(12) BAN MO TA SANG CHE THUOC BANG BOC QUYEN SANG CHE ~ (19) Cong hda xa hoi chi nghia Viet nam (VN) (11) (MITTEE cuc 86 AOU TRI TUE 1-0015571 (51)? CO7D 401/14, A61K 31/4439, A6IP (13) B 35/00 (21) 1-2013-01228 (22) 29.09.2011 (86) PCT/US2011/053798 29.09.2011 (87) WO2012/047699 12.04.2012 (30) 61/389,911 05.10.2010 US (45) 25.07.2016 340 (43) 25.07.2013 304 (73) ELLLILLY AND COMPANY (US) Lilly Corporate Center, Indianapolis, Indiana 46285, United States of America (72) DISEROAD, Benjamin Alan (US) (74) Cong ty Luat TNHH T&G (TGVN) (54) HOP CHAT = (R}(E)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-DICLOPYRIDIN-4-Y LJETOXY)-1H- INDAZOL-3-YL)VINYL)-IH-PYRAZOL-1-YL)ETANOL MONOHYDRAT DANG TINH THE VA DUOC PHAM CHUA HOP CHAT NAY (57) Sing ché dé cap dén hgp chat (R)-(B)-2-(4-(2-(5-(1-G,5-diclopyridin-4- yljetoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-I-yDetanol dang tinh thé hiu ich diing dé diéu trj bénh ung thu va duc phéim chita hgp chat nay.15571 Linh vue ky thudt duge dé cap Sang ché 42 cap dén hop chat (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-G,5-diclopyridin-4- yletoxy)-1H-indazol-3-y)vinyl)-1H-pyrazol-1-yDetanol monohydrat dang tinh thé iu ich ding 4é diéu tri bénh ung thu va duge phdm chita hyp chat nay. ‘Tinh trang kf thudt cita sang ché Yéu 16 ting truéng nguyén bao sqi (Fibroblast growth factor - FGF) duge nhin dign 18 chat trung gian quan trong trong nhiéu quy tinh sinh ly hoe, nbw si teo hinh Khi phat tién va hinh thanh mach. Ho thy thé yéu t6 ting tudng nguyén bao soi (fibroblast growth factor receptor-FGFR) gém cé bin thanh vién (FGFR1-FGFR&), 1 cae glycoprotein bao gém cdc ving gidng globulin mién dich (immunoglobulin-Ig) ngoai bao, ving xuyén mang ky nude va phin té bao chat chira ving tyrosin kinaza. Lién két FGF dan dén su dime héa FGFR, sau 46 béi sy phosphoryl héa thy thé va hoat héa dung truyén tin higu xudi chiéu. Sy hoat héa thy thé da dé tuyén chon va hoat héa thanh phan truyén tin higu xudi chiéu dic higu tham gia vao sur diéu hda cdc quy trinh thay déi kh4c nhau nhu su sinh trudng té bao, sy trao ddi chat cia té bao va su sng sot cia té bao. Do dé, dying truyén tin higu FGF/FGFR od nhiéu tac déng dén nhiéu quy trinh sinh hoc quyét dinh déi véi su tang sinh té bao khéi u, su di tra, x4m chiém, va hinh think mach, Vinyl indazol d& duge biét trong linh vac ky thuat dé didu tri bénh ung thu. Xem vi du, WO200210137 va WO2003101968. Chat te ché FGFR cing duge biét trong linh vue ky thudt. Xem, vi du, WO2002022598. PCT/US2010/033487 bGc 19 dang v6 dinh hinh cia (R)-(B)-2-(4-(2-(5-(1-3,5- diclopyridin-4-y!)etoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-IH-pyrazol-1-ylJetanol ¢6 sy két tinh kém va himu ich lam chat te ché cia FGFR.15571 Ban chat ky thi Mue dich cia sdng ché 1a dé xudt hop chdt (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-3,5- diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-1-yl)etanol dang tinh thé 1a cht tte ché cé hiéu luc cia FGFR va cé thé tao ra cdc dc tink cé loi tuong img véi dang wu tién c6 cdc dc tinh xt ly chat rin tét hon trén quy mé lén, dé dang tinh ché bing cach két tinh, va 46 én dinh nhiét dng lyc duéi cae diéu kign xir ly va bao quan thudée. Theo mt phuong an, (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-IH- indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-I-yl)etanol tinh thé 6 dang monohydrat. cia sing ché Sang ché cing dé xudt (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-]H- indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-1-yl)etanol dang tinh thé duge mé ta béi mau nhiéu xa b6t tia X (sur bite xa Cu, 2 = 1,54059 A (0,154059nm)) bao gdm dinh tai 14,65, vA mot hoe nhiéu dinh tai 3,54, 12,51, hose 19,16 (20 + 0,1°) Sang ché mé té phuong ph4p diéu tri bénh ung thu trong 46 bénh ung thu duge chon tir nhém bao gém bénh ung thir vii, bénh ung ther phdi khéng té bao nhé (non- small cell lung-NSCL), bénh ung thu bing quang, bénh ung thr da day, bénh ung thir tuyén tuy, bénh ung thu tién ligt tuyén, bénh ung thu rugt két, da u tay, bénh ung thee gan, u hdc sfc 16, bénh ung thu ddu va cé, bénh ung thr tuyén gidp, béoh ung thu té bao thin, u nguyén bao dém, va bénh ung thu tinh hoan & dng vat 06 vii bao gém viée stt dung cho d6ng vat c6 vi cdn digu tri mét Ivgng him hiéu hgp chat hod mudi theo sang ché. Sang ché ciing 48 xudt duge phdm chia hgp chat hoge mudi theo sang ché két hop voi m6t ho&c nhiéu chét mang, chét pha loding, hodc té duge duge dung. Theo mot phuong an dic biét ché phdm cdn bao gdm mét hod nhigu chit tr ligu khée. Sang ché cing dé xudt hop chét ho&e mudi theo s4ng ché sir dung wong tj ligu. Ngoai ra, sang ché m6 ta viée sir dung hgp chét hoc muéi theo sang ché trong san xuit thude diéu tri bénh ung thu. Ngoai ra, sing ché