МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ

НАЦІОНАЛЬНИЙ ТЕХНІЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

«ХАРКІВСЬКИЙ ПОЛІТЕХНІЧНИЙ ІНСТИТУТ»

Кафедра біотехнології, біофізики та аналітичної хімії

Реферат
з дисципліни
«Экобіотехнологія»

на тему:
«Біодобрива. Азотфіксуючі мікроорганізми і препарати на їх основі»

Виконала
студентка групи ХТ-416а
Кабанець Марія Олександрівна
Перевірила
проф. Близнюк О. М.

Харків
2020
 ЗМІСТ

1. Вступ
2. Особливості біодобрив
3. Фосфобактерін
4. Азобактерин
5. Добрива на основі бульбочкових бактерій
6. Нітрагин
7. Процес приготування бактеріального добрива
8. Висновок
9. Список джерел інформації
 ВСТУП

Присутня в грунті мікрофлора безпосередньо впливає на її родючість, і як

наслідок, на підвищення врожайності сільськогосподарських культур. Грунтові
мікроорганізми в процесі росту і розвитку покращують структуру грунтів,
накопичують в них поживні речовини, мінералізуючи різні органічні і неорганічні
сполуки, наприклад, азоту і фосфору, перетворюючи їх в підсумку в
легкозасвоювані рослиною продукти харчування.
З метою стимулювання діяльності грунтової мікрофлори застосовують різні
бактеріальні добрива, які збагачують ризосферу рослин корисними
мікроорганізмами.
Рослини синтезують ряд сполук, що регулюють їх ріст і розвиток
(фітогормони, біорегулятори). До їх числа належать ауксини, гібереліни,
цитокініни. Дозрівання плодів стимулює етилен. Ці біорегулятори знаходять
застосування в сільському господарстві. До числа нових, виявлених в останні
роки биорегуляторов відносять пептиди, є перспективи їх застосування в
сільському господарстві.
Біологічні (бактеріальні) добрива застосовують для збагачення грунту
зв'язаним азотом. Великого поширення набули препарати нітрагін і азотобактерин
- клітини бульбочкових бактерій і азотобактера, до яких додають стабілізатори
(мелясу, тіомочевину) і наповнювач (бентоніт, грунт). Азотобактерин збагачує
грунт не тільки азотом, але і вітамінами і фітогормонами, гібереліни і
гетероауксинами. Препарат фосфобактерін з Bacillusmegaterium перетворює
складні органічні сполуки фосфору в прості, легко засвоювані рослинами.
Фосфобактерін також збагачує грунт вітамінами і покращує азотне живлення
рослин.
 ОСОБЛИВОСТІ БІОДОБРИВ
За видовою приналежністю, в залежності від природи діючого початку,
біопрепарати поділяють на три основні групи:
Бактеріальні - зроблені на основі різних видів бактерій, їх застосовують для
боротьби з шкідниками і гризунами, проти фітопатогенів - бактерій-антагоністів;
Грибні - основою є гриби-ентомопатогени з широким спектром дії проти
шкідників і мікроби-антагоністи і гіперпаразит, специфіка яких використана в
боротьбі проти хвороб;
Вірусні - виготовлені на основі ентомопатогенних вірусів. Висока
специфічність цієї групи біопрепаратів обумовлює їх дію переважно на одного
шкідника.
Бактеріальні добрива - це препарати, що сприяють поліпшенню живлення
рослин. Поживних речовин вони не містять. Препарати, в яких містяться корисні
для сільськогосподарських рослин грунтові мікроорганізми. При внесенні цих
добрив в грунті посилюються біохімічні процеси і поліпшується кореневе
живлення рослин.

