Fluorescence, infrared, scanning electron microscopy (SEM), UV–visible, and X-ray

diffraction (XRD) techniques have been applied to monitor the effect of processing mode
on the residual cyanogens in cassava roots. The processed samples’ infrared spectra have
shown that only the boiled sample contains residual cyanide. SEM micrographs have
revealed that irregularly shaped granules of about 100-μm size contain cyanide, while
spherical granules of about 10-μm size do not. X-ray diffraction patterns have shown that
the intensities of peaks are not affected by the presence of cyanide in the cassava samples.
Fluorescence and UV–visible studies have detected the presence of cyanide converted to
cyanate in water used for soaking processes. The thermal behavior of cassava simples with
respect to the cyanide content and the role of oxygen and different ions present in water
used for soaking processes are also discussed.

INTRODUCTION starches because many researchers have

Cassava (Manihot esculenta Crantz) roots
form an important staple food for more
than 500 million people, mostly in humid
tropics such as Africa, Asia, and Latin
America. Cassava is a carbohydrate with
a high content of cyanogenic glycosides
(1–5).
Therefore, the consumption of uncooked
cassava is unsafe due to the potentially
toxic concentrations of cyanogenic
glucosides that are reduced to low levels
through cooking (6). The most popular
processing modes used in reducing the
cyanogen levels of cassava are drying,
steaming, soaking, boiling, and
fermentation.
All these processes reduce the total
cyanide content of cassava (7). There are
two types of cyanide in cassava. The free
cyanide, that is non-glycosidic, and the
bound cyanide, that is glycosidic (6, 7).
The bound cyanide in processed cassava
is the major source of dietary cyanide
exposure (8). Thus, there is a concerted
effort to try to make cassava consumption
safer. One approach is to breed plants
with low cyanogenic potential or develop
simple methods to test for the presence of
cyanide.
Hoover (9) reviewed the present
knowledge on the composition, structure,
and physicochemical properties of native
tuber and root starches and highlighted
the lack of information on most of the
used only one technique for determining
the properties of tuber and root starches.
He suggested that using different
techniques collectively might be a more
advantageous approach to obtain a deep
insight into the physicochemical
properties of these starches. In an
international workshop held in 1993, it
was also recognized that an important
contributor for safety in cassava
consumption is the availability of
analytical methods to monitor the level of
cyanogens (3). Among the many
analytical methods published in the
literature, most of them are time-
consuming and require some sample
preparation and skilled operators, and the
reliability and accuracy of such methods
have often been questioned (3, 7, 10, 11).
The presence of cyanide at very low
concentration is not always detected by
most of the standard methods. A method
that can use the root samples directly for
analysis and provide a quick estimate of
the cyanogenic potential is ideal.
Vetter (12) reviewed the different
methods used so far to detect cyanide,
including the indirect classical
photometrical method and the most recent
direct chromatographic method.
The objective of this work is to complete
the work done by Vetter (12) by
presenting spectroscopic methods that can
assess quickly and qualitatively the
release of cyanogenic compounds.
The methods reported herein are able to
directly detect cyanide at low
concentration in a processed cassava
sample. Infrared, scanning electron
microscopy (SEM), and X-Ray
diffraction (XRD) techniques were
applied to study the residual cyanide
present in the processed cassava sample,
while fluorescence and UV–visible
techniques were employed to monitor the
appearance of cyanide in water used for
boiling or soaking the cassava sample.
Attenuated totally reflectance infrared
(ATR-IR) spectroscopy has also been
used to identify cyanide in water used for
soaking. No fluorescence or ultraviolet
techniques have been used before in
cyanide detection. All these techniques do
not show any correlation between the size
and shape of the cassava granules and the
presence of cyanide in the granules.
MATERIALS AND METHODS
Cassava Root.
Fresh cassava root was bought at the
store. Its origin was not specified. The
cassava samples were cut into ∼2 mm
thick discs. The changes in molecular
composition and in concentration of free
cyanide (nonglycosidic) and bond
cyanide (cyanogenic glycosides)
were studied under different conditions
and for different objectives. To monitor
the changes in concentration of cyanide in
fresh cassava roots during boiling, air-
drying, and soaking processes, three
simples were cut from a fresh cassava
root. The first sample was sun-dried for
one month. The second sample was
soaked in tap water at room temperature
for one month. The third sample was
boiled for 30 min and then soaked in tap
water for one month. The water of the
second and third samples was removed
and replaced by fresh water every day.
To assess the influence of heat treatment
on the cyanogenic loss, an experiment
was carried out using one sample of
cassava to monitor the cyanide escaping
through heat. After recording the ATR-IR
infrared spectrum of one piece, we
divided this piece into three parts: one
part was oven-dried for 20 min at 60 °C,
one was boiled in water for 15 min, and
one was boiled in water for 15 min and
then oven-dried for 15 min.
Conflicting results on the oxidation
process taking place in the removal of
cyanide in cassava have been reported in
the literatura (3,5,7,8,13).
An experiment was carried out to explore
the role of oxygen, carbondioxide, and
ion traces in the removal of cyanide. Five
samples were cut from a fresh cassava
root. One sample was put in oxygenated
water. The second and third samples were
respectively soaked in deionized water
and previously heated deionized water (to
eliminate O2 and CO2) at room
temperature. High purity deionized water
was obtained from a Millipore Milli-Q-
System (Waters, Millipore, Medford,
MA). The fourth and fifth samples were
put in tap water and previously boiled tap
water, respectively, for 4 h. About 200
mg of each sample was placed in 50 mL
of adequate water.
Infrared Spectra.