con mé ta viée sit dung hop chat hoe mudi theo sang ché dé sir dung trong diéu tri bénh ung thy. Cy thé la bénh ung thr nay duge chon tir nhom gém bénh ung thu vi, bénh ung thu phi, bénh ung thu bang quang, bénh ung thu da day, bénh ung thu tuyén tuy, bénh ung thu tién Liét tuyén, bénh ung thu rugt két, da u ty AML, bénh ung thu gan, u hac sic t6, bénh ung thu dau va cé, bénh ung thu tuyén gidp, bénh ung thu té bao thin, u nguyén bao dém, va bénh15571 ung thy tinh hoan. Cy thé hon, bénh ung thu duge chon ti nhém gém bénh ung thu va, bénh ung thir phdi khong té bao nhd, bénh ung thur bang quang, bénh ung thu dg day, bénh ung thu tuyén tuy, bénh ung thu tién ligt tuyén, bénh ung thu rudt két, da u tay, bénh ung thu gan, uw hc sc t6, bénh ung thu dau va od, bénh ung thu tuyén gidp, béah ung thu té bao than, u nguyén bao dém, va bénh ung thir tinh hoan, Cy thé, bénh ung thur 1a bénh ung thy phéi khéng 1é bao nh. Cu thé, bénh ung thr la bénh ung thu da dy. Ca thé, bénh ung thu 1a da u tiy. Hon ntta, séng ché con 48 xudt duge phim ding ung thu duge chon tir nhém bao gém bénh ung thir vi, phdi khéng té bao mhé, bé tuyén tuy, bénh ung thu tién ligt tuyén, bénh ung thu ruét két, da u tly, bénh ung thu gan, u hie sic t6, bénh ung thu ddu va c6, bénh ung thy tuyén giép, bénh ung thu té bao than, u nguyén bao dém, va bénh ung thu tinh hon bao gém hop chit hofe mudi theo sing ché duéi dang hoet chat. ung thar bang quang, bénh ung thu da day, M6 ta chi tiét sing ché Ngudi c6 hiéu bié tung binh tong Hh vue nay sé hiéu ring tit cd cdc hop chdt theo sang ché c6 kha nang tao thanh mudi. Hop chat theo sang ché 14 amin, va do 46 phan (mg véi axit bat ky trong sé cde axit vé co va hia co dé tao thanh mudi cong axit duge dung. Mudi céng axit duge dung nay va hé phuong ph4p chung dé diéu ché ching 44 duge biét trong linh vec kf thudt. Xem, vi dy, P. Stahl, et ai., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S.M. Berge, ef al., “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, Jenuary 197. Nhu duge sit dung trong ban mé ta, thudt ngit “duge phan tich” c6 nghia la (R)- B)-2-(4-(2-(5-(1-3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-1- yijetanol tinh thé c6 d6 tinh khiét 99%. Céc hop chat theo sang ché o6 thé duge diéu ché co ban nhu duge minh hoa trong céc quy tinh diéu ché va vi du duéi day. Viée dat tén cdc quy trinh va vi dy duge tién hanh bing céch st dung tiéu chi dat tén Cdu tao = Tén goi trong ChemDraw® Ultra 10.0.15571 Quy trinh diéu ché 1 1-G,5-diclopyridin-4-yi)etanol B6 sung tetrahydrofuran (THF, 3L) va diisopropylamin (DIPA, 315mL, 2,24mol) vao binh ba cd day tron 12L va lim mét dén nbiét 46 -78°C. BS sung tir tirn- butylithi (1,6M trong hexan, 1400mL, 2,24mol). Sau khi hoan thinh sy bé sung va nhiét 46 duge én dinh 6 -78°C bd sung tir tir dung dich chita 3,5-diclopyridin (296,78, 2,00mol) tryc tiép tgo thinh dung dich mau vang thay déi huyén pha ‘Sau khi hoan thanh viée bé sung va nhiét d6 duge dn dinh o -78°C bé sung ti tir axetaldehyt (230mL, 4,05mol) trong THF (600mL). Khudy lién tue 6 nhiét 46 -78°C. Sau thoi gian 3 gid, logi bd khoi bén da khé va bat dau 1am nguéi hén hop phan img bang cach bd sung timg gigt natri clorua bao hoa trong nuée (IL). Cho phép hén hop phan img lam 4m dén nbiét 46 trong phong (room temperature - RT) qua dém bing cach khudy. Pha loang hon hop véi metyl-tert-butylete (methyl-tert-butylete-MTBE, 2L), amoni clorua b&o héa trong nude (1L) va nude (2L). Chia thanh nhiéu phn va rita cdc chat hiru co bing natri clorua bio héa trong nuéc (nude mudi), Chiét pha chia nuée voi MTBE (1,5L). Lién két céc lop hita cg, lam khé trén natri sulfat, Igc va c6 dic trong chin khéng. Tinh ché phin cin bing phuong phap sic ky silicagel [25% etylaxetat (EA) trong hexan] tao ra hop chit néu 6 dé mye nay & dang dau mau dé. Higu sudt: 352g (90%). MS (ES) m/z 192 (M+1]". Quy trinh diéu ché 2 (S)-1-G,5-dielopyridin-4-yetanol Tach riéng hén hop cia cde chat déng phan lép thé thu duge trong quy trinh digu ché 1 tren cOt CHIRALPAK® AD-H rita giai véi 90% heptan/10% etanol. Dinh cuc dai 2 1a chat déng phan déi anh mong mudn. Dé thiét lap cdu hinh tuyét déi hoa tan mu sin phim trong CDCI; (néng d9 cudi cing 100mg/mL.). Thu duge tinh lueng hudng sic vong tron dao dng (vibrational circular dichroism - VCD) va phé tia héng ngoai (infrared - IR) cé d6 phan giai bing 4em-1 str dung quang phd ké ChiralIR FT VCD (BioTools Ine ®) véi té bao IR duce trang bi céc cita sd BaF, va chiéu dai duéng di bing 100mm. Thu VCD va IR trong thoi gian 6 gid véi 150uL cia miu. C6 dit ligu nhung khéng lam tr6i chay hode xi ly dit ligu. Thu durge cdc tin sé rung d6ng va su hap thu va cudng 4§ VCD bang céch t6i wu nang Iugng thép nhdt thich hop boi Gaussian tai mire B3PW91/6-31G** trén cum