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動態散射光實驗
動態散射光實驗
動態散射光實驗
一、 目的
影響。
二、 原理
光散射實驗是以光子碰撞樣品,而樣品中的粒子與光交互作用後,我們可藉由量測彈性
或非彈性碰撞出來的光子之角度分佈、偏光狀態、能量分佈等性質得知受測樣品的特性。類
似的散射實驗也可用其他粒子,如電子或中子來進行。拉塞福(Ernest Rutherford)之原子核
碰撞、X-ray、同步輻射實驗、光散射實驗、高能粒子碰撞實驗等都可算是散射實驗。由於
散射出來的光沒有經過透鏡聚焦成像,分析方式與顯微鏡等技術不同。散射實驗透過仔細的
理論分析,得知何種處理訊號的方式可提供樣品的特定性質。本實驗以散射光強度的自相關
函數來得知懸浮微胞粒子的擴散快慢,配合溫度與溶劑的黏滯係數來推測出微胞的粒徑。
由於粒子 i內的介電係數與溶液的介電係數略有不同,這將使得雷射光源傳出的平面電
磁波在行經微胞時,產生了散射光波。當介電係數的差別較大時,散射訊號明顯,但也有不
少光被散射多次,造成明顯但不容易分析的訊號,例如牛奶。當介電係數的差別小的時候,
雖然散射光訊號變弱,但散射光大多只被散射一次,結果才容易分析。以下我們考慮單次散
射。
在樣品中行進的平面電磁波,可以用式(1)表示
遇到粒子時,會引起額外的電偶極密度,以式(2)表示
i
可以是奈米粒子,微胞,油滴,氣泡等微粒。
1
𝛿𝜖 (𝒓, 𝑡)~ ∑ 𝛩(𝒓 − 𝑹𝑛 (𝑡)) (3)
𝑛
我們並引入質心密度函數
都產生球面波的散射電磁場,其電場疊加成
𝑒 𝑖𝒌𝑂 ∙(𝑹𝐷 −𝒓)
𝑬𝑆 (𝑹𝐷 , 𝑡) ∝ ∫ 𝑑𝒓 𝛿𝜖 (𝒓, 𝑡)𝑨𝑒 𝑖(𝒌𝐼 ∙𝒓−𝜔𝑡) ( ) (6)
| 𝑹𝐷 − 𝒓|
其中 𝑬𝑆 表示 scattering 的電場,𝑹𝐷 是偵測器所在的位置向量。𝒌𝐼 (In)的是2𝜋除以波長,
方向是順著雷射光源前進的方向。因為絕大多數的散射光,其頻率 ii都和入射光一樣,為彈
器。
在這裡散射電磁波主要的特徵是
𝒒 = 𝒌𝐼 − 𝒌𝑂 (8)
每一個粒子,根據其質心位置,都貢獻出一個大小為 1 的複數,包含相位的訊息。
偵測器—例如光電倍增管—量測到散射光的強度,其正比於電場平方
於 homodyne 方法。
ii
或光子的能量。
2
相對於入射光源來定義,偵測器擺放在不同的角度,即不同的 𝒒,會接收到不同的散射
光訊號強度。類似於單狹縫,各處的光源在不同的角度疊加出建設性或破壞性干涉,這個散
通常大粒子的散射光集中在小角度散射,而小粒子的散射光角度分佈較廣。也類似於單狹縫
干涉,散射光的角度分佈也可能出現多個峰值,對應於建設性干涉在某些角度產生局部極大
值。若仔細分析稀薄溶液的散射光的角度分佈,配合模型計算 iii,可以反推出溶液中大小粒
峰值的現象。
此外,如果粒子濃度高,形成週期排列的晶體,則不同粒子的散射光也可在特定角度產
量測其晶格尺寸;同理,在微米粒子的膠體晶體,亦可用可見光量測其晶格尺寸。
【動態光散射】
雖然散射光大多為彈性散射之訊號,由於粒子並非靜止,仍有極少數的散射光其光子的
能量大於或少於入射光能量。從光子與粒子碰撞的想法來描述,這些散射光是非彈性散射的
訊號。小分子拉曼散射就是一個很好的例子,散射光由分子的原子核振動得到或損失能量。
本實驗中,我們觀察更小的能量轉移,散射光子由微胞粒子的質心熱運動得到或損失能量。
由於質心運動的能階分佈密,能階差別很小,量子現象不明顯,以下我們可以用古典的粒子
擴散圖像來分析動態光散射訊號。
有兩種數學上等價的方法可以分析散射光的成份,分別如圖一(a)、(b)所示。(a)方法是
將散射光導入分光儀,將不同頻率的光強度分別紀錄;(b)方法是將散射光強度隨時記錄,
檢查其隨時間的亮暗變化有沒有其特有的時間尺度。例如牛奶中小顆的脂肪微粒造成的散射
iii
例如假設粒子為球形。
iv
偵測器的特別角度。
3
光,其亮暗變化較為迅速;而大顆的脂肪微粒散射出來的光,其亮暗變化就較緩慢。這兩種
圖一 以數學方法分析散射光的成份
在光散射儀中,相關儀(correlator)並不保留光強度的時間紀錄。瞬時量到的光強度,
以電子線路進行延遲時間 𝜏 後直接與新的訊號合併,進行相乘,之後才累加。取長時間 𝑇 平
均後輸出自相關函數,本儀器的 𝑇 最短是一秒,通常取更長的時間,以減小有限取樣所產生
的誤差。相關儀通常可以同時處理數百個不同的延遲時間。延遲時間的選取可以讓儀器預設