The infrared spectra of the samples were
obtained using a Spectrum One
spectrometer from Perkin-Elmer. For
transmisión spectra, samples were
prepared as KBr discs with 10% w/w of
each sample. For ATR-IR spectra, an
ATR DuraVision accessory was used to
record the spectra of pure samples,
without any preparation. The spectra were
recorded between 4000 and 600 cm-1 at 4
cm-1 resolution, and 64 scans were
accumulated. All the infrared spectra
were normalized.
In order to facilitate assignments of the
infrared bands associated with vibrations
of oxygen sites, cassava samples were
soaked in D2O solutions. Mobile
hydrogen atoms attached to oxygen are
expected to be exchanged by deuterium
after repeated deprotonation/protonation
cycles performed in heavy water.
Scanning Electron Microscopy (SEM).
Granule morphology was observed with a
Hitachi scanning electron microscope
(model S-4700). The samples of tuber
pieces were coated with a thin layer of
gold prior
to being studied. All the scanning electron
micrographs were obtained using an
accelerating voltage of 5.0 kV and a
magnification of 500×.
Powder X-ray Diffraction (XRD).
X-ray spectra of the powdered samples
were recorded using a Siemens D5005.
The power was 40 kV/15 mA. The X-ray
source was Cu K radiation of 1.54
wavelength. The powdered samples were
maintained stationary while scattering
angles from 4 to 80° were scanned in the
reflection mode at a scanning
rate of 1° min-1.
Electronic Spectra.
The tuber pieces were cut into ∼2 mm
thick discs and weighed. About 200 mg
of each intact tuber piece was placed into
50 mL of adequate water. The cyanide
released from the tuber piece goes
through the aqueous medium by
diffusion. Electronic spectra are then run
over time. Absorption spectra were
performed in a 1 cm quartz cuvette using
a CARY BIO 300 spectrometer from
Varian. Fluorescence spectra were
similarly collected on a Varian Eclipse
spectrometer. Deionized water was used
as a blank.
RESULTS AND DISCUSSION
Effect of Processing Mode on the
Structure of Cassava Tuber Pieces.
ATR-IR spectra of powdered starch
(obtained from Fischer), a fresh tuber
piece, and powdered air-dried, soaked,
and boiled tuber pieces were obtained in
order to verify how the processing modes
might affect the structure of cassava. The
corresponding peak assignments are
given in Table 1 according to literature
values and our deuteration experiments
(4, 8, 14, 15).
The ATR-IR spectra are very similar,
showing that the major carbohydrate in
our samples is starch, in agreement with
the results of Hoover (9) and Demiate et
al. (13). The presence of free and bound
cyanide is evidenced in the fresh sample
by an infrared broad peak at around 2110
cm-1. The carbohydrate region (1300–
800 cm-1) remains unchanged in all
samples. As a result, it roughly appears
that the processing modes (boiling,
soaking, and sun-drying) do not
significantly affect the initial chemical
composition of cassava. This result is
consistent with the X-ray diffraction
results shown later.
Analysis of Residual Cyanide after
Different Processing Modes.
The loss of cyanide from the cassava
sample was simultaneously examined
using infrared, XRD, and SEM
techniques.
Figure 1 shows the transmission infrared
spectra of the sundried, soaked, and
boiled cassava in the 2600–600 cm-1
region. These spectra are in agreement
with those reported in the literature by
Demiate et al. (13) and Gunaratne and
Hoover (5).
The band at 2130 cm-1 on the infrared
spectra indicates the presence of bound
cyanide (15). When we compare all the
processed samples, we observe that only
the boiled sample contains bound
cyanide. The infrared technique was able
to detect residual cyanide at relatively
very low concentrations.
But a deeper analysis of the infrared
spectra shows that the infrared spectra of
our processed samples contain an
additional band at around 1731 cm-1.
This band is probably due to a residual
carboxylic acid that could not escape.
According to the intensity of this band,
gelatinization of starch in cassava
may explain the higher carboxylic acid
levels in the boiled sample than in the
other sample. This acid may be a part of
the molecular structure of cassava,
because it remains after heat treatment, as
the other bands of starch do. Demiate et
al. (13) have also observed the presence
of this band. The carboxylic acid may
have been generated by an oxidation
process. Future research is needed to
unambiguously clarify the origin of this
band at 1731 cm-1.
In order to find a correlation between the
presence of cyanide and the SEM
technique, we present Figures 2–4,
showing the micrographs obtained for the
sun-dried, soaked, and boiled cassava (4,
16). The grinding methods used when
preparing the
three samples for the SEM experiments
were similar. The particles of the boiled
sample have an irregular shape with a size
of more than 100 μm (Figure 2); they
contain fisures.
When the samples are sun-dried (Figure
3) or soaked (Figure 4), the particles are
spherical, with a smaller size of about 10
μm. The particles have imploded and
become smaller because they have
released cyanide. The size and shape of
our air-dried, soaked, and boiled samples
are in agreement with those reported by
Hoover (9). The degree of crystallinity of
tuber and root starch from cassava
(Manihot esculenta Crantz) has not been
thoroughly investigated (9). X-ray
diffraction analysis was performed to
reveal the presence of molecular order
postprocessing and the occurrence of any
change in order of the samples due to the
processing mode. For the first time to our
knowledge, the X-ray diffractograms of
boiled, soaked, and sun-dried samples of
cassava root are presented (Figure 5).
The diffractograms are typical of
amorphous systems, exhibiting a broad
pattern regardless of their processing
mode. The broad pattern contains two
weak peaks centered at around θ ) 15 and
20° (16). The intensity ratio I15/I20
seems to be smaller for the air-dried
sample, which has been found to contain
no cyanide by the infrared and SEM
techniques. This result may suggest that
the air-drying process brings more order
to the structure of cassava. Since
carbohydrates are amorphous, the X-ray
diffraction patterns are not well-defined.
