Professional Documents
Culture Documents
Lesingeenheidtema 9 2013 Studente
Lesingeenheidtema 9 2013 Studente
Gene en geen-
ekspressie
• Garrod (1902)
5
Fig. 17-2
EKSPERIMENT
MM + ornitien
MM + sitrullien
MM + arginien
(kontrole)
Klas I Klass II Klas III
GEVOLGTREKKING
CONCLUSION Wilde mutante mutante mutante
tipe (mutasie (mutasie in (mutasie
geen A) geen B) geen C)
Voorganger Voorganger Voorganger Voorganger
Geen A Ensiem A Eniem A Ensiem A Ensiem A
Ornitien Ornitien Ornitien Ornitien
Geen B Ensiem B Ensiem B Eniem B Ensiem B
Sitrullien Sitrullien Sitrullien Sitrullien
Geen C Ensiem C Ensiem C Eniem C Ensiem C
Arginien Arginien Arginien Arginien
Produkte van geen-ekspressie
• Insulien – hormoon
• 7
Basiese beginsels van transkripsie en
translasie
•
8
Basiese beginsels van transkripsie en
translasie
• Transkripsie
– Die sintese van ʼn komplimentêre RNA draad deur die leiding
van DNA
9
Basiese beginsels van transkripsie en
translasie
• Translasie
– Is die daadwerklike sintese van ʼn polipeptied onder die
leiding van mRNA
10
Fig. 17.3
– mRNA
Ribosoom
TRANSLASIE
• Eukariote
Nukleêre Polipeptied
membraan
RNA PROSESSERING
Pre-mRNA – Transkripsie en translasie is geskei in tyd en plek
mRNA
–
TRANSLASIE
Polipeptied
DNA RNA PROTEÏNE 11
Kodons: drietal basisse
• Genetiese informasie
– Geskryf in DNA as ʼn volgorde van nie-oorvleuelende basis
drietalle, of kodons
– Transkripsie – die DNA templaat draad verskaf die volgorde
van die nukleotied volgorde in die RNA transkrip
– Translasie – die volgorde van die kodons op die mRNA
word getransleer na ʼn ketting van aminosure – maak die
polipeptied ketting
12
Fig. 17.4
DNA Geen 2
molekuul
Geen 1
Geen 3
DNA draad 3 5
(templaat) A C C A A A C C G A G T DNA draad
(nie-templaat =
koderende draad)
TRANSKRIPSIE
U G G U U U G G C U C A
mRNA 5 3
Kodon
TRANSLASIE
13
Ontdekking van die genetiese kode
15
Fig. 17.5
Die genetiese kode
Tweede mRNA basis
U C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe Tyr Cys
UUC UCC UAC UGC C
U
UUA UCA Ser UAA Stop UGA Stop A
Leu UAG Stop
UUG UCG UGG Trp
18
Sintese en prosessering van RNA
• mRNA sintese
– Gekataliseer deur RNA polimerase
• Forseer die DNA drade van mekaar los en verbind RNA nukleotide
soos wat hulle basispaar met die DNA
– RNA polimerase
• Bou die polinukleotied in ʼn 5‟ - 3‟ rigting
–
–
19
Fig. 17.7
Synthesis and processing of RNA
Promoter
Transkripsie eenheid
5 3
3 5
Begin punt DNA
Inisiasie
RNA polimerase • RNA polimerase bind aan die promotor
1 • DNA draad wen af
• Polimerase inisieer RNA sintese
5 3
3 5
Templaat draad van DNA
Afgewende DNA RNA transkrip
Verlenging
• Polimerase beweeg stroomaf, wen die DNA af en
2 verleng die RNA transkrip in ʼn 5 3 rigting
DNA weer opgewen • DNA drade herstel weer die dubbel heliks
5 3
3 3 5
5
RNA transkrip
Terminasie
3 • RNA transkrip word vrygestel
• Polimerase gaan los van die DNA af
5 3
3 5
5 3 20
Voltooide RNA transkrip
Fig. 17.9
Verlenging Nie-templaat
DNA draad
RNA nukleotide
RNA
polimerase
3
3 ent
