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Informe: Laboratorio de Genética para Microbiología, Martes-1500
Informe: Laboratorio de Genética para Microbiología, Martes-1500
INFORME
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGIA
(BI-640)
CULTIVO CELULAR
PRACTICA #8
NUMERO DE GRUPO: 9
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Laboratorio de Genética para Microbiología, martes-1500
INFORME
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGIA
(BI-640)
CULTIVO CELULAR
PRACTICA #8
NUMERO DE GRUPO: 9
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Laboratorio de Genética para Microbiología, martes-1500
INTRODUCCION
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Desde comienzos del siglo XX los entomólogos han tratado de mantener in vitro
células de insecto como una herramienta en diferentes campos de estudio (Lynn
2002). Pero solo hasta 1962 Grace obtuvo la primera línea celular de insecto
correspondiente a la polilla Antheraea eucalypti. Actualmente, existen más de 500
líneas celulares establecidas a partir de diversos tejidos de insectos, siendo mayor
el número de éstas en dípteros y lepidópteros (Lynn 2001).
La primera línea celular de Aedes aegypti fue establecida por Grace en 1966;
posteriormente, se generaron otras líneas celulares de esta misma especie (Bhat y
Singh 1969, Varma y Pudney 1969). Desde entonces, diferentes cultivos celulares
de mosquitos se han utilizado como sustratos para el aislamiento e identificación de
arbovirus. Sin embargo, existe en la actualidad una amplia gama de aplicaciones
biotecnológicas (Singh 1972, Sudeep et al. 2005), así como también biomédicas,
principalmente en investigaciones con algunas bacterias y parásitos (Syafruddin et
al. 1992, Dobson et al. 2002). En esta última línea de acción, es importante resaltar
el estudio realizado por Fampa et al. (2003), en el cual se muestra la interacción de
ciertas especies de tripanosomátidos monoxenos con líneas celulares de A.
albopictus, Anopheles gambiae y Lutzomyia longipalpis. De igual manera, se han
realizado infecciones con Trypanosoma brucei en cultivos celulares del mosquito A.
gambiae, en donde al parecer, no se disminuye la infectividad del parásito al utilizar
estas células como sustrato (Kaminsky et al. 1987).
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Materiales y métodos
Análisis estadístico: Los datos fueron analizados en el software Statistix 1.0 para
Windows. Se les aplicó la prueba de Anova de una vía y el test de Tukey. Los
resultados de la morfología celular, porcentaje de células con gránulos PAS positivo
y porcentaje de células con vacuolas PAS positivo, fueron analizados en Microsoft
Excel 2002, en donde se obtuvo promedio, desviación estándar y error estándar.
Resultados
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El Cuadro 1 nos muestra el promedio del tamaño celular (longitud y amplitud) de las
dos morfologías celulares encontradas.
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Discusión
Las vacuolas que fueron apreciadas en las electromicrografías, son similares a las
observadas en el citoplasma de una línea celular de A. triseriatus (Charpentier et al.
1995). El resultado positivo a la coloración de PAS concuerda con lo descrito en una
línea celular de A. eucalypti, en donde se menciona la presencia de vesículas
densas, las cuales fueron PAS positivo. Estas vesículas fueron descritas como
semejantes a lisosomas, aclarando que su naturaleza y función precisa no se
habían determinado (Grace 1971). La evidencia ultraestructural obtenida en el
presente trabajo, indica que efectivamente corresponden a lisosomas y su reacción
positiva a la coloración de PAS, lo reafirma. En cuanto a la presencia del material
PAS positivo, con diferente grado de intensidad, dentro de la gran cantidad de
vacuolas citoplasmáticas y gránulos, creemos que puede deberse a acumulación
de productos derivados del metabolismo celular.
Con los hallazgos observados en este trabajo por microscopia de luz y electrónica
se confirmó la internalización y transformación del parásito, demostrando la
capacidad que tiene las células de este cultivo celular de ser infectadas por L.
panamensis, lo cual permitiría proponer a este cultivo celular como un posible
modelo in vitro para el estudio de la interacción parásito-vector.