Analysis of Residual Cyanide in the
Water Used for Soaking.
UV–visible and fluorescence techniques
simultaneously monitored the appearance
of cyanide in deionized wáter during the
soaking process. Ten grams of cassava
sample were soaked in 1000 mL of
deionized water (initial pH 6.93) for two
weeks. Infrared spectra of the cassava
sample were recorded to ensure that the
sample contained cyanide before the
soaking process. Aliquots were taken
over time, and their pH, UV–visible, and
fluorescence emission spectra were
recorded over time for two weeks. The
pH of deionized water decreased from
6.93 to 4.3 after two days. As there are no
reported values for cyanide from cassava
in the literature, UV–visible and
fluorescence spectra of standards such as
KCN and KOCN were also recorded for
species identification. Taking into
account the fact that the pKa for HCN is
9.2, we do not expect the presence of
CN– species in deionized water at our
work conditions (pH < 7).
The flask used for this experiment was
kept closed all the time, except when we
had to take aliquots or measure the pH.
We may have lost some cyanide in the
form of a gas.
UV–Visible Spectra.
During the soaking process, a peak
maximum was found at around 265 nm
(Figure 6a). After two hours, the solution
was saturated (Figure 6b). To identify the
absorbing species, we recorded the
spectra of KCN and KOCN aqueous
solutions (17). We were not able to detect
the absorbance of KCN. But Masao et al.
found a weak peak maximum at around
210 nm for a HCN aqueous solution (18).
KOCN gave rise to a peak at 250 nm. The
emerging peak at 265 nm in water used
for soaking was probably due to cyanate,
with a red shift due to the absence of K
and the presence of an unknown cation in
cyanide from cassava, but this suggestion
must be confirmed by the fluorescence
spectra.
Fluorescence Spectra. The absorption
spectra show a peak maximum at 265 nm;
thus, this wavelength was chosen as the
wavelength of excitation. The
fluorescence emission spectra of KCN
exhibited a peak maximum at around 284
nm while those of KOCN showed a peak
maximum at 370 nm.
The initial (after 5 min of soaking)
fluorescence emisión spectra (Figure 7)
exhibit four broad bands with maxima at
284 (very weak), 358 (very strong), 421
(very weak), and 460 (very weak) nm.
The comparison of the fluorescence
emisión spectra of KCN and those of
cyanide in soaking water showed that the
peak at 284 nm was due to CN- ion. But
that peak at 284 nm disappeared after 1 h.
The strong fluorescence emission
intensity around 358 nm initially
increases and then decreases over time,
without a shift of the peak maximum. The
comparison of the fluorescence emission
spectra of KOCN (peak maximum at 370
nm at pH 7) with those of cyanide in
soaking water showed that the peak at
358 nm was due to cyanate ion (OCN-)
produced by the reaction between cyanide
and oxygen contained in the wáter used
for soaking. The reaction 2KCN + O2 f
2KOCN is the probable mechanism of
production of the OCN- species. The
small red shift of 12 nm may be due to
the absence of K and the presence of an
unknown cation in cyanide from cassava.
The initial increase of intensity is due to
the increasing appearance of cyanide
released by the starchy part of the cassava
over time. After 2 h of soaking, we
observed that the viscosity of the solution
increases with increasing concentration of
cyanate and the pH decreases. High
viscosity and a decrease in pH are the
possible explanations of the decrease of
the fluorescence emission intensity
observed after 2 h of soaking. It is known
that the major carbohydrate in cassava is
starch. Starch and cyanide go into water
by diffusion. Starch in water increases
viscosity, as other investigators have
reported previously (19).
The viscosity effect and low pH are
known to affect the fluorescence emission
intensity of cyanate compounds (19). We
have worked in an almost closed bottle
under the hood, but we may have lost
some cyanide under the form of HCN
gas.
The peak at 421 and 460 nm increased
over time while remaining less strong
than the peak at 358 nm. But when that
solution (obtained after 2 weeks of
soaking time) was diluted in water, the
peak at 460 nm disappeared (Figure 8),
while the peak at 421 nm remained and
became stronger but less intense
than the peak at 358 nm. We believe that
the peak at 421 nm may be due in part to
the presence of an unknown catión
attached to cyanide ion. This insight may
help us determine under which form the
cyanide is present in the cassava, because
this question is still open to debate.
Influence of Heat Treatment on the
Cyanogen Loss.
To assess the influence of heat treatment
on the cyanogenic loss, an experiment
was carried out using one variety of
cassava to monitor the HCN escaping
with the addition of heat. After recording
the ATR-IR spectrum of one tuber piece
to verify the presence of cyanide, three
samples were prepared from this cassava
tuber piece: the first was oven-dried for
15 min at 60°C, the second one was
boiled in water for 15 min, and the third
one was boiled in water for 15 min and
then put in an oven for 15 min. Figure 9
shows the ATR-IR spectra of the three
parts of a tuber piece of cassava after the
thermal treatment. The presence of
cyanide is evidenced in the fresh tuber
sample (Figure 9, spectrum a) by an
infrared broad peak at around 2110 cm-1.
The boiled cassava still shows almost the
same amount of cyanide as the fresh tuber
sample (Figure 9, spectrum b). But when
a sample is subsequently oven-dried
(Figure 9, spectrum c) or directly oven-
dried (Figure 9, spectrum d), it shows no
trace of cyanide. Therefore, cyanide has
been completely removed without
changing cassava’s chemical structure.