Linux, va kich thich phd tong img sir i mau gi sit.15571 dung 46 rng dai tan Lorentzian bang tinh luéng huéng sic vong tron rung déng 6em- 1, Thir nghiém tén chi ra sin pham 1a chat déng phan S. Higu swat: 84,37g (27%). ‘MS (ES) m/z 192 [M+1]". Quy trinh diéu ché 3 (S)-1-G,5-diclopyridin-4-yl)etyl metansulfonat Hoa tan (S)-1-G,5-diclopyridin-4-yetanol (6,02g, 26,14mmol) trong diclometan (DCM, 100mL) va lam mat binh thot cé trong bin da. Bé sung trietylamin (TEA, 3,5mL, 25,11 mmol) sau d6 bing cach bé sung timg giot metansulfonyl clorua (2,2mL, 28,42mmol). Logi b6 bin nude da va cho phép h5n hop phan tmg duye lam dm dén RT. Sau thoi gian 4 gid, lam nguéi hin hgp phan img bang nuéc (100mL) va tach cde lép. Chiét 6p chira nude bing DCM (50mL), sau dé bang 20% rugu isopropyl (IPA)cloroform (S0mL). Lién két dich chiét hitu co, lam khé trén natri sulfat khan, loc va c6 dc trong chan khong. Higu sudt: 7,15g, (100%). MS (ES) m/z 270 (M+1]". Quy trinh diéu ché 4 4-iodo-1-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)etyl)-1H-pyrazol Trong binh 3-cé 1L bang canh khudy ty, Iép phi nito va dau do nhiét 46 bén trong hba tan 2-(2-bromoetoxy)tetrahydro-2H-pyran (34g, 156mmol) trong axetonitril (ACN, 400mL). BS sung 4-lodopyrazol (29,34g, 149,74mmol), sau 46 bing xeri cacbonat (73,4g, 223,02mmol). Khudy hén hop & RT trong théi gian 18 gi’. Loc ‘hop phan img qua CELITE®, rita banh loc bing ACN va ¢6 dic phan loc thanh déu mau vang. St dung ma khéng can tinh ché thém. Hiéu suat: 47,819 g (99%). MS (ES) m/z 323 [M+1]". Quy trinh diéu ché 5 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-IH-indazol Nap vio lo phan tmg 10L véi N,N-dimetylformamit (DMF, 2,501), 5- hydroxyindazol (150,20g, 1,12mol) va 1H-imidazol (114,35g, 1,68mol). Lam mat hn hop phan tmg dén nhiét 4d 0°C va bd sung tert-butyldimetylclosilan (253,162, 1,68mol) trong thai gian 0,5 gid. Khudy hén hop phan tng & nhiét 46 18°C trong thoi gian 3 gid. Bé sung nude (2,5L) tir tr vao hn hop phan tmg véi ban da & nhiét d6 S°C dé duy tri nhigt 46 bén trong khodng 20°C. Chuyén hén hop vao phéu tach va chiét voi15571 EA (2x 2,5L). Két hop dich chiét va ria bing nude (3 x 2,5L) va nude mudi. Lam khd dung djch hou co tén natri sulfat khan, loc va lam bay hoi thanh dau mau 46, Chuyén dau qua dém silicagel va nia gidi bang dung dich rita gidi (tir 0% dén 30% EA trong hexan) thu duvge hop chdt néu 6 42 muc nay & dang dau mau cam két tinh. Higu sudt: 300g (100%). MS (ES) m/z 249 [M+1]". Quy trinh digu ché 6 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-3-iodo-1H-indazol Lam mat dung dich chia 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-1H-indazol (300,00g, 1,21mol) trong DCM (4,00L) dén nhigt 45 10°C wong binh phin img duge boc 10L. Bé sung vao dung dich tao thanh N-iodosucxinimit (298,89g, 1,33mol) theo timg phan trong théi gian 0,5 gi’. Khudy hén hop 6 RT trong théi gian 3 gid dé tgo ra su bién adi hon toan nhu duge chi ra bing phuong php khéi phd sic ky long (liquid chromatography mass spectrometry - LC-MS) va phuong phép sic ky lop mong (thin layer chromatography-TLC). Lim mat hén hop dén nhiét 4 10°C va lam nguéi bing nude (2,5L). Chuyén hén hop phan img vao phéu tach va chiét lop chita nuée thanh DCM (2,5L). Rta dich chiét hima co lién két voi dung dich natri thiosulfat 10% (SL) va nude mudi. Lam khé dung dich hiru co trén magie sulfat, loc va c6 dic trong chan Khéng dé thu duge hop chit néu 6 4é muc nay 6 dang chat rin mau cam. Higu sudt: 388g (90%). MS (ES) m/z 375 [M+1]". Quy trinh diéu ché 7 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-3-iodo-1-(tetrahyddro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazol Lam mét dung dich chéa 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-3-iodo-1H-indazol (387,00, 1,08mol) trong DCM (2,50L) va THF (1,00L) dén nhiét 6 10°C trong 1p phan img duge boc 10L. Bé sung axit metansulfonic (14,0mL, 216,02mmol) vio hén gp tgo thanh, sau 46 bing 3,4-dihydro-2H-pyran (296mL, 3,24mol) trong thdi gian 0,5 gig, quan sat su téa nhiét nhe. Khudy hon hop 6 RT trong théi gian 3 gid. Lam mat ‘ndn hop phan tmg dén nhiét 46 10°C va lam nguéi bang natri bicacbonat bio hoa trong nuée (2L). Pha loang hén hep bang nude (2L) va chiét 6p chita nude bing DCM (QL). Rita dich chiét ht co lién két bang nuée (2L) va nude mudi. Lam khé hin hop hdu co wén natri sulfat khan, loc va ¢6 dic trong chan khdng. Rita gidi cin qua dm silicagel bing dung dich ria giai (tr 0 dén 10% EA/hexan) tao ra hop chit néu & 48 mye nay, Higu sudt: 150g (31%). MS (ES) m/z 459 [M+1)’ 115571 Quy trinh diéu ché 8 (©)-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-3-(2-(1-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl)-LH- pyrazol-4-yl)vinyl)-1H-indazol-5-ol Phun véi khi nito hn hp cia 