的去選(general mode)。在測量奈米粒子,蛋白質,或微胞等小粒子樣品,自相關函數在
由於稀薄樣品不同 𝒒 得出的自相關函數可互相推算,因此在商用的動態光散射儀中,
透光的樣品儀器自動會選用 173°大角度的偵測器,希望降低多次散射光的干擾。由配備的半
因此大粒子散射出來的光強度較小粒子強多了,正比於粒徑的六次方。
v
Dynamic Light Scattering: With Applications to Chemistry, Biology, and Physics by Bruce J. Berne, Robert Pecora
4
進一步分析散射光的自相關函數,常常把隨機粒子散射出的電磁場近似為高斯分佈的隨
機變數。由於多個高斯隨機變數連乘的平均,可以化簡成兩兩相乘平均的總合(Wick’s
theorem),如
其中第一項即為平均光強度的平方,和 𝜏 無關。第二項進一步分析為零。第三項則是主要受
到 𝜏 影響的部分。
品為例,其電場的自相關函數為式(14),正比於質心密度自相關函數,或稱為 intermediate
scattering function
對微胞溶液來說,其中不同顆粒子的交叉項,因為起始位置多樣且無關,故式(16)平均為零
隨機變數的性質以及□
2 擴散的均向性
−〈𝑥 2〉
1 〈𝑒 𝑖𝑥 〉 = 𝑒
□ 2
〈𝑅 2 〉
□
2 𝑞𝑥 2〈
𝑅𝑥 〉 + 𝑞𝑦 2 〈𝑅𝑦 2 〉 + 𝑞𝑧 2 〈𝑅𝑧 2 〉 = (𝑞𝑥 2 + 𝑞𝑦 2 + 𝑞𝑧 2 ) (
2
)
3
2
〈𝑅 2 〉
=𝑞 ( )
3
可得到式(17)
5
2
−𝑞2 〈(𝑹𝑛 (𝑡+𝜏)−𝑹𝑚 (𝑡)) 〉𝑡
〈𝑒 𝑖𝒒∙(𝑹𝑛(𝑡+𝜏)−𝑹𝑛 (𝑡)) 〉𝑡 = 𝑒 6 (17)
接著又利用擴散的特性
最後我們能推得式(18)
2 𝐷𝜏
〈𝑒 𝑖𝒒∙(𝑹𝑛 (𝑡+𝜏)−𝑹𝑛 (𝑡)) 〉𝑡 = 𝑒 −𝑞 (18)
由式(18)可知每一個粒子的自相關項,是隨延遲時間以指數遞減。因此,我們可由歸一化
(normalized)的自相關函數隨延遲時間的遞減快慢,得出擴散係數 𝐷。
〈𝐼(𝑡)𝐼(𝑡 + 𝜏)〉𝑡 − 〈𝐼 〉2
𝑔2 (𝑹𝐷 , 𝜏) =
〈𝐼 2 〉 − 〈𝐼 〉2
|𝐹1 (𝒒, 𝜏)|2 2
≈ = 𝑒 −2𝑞 𝐷𝜏 (19)
|𝐹1 (𝒒, 0)| 2
Einstein 關係
𝑘𝐵 𝑇
𝐷=
3𝜋𝜂𝑑
軟體可由波茲曼常數 𝑘𝐵 、絕對溫度 𝑇、以及溶劑的黏滯係數 𝜂,推算出粒徑 𝑑。
【混合粒徑樣品】
由粒徑的高次方可看出,氣泡或灰塵等大粒子都會大幅影響量測。儀器廠商的軟體試著找出
據顆數定義(number),或是根據體積分率定義(volume)。
vi
例如光源不穩定。
vii
需加上額外的 correlation factor,式(19)才會成立。
6
【界面活性劑之微胞自組裝】
界面活性劑具有雙親(amphiphilic)的特性,頭基具電偶極或離子而親水,尾端碳氫鏈
親油。這種結構一方面使其容易吸附到界面,而造成表面張力降低。另一方面分子也在略高
濃度的溶液中自組裝成為微胞。在眾多的自組裝結構中,根據頭基的大小 𝐴(含作用力),
構。
本實驗用的非離子型界面活性劑即傾向形成球狀微胞。當不加油時,微胞個數在低濃度
極少,在臨界微胞濃度以上變多。基本上微胞大小不太受到濃度影響。當有加入油時,油分
子傾向進入微胞內,因而微胞大小和油的量有關。
三、 藥品與儀器
1. 動態光散射儀(Nano Particle Analyzer SZ-100)、拋棄式塑膠比色樣品管
開啟樣品室上蓋的按鈕
圖二 散射儀外部及內部 圖三 比色管
3. 20 mL 含蓋樣本瓶
7
四、 實驗注意事項
◇
1 記得帶 USB 來存取數據。
◇
2 因配合儀器測量,須花較長時間等待,實驗中可利用時間處理數據、閱讀學科書籍、寫
作業/報告、準備考試等。
◇
3 溶液配製過程中,盡量不要製造氣泡,以免干擾偵測結果。
◇
4 除了放入或拿出比色樣品管(cuvette),其餘時間請關閉儀器上蓋,以免灰塵進入儀器
內部。
五、 實驗步驟
【溶液樣品配製】
體積比相互混合均勻viii。
【溶液樣品測量】
※動態散射儀助教上課前已提早開機,進行暖機。操作同學於實驗結束、離開實驗室前,務
必檢查儀器是否已確實關機。
2. 欲開啓儀器樣品室上蓋,務必透過儀器上方左下角處的橢圓形按鈕,切勿直接強行扳開