This result shows that (a) “dry” heat
removes free and bond cyanide and (b)
the effect of temperature on cyanide
content in cassava depends on the mode
of processing. Briefly, the processing
modes did not significantly affect the
chemical composition of the cassava
sample. The ATR-IR technique can use
the cassava root directly for analysis and
provide a quick estimate of the
cyanogenic potential. In addition, this
technique requires no sample preparation.
Influence of Oxygen, Carbon Dioxide
and Ion Traces on Cyanogenic Loss.
The following experiment was carried out
to explore the role of oxygen, carbon
dioxide, and mineral traces in the removal
of cyanide. Five samples were cut from a
fresh cassava root. The first sample was
soaked in hydrogen peroxide solution
(3%). The second and third samples were
soaked in deionized water and preheated
(to eliminate dissolved O2 and CO2)
deionized water at room temperature,
respectively. The fourth and fifth samples
were soaked in tap water and preheated
tap water, respectively. About 200 mg of
each sample was used in 50 mL of
adequate water. In our study on cyanogen
elimination during processing, the initial
and final levels only are quantified. All
the experiments were conducted under the
hood at room temperature (the preheated
solution was allowed to cool down before
soaking the sample in it) and under a
controlled atmosphere. Cyanogen
elimination during processing was
monitored at the initial and final stages.
Table 2 shows the percent of cyanide
remove in cassava over time. The results
show that hydrogen peroxide, deionized
water, and preheated deionized water
release less cyanide than tap water.
According to these results, it seems that
oxygen (alone) and heat do not play a
major role in cyanide removal, while ion
traces contained in tap water speed up the
cyanide removal in cassava.
This study highlights the major changes
occurring in the infrared spectra and SEM
micrographs of cassava as a result of
different modes of processing. Soaking in
water and sun drying were very effective
in reducing bound cyanide. The ATR-
FTIR technique can use the tuber pieces
directly (without preparation) for analysis
and provide a quick estimate of the
cyanogenic potential. This technique will
be helpful to plant breeders, who often
deal with large numbers of samples.
There is a correlation between the size
and shape of cassava granules given by
the SEM micrographs and the presence of
cyanide. The processing modes did not
significantly affect the structure of the
cassava samples, as reflected by the
infrared and XRD spectra. Future work
will study cyanogenic differences
between cassavas from different regions.
The mechanism of metal/cyanide binding
Will also be investigated
Se han aplicado técnicas de fluorescencia,
infrarrojos, microscopía electrónica de
barrido (SEM), UV-visible y difracción
de rayos X (XRD) para controlar el efecto
del modo de procesamiento sobre los
cianógenos residuales en las raíces de
yuca. Los espectros infrarrojos de las
muestras procesadas han demostrado que
solo la muestra hervida contiene residual
de cianuro. SEM micrografías han
revelado que irregular en forma de
gránulos de aproximadamente 100- μ m
tamaño contienen cianuro, mientras
esféricos gránulos de aproximadamente
10- mu m tamaño de hacer no. X- rayo de
difracción patrones han demostrado que
las intensidades de los picos son no
afectadas por la presencia de cianuro en
las muestras de yuca. Los estudios de
fluorescencia y UV-visible han detectado
la presencia de cianuro convertido en
cianato en el agua utilizada para los
procesos de remojo. La térmica
comportamiento de yuca simples con
respecto a la del cianuro contenido y el
papel de oxígeno y diferentes iones
presentes en el agua usada para remojar
procesos están también discutido.
INTRODUCCIÓN
Yuca ( Manihot esculenta Crantz ) raíces
forman un importante alimento básico de
alimentos para más de 500 millones de
personas , sobre todo en húmedos
tropicales tales como África , Asia y
América Latina . La yuca es un
carbohidrato con un alto contenido de
glucósidos cianogénicos ( 1–5 ).
Por lo tanto, el consumo de yuca cruda no
es seguro debido a las concentraciones
potencialmente tóxicas de glucósidos
cianogénicos que se reducen a niveles
bajos durante la cocción ( 6 ). Los modos
de procesamiento más populares
utilizados para reducir los niveles de
cianógeno de la yuca son el secado, la
cocción al vapor, el remojo, la ebullición
y la fermentación.
Todos estos procesos reducen el
contenido total de cianuro de la yuca ( 7 ).
No son dos tipos de cianuro en la yuca. El
cianuro libre, que no es glucosídico, y el
cianuro unido, que es glucosídico ( 6, 7 ).
El cianuro unido en la yuca procesada es
la principal fuente de exposición al
cianuro en la dieta ( 8 ). Por lo tanto, no
es un concertado esfuerzo para tratar de
hacer que la yuca consumo más seguro.
Un enfoque es a criar plantas con baja
cianogénico potencial o desarrollar
simples métodos de prueba para la
presencia de cianuro.
Hoover ( 9 ) revisó el conocimiento actual
sobre la composición, estructura y
propiedades fisicoquímicas de los
almidones nativos de tubérculos y raíces
y destacó la falta de información sobre la
mayoría de los almidones porque muchos
investigadores han utilizado solo una
técnica para determinar las propiedades
de los tubérculos y las raíces. almidones.