Agradecimientos
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Resumen
La primera línea celular de Aedes aegypti fue establecida por Grace en 1966 y
desde entonces se han utilizado para el estudio de virus, bacterias y parásitos. En
el presente trabajo se describen, por primera vez, algunas características
citoquímicas de los cultivos celulares de A. aegypti, infectados con la cepa
(MHOM/CO/87CL412) de Leishmania panamensis. También se realizó un estudio
morfológico de las células del cultivo. Se observaron 30 células pequeñas con
apariencia fibrolastoide de 10.84±2.54 µm de largo y 5.31±1.26 µm de ancho; otras
30 presentaron apariencia epitelioide con 23.04±4.00 µm de largo y 13.96±3.70 µm
de ancho; éstas últimas predominaron sobre las de apariencia fibroblastoide. De
113 células, un 7.08%, presentaron abundantes gránulos citoplasmáticos positivos
con la coloración de PAS, indicando presencia de polisacáridos. La prueba de
peroxidasa dio un resultado negativo. El mayor porcentaje de infección (18.90%),
de un total de 101 células, se presentó el día 6. Ultraestructuralmente, las células
presentaron un citoplasma con aspecto vacuolado; algunas contenían parásitos,
otras material fibrilar y otras estaban vacías. Los resultados indican que los cultivos
celulares de A. aegypti pueden ser infectados por L. panamensis y mantener dicho
proceso por aproximadamente una semana.
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MATERIALES
Cultivo de linfocitos
Tubo heparinizado
Estas cabinas están diseñadas para proporcionar un aire limpio y constante a una
velocidad de paso de aire de 0,3 a 0,5 metros por segundo para así barrer la
superficie de la zona de trabajo y evitar la suspensión de partículas así como una
posible contaminación de las muestras.
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Tubo estéril
Incubadora
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RPMI
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Filohemaglutanina
Penicilina y estreptomicina
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Agitador magnético
Agar
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Gentamicina
Acido propiónico
Levadura
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ACTIVIDADES
b) Utilizando el mapa mórbido humano, identifique 10 loci cromosómicos de 10
enfermedades humanas relevantes.
Enfermedad Locus
Mucoviscidosis 7q31.2
Enfermedad de Gaucher 1q21
Cáncer familiar de colon 8q21
Diabetes mellitus 11p15.5
Fenilcetonuria 12q23.2
Retinoblastoma 13 q14.2
Amiloidosis 11p15.1
Enfermedad del Alzheimer 14q24.3
distrofia miotónica 3 q21.
Deficiencia de ADA 20q13.12
Cuestionario-Enlace1
1.Desventaja del uso de suero fetal bovino como fuente de nutrientes
naturales
R// El suero tiene una composición que no es exacta y eso provoca que haya mucha
variabilidad entre un lote con otro lote de suero.
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3.Defina
• Hipoxia: Si se trabaja con porcentajes menores de oxigeno a los que se
encuentran en el tejido
• Normoxia: Si se trabaja con un porcentaje equivalente de oxígeno a los que se
encuentran en el tejido
• Hiperoxia: Porque esta con un porcentaje de oxígeno por encima del normal en el
tejido
En cuál de estas condiciones se trabajan los medios de cultivo celulares In-vitro
R// Se trabajan en condiciones Normoxia
6. Defina
• Isotónico: Las concentraciones de moléculas dentro de las células son iguales que
las concentraciones de moléculas en el medio, por lo tanto, hay equilibrio en el
sistema.
• Hipertónico: La concentración de moléculas en el exterior de la célula es mucho
mayor y por lo tanto el agua tiende a difundir desde la célula hacia el exterior
intentando equilibrar estas concentraciones, esto quiere decir que las células se
deshidratan.
• Hipotónico: La concentración de moléculas en el exterior de la célula es mucho
menor y por lo tanto la célula se hincha y al final puede acabar lisando
En cuál de estas condiciones se trabajan los medios de cultivo celulares In-vitro
R// Se trabajan en condiciones isotónicas
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DISCUSION
INTRODUCCIÓN:
Obtención de células:
Cultivo de células:
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alrededor de 7,4 y tienen, además, indicadores de pH, como el rojo fenol, que
cambian de color a medida que aparecen catabolitos ácidos como resultado del
metabolismo celular. Suelen agregarse también antibióticos y antimicóticos para
[2]
impedir la contaminación con microorganismos.
Los cultivos primarios pueden ser removidos del recipiente de cultivo para
formar cultivos secundarios y en estas condiciones las células suelen
multiplicarse hasta cubrir la superficie del recipiente de cultivo, formando una
monocapa (capa de una célula de espesor). Como consecuencia del contacto
entre las células se detiene temporalmente su proliferación, hasta que se las
subcultiva a un recipiente con medio fresco. Así, podrán subcultivarse durante
semanas o meses. En este estado, las células frecuentemente mostrarán
distintas propiedades según su origen.