5-(tert-butyldimetylsilyloxy)-3-iodo-1- (tetrahydro-2H-pyran-2-y1)-1H-indazol (14g, 30,54mmol) trong DMF (150mL) trong binh 3 cé day tron 500mL duge trang bj khudy tu, déu do nhiét d6, va ngung ty bing véch ngin trong thoi gian 10 phét. BS sung tributylamin (TBA, 6,72, 36,1mmol) va 4,4,5,5-tetrametyl-2-vinyl-1,3,2-dioxaborolan (7,0g, 43,18mmol) vao dung dich tg0 thanh va két hgp phun trong thoi gian 10 phat. Bé sung bis(triphenylphosphin) paladi (H) clorua (0,45g, 0,63mmol) vao hdn hop tao thanh va lién tue phun trong thai gian 0,5 gid nia, Gia nhiét hén hop & nhiét 46 nim trong khoang tl 95 dén 100°C trong théi gian 18 gid. Lam mét hon hop phan img xuéng thap hon nhiét 46 40°C va nap voi 4-iodo-1-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)etyl)-1H-pyrazol (9,8g, 30,42 mmol). Bé sung bari hydroxit octahydrat (19,3g, 60,3mmol) va nude (13mL) vao hn hop phan img va lign tye phun trong thoi gian 10 phit. Bd sung phuc chét DCM 1,1'- bis(dipheny!phosphino)feroxen paladi (M1) clorua (1,3g, 1,56mmol) vao bén hop phén img va lién tue phun trong thoi gian 0,5 gid. Gia nhiét hin hgp 5 nhiét d0 95°C dusi khi nito trong thoi gian 3 gid. Pha loang hn hgp bing BA va loc qua dém Celite®, Ria dém bang nude mudi (400mL) va tach riéng cdc Iép loc. Rita 6p hitu co bing nuée muéi va chiét lop chita nude lién két bing EA. Két hop cac dung dich hiru co va 6 dc thanh diu mau ndu, Héa tan du trong DCM (100mL) va silicagel. Rita gidi dém bang dung djch ria giai (50% EA trong hexan, sau dé bing 70% EA trong hexan) thu duge déu mau ndu sang. Nghién thanh bot bing MTBE (100mL) thu duge hop chat néu 6 48 myc nay 6 dang chit rin. Higu suit: 5g (37%). MS (ES) m/z 439 [M+1}". Quy trinh digu ché 9 5-((R)-1-(3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-3-(E)-2-(1-(2- (tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)etyl)-LH-pyrazol-4-yl)vinyl)-1H-indazol Trong binh 3 cé day tron 250mL duge trang bi dau do nhiét d6 bén trong, binh ngung héi hr, lép phi nito va thanh khudy tir, huyén phi gc (E)-1-(tetrahydro-2H- pyran-2-yl)-3-(2-(1-(2-(tetrahy dro-2H-pyran-2-yloxy)etyl)-1H-pyrazol-4-yl)vinyl)-1H- indazol-5-ol (10,0g, 22,83mmol) va xeri cacbonat (7,88g, 23,94mmol) trong ACN 6 sung vio dém15571 (82mL) lam fm dén nhigt > 60°C. Bé sung (S)-1-(3,5-diclopyridin-4-yl)ety! metansulfonat (7,03g, 26,02mmol) vao huyén phd va khudy qua dém. Lam mat hén hop phan tmg dén RT, loc va nia chat rin bang ACN. Cé dac phan dich loc va tinh ché cin bing phuong php sic ky silicagel (tr 2 dén 4% (amoni 2M trong rou metylic)DCM). Két hgp cde phan san phdm va c6 dic trong chan khéng thinh bot mau tring. Hiéu sudt: 12,5g (86%). MS (ES) m/z 612 [M+1]". Quy trinh diéu ché 10 (dang v6 dinh hinh) RE)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-1H- pyrazol-1-yl)etanol Nap vio binh 3 cd, day tron duge trang bi phéu bé sung, Idi vao nito, dau do nhiét 46 bén trong va thia khuéy ti tinh voi rugu metylic (57mL) va lam mét trong bén 44. BG sung axetyl clorua (20mL, 281,03mmol) tir tir vao dung dich phan img qua phéu bé sung. Bé sung 5-((R}-1-(3,5-diclopyridin-4-yletoxy)-1-(tetrahydro-2H-pyran- 2-yl)-3-(B)-2-(1-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl)-1H-pyrazol-4-ylvinyl)-1H- indazol (7,1g, 11,59mmol) vao dung dich duge héa tan tong nagu metylic (40mL) qua phéu bé sung. Sau khi hoan thanh vige bé sung, loai bé khéi bén da, lam 4m dén RT va khudy hén hop trong thai gian 4 gid. C6 dae hon hop phan img trong chan khong thinh bot mau vang, Hoa tan bot mau vang trong rgu metanol (10mL) va bé sung wt tir vao dung dich natri bicacbonat bdo hoa trong nude (120mL). Khudy hon hop 6 RT trong thi gian 30 phtit. Loc hén hop, nia chét rin voi nude (100mL), va lam khé duéi chan khéng. Két tinh lei chit rin tir EA néng/nagu metylic/hexan tao ra hop chat néu & dé myc nay duéi dang chét rin mau tring. Hiéu sudt: 2,1g (41%). MS (ES) m/z 444. My ‘Vi du thye hign sing ché Vidyl (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1 H-indazol-3-yl)vinyl)-1H- pyrazol-I-yl)etanol monohydrat dang 1:15571 Lo phan mg duge thanh tring bing nite va nap (R}-(E)-2-(4-(2-(5-(1-3,5+ diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H-indazol-3-yl)vinyl)-IH-pyrazol-1-yl)etanol va hn hop dung méi chira 11% nuéc/axetonitril. Huyén phi tao thanh duge gia nhiét dén nhiét 46 bén trong nim trong khodng tir 66 dén 68°C tgo ra dung dich. Dung dich duge lam mat tir tir dén nhiét 46 ndm trong khoang tir 56 dén 58°C, sau d6 duge tg0 mam bing huyén pha chia tinh thé hat trong 11% hén hop nude/axetonitril va duge khudy ti tw. Hon hop phan img ban dau duge lam mat xudng dén nbiét 46 nim trong khoang tir 48 dén 50°C va tiép d6 dén nhiét d6 tir 19 dén 20°C. San phim duge tach ring bing cach loc -VGi sy c6 mat cla ding khi nito véi dé Am trong déi it nhat bang 80% di qua banh loc. ‘Mite 46 m trong dong nito tiép 46 duoc thay 44i thanh 40% va lim khé lién tuc, tao thanh khi sén xudt hop cht néu & dé muc nay. Luu y ring tinh thé hat tuong tr duge thu nhu sau: Lo phan img duge khir tring bing nito va durge nap (R)-(E)-2-(4-2-(5-(1- ,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-IH-indazol-3-yl)viny!)