Se sugirió que el uso de diferentes
técnicas colectivamente podría ser una
más ventajoso enfoque para obtener una
profunda penetración en los
fisicoquímicas propiedades de estos
almidones. En una internacional taller
celebrado en 1993, que fue también
reconoció que un importante
contribuyente a la seguridad en yuca
consumo es la disponibilidad de analíticas
métodos para monitorear el nivel de
cianógeno ( 3 ). Entre los muchos
métodos analíticos publicados en la
literatura, la mayoría de ellos requieren
mucho tiempo y requieren una
preparación de la muestra y operadores
expertos, y la confiabilidad y precisión de
tales métodos a menudo han sido
cuestionados ( 3, 7, 10, 11 ). La presencia
de cianuro en muy baja concentración se
no siempre detectado por la mayoría de
los estándares métodos. Un método que
puede utilizar las raíces muestras
directamente para el análisis y
proporcionar una rápida estimación de la
cianogénico potencial es ideal.
Vetter ( 12 ) revisó los diferentes métodos
utilizados hasta ahora para detectar el
cianuro , incluido el método fotométrico
clásico indirecto y el método
cromatográfico directo más reciente.
El objetivo de este trabajo es para
completar el trabajo hecho por Vetter (12)
por la presentación de espectroscópicas
métodos que puede evaluar de forma
rápida y cualitativamente la liberación de
cianogénicos compuestos.
Los métodos reportados en el presente
documento son capaces de directamente
detectar cianuro en baja concentración en
un procesado de yuca muestra. Se
aplicaron técnicas de infrarrojo,
microscopía electrónica de barrido (SEM)
y difracción de rayos X (XRD) para
estudiar el cianuro residual presente en la
muestra de yuca procesada, mientras que
se emplearon técnicas de fluorescencia y
UV-visible para controlar la apariencia
del cianuro en el agua utilizada. para
hervir o remojar la muestra de yuca.
Atenuada totalmente reflectancia
infrarroja (ATR-IR) espectroscopia ha
también sido utilizado para identificar el
cianuro en el agua utilizada para el
remojo. No se han utilizado técnicas de
fluorescencia o ultravioleta antes en la
detección de cianuro. Todas estas técnicas
no muestran ninguna correlación entre el
tamaño y forma de la yuca gránulos y la
presencia de cianuro en los gránulos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Raíz de yuca .
La raíz de yuca fresca se compró en la
tienda. Su origen no fue especificado. Las
muestras de yuca se cortaron en discos de
∼ 2 mm de espesor. Los cambios en la
composición molecular y en la
concentración de cianuro libre ( no
glucosídico ) y cianuro de enlace
( glucósidos cianogénicos )
fueron estudiados bajo diferentes
condiciones y para diferentes objetivos.
Para monitorear los cambios en la
concentración de cianuro en las raíces
frescas de yuca durante los procesos de
ebullición, secado al aire y remojo , se
cortaron tres simples de una raíz fresca de
yuca . La primera muestra se secó al sol
durante un mes. La segunda muestra se
sumerge en el grifo de agua en el
ambiente de temperatura para un solo el
mes. La tercera muestra se hirvió durante
30 min y entonces empapada en grifo de
agua para uno mes. El agua de la segunda
y tercera muestra se eliminó y reemplazó
por agua fresca todos los días.
Para evaluar la influencia de calor
tratamiento en la cianogénico pérdido, un
experimento fue llevado a cabo utilizando
una muestra de yuca para supervisar el
cianuro de escapar a través de calor.
Después de la grabación de la ATR-IR de
infrarrojos del espectro de una pieza, que
dividimos esta pieza en tres partes: una
parte se horno- secó para 20 min a 60 ° C,
uno se hirvió en agua para 15 min, y uno
se hirvió en agua para 15 min y luego
secados al horno durante 15 min.
Se han reportado resultados
contradictorios sobre el proceso de
oxidación que tiene lugar en la
eliminación de cianuro en la yuca en la
literatura ( 3,5,7,8,13 ).
Un experimento fue llevado a cabo para
explorar el papel de oxígeno, dióxido de
carbono y trazas de iones en la
eliminación de cianuro. Cinco muestras
fueron cortadas a partir de una fresca
yuca raíz. Una muestra se puso en agua
oxigenada. Las segundas y terceras
muestras fueron respectivamente
empapados en desionizada agua y
previamente calentado desionizada agua (
para eliminar O2 y CO2) en sala de
temperatura . De alta pureza desionizada
agua se obtiene a partir de un Millipore
Milli -Q- System (Waters, Millipore,
Medford, MA). Los cuarto y quinto
muestras se pusieron en grifo de agua y
previamente hervidos grifo de agua ,
respectivamente , para 4 h. Se colocaron
aproximadamente 200 mg de cada
muestra en 50 ml de agua adecuada .
Espectros infrarrojos .
Los espectros infrarrojos de las muestras
se obtuvieron usando un espectrómetro
Spectrum One de Perkin-Elmer. Para los
espectros de transmisión, las muestras se
prepararon como discos KBr con 10% p /
p de cada muestra. Para ATR-IR
espectros, un ATR DuraVision accesorio
se utiliza para registrar el espectro de
puros muestras , sin ninguna preparación .
Los espectros se registraron entre 4000 y
600 cm-1 a una resolución de 4 cm-1 , y
se acumularon 64 escaneos . Todos los
espectros infrarrojos se normalizaron .
En orden a facilitar las tareas de los
infrarrojos bandas asociadas con
vibraciones de oxígeno sitios , yuca
muestras se empaparon en D2O
soluciones . Móviles de hidrógeno átomos
unidos a oxígeno se espera a ser
intercambiados por deuterio después de
repetidas desprotonación / protonación
ciclos realizados en agua pesada .
Microscopía electrónica de barrido
(SEM). Granule la morfología se observó
con un Hitachi de barrido de electrones
microscopio ( modelo S-4700). Las
muestras de tubérculos piezas fueron
recubiertas con una fina capa de oro antes
a ser estudiado . Todos los de exploración
de electrones micrografías se obtienen
usando una de aceleración de voltaje de
5,0 kV y una magnificación de 500 ×.