5
–
• Polimerase beweeg stroomaf
–
• RNA transkrip word vrygestel
22
• Polimerase gaan los van die DNA af
RNA polimerase binding en inisiasie van
transkripsie
• Promoters dui die inisiasie punt van RNA sintese
aan
• Begin punt van transkripsie
5 3
Polipeptied
3 5
5 3
3 5 5
RNA transkrip
–
• Transkripsie van poli-adenilasie volgorde (AAUAAA)
• Gedeeltes binne
– Belangrike funksie
• Fasiliteer die uitvoer van volwasse mRNA vanuit die
nukleus
– 3 ent
• Ontvang ʼn poli-A stert, 50-250 adenien nukleotide
Nukleêre
membraan
ʼn Gemodifiseerde guanien nukleotied 50 tot 250 adenien nukleotide
word bygevoeg aan die 5‟ ent word bygevoeg aan die 3 ent
TRANSKRIPSIE DNA
Proteïen-koderende segment Poli-adenilasie teken
RNA PROSESSERING Pre-mRNA 5 3
G P P P AAUAAA AAA…AAA
mRNA
Begin kodon Stop kodon
5 kroon 5 UTR 3 UTR Poli-A stert
TRANSLASIE Ribosoom
Polipeptied 28
Gesplete gene en RNA splitslassing
• RNA splitslassing
– Verwyder groot gedeeltes van die getranskribeerde RNA
– Introns (inmenger volgordes) word verwyder
– Eksons (expressed sequences/exit nucleus sequences)
word aan mekaar gebind
– Skep ʼn mRNA molekuul met ʼn aaneenlopende volgorde
wat getransleer gaan word na ʼn polipeptied
29
Fig. 17.11
Nukleêre
Membraan
Ekson Ekson Ekson
5 Intron Intron 3
TRANSKRIPSIE DNA Pre-mRNA 5 Kroon Poli-A stert
TRANSCRIPTION DNA
1 30 31 104 105 146
RNA PROSESSERING Pre-mRNA
RNA PROCESSING Pre-mRNA Introns uitgesny en
eksons aan mekaar gelas
mRNA
mRNA
Ribosome
TRANSLATION
mRNA 5 Kroon Poli-A stert
TRANSLASIE Ribosoom
Polipeptide
1 Koderende 146
5 UTR 3 UTR
segment
Polipeptied
30
Gesplete gene en RNA splitslassing
• RNA splitslassing
– Die sein vir RNA splitslassing by beide punte van ʼn intron
– Herken deur klein nukleêre ribonukleoproteïen (small
nuclear ribonucleoproteins) (snRNP)
– Verskeie snRNPs sluit aan by ander proteïne om die
spliseosoom te vorm
• Reageer met gebiede van die intron
31
Fig. 17.12
Protein
1 Other proteins
snRNA
snRNPs
Spliceosome
2 5
Nukleêre
membraan
TRANSKRIPSIE DNA
TRANSCRIPTION DNA
RNA PROSESSERING Pre-mRNA
RNA PROCESSING Pre-mRNA
Spliceosome
components
mRNA
mRNA
Cut-out
Ribosome
TRANSLATION intron
3
mRNA
TRANSLASIE Ribosoom 5
Polypeptide
Exon 1 Exon 2
Polipeptied 32
Fig. 17.12
Proteïen
1 Ander proteïne
snRNA
snRNPs
Spliseosoom
2 5
Spliseosoom
komponente
Uitgesnyde
intron
3
mRNA
5
Ekson 1 Ekson 2
33
Ribosieme
34
Die funksie en evolusionêre
belangrikheid van introns
• Sommige introns bevat volgordes wat geen-
aktiwiteit reguleer
• Splitslassing is nodig vir die mRNA om na die
sitoplasma vervoer te word
• Stel een geen in staat om vir meer as een
polipeptied te kodeer
– Alternatiewe splitslassing
• ʼn Enkele geen wat oorsprong gee aan twee of meer polipeptide
35
Fig. 18.13
Eksons
DNA
Troponien T geen
Primêre
RNA
transkrip
Nukleêre
membraan
RNA splitslassing
TRANSKRIPSIE DNA
mRNA of
TRANSCRIPTION DNA
RNA PROSESSERING Pre-mRNA
RNA PROCESSING Pre-mRNA
mRNA
mRNA
Ribosome
TRANSLATION
TRANSLASIE Ribosoom
Polipeptide
Polipeptied 36
