‫מיקרוביולוגיה אורלית – מבוא‬

‫ד"ר רונית בר‪-‬נס גרינשטיין‬

 ‫מה זה מיקרוביולוגיה?‬
‫מדע היצורים הזעירים‪ :‬חיידקים‪ ,‬ווירוסים ופחות מזה ‪-‬‬
‫הפרוקריוטים‬

‫חיידקים‪0.2-10mm :‬‬ ‫וירוסים‪10-5-0.01mm :‬‬

‫ויש יותר גדולים‬
‫‪mm = micron = meter/million‬‬
 :‫קצת סדר בבלגן‬
‫מיקרוביולוגיה‬ Prokaryotes

Bacteria Viruses

Eukaryotes
Eukaryotes

Protista
Protista Plants Animals
Animals

Algae
Algae Fungi Protozoa
Protozoa
 ‫היסטוריה על קצה המזלג‬
‫‪ - Van Leeuwenhoek: 1676‬המיקרוסקופ )‪(white mater.‬‬
‫‪Animalcules‬‬

‫‪– Pasteur + Koch : 1859‬‬

‫סטריליזציה‪ ,‬תרביות טהורות‪ ,‬פרמנטציה של סוכרים‬

‫‪- Miller : 1889‬‬

‫קשר בין מיקרואורגניזמים לעששת‪ :‬החיידקים האורליים‬
‫גורמים לעששת בגלל ייצור חומצות‬
‫)‪(Chemoparasitic theory‬‬
 ‫עוד היסטוריה על קצה המזלג‬

‫‪– (in vivo) Williams, Black : 1897-1898‬‬

‫קשר בין מיקרואורגניזמים לעששת‪ ,‬הרובד הדנטלי‬

‫‪ – (in vivo) Clarke : 1920‬בידוד קוקים משונים‬

‫בשרשראות מנגעים עששתיים‪S. mutans :‬‬

‫‪ – (in vivo) Keyes & Fitsgerald : 1950‬עששת מחלה‬

‫זיהומית באוגרים וחולדות‬
‫תרבית טהורה על מצע מוצק (אגר)‬
 ‫שימושים בחיידקים‬
‫* מודל מחקר פשוט ונוח‬

‫* חיסונים נגד מחלות פתוגנים‬

‫* פועלי ייצור‪ :‬אנזימים‪,‬‬

‫ויטמינים‪ ,‬אנטיביוטיקות‪,‬‬
‫אינסולין‪ ,‬הורמוני גדילה ועוד‪ ,‬הנדסה‬
‫גנטית‪ ,‬בקרת פלורה מע' עיכול להרזייה!‬
 ‫חיידקים – מאפיינים כלליים‬
‫‪ ‬קיימים בכל מקום (ספורות) חוץ מ‪( .....‬ניסויים‪:‬‬
‫חשיפה לאוויר‪ ,‬שיעול‪-‬נשיפה)‬
‫‪ ‬הרבה טובים וקצת רעים‬
‫‪ ‬גודל‪ :‬לרוב ‪ 2‬מיקרון‪ ,‬ויש ארוכים יותר‬
‫‪ ‬מגבלות‪ :‬גודל (מקום איחסון מוגבל‪ ,‬סילוק והעפה)‪,‬‬
‫לחות הכרחית‬
‫‪‬יתרונות‪ :‬גודל (תחכום‪ :‬אינדוקציה‪ ,‬דיפוזיה)‬
‫חיידקים – מאפיינים כלליים נוספים‬

‫‪ ‬תא עצמאי‪ :‬מטבוליזם (מהיר) ‪ +‬התרבות‬

‫‪‬תא פרוקריוטי‪ :‬ללא מידור‪ ,‬ללא זרימת‬
‫ציטופלסמה‪ ,‬פשטות‬
 Prokaryotes vs Eukaryotes