Найпоширенішими бактеріальними добривами є:

1. нітрагін - препарат, що містить бульбочкові бактерії, які постачають до

рослин азот. Використовується тільки для бобових рослин, причому
для кожного виду культури різний тип бактерій;
2. азотобактерин - препарат, що містить азотобактерії, які також
постачають азот. Однак ці істоти універсальні і можуть
застосовуватися на різних культурах;
3. фосфобактерін - препарат, що містить фосфобактеріі, відповідно,
переносять до коренів рослин фосфор;
4. ЕМ-препарат (ефективні мікроорганізми) - містить кілька видів
мікроорганізмів, які разом комплексно впливають на рослини.

Все бактеріальні добрива вносяться в грунт в дуже малих кількостях (кілька

крапель на 1 л дощової води).
 Вносити такі добрива слід, дотримуючись ряд правил:

1. грунт повинен бути вологим;

2. розчин не повинен потрапляти на пагони рослин;
3. мікроорганізми не люблять багато світла, тому препарати краще
вносити пізно ввечері або в похмуру погоду;
4. ослаблені з різних причин рослини (від шкідників, хвороб) або
посаджені недавно не варто удобрювати таким чином, тому що вони
занадто слабкі.

Так як бактеріальні добрива містять живих істот, то зберігання їх повинно

бути особливим: від заморозки і занадто високої температури бактерії загинуть.
Даний вид добрив не витримують тривалого зберігання, тому готують їх в
кількості, необхідній лише для одного сезону. Зберігають в заводській тарі в
сухому приміщенні при температурі від 0 до 10 ° C; не можна зберігати на складі,
де знаходяться леткі отрутохімікати [1].
 ФОСФОБАКТЕРІН
Фосфобактерін - бактеріальне добриво, що містить спори мікроорганізму
Bacillus megaterium var. phosphaticum. Являє собою порошок світло-сірого або
жовтуватого кольору.
Бактерії мають здатність перетворювати складні фосфорорганічні сполуки
(нуклеїнові кислоти, нуклеопротеїни і т.д.) і мінеральні фосфати в доступну для
рослин форму. Крім цього бактерії виробляють біологічно активні речовини
(тіамін, піридоксин, біотин, пантотенову і нікотинову кислоти і ін.), Що
стимулюють ріст рослини. Фосфобактерін відноситься до числа препаратів із
стимулюючим ефектом.
Bacillus megaterium var. phosphaticum представляють собою дрібні,
грампозитивні аеробні спороутворюючі палички розміром 2 * 6 мкм. Клітини
містять значну кількість сполук фосфору. У ранній стадії розвитку це рухливі
поодинокі палички, при старінні утворюють ендоспори, що локалізуються в
одному з кінців клітини. В силу вищевикладеного технологія вирощування
зводиться до отримання спор.
В цілому виробництво фосфобактеріна схоже на виробництво азотобактерин
і препаратів бульбочкових бактерій. Склад живильного середовища в процентах:
кукурудзяний екстракт -1.8, меляса - 1.5, сульфат амонію - 0.1, крейда - 1, решта -
вода. Культивування ведеться глибинним методом в строго асептичних умовах
при постійному перемішуванні і примусової аерації до стадії утворення спор.
Основні параметри проведення процесу: температура 28-30оС, рН 6.5-7.5,
тривалість культивування 1.5-2 доби.
Отриману в ході культивування біомасу клітин відокремлюють
центрифугуванням і висушують в розпилювальної сушарці при температурі 65-
75оС до залишкової вологості 2-3%. Висушені суперечки змішують з
наповнювачем. Готовий препарат повинен містити не менше 8 млрд. Клітин в 1 м
Розфасовують препарат в поліетиленові пакети по 50-500 м На відміну від
нитрагина і азотобактерин фосфобактерін володіє більшою стійкістю при
зберіганні.
 Фосфобактерін рекомендують застосовувати на чорноземних грунтах, які
містять найбільш значну кількість фосфороорганических з'єднань. Необхідний
для підвищення врожайності зернових, картоплі, цукрових буряків та ін.
Сільськогосподарських рослин. Насіння обробляють сумішшю сухого
фосфобактеріна з наповнювачем (золою, грунтом і ін.) В співвідношенні 1:40. На
1 гектарну порцію потрібно 5 г препарату і 200 г наповнювача. Бульби картоплі
рівномірно зволожують суспензією спор, приготовленої з розрахунку 15 г
препарату на 15 л води. Урожай при цьому підвищується на 10% перспективи їх
застосування в сільському господарстві [2].
 АЗОБАКТЕРИН