Difracción de rayos X en polvo (DRX).
Los espectros de rayos X de las muestras
en polvo se registraron utilizando un
Siemens D5005. La potencia era de 40
kV / 15 mA. La fuente de rayos X fue
radiación Cu K de 1,54 de longitud de
onda . Las muestras en polvo se
mantuvieron estacionarias mientras que
los ángulos de dispersión de 4 a 80 ° se
escanearon en el modo de reflexión en un
escaneo tasa de 1 ° min-1.
Espectros electrónicos.
Las piezas de tubérculo se cortaron en
discos de ∼ 2 mm de espesor y se pesaron
. Se colocaron aproximadamente 200 mg
de cada pieza de tubérculo intacta en 50
ml de agua adecuada . El cianuro liberado
desde el tubérculo pieza va a través de la
acuosa medio por difusión . Electrónicos
espectros son entonces corren más
tiempo. Los espectros de absorción se
realizaron en una cubeta de cuarzo de 1
cm usando un espectrómetro CARY BIO
300 de Varian . Los espectros de
fluorescencia se recogieron de manera
similar en un espectrómetro Varian
Eclipse . Se usó agua desionizada como
blanco .
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Efecto del modo de procesamiento en la
estructura de las piezas de tubérculos de
yuca .
ATR-IR Los espectros de polvo de
almidón ( obtenido de Fischer), un fresco
del tubérculo pieza , y polvo de aire se
seca , empapado , y hervidas tubérculos
piezas se obtuvo en orden a verificar
cómo los procesamiento modos podrían
afectar a la estructura de la yuca . Las
asignaciones de picos correspondientes se
dan en la Tabla 1 de acuerdo con los
valores de la literatura y nuestros
experimentos de deuteración ( 4, 8, 14,
15).
Los espectros de ATR-IR son muy
similares, mostrando que el carbohidrato
principal en nuestras muestras es el
almidón , de acuerdo con los resultados
de Hoover ( 9 ) y Demiate et al. ( 13 ) La
presencia de libre y unido cianuro se pone
de manifiesto en la fresca de la muestra
por un infrarroja amplio pico a alrededor
de 2110 cm-1. La región de carbohidratos
(1300–800 cm-1) permanece sin cambios
en todas las muestras. Como un resultado,
que más o menos parece que los de
procesamiento de modos ( hirviendo,
remojo y secado al sol ) no afectan
significativamente la composición
química inicial de la yuca . Este resultado
es consistente con los X- rayo de
difracción resultados mostrados más
adelante.
Análisis de cianuro residual después
de diferentes modos de procesamiento.
La pérdida de cianuro de la yuca muestra
fue simultáneamente examinó usando
infrarrojos, XRD, y SEM técnicas.
La Figura 1 muestra la transmisión de
infrarrojos espectros de los secados al sol,
empapado, y hervido yuca en el 2600 a
600 cm-1 región. Estos espectros están de
acuerdo con los reportados en la literatura
por Demiate et al. ( 13 ) y Gunaratne y
Hoover ( 5 ).
La banda a 2130 cm-1 en los espectros
infrarrojos indica la presencia de cianuro
unido ( 15 ). Cuando nos comparamos
todos los procesados muestras, que
observamos que solamente el hervido de
muestra contiene cota de cianuro. La
técnica infrarroja fue capaz de detectar
cianuro residual a concentraciones
relativamente muy bajas.
Pero un análisis más profundo de los
espectros infrarrojos muestra que los
espectros infrarrojos de nuestras muestras
procesadas contienen una banda adicional
de alrededor de 1731 cm-1. Esta banda es
probablemente debido a un residual
carboxílico ácido que podría no escapar.
De acuerdo a la intensidad de esta banda,
la gelatinización del almidón en la yuca
puede explicar los niveles más altos de
ácido carboxílico en la muestra hervida
que en la otra muestra. Este ácido puede
ser parte de la estructura molecular de la
yuca, ya que permanece después del
tratamiento térmico, como lo hacen las
otras bandas de almidón. Demiate y col.
( 13 ) también han observado la presencia
de esta banda. El ácido carboxílico puede
haber sido generado por un proceso de
oxidación. Se necesita investigación
futura para aclarar inequívocamente el
origen de esta banda a 1731 cm-1.
En orden a encontrar una correlación
entre la presencia de cianuro y el SEM
técnica, que presentan las figuras 2 - 4,
que muestra las micrografías obtenidas
por el secado al sol, empapado, y hervido
yuca ( 4, 16 ). Los métodos de molienda
utilizados al preparar el
Tres muestras para los experimentos SEM
fueron similares. Las partículas de la
muestra hervida tienen una forma
irregular con un tamaño de más de 100 μ
m ( Figura 2 ); que contienen fisures.
Cuando las muestras son secados al sol
( Figura 3 ) o empapado ( Figura 4 ), las
partículas son esféricas , con un pequeño
tamaño de aproximadamente 10 μ m . Las
partículas han hecho implosión y vuelto
más pequeño debido a que han lanzado
cianuro. El tamaño y la forma de nuestras
muestras secadas al aire , empapadas y
hervidas están de acuerdo con las
informadas por Hoover ( 9 ). El grado de
cristalinidad del tubérculo y el almidón de
raíz de la yuca ( Manihot esculenta Crantz
) no se ha investigado a fondo ( 9 ). X-
rayo de difracción análisis se realizó para
revelar la presencia de molecular fin de
postprocesado y la ocurrencia de
cualquier cambio en orden de las
muestras debido al procesamiento modo.