樣品室上蓋,以免上蓋毀損ix。
viii
務必於樣品瓶內將 Triton X-100 水溶液與環己烷混合,切勿於拋棄式塑膠比色樣品管內將兩者混合,否則
樣品管壁容易被環己烷腐蝕。
ix
欲關閉樣品室上蓋,手動推回去即可。
8
2. 將樣品管放入儀器樣品室內。
(a) 選擇測量模式Size(粒徑)。
使用的樣品管等。
(d) 按下開始並等待測量結果。
(e) 於相同溫度、濃度條件下的樣品溶液至少測量三次,這三次的粒徑數據必須接近,
誤差要小,且不得出現驚嘆號xi。
存於 USB 中xii。
5. 重新裝入 2 mL 的待測樣品溶液於樣品管。
※記得於步驟 A.3(c)時,替非相同溫度或濃度的樣品溶液更換名稱。
※記得於步驟 A.3(b)改變樣品管的設定溫度。
x
每回測量的時間、次數及間隔。
xi
數據若出現驚嘆號,表示微胞粒徑測量出現失誤,結果不可信!
xii
至少匯出一次粒徑測量結果的 txt 檔。
xiii
因此,測量的順序該由低濃度至高濃度的樣品溶液進行。
xiv
建議放入樣品管前,即調整樣品室溫度。待溫度達到設定值後,才放入樣品管。置入樣品管後,再重新調
整樣品室溫度一次,以確認樣品溫度與儀器設定的溫度值相同。熱平衡也可能需要一段時間。
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C. 探討在不同莫耳分率下的環己烷對於 Triton 微胞尺寸大小的影響
1. 更改樣品室的設定溫度為 25.0℃。
六、 數據處理
1. 計算相同實驗條件(溫度及濃度)下的三組微胞粒徑數據之平均值與標準差。
同溫度條件下的曲線繪於同一張圖上。
於同一張圖上,觀察是否有差異?
率。
5. 繪製以環己烷莫耳分率為橫軸,Triton 微胞平均粒徑為縱軸的關係圖,藉此觀察環己烷
的添加量對於微胞尺寸大小的影響。
xv
任何一種濃度、溫度條件皆可。
10
七、 問題與討論
1. 從數據處理 3 的結果,討論軟體分析出來的粒徑分布圖,是否可以很理想地解釋原始數
據所得的自相關函數圖?並且自行在粒徑分布區間中,手動調整至少一個區段的粒徑濃
度,使其比儀器軟體估算值大(或小)10%以上xvi。重複數據處理 3 的做法,討論是否
吻合或歧異於原始數據的自相關函數圖?軟體計算出來的粒徑分佈,誤差小於 10%嗎?
2. 試討論環己烷對微胞所造成的影響。
3. 是否環己烷完全進入微胞中xvii?
八、 參考文獻
1. B.J. Berne, R. Pecora, Dynamic Light Scattering, with Applications to Chemistry, Biology, and
Physics, (John Wily & Sons, New York, 1975).
2. J.N. Israelachvili, Intermolecular and Surface Forces, 2nd ed. (Academic Press, New York, 1992).
xvi
即手動調整出一個新的粒徑分布圖。
xvii
參考文獻 3。提示:可由微胞在添加環己烷前後的體積差異來判斷。可做定性描述,或若能試著以計算方
式做定量化的描述更佳!
11
附錄—動態光散射儀 SZ-100 軟體操作說明
點擊螢幕桌面 SZ-100 軟體後,即進入如下圖的畫面。可點選紅色框以進入手動測量
(Manual Measurement)的畫面或是直接使用藍色框的軟體工具列進行操作。
1. 測量模式選單由下拉式選單,選擇 Size(粒徑)測量
粒徑
Zeta 電位
分子量
2. 溫度設定點擊 一次,將跳出下圖的溫度設定視窗,自行在橘色框中輸入欲設定
成功。
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3. 測量參數設定
輸入名稱
13
(2) Particle/Dispersion medium設定粒子及分散液種類。
(3) Measurement設定測量條件。
Consecutive measurements可設定重複測量次數及每次的間隔時間。
(4) Cell選擇適當的模式。
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4. 測量開始
點擊 一次,軟體即進行粒徑測量。
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