Азотобактерин - бактеріальне добриво, що містить вільноживучих грунтовий
мікроорганізм Azotobacter chroococcum, здатний фіксувати до 20 мг атмосферного
азоту на 1 г використаного цукру. Внесені в якості добрива в грунт бактерії також
виділяють біологічно активні речовини (нікотинову та пантотенову кислоти,
піридоксин, біотин, гетероауксин, гиббереллин і ін.). Ці речовини стимулюють
ріст рослин. Крім того, віднайдені Azotobacter фунгіцидні речовини з групи
анісоміціна пригнічують розвиток деяких небажаних мікроскопічних грибів в
ризосфері рослини.
Встановлено, що при фіксації азоту процес його відновлення протікає на
одному і тому ж синтезованих азотобактером ферментному комплексі і лише
кінцевий продукт (аміак) відділяється від ферменту. Нітрогеназну азотфіксуючих
система являє собою Мультиферментний комплекс, що містить не пов'язане з
геном залізо, молібден і SH-групи.
Азотобактерин - бактеріальне добриво, що містить вільноживучих грунтовий
мікроорганізм Azotobacter chroococcum, здатний фіксувати до 20 мг атмосферного
азоту на 1 г використаного цукру. Внесені в якості добрива в грунт бактерії також
виділяють біологічно активні речовини (нікотинову та пантотенову кислоти,
піридоксин, біотин, гетероауксин, гиббереллин і ін.). Ці речовини стимулюють
ріст рослин. Крім того, віднайдені Azotobacter фунгіцидні речовини з групи
анісоміціна пригнічують розвиток деяких небажаних мікроскопічних грибів в
ризосфері рослини.
Технологія отримання сухого азотобактерин має багато спільного з
технологією виробництва сухого нитрагина. Сухий азотобактерин - активна
культура висушених клітин азотобактера з наповнювачем. В 1 г препарату
міститься не менше 0.5 млрд. Життєздатних клітин. Культуру мікроорганізму
вирощують методом глибинного культивування на середовищі, що містить ті ж
компоненти, що і при культивуванні клітин Rhizobium. Додатково вводять тільки
сульфати заліза і марганцю, а також складну сіль молібденової кислоти, рН 5.7-
6.5.
 Процес ферментації проводять до стаціонарної фази розвитку культури, так
як в цій фазі біологічно активні речовини виділяються з клітини і залишаються в
культуральної рідини. Біологічно активні речовини можуть також повністю або
частково губитися при висушуванні, проте життєздатні клітини швидко
відновлюють здатність їх продукувати. Висушену культуру стандартизують,
фасують в поліетиленові пакети по 0.4-2 кг і зберігають при температурі 15оС не
більше 3 місяців [2].
Грунтовий та торф'яної азотобактерин представляють собою активну
культуру азотобактера, розмноження на твердому живильному середовищі, і
містять в 1 г не менше 50 млн. Життєздатних клітин. Для їх приготування беруть
родючий грунт або розкладається торф з нейтральною реакцією середовища. До
просіяти субстрату додають 2% вапна і 0.1% суперфосфату. По 500 г отриманої
суміші переносять в бутлі ємністю по 0.5 л, зволожують на 40-60% за обсягом
водою, закривають ватними пробками і стерилізують. Посівний матеріал готують
на агарових середовищах, що містять 2% сахарози і мінеральні солі. Коли агар
повністю покривається слизистою масою коричневого кольору, отриманий
матеріал стерильно змивається дистильованою водою і переноситься на
приготований субстрат. Вміст пляшок ретельно перемішують і інкубують при 25-
27оС. Культивування продовжують до тих пір, поки бактерії не розмножаться до
необхідної кількості. Отриманий препарат зберігає свою активність протягом 2-3
місяців.
Використовувати азотобактерин рекомендується тільки на грунтах, що
містять фосфор і мікроелементи. Азотобактерин застосовують для бактеризації
насіння, розсади, компостів. При цьому врожайність збільшується на 10-15%.
Насіння зернових опудривают сухим азотобактерин з розрахунку 100 млрд.
Клітин на 1 гектарну порцію насіння. Картопля і кореневу систему розсади
рівномірно змочують водною суспензією бактерій. Для отримання суспензії 1
гектарну норму (300 млрд. Клітин) розводять в 15 літрах води. При обробці
грунтовим або торф'яним азотобактерин насіння перемішують з зволоженим
препаратом і для рівномірного висіву підсушують. Кореневу систему розсади
змочують приготовленої суспензією [2].

