinyal glikinergik yang cukup untuk mencegah kematian serangan
mioklonik diamati pada keracunan strychnine. Memang, restorasi beberapa
aktivitas sinaptik penghambatan juga telah terjadi terbukti efektif dalam
gangguan terkait reseptor glisin hyperekplexia (OMIM 149400), yang dapat
diobati dengan agonis reseptor GABAA [7]. Strychnine-resistant aktivitas dasar
reseptor glisin yang dimediasi oleh ivermectin tidak menghasilkan efek samping
yang nyata pada hewan dan namun cukup untuk melindungi terhadap toksisitas
strychnine. Itu kombinasi farmakokinetik lambat dan terapi luas Jendela
berguna untuk obat yang bertindak sistemik. In vivo perlindungan GlyRs
mungkin relevan secara terapi dalam pengobatan gangguan motorik terkait
reseptor glisin, seperti hyperekplexia, sindrom pria kaku, dan kejang lainnya
penyakit.)