• Small genome • Large genome

(1Chromosome) (> 1Chromosome)
• “Naked” DNA • Nucleus
• No organelles • Membranous organelles
• No mitochondria • Mitochondria
• No cytoskeleton • Cytoskeleton
• Fission/budding (20 min) • Mitosis (16-20 hours)
 ‫תא‬
‫פרוקריוטי‬

‫תא‬
‫אאוקריוטי‬
‫חיידק – מבנה טיפוסי‬
 ‫מבנה חיידק – דופן‬
‫פפטידוגליקן (‪ ,)Amino-polysaccharide‬הגנה מכנית‪,‬‬
‫קב' גרם‬
‫דופן חיידק גרם חיובי‪ :‬פפטידוגליקן עבה‪Lipo ,‬‬
‫‪ ,LTA=( Teichoic Acid‬פולימר סוכר‪-‬פוספט) (פעילות‬
‫דומה אך פחות טוקסי מ‪)LPS-‬‬
‫דופן חיידק גרם שלילי‪ :‬פפטידוגליקן דק‪ ,‬ממברנה חיצונית‪,‬‬
‫‪LPS‬‬
Peptidoglycan
Gram ??
Gram positive
 Gram staining

+
‫חוץ התא‬

‫בממברנה‬
‫החיצונית‬
 ‫‪LPS=Lipopolysaccharides‬‬
‫‪‬היבריד ליפיד‪-‬סוכר‪ :‬גורם וירולנטיות של גרם‬
‫שליליים (אנדוטוקסין)‬
‫‪‬וריאביליות אורך ה‪:O side chain-‬‬
‫‪( Smooth‬על אגר) – הרבה ‪repeating units‬‬
‫של שיירים סוכריים‬
‫‪( Rough‬על אגר) ‪ O side chain -‬חסר יח' חוזרות‬
‫‪‬פעילויות לדוגמה‪ :‬טוקסיות‪ ,‬סטימולציית דלקת‪ ,‬שפעול‬
‫מע' משלים‪ ,‬שפעול מקרופאגים ו‪ ,PMN-‬פירוגניות‪,‬‬
‫סטימולציית ספיגת עצם וסינתזת פרוסטגלנדינים ועוד‬
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫‪‬קפסולה ‪ :Slime layer /‬פוליסכרידים ‪ - / +‬חלבונים‪:‬‬
‫הגנה מכנית (התייבשות)‪ ,‬מחסום אוסמוטי‪ ,‬התחמקות‬
‫מפגוציטוזיס ומקור מזון בשעת דחק (לא לכולם)‬

‫‪ :S-layer‬חלבונים – מבנה גבישי מסודר (מחסום‬

‫הגנה גם מפאגוציטוזיס) (לא לכולם)‬
Capsule
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫‪( :Pili‬לטינית‪ :‬שיער)‪ .‬ארוכים יותר –‬
‫מעטים יותר‪( .‬לא לכולם)‬
‫‪( :Fimbriae‬לטינית‪ :‬סיב)‪ .‬קצרים יותר –‬
‫רבים יותר‪( .‬לא לכולם)‬
‫מבנה‪ :‬חלבון ‪.pilin‬‬
‫תפקידים‪ :‬היצמדות‪ ,‬קולוניזציה‪ ,‬פלישה‪,‬‬
‫קוניוגציה‪ ,‬אינדוקציה של אפופטוזיס‬
‫וסטימולצייה של ספיגת עצם‬
Fimbriae Pili
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫קוניוגציה (לא בכולם)‪ :‬סקס בחיידקים ‪+‬‬
‫ניתוח שינוי מין‬
‫‪ .1‬פלסמיד חיידק תורם ("זכר") נפתח (‪)F plasmid‬‬
‫‪ SS-DNA .2‬מועבר לחיידק מקבל ("נקבה") דרך ‪sex‬‬
‫‪( pilus‬לפעמים גם גנים נוספים מועברים כך)‬
‫‪ .3‬שני הפלסמידים (התורם והמקבל) מוכפלים‪,‬‬
‫המקבל יכול מעכשיו להיות תורם (זכר!)‪.‬‬
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫שוטון = ‪( Flagella‬אופציונלי) ‪ :‬אמצעי תנועה‬
‫(מהירות‪ 18 :‬קמ"ש!)‪ :‬עזרה בכימוטקסיס‬
‫חיובי‪/‬שלילי‬
‫חשוף לסביבה (מלבד ספירוכטות – שוטונים‬
‫פריפלסמיים!)‬
‫מבנה‪ + Flagellin :‬חלבונים אחרים‬
‫שוטונים בספירוכטות‪ :‬סיבוב כנגד הצילינדר‬
‫של התא גורם לו להסתלסל‬
 ‫סוגי ‪Flagella‬‬