Translasie: Sintese van ʼn polipeptied
– Ribosoom
• Las aminosure, wat gedra word deur die tRNA, aan die groeiende
kant van die polipeptied ketting
37
Fig. 17.14
Translasie: Sintese van ʼn polipeptied
Nukleêre
membraan
TRANSCRIPTION DNA
mRNA
Ribosome
mRNA
mRNA
Aminosure
Ribosome
TRANSLATION
Polipeptied
TRANSLASIE Ribosoom
Polipeptide
Gly
tRNA
3A 5 Antikodon
A A
U G G U U U G G C
5 Kodons 3
mRNA
38
Translasie: Sintese van ʼn polipeptied
39
Die struktuur en funksie van oordrag RNA
• tRNA struktuur
– Enkel RNA draad, omtrent 80 nukleotide lank, wat
terugvou op homself
– Drie-dimensionele struktuur
• Draad met komplimentêre nukleotide
• L-vorm
• ʼn Aminosuur heg aan die 3‟ ent, en ʼn antikodon aan een van die
lusse
40
Fig. 17.15
Waterstofbindings
Antikodon
Twee dimensionele struktuur 41
Fig. 17.15
Waterstof-
bindings
3 5
Antikodon Antikodon
42
Fig. 17.16
P Adenosien
2 ATP verloor twee P groepe
Pirofosfaat P Pi
en bind aminosuur as AMP
Fosfate Pi
Pi
tRNA
Die regte tRNA bind deur
kovalente bindings aan die
3 aminosuur en verplaas die P Adenosien
AMP
AMP
Geaktiveerde/gelaaide aminosuur
4
word vrygestel deur die ensiem
43
Aminoasiel tRNA (ʼn geaktiveerde/gelaaide aminosuur)
Die wobble-effek
44
Die genetiese kode
Tweede mRNA basis
U C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe Tyr Cys
UUC UCC UAC UGC C
U
UUA UCA Ser UAA Stop UGA Stop A
Leu UAG Stop
UUG UCG UGG Trp
45
Fig. 17.5
Antikodon
CUU
G AG
Kodon
• GAG, GAA is
die kodon
• 3‟CUU5‟ is
die antikodon
• Beide kodeer
vir glutamien
Antikodon
CUU
G AA
Kodon
46
Fig. 17.17
Ribosoom
• Fasiliteer spesifieke paring van tRNA antikodon met mRNA kodon
• Ribosomale subeenhede bestaan uit proteïne en RNA molekule wat
ribosomale RNA (rRNA) genoem word
Groeiende
polipeptied Uitgangstonnel
tRNA
molekule
Groot
E PA subeenheid
Klein
subeenheid
5
mRNA 3
Ribosoom
• Die ribosoom het ʼn bindingsetel vir mRNA en drie
bindingsetels vir tRNA
– Die P setel (peptidiel tRNA setel) – bevat die tRNA wat die groeiende peptied ketting dra
– Die A setel (aminoasiel-tRNA setel) – bevat die tRNA met die volgende aminosuur om
bygevoeg te word
– Die E setel (exit-/uitgangs-setel) – waar ontlaaide tRNA uit gaan
E setel
(Exit-/uitgang-setel)
Groot
E P A subeenheid
mRNA bindingsetel
Klein
subeenheid
48
Fig. 17.17
Ribosoom
Groeiende polipeptied
Amino ent
Die volgende aminosuur
wat by die groeiende
polipeptied gevoeg gaan
word
Kodons
49
Bou van die polipeptied
50
Ribosoom assosiasie en inisiasie van
translasie
• Die inisiasie stap van translasie bring die volgende
bymekaar
– mRNA
51
Fig. 17.18
Groot
ribosomale
3 U A C 5 subeenheid
P setel
5 A U G 3
Inisiator
tRNA GTP GDP
E A
mRNA 3 5
5 5
3 3
Begin kodon
Klein
mRNA bindingsetel ribosomale Translasie inisiasie kompleks
subeenheid
52
Inisiasie van translasie
• Begin met (prokariote):
– Klein ribosomale subeenheid
– mRNA (stroomop van die begin kodon)
– Bind aan die 5‟ kroon van die mRNA (stroomop van die begin kodon)
mRNA
– Kodon herkenning
Ribosome
TRANSLATION