Para la primera vez para nuestro
conocimiento, los X- rayos
difractogramas de hirvieron , empapados ,
y secados al sol muestras de yuca raíz se
presentan ( Figura 5 ). Los difractogramas
son típicos de los sistemas amorfos ,
exhiben un patrón amplio
independientemente de su modo de
procesamiento . El amplio patrón
contiene dos débiles picos centrados en
torno a θ ) 15 y 20 ° ( 16 ). La intensidad
de relación de I15 / I20 parece a ser más
pequeña para el aire se seca la muestra ,
que ha sido encontrado para contener no
cianuro por los infrarrojos y SEM
técnicas . Este resultado puede sugerir
que el proceso de secado al aire da más
orden a la estructura de la yuca. Desde los
hidratos de carbono son amorfo, los X-
rayo de difracción patrones son no bien
definidos.
Análisis de cianuro residual en el agua
utilizada para remojar .
UV-visible y de fluorescencia técnicas
simultáneamente monitoreados la
aparición de cianuro en desionizada wáter
durante el remojo proceso . Diez gramos
de yuca muestra se empaparon en 1000
ml de desionizada agua ( inicial pH 6,93)
para dos semanas . Se registraron los
espectros infrarrojos de la muestra de
yuca para asegurar que la muestra
contuviera cianuro antes del proceso de
remojo . Se tomaron alícuotas con el
tiempo, y sus espectros de pH, UV-visible
y emisión de fluorescencia se registraron
con el tiempo durante dos semanas . El
pH del agua desionizada disminuyó de
6.93 a 4.3 después de dos días . Como no
hay reportados valores de cianuro de yuca
en la literatura , UV-visible y de
fluorescencia espectros de normas tales
como KCN y KOCN fueron también
registrados para especies de identificación
. Teniendo en cuenta el hecho de que la p
K una de HCN es 9.2, que sí no
esperamos la presencia de CN- especies
en desionizada agua en nuestros trabajos
condiciones (pH <7).
El frasco utilizado para este experimento
se mantuvo cerrado todo el tiempo,
excepto cuando nos tuvimos que tomar
alícuotas o medir el pH. Nos podríamos
haber perdido algo de cianuro en la forma
de un gas.
Espectros UV-visibles .
Durante el proceso de remojo , se
encontró un pico máximo a alrededor de
265 nm ( Figura 6a ). Después de dos
horas , la solución estaba saturada
( Figura 6b ). Para identificar los
absorbentes de especies , que registró el
espectro de KCN y KOCN acuosas
soluciones ( 17 ). Nos quedamos no poder
para detectar la absorbancia de KCN.
Pero Masao et al. encontró un pico
máximo débil a alrededor de 210 nm para
una solución acuosa de HCN ( 18 ).
KOCN dio lugar a un pico a 250 nm. La
emergente pico a 265 nm en agua
utilizada para el remojo era
probablemente debido a cianato , con un
desplazamiento hacia el rojo debido a la
ausencia de K y la presencia de un
desconocido catión en cianuro de yuca ,
pero esta sugerencia debe ser confirmado
por la fluorescencia espectros .
Espectros de fluorescencia . Los espectros
de absorción muestran un pico máximo a
265 nm; así , esta longitud de onda fue
elegida como la longitud de onda de
excitación . Los espectros de emisión de
fluorescencia de KCN exhibieron un pico
máximo a alrededor de 284 nm mientras
que los de KOCN mostraron un pico
máximo a 370 nm.
Los espectros iniciales de emisión de
fluorescencia (después de 5 minutos de
remojo ) ( Figura 7 ) exhiben cuatro
bandas anchas con máximos a 284 ( muy
débil ), 358 ( muy fuerte ), 421 ( muy
débil ) y 460 ( muy débil ) nm. La
comparación de los espectros de emisión
de fluorescencia de KCN y los de cianuro
en agua de remojo mostró que el pico a
284 nm se debía al ion CN. Pero ese pico
a 284 nm desapareció después de 1 h. La
fuerte fluorescencia de emisión de
intensidad alrededor de 358 nm
inicialmente aumenta y luego disminuye
más de tiempo, sin un cambio de la pico
máximo . La comparación de los
espectros de emisión de fluorescencia de
KOCN ( pico máximo a 370 nm a pH 7)
con los del cianuro en agua de remojo
mostró que el pico a 358 nm se debió al
ion cianato (OCN-) producido por la
reacción entre el cianuro y el oxígeno
contenido en el agua utilizada para
remojar . La reacción 2KCN + O2 f
2KOCN es el mecanismo probable de
producción de la especie OCN . El
pequeño desplazamiento hacia el rojo de
12 nm puede ser debido a la ausencia de
K y la presencia de un desconocido catión
en cianuro de yuca .
El aumento inicial de intensidad se debe a
la aparición creciente de cianuro liberado
por la parte almidonada de la yuca con el
tiempo. Después de 2 h de remojo , que
observó que la viscosidad de la solución
aumenta con el aumento de la
concentración de cianato y el pH
disminuye . La alta viscosidad y una
disminución del pH son las posibles
explicaciones de la disminución de la
intensidad de emisión de fluorescencia
observada después de 2 h de remojo . Que
es conocida
que el principal carbohidrato en la yuca es
el almidon . El almidón y el cianuro
entran al agua por difusión . El almidón
en el agua aumenta la viscosidad , como
otros investigadores han informado
anteriormente ( 19 ).