ДОБРИВА НА ОСНОВІ БУЛЬБОЧКОВИХ БАКТЕРІЙ

Мікрофлора грунту безпосередньо впливає на її родючість і, як наслідок, на
врожайність рослин. Грунтові мікроорганізми в процесі росту і розвитку
покращують структуру ґрунту, накопичують в ній поживні речовини,
минерализуют різні органічні сполуки, перетворюючи їх в легко засвоювані
рослиною компоненти харчування. Для стимуляції цих процесів застосовують
різні бактеріальні добрива, які збагачують ризосферу рослин корисними
мікроорганізмами. Мікроорганізми, використовувані для виробництва
бактеріальних препаратів, сприяють насиченню рослин не тільки елементами
мінерального живлення, але і фізіологічно активними речовинами
(фитогормонами, вітамінами і ін.).
В даний час випускають такі бактеріальні добрива, як нітрагін, ризоторфін,
азотобактерин, фосфобактерін, Екстрасол. Вітчизняна промисловість випускає
два види препаратів бульбочкових бактерій: нітрагін і ризоторфін. Обидва
препарати виробляються на основі активних життєздатних бульбочкових бактерій
з роду Rhizobium. Ці бактерії в симбіозі з бобовими культурами здатні фіксувати
вільний азот атмосфери, перетворюючи його в сполуки, легкозасвоювані
рослиною.
Бактерії роду Rhizobium - строгі аероби. Серед них розрізняють активні,
малоактивні і неактивні культури. Критерієм активності бульбочкових бактерій
служить їх здатність в симбіозі з бобовим рослиною фіксувати атмосферний азот і
використовувати його у вигляді сполук для кореневого живлення рослин.
 Фіксація атмосферного азоту можлива тільки в бульбах, що утворюються на
коренях рослин. Виникають вони при інфікуванні кореневої системи бактеріями з
роду Rhizobium. Зараження кореневої системи відбувається через молоді кореневі
волоски. Після впровадження бактерії проростають усередині них до самої основи
у вигляді інфекційної нитки. Виросли нитки проникають крізь стінки епідермісу в
кору кореня, розгалужуються і розподіляються по клітинами кори. При цьому
активується поділ клітин господаря і розростання тканин. У місці локалізації
бактерій на корені рослини-господаря утворюються бульби, в яких бактерії
швидко розмножуються і розташовуються окремо або групами в цитоплазмі
рослинних клітин. Самі бактеріальні клітини збільшуються в кілька разів і
змінюють забарвлення. Якщо бульби мають червонувате або рожеве забарвлення,
зумовлену наявністю пігменту леггемоглобін - аналог гемоглобіну крові тварин,
то вони здатні фіксувати молекулярний азот. Незабарвлені ( "порожні") або мають
зеленувате забарвлення бульби не фіксують азот.
Бактерії, що знаходяться в бульбах, синтезують ферментну систему з
нитрогеназной активністю, що відновлює молекулярний азот до аміаку.
Асиміляція аміаку відбувається, в основному, шляхом залучення його в ряд
ферментативних перетворень, що призводять до утворення глутаміну і
глутамінової кислоти, що йдуть в подальшому на біосинтез білка.
Крім критерію активності в характеристиці бульбочкових бактерій
використовують критерій вірулентності. Він характеризує здатність
мікроорганізму вступати в симбіоз з бобовим рослиною, тобто проникати через
кореневі волоски всередину кореня і викликати утворення бульб. Велике значення
має швидкість такого проникнення. У симбиотическом комплексі рослина -
Rhizobium бактерії забезпечуються поживними речовинами, а самі постачають
рослина азотистих харчуванням. З вірулентністю пов'язана і видова вибірковість,
яка характеризує здатність даного виду бактерій до симбіозу з певним видом
бобової рослини. Класифікація різних видів Rhizobium враховує рослина-
господаря, наприклад: Rhizobium phaseoli - для квасолі, Rhizobium lupini - для
люпину, сараделли і т.д. Вірулентність і видоспецифичность взаємопов'язані і не є
постійними властивостями штаму.
Завданням виробництва бактеріальних добрива є максимальне накопичення
життєздатних клітин, збереження їх життєздатності на всіх стадіях
технологічного процесу, приготування на їх основі готових форм препарату зі
збереженням активності протягом гарантійного терміну зберігання [2].