‫פולרי (אחד)‬

‫‪( Lophotrichous‬הרבה‪ ,‬פולרי)‬

‫ביפולרי‬

‫‪( Peritrichous‬הרבה – מפוזרים)‬

 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫ממברנה ציטופלסמטית‪ :‬מפרידה את תוכן התא‬
‫מהסביבה‪ .‬ריכוז חלבון ממוצע בחיידק‪350 mg/ml :‬‬
‫(לעומת פלסמה‪ :‬כמה עשרות מ"ג)‬
‫בגרם חיוביים‪ :‬רק אחת‪ ,‬בשליליים‪ :‬שתיים (חלל‬
‫פריפלסמי ביניהן)‬
‫מבנה‪ Bilayer :‬פוספוליפידי דומה לאאוקריוטים רק‬
‫בלי סטרולים‪ ,‬עם חלבונים טרנס‪-‬ממברנליים‬
‫תפקיד‪ :‬מחסום סלקטיבי‪ ,‬אנזימי נשימה‪ ,‬רצפטורים‬
‫לקליטת סיגנלים סביבתיים‪ ,‬חלבוני טרנספורט‪ ,‬בגרם‬
‫שליליים‪ :‬פורינים‪ ,‬גורמי וירולנטיות (היצמדות‪)LPS ,‬‬
‫חיידק – מבנה ממברנה‬
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫ציטופלסמה‪ :‬תוך התא – חיי היומיום‪.‬‬
‫תכולה‪ :‬אנזימים‪ ,‬פריקורסורים‪ ,‬מקורות‬
‫אנרגיה‪ ,‬אברונים (ריבוזומים)‪ ,‬מקרומולקולות‬
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫‪‬איזור הגרעין‪ :‬כרומוזום מעגלי מקופל (ארוך פי ‪1000‬‬
‫ויותר מהחיידק)‪( dsDNA :‬כל האינפורמציה הגנטית‪:‬‬
‫אנזימים‪ ,‬חלבונים סטרוקטורלים‪ ,‬וכו')‪ ,RNA ,‬פלסמידים‪.‬‬
‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫מבנה ‪dsDNA‬‬
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫‪ ‬גודל ה‪ DNA-‬של חיידקים אורליים קטן יותר מזה של‬
‫חיידקים שחיים בסביבות שונות ובמאכסנים שונים‪,‬‬
‫לדוגמה‪ :‬ל‪ S. mutans-‬יש ‪ mill.bp 2.03‬לעומת‬
‫‪ Pseudomonas‬עם ‪ 6.2‬או ‪ E. Coli‬עם ‪4.6‬‬
‫‪ ‬יכולת רפליקציה עצמית – לדור הבא (מוטציות)‬
‫‪ ‬פלסמידים‪ :‬עצמאיים‪ .‬עמידויות‪ ,‬אנזימים ועוד‬
‫(גודל‪ bp2000:‬עד ‪)kbp100‬‬
‫‪‬בקטריופאז'ים‪ :‬אינטגרציה לכרומוזום החיידקי‬
‫הכרומוזום החיידקי וגם פלסמיד‬
 ‫שיכפול ‪DNA‬‬
‫כללי‪ :‬שכפול כלל ה‪ DNA-‬בתא אאוקריוטי‪ :‬כ‪8-‬‬
‫שעות‪ ,‬בקצב של ‪ 50bp‬לשניה עם מס'‬
‫מקורות שיכפול (ס"ה ‪ 3‬מיליארד בסיסים‬
‫בתא האנושי)‬