Polypeptide
E 1 Kodon
mRNA 3
– Peptied bindings formasie P A herkenning
5 setel setel
2 GTP
– Translokasie 2 GDP
E E
P A P A
2
3 GDP
GTP
Peptied
Translokasie
E
bindingsformasie
54
P A
Verlenging
• Kodon herkenning
• Komplementêre basisparing
• Peptied bindingsformasie
• rRNA molekuul kataliseer die binding tussen die aminosure
• tRNA in die P setel word geskei van die groeiende polipeptied ketting
• Translokasie
• Ribosoom translokeer die tRNA in die A setel na die P setel
56
Fig. 17.20
Vrystellings-
Vrygestelde
faktor
polipeptied
5
3 3
3
5 5 2 GTP
Stop kodon 2 GDP
(UAG, UAA, of UGA)
57
Fig. 17.21
Poliribosome (polisome)
0.1 µm
58
Transkripsie
(Vergelyking)
Bakterieë Eukariote
– Een tipe polimerase in – Drie tipe (RNA pol I, II en III) in
sitoplasma nukleus
– Transkripsie faktore afwesig – Transkripsie faktore bind aan
promotor
– Terminasie volgorde – Poli-adenilasie volgorde (AAUAAA)
59
Vraag
60
Vraag
61
Vraag
• Met U
Tweede mRNA base
C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe UCC Tyr Cys
U UUC UAC UGC C
UUA UCA Ser UAA Stop UGA StopA
62
Vraag
• Met-Lys U
Tweede mRNA base
C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe UCC Tyr Cys
U UUC UAC UGC C
UUA UCA Ser UAA Stop UGA StopA
63
Vraag
• Met-Lys-Phe U
Tweede mRNA base
C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe UCC Tyr Cys
U UUC UAC UGC C
UUA UCA Ser UAA Stop UGA StopA
64
Vraag
• Met-Lys-Phe-Ser U
Tweede mRNA base
C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe UCC Tyr Cys
U UUC UAC UGC C
UUA UCA Ser UAA Stop UGA StopA
65
Vraag
• Met-Lys-Phe-Ser U
Tweede mRNA base
C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe UCC Tyr Cys
U UUC UAC UGC C
UUA UCA Ser UAA Stop UGA StopA
66
Punt mutasies kan proteïen struktuur en
funksie affekteer
• Mutasies
– Veranderinge in die genetiese materiaal van ʼn sel
• Punt mutasies
– ʼn Verandering in ʼn enkele basispaar van ʼn geen
67
Fig. 17.23
mRNA mRNA
Die mutante mRNA het
G A A G U A ʼn U i.p.v. ʼn A in
die een kode
5 3 5 3
68
Punt mutasie tipes
69
Substitusies
• Basispaar substitusie
– Die vervanging van een van die nukleotied basispare met
ʼn ander nukleotied basispaar
– Stil mutasies
• Baie klein effek of glad nie ʼn effek nie
– Missin mutasies
• Verander na ʼn ander aminosuur met dieselfde eienskappe
70
Substitusies
– Onsin mutasies
• ʼn Punt mutasie wat die aminosuur kodon verander in ʼn stop kodon
71
Fig. 17.24
Substitusies
Wilde tipe
A U G A A G U U U G G C U A A
mRNA
5 3
Proteïen Met Lys Phe Gly
Tweede mRNA basis Stop
U C A G
UUU UCU UAU UGU U Amino kant
Phe Tyr Cys Karboksiel kant
UUC UCC UAC UGC C
U Basispaar substitusie
UUA UCA Ser UAA Stop UGA Stop A
Leu UAG Stop
UUG UCG UGG Trp G Stil mutasie
Onsin
U i.p.v. ʼn A
A U G U A G U U U G G C U A A
72
Met
Stop
Punt mutasie tipes
73
Invoegings en weglatings
74
Punt mutasie tipes
• Elkeen van die volgende opsies is ʼn modifikasie van die sin
DIEKATEETDIEROT
• Watter van die volgende is gelykstaande aan ʼn
leesraamverskuiwing mutasie?