НІТРАГИН
Вітчизняна промисловість випускає два види нитрагина: грунтовий і сухий.
Вперше культура бульбочкових бактерій на грунтовому субстраті була
приготовлена в 1911 році на бактеріально-агрономічної станції в Москві. В даний
час його виробництво має обмежене значення, так як технологія досить складна і
трудомістка при виконанні окремих операцій. Більш перспективна технологія
виробництва сухого нитрагина.
Сухий нітрагін - порошок світло-сірого кольору, що містить в 1 г не менше 9
млрд. Життєздатних бактерій в суміші з наповнювачем. Вологість не перевищує
5-7%. Промислове виробництво має типову схему. Необхідно відзначити, що
важливо підбирати штами, стійкі до висушування. Для виробництва посівного
матеріалу вихідну культуру бульбочкових бактерій вирощують на агаризованому
середовищі, що містить відвар бобових насіння, 2% агару і 1% сахарози, потім
культуру розмножують в колбах на рідкому поживному середовищі протягом 1-2
діб при 28-30оС і рН 6.5-7.5 . На всіх етапах промислового культивування
застосовують живильне середовище, що включає такі компоненти, як меляса,
кукурудзяний екстракт, мінеральні солі у вигляді сульфатів амонію і магнію,
крейда, хлорид натрію і двозаміщений фосфат калію. Основна ферментація йде
при тих же умовах протягом 2-3 діб. Готову культуральну рідину сепарують,
виходить біомаса у вигляді пасти з вологістю 70-80%. Пасту змішують із
захисною середовищем, що містить тіомочевину і мелясу (1:20) і направляють на
висушування. Сушать шляхом сублімації (в вакуум-сушильних шафах). Висушену
біомасу розмелюють. Продуктивніше висушування в розпилювальних сушках, але
при цьому 75% клітин втрачають життєздатність. Препарати сухого нитрагина
фасують і герметизують в поліетиленові пакети по 0.2 - 1 кг, зберігають при
температурі 15оС не більше 6 місяців. Насіння опудривают перед посівом.
Внесення нитрагина підвищує врожайність в середньому на 15-25% [2].