-IH-pyrazol-I-yl)-etanol_ va. hn hop dung méi chia 11% nudc/axetonitril. Huyén phi tao thanh duge gia nhiét dén nhiét 46 bén trong bing 70°C tao ra dung dich. Dung dich sau 46 duge Jam mat tit ti, duge dé két tinh, loc va lam khé. Hop chat nay 1a chat we ché c6 hiéu lye cla FGFR va 6 thé c6 cdc dac tinh c6 loi tong img voi dang trudc cé cac dic tinh xi ly chdt rin tét hon trén quy mé lén, dé dang tinh ché bang sy két tinh, va 46 dn dinh ohiét dong dudi cdc diéu kién xir ly va bao quan thudc. Hop chit trong Vi du 1, XRPD Miu XRPD duge thu bang cdch str dung nhiéu xa ké PANalytical X'Pert™ Pro, MPD PW3040 Pro, duge trang bi bai sur bite xa CuKa (A = 1,54059 A (0,154059nm) (dign ap: 45kV va cudng 46 dong dién: 40mA)) duge tao ra bing céch str dung ngudn diéu tiéu chinh xAc dai Optix. Mau duge kep gitta céc mang day 3:m, duge phén tich trong hinh hoc truyén dn, va duge quay 1 vong méi giay dé tdi uu héa sé liéu théng. ké dink huéng. Trude khi phan tich mau silic (vat ligu tham chiéu chudn NIST 640c) duge phan tich 48 kiém tra vj tri otia dinh silic 111. Mét mu Panalytical duge phén tich cho vat ligu nay, va sy dinh hung duge uu tién va cdc tac dung théng ké phan nr duge danh gié théng qua sy so sinh mau XRPD duge kich thich tir siz phén tich tinh thé don. Phan xa da l6p phan hang gian luge duge sit dung dé tap chung céc tia X Cu Ka cia nguén qua mu va Jén tén may dd. Céc mau nhiéu xa duge thu sir dung may -10-do nhay vi tri quét (X'Celerator) duge dat trong 240mm tir mau, Dit ligu duge thu tir 1,01 dén 39,99 46 26 véi kich thuée bude bing 0,017 d6 26 va téc d6 quét bing 1,2 dGiphit va véi khe phan ky 0,5 46 va khe tan xa 0,25 46. BO chan chim tia duge sit dung dé lam giam thiéu khéng gian duge tao ra bai sy tn xa khong khi. Khe Soller duoc sir dung cho chium tia 16i va chim tia nhiéu xa dé lam gidm thiéu su phan ky quanh true. Céc dinh duge quan sét duge chi ra trong Bang 1. Nguong cuig d6 bing 5% duge sit dung, 15571 Bang 1. Cac dinh duge quan sit véi hop chat trong Vi dy 1, XRPD. "28 Khoing cach d(A) | Cuong 46 (0,1nm) 3,342 0,10 24,975 = 0,726 5 7,08 # 0,10 12,485 = 0,179) “10 10,62 = 0,10 832840079 | 9 12,51 = 0,10 7,075£0,057___| 78 13,00 = 0,10 6,812 © 0,053 37 13,602 0,10 6,512 £0,048 16 14,18 = 0,10 6,245 + 0,044 1B 14,65 0,10 6,046 x 0,041 100 14,97 + 0,10 [5,919 + 0,040 29 15,49 0,10 [5,722 0,037 | 16 16,24 = 0,10 [5,459 £0,034 35 16,59 = 0,10 [5,344 4 0,032 24 17,06 0,10 [5,198 + 0,030 26 17,76 = 0,10 4,995 + 0,028 20 18,49 = 0,10 4,798 + 0,026 9 19,16 0,10 4,632 £0,024 68 | 20,37 £0,10 4,361 £0,021 44 21,67 £0,10 4,101 = 0,019 8 21,89 40,10 4,061 20,018 | 8 22,17 £ 0,10 401020018 | 22 23,02 40,10 ~_ 3,863 £0,017 34 24,33 0,10 3,659 + 0,015 | 15 | 25,25 + 0,10 352820014 | 27 25,93 £0.10 3,436 0,013 49 26,16 = 0,10 3,406 2 0,013, 16 26,77 20,10 3,331 £0,012 10 27,23 =0,10 3,275 £0,012 15 28,25 £0,10 3,159 = 0,011 10 28,59 + 0,10 3,123 £0,011 u 29,56£0,10 3,022 © 0,010 13 -ll-15571 Do dé, mu duge diéu ché thich hyp trong Vi du 1 06 thé duge mé ta bing mau nhidu xa tia X sir dung sy bite xa CuK, dui dang o6 céc dinh nhigu xq (gia trj 2-theta) nhu duge mé ta trong Bang 1, va cy thé la cé cde dinh tai 14,65 két hop voi mét hole nhiéu dinh tai 3,54, 12,51, va 19,16; va cu thé hon co cdc din tai 14,65; véi dung sai cha cdc gée nhiéu xa bang 0,1 dé, tit hon ntfa 1a 0,01 46. Sy diéu chinh khéc thudng trong duéng FGF/FGFR duoc 4m chi duéi nhiéu dang cia cdc khéi u ac tinh & ngudi. FGFR va FGF thuimg duge biéu hign qué mie trong nhiéu bénh ung thu, va sy biéu hién cita chting thudng tuong quan véi sy dy doan kém. Céc dt bién hoat héa trong ving FGFR kinaza duge tim thy trong nhiéu Joai khdi u khde nhau, gdm bénh ung thu vu, NSCLC, bénh ung thy bang quang, bénh ung thu da day, bénh ung thu tién liét tyén, bénh ung thu rudt két, va da u tity. Su khuéch dai hé gen cia locus FGFR ofing duge phat hién trong nhiéu ngwoi bénh bi bénh ung thu vi, béoh ung thy da day va bénh ung thu phéi. Sy biéu hign qua mite ota FGER hode FGF cling duge tim th4y tong nhiéu loai bénh Khdc nhau cia khéi u nh bénh ung thu bang quang, da u tiy, bénh ung thu tién ligt tuyén, va bénh ung thu phdi. (Cac bénh ung thu khdc c6 thé cé Ioi ti liéu phép tte ché dutng ho FGFR gm AML, bénh ung thu gan, u hic séc t6, bénh ung thu dau va cé, bénh ung thu tuyén gidp, bénh ung thu tuyén tuy, bénh ung thu té bao thén, u nguyén bao dém, va bénh ung thu tinh hoan. Ngoai vai