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homogéneas. En muchos casos una célula única puede ser cultivada más
rápidamente hasta formar una colonia de muchas células idénticas, proceso
denominado clonación celular. La cepa de células resultante es homogénea,
con morfología y composición uniformes, y se denomina clon. Esta técnica,
utilizada con muchas bacterias, levaduras y tipos de celulares mamíferos,
facilita el aislamiento de clones de células genéticamente distintas y permite
obtener un número elevado de réplicas idénticas, con lo que se supera el grave
problema de heterogeneidad de las muestras, asociado al uso de animales de
experimentación.
-Validez del modelo 'in Vitro': El cultivo celular aporta unas respuestas cuya
validez se pueden cuestionar puesto que carecen de los componentes
sistémicos de regulación, implicados en la regulación de la homeostasis “in
vivo”, es decir, la célula se puede comportar de un modo diferente al no
encontrarse en su entorno, ha perdido la organización espacial tridimensional
propia del tejido y se han perdido las interacciones heterotópicas,
[1]
especialmente los sistemas nervioso y endocrino.
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Totipotencialidad:
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• El cultivo de meristemas:
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Las células animales tienen varias características que las diferencian de otras
células u organismos utilizados en la biotecnología. Son células de eucariotas
superiores, por lo que poseen núcleo y diversos organelos, tales como retículo
endoplásmico y aparato de Golgi [7]. Además, carecen de pared celular y son
más grandes que las levaduras o bacterias, con un diámetro aproximado de
entre 10 y 20 µm. Las diversas líneas celulares utilizadas en biotecnología
poseen distintas características morfológicas, bioquímicas y fisiológicas. Las
células animales se pueden derivar de tejido epitelial, conectivo, muscular o
nervioso. A diferencia de eucariotas inferiores (hongos, levaduras) y bacterias,
el cultivo de células animales representa retos enormes, ya que, entre otras
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¿Por qué entonces emplear células animales? Existen varias razones, entre las
cuales la más importante es que son capaces de producir proteínas altamente
parecidas a las que sintetiza el cuerpo humano, pues están más cerca
evolutivamente que las bacterias o levaduras.
Las células madre, su nombre en inglés “stem cells” significa “células tronco”,
ilustrando de otra manera la función vital que éstas cumplen en todos los
organismos multicelulares son las células originarias, no especializadas ni
formadas para una determinada función, que antes de formarse el embrión, se
están multiplicando en el zigoto. El zigoto se forma después de la fecundación
del óvulo por el espermatozoide y es en el mismo instante de la fecundación
cuando se forman las
células madre y empiezan a reproducirse hasta que, al tercer mes de embarazo
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Las células madre son células que se encuentran en todos los organismos
multicelulares y que tienen la capacidad de dividirse (a través de la mitosis) y
diferenciarse en diversos tipos de células especializadas y de auto-renovarse
para producir más células madre. En los mamíferos, existen diversos tipos de
células madre que se pueden clasificar teniendo en cuenta su potencia, a saber,
el número de diferentes tipos celulares en los que puede diferenciarse.
inmunitario). Sin embargo, recientes estudios indican que las células madre
adultas de todo el cuerpo tendrían la capacidad latente de tomar cualquiera de
las demás funciones celulares.
3. APLICACIONES EN MEDICINA:
La llegada de la ingeniería genética ha supuesto que numerosas proteínas
potencialmente terapéuticas, que antes se producían sólo en pequeñas
cantidades, puedan elaborarse en grandes cantidades. Hoy en día existen
cientos de genes de proteínas terapéuticas que se han expresado a nivel de
laboratorio, y que están intentando demostrar su adecuación clínica. Ya existen
más de 30 proteínas aprobadas para su uso clínico.
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Desventajas de las
Beneficios de las plantas transgénicas plantas
transgénicas
1. Resistencia a insectos 1. Los insecticidas Bt y similares
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5. BIBLIOGRAFÍA
• [3]
http://www.argenbio.org/adc/uploads/pdf/Cultivos%20celulares%20II%20E
uge.pdf
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• [4] http://myprofeciencias.wordpress.com/tag/celulas-totipotenciales/
• [5] Pierik, R.L.M. (1987) In vitro culture of higher plants. Editorial Martinus
Nijhoff Publishers.
• [6]http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libr
os/celular/cultivo s.htm
• [7]http://biotecnologia-robles.blogspot.com.es/2011/11/cultivos-de-celulas-
animales.html
• [8]http://www.fbmc.fcen.uba.ar/materias/agbt/teoricos/2011_21%20Culti
vos%20de%20celu las%20animales.pdf
• [9[http://www.revista.unam.mx/vol.6/num11/art104a/nov_art104a.pdf
• [10]http://www.ecojoven.com/uno/05/celulasm.html
• [11] http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/ambio.htm#_ftn11
• [12] Un ensayo breve sobre las promesas y riesgos de la biotecnología
ambiental, incluyendo la no basada en ADN recombinante, en Amils
2000.