‫שכפול כלל ה‪ DNA-‬בתא פרוקריוטי‬

‫(‪ :)E. Coli‬כ‪ 40-‬דקות‪ ,‬בקצב של ‪1000bp‬‬
‫לשניה‪ ,‬מקור שיכפול אחד (ס"ה מס' מיליוני‬
‫בסיסים)‬
‫סמי‪-‬קונסרבטיבי (גדיל כפול חדש – מכיל חצי‬
‫מהישן)‪ .‬כיוון הסינתזה‪ :‬מ‪ 5'-‬ל‪3'-‬‬
Bacterial Replication
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫ריבוזומים = חלבונים ‪ .rRNA +‬שתי תת יח'‪:‬‬
‫)‪30S+50S=70S (vs 80S=40S+60S Eucar.‬‬
‫תת יח' קטנה נקשרת ל‪mRNA-‬‬
‫חלק מתת יח' קטנה‪( 16S rRNA :‬רצף ייחודי ושמור)‬
‫‪A-P-E sites‬‬

‫תפקיד‪ :‬ביח"ר לחלבונים‪ ,‬בעזרת‪:‬‬

‫‪tRNA, according to (DNA) mRNA template.‬‬
 ‫הערת ביניים לגבי ‪:S‬‬

‫‪Svedberg = sedimentation rate‬‬

‫‪1S = 10-13 sec‬‬
‫קצב השקיעה בצנטריפוגה לוגריתמי‪:‬‬
‫חלקיקים גדולים שוקעים מהר יותר‬
‫לכן המהירות גדולה יותר (הזמן קצר‬
‫יותר)‪ ,‬לדוגמה‪:‬‬
‫‪1/80*1013 =80x 10-13>70x 10-13‬‬
‫סינתזת חלבונים‬
 Bacterial Ribosome

(P)

(A)
(E)
 ‫חיידק ‪ -‬מבנה‬
‫גרנולות ציטופלסמטיות‪ :‬חמרים בלתי מסיסים‪ ,‬מאגר‬
‫חירום‪ :‬גליקוגן‪ ,‬שומנים‪ ,‬עמילן‪ ,‬חמרים אנאורגניים‪.‬‬

‫=‪PHB‬‬
‫‪Polyhydroxybutyrate‬‬
‫(מקור אנרגיה בסטרס)‬
‫צורות חיידקים (ויש עוד וריאציות)‬
 ‫הפה כאקוסיסטם‬
‫פרותטיקה‬ ‫אורתודונטיה‬
‫הפה‬

‫רקמות רכות‬ ‫שיניים‬ ‫נוזלים‬

‫ריריות‬ ‫לשון‬ ‫‪GCF‬‬ ‫רוק‬

‫‪Oclusal‬‬
‫חניכיים‬
‫‪subgingi‬‬ ‫‪supragingi‬‬
‫‪Interprox‬‬
‫‪4‬‬
 ‫האקולוגיה של הפה‪ :‬הרוק‬
‫הרכב‪ :‬מים‪ ,‬מומסים אורגניים ואנאורגניים‪ :‬חלבונים‪,‬‬
‫נוגדנים‪ ,‬מוקופוליסכרידים‪ ,‬אנזימים‪ ,‬ביקרבונט‪ ,‬קלציום ויונים‬
‫נוספים‪ ,‬ועוד (פירוט בהמשך)‪Salivary pellicle .‬‬
‫מקור‪ :‬מס' בלוטות‪ .‬מצב זיהום הרוק?‬