trd ca chuing 46i voi su tao thénh va su tién trién ota khéi u, FGF va FGER ciing 1a cdc chét diéu hoa chinh cla su hinh thanh mach, dac biét 1a trong su phat trién cia khdj u. Truc FGF/FGFR déng vai tro quan trong trong su Jam tang Ién cdc té bao mé dém khéi u khée nhw nguyén bao sgi cé lién quan dén bénh ung thu. Sy diéu hoa ting cla cdc FGF cing din dén tinh khang véi héa hoc tri ligu khée va eu phap chéng sw tgo mach, Cuéi cing, cdc chét te ché phan ti nh6 olla FGFR chimg minh duge ring hoat tinh chéng khéi u trong cée m6 hinh khdi u khéi déu khée nhau va duge khai thc theo chuyén khoa. Duge dua ra ding thoi, duéng FGF/FGFR cin thiét cho cdc quy trinh té bao quan trong khdc nhau trong cc té bao ung thu. Véi nhiéu ly do, cdc ligu phap trén co so sy truyén tin higu cia FGFR dich vihoic FGF cé. thé anh hudng dén cd hai té bao khéi u truc tiép va sy hinh thanh mach cla khdi u. Quy trinh diéu ché 10 co ban duge thir nghiém nhu duge mé té duéi day trong cdc thir nghiém co ban duge mé ta dudi day trong ca thir nghiém dudi day: Thr nghiém enzym FGFRI (lién két b6 loc), Thur nghiém enzym FGFR3 (lién két b6 Joc), -12-15571 p-ERK do FGF9 gay ra trong thir nghiém wén co sé té bao RT-112 (véi sir c6 mat oba BSA), va sy phat hign AlpbaScreen SureFire Detection cia sy phosphoryl héa ERK (Thr202/Ty1204) trong thir nghiém trén co sé té bao cia cac 1é bao ndi mé tinh mach rn & ngudi (Human Umbilical Vein Endothelial Cell-HUVEC). Céc thir nghiém nay ching minh ring quy trinh diéu ché 10 1a chat tre ché duéng ho FGFR va cé hoat tinh chéng ung thu. Do @6, céc két qué véi dang v6 dinh hinh cia (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1- (3,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H-indazol-3-yi)vinyl)-1H-pyrazol-1-yl)etanol biéu 16 céc két qua véi hop chdt theo sing ché. Dang tinh thé cla hop chit cé uu diém do ching 06 thé dua ra cée dc tinh tuong img véi dang trude a6 06 cdc die tinh xir ly dé dang tinh ché bing sy két tinh, va 46 én dinh nhiét "u kién xit ly va bao quan duge phdm. chat rin tét hon trén quy mé Ié 46 dudi cde ‘Thir nghiém enzym FGFRI va FGFR3 (lién két 66 loc) FGFR1 ho&c FGFR3 kinaza (0,15ng/iL FGFRI 6 ngudi hoe 0,32ng/iL FGFR3 @ ngudi) duge i trong SOL chat dém chia 10mM axit 4-(2-hydroxyetyl)-1- piperazinetan-sulfonic (HEPES) pH=7,5, 8mM tis(hydroxymetyl)aminometan (Tris~ HCI), pH=7,5, 5,0mM dithiothreitol (DTT), 10,0uM adenosin triphosphat (adenosine triphosphate - ATP), 10mM MnCl, 150mM NaCl, 0,01% TRITON® X-100, 0,5 uCi “P-ATP, va 0,05yg/uL Poly(Glu-Tyr). Phin img duge tién hinh voi thé tich bing SOuL 6 RT trong thdi gian 30 phut va tiép dé duge lam ngugi bing cach bé sung 10% HPO, 130yL. Hén hop phan img (120uL) duce chuyén vao dia loc soi thiy tinh 1,0um 96 18, duge a 6 RT trong théi gian tr 20 dén 30 phit va tiép 46 duge rita 3 lin trén TITERTEK® Zoom v6i 0,5% H;POy. Céc 18 duge lam khé trade khi b3 sung 40pL MicroScint™20 (Packard) va tiép 46 duge dém trén méy dém Wallac Micobeta. Déi voi su tte ché hop chat, hyp cht duge cung cdp dusi dang 10mM nguyen ligu trong dimetyl sulfoxit (dimethyl sulfoxide-DMSO). Hop chét duge pha loang thir tr 1:3 trong 20% DMSO dé tgo ra durong cong dép tmg néng dé 10 diém va duge pha long 1:5 (tir 204M dén 0,001M cudi cing trong 4% néng 4 DMSO cubi cing) vao dia phan img trade khi bé sung véo hon hop phan img trong dia loc dé xd dinh hoat tinh cla hop chat. Diéu chinh cdc giéng chira 4% DMSO chi trong khi duong géc duce thiét lp bing céc giéng adi chimg chita 0,1M axit etylendiamintetraaxetic (ethylenediaminetetraacetic acid - EDTA). Gia tj tre ché theo phan trim cho timg -13-15571 néng 46 trong s6 10 néng dé duoc tinh tir cdc 18 44i chimg trén mdi dia va dit ligu dap img néng 4 10 diém sau d6 duge phan tich bing cach str dung phan mém ActivityBase (IDBS) sir dung phuong trinh logistic bén thong 36 va cdc gia tri IC,, tuyét 461 duge dénh gié tir sy phit hop cla duéng cong tgo thanh. Thir nghiém enzym FGFRI va FGFR3 cé ty Ié t6i thiéu dang ké (Minimum Significant Ratios-MSR) voi ICs duge danh gid bang 1,38 va 1,47, tuong img. Cac két qué IC,, trong quy tinh digu ché 10 voi FGFR1 vi FGER3 trong cdc thir nghiém nay duge dah gid 14 0,0077 ‘va 0,0064uM, tuong tg. Dt ligu nay chi ra ring quy tinh diéu ché 10 1a cht tre ché enzym FGFR1 va FGFR3 od higu luc. p-ERK do FGF9 gay ra voi BSA Té bao ung thu bang quang RT112 6 nguiri duge gieo giéng voi mat 46 5000 16 bao trén méi giéng trong 100uL RPMI 1640 (Gibco 1875-085) duge bé sung 10% huyét thanh bao thai 69 (fetal bovine serum - FBS, Gibco 1082-147) va 1% dung dich penixilin/streptomyxin (Gibeo 15140-122) trong cde dia 96 18 CELLBIND® (Coming 3340) va duge & qua dém 6 nhiét d 37°C. Budi séng ngay tiép theo méi trudng sinh truéng duge loai bd va duge thay thé bing 100uL