ПРОЦЕС ПРИГОТУВАННЯ БАКТЕРІАЛЬНОГО ДОБРИВА

Розглянемо процес приготування бактеріального добрива більш докладно.
Весь цикл складається з 5 етапів, кожен з яких, в свою чергу, підрозділяється на
кілька кроків.
Схема процесу виробництва бактеріальних добрив в загальному вигляді
I) Приготування інокулята:
1) Підбір штаму бактерій, що володіє необхідними властивостями (достатня
швидкість росту, обов'язково стійкість до сухим умовам, і ряд властивостей,
необхідних для кінцевого продукту)
2) Посів на тверду живильне середовище. Виробляється в лабораторних
умовах при дотриманні стерильності. Потрібно для початкового нарощування
біомаси.
3) Пересівши на рідку живильне середовище. Також проводиться в
лабораторних умовах. Необхідний для отримання кількості біомаси, достатнього
для приміщення в ферментер великого обсягу.
II) Приготування середовища:
Цей процес відбувається паралельно з приготуванням інокулята, живильне
середовище також використовується для попереднього нарощування біомаси
бактерій. Склад середовища підбирається індивідуально для кожного виду
бактерій. Для збільшення ефективності процесу ферментації найчастіше потрібна
досить трудомісткий попередній етап підбору оптимального складу живильного
середовища.
1) Підбір оптимального складу живильного середовища, якщо потрібно (при
модернізації виробництва, при використанні нового штаму бактерій і т.д.).
2) Приготування необхідної кількості середовища.
3) Стерилізація середовища.
III) Ферментація:
Процес ферментації проводиться, як правило, глибинними методами в тарі,
призначеної для кінцевого продукту, в приміщеннях, забезпечених оптимальними
для процесу умовами; рідше - в ферментерах. Умови культивування суворо
асептичні, температурний режим як правило 26-30 ° С, pH середовища нейтральна
(6,5 - 7,5). Тривалість культивування залежить від необхідної кількості біомаси,
виду мікроорганізму та інших умов, в загальному підбирається
експериментальним шляхом.
IV) Сушка:
Існує кілька методів сушки, що застосовуються у виробництві бактеріальних
добрив - сушка сублімації, застосування розпилювальних, стрічкових і ін.
Сушарок. Вибір методу сушки і умов процесу (температурний режим, необхідна
залишкова вологість) визначаються, виходячи з експлуатаційних вимог
одержуваного добрива і того, які мікроорганізми взяті для виробництва.
V) Фасовка і випуск продукту:
Найчастіше, стадія фасування готового добрива мало виділяється серед
попередніх стадій виробництва. Це пов'язано з тим, що в багатьох випадках
культивування мікроорганізмів проводиться безпосередньо в товарній упаковці
(наприклад, ризоторфін - в ПЕ пакетах (попередньо в них розфасована
підготовлене середовище - торф), азотобактерин - в скляних бутлях і т.д.). Багато
в чому це пов'язано з тим, що термін зберігання готового продукту дуже
короткий, тому економічно найбільш прийнятна якнайшвидша його реалізація. В
інших випадках проводиться сортування, відбір, фасування й упакування готового
продукту, для чого може знадобитися введення окремої виробничої лінії [3].
 ВИСНОВОК
На закінчення розглянемо переваги і недоліки бактеріальних добрив як
таких. До їх плюсів можна віднести наступне:
- Представляють собою 100% екологічно чисті препарати
- Щодо простий виробничий цикл
- Доступні штами мікроорганізмів
- Істотна ефективність використання в порівнянні з мінеральними добривами
До недоліків біопрепаратів можна віднести:
- Залежність ефективності їх дії від складу і властивостей ґрунту, і низки
інших чинників
- Розрахунок товарної упаковки на застосування на великих площах,
утруднене використання на малих садових ділянках
- Малий термін зберігання, деяка "сезонність" виробництва
 СПИСОК ДЖЕРЕЛ ІНФОРМАЦІЇ

1. Дятлова К.Д. Микробные препараты в растениеводстве / К.Д. Дятлова //

Соросовский образовательный журнал - 2001. - Т. 7, вып. 5. - С. 17-22.
2. Промышленная биотехнология [Електронний ресурс] – Режим доступу до
ресурсу: https://studfile.net/preview/12528957/
3. Производство бактериальных удобрений [Електронний ресурс] –
Режим доступу до ресурсу:
http://chemanalytica.com/book/novyy_spravochnik_khimika_i_tekhnologa/06_syre_i_p
rodukty_promyshlennosti_organicheskikh_i_neorganicheskikh_veshchestv_chast_II/54
20