Preparació OPOSICIONS BIOLOGIA i GEOLOGIA

QÜESTIONS ENZIMOLOGIA
1. Quina relació existeix entre la Km i la [S], quan una reacció catalitzada enzimàticament arriba al
80% de la velocitat màxima?
2. Calcular la proporció entre les concentracions de substrat requerides per aconseguir una
saturació del 80% i d’un 10%, respectivament, per un enzim que presenta una cinètica de
saturació hiperbòlica.
3. La hidròlisi del pirofosfat a ortofosfat és important per impulsar les reaccións anabòliques com les
de síntesi d’ADN. Aquesta reacció hidrolítica és catalitzada en Escherichia coli per una
pirofosfatasa que té un pes molecular de 120 KD i està constituïda per 6 subunitats idèntiques.
L’enzim purificat té una velocitat màxima de 2800 unitats per mg d’enzim. Per aquest enzim, una
unitat ve definida com la quantitat d’enzim que hidrolitza 10 µmols de pirofosfat en 15 minuts a
37℃ sota les condicions de l’assaig estàndard. a) Quantes molècules de substrat són
hidrolitzades per segon i per mg d’enzim? b) Quants mols de centre actiu existeixen en un mg
d’enzim? (Cal asumir que cada subunitat té un centre actiu) c) Quin és el número de recanvi
d’aquest enzim?
4. Quina informació es pot obtindre de la representació de Lineweaver-Burk de la cinètica
enzimàtica en les condicions següents:
A) 1/V es zero quan 1/S és –40 l.mol–1
B) 1/V es zero i 1/S x 10–2 es igual a –2,5 l.mol–1
C) 1/V es zero i 1/S x 10–3 es igual a –3,3 l.mol–1 en presència o absència d’ADP
D) 1/S es zero i 1/V és igual a 3.105 min.mol–1
E) 1/S es zero i 1/V x10–5 es igual a 3 min.mol–1
F) 1/S es zero i 1/V x 10–3 es igual a 5 min.mol–1 i la pendent de la recta es 120 min.l–1
5. Per estudiar la dependència de la velocitat d’una reacció catalitzada per un enzim sobre la
concentració de substrat, s’afegeix una quantitat constant d’enzim a una sèrie de mescles de
reacció que contenen concentracions diferents de substrat (com a regle general expresades en
mols/l). Les velocitats inicials de reacció es determinen mesurant el número de mols (o micromols)
consumits de substrat (o de producte produït) per minut. Considerem un experiment on les
velocitats inicials obtingudes venen en la taula següent a les concnetracions de substrat
indicades.
[S] (mols/l) V (µmols/min)

2,0 x 10–1 60

2,0 x 10–2 60

2,0 x 10–3 60

2,0 x 10–4 48
1,5 x 10–4 45

1,3 x 10–5 12
a) Quina és la Vmàx per aquesta reacció?
b) Per què la V és constant a concentracions de substrat per damunt de 2mM?
c) Quina serà la concnetració d’enzim lliure a un aconcnetració de substrat de 2 x10–2M?
6. Utilitzant el procediment experimental explicat en el problema anterior, s’obtenen les dades de la taula
següent per un enzim en una mescla de reacció de 10 ml. Utilitzar els càlculs numèrics (no els gràfics) per
contestar les preguntes següents:
a) Quina és la Vmàx per aquesta concentració d’enzim?
b) Quina és la KM d’aquest enzim?
c) Demostra si aquesta reacció segueix o no una cinètica de Michaelis-Menten
d) Quines són les velocitats inicials a [S] =0,1 M i [S] =1,0 µM?
e) Calcular la quantitat total de producte format en els primers cinc minuts a [S]=2,0 mM
pàgina 1 de 2
Preparació OPOSICIONS BIOLOGIA i GEOLOGIA

f) Suposa que la concentració de l’enzim en cada mescal de reacció s’augmenta per un factor de
quatre Quin seria el valor de Km? de Vmàx? Quin seria el valor de V a [ S]=5,0µM?
[S] (M) V (µmols/min)

5,0 x 10–2 0,25

5,0 x 10–3 0,25

5,0 x 10–4 0,25

5,0 x 10–5 0,20

5,0 x 10–6 0,071

5,0 x 10–7 0,0006

pàgina 2 de 2