RPMI 1640 duge bé sung 20me/mL albumin huyét thanh bd (bovine serum albumin - BSA). Sau théi gian 3 gid & 6 nbiét 46 37°C, 20uL hgp chét duge pha loging tht nr 3 in trong RPMI 1640 véi 20me/mL BSA trong 6% DMSO duge bé sung vao méi giéng. Cudi cing thu duge dudng cong dap img liéu ding 10 diém nim trong khoang tir 10 dén 0,005pM trong 1% DMSO. Quy trinh i duge tién hanh lién tue trong théi gian 1 gid 6 nhiét 46 37°C. TE bao duge kich thich bing SOuL cla SOug/mL dung dich FGF9 (R&D Systems 273-F9) tong RPMI khong chia huyét thanh tao ra ndng d6 cudi cing bang 500ng/mL FGF9. Té bao duge 06 dinh bang cach bé sung 25% dung dich formaldehyt 30uL trong nude mudi 4ém phosphat (phosphate buffered saline - PBS) (3,7% néng 46 formaldehyt cuéi cing), va duge & trong thoi gian 30 phuit 6 RT. Cac té bao duge ria 3 lan bing PBS, sau 46 bing cach bd sung 100uL rugu metylic lanh va duge 8 trong théi gian 30 phat & nhiét 46 -20°C, Rugu metylic duge loai bé va té bio duge xr ly bing PBS chira 0,1% TRITON® X-100 (PBST), duge mia ba lan bing PBS, va dugc u trong théi gian 15 phut 6 RT. Té bao tiép 46 duge i qua dém 6 nhiét d6 4°C bing cach lic nhe trong. SOUL phin pha lofing 1:400 cha khang thé ban ddu p-p44/42 MAPK (Sx truyén tin -14-15571 higu té bao 9101S) trong PBS duge bé sung 2% BSA, 0,01% dung dich hon hop chat we ché phosphataza 1 (Sigma P2850), 0,01% dung dich hn hgp chét tte ché phosphataza 2 (Sigma P5726), va 0,01% dung dich hn hop chat tre ché proteaza (Sigma P8340). Sang ngay tiép theo, cdc dia duge rita hai lan bing PBST va hai lin bing PBS, sau dé bing cach 1 gid & RT trong tdi trong 80uL phan pha long 1:1000 cia khang thé thi cap IgG H+L dé khang thd Alexa Fluor 488 (Invitrogen A11034) trong PBS voi 1% BSA va 0,1% dung dich hén hop chat te ché phosphataza 1, 0,01% dung dich hén hop chat tte ché phosphataza 2, va 0,01% dung dich hén hop chat tre ché proteaza. Té bao dugc rita 3 lan bang PBS, sau dé bing céch bé sung 100yL phan pha long 1:200 propidi iodua (propidium iodide - PI) @au dé phan tir P-3566) trong, PBS va tiép dé duge u trong béng tdi trong thoi gian 1 gid. Cac té bao duong tinh p- ERK va té bao tng s6 trén mGi 16 duge nhan biét bi ACUMEN EXPLORER™ (TTP LabTech Ltd) sir dung b6 lye quang hoe tir 500 dén 530nM va tir 575 dén 640M voi Alexa 488 va PI, tuong tmg. Cuong 6 trung binh ting sé déi voi pERK/giéng str dung cdc gid tri Alexa 488 tiép theo duge bién 44i thanb sy tte ché theo phan tam sir dung cée gia tri thu duge tir MIN (10M hop chét 461 ching duong trong DMSO) va MAX (chi rigng DMSO) diéu chinh sy chay trén dia tuong ty. Cac gid tr de ché theo phan tram va dir liéu dap tmg ndng 46 10 diém va sau d6 dugc phan tich bing céch sir dung phuong trinh dap img ligu ding sigmoid 4 thong sé va cdc gid tr] ICs tong img duge dénh gié tir duémg cong tgo thinh. p-ERK do FGF9 gay ra véi thir nghiém BSA. co ty 1g t6i thiéu dang ké (Minimum Significant Ratio - MSR) véi ICsp duge danh gid bing 2,7. ICs déi véi quy trinh diéu ché 10 trong thir nghiém nay duge danh gid 14 0,0004uM. Dir ligu nay chimg minh ring quy trinh diéu ché 10 1a chat ire ché cé higu lye cla su phosphoryl héa ERK do FGF9 gay ra trong céc té bao bénh ung thy & ngudi. Su phat hién AlphaScreen SureFire cia sy phosphoryl héa ERK (Thr202/Tyr204) trong té bao n6i mé tinh mach rén 6 ngudi (Human Umbilical Vein Endothelial Cell- HUVEC) Téc dyng cita hop chat dén sy tre ché FGF thy thé 1 duoc do bing cach kiém tra su phosphoryl héa ERK (pERK) khi dap img vei sy kich thich thy thé phat trién nguyén bao soi co ban (basic-Fibroblast growth factor - b-FGF) trong céc 18 bao ni -15-15571 m6 r6n 6 ngudi (Human Umbilical Endothelial cell - HUVEC). Cae mie pERK duge tao thanh duge do bing cach sir dung hé thing ALPHASCREEN® SUREFIRE ® (TGR Biosciences, TGRESSOK). Day 14 dang thir nghiém ddng abét sir dung su thu git’ kep mién dich cla chit gin duge phosphoryl héa sau 46 phat hién bing cach sir dung céc hat ALPHASCREEN® duge boc khéng thé (Perkin Elmer) dé tao ra tin higu duge Khuéch dai. Cae té bao HUVEC duge thu va duy tri trong moi tring sinh truémg gdm 0d méi trrdng géc té bao n6i mé (Clonetics, CC-3132) duge bé sung 10% FBS 0,4% dich chiét no bd 0,1% hydrocortison, 0,1% gentamixin sulfat amphoterixin-B, va 0,1% yéu 16 ting trung bidu bi, su tai t6 hop & ngubi cho dén khi qua 7. Véi tht: nghiém nay, 18 ‘bao duge thu bing cdc quy trinh chudn va sau 46 duge dém. TE bao (20000/18) durgc gt trong 100uL cia méi truimg phat trién vio céc dia duge bye Poly-D-Lysin 96 ging (BD, 354640), Cac dia duge X qua dém & nhiét a9 37°C, 5% CO Vao ngay thi nghiém, té bao bj thigu huyét thanh 100L méi trong EBM (16 bao géc ndi m6) chita 1,5% FBS va 20mg/mL BSA trong théi gian 3 gi & nhiét 46 37°C, 5% CO, tiép dé duge xt ly bing 20uM hop chat pha