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La más importante es que son capaces de Mediante éstas y otras técnicas de cultivo, es
producir proteínas altamente parecidas a las posible obtener plantas libres de microbios en un
que sintetiza el cuerpo humano, pues están medio nutritivo aséptico (estéril) en condiciones
más cerca evolutivamente que las bacterias o ambientales controladas.
levaduras.
Las diversas líneas celulares utilizadas en A partir de un explanto se pueden establecer
biotecnología poseen distintas características cultivos de células para producir compuestos de
morfológicas, bioquímicas y fisiológicas. Las interés, o para obtener embriones somáticos y
células animales se pueden derivar de tejido semillas artificiales, entre otras aplicaciones
epitelial, conectivo, muscular o nervioso.
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CONCLUSIONES
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CUESTIONARIO
1. ¿Qué son las células totipotenciales?
R// Estas células que tienen capacidad para dar lugar a cualquier estirpe celular,
pero no a un embrión completo (3)
R// Las células madre vienen en muchas formas diferentes. Los científicos creen
que cada órgano de nuestro cuerpo tiene su propio tipo específico de células madre.
Por ejemplo, nuestra sangre viene de células madre de la sangre (también
conocidas como hematopoyéticas). Las células madre también están presentes
durante las etapas tempranas del desarrollo humano, y cuando los científicos
cultivan estas, se denominan “células madre embrionarias”. La razón por la que los
científicos están entusiasmados con las células madre embrionarias es que el
trabajo natural de las estas células es el de construir todos los órganos y tejidos en
el cuerpo durante el desarrollo humano. Lo que esto significa es que las células
madre embrionarias, a diferencia de las células madre adultas, pueden ser dirigidas
potencialmente a la formación de casi cualquier otro tipo de los cientos que existen
de células humanas. Por ejemplo, mientras que la célula madre sanguínea sólo
puede formar sangre, una célula madre embrionaria puede formar sangre, hueso,
piel, cerebro, y así sucesivamente. Además, las células madre de embriones son
programadas por la naturaleza para formar tejidos e incluso órganos, mientras que
las células madre adultas no lo son. Esto significa que las células madre
embrionarias tienen una mayor capacidad natural para reparar los órganos
enfermos. Las células madre embrionarias se producen a partir de embriones de
unos pocos días de edad, sobrantes de tratamientos de fertilización in vitro, material
que si no es utilizado es desechado. (4)
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R// Cuando las células son reagrupadas para recrear una estructura tridimensional
parecida al tejido original (7)
R// Tiene sus raíces en el siglo XIX, cuando los estudiosos de la época plantearon
la hipótesis de que las células de los tejidos podrían comportarse de manera similar
a un organismo en busca de supervivencia en el medio ambiente. La teoría fue
reforzada por Ramón y Cajal, un neurobiólogo español, que llegó a la conclusión de
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que cuando se formaban las células nerviosas, había una "lucha" para obtener
espacio y nutrirlas para seguir creciendo. Y de estas dos investigaciones nació Cell
Ecology, que propone que el desarrollo celular tiene una influencia directa en el
medio ambiente, que sería ecológico y defiende ciertos genes. (11)
R// A partir de una planta madre se obtienen numerosos explantos que, sujetos a
condiciones y medios de cultivo adecuados, darán lugar a nuevas plantas iguales a
la planta original, permitiendo su multiplicación (12)
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Introducción
Discusion
Cuestionario
2. Anticoagulantes: Qué son p, Abreu M. Anticoagulantes: Qué son, principales tipos y para qué
sirven [Internet]. Tua Saúde. 2020 [cited 1 April 2020]. Available from:
https://www.tuasaude.com/es/anticoagulantes/
7. C�lulas madre [Internet]. Biologia.edu.ar. 2020 [cited 2 April 2020]. Available from:
http://www.biologia.edu.ar/reproduccion/celula-madre.htm
9. Una mosca muy valiosa para la investigación de enfermedades [Internet]. IRB Barcelona. 2020
[consultado el 1 de abril de 2020]. Disponible en: https://www.irbbarcelona.org/es/news/una-mosca-
muy-valiosa-para-la-investigacion-de-enfermedades
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10. ¿Qué son las células madre? - El nicho [Internet]. El nicho 2020 [consultado el 2 de abril de
2020]. Disponible en: https://ipscell.com/%C2%BFque-son-las-celulas-madre/
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