A.) DIEROTEETDIEKAT
B.) DIETAKEETDIEROT
C.) DIEKATWORDIEROT
D.) DIEKATETDIEROT
E.) KATEETDIEROT
75
Punt mutasie tipes
• Elkeen van die volgende opsies is ʼn modifikasie van die sin
DIEKATEETDIEROT
• Watter van die volgende is gelykstaande aan ʼn
leesraamverskuiwings mutasie?
A.) DIEROTEETDIEKAT
B.) DIETAKEETDIEROT
C.) DIEKATWORDIEROT
D.) DIEKATETDIEROT
E.) KATEETDIEROT
76
Fig. 17.24
Wilde tipe
DNA templaat draad 3 5
5 3
mRNA 5 3
Proteïen Stop
Amino ent Karboksiel ent
A ipv G Ekstra A
3 5 3 5
5 3 5 3
U ipv C Ekstra U
5 3 5 3
Stop Stop
Leesraamverskuiwing veroorsaak dadelik onsin
Stil (glad nie ʼn effek op die aminosuur volgorde nie)
(1 basispaar inplasing)
T ipv C afwesig
3 5 3 5
5 3 5 3
A ipv G afwesig
5 3 5 3
Stop
Leesraamverskuiwing veroorsaak ernstige missin
Missin
(1 basispaar weglating)
A ipv T afwesig
3 5 3 5
5 3 5 3
U ipv A afwesig
5 3 5 3
Stop Stop
79
Wat is ʼn geen?
Hersien die vraag
• Een geen – een polipeptied, maar….
– Meeste eukariotiese gene het groot introns wat nie ʼn
ooreenstemmende polipeptied het nie
– Promotors word nie getranskribeer nie, maar moet
teenwoordig wees vir transkripsie om plaas te vind
– snRNA, rRNA en tRNA word nie getransleer na
polipeptide nie, maar dien wel ʼn doel
80
Fig. 17.26
DNA
TRANSKRIPSIE
3
RNA
5 RNA polimerase
transkrip
RNA PROSESSERING
Ekson
RNA transkrip
(pre-mRNA)
Intron
Aminoasiel-tRNA
sintetase
NUKLEUS
Amino
suur
AMINOSUUR AKTIVERING
SITOPLASMA tRNA
mRNA Groeiende
polipeptied
3
A
Geaktiveerde
P aminosuur
Ribosomale
E
subeenhede
5
TRANSLASIE
E A
Antikodon
Kodon
Ribosoom 81
Fig. 21.8
Transponerende elemente
(beweegbare elemente)
• Benodig transposase
– Retrotransposons
• Beweeg dmv ʼn RNA tussenganger (transkrip van die
retrotransposon DNA)
84
Fig. 21.9
Transposon beweging
Transposon Inplasing
word gekopieer
Transposase
Mobiele transposon
85
Fig. 21.9
Retrotransposon beweging
Nuwe kopie van
Genoom DNA Retrotransposon retrotransposon
RNA pol I
RNA
Reverse Inplasing
transkriptase
Integrase
Retrotransposon beweging 86
Volgordes betrokke by transponeerbare
elemente
• Veelvoudige kopieë van transponeerbare
elemente en volgordes wat verband hou met hulle
– Versprei deur die hele eukariotiese genoom
• In mense
– ʼn Groot gedeelte van transponeerbare elemente
bestaan uit ʼn familie van ooreenkomstige volgordes wat
Alu elemente genoem word (10%)
• Getranskribeer na RNA molekule (funksie is onbekend)
• Belangrikheid?
87