loang thir ny 3 ln trong méi truéng thiéu hut trong thdi gian m6t gid 6 nhiét 46 37°C. Két qua thu duge dung cong dap img néng 46 10 diém nim trong khong tir 10 dén 0,00SuM trong 1% DMSO, Sau thoi gian 1 gid xi ly hop chat, té bao duge kich thich bing SOuL b-FGF (Sigma, F0291, néng 46 b-FGF cudi cing S0ng/mL) & nhiét 46 37°C trong thoi gian 15 phiit. Trong cdc giéng chita té bao va S0pL chét kich thich b-FGF thu duge tin higu MAX, va céc té bao voi 10M hop chat déi chimg duong va 50ul cht kich thich b- FGF 1a MIN. Sau 46, m6i trudng duge Jogi bd va SOuL dém 1x SUREFIRES Lysis Buffer (thanh phan kit TGR Biosciences SUREFIRE ®) duge bd sung/giéng va u lién tue & RT trong thoi gian 10 git bing cach lic nhe. Dé phat hién pERK, 6uL dich thay phan va 10pL hén hop phan img (60 phin dm phan img/10 phan dém hoat héa/0,6 phin mdi hat trong hat chét cho va chat nhén, Perkin Elmer, 6760617R) dure chuyén yao dia gan nhdt 384 15 (Perkin Elmer, 6006280). Dia duoc bit kin va duge a ¢ RT trong thoi gian 2 gid bing cach ldc nhe va tigp 46 doc trén may doc dia Perkin Elmer EnVision duge trang bj TurboModule sir dung céc céch cai djt ALPHASCREEN® chudn (Exggoam V4 Emso0.620em)- DO liu phdt xa duge bién déi thanh sy ite ché theo phan tram duge xée dinh tr MAX (riéng DMSO) va MIN (102M hop chat déi ching15571 duong trong DMSO) kiém sodt trén mdi dia va dé liu néng 46 hop cht mudi diém tiép 46 phi hop véi phuong trinh logitic bén thong sé ACTIVITYBASE® 4.0 va ICs duge dénh gid, Sy phét hin ALPHASCREEN® SUREFIRE® cia sy phosphoryl héa ERK (thir nghiém (Thr202/Tyr204) c6 ty 1¢ t6i thiéu dang ké (Minimum Significant Ratio-MSR) déi véi ICso bang 2,1. [Ceo trong quy trinh diéu ché 10 trong thir nghiém. nay duge danh gid la 0,0006yM. Dt ligu nay ching minh ring quy trinh diu ché 10 1a chat ite ché cé higu luc eta su phosphoryl héa ERK do bFGF gay ra trong céc té bao ngi mé rén & ngudi. Hop chat theo séng ché tét hon la duge bao ché duéi dang duge phim duge sit dung bing cdc duémg ding khée nhau. Tét hon nhét, ché phdm nay 48 sir dung theo duéng migng hodc trong tinh mach. Duge phdm nay va céc quy trinh diéu ché ching cling duge biét trong linh vue kj thuét nay. Xem, vi dy, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (D. Troy, ef al., eds., 21” ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005). Hop chat theo sang ché thudng c6 higu qua d6i véi khoang liéu ding réng. Vi dy, ligu ding mi ngay thudng nim trong khoang tir 0,5 dén khong 100mg/kg cén ngng. Trong mét vai trudng hop mite Ligu ding thép hon giéi han thép hon cla khoang noi trén c6 thé nhiéu hon giéi han thich hgp, trong khi véi cde trrimg hyp khée ligu ding van Ién hon cé thé duge sit dung ma khéng g4y ra téc dung phu cé hai bat ky, va do 46 khoang liéu ding trén khéng duge ding dé gidi han pham vi cila séng ché theo cach bat ky. Diéu nay duge hiéu ring lugng hop chat thuc té duge str dung st duge xéc dinh béi bic sf, v6i syt 5 rang cia céc digu kign cé lién quan, bao gim tinh trang bénh duge diéu tri, duimg ding dugc Iya chon, hgp chat hole cée hop chét thye té duge sir dung, tudi téc, can nfng, vA dép tmg cha mi nguti bénh, va tich nghiém trong véi trigu ching cia nguii bénh. -17-153571 yu CAU BAO HO 1. Hop chat (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-diclopyridin-4-yletoxy)-1H-indazol-3- yDvinyl)-IH-pyrazol-L-yl)etanol monohydrat dang tinh thé. 2. Hop chat theo diém 1, trong dé hop chat nay duge tach riéng, 3. Hop chat theo diém 1, trong 46 hgp chat nay duge dac trung béi mau nhiéu xa bot tia X (bite xa Cu, A = 1,54059A) bao gdm céc dinh tai 3,54, 12,51, 14,65, 20,37, 23,02, va 19,16 (20 40,1"). 4. Duge phim chita hgp chit (R)-(E)-2-(4-(2-(5-(1-G,5-diclopyridin-4-yl)etoxy)-1H- indazol-3-yl)vinyl)-1H-pyrazol-1-ylJetanol monohydrat dang tinh thé két hop véi chat mang, chat pha loding hodc ta duge duge dung. 5. Hop chat theo diém 1, trong 46 hop chat nay duge diac trumg béi mau nhiéu xa bot tia X (bute xa Cu, A = 1,54059A) bao gém cdc dinh tai 12,51, 14,65, 20,37, 23,02, va 19,16 (20 +0,1°), 6. Hop chat theo diém 1, trong 46 hgp chat nay duge dac tring boi mau nhiéu xa bét tia X (bite xa Cu, 2 = 1,54059A) bao gim céc dinh tai 12,51, 14,65, 23,02, va 19,16 (28 0,1") 7. Hop chit theo diém 2, trong 46 hop chat nay duge dic wumg boi mau nhiéu xa bot tia X (bue xa Cu, 4 = 1,54059A) bao gém cée dinh tai 3,54, 12,51, 14,65, 20,37, 23,02, va 19,16 (28 + 0,1°).. 8. Hop chat theo diém 2, trong 46 hop chat nay duge dac trmg béi mau ahiéu xa bot tia X (bite xa Cu, 2 = 1,54059A) bao gém cée dinh tai 12,51, 14,65, 20,37, 23,02, va 19,16 (26 + 0,1°). 9. Hop chat theo diém 2, trong 46 hop chat nay duge dac trung béi mau nhiéu xa bot tia X (bite x@ Cu, & = 1,54059A) bao gim cac dinh tai 12,51, 14,65, 23,02, va 19,16 (20 +0,1°). -18-