‫הבלוטות העיקריות‬ ‫דיירים‪?? :‬‬

‫האקולוגיה של הפה‪ :‬הנוזל הקרויקולרי‬
‫‪GCF =Gingival Crevicular Fluid‬‬
‫הרכב‪ :‬מרכיבי סרום (נוגדנים‪ ,‬משלים‪ ,‬תאי מע' חיסון)‪,‬‬
‫אנזימים (פירוט בהמשך)‪ .‬קיים בבריאות‪ ,‬מוגבר במחלה‪.‬‬
‫מקור‪ :‬זרימה מאזור חיבור אפיתל החניכיים לשיניים‬
‫דיירים‪?? :‬‬
 ‫האקולוגיה של הפה‪ :‬השיניים‬
‫ייחוד לחיידקים‪ ,non-shedding :‬הופעה בגיל מס' חדשים‪,‬‬
‫השתנות עד גיל ‪ ,12‬אפשרות להצטברות רובד (גם על‬
‫הצמנטום של השורש בנסיגת חניכיים)‬
‫הרכב‪ :‬מעל ‪ -‬האמייל (הידרוכסיאפטיט)‪ ,‬מתחת ‪ -‬דנטין‬
‫(קולגן‪+‬מינרלים) (טובולי דרך הדנטין בין המוך לאמייל)‬
‫משטחים‪ :‬על חניכיים (‪( )supra-gingival‬חלקים‪+‬חריצים)‪,‬‬
‫אינטר‪-‬פרוקסימליים‬
‫ותת‪-‬חניכיים (‪)sub-gingival‬‬
‫נוזל שטיפה‪ :‬רוק ‪ .GCF +‬לאיזה משטח? תדירות שטיפה??‬
‫סילוק מכני‪ :‬באיזה משטחים??‬
 ‫האקולוגיה של הפה‪ :‬השיניים‬
‫השפעות אנטומיות של מבנה השיניים על החיידקים‪:‬‬
‫המורפולוגיה‪ ,‬הכימיה‪ ,‬הסידור על הלסת‪ ,‬שחזורים לקויים‬
‫קצב שטיפת רוק‪ ,‬הגיינה קשה‪/‬קלה לביצוע‬
 ‫האקולוגיה של הפה‪ :‬הלשון‬

‫מבנה‪ :‬צד דורסלי‪ :‬עמקים וגאיות‪ ,‬הרים וגבעות (פפילות)‬

‫צד ונטרלי‪ :‬חלק יותר‪.‬‬
‫מאפיינים‪ :‬זיהום מקסימלי (למה? באיזה צד יותר?)‪,‬‬
‫נישות? מאגר חיידקים‬
‫האקולוגיה של הפה‪ :‬הריריות‬

‫מיקום‪ :‬השפתיים‪ ,‬הרירית הבוקלית ותיקרת הפה –‬

‫החיך הרך והקשה‪ .‬נוזל שטיפה?‬
‫חיידקים‪ :‬מזדמנים וזדוניים‪.‬‬
‫יתרונות וחסרונות‪?? :‬‬
 ‫האקולוגיה של הפה‪ :‬החניכיים‬

‫מיקום‪ :‬הרקמה המכסה על עצם הלסת‪ ,‬התאחיזה של‬

‫השיניים‪ .‬נוזל שטיפה?‬
‫חיידקים‪ :‬מזדמנים‪.‬‬
‫יתרונות וחסרונות‪?? :‬‬
‫האקולוגיה של הפה‪ :‬פרותטיקה ואורתודונטיה‬
‫אם לא מנוקים היטב – מאגרי חיידקים ופטריות‪.‬‬
‫הפטריות (כמו ‪ )Candida‬יכולות לגרום אינפקציות של‬
‫תותבות )‪( )Denture stomatitis‬על כך בהרצאה‬
‫נפרדת)‬
‫האקולוגיה של הפה‪ :‬סיכום‬

‫הפה מכיל הרבה גומחות‬

‫אקולוגיות‪ ,‬שמתחלקות‬
‫לתת‪-‬גומחות וצירופים שונים‬
‫של פרמטרים אקולוגיים‪.‬‬

‫החיידקים מצידם –‬
‫מאכלסים את הגומחות‬
‫השונות עפ"י העדפותיהם‪,‬‬
‫ולעיתים גם בניגוד לרצונם‪.‬‬