Se sabe que el efecto de la viscosidad y el
bajo pH afectan la intensidad de emisión
de fluorescencia de los compuestos de
cianato ( 19 ). Nosotros hemos trabajado
en una casi cerrada la botella bajo el
capó , pero que puede haber perdido algo
de cianuro bajo la forma de gas de HCN.
El pico a 421 y 460 nm aumentó con el
tiempo mientras permaneció menos fuerte
que el pico a 358 nm. Pero cuando esa
solución ( obtenida después de 2 semanas
de tiempo de remojo ) se diluyó en agua ,
el pico a 460 nm desapareció ( Figura 8 ),
mientras que el pico a 421 nm
permaneció y se hizo más fuerte pero
menos intenso
que el pico a 358 nm. Nosotros creemos
que el pico en 421 nm puede ser debido
en parte a la presencia de un desconocido
catión unido a cianuro de iones. Esta idea
puede ayudarnos a determinar bajo qué
forma está presente el cianuro en la yuca ,
porque esta pregunta aún está abierta a
debate.
Influencia del tratamiento térmico en la
pérdida de cianógeno .
Para evaluar la influencia de calor
tratamiento en la cianogénico pérdida , un
experimento fue llevado a cabo usando
una variedad de yuca para supervisar el
HCN escapar con la adición de calor .
Después de la grabación de la ATR-IR
espectro de un tubérculo pieza a verificar
la presencia de cianuro, tres muestras se
prepararon a partir de este yuca tubérculo
pieza: la primera se horno- secó para 15
min a 60 ° C, el segundo uno se hierve en
agua para 15 min, y el tercero uno se
hirvieron en agua durante 15 min y luego
ponen en un horno para 15 min. La Figura
9 muestra el ATR-IR Los espectros de las
tres partes de un tubérculo pieza de yuca
después de la térmica tratamiento. La
presencia de cianuro se pone de
manifiesto en el fresco del tubérculo de la
muestra ( Figura 9 , espectro de una ) por
una infrarrojo amplio pico a alrededor de
2110 cm-1. La yuca hervida todavía
muestra casi la misma cantidad de cianuro
que la muestra de tubérculo fresco
( Figura 9 , espectro b ). Pero cuando una
muestra se seca posteriormente en horno (
Figura 9 , espectro c ) o se seca
directamente en horno ( Figura 9 ,
espectro d ), no muestra rastros de
cianuro . Por lo tanto , cianuro ha sido
completamente eliminado sin cambiar de
yuca química estructura . Este resultado
muestra que ( a ) “ seco ” calor elimina
libres y esclavos cianuro y (b) el efecto de
la temperatura en cianuro contenido en
yuca depende en el modo de
procesamiento . Brevemente , los de
procesamiento modos qué no
significativamente afectan a la química
composición de la yuca muestra . El
ATR-IR técnica puede utilizar la yuca
raíz directamente para el análisis y
proporcionar una rápida estimación de la
cianogénico potencial . En adición , esta
técnica requiere ninguna muestra de
preparación .
Influencia del oxígeno , dióxido de
carbono y trazas de iones en la pérdida
cianogénica .
El siguiente experimento se llevó a cabo
para explorar el papel del oxígeno , el
dióxido de carbono y las trazas minerales
en la eliminación del cianuro . Cinco
muestras fueron cortadas a partir de una
fresca yuca raíz . La primera muestra se
empapó en solución de peróxido de
hidrógeno (3%). Las segundas y terceras
muestras se empaparon en desionizada
agua y precalentados ( a eliminate
disuelto O2 y CO2) desionizada agua en
sala de temperatura , respectivamente .
Los cuarto y quinto muestras se
empaparon en grifo de agua y
precalentado grifo de agua ,
respectivamente . Se usaron
aproximadamente 200 mg de cada
muestra en 50 ml de agua adecuada . En
nuestro estudio sobre cianógeno
eliminación durante el procesamiento , las
iniciales y finales niveles solamente se
cuantificó . Todos los experimentos se
llevaron a cabo bajo el capó en sala de
temperatura ( el precalentado solución se
dejó a enfriar hacia abajo antes de remojo
la muestra en ella ) y bajo una controlada
atmósfera . La eliminación de cianógeno
durante el procesamiento se controló en
las etapas inicial y final . La Tabla 2
muestra el porcentaje de eliminación de
cianuro en la yuca con el tiempo. Los
resultados muestran que el hidrógeno
peróxido , desionizada agua , y
precalentado desionizada agua liberación
menos cianuro de grifo de agua . De
acuerdo a estos resultados , que parece
que el oxígeno ( solo ) y el calor hacen
que no juegan un importante papel en
cianuro de extracción , mientras que las
trazas de iones contenidos en el grifo de
agua de velocidad hasta el cianuro de
eliminación de yuca .

Este estudio destaca los principales

cambios que ocurren en los espectros
infrarrojos y las micrografías SEM de
yuca como resultado de diferentes modos
de procesamiento . El remojo en agua y el
secado al sol fueron muy efectivos para
reducir el cianuro unido . El ATR-FTIR
técnica puede utilizar los tubérculos
piezas directamente ( sin preparación )
para el análisis y proporcionar una rápida
estimación de la cianogénico potencial .
Esta técnica le será muy útil a la planta
criadores , que a menudo tienen que ver
con grandes números de muestras . No es
una correlación entre el tamaño y forma
de yuca gránulos dadas por los SEM
micrografías y la presencia de cianuro .
Los procesamiento modos qué no
significativamente afectan a la estructura
de los yuca muestras , como se refleja por
el infrarrojo y XRD espectros . Futuro
trabajo será estudiar cianogénicos
diferencias entre yuca de diferentes
regiones . El mecanismo de de metal /
cianuro